CN203653565U - 癌细胞培养均基质平行对比三维支架 - Google Patents

Abstract

本实用新型涉及科研领域，尤其涉及癌细胞培养均基质平行对比三维支架。包含两个能叠放的基板，所述基板上均有一个以上的培养孔，两个基板的培养孔孔位对应，所述下方的基板带底板，所述两个能叠放的基板还有可抽离的分隔板。所述分隔板边侧还有拉手。采用如上技术方案的本实用新型，相对于现有技术有如下有益效果：叠加后直接加基质，进而保证平行试验的基质一致，很好为三维支架下培养癌细胞提供结构基础。

Description

癌细胞培养均基质平行对比三维支架

技术领域

本实用新型涉及科研领域，尤其涉及癌细胞培养均基质平行对比三维支架。 

背景技术

传统研究肿瘤发生的方法包括体外肿瘤细胞二维培养和建立体内鼠肿瘤模型。但是二者均有局限性：肿瘤细胞二维培养不能很好的反映体内肿瘤的微环境，而体内试验在控制单独细胞信号方面功能不足。体外三维培养能够克服以上不足，而三维支架是三维培养的基础。 

目前用于癌症研究的三维培养支架体系有3类：自然材料来源的支架、人工合成材料支架和肿瘤多细胞球体。癌症研究中自然材料来源的支架包括胶原凝胶、富含层粘连蛋白的凝胶和来源于基底膜的材料已经被广泛用于癌症研究。由于组织来源、交联化学物质和单体浓度的不同影响这些基质支架的微观结构，降低了研究的可重复性和可比性。并且这些自然材料来源的支架由于空间排布和机械性能与肿瘤自身的细胞外基质不同，在其上培养的肿瘤细胞的许多生物学行为也就与体内不同。癌症研究中合成材料支架如聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚ε己内/β磷酸三钙和壳聚糖-藻酸盐三维支架等人工合成材料已经被用于肿瘤的转移和血管生成研究。人工合成聚合物支架最显著的缺点是缺乏生物信号而不易被细胞识别，并且三维空间排布和机械性能也与肿瘤自身的细胞外基质不同。肿瘤多细胞球体是肿瘤细胞体 外培养中获得的由多个细胞组成的球状聚合体，在组织结构上与实体瘤相似，是研究实体瘤的良好模型，缺点是药物实验中，大分子药物不易扩散到多细胞球体中，缺乏明确的反应终点和检测其细胞活性的确切方法。 

并且，传统的科学试验难以重现同样的基质，因此而对生物医药的试验造成了一定的难度，生物实验的重现性也多因为个性化操作而难以实现。 

做实验的时候，平行试验很难操作并且浪费时间。 

实用新型内容

实用新型的目的：为了提供一种操作简便、节省时间的癌细胞培养均基质平行对比三维支架。 

为了达到如上目的，本实用新型采取如下技术方案： 

癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，包含两个能叠放的基板，所述基板上均有一个以上的培养孔，两个基板的培养孔孔位对应，所述下方的基板带底板，所述两个能叠放的基板还有可抽离的分隔板。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述分隔板边侧还有拉手。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述分隔板上包含边框，所述基板能够嵌套在其上，所述分隔板上还有圆形凸起，培养孔下端能与该凸起契合而密封。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述两个基板上各自的培养孔彼此连通，连通结构为细管，所述细管内置于基板壁内。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述培养孔为圆柱形。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述圆柱形直径是7-10毫米，厚度是2毫米。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述分隔板和底板上均有内置的温度传感器，其连接CPU。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述分隔板和底板下方均有压力传感器，其连接CPU。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述CPU连接报警装置。 

本实用新型进一步技术方案在于，所述CPU连接照相机。 

采用如上技术方案的本实用新型，相对于现有技术有如下有益效果：叠加后直接加基质，进而保证平行试验的基质一致，很好为三维支架下培养癌细胞提供结构基础。 

附图说明

为了进一步说明本实用新型，下面结合附图进一步进行说明： 

图1为实用新型的结构示意图； 

其中：1.拉手；2.培养孔；3.基板；4.分隔板。 

具体实施方式

下面结合附图对本实用新型的实施例进行说明，实施例不构成对本实用新型的限制： 

癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，包含两个能叠放的基板3，所述基板3上均有一个以上的培养孔2，两个基板3的培养孔2孔位对应，所述下方的基板3带底板，所述两个能叠放的 基板3还有可抽离的分隔板4。本处操作的时候，将基质在顶部直接灌输到各个培养孔里边，基质在培养孔内壁从上往下滑动，进而使得两个基板3同时获得相同的基质作为培养基础。还可以进行高同步性的平行试验。 

所述分隔板4边侧还有拉手1。本结构可以使得分隔板4的抽拉方便。 

所述分隔板4上包含边框，所述基板3能够嵌套在其上，所述分隔板4上还有圆形凸起，培养孔2下端能与该凸起契合而密封。本结构使得分隔板上方的基板3能够进行稳定培养。 

所述两个基板3上各自的培养孔2彼此连通，连通结构为细管，所述细管内置于基板3壁内。本处的结构所起的作用是使得多个培养孔2内部的基质形成统一的基本环境，培养条件实现严格单一。 

所述培养孔2为圆柱形。所述圆柱形直径是7-10毫米，厚度是2毫米。本结构在试验数据的显示中能有效完成三维培养。 

所述分隔板4和底板上均有内置的温度传感器，其连接CPU。本处的结构能起到的做用是，严密检测一线的培养环境，因为培养箱是可能出现多个温度点的，而内置的温度传感器能够获取更精确的温度，让第一线试验数据更精确。 

所述分隔板4和底板下方均有压力传感器，其连接CPU。本处的结构能够防止外人乱动培养装置，防止试验被人影响，也可以通过电脑严密记录学生做实验的诚信程度，比如，什么时候查看，查看了几次等。所述CPU连接报警装置。比如报警灯或者蜂鸣器，要是有 外人随便触碰，即可进行报警，试验就会报废，有助于严密的科学精神的养成。 

本实用新型所要解决的技术问题是：针对上述目前用于癌症研究的三维培养支架存在种种不足，提供一种空间排布和结构与肿瘤自身的细胞外基质相似的肿瘤细胞三维培养支架。 

所述CPU连接照相机。即每碰触一次，就会拍照，找到碰触者。 

以下为一种具体的试验的方式： 

先建立免疫缺陷鼠(SCID小鼠)皮下人肺腺癌A549系细胞种植成瘤模型，肿瘤生长4周，直径接近1cm，取出肿瘤块后切成厚度2mm薄片，采用Tris-Trypsin-Triton X-100混合去细胞法彻底去除细胞。其具体去细胞步骤为：厚度2mm肿瘤的肿瘤薄片浸入低渗液(10mM Tris(pH8.0)，5mM EDTA)过夜，再浸入高渗液(50mM Tris，1M NaCl，10mM EDTA)室温下24小时，然后在0.025％Trypsin/0.02％EDTA中处理0.5小时，然后用0.5％Triton X-100处理48小时，最后用含DNase-I(浓度20U/ml)及RNase-A(浓度0.2mg/ml)的磷酸盐缓冲液37℃下处理24小时。处理各步骤间和处理后均以大量无菌磷酸盐缓冲液冲洗。然后冷冻干燥24小时后密封，最后以25KGy剂量的伽马射线灭菌后保存备用。 

进一步的实体肿瘤细胞种植试验结果表明，所得去细胞肿瘤细胞外基质支架支持实体肿瘤细胞的浸润和生长。与二维培养比较，实体肿瘤细胞在去细胞肿瘤细胞外基质支架上培养后，细胞增殖更快，并且细胞活性增高，不容易凋亡。 

用人乳腺癌MCF-7细胞系细胞加灭菌后保存备用的去细胞支架在24孔板培养，用肿瘤细胞二维培养(不加支架)作对照。具体步骤为：去细胞支架修剪成直径7mm的圆盘状，置于24孔板中，先与20％胎牛血清在细胞培养箱中(温度37℃，5％CO2，饱和湿度)孵育过夜，然后吸去培养皿中液体，将浓度5×105/ml的肿瘤细胞悬液，每孔滴加1ml，然后加入含10％小牛血清，1000U/ml青霉素，100mg/ml链霉素的DMEM培养液，置于37℃，5％CO2培养箱中静态培养，每2日更换培养液。在不同时间点(1，4，7，10和13天)对细胞活性和增殖进行评价。培养13天后CFDA-SE/PI细胞增殖和凋亡进行染色情况，CFDA-SE将活细胞标记为绿色，将凋亡细胞标记为红色。乳腺癌MCF-7细胞系细胞二维培养13天后凋亡失活的细胞数目多，而其在去细胞支架上三维培养13天后凋亡失活细胞数目少，活细胞数目多。在去细胞支架上三维培养细胞活性增高，不容易凋亡。通过MTT法测在570nm处吸光度(OD值)，OD值越大，表示细胞增殖的数量越多。二维培养在10天前细胞数目增多，而10天后数目开始减少。而去细胞支架上三维培养10天后细胞数目仍在增加。并且从第4天开始，每个时间点的三维培养细胞数均较二维培养多。结果显示乳腺癌MCF-7细胞系细胞在去细胞支架上三维培养增殖远好于二维培养。 

举例二 

食管鳞癌KYSE-510细胞系细胞在去细胞支架上三维培养，方法步骤同前，细胞增殖速度略慢，因食管癌恶性程度低，本身增殖慢所 致，余同前。 

以上显示和描述了本实用新型的基本原理、主要特征和本实用新型的优点。本领域的技术人员应该了解本实用新型不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本实用新型的原理，在不脱离本实用新型精神和范围的前提下，本实用新型还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的范围内。 

Claims (10)

1.癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，包含两个能叠放的基板(3)，所述基板(3)上均有一个以上的培养孔(2)，两个基板(3)的培养孔(2)孔位对应，所述下方的基板(3)带底板，所述两个能叠放的基板(3)还有可抽离的分隔板(4)。 

2.如权利要求1所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述分隔板(4)边侧还有拉手(1)。 

3.如权利要求1所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述分隔板(4)上包含边框，所述基板(3)能够嵌套在其上，所述分隔板(4)上还有圆形凸起，培养孔(2)下端能与该凸起契合而密封。 

4.如权利要求1所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述两个基板(3)上各自的培养孔(2)彼此连通，连通结构为细管，所述细管内置于基板(3)壁内。 

5.如权利要求1所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述培养孔(2)为圆柱形。 

6.如权利要求5所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述圆柱形直径是7-10毫米，厚度是2毫米。 

7.如权利要求5所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述分隔板(4)和底板上均有内置的温度传感器，其连接CPU。 

8.如权利要求5所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述分隔板(4)和底板下方均有压力传感器，其连接CPU。 

9.如权利要求7或8所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述CPU连接报警装置。 

10.如权利要求7或8所述的癌细胞培养均基质平行对比三维支架，其特征在于，所述CPU连接照相机。 

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