CN1952114A - 一种谷氨酸棒杆菌及其应用于制备烟酰胺的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)CGMCC No.1464，其发酵产物是产腈水合酶的细胞，腈水合酶可催化烟腈进行水合反应而生成烟酰胺。本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，先将谷氨酸棒杆菌进行发酵取得产腈水合酶细胞，再以产腈水合酶细胞与烟腈混合，使产腈水合酶细胞所产生的腈水合酶催化烟腈水合反应而得烟酰胺。本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌，该菌株产酶能力强，经发酵所得的产腈水合酶细胞所产生的腈水合酶的总酶活力可达1300U。由于本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌经发酵的腈水合酶的总酶活力高，使其可大大提高应用其发酵产物制备烟酰胺的效率。
Description
技术领域 本发明涉及的是一种谷氨酸棒杆菌及其应用于制备烟酰胺的方法，属生物化学技术领域。
背景技术 烟酰胺，化学名为3-吡啶甲酰胺，是B族维生素中重要的一种，多以饲料添加剂的形式被广泛应用于畜牧业生产当中，同时也有用作制药的中间体，其作用是保障新陈代谢的进行和细胞的正常呼吸。烟酰胺可以通过由以腈水合酶为生物催化剂的烟腈，即3-氰基吡啶的水合反应制备，而腈水合酶则以相应菌的发酵液中的产酶细胞产生，不同菌的腈水合酶的酶活力不同，如：
1991年李文忠等在国家重点科技攻关计划专题95-531-01-01A上公开了棒状杆菌ZBB-21的腈水合酶，总酶活力为190U。
1991年曾云峰等在全国生物化工学会的年会上公开了R84和R310菌株的丙烯腈水合酶，R310的总酶活力可达342.78U。
日本的日东化学工业株式会社(Nitto Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha)1994年公开了红球菌(Rhodoccuccos rhodochrous J-1)菌株的腈水合酶，总酶活力为1000U(美国专利US5334519)。
在此所述总酶活力的单位数定义为1ml发酵液(腈水合酶)和1ml丙烯腈进行反应1hr所产生的丙烯酰胺的微克数。腈水合酶的酶活力越高，其催化烟腈水合反应的效率越高。上述所公开的各种腈水合酶的酶活力都较低，使烟腈水合反应的效率也低，导致烟酰胺的制备成本过高。
发明内容 针对上述不足，本发明是要解决制备烟酰胺所用的腈水合酶的酶活力低下的技术问题，以使制备烟酰胺的效率得到提高，进而提供一种可产生酶活力高的腈水合酶的菌——谷氨酸棒杆菌，并提出其应用于制备烟酰胺的方法。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)CGMCC No.1464，其发酵产物是产腈水合酶的细胞，腈水合酶可催化烟腈进行水合反应而生成烟酰胺。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌，是将从味精制造企业附近土壤中分离得到的野生菌，以通用的微生物培养、分离技术，再经多年菌种选育而得到的新菌株，该菌株属名为：Corynebacterium，种名为：glutamicum，已于2005年9月27日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号是：CGMCC No.1464。
该菌种各特性描述如下：
形态特征：在显微镜下可见为短杆状、棒状，两端钝圆。
培养特征：如表1
表1：
| 培养基名称 | 培养特征 |
| 营养琼脂 | 菌落隆起，无气生菌丝，呈不规则圆形，表面光滑，有光泽， |
| 呈粉红色至桔红色，随培养时间而加深。无可溶性色素。 | |
| 营养肉汤 | 生长旺盛，清，桔红色，絮状菌膜下沉。 |
| 天门冬酰胺—葡萄糖琼脂 | 生长平等，菌落平坦，表面湿润，呈粘液状，菌落色泽呈桔红色，无可溶性色素。 |
生理生化性质：
常规生理生化性质，见表2：
表2：
| 项目 | 生理生化特性 |
| 需氧试验 | 好氧 |
| OF试验 | 氧化、产酸能力弱 |
| 石蕊牛奶 | 产龄、不凝固、不液化 |
| 硝酸还原 | + |
| 厌氧硝酸 | - |
| 盐产气 | - |
| VP试验MR/VP | - |
| 吲哚生产 | - |
| H2S产生 | - |
| 淀粉水解 | - |
| 酪素水解 | - |
| 明胶液化 | - |
| H2O2酶 | + |
| 氧化酶 | - |
| 抗酸性 | - |
| 纤维素水解 | - |
| 生长PH范围 | 6-9 |
| 生长温度范围 | 15℃-40℃ |
| 10％脱脂牛奶72℃15min | 死亡 |
| 色素形成 | - |
| Tween分解(40) | ++ |
| Tween分解(60) | + |
| Tween分解(80) | + |
| 耐盐浓度 | 7％ |
碳源利用，如表3：
表3：
| 碳源 | 碳源利用情况 |
| 葡萄糖 | + |
| 蔗糖 | + |
| 木糖 | + |
| 阿拉伯糖 | + |
| 乳糖 | + |
| 半乳糖 | + |
| 鼠李糖 | - |
| 甘露醇 | + |
| 七叶灵 | - |
| 柠檬酸钠 | + |
| 琥珀酸 | + |
| 醋酸钠 | + |
| 丙腈 | + |
| 丁腈 | + |
| 异丁腈 | + |
| 苯酚 | + |
| 丙烯腈 | + |
| 丙烯酰胺 | + |
氮源利用，如表4：
表4
| 氮源 | 氮源利用情况 |
| (NH4)2SO4 | + |
| NaNO3 | + |
| 尿素 | + |
| 谷氨酸钠 | + |
| 丙烯腈(0.5％) | +- |
| 丙烯腈(1％) | - |
| 丙烯酰胺(0.5％) | + |
| 丙烯酰胺(1％) | + |
用于该菌种长期低温保存的菌种斜面保存培养基，一般使用营养琼脂培养基。因为在保存期间要求菌细胞的代谢活动处于休眠状态，所以其浓度一般控制都较低，且所说的斜面保存培养基不宜使用葡萄糖，以免发酵产酸。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，先将谷氨酸棒杆菌进行发酵取得产腈水合酶细胞，再以产腈水合酶细胞与烟腈混合，使产腈水合酶细胞所产生的腈水合酶催化烟腈水合反应而得烟酰胺，其中：
发酵过程——产腈水合酶细胞的制备是：
先进行发酵种子的培养：种子培养基灭菌后接入菌种，于摇床上恒温振荡培养。培养温度为20-30℃，时间为20-40hr，得到种子液。然后进行发酵：发酵培养基实消后接入培养基体积的1‰-4％的种子液，在通气量1∶0.2-1∶0.8V.V.M(每分钟通入的净空气的体积与发酵物的体积之比)，罐压(表压)0.03-0.06MPa，温度20-30℃下搅拌发酵32-48hr，得到发酵液。最后进行发酵液处理而得可使用的产腈水合酶细胞：将发酵液进行离心，去上清液后在所留湿的产腈水合酶细胞中加入海藻酸钠溶液成浆，海藻酸钠溶液的加入量为与湿的产腈水合酶细胞的重量百分比达到1％，随后在0.2M氯化钙溶液中固化造粒、滤去液体，再加入聚乙酰亚胺和戌二醛进行交联而得到固定化了的产腈水合酶细胞，其中聚乙酰亚胺的加入量为与湿的产腈水合酶细胞的重量百分比达到1-5％，戌二醛的加入量为与湿的产腈水合酶细胞的重量百分比达到0.5-1％。
其中种子培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：葡萄糖0.6-2，酵母膏0.3-0.8，脲0.1-0.7，磷酸二氢钾0.05-0.2，磷酸氢二钾0.05-0.2，硫酸镁0.05-0.2；种子培养基的pH值为7.2-7.5。
发酵培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：葡萄糖1-3，酵母膏0.3-0.8，脲0.1-1，乙酰胺01-2，磷酸二氢钾0.05-0.2，磷酸氢二钾0.05-0.2，硫酸镁0.05-0.2；发酵培养基的pH值为7.2-7.5。
反应过程——烟腈的生物酶催化水合是：
先将在发酵过程中制取的可使用的产腈水合酶细胞与去离子水混合，再在10-15℃的温度下对混合液进行搅拌的同时流加烟腈溶液进行生物酶催化水合反应，烟腈溶液的流加按时段递减进行，流加总量为在反应充分后反应混合液中所含烟腈浓度为80-500ppm。
应用本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌进行烟酰胺的制备，是先将该菌株进行种子培养，再对所得的种子液进行发酵以获得产腈水合酶细胞，然后用所得产腈水合酶细胞在反应混合液中所产生的酶催化烟腈的水合反应，反应所得烟酰胺溶液经过浓缩干燥后便为烟酰胺产品。其中浓缩干燥是公知的烟酰胺溶液的浓缩干燥工艺，特别地，本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，推荐这一浓缩干燥工艺为：将反应所得的烟酰胺溶液进行升温浓缩，浓缩温度为120℃，当烟酰胺浓缩至百分含量60-80％时进行干燥，干燥温度为100-150℃。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，在发酵过程中的发酵种子的培养时，摇床的转速为100-300rpm。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，在发酵过程中发酵培养基的组份中还含有：蛋白胨0.05-0.2g/100ml培养基，味精0.01-0.1g/100ml培养基，氯化钴5-15ppm。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，在发酵过程中发酵罐搅拌机的搅拌速度50-200rpm。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，在反应过程中的搅拌速度为50-100rpm。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，在反应过程中的流加的烟腈溶液的重量百分比浓度为20-30％，在反应物总重量中所加入烟腈溶液中的烟腈重量为10-25％，在反应体系中，湿产腈水合酶细胞重量占5-10％。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，在反应过程中的产腈水合酶细胞与去离子水混合液中还加入pH7.5-8.0的磷酸盐缓冲溶液，缓冲溶液加入量须保证最终反应混合液的pH值在6-9之间，其量为总反应混合物重量的30-40％。
本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌，该菌株产酶能力强，在本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法所确定的发酵条件下能获得较高的生物量，最高可达80mg湿的菌体，即产腈水合酶细胞/ml发酵液，产腈水合酶细胞所产生的腈水合酶的总酶活力可达1300U。所述总酶活力按其单位数定义进行实验确定，即以1ml发酵液和1ml丙烯腈进行反应1hr后以气相色谱法检测所产生的丙烯酰胺的微克数，该微克数即为总酶活力单位数。由于本发明提供的一种谷氨酸棒杆菌经发酵的腈水合酶的总酶活力高，使其可大大提高应用其发酵产物制备烟酰胺的效率。
具体实施方式
1、一谷氨酸棒杆菌，属名为：Corynebacterium，种名为：glutamicum，现保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号是：CGMCC No.1464。其发酵产物是产腈水合酶的细胞，腈水合酶可催化烟腈进行水合反应而生成烟酰胺。
2、上例所说的谷氨酸棒杆菌，在营养琼脂培养基制成的菌种斜面保存培养基中长期低温保存。其中营养琼脂培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：牛肉膏0.3；蛋白胨0.2；氯化钠0.5；琼脂1.8；营养琼脂培养基的pH值为7.2。
3、例1所说的谷氨酸棒杆菌，在营养琼脂培养基制成的菌种斜面保存培养基中长期低温保存。其中营养琼脂培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：牛肉膏1.0；蛋白胨0.05；氯化钠1.0；琼脂1.5；营养琼脂培养基的pH值为7.3。
4、例1所说的谷氨酸棒杆菌，在营养琼脂培养基制成的菌种斜面保存培养基中长期低温保存。其中营养琼脂培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：牛肉膏0.6；蛋白胨0.01；氯化钠0.3；琼脂2.0；营养琼脂培养基的pH值为7.5。
5、例1所说的谷氨酸棒杆菌，菌株的培养是在包含如下组份的培养基中进行的(以g/100ml培养基计)：葡萄糖2；酵母膏0.8；脲0.1；磷酸二氢钾0.05；磷酸氢二钾0.05；硫酸镁0.2；培养基的pH为7.5；培养温度是30℃。
6、例1所说的谷氨酸棒杆菌，菌株的培养是在包含如下组份的培养基中进行的(以g/100ml培养基计)：葡萄糖0.6；酵母膏0.5；脲0.4；磷酸二氢钾0.1；磷酸氢二钾0.2；硫酸镁0.05；培养基的pH为7.2；培养温度是25℃。
7、例1所说的谷氨酸棒杆菌，菌株的培养是在包含如下组份的培养基中进行的(以g/100ml培养基计)：葡萄糖1；酵母膏0.3；脲0.7；磷酸二氢钾0.2；磷酸氢二钾0.1；硫酸镁0.1；培养基的pH为7.3；培养温度是20℃。
8、应用例1所说的谷氨酸棒杆菌进行烟腈胺的制备，一般经过如下步骤：
一、发酵过程：
先进行发酵种子的培养：种子培养基灭菌后接入菌种，于摇床上恒温振荡培养。培养温度为25℃；时间为30hr，得到种子液。然后进行发酵：在发酵罐中加入发酵培养基，实消后接入培养基体积的1％的种子液，在通气量1∶0.6V.V.M(每分钟通入的净空气的体积与发酵物的体积之比)，罐压(表压)0.05Mpa，温度25℃下搅拌发酵32hr，得到发酵液。最后进行发酵液处理而得可使用的腈水合酶：将发酵液进行离心，去上清液后在所留湿细胞中加海藻酸钠溶液成浆，加入量为与湿细胞的重量百分比达到1％，随后在0.2M氯化钙溶液中固化造粒、过滤，再加入聚乙酰亚胺和戌二醛进行交联，聚乙酰亚胺的加入量为与湿细胞的重量百分比达到3％，戌二醛的加入量为与湿细胞的重量百分比达到0.7％。
其中种子培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：葡萄糖1，酵母膏0.5，脲0.4，磷酸二氢钾0.1，磷酸氢二钾0.1，硫酸镁0.1；种子培养基的pH值为7.3。
发酵培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：葡萄糖2，酵母膏0.5，脲0.5，蛋白胨0.1，味精0.1，乙酰胺1，磷酸二氢钾0.1，磷酸氢二钾0.1，硫酸镁0.1；还含有氯化钴15ppm；发酵培养基的pH值为7.3。
二、反应过程：
先将在发酵过程中制取的可使用的产腈水合酶细胞与去离子水混合，再在13℃的温度下对混合液进行搅拌的同时流加烟腈溶液进行生物酶催化水合反应，烟腈溶液的流加按时段递减进行，流加总量为在反应充分后反应混合液中所含烟腈浓度为200ppm。
9、如上例，在反应过程中，先以含有1吨湿产腈水合酶细胞的固化细胞与去离子水混合成可搅拌状态，合2吨，再流加总量为4吨、重量百分比浓度为30％的烟腈溶液，使烟腈在总反应混合物中占20％，在流加时递减进行。
10、对上例所得的烟酰胺溶液进行升温浓缩，浓缩温度到达120℃，当烟酰胺浓缩至重量百分含量70％时进行干燥，干燥温度为120℃。
11、应用例1所说的谷氨酸棒杆菌进行烟腈胺的制备，其全部工序如下：
先进行发酵种子的培养。在8只500ml三角瓶中各装入50ml的种子培养基，灭菌后接入一接种铲的菌种，于摇床室中放入摇床上恒温振荡培养。培养温度30℃；转速为200rpm；培养时间40h，此培养液为种子液。
其中种子培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：葡萄糖2；酵母膏0.8；脲0.1；磷酸二氢钾0.05；磷酸氢二钾0.05；硫酸镁0.2；培养基的pH为7.5。
接下来在50001的发酵罐中装入15001的发酵培养基，实罐消毒后接入31种子液，在通气量为1∶0.5V.V.M；罐压(表压)为0.03MPa；温度为22℃等条件下发酵40hr，发酵罐搅拌速度前20hr为150rpm，后20hr为70rpm。
其中发酵培养基的组份中含有(以g/100ml培养基计)：葡萄糖1，酵母膏0.8，脲0.1，蛋白胨0.05，味精0.01，乙酰胺2，磷酸二氢钾0.2，磷酸氢二钾0.2，硫酸镁0.2；还含有氯化钴5ppm；发酵培养基的pH值为7.2。
再将发酵液在台式离心机中进行离心，去上清液后取固体，即湿的产腈水合酶菌体细胞，加入1％重(按湿产腈水合酶细胞重计量)海藻酸钠溶液成浆状后，在0.2M氯化钙溶液中固化造粒、过滤，再加入1％聚乙酰亚胺和0.5％戌二醛进行交联。
再将固定化的产腈水合酶细胞加入到反应釜中，同时加入去离子水和pH7.5-8.0的磷酸盐缓冲溶液至2吨，在10℃的温度，100rpm的搅拌速度下进行酶催化反应。反应过程中向反应釜流加烟腈溶液，烟腈溶液的浓度为以3.2t水和1.6t烟腈配制而成，流加速度第一小时800kg，第二小时700kg，依次每小时阶梯式递减100kg，直至加毕，经过8hr的反应后检测浓度，当反应釜中混合液所含烟腈浓度(底物浓度)为80ppm时，将该混合液以微膜超滤系统进行过滤，得上清液——烟酰胺溶液，和滤饼——产腈水合酶菌体细胞，后者可循环使用。超滤膜孔径为0.2-0.5μm。
再将上述所得上清液经过活性炭柱脱色而获得的烟酰胺溶液加入浓缩锅，进行升温蒸发浓缩，当浓缩温度达到120℃时开始将料液放入接受锅，如烟酰胺溶液浓度低于60％时再送加浓缩锅进行浓缩，如烟酰胺溶液浓度在60-80％范围内时，则压至干燥塔进行喷雾干燥。干燥塔控制进口温度为150℃，出口温度为100℃。
最后将完成干燥的烟酰胺成品，由热风经一可加热的管道送入贮桶进行包装。所获得的烟酰胺纯度在99.8％以上。
12、应用例1所说的谷氨酸棒杆菌进行烟腈胺的制备，其中经两次发酵：
在1500L的发酵罐中加入发酵罐体积30％的培养基，实消后，接入培养基体积1‰种子液。发酵前期搅拌速度为100rpm；后期的搅拌速度为50rpm；通气量为1∶0.5 V.V.M；罐压为0.04MPa；温度为28℃；培养48hr。
在10m3的发酵罐中加入65％的发酵培养基，实消后接入4％的种子液，在通气量为1∶0.4V.V.M；罐压0.04MPa；搅拌速度：前期为100rpm，后期为50rpm；温度为28℃，培养48hr。
种子培养基组份中含有(以g/100ml培养基计)：葡萄糖0.8；酵母膏0.4；脲0.2；磷酸二氢钾0.05；磷酸氢二钾0.05；硫酸镁0.05；培养基pH为7.5。
发酵培养基组份中含有(以g/100ml培养基计)：葡萄糖2.5；酵母膏0.5；脲0.75；蛋白胨0.1；味精0.075；乙酰胺0.2；磷酸二氢钾0.05；磷酸氢二钾0.05；硫酸镁0.05；氯化钴10ppm；培养基pH为7.5。
13、将发酵液离心分离，去上清液，获得产腈水合酶的湿细胞，固定化后加入到反应釜中，同时加入去离子水和pH为7.7的缓冲溶液到4吨；在15℃的温度，82rpm的搅拌速度下进行酶催化反应。反应过程中通过流加烟腈溶液浓度为6t水加2t烟腈配制，流加速度800kg/第一小时，700kg/第二小时，600kh/第三小时，500kg/第四小时，400kg/第五小时加入到反应釜中，同时在第五小时开始保持400kg/hr的流加速度直至加毕。随后检测浓度，当底物浓度为500ppm时，再通过微膜过滤系统进行超滤，上清液进入下一道工艺—活性炭柱脱色。
14、将上述反应过活性炭柱脱色而获得的一定浓度的烟酰胺溶液通入浓缩锅，当浓缩温度达到120℃时开始将料液放入接受锅，料液在浓缩锅和接受锅之间循环，当测得接受锅流出产物酰胺溶液浓度为75％时，压至干燥塔进行喷雾干燥。此时控制干燥塔的进口温度为130℃，出口温度为90℃，喷出大量晶体，即烟酰胺成品。
Claims (10)
1、一种谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)CGMCC No.1464，其特征是其发酵产物是产腈水合酶的细胞，腈水合酶可催化烟腈进行水合反应而生成烟酰胺。
2、一种如权利要求1所述的谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是先将谷氨酸棒杆菌进行发酵取得产腈水合酶细胞，再以产腈水合酶细胞与烟腈混合，使产腈水合酶细胞所产生的腈水合酶催化烟腈水合反应而得烟酰胺，其中：
发酵过程——产腈水合酶细胞的制备是：
先进行发酵种子的培养：种子培养基灭菌后接入菌种，于摇床上恒温振荡培养，培养温度为20-30℃，时间为20-40hr，得到种子液；然后进行发酵：发酵培养基实消后接入培养基体积的1‰-4％的种子液，在通气量1∶0.2-1∶0.8V.V.M，罐压(表压)0.03-0.06MPa，温度20-30℃下搅拌发酵32-48hr，得到发酵液；最后进行发酵液处理而得可使用的产腈水合酶细胞：将发酵液进行离心，去上清液后在所留湿的产腈水合酶细胞中加入海藻酸钠溶液成浆，海藻酸钠溶液的加入量为与湿的产腈水合酶细胞的重量百分比达到1％，随后在0.2M氯化钙溶液中固化造粒、滤去液体，再加入聚乙酰亚胺和戌二醛进行交联而得到固定化了的产腈水合酶细胞，其中聚乙酰亚胺的加入量为与湿的产腈水合酶细胞的重量百分比达到1-5％，戌二醛的加入量为与湿的产腈水合酶细胞的重量百分比达到0.5-1％；
其中种子培养基的组份中含有：葡萄糖0.6-2g/100ml培养基，酵母膏0.3-0.8g/100ml培养基，脲0.1-0.7g/100ml培养基，磷酸二氢钾0.05-0.2g/100ml培养基，磷酸氢二钾0.05-0.2g/100ml培养基，硫酸镁0.05-0.2g/100ml培养基；种子培养基的pH值为7.2-7.5；
发酵培养基的组份中含有：葡萄糖1-3g/100ml培养基，酵母膏0.3-0.8g/100ml培养基，脲0.1-1g/100ml培养基，乙酰胺0.1-2g/100ml培养基，磷酸二氢钾0.05-0.2g/100ml培养基，磷酸氢二钾0.05-0.2g/100ml培养基，硫酸镁0.05-0.2g/100ml培养基；发酵培养基的pH值为7.2-7.5；
反应过程——烟腈的生物酶催化水合是：
先将在发酵过程中制取的可使用的产腈水合酶细胞与去离子水混合，再在10-15℃的温度下对混合液进行搅拌的同时流加烟腈溶液进行生物酶催化水合反应，烟腈溶液的流加按时段递减进行，流加总量为在反应充分后反应混合液中所含烟腈浓度为80-500ppm。
3、如权利要求2所述的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是其中浓缩干燥工艺为：将反应所得的烟酰胺溶液进行升温浓缩，浓缩温度为120℃，当烟酰胺浓缩至百分含量60-80％时进行干燥，干燥温度为100-150℃。
4、如权利要求2所述的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是在发酵过程中的发酵种子的培养时，摇床的转速为100-300rpm。
5、如权利要求2所述的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是在发酵过程中发酵培养基的组份中还含有：蛋白胨0.05-0.2g/100ml培养基，味精0.01-0.1g/100ml培养基，氯化钴5-15ppm。
6、如权利要求2或5所述的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是在发酵过程中发酵罐搅拌机的搅拌速度50-200rpm。
7、如权利要求2所述的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是在反应过程中的搅拌速度为50-100rpm。
8、如权利要求2或7所述的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是在反应过程中的流加的烟腈溶液的重量百分比浓度为20-30％，在反应物总重量中所加入烟腈溶液中的烟腈重量为10-25％，在反应体系中，湿产腈水合酶细胞重量占5-10％。
9、如权利要求2所述的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是在反应过程中的产腈水合酶细胞与去离子水混合液中还加入pH7.5-8.0的磷酸盐缓冲溶液，缓冲溶液加入量须保证最终反应混合液的pH值在6-9之间，其量为总反应混合液重量的30-40％。
10、如权利要求8所述的一种谷氨酸棒杆菌应用于制备烟酰胺的方法，其特征是在反应过程中的产腈水合酶细胞与去离子水混合液中还加入pH7.5-8.0的磷酸盐缓冲溶液，缓冲溶液加入量须保证最终反应混合液的pH值在6-9之间，其量为总反应混合液重量的30-40％。
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