CN202854148U - 一种胃蛋白酶原ⅰ时间分辨荧光免疫检测试剂盒 - Google Patents
一种胃蛋白酶原ⅰ时间分辨荧光免疫检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
一种胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫检测试剂盒,属于体外试剂诊断技术领域。本实用新型基于双抗夹心方法,利用了抗原抗体特异性免疫反应,定量检测血清(浆)中PGI含量。试剂盒内组成包括:抗PGⅠ单克隆抗体包被板,PGⅠ标准品,Eu标抗PGⅠ单克隆抗体,缓冲液,增强液,浓缩洗板液。利用标记物的荧光和高效价的单克隆抗体,达到血清不需要稀释直接反应检测,减轻工作量的目的;同时获得宽的测量范围,便于临床使用。本实用新型的积极意义在于:试剂盒灵敏度高、特异性好、测量范围宽、操作简单,利于大规模推广应用,有广阔的市场前景。
Description
技术领域
本实用新型涉及定量检测血清(血浆)中胃蛋白酶原Ⅰ含量的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒,属于体外试剂诊断技术领域。
背景技术
胃蛋白酶原Ⅰ(简称PGⅠ)由胃底腺的主细胞、颈黏液细胞分泌,大部分进入胃腔,少量进入血液循环,而胃是PGⅠ的唯一来源,因此水平的变化可以反映胃粘膜状态和细胞数量的改变。
国内外临床研究指出,PGⅠ升高,提示胃黏膜破损可能性高,患胃溃疡、胃炎的风险增加;PGⅠ降低,则患有萎缩性胃炎的可能性明显增加,甚至有患胃癌的风险。测定PGⅠ含量有助检测出胃溃疡、萎缩性胃炎、胃炎、胃癌等其他消化道疾病,供临床检测和体检筛查需求。国内外学者对胃癌患者的血清PG变化作了大量研究指出:胃癌患者的血清PG含量急剧降低,低分化癌患者PGⅠ含量更低于分化较高的胃癌患者;有数据显示,在被确诊的胃癌患者中,检测他们几年前的血样品可以发现,1/3的患者在当时还健康的情况下血清PG水平已经降低;PGⅠ与PGⅠ/PGⅡ比值并联使用灵敏度高,可有效应用于胃癌高发区人群的初步筛查。因此,PG检测被称为胃部的“血清学活检”,作为非侵入性方法,降低患者痛苦,简便、经济,具有普查价值。
采用时间分辨荧光测量技术,以稀土离子为示踪材料,组建的PGI的TRFIA试剂盒具有测量灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染等优点,是目前PGI检测方法中最灵敏、测量范围最宽的方法之一,非常有利于大规模的普查筛选及患者病程检测。
实用新型内容
本实用新型的目的是提供出一种新型的PGⅠ的时间分辨荧光免疫检测试剂盒,运用稀土离子的荧光放大效应,,达到灵敏度高、特异性好、量程范围宽的目的。该试剂盒能够实现快速、简便的检测。
本实用新型的技术方案:一种胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫检测试剂盒,该试剂盒的盒体(7)内设有:包被有PGⅠ单克隆抗体的微孔板,即抗体反应板1块(1),PGⅠ标准品6瓶(2),Eu标抗PGⅠ单克隆抗体(3),缓冲液1瓶(4),增强液1瓶(5),浓缩洗板液1瓶(6)。
抗体反应板1块(1)放置于盒体(7)内的右前部,PGⅠ标准品6瓶(2)放置于盒体(7)内的右后部,为6只竖放的相邻放置的小瓶;盒体(7)内的左后部放置1只竖放的Eu标抗PGⅠ单克隆抗体(3)小瓶,盒体(7)内的左 前部从前向后依次放置横向的缓冲液1瓶(4)、浓缩洗板液1瓶(6)、增强液1瓶(5),此种放置方式使试剂盒体积紧凑,并使用方便。
抗体反应板(1)为抗PGⅠ单克隆抗体包被,可拆卸96孔板;Eu标记的PGⅠ单克隆抗体(3)为另一株与包被抗体成对的抗PGⅠ单克隆抗体;PGⅠ标准品(2)为不同浓度的PGⅠ抗原冻干品一套。
另附操作说明书。每个试剂盒的试剂足够96次测定,检测时包被抗体与Eu标记另一株抗体与样本中的抗原构成夹心复合物,加入增强液后,样品荧光计数与样品PGⅠ含量成正相关,根据标准曲线即获得相应PGⅠ浓度,操作简便。
本实用新型的有益效果:一、灵敏度高,可达0.05ng/mL;二、量程宽,血清(浆)样本不需要稀释,样品浓度值介于0-300ng/mL的都能准确检测;三、检测时间短,2小时完成。
附图说明
图1本实用新型的结构示意图。图中:1、包被有PGI单克隆抗体的微孔板,即抗体反应板1块(96T);2、PGI标准品(0-300ng/mL,6瓶);3、Eu标抗PGⅠ单克隆抗体(另一株,与包被抗体成对)1×0.5mL/瓶(用时1︰50稀释);4、缓冲液:一瓶,50mL;5、增强液:一瓶,30mL;6、浓缩洗板液:一瓶,40mL;7、盒体。
具体实施方式
实施例1:PGI的TRFIA样品测定
(1)试剂的准备
a、冻干品:使用前将冻干品平衡至室温,用1mL蒸馏水溶解。
b、将所需数量的抗体反应板条使用前平衡至室温。
c、洗涤液:将浓缩洗板液用蒸馏水1︰25倍稀释,作为工作洗涤液。
d、Eu-标抗PGⅠ单克隆抗体的稀释:在应用前1小时内根据样品量以缓冲液1︰50倍稀释。
(2)试验步骤
a、取抗体反应板,从第一孔开始,每孔依次加入50μL的标准品(共6个标准点,建议做复孔以保证标准曲线的可靠性)。在标准品后依次加入50μL样品(建议采用双孔测量)。
b、加完标准品及样本之后,每孔再加入150μL缓冲液,25℃振荡孵育1小时,工作洗涤液冲洗4次。
c、每孔依次加入已用缓冲液1︰50倍稀释的Eu标抗PGⅠ单克隆抗体200μL,25℃振荡孵育1小时,工作洗涤液冲洗6次。
d、每孔加增强液200μL,25℃振荡孵育5分钟后测量。
e、待测试运行结束后,退出样本,收回所用试剂于2~8℃放置。所用抗体 反应板条取出后弃去,请勿重复使用。
结果处理:根据已知PGⅠ浓度的系列参考标准品的相应发光强度可得到标准曲线,通过双对数数学模型回归处理得到回归直线,未知样品的PGⅠ浓度可以通过其相应发光强度从回归直线上反算出来(表1)。
表1
本实用新型所述实施例是指导性的,非限定性的,只是帮助理解本实用新型,因此本实用新型并不限于具体实施方式中所述的实施例,凡是由本领域技术人员根据本实用新型的技术方案得出的其他具体实施方式,同样属于本实用新型保护的范围。
Claims (1)
1.一种胃蛋白酶原Ⅰ时间分辨荧光免疫检测试剂盒,其特征在于:试剂盒的盒体(7)内设有:包被有PGⅠ单克隆抗体的微孔板,即抗体反应板1块(1); PGⅠ 标准品6瓶(2);Eu标抗PGⅠ单克隆抗体(3)、缓冲液1瓶(4)、增强液1瓶(5)、浓缩洗板液1瓶(6);
抗体反应板1块(1)放置于盒体(7)内的右前部,PGⅠ标准品6瓶(2)放置于盒体(7)内的右后部,为6只竖放的相邻放置的小瓶;盒体(7)内的左后部放置1只竖放的Eu标抗PGⅠ单克隆抗体(3)小瓶,盒体(7)内的左前部从前向后依次放置横向的缓冲液1瓶(4)、浓缩洗板液1瓶(6)、增强液1瓶(5),此种放置方式使试剂盒体积紧凑,并使用方便;
抗体反应板(1)为抗PGⅠ单克隆抗体包被,可拆卸96孔板;Eu标抗PGⅠ单克隆抗体(3)为Eu标记的另一株与包被抗体成对的抗PGⅠ单克隆抗体;PGⅠ标准品(2)为不同浓度的PGⅠ抗原冻干品一套。
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