CN1928554A - 离子液体溶胶－凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法 - Google Patents
离子液体溶胶－凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种离子液体溶胶－凝胶复合膜包埋酶制备生物传感器的方法，其主要步骤为：将1－丁基，3－甲基咪唑四氟化硼，四乙氧基硅，水，0.1molL－1的盐酸按照1－2∶2－4∶1－2∶0.05－0.1的体积比例在室温下混合，磁力搅拌2－5小时，室温下放置1－2小时，得到溶胶A；将酶与0.05molL－1的pH＝6－7的磷酸缓冲溶液按照质量体积比为1－3∶50毫克微升的比例混合均匀得溶液B；将溶胶A和溶液B按照体积比1∶1－2.5混合均匀，取该混合液均匀涂覆到电极表面，厚度为0.5－500微米，于0－4℃下放置24－48小时，得生物传感器。本发明的制备方法简单，制备的生物传感器响应快，使用寿命长。
Description
技术领域
本发明属于离子液体溶胶-凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法
技术背景
溶胶-凝胶包埋法是迄今应用最普遍的固定化酶的方法，利用这种方法可在低温下对有机硅烷化物水解、聚合形成网络状的膜，制得的含酶凝胶膜具有物理刚性，化学惰性和可忽略的溶涨性等优点。目前已报道的溶胶-凝胶膜固定酶的生物传感器主要集中在凝胶/聚合物的体系。B.A.Gregg，A.Heller，在J.Phys.Chem.，1991，95，5976中公开了一种电极表面用长链双环交联聚4-乙烯基吡啶并同时固定化酶的方法，所得酶凝胶能牢固固定于电极表面并有较快的响应，但是在聚合物的交联过程中会造成酶的失活。在Analysis 1992，20，543中，Lev公开了一种以表面活性剂搀杂到溶胶中制备了一种无开裂的溶胶-凝胶膜。但是表面活性剂会破坏膜中酶的活性进而影响生物传感器的性能。
发明内容
本发明的目的是提供一种离子液体溶胶-凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法
本发明选用了一种新型固定化酶载体-离子液体溶胶-凝胶。由于1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼是一种粘稠的导电性离子液体，具有超分子结构，它成功的避免了传统溶胶-凝胶载体容易干裂、溶涨的缺点；同时由于离子液体良好的生物相容性及模板作用，固定化酶具有良好的生物活性而且使得其与被检测物的接触更容易。
本发明一种离子液体溶胶-凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法，其步骤和条件为：
a)将1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，四乙氧基硅，水，0.1mol L-1的盐酸按照1-2∶2-4∶1-2∶0.05-0.1的体积比例在室温下混合，磁力搅拌3小时，室温下放置1-2小时，得到溶胶A；
b)将酶与0.05mol L-1的pH＝6-7的磷酸缓冲溶液按照质量体积(毫克/微升)比为1-3∶50的比例混合均匀得溶液B，所述酶是辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶或多酚氧化酶；
c)将溶胶A和溶液B按照体积比1∶1-2.5混合均匀，均匀涂覆到电极表面，厚度为0.5-500微米，于0-4℃下放置24-48小时，得生一种离子液体溶胶-凝胶复合膜包埋酶生物传感器。
上述步骤c)之前，也可以增加步骤：在整个电极表面，按照二茂铁乙醇溶液的涂覆量为70-140微升/1平方厘米的比例，均匀涂覆重量百分比浓度为7.5-15毫克/毫升的二茂铁乙醇溶液，放置干燥；
本发明采用的电极为本领域公知的基底电极。
本发明制备的生物传感器响应快，响应时间为5-20秒；使用寿命长，1-2个月；适合于检测各种酶底物。
具体实施方式
实施例1 制备辣根过氧化物酶传感器：
先在基底电极表面按照70-140微升∶1平方厘米的比例均匀滴加7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将1毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，2毫升四乙氧基硅，1毫升水和0.05毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌3小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1小时；另将1毫克的辣根过氧化物酶加入50微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度约为10微米，然后再在4℃下放置24小时，即制得辣根过氧化物酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为2×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1；稳定性，1-2个月。
实施例2 制备葡萄糖氧化酶传感器：
2毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，4毫升四乙氧基硅，2毫升水和0.1毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌3小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置2小时；另将3毫克的葡萄糖氧化酶，加入50微升0.05mol L-1的pH6的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到基底电极表面，厚度约为100微米然后再在0℃下放置36小时，即制得葡萄糖氧化酶传感器，可用于水相中检测葡萄糖。该生物传感器平衡时间在6分钟以内；响应时间为15秒；稳定性，1.5-2个月。
实施例3 制备多酚氧化酶传感器：
将1.5毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，3毫升四乙氧基硅，1.5毫升水和0.075毫升0.1molL-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌3小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1.5小时；另将10毫克的酶，即葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶、多酚氧化酶中的一种，加入500微升0.05mol L-1的pH7的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到基底电极表面，厚度约为500微米，然后再在4℃下放置24小时，即制得多酚氧化酶生物传感器，可用于水相中测定苯酚，儿茶酚等物质。该生物传感器平衡时间在6分钟以内；响应时间为15秒；稳定性，1-2个月。
实施例4 制备葡萄糖氧化酶传感器：
先在基底电极表面按照140微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂15微升15毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将2毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，4毫升四乙氧基硅，2毫升水和0.1毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌3小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1小时；另将2毫克的葡萄糖氧化酶，加入50微升0.05mol L-1的pH6的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2.5的比例混合均匀，用微量注射器移取溶胶A和溶液B的混合液均匀滴涂到基底电极表面，厚度约为50微米，然后于4℃下放置48小时，即制得葡萄糖氧化酶传感器，可用于水相中检测葡萄糖。该生物传感器平衡时间在6分钟以内；响应时间为14秒；稳定性，1-1.5个月。
实施例5 制备辣根过氧化物酶传感器：
先在面积为0.073平方厘米的基底电极表面先滴涂15微升10毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液到表电极表面，放置至干燥；再将1.5毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，2毫升四乙氧基硅，1毫升水和0.05毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌3小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1小时；另将12毫克的辣根过氧化物酶加入500微升0.05mol L-1的pH6的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度约为200微米，然后再在0℃下放置48小时，即制得辣根过氧化物酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在6分钟以内；响应时间为15秒；稳定性，1-1.5个月。
实施例6 制备多酚氧化酶传感器：
先在基底电极表面按照100微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂12毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置至干燥；将1.5毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，3毫升四乙氧基硅，1.5毫升水和0.075毫升0.1molL-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌2小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1.5小时；另将100毫克的多酚氧化酶，加入5毫升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到基底电极表面，厚度约为80微米，然后再在4℃下放置30小时，即制得多酚氧化酶生物传感器，可用于水相中测定苯酚，儿茶酚等物质。该生物传感器平衡时间在6分钟以内；响应时间为16秒；稳定性，1-2个月。
实施例7 制备辣根过氧化物酶传感器
先在基底电极表面按照70微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将10毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，10毫升四乙氧基硅，5毫升水和0.25毫升0.1molL-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌5小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1小时；另将10毫克的辣根过氧化物酶加入250微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为200微米，然后再在4℃下放置24小时，即制得辣根过氧化物酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1；稳定性，0.5-1个月。
实施例8 制备辣根过氧化物酶传感器
先在基底电极表面按照120微升∶1平方厘米的比例均匀滴加7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将20毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，80毫升四乙氧基硅，40毫升水和2毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌5小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置2小时；另将3毫克的辣根过氧化物酶加入50微升0.05molL-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为300微米，然后再在4℃下放置48小时，即制得辣根过氧化物酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为5×10-6-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1，稳定性，1-2个月。
实施例9 制备辣根过氧化物酶传感器
先在基底电极表面先滴加按照70微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂10毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将10毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，20毫升四乙氧基硅，10毫升水和0.5毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌4小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1.5小时；另将0.5毫克的辣根过氧化物酶加入25微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为400微米，然后再在0℃下放置28小时，即制得辣根过氧化物酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在8分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6molL-1；稳定性，0.5-1个月。
实施例10 制备辣根过氧化物酶传感器
先在基底电极表面按照80微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂12毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将100毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，300毫升四乙氧基硅，150毫升水和7.5毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌3.6小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置2.5小时；另将2毫克的辣根过氧化物酶加入50微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为0.5微米然后再在4℃下放置36小时，即制得辣根过氧化物酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为2×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为3×10-6mol L-1；稳定性，1-1.5个月。
实施例11 制备辣根过氧化物酶传感器
先在基底电极表面按照90微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将20毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，60毫升四乙氧基硅，30毫升水和1.5毫升0.1molL-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌2.5小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1.5小时；另将1.5毫克的辣根过氧化物酶加入50微升0.05mol L-1的pH7的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为1微米然后再在3℃下放置48小时，即制得辣根过氧化物酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-1×10-4mol L-1；检测限为2×10-6mol L-1；稳定性，1-2个月。
实施例12 制备葡萄糖氧化酶传感器
先在基底电极表面按照100微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将10毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，10毫升四乙氧基硅，5毫升水和0.25毫升0.1molL-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌2小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1小时；另将10毫克的葡萄糖氧化酶加入200微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为20微米然后再在4℃下放置24小时，即制得葡萄糖氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1；稳定性，0.5-1个月。
实施例13 制备多酚氧化酶传感器
先在基底电极表面按照115微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将20毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，80毫升四乙氧基硅，40毫升水和2毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌5小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置2小时；另将1.8毫克的多酚氧化酶加入50微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为10微米然后再在2℃下放置48小时，即制得多酚氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为5×10-6-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1；稳定性，1-2个月。
实施例14 制备多酚氧化酶传感器
先在基底电极表面按照85微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂10毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将10毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，20毫升四乙氧基硅，10毫升水和0.5毫升0.1molL-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌4小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1.5小时；另将20毫克的多酚氧化酶加入500微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为25微米，然后再在4℃下放置28小时，即制得多酚氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在8分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1；稳定性，0.5-1个月。
实施例15 制备葡萄糖氧化酶传感器
先在基底电极表面按照140微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂12毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将100毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，300毫升四乙氧基硅，150毫升水和7.5毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌3.6小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置2.5小时；另将1毫克的葡萄糖氧化酶加入25微升0.05mol L-1的pH7的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为5微米，然后再在4℃下放置36小时，即制得葡萄糖氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为2×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为3×10-6mol L-1；稳定性，1-1.5个月。
实施例16 制备多酚氧化酶传感器
先在基底电极表面先滴加按照140微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将20毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，60毫升四乙氧基硅，30毫升水和1.5毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌2.5小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1.5小时；另将1毫克的多酚氧化酶加入50微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为50微米然后再在4℃下放置48小时，即制得多酚氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-1×10-4mol L-1；检测限为2×10-6mol L-1；稳定性，1-2个月。
实施例17 制备多酚氧化酶传感器
先在基底电极表面先滴加按照95微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将10毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，10毫升四乙氧基硅，5毫升水和0.25毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌2小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1小时；另将1.9毫克的多酚氧化酶加入50微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为1微米然后再在4℃下放置24小时，即制得多酚氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1；稳定性，0.5-1个月。
实施例18 葡萄糖氧化酶传感器
先在基底电极表面先滴加按照80微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将20毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，80毫升四乙氧基硅，40毫升水和2毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌5小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置2小时；另将3毫克的葡萄糖氧化酶加入25微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为100微米，然后再在4℃下放置48小时，即制得葡萄糖氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为5×10-6-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1；稳定性，1-2个月。
实施例19 制备葡萄糖氧化酶传感器
先在基底电极表面先滴加按照95微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂10毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将10毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，20毫升四乙氧基硅，10毫升水和0.5毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌4小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1.5小时；另将0.3毫克的葡萄糖氧化酶加入10微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶1.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为30微米，然后再在4℃下放置28小时，即制得葡萄糖氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在8分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为1×10-6mol L-1；稳定性，0.5-1个月。
实施例20 制备多酚氧化酶传感器
先在基底电极表面先滴加按照70微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂12毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将100毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，300毫升四乙氧基硅，150毫升水和7.5毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌3.6小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置2.5小时；另将50毫克的多酚氧化酶加入2.5毫升0.05mol L-1的pH6的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2.5的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为30然后再在4℃下放置36小时，即制得多酚氧化酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为2×10-5-2×10-4mol L-1；检测限为3×10-6molL-1；稳定性，1-1.5个月。
实施例21 制备葡萄糖氧化酶传感器
先在基底电极表面先滴加按照140微升∶1平方厘米的比例均匀滴涂7.5毫克/毫升的二茂铁的乙醇溶液，放置10分钟；再将20毫升1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，60毫升四乙氧基硅，30毫升水和1.5毫升0.1mol L-1的盐酸于室温下混合，磁力搅拌2.5小时，即得到均相溶胶A，然后室温下放置1.5小时；另将1毫克的葡萄糖氧化酶加入30微升0.05mol L-1的pH6.86的磷酸缓冲溶液中混合均匀得溶液B；然后将溶胶A和溶液B按照1∶2的比例混合均匀，用微量注射器移取该混合液均匀滴涂到上述基底电极表面，厚度为105微米，然后再在4℃下放置48小时，即制得葡萄糖氧化酶酶传感器，可用于水相中检测过氧化氢。该生物传感器平衡时间在5分钟以内；响应时间为15秒；线形范围为1×10-5-1×10-4mol L-1；检测限为2×10-6mol L-1；稳定性，1-2个月。
Claims (2)
1.一种离子液体溶胶-凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤和条件如下：
a)将1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，四乙氧基硅，水，0.1mol L-1的盐酸按照1-2∶2-4∶1-2∶0.05-0.1的体积比例在室温下混合，磁力搅拌3小时，室温下放置1-2小时，得到溶胶A；
b)将酶与0.05mol L-1的pH＝6-7的磷酸缓冲溶液按照质量体积(毫克微升)比为1-3∶50的比例混合均匀得溶液B，所述酶是辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶或多酚氧化酶；
c)将溶胶A和溶液B按照体积比1∶1-2.5混合均匀，均匀涂覆到电极表面，厚度为0.5-500微米，于0-4℃下放置24-48小时，得生一种离子液体溶胶-凝胶复合膜包埋酶生物传感器。
2.一种离子液体溶胶-凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法，其特征在于，步骤和条件如下：
a)将1-丁基，3-甲基咪唑四氟化硼，四乙氧基硅，水，0.1mol L-1的盐酸按照1-2∶2-4∶1-2∶0.05-0.1的体积比例在室温下混合，磁力搅拌2-5小时，室温下放置1-2小时，得到溶胶A；
b)将酶与0.05mol L-1的pH＝6-7的磷酸缓冲溶液按照质量体积比为1-3∶50毫克微升的比例混合均匀得溶液B，所述酶是辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶或多酚氧化酶；
c)在整个电极表面，按照二茂铁乙醇溶液的涂覆量为70-140微升/1平方厘米的比例，均匀涂覆重量百分比浓度为7.5-15毫克/毫升的二茂铁乙醇溶液，放置干燥；
d)将溶胶A和溶液B按照体积比1∶1-2.5混合均匀，取该混合液均匀涂覆到步骤c)处理后的整个电极表面，厚度为0.5-500微米，于0-4℃下放置24-48小时，得到一种离子液体溶胶-凝胶复合膜包埋酶生物传感器。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200610017201 CN1928554A (zh) | 2006-09-22 | 2006-09-22 | 离子液体溶胶－凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法 |
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| CN 200610017201 CN1928554A (zh) | 2006-09-22 | 2006-09-22 | 离子液体溶胶－凝胶复合膜包埋酶生物传感器的制备方法 |
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| CN (1) | CN1928554A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101216450B (zh) * | 2008-01-16 | 2010-09-01 | 暨南大学 | 用于检测黄曲霉毒素b1的生物传感器电极及其制备方法 |
| CN101196487B (zh) * | 2007-12-25 | 2010-09-08 | 浙江大学 | 电沉积壳聚糖-离子液体-酶复合膜制备修饰电极的方法 |
| CN102023181A (zh) * | 2009-09-21 | 2011-04-20 | 清华大学 | 一种酶电极及其制备方法 |
| CN101231260B (zh) * | 2008-02-15 | 2011-12-07 | 江南大学 | 以离子液体作为绿色介质制备生物传感器的方法 |
-
2006
- 2006-09-22 CN CN 200610017201 patent/CN1928554A/zh active Pending
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| C06 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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