CN203616316U - 用于检测细胞活化抗原的试剂盒 - Google Patents
用于检测细胞活化抗原的试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN203616316U CN203616316U CN201320688939.2U CN201320688939U CN203616316U CN 203616316 U CN203616316 U CN 203616316U CN 201320688939 U CN201320688939 U CN 201320688939U CN 203616316 U CN203616316 U CN 203616316U
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- reagent tube
- housed
- fluorescence labeling
- kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 67
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 58
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 claims description 57
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 claims description 8
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 claims description 8
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 8
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 claims description 7
- 229940124293 CD30 monoclonal antibody Drugs 0.000 claims description 7
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims description 7
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims description 7
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 6
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- -1 CD86 Proteins 0.000 description 1
- 101000851376 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Proteins 0.000 description 1
- 102100036857 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，包括盒体、盒盖和设置在盒体内的衬垫，所述衬垫上设有小孔，装有荧光标记各种单克隆抗体的试剂管被设置在所述小孔内。该试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染。使用该试剂盒检测细胞活化抗原时，不涉及细胞培养，程序简单，降低了检测工作的强度；对实验室条件要求不高，只要有流式细胞仪的实验室即可开展检测，便于技术广泛推广，检测操作时间短、检测精度高，上机操作和数据分析方法简单，可以在第一时间得到临床所需资料。
Description
技术领域
本实用新型属于免疫学技术领域，涉及一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒。
背景技术
细胞免疫广义指经特异性细胞（如细胞毒T淋巴细胞）和非特异性细胞（如巨噬细胞、自然杀伤细胞）活性增强的免疫反应；狭义指T细胞介导的免疫。细胞免疫（cellular immunity）是T细胞受到抗原刺激后，增殖、分化、转化为致敏T细胞(也叫效应T细胞)，当相同抗原再次进入机体的细胞中时，致敏T细胞（效应T细胞）对抗原的直接杀伤作用及致敏T细胞所释放的细胞因子的协同杀伤作用，统称为细胞免疫。免疫细胞的活化是免疫应答产生的一种标志。静止细胞经过抗原刺激活化后，表现出一系列的特征，如细胞膜表面活化分子的表达等。
目前可利用流式细胞术通过检测免疫细胞活化后的特性，来分析抗原特异性免疫应答及其应答规律，并且可以追踪特定细胞在免疫应答过程中的作用。现有的流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总蛋白量等指标，而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少；若采用多参数荧光标记，则由于串联荧光染料易降解，会影响对结果的判定。
实用新型内容
为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，可以快速、准确地检测细胞活化抗原。
为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是：一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，包括盒体（1）、盒盖（2）和设置在盒体（1）内的衬垫（3），所述衬垫（3）上设有小孔，装有荧光标记CD1a单克隆抗体的试剂管（4）、装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管（5）、装有荧光标记CD4单克隆抗体的试剂管（6）、装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管（7）、装有荧光标记CD30单克隆抗体的试剂管（8）、装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管（9）、装有荧光标记CD80单克隆抗体的试剂管（10）、装有荧光标记CD86单克隆抗体的试剂管（11）、装有荧光标记CD166单克隆抗体的试剂管（12）、装有荧光标记CD8单克隆抗体的试剂管（13）、装有荧光标记CD14单克隆抗体的试剂管（14）、装有荧光标记CD19单克隆抗体的试剂管（15）、装有荧光标记IgG1单克隆抗体的试剂管（16）、装有荧光标记IgG2a单克隆抗体的试剂管（17）装有红细胞裂解液的试剂管（18）和装有PBS缓冲液的试剂管（19）被设置在所述小孔内。
其中，CD1a单克隆抗体、CD86单克隆抗体、CD166单克隆抗体和IgG2a单克隆抗体使用PE标记；CD3单克隆抗体使用PerCP标记；CD4单克隆抗体使用PE-CY7标记；CD8单克隆抗体使用APC-CY7标记；CD14单克隆抗体、CD56单克隆抗体使用APC标记；CD30单克隆抗体、CD69单克隆抗体、CD80单克隆抗体和IgG1单克隆抗体使用FITC标记；CD19单克隆抗体使用BV421标记。
其中，所述红细胞裂解液和PBS缓冲液为本领域常规试剂。
其中，所述衬垫（3）上设有16个小孔，所述小孔在所述衬垫（3）上分成四排平行排列。
通过以上技术方案，本实用新型的有益效果如下：
（1）本实用新型的试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染。
（2）本实用新型的试剂盒在检测细胞活化抗原时，不涉及细胞培养，程序简单，降低了检测工作的强度；对实验室条件要求不高，只要有流式细胞仪的实验室即可开展检测，便于技术广泛推广，检测操作时间短、检测精度 高，上机操作和数据分析方法简单，可以在第一时间得到临床所需资料。
附图说明
图1为本实用新型的结构示意图；
图2-图5为使用本实用新型的试剂盒检测细胞活化抗原时所得的散点图。
图中，1-盒体，2-盒盖，3-衬垫，4-装有荧光标记CD1a单克隆抗体的试剂管，5-装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管，6-装有荧光标记CD4单克隆抗体的试剂管，7-装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管，8-装有荧光标记CD30单克隆抗体的试剂管，9-装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管，10-装有荧光标记CD80单克隆抗体的试剂管，11-装有荧光标记CD86单克隆抗体的试剂管，12-装有荧光标记CD166单克隆抗体的试剂管，13-装有荧光标记CD8单克隆抗体的试剂管，14-装有荧光标记CD14单克隆抗体的试剂管，15-装有荧光标记CD19单克隆抗体的试剂管，16-装有荧光标记IgG1单克隆抗体的试剂管，17-装有荧光标记IgG2a单克隆抗体的试剂管，18-装有红细胞裂解液的试剂管，19-装有PBS缓冲液的试剂管。
具体实施方式
下面结合实施例对本实用新型的具体实施方式作进一步描述，本实用新型的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本实用新型的范围构成任何限制。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中使用的流式细胞仪为美国BD-CantoII（三激光8色）。
如图1所示，本实用新型提供了一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，包括盒体1、盒盖2和设置在盒体1内的衬垫3，所述衬垫3上设有16个小孔，所述小孔在所述衬垫3上分成四排平行排列，装有荧光标记CD1a单克 隆抗体的试剂管4、装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管5、装有荧光标记CD4单克隆抗体的试剂管6、装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管7、装有荧光标记CD30单克隆抗体的试剂管8、装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管9、装有荧光标记CD80单克隆抗体的试剂管10、装有荧光标记CD86单克隆抗体的试剂管11、装有荧光标记CD166单克隆抗体的试剂管12、装有荧光标记CD8单克隆抗体的试剂管13、装有荧光标记CD14单克隆抗体的试剂管14、装有荧光标记CD19单克隆抗体的试剂管15、装有荧光标记IgG1单克隆抗体的试剂管16、装有荧光标记IgG2a单克隆抗体的试剂管17装有红细胞裂解液的试剂管18和装有PBS缓冲液的试剂管19被设置在所述小孔内。
其中，CD1a单克隆抗体、CD86单克隆抗体、CD166单克隆抗体和IgG2a单克隆抗体使用PE标记；CD3单克隆抗体使用PerCP标记；CD4单克隆抗体使用PE-CY7标记；CD8单克隆抗体使用APC-CY7标记；CD14单克隆抗体、CD56单克隆抗体使用APC标记；CD30单克隆抗体、CD69单克隆抗体、CD80单克隆抗体和IgG1单克隆抗体使用FITC标记；CD19单克隆抗体使用BV421标记。
其中，所述红细胞裂解液购自美国BD公司，所述PBS缓冲液购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
检测步骤如下：
1）取四支流式管，分别编号为1号管、2号管、3号管和4号管，第一管分别加入IgG1-FITC20μl、IgG2a-PE20μl的同型对照；第二管分别加入CD30-FITC20μl、CD1a-PE20μl、CD3-PerCP20μl、CD4-PE-CY75μl、CD8-APC-CY75μl、CD56-APC5μl、CD19-BV4215μl；第三管分别加入CD80-FITC20μl、CD86-PE20μl、CD3-PerCP20μl、CD4-PE-CY75μl、CD8-APC-CY75μl、CD14-APC5μl、CD19-BV4215μl；第四管分别加入CD69-FITC20μl、CD166-PE20μl、CD3-PerCP20μl、CD4-PE-CY75μl、CD8-APC-CY75μl、CD14-APC5μl、CD19-BV4215μl；
2）对待检测的外周血采集物或骨髓标本进行白细胞计数，将细胞浓度调至3×107/ml，向每个管内分别加入待检测的外周血采集物或骨髓标本 70μl，低速涡旋混匀，2℃至8℃避光孵育20分钟；
3）向每个管内分别加入红细胞裂解液1ml，低速涡旋混匀，在2℃至8℃避光裂解红细胞10分钟；
4）裂解结束后立即以1500转/分钟离心5分钟，离心结束后弃上清，然后向各管内加入1ml PBS，低速涡旋混匀，以1500转/分钟离心5分钟；离心结束后弃上清，向各管内加入0.5ml PBS重悬，低速涡旋混匀，24h内使用流式细胞仪上机检测；
5）在检测时，调节好个通道电压，收集P1门内细胞10万，应用BDFACSDive软件分析数据。
检测结果如下：
数据以散点图形式显示，如图2-图5，分别用CD3+CD4+、CD3+CD8+、SSC-CD14+、SSC-CD19+、SSC-CD56+射门圈定相应的细胞群，再分别看CD1a、CD30、CD80、CD86、CD69、CD166在以上各群细胞上的表达情况，阳性表达以阴性对照作为参考。
上面已经举例说明了本实用新型的实施例，本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本实用新型的精神和范围下可以对本实用新型技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本实用新型的保护范围内。
Claims (3)
1.一种用于检测细胞活化抗原的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括盒体（1）、盒盖（2）和设置在盒体（1）内的衬垫（3），所述衬垫（3）上设有小孔，装有荧光标记CD1a单克隆抗体的试剂管（4）、装有荧光标记CD3单克隆抗体的试剂管（5）、装有荧光标记CD4单克隆抗体的试剂管（6）、装有荧光标记CD56单克隆抗体的试剂管（7）、装有荧光标记CD30单克隆抗体的试剂管（8）、装有荧光标记CD69单克隆抗体的试剂管（9）、装有荧光标记CD80单克隆抗体的试剂管（10）、装有荧光标记CD86单克隆抗体的试剂管（11）、装有荧光标记CD166单克隆抗体的试剂管（12）、装有荧光标记CD8单克隆抗体的试剂管（13）、装有荧光标记CD14单克隆抗体的试剂管（14）、装有荧光标记CD19单克隆抗体的试剂管（15）、装有荧光标记IgG1单克隆抗体的试剂管（16）、装有荧光标记IgG2a单克隆抗体的试剂管（17）装有红细胞裂解液的试剂管（18）和装有PBS缓冲液的试剂管（19）被设置在所述小孔内。
2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：CD1a单克隆抗体、CD86单克隆抗体、CD166单克隆抗体和IgG2a单克隆抗体使用PE标记；CD3单克隆抗体使用PerCP标记；CD4单克隆抗体使用PE-CY7标记；CD8单克隆抗体使用APC-CY7标记；CD14单克隆抗体、CD56单克隆抗体使用APC标记；CD30单克隆抗体、CD69单克隆抗体、CD80单克隆抗体和IgG1单克隆抗体使用FITC标记；CD19单克隆抗体使用BV421标记。
3.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述衬垫（3）上设有16个小孔，所述小孔在所述衬垫（3）上分成四排平行排列。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201320688939.2U CN203616316U (zh) | 2013-11-04 | 2013-11-04 | 用于检测细胞活化抗原的试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201320688939.2U CN203616316U (zh) | 2013-11-04 | 2013-11-04 | 用于检测细胞活化抗原的试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN203616316U true CN203616316U (zh) | 2014-05-28 |
Family
ID=50768949
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201320688939.2U Expired - Lifetime CN203616316U (zh) | 2013-11-04 | 2013-11-04 | 用于检测细胞活化抗原的试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN203616316U (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104677810A (zh) * | 2015-01-30 | 2015-06-03 | 广东医学院附属医院 | 嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒及其使用方法 |
| CN105628919A (zh) * | 2014-10-30 | 2016-06-01 | 上海市第十人民医院 | Cd166作为肝癌诊断血清标志物的应用及其试剂盒 |
| CN109490544A (zh) * | 2018-09-13 | 2019-03-19 | 浙江博真生物科技有限公司 | 一种用于检测人体免疫年龄的试剂盒及其应用 |
-
2013
- 2013-11-04 CN CN201320688939.2U patent/CN203616316U/zh not_active Expired - Lifetime
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105628919A (zh) * | 2014-10-30 | 2016-06-01 | 上海市第十人民医院 | Cd166作为肝癌诊断血清标志物的应用及其试剂盒 |
| CN104677810A (zh) * | 2015-01-30 | 2015-06-03 | 广东医学院附属医院 | 嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒及其使用方法 |
| CN104677810B (zh) * | 2015-01-30 | 2017-08-22 | 广东医学院附属医院 | 嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒及其使用方法 |
| CN109490544A (zh) * | 2018-09-13 | 2019-03-19 | 浙江博真生物科技有限公司 | 一种用于检测人体免疫年龄的试剂盒及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2021012925A1 (zh) | 一种人外周血淋巴细胞的检测方法 | |
| CN103018463B (zh) | 检测急性b淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒及其应用 | |
| CN203616316U (zh) | 用于检测细胞活化抗原的试剂盒 | |
| CN105980852A (zh) | 细胞分析方法和系统、装置 | |
| CN104360053A (zh) | 一种b淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒 | |
| Fornas et al. | Flow cytometry counting of CD34+ cells in whole blood | |
| CN105223361A (zh) | 一种检测急性t淋巴细胞白血病幼稚t细胞的试剂盒、应用及方法 | |
| CN203535053U (zh) | 用于检测nk细胞活性的试剂盒 | |
| CN202482328U (zh) | 一种循环肿瘤细胞检测仪 | |
| Brunck et al. | Absolute counting of neutrophils in whole blood using flow cytometry | |
| CN105223360A (zh) | 鉴别检测正常浆细胞和克隆性浆细胞的试剂盒及其应用 | |
| CN207130273U (zh) | 一种可捕获细菌的磁力微流控芯片 | |
| CN108780086B (zh) | 靶分析物的亚细胞定位 | |
| CN102998241A (zh) | 一种利用流式细胞仪检测抗原表达水平的方法 | |
| CN104459135B (zh) | 检测样本阴阳性的设备、方法及判断标准的确定方法 | |
| CN104133058B (zh) | 用于检测nk细胞活性的试剂盒 | |
| CN104515728A (zh) | 血液细胞分析仪及网织红细胞计数装置和计数修正方法 | |
| CN204631046U (zh) | 用于检测移植后患者免疫重建功能的试剂盒 | |
| CN104634720B (zh) | 一种基于几何平均荧光指数检测弱抗原表达水平的方法 | |
| CN111879684B (zh) | 一种基于流式细胞术的吞噬细胞功能检测方法 | |
| CN204649750U (zh) | 用于检测调节性t细胞的试剂盒 | |
| RU2007137097A (ru) | Способ диагностики вирусов и лунка для применения в данном способе | |
| CN204165989U (zh) | 一种磁性微粒清洗分离再悬浮装置 | |
| CN105388291A (zh) | 一种快速诊断活动性结核病的gamma delta T细胞表面活化分子及试剂盒 | |
| DK1192443T3 (da) | Fremgangsmåde til kvantificering af endotel-mikrosfærer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 100176 building 4, building 3, No. 1, Desheng North Street, Beijing Economic and Technological Development Zone, Daxing District, Beijing Patentee after: BEIJING HAISITE MEDICAL EXAMINE LABORATORY CO.,LTD. Address before: 100176, Beijing, Daxing District, Beijing Yizhuang economic and Technological Development Zone, 1 North Sheng street, A-3, A-4 Patentee before: BEIJING HIGHTRUST DIAGNOSTICS CO.,LTD. |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20140528 |
|
| CX01 | Expiry of patent term |