CN203732540U

CN203732540U - 一种酶标板的可拆卸板条

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Publication number: CN203732540U
Application number: CN201420021565.3U
Authority: CN
Inventors: 白仲虎; 王喆
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2014-01-14
Filing date: 2014-01-14
Publication date: 2014-07-23
Anticipated expiration: 2024-01-14

Abstract

本实用新型提供了一种酶标板的可拆卸板条，其能大幅降低酶联免疫检测分析的成本，实现反应杯与试剂杯的一体化，便于简化半自动化和全自动化的仪器操作。其作为临床或基础免疫学、生物化学和微生物的分析检验的固相载体，包括若干孔杯，其特征在于：孔杯包括试剂杯和反应杯，各试剂杯内预灌装有相同或者不同的分析检测所需的反应试剂，试剂杯的开口通过薄膜封装，板条可与标准的96孔酶标的板架配合安装。

Description

一种酶标板的可拆卸板条

技术领域

本实用新型涉及酶联免疫分析检测方法使用的酶标板，尤其涉及一种酶标板的可拆卸板条。

背景技术

近20年来，基于显色底物、化学发光底物、和荧光底物的酶联免疫分析技术（ELISA）在临床和基础免疫学、生物化学和微生物学领域内得到广泛的应用，已成为了一个常规技术手段。目前基于96孔酶标板的ELISA分析的操作过程已经实现的全自动化或半自动化，并且相关的自动化设备在医院的临床实验室和大学、科研院所等研究机构得到了广泛的推广。半自动或全自动化化操作可以显著提高分析的准确性和结果的重复性，减少操作者带来的结果变异（偏差），提高分析的通量。

开展ELISA分析需要预先包被有活性分子的孔杯，包被孔杯一般以96孔酶标板的形式存在，同时需要反应液、稀释液、酶标记液，信号底物和清洗液等溶液用于反应的完成。因此一般的全自动分析仪器均要设置溶液区域，用于放置这些溶液，并且通过自动化移液装置按要求向孔杯内滴加溶液，因此全自动仪器设备结构一般比较复杂。同时，由于在日常开展ELISA分析时，尤其是在临床实验室，往往需要同时对多个检测项目进行分析，而每个检测项目所需要的酶标物、反应液均不相同，所以一个自动化操作仪器往往有几十个试剂位，这种情况又进一步增加了对自动化仪器的结构和操作要求，使得仪器的复杂程度进一步提高。这种适合于多个检测项目的半、全自动EILISA分析仪器价格昂贵。

另外，由于已有的ELISA分析试剂均是以96孔板的形式存在，即理论上可以一次分析96个样本，所以在样品量较小的实验室，传统的ELISA试剂使用起来不是很方便，并有可能导致试剂的浪费，增加分析成本。在中小型的临床实验室，或者样品量不大的基础科学实验室，现有的自动化ELISA分析检测技术平台往往不能适用，亟需在方法学上有创新突破。如何解决在样品量较小的实验室开展基于96孔板ELISA的多个分析项目的半自动或全自动分析，也就成为了目前在该领域内的努力方向之一。

实用新型内容

针对上述问题，本实用新型提供了一种酶标板的可拆卸板条，其能大幅降低酶联免疫检测分析的成本。

其技术方案是这样的，一种酶标板的可拆卸板条，其作为临床或基础免疫学、生物化学和微生物的分析检验的固相载体，包括若干孔杯，其特征在于：所述孔杯包括试剂杯和反应杯，实现反应杯与试剂杯的一体化，各试剂杯内预灌装有相同或者不同的分析检测所需的反应试剂，所述试剂杯的开口通过薄膜封装，所述板条可与标准的96孔酶标的板架配合安装。

其进一步特征在于：

所述板条为8孔杯板条或者12孔杯板条， 8孔杯板条中反应杯的数量为1个至4个，12孔板条中反应杯的数量为1个至6个；

其还包括安装座，若干试剂杯依次连接为一整体并固接于所述安装座一侧，所述安装座设有槽体，所述反应杯安装于所述槽体内；

所述槽体的前、后两侧内壁上对称地设有卡槽，所述卡槽的组数与所述反应杯的个数相等，所述反应杯的前、后两侧由所述卡槽卡合。

其更进一步特征在于：

所述卡槽设有若干组，位于相邻的两组卡槽之间设有支撑所述槽体的前、后两侧内壁的隔板；

所述槽体的左、右两侧内壁上以及所述隔板的左、右两侧端面上对称的设有卡块，所述反应杯的左、右两侧与所述卡块卡合；

所述反应杯为柱形或倒锥形，所述卡块位于所述隔板和所述槽体下部，所述卡槽和所述卡块的内端面为圆弧曲面；

所述反应杯内设有包被层；

所述反应杯的上部设有径向的凸缘；

所述槽体的上、下两端设有开口，所述槽体的下端开口设有挡条，所述挡条上设有垫块；

所述试剂孔杯可以预灌装针对不同的检测项目对应的反应试剂，如酶标记物、生物素标记的抗体或样品稀释液。

本实用新型的有益效果在于：

（1）通过反应杯和试剂杯的一体化设计，并在试剂孔内预灌装有酶联免疫检测所需试剂，不仅减少或者避免了自动化操作仪器的试剂位的设计，大幅精简其结构，而且降低其操作要求，便于简化半自动化和全自动化的仪器操作，并且降低自动化操作仪器的生产制造成本；

（2）通过单一的8孔或12孔板条实现对少量样品的多个检测项目的同时检测，不仅避免了传统96孔酶标板利用率低下的问题，降低了酶标板的使用成本，而且显著简化了操作员以及设备的操作程序，提高了样本的检测速度，降低了检测的人力成本，并实现病床边快速检测（POCT）的需要。

（3）反应杯为可拆卸的安装于板条的安装座上，可以避免因单个反应杯加样错误而造成的整个板条的报废，可进一步降低酶标板的使用成本；卡槽和卡块的设置可以有效的固定反应杯，隔板的设置可以增加安装座的强度以及稳定性，反应杯的上部设有径向的凸缘，方便持握。

附图说明

图1为本实用新型的结构示意图；

图2为图1的俯视结构示意图；

图3为本实用新型的安装座的结构示意图；

图4为本实用新型与现有的96孔酶标板的板框的装配示意图。

具体实施方式

如图1至图3所示，一种酶标板的可拆卸板条，其作为临床或基础免疫学、生物化学和微生物的分析检验的固相载体，板条可装配于标准的96孔酶标的板架，包括8个孔杯，孔杯包括试剂杯1和反应杯2，反应杯2的数量为3个，图1、图2中其中一个反应杯2未示出，各试剂杯1内分别预灌装有分析检测所需的反应试剂13、14、15、16、17，试剂13、14、15、16、17选自酶标记物、生物素标记的抗体或样品稀释液，酶标记物可以是酶标记抗体或者酶标记抗原，试剂杯1的开口通过薄膜12封装。

其还包括安装座3，5个试剂杯1依次连接为一整体并固接于安装座3一侧，安装座3设有槽体18，反应杯2安装于槽体18内；槽体18的前、后两侧内壁上对称地设有卡槽4，卡槽4的组数与反应杯2的个数相等，反应杯2的前、后两侧由卡槽4卡合；卡槽4设有若干组，位于相邻的两组卡槽4之间设有支撑槽体18的前、后两侧内壁的隔板8；槽体18左、右两侧的内壁上以及隔板8的左、右两侧端面上对称的设有卡块5，反应杯2的左、右两侧与卡块5卡合；反应杯2为柱形，卡块5位于隔板8和槽体18下部，卡槽4和卡块5的内端面为圆弧曲面；反应杯内设有包被层；反应杯2的上部设有径向的凸缘9；槽体18的上、下两端设有开口，槽体18的下端开口设有挡条6，挡条6上设有垫块7，图中10、11为板条两端的持握部。

如图4所示，本实用新型可以装配于现有的96孔酶标板的板框上，可根据检测需求设置板条的数目，大幅提高了酶标板的利用率，并且反应孔杯数量和试剂孔杯数量可以根据分析实验的需要进行分配，还可在板条上留有空位，使孔杯的数量减少，孔杯的结构和尺寸可以根据实验需要进行必要调整。

基于本实用新型板条的ELISA分析检测，可以用于手工操作，但是主要应用于相关的半自动、全自动分析过程。在自动化的操作过程中，相对于传统的基于96孔板的分析设备，由于不在需要试剂瓶，可以显著简化对自动化仪器的要求。

下述是基于本实用新型原理的临床免疫分析应用实例。

实例一：孕保4项检测

孕妇的临床常规体检重要项目包括叶酸（FA），甲胎蛋白（AFP），人绒毛膜促性腺激素（HCG），游离雌二醇（uE2）等。叶酸对于神经管的形成有重要作用，怀孕期间缺乏叶酸能够影响胎儿神经系统的发育，因此孕妇在怀孕前摄入足够的叶酸对于胎儿的正常发育很重要。研究表明在怀孕前期和怀孕中补充足够的叶酸能够降低神经管畸形和唇裂胎儿的出生率。唐氏综合征是由人体的第21对染色体的三体变异造成的现象，这也是人类首次发现的染色体缺陷造成的疾病。我国年出生新生儿约为1600万，唐氏症儿的出生率为1/800～1/600，则每年约会增加唐氏儿20000余名。目前临床常用的免疫学方法检测唐氏综合症的技术手段为取受检者静脉血并分离血清，测定血清中的甲胎蛋白(AFP)、游离雌三醇(uE3)及人绒毛膜促性腺激素(HCG)含量，并根据受检者年龄、体重、孕周及是否为糖尿病患者等因素通过数学分析筛查软件进行计算MMOL值及风险率评估。目前临床上的测试方法为分别应用4个试剂盒对同一份血清样本进行单独的检测分析，操作步骤多，不利于实际应用，并且不适合样本量少的实验室开展该项目的检测。

采用本实用新型的原理，可以将上述4个检测项目的所有试剂及包被孔放置在一个分析板条上，构成针对一份样本的综合检测其结构表1所示。

表1：叶酸（FA），甲胎蛋白（AFP），人绒毛膜促性腺激素（HCG），游离雌二醇（uE2）孕保四联酶联检测的板条设计实例

叶酸检测过程需要样本预处理，所以反应试剂包括3个，检测原理为免疫竞争法，包被孔为叶酸结合蛋白，试剂1和2 为样品处理液，试剂3为叶酸酶标试剂；

AFP和HCG检测方式为免疫分析夹心法，试剂1为生物素化的第一抗体试剂，试剂2 为酶标二抗试剂，AFP和HCG包被孔为亲和素包被孔；

uE2为小分子检测，采用免疫竞争法，uE2反应试剂为E2酶标试剂，与样品中的游离E2进行竞争，包被孔为抗E2抗体；

上述四联检测试剂可以在半自动或全自动分析设备上开展，检测条件可以根据生物原材料的特征分别进行优化，最长反应时间不超过30分钟，反应温度为25-37⁰C，样本量为10微升-100微升。

实例二：端脑利钠肽前体/心肌肌钙蛋白I二合一检测

NT-proBNP是 BNP 激素原分裂后无活性的 N 端片段，主要在心肌细胞受到容量负荷和压力负荷增高时由左心室分泌。NT-proBNP可用于早期评价心脏收缩功能不全，早期评价舒张功能不全和心室壁节段运动协调性，有较高的敏感性和阴性预测价值。

肌钙蛋白由 I、T、C 三亚基构成，它们和原肌球蛋白一起通过调节 Ca²⁺对横纹肌动蛋白 ATP 酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用。当心肌损伤后，心肌肌钙蛋白复合物释放到血液中，4~6小时后，开始在血液中升高，升高的cTnI能在血液中保持很长时间（6~10 天），这样就提供了较长的检测期。cTnI具有心肌特异性，cTnI对检测心肌受损的敏感性和特异性均较高，慢性心衰可出现低水平升高，重症有症状心衰存在心肌细胞坏死、肌原纤维不断崩解，血清中心肌肌钙蛋白水平可持续升高。

临床上通过同时开展上述两个检测项目的定量测量，实现心肌梗塞的快速准确诊断。

采用本实用新型的原理，可以将上述2个检测项目的所有试剂及包被孔放置在一个分析板条上，构成针对一份样本，包括血清、血浆、全血中 N-端脑利钠肽前体以及心肌肌钙蛋白 I 的定量综合检测，其结构表2所示。

表2：N-端脑利钠肽前体（NT-proBNP）以及心肌肌钙蛋白 I (cTn I) 的定量综合检测心肌梗表2：塞二联酶联检测的板条设计实例

NT-proBNP和cTn I两个检测项目的检测原理均为免疫夹心法。包被孔为包被有亲和素，试剂1为生物素化的第一抗体试剂，试剂2为酶标二抗试剂，比如辣根过氧化物酶（HRP）；

上述二联检测试剂可以在半自动或全自动分析设备上开展，检测条件可以根据生物原材料的特征分别进行优化，最长反应时间不超过20分钟，反应温度为35-37⁰C。样本量为10微升-100微升。

实例三：全程C反应蛋白(HS-CRP和CRP)的联合检测

C－反应蛋白（C-Reactive protein，简称CRP），早于1930年发现，是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。CRP的检测在八十年代以前作为炎症和组织损伤的非特异性标志物大量应用于临床，但由于过去CRP的检测方法较为落后，假阳性和假阴性很高，影响了它在临床上的价值，而逐渐被临床所忽视。近年来，由于检测技术的更新，测定CRP的快速、简便和可靠的方法已迅速建立，使CRP在临床应用领域大大增加，其在医学上的价值正得到广泛验正和承认。

超敏C反应蛋白（ High sensitivity C-reactive protein）与CRP并不是两种蛋白，只是从灵敏度上加以区分，超敏C反应蛋白(HS-CRP)最低检测限达0.1 mg/l；原先认为CRP是正常的血清却发现同未来发生心血管疾病密切相关，大量研究资料表明，动脉粥样化的血栓去除了是脂肪堆积的过程外也是一个慢性炎症过程；HS-CRP轻度升高与冠状动脉事件、中风及周围血管病相关，是一项独立的危险因素； HS-CRP已被证实是由慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素，检测其浓度对心血管疾病的干预及预后起重要作用而被临床重视。流行病学调查也显示， HS-CRP 水平升高者发生急性脑卒中的几率是正常健康人的2 倍，发生心肌梗死的几率是正常者的3 倍。2003 年欧洲高血压防治指南( ESH/ESC) 正式推荐，高血压患者需检测HS-CRP 水平。

由于目前CRP检测的灵敏度达不到HS-CRP的检出要求，所以给临床判断带来了不便，同时由于HS-CRP的检测试剂灵敏度较高，往往在高CRP情况下，达到了检测试剂的平台期， HS-CRP检测试剂不能报告正确的CRP水平。临床上一般不得不采用两种试剂对同一份样本分别进行检测。

CRP和HS-CRP的临床检测的主要意义如下：

1、CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，并有成倍增长之势，病变好转时，又迅速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正相关。

2、CRP与其它炎症因子的相关性：CRP与其它炎症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有密切相关性，CRP与WBC存在正相关，在炎症反应中起着积极作用，使人体具有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时，CRP可早于WBC而上升，回复正常也很快，故具有极高的敏感性。

3、 CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断：一旦发生炎症，CRP水平即升高，而病毒性感染CRP大都正常；脓毒血症CRP迅速升高，而依赖血培养则至少需要48小时，且其阳性率不高。

临床上通过开展上述CRP和HS-CRP的准确定量测量，从而提高CRP指标的临床应用价值。

采用本实用新型的原理，可以将上述CRP检测项目的所有试剂及包被孔放置在一个分析板条上，构成针对一份样本，包括血清、血浆、全血中CRP的准确定量综合检测，其结构表3所示。

表3：CRP的定量综合检测反应板条设计实例

CRP检测项目的检测原理均为免疫夹心法，包被孔为包被有亲和素，试剂1为生物素化的第一抗体试剂，试剂2为酶标二抗试剂，比如辣根过氧化物酶（HRP）标记的第二抗体，样品稀释液是对样品进行必要的稀释，用于检测阳平中有较高水平的CRP蛋白，比如CRP浓度位于0.01mg/L – 10mg/L；

上述CRP检测试剂可以在半自动或全自动分析设备上开展，检测条件可以根据生物原材料的特征进行优化。最长反应时间不超过20分钟。反应温度为35-37⁰C，样本量为10微升-100微升。

Claims

1.一种酶标板的可拆卸板条，其作为临床或基础免疫学、生物化学和微生物的分析检验的固相载体，包括若干孔杯，其特征在于：所述孔杯包括试剂杯和反应杯，实现反应杯与试剂杯的一体化，各试剂杯内预灌装有相同或者不同的分析检测所需的反应试剂，所述试剂杯的开口通过薄膜封装，所述板条与标准的96孔酶标的板架配合安装。

2.根据权利要求1所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述板条为8孔杯板条或者12孔杯板条， 8孔杯板条中反应杯的数量为1个至4个，12孔板条中反应杯的数量为1个至6个。

3.根据权利要求1或2所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述板条还包括安装座，若干试剂杯依次连接为一整体并固接于所述安装座一侧，所述安装座设有槽体，所述反应杯安装于所述槽体内。

4.根据权利要求3所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述槽体的前、后两侧内壁上对称地设有卡槽，所述卡槽的组数与所述反应杯的个数相等，所述反应杯的前、后两侧由所述卡槽卡合。

5.根据权利要求4所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述卡槽设有若干组，位于相邻的两组卡槽之间设有支撑所述槽体的前、后两侧内壁的隔板。

6.根据权利要求5所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述槽体的左、右两侧内壁上以及所述隔板的两侧端面上对称的设有卡块，所述反应杯的左、右两侧与所述卡块卡合。

7.根据权利要求6所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述反应杯为柱形或倒锥形，所述卡块位于所述隔板和所述槽体下部，所述卡槽和所述卡块的内端面为圆弧曲面。

8.根据权利要求1所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述反应杯内设有包被层，所述反应杯的上部设有径向的凸缘。

9.根据权利要求3所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述槽体的上、下两端设有开口，所述槽体的下端开口设有挡条，所述挡条上设有垫块。

10.根据权利要求1所述的一种酶标板的可拆卸板条，其特征在于：所述试剂孔杯可以预灌装针对不同的检测项目对应的反应试剂，所述反应试剂选自酶标记物、生物素标记的抗体或样品稀释液中的任一种。