CN1977852B

CN1977852B - 含有二苯乙烯总苷的药物组合物及其在制备治疗乙型肝炎药物中的应用

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Publication number: CN1977852B
Application number: CN2005101276359A
Authority: CN
Inventors: 周亚伟
Original assignee: Individual
Current assignee: Suzhou Green Growth Investment Center LP
Priority date: 2005-12-07
Filing date: 2005-12-07
Publication date: 2010-04-21
Anticipated expiration: 2025-12-07
Also published as: CN1977852A

Abstract

本发明属于中药新药研发领域，具体涉及一种治疗乙型肝炎的药物组合物，其主要成分为从我国传统中药虎杖中提取的有效部位二苯乙烯总苷(其中的主要成分为虎杖苷)，且二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于55％。本发明还提供了含有二苯乙烯总苷的药物制剂，其优选剂型为胶囊剂、片剂及冻干粉针剂。本发明所述的含有二苯乙烯总苷的药物组合物及其制剂具有较好的保肝、降酶、抗乙肝病毒的作用，可在制备治疗乙型肝炎药物中的应用，包括急、慢性乙型肝炎和病毒性乙型肝炎。

Description

含有二苯乙烯总苷的药物组合物及其在制备治疗乙型肝炎药物中的应用

发明领域

本发明属于中药新药研发领域，具体涉及一种含有二苯乙烯总苷的药物组合物及其在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。

背景技术

肝炎的发生多为病毒感染所致。在我国罹患率较高的是乙型病毒性肝炎。据不完全统计，急性乙型病毒性肝炎的治愈率约为1/3，死亡率约为1/3，其余多转为慢性乙肝。慢性乙肝以及乙肝病毒携带者在我国发生率已逾10％。目前市场上疗效较好的抗乙肝病毒药物很少，而且也未能满足病人的需要。在品种繁多的治疗乙肝病毒药物中，西药因价格昂贵、副作用较大，疗效不能令人满意，在我国推广使用难合国情。为此，迫切需要为众多的乙型肝炎疾病患者提供药理作用明确、药效高、毒副作用低的治疗乙型肝炎的药物。

虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎，其性微苦，微寒；归肝、胆、肺经；虎杖具有祛风利湿、祛痰止咳、清热解毒、活血化瘀等功效。从现代研究来看，虎杖具有抗血小板聚集、改善微循环、保肝降酶、降脂、抗氧化、抗病毒等多种药理活性，临床用于治疗高血压、动脉粥样硬化、高脂血症及各种病毒感染等疾病。

有关虎杖的药理作用报道很多。其中刘蕾等(虎杖对小鼠CCl₄性肝损伤的保护作用.黑龙江医药科学，2001年6月第24卷第3期)研究结果表明虎杖煎剂能显著降低CCl₄(四氯化碳)诱导的肝损伤小鼠的血清ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)值，增强SOD(超氧化物歧化酶)活力，降低MDA(丙二醛)含量，说明虎杖煎剂对CCl4致肝损伤具有一定保护作用。谢扬等(虎杖及其复方制剂抗病毒有效成分研究与临床应用.时珍国医国药，2004，15(8)：527)报道虎杖及其复方制剂是常用的一种光谱抗病毒中药，已广泛应用于病毒性肝炎等疾病的治疗。从报道的文献中可以看出虎杖具有明显的保肝、抗病毒作用，但其发挥作用的确切有效成分还未见有详细报道。

发明内容

本发明人针对上述现象，对虎杖进行了深入研究，并发现了虎杖中的有效部位二苯乙烯总苷具有明显的保肝降酶、利胆、抗病毒作用。

本发明的目的在于提供一种含有二苯乙烯总苷的用于治疗乙型肝炎的药物组合物及其药物制剂，并提供了该药物组合物或药物制剂在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。

本发明所述的二苯乙烯总苷是从中药虎杖中提取的有效部位。所述虎杖为蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根茎。本发明在此提供了一种制备二苯乙烯总苷的制备方法。

本发明所述的二苯乙烯总苷可用如下方法得到：取虎杖药材，粉碎成过10-30目筛的粗粉，用8-16倍药材重量体积的水或不同浓度乙醇提取，提取液减压浓缩至相对密度为1.05～1.08(60℃时)的浸膏，加3-10倍药材重量的去离子水溶解，离心(3000转/分，8分/次)，上清液过大孔吸附树脂柱，用去离子水除杂，然后再用10％以下浓度乙醇除杂，最后用20％-40％的乙醇以0.8L/kg.h流速解吸，收集解吸液，减压回收乙醇，浓缩并真空干燥(60℃，-0.09Mpa)，粉碎得虎杖提取物，其有效部位为二苯乙烯总苷。上述虎杖提取物中二苯乙烯总苷含量以虎杖苷计大于等于55％。

上述提取方法中所用的树脂可以是D-101、Dm301或AB-8型。

本发明所述的二苯乙烯总苷也可以通过其它制备方法制备，其二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量应大于等于55％。

经研究，本发明所述的二苯乙烯总苷主要包含两种化合物，分别为白藜芦醇(Resveratrol)和虎杖苷(Polydatin)，其中主要成分为虎杖苷。二者化学结构式如下：

本发明提供了一种含有二苯乙烯总苷的用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其中的活性成分为二苯乙烯总苷，且二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于55％。

本发明所述的含有二苯乙烯总苷的用于治疗乙型肝炎的药物组合物，其中二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于80％。

为了将二苯乙烯总苷开发成治疗乙型肝炎的药物，可将其制成不同的药物剂型，该中药药物制剂以上述二苯乙烯总苷为主要活性成分，并包括了药剂学上可接受的辅料组分。药物剂型包括常规剂型如：片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、贴剂、霜剂等。另外可制成新型给药制剂，如：经皮给药系统、靶向给药制剂、缓控释制剂、粘膜给药系统等，其中靶向给药制剂可以是纳米粒、脂质体、微囊、微球等。给药途径可以包括口服、粘膜、经皮、注射等，其中注射给药可以是经肌肉、皮下或静脉等途径。在制备胶囊剂或片剂时，选用的辅型剂可以是淀粉、糊精或环糊精、蔗糖、硬脂酸盐等常规充填剂。各制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。

本发明所述的含有二苯乙烯总苷的药物制剂，优选剂型是胶囊剂和片剂，其中二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于55％，其制备方法可按领域内公知的制备技术制备。

本发明所述的含有二苯乙烯总苷的药物制剂，优选剂型是冻干粉针剂，其中二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于80％，其制备方法可按领域内公知的制备技术制备。

为了研究二苯乙烯总苷在制备治疗乙型肝炎药物中的应用，本发明人根据《中药(新药)临床前研究指导原则》，重点研究了二苯乙烯总苷在保肝降酶和抗乙肝病毒方面的药效，另外也研究了二苯乙烯总苷在免疫调节、利胆和降脂等方面的药效。研究结果表明：二苯乙烯总苷对各种因素导致的急、慢性肝损伤均具有显著的预防保护和治疗作用；体外实验和体内实验提示其对乙肝病毒(HBV)亦具有显著的抑制作用；另外研究还表明，二苯乙烯总苷可以提高正常大鼠胆汁流量，调节脂质代谢的异常，并对机体特异性细胞免疫功能具有调节作用，而免疫功能失调正是慢性肝炎肝细胞损伤的主要机理。研究结果说明二苯乙烯总苷可从多个环节来发挥治疗肝炎的功效。二苯乙烯总苷的急性毒性研究、一般药理研究以及对大鼠和犬的长期毒性研究结果均提示该药物毒性非常小，药效剂量远低于毒性剂量。因此二苯乙烯总苷具有明显的保肝降酶、利胆、降脂、抗病毒作用，且具有免疫调节功能。鉴于二苯乙烯总苷具有高效、低毒的特点，因此市场应用前景非常广阔。

综上所述，本发明所述的药物组合物或者药物制剂可在制备治疗乙型肝炎药物中的应用，具体包括在制备治疗急、慢性乙型肝炎药物中的应用和在制备治疗乙型病毒性肝炎药物中的应用。

具体实施例

为了便于理解二苯乙烯总苷在制备治疗乙型肝炎药物中的应用，发明人完成了下述主要药效学试验。但本发明并不限于下述试验内容。

试验例1对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的预防保护作用

一、材料与方法

1.受试药物：二苯乙烯总苷，性状，棕褐色粉末，由本发明人制备，含量＞55％。

2.阳性对照药：联苯双酯滴丸，北京协和药厂，规格：1.5mg×500丸/盒，批号：03100103，有效期：3年。

3.实验动物

II级昆明种小鼠，雌雄各半，体重22±2g，由北医实验动物科学部提供。

4.方法

取昆明种小鼠72只，雌雄各半，按体重随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(联苯双酯200mg/kg)、二苯乙烯总苷小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)剂量组，共6组，12只/组。除空白对照组与模型对照组外，其余各组均按0.2ml/10g灌胃给药，空白对照组和模型对照组给予等体积的蒸馏水，每日1次，共7日，并于第7日给药1h后，除空白对照组外，其余各组均腹腔注射0.12％四氯化碳花生油溶液0.1ml/10g造成小鼠急性肝损伤模型，造模后16h摘眼球取血测血清ALT、AST。

5.数据统计方法

数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较运用方差齐性检验和t检验。

二、试验结果(见表1)

表1二苯乙烯总苷对四氯化碳致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST的影响(n＝12，x±s)

注：与空白对照组比较，^△△△P＜0.001；与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^**P＜0.001。

由上表结果可见，二苯乙烯总苷小、中、大剂量组与模型对照组比较，ALT、AST值明显降低，经统计学处理差异均有显著性，且具有良好的剂量效应关系。本结果说明二苯乙烯总苷对四氯化碳致小鼠急性肝损伤有明显的预防保护作用。

试验例2对D-氨基半乳糖致大鼠急性肝损伤的治疗作用

一、材料与方法

受试药物、阳性对照药、数据统计处理方法同试验例1。

1.实验动物

II级Wistar大鼠，雌雄各半，体重140～160g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证号：SCXK11-00-0006。

2.方法

Wistar大鼠72只，雌雄各半，体重140～160g，按体重随机分为6组，即空白对照组、模型对照组、阳性对照组(联苯双酯150mg/kg)、二苯乙烯总苷小(15mg/kg)、中(30mg/kg)和大(60mg/kg)剂量组。除空白对照组腹腔注射等体积的生理盐水外，其余各组均腹腔注射D-氨基半乳糖生理盐水溶液600mg/kg，造成急性肝损伤模型。造模后除空白对照组与模型对照组给予等体积的生理盐水外，其余各组分别在造模后1小时、10小时及21小时按0.2ml/10g的给药量灌胃给药一次，并于造模后22小时腹主动脉取血，测血清ALT、AST、TP、ALB值。

二、试验结果(见表2、表3)

表2二苯乙烯总苷对D-氨基半乳糖致大鼠急性肝损伤血清ALT、AST的影响(n＝12，x±s)

注：与空白对照组比较，^△△△P＜0.001；与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

由上表结果可见：二苯乙烯总苷小、中、大剂量组与模型对照组比较，ALT、AST值明显降低，经统计学处理差异具有显著性。

表3二苯乙烯总苷对D-氨基半乳糖致大鼠急性肝损伤

血清TP、ALB的影响(n＝12，x±s)

由上表结果可见，二苯乙烯总苷小、中、大剂量组与模型对照组比较，TP值明显升高，ALB值明显升高，差异具有显著性。

以上结果可知，二苯乙烯总苷灌胃给药对D-氨基半乳糖致大鼠急性肝损伤有明显的治疗作用。

试验例3对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的预防保护作用

一、材料与方法

受试药物、阳性对照药、试验动物、数据统计处理方法同试验例1。

试验方法：取昆明种小鼠72只，雌雄各半，体重22±2g，按体重随机分为空白对照组、模型对照组、阳性组(联苯双酯200mg/kg)、二苯乙烯总苷小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)剂量组，共6组，12只/组。除空白对照组和模型对照组外，其余各组均按0.2ml/10g灌胃给予相应药物，空白对照组与模型对照组给予等体积的生理盐水，每日1次，共7日。于末次给药后1h，除空白对照组外，其余各组均按0.2ml/10g灌胃给对乙酰氨基酚(120mg/kg)造成小鼠急性肝损伤模型，空白对照组灌胃给等体积生理盐水(造模后禁食)，于造模后16h摘眼球取血，离心并提取血清，测血清ALT、AST。

二、试验结果(见表4)

表4二苯乙烯总苷对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST的影响(n＝12，x±s)

由上表可知：二苯乙烯总苷小、中、大剂量组与模型对照组比较，ALT值均明显降低，差异具有显著性(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)，AST值均明显降低，差异具有显著性(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。结果表明：二苯乙烯总苷对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤有明显的预防保护作用。

试验例4对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤的治疗作用

一、材料与方法

受试药物、阳性对照药、试验动物、数据统计处理方法同试验例2。

试验方法：取Wistar大鼠86只，随机分出12只为空白对照组。其余均皮下注射25％四氯化碳花生油溶液(2ml/kg)，每周一、四各1次，连续6周，造成慢性肝损伤模型。于造模2周后眶后取血测血清ALT及AST值，根据血清ALT及AST值，并参考体重分为5组，即模型对照组、联苯双酯组(150mg/kg)、二苯乙烯总苷小(15mg/kg)、中(30mg/kg)、大(60mg/kg)剂量组。各组按1ml/100g体积灌胃给药，模型及空白对照组给予等体积生理盐水，每天给药一次，连续给药4周。于末次给药后24小时，腹腔注射戊巴比妥钠(30mg/kg)将大鼠麻醉，腹主动脉取血，分离血清，测血清ALT、AST、A/G(白蛋白/球蛋白)值，并取肝脏测定肝脏羟脯氨酸及肝糖原含量。

二、试验结果(见表5、6)

表5二苯乙烯总苷对慢性肝损伤大鼠血清ALT、AST、A/G的影响(n＝12，x±s)

注：与空白对照组比较，^△△△P＜0.001；与模型对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

由上表可知，二苯乙烯总苷小剂量组与模型对照组比较，ALT含量明显降低，差异具有非常显著性(P＜0.01)，中、大剂量组与模型对照组比较，ALT含量明显降低，差异具有极显著性(P＜0.001)。二苯乙烯总苷各给药组AST含量均有降低趋势，其中中、大剂量组与模型对照组比较，AST值明显降低，经统计学处理差异具有显著性和极显著性(P＜0.05、P＜0.001)。二苯乙烯总苷各剂量组A/G值均有回升的趋势，其中中、大剂量组与模型对照组比较，A/G值明显升高，经统计学处理差异均有显著性(P＜0.05)。

表6二苯乙烯总苷对慢性肝损伤大鼠肝糖原、羟脯氨酸含量及肝系数的影响(n＝12，x±s)

注：与空白对照组比较，^△△P＜0.01 ^△△△P＜0.001；与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001

由上表可知，二苯乙烯总苷小、中、大剂量组与模型对照组比较，肝糖原均明显升高，肝脏羟脯氨酸含量明显降低，经统计学处理，差异有显著性。

由表5和表6可知，二苯乙烯总苷对四氯化碳致大鼠慢性肝损伤有明显的治疗作用。

试验例5对小鼠免疫性肝损伤的预防保护作用

一、材料与方法

试验方法：取昆明种小鼠90只，雄性，按体重随机分为空白对照组、模型对照组、阳性联苯双酯组(200mg/kg)、二苯乙烯总苷小(20mg/kg)、中(40mg/kg)、大(80mg/kg)剂量组，共6组，每组15只。除空白对照组给予等体积的生理盐水外，其余各组均尾静脉注射卡介苗5×10⁷U/只一次，12天后小鼠再尾静脉注射脂多糖6.0μg/只一次，造成小鼠免疫性肝损伤模型。注射卡介苗后，除空白与模型组给予等体积的生理盐水外，注射卡介苗后二苯乙烯总苷小、中、大剂量组和阳性药组分别给予相应剂量药物，按0.2ml/10g体积灌胃给药，每日一次，共12日。于注射LPS后12h，摘眼球取血，离心血清测ALT、AST、TP(总蛋白)、ALB(白蛋白)、A/G(白蛋白/球蛋白)。

二、试验结果(见表7、8)

表7二苯乙烯总苷对小鼠免疫性肝损伤动物血清ALT、AST的影响(n＝15，x±s)

注：与空白对照组比较^△△△P＜0.001；与模型对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

由上表可知，二苯乙烯总苷小、中、大剂量与模型组比较，ALT值有不同程度下降，具有显著性差异；大剂量组AST值有显著性下降。

表8二苯乙烯总苷对小鼠免疫性肝损伤血清TP、ALB、A/G

从表中可知，二苯乙烯总苷中、大剂量组与模型对照组比较，TP、A/G值明显升高，经统计学处理具有显著性差异。二苯乙烯总苷三个剂量与模型对照组比较，ALB值有不同程度升高，经统计处理具有显著性差异。

本试验结果说明：二苯乙烯总苷对小鼠免疫性肝损伤具有明显的预防保护作用。

试验例6对乙肝病毒抑制作用的体外研究

一、材料与方法

1.材料

1.1实验细胞株2.2.15细胞，为基因组内整合有人乙肝病毒全基因组的肝癌HepG₂细胞。

1.2药物

受试药物：二苯乙烯总苷，同试验一；阳性药物：拉米夫定(3TC)片剂

2.实验方法

细胞接种于96孔板24小时后，弃去各孔培养液，将二苯乙烯总苷药液从1mg/ml设起，依次用DMEM培养液2倍稀释成6个浓度，每个浓度药液作用5孔细胞，每孔药液终体积为200μL，同时设不给药细胞对照，于37℃，5％CO₂条件下培养72～96小时。用MTT试验测定各孔细胞的OD值(吸光值)。用BLiss法计算二苯乙烯总苷对2.2.15细胞的半数毒性浓度TC₅₀及无毒浓度(近似使95％的细胞存活的药物浓度)。

在95％细胞存活的药物浓度以下设置6个倍比稀释的药物浓度，作用于2.2.15细胞，给药方式同上，培养8天，分别收集培养4天及8天的培养上清液，用Elisa方法测定HBsAg和HBeAg的含量，具体用OD值表示；并计算受试药物对HBsAg和HBeAg的抑制百分率；用BLiss法算出二苯乙烯总苷和拉米夫定(3TC)对HBsAg和HBeAg的半数抑制浓度(IC₅₀)。试验重复3次，观察药物作用的稳定性。

采用治疗指数(TI)为评价药物安全性和有效性的指标，具体计算方法如下：

TI＝TC₅₀(细胞生长抑制率为50％时的药物浓度)/IC₅₀(抗原抑制率为50％时的药物浓度)；

判定标准：TI＞2为有效；1≤TI≤2为有毒有效；TI＜1为毒性作用。可将受试药物与阳性对照药进行比较研究。

二、试验结果(结果见表9)

表9二苯乙烯总苷和3TC对乙肝病毒HBsAg和HBeAg的治疗指数(T1)

三批实验中二苯乙烯总苷对HBsAg和HBeAg TI的平均值分别为2.0和4.5；3TC在三批实验中，对HBsAg的TI平均值为4.6，对HBeAg未检测到抑制作用。

本试验结果表明：二苯乙烯总苷体外对乙肝病毒具有抑制作用，其中对HBeAg的抑制作用尤为显著。

试验例7对鸭乙型病毒性肝炎的影响

一、材料和方法

1.材料

1.1动物：1日龄北京麻鸭，购自北京前进种鸭厂。

1.2鸭乙型肝炎病毒阳性血清：采自上海麻鸭。

1.3质粒：pUC18-DHBV-DNA(含有DHBV全基因组DNA；DHBV为鸭乙肝病毒)。

1.4药品：

受试药物同试验例1；阳性药物：拉米夫定(3TC)，同试验6。

2.方法

2.1建立鸭乙型肝炎动物模型

1日龄北京麻鸭，经腿胫静脉注射麻鸭DHBV-DNA阳性鸭血清，每只0.3ml，以构建鸭乙型肝炎动物模型。7天后取血，进行斑点杂交实验，检测血清中DHBV-DNA含量，筛选感染阳性麻鸭。

2.2实验分组及方法

选取感染阳性麻鸭75只，随机分为5组，每组15只，分别为：模型组(灌胃等体积生理盐水)、阳性药组(口服给药3TC，20mg/kg)、二苯乙烯总苷小(60mg/kg)、中(120mg/kg)、大(240mg/kg)三个剂量给药组，药物经鸭灌胃给药，给药体积为1mL/100g，每天1次，连续给药10天，停药3天。同时取10只麻鸭作为正常对照组，灌胃给予等体积生理盐水，与其他剂量组平行操作，分别在给药前(T₀)、给药后第5天(T₅)、给药后第10天(T₁₀)及停药后第3天(P₃)取鸭颈血清测DHBV-DNA及DHBpresAg含量，停药3天后各组麻鸭处死。

2.3观察指标及检测方法

2.3.1鸭血清DHBV-DNA含量(斑点杂交法检测)

按照Dig标记和检测试剂盒说明书方法进行操作。将上述鸭血清进行点膜，用Dig标记的DHBV全基因组DNA作为探针，进行斑点杂交，NBT/BCIP底物显色，用CMIAS系列-多功能真彩色病理图象分析系统分析膜上斑点的平均光密度值，以该值来代表样本中DHBV-DNA水平。

2.3.2鸭血清鸭乙肝病前s表面抗原(DHBpresAg)含量(ELISA方法检测)

取待检测鸭血清，包被酶标板，通过ELISA方法测OD值，以OD值的高低来反映血清中DHBpresAg的含量，OD值越高代表DHBpresAg的含量越高。

2.3.3数据统计与分析方法

将每组鸭给药后给药后第5、10天和停药后第3天鸭血清DHBV-DNA水平/DHBpresAg水平分别与同组给药前鸭血清DHBV-DNA水平/DHBpresAg水平比较(采用成对t检验)，分析差异的显著性；将各给药组鸭给药前、给药后第5、10天和停药后第3天鸭血清DHBV-DNA水平/DHBpresAg水平分别与相应模型组(给药前、给药后第5、10天和停药后第3天)鸭血清DHBV-DNA水平/DHBpresAg水平比较(采用组间t检验)，分析差异的显著；判断药物对该两指标的抑制效果；同时计算每组鸭用药给药后第5、10天和停药后第3天对鸭血清中上述两指标的抑制率。

二、试验结果(见表10、11、12、13)

表10二苯乙烯总苷对鸭血清中DHBV-DNA含量的影响

注：*：成对t检验：给药组不同时间(T5、T10、P3)鸭血清DHBV-DNA平均光密度值与未药前(T0)平均光密度值比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

△：组间t检验：给药组不同时间(T5、T10、P3)鸭血清DHBV-DNA平均光密度值与模型组(T5、T10、P3)平均光密度值比较，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001。

表11二苯乙烯总苷对鸭血清中DHBV-DNA的抑制率结果

由上表可见：二苯乙烯总苷能明显降低鸭血清中DHBV-DNA的含量，具有差异显著性，且具有良好的量效关系，停药后无“反跳”现象。二苯乙烯总苷对DHBV-DNA的抑制率最高可达61％，且大剂量组的抑制率明显高于中、小剂量组。

表12二苯乙烯总苷对鸭血清中DHBpresAg的影响

注：*：成对t检验，给药组不同时间(T5、T10、P3)鸭血清DHBV-DNA平均光密度值与未给药前(T0)平均光密度值比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

表13二苯乙烯总苷对鸭血清中DHBpresAg的抑制率结果

由表可见，二苯乙烯总苷对DHBpresAg有抑制作用，但对DHBV-DNA的抑制率更高，考虑到DHBpresAg的含量只能近似代表病毒的数量，而病毒DNA的含量更接近真实的病毒量，故仍认为二苯乙烯总苷对乙肝病毒的增殖具有明显的抑制作用，且作用持久而稳定。

本实验结果说明：二苯乙烯总苷对鸭乙型病毒性肝炎具有较好的治疗效果作用。

具体实施方式

以下通过实施例来进一步阐述本发明药物的制备方法

[实施例1]本发明所述二苯乙烯总苷优选的制备方法

按照说明书中提供的制备方法制备二苯乙烯总苷，具体如下：取虎杖药材(虎杖苷含量在2.55％)100kg，粉碎成过20目筛的粗粉，用12倍药材重量体积的60％乙醇以0.6L/kg.h流速渗漉，提取液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.06(60℃时)的浸膏，加6倍药材重量的去离子水溶解，离心，上清液以0.8L/kg.h流速过D-101大孔吸附树脂柱(柱径∶柱高＝1∶10，树脂重量为药材重量的1.5倍)，用6倍于D-101树脂体积的去离子水以1L/kg.h流速除杂，然后再用6倍于D-101树脂体积的10％乙醇以0.8L/kg.h流速除杂，最后用8倍于D-101树脂体积的30％的乙醇以0.8L/kg.h流速解吸，收集解吸液，减压回收乙醇，浓缩并真空干燥，粉碎得二苯乙烯总苷，其含量为59.46％，虎杖苷含量为58.72％。

[实施例2]本发明优选剂型胶囊剂的制备方法

[处方]虎杖总苷100克共制成1000粒

[制法]按照实施例1所述的制备方法制备二苯乙烯总苷，粉碎过80目筛，加入药用淀粉，过筛混合均匀，喷入95％乙醇溶液，制软材，过40目筛制粒，60℃干燥，分装于3#胶囊中，质检，包装，即得。

[实施例3]本发明优选剂型片剂的制备方法

采用实施例1制备方法制备二苯乙烯总苷100克，研磨粉碎，过80目筛。加入过80目筛的药用淀粉40g，混合均匀，干燥后压成1000片(140mg/每片)，即得。本品每粒片剂含虎杖苷(C₂₀H₂₂O₈)，不得少于50mg。口服，一次2粒，每日三次。

Claims

1.含有二苯乙烯总苷的用于治疗乙型肝炎和/或预防急、慢性肝损伤的药物组合物，所述二苯乙烯总苷从虎杖中提取，主要包括白藜芦醇和虎杖苷，二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于55％。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于55％；该药物组合物是用下述方法制备：

取虎杖药材，粉碎成过10-30目筛的粗粉，用8-16倍药材重量体积的水或不同浓度乙醇提取，提取液减压浓缩，至60℃时相对密度为1.05-1.08的浸膏，加3-10倍药材重量的水溶解，离心，3000转/分，8分/次，取上清液过大孔树脂柱，用去离子水、10％以下浓度乙醇除杂，最后用20-40％乙醇以0.8L/kg.h流速解吸，收集解吸液，在60℃，-0.09Mpa下浓缩并真空干燥，粉碎得虎杖提取物，即二苯乙烯总苷。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的制备方法中大孔树脂为D-101、Dm301或AB-8型。

4.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于80％。

5.含有二苯乙烯总苷的药物制剂，其特征在于该制剂是由权利要求1～4任一权利要求所述的药物组合物和药学上可接受的辅料成分制备而成。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于该制剂是片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂、贴剂或霜剂。

7.根据权利要求6所述的药物制剂，其剂型是胶囊剂或片剂，其中二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于55％。

8.根据权利要求6所述的药物制剂，其剂型是冻干粉针剂，其中二苯乙烯总苷以虎杖苷计含量大于等于80％。

9.权利要求1～4任一权利要求所述的药物组合物在制备治疗乙型肝炎和/或急、慢性肝损伤药物中的应用。

10.权利要求5～7任一权利要求所述的药物制剂在制备治疗乙型肝炎和/或急、慢性肝损伤药物中的应用。