CN1889949B - PDK-1/Akt信号传导抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一类新型的式(I)磷酸肌醇依赖性激酶-1(PDK-1)抑制剂：其中X选自烷基及卤烷基；Ar为一选自苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基及芴基的芳基；而其中Ar可任选用一或多个选自卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、叠氮基、C1-C4叠氮烷基、芳基、烷基芳基、卤代芳基、卤烷基芳基及其组合的基团所取代；R选自甲腈、乙腈、乙基腈、丙基腈、羧酰胺、脒、四唑、肟、腙、乙脒、氨基乙酰胺、胍及脲。本发明同样提供用该等化合物治疗及预防人类癌症的方法。

Description

PDK-1/Akt信号传导抑制剂
相关申请的交叉引用
本申请要求2003年10月3日提出的题为“PDK-1/Alct信号传导抑制剂”的美国专利临时申请第60/508,619号及2003年10月8日提出的题为“PDK-1/Akt信号传导抑制剂”的美国专利临时申请第60/509,814号的优先权；这两个申请中的每一个整体在此引作参考。
关于联邦政府资助研究声明
本发明至少部分是在美国国立卫生研究院同意的CA94829及军队同意的DAMD 17-02-1-0117项目下由政府资助完成。联邦政府对本发明拥有一定权利。
发明背景
磷酸肌醇(PI)3-激酶/PDK-1/Akt信号传导级联是调节细胞增殖及生存的大量受体酪氨酸激酶和细胞因子介导途径的会聚点，提供了赋予大量细胞外营养因子维持细胞生存能力的框架。由于组成型生长因子受体激活和/或PTEN模拟引起的该信号传导级联的调节异常导致Akt上调，后者随后促进肿瘤入侵、血管生成及发展。因此，PDK-1/Akt信号传导抑制剂在开发成为有用化疗剂或化学预防剂方面有直接关联。需要开发作为有效PDK-1/Akt信号传导抑制剂的新型化合物。还需要开发基于PDK-1/Akt信号传导抑制的化疗剂及化学预防剂。
发明概述
本发明提供式I化合物：
Figure G2004800360073D00021
其中X选自烷基及卤烷基；Ar选自苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基及芴基；R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN -CONH2
Figure G2004800360073D00022
式I同样包括其药学上可接受盐、代谢产物及其前体。
附图简述
图1所示为化合物70(左边一组)及化合物71(右边一组)对PC-3细胞的细胞存活力及对9种代表性人类肿瘤细胞系细胞生长的剂量依赖作用。
图2所示为用1，1，1-三氟-4-羟基-4-菲-2-基-丁-3-烯-2-酮作为共同前体合成化合物37至化合物72。
发明详述
本发明提供一类新型PDK-1/Akt信号传导抑制剂。本文所述化合物可用于在不合要求增生的细胞(例如癌细胞)中诱导细胞凋亡。本文所述化合物同样可用于促进伤口愈合及防止瘢痕形成。本文所述化合物进一步应用于预防再狭窄。本文所述化合物进一步应用于器官移植。
本文所述化合物可如通式I所示：
Figure G2004800360073D00031
其中X选自烷基及卤烷基；Ar选自苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基及芴基；R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN -CONH2
Figure G2004800360073D00032
除非另有说明，否则R选自腈、乙腈、乙基腈、丙基腈、羧酰胺、脒、吡唑、肟、腙、乙脒、乙酰胺、胍及脲。式I同样包括其药学上可接受盐、代谢产物及其前体。
在某些实施方案中，X为C1至C4卤烷基。在某些实施方案中，X为CF3。在某些实施方案中，Ar可在任何可取代位置为一个或多个基团所取代，这些取代基例如(但不限于)卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、叠氮基、C1-C4叠氮烷基、芳基、烷基芳基、卤代芳基、卤烷基芳基及其组合。在某些实施方案中，Ar选自2-萘基、4-联苯基、9-蒽基、2-芴基、4-叠氮苯基、4-叠氮甲基苯基、4-(2-叠氮乙基)苯基、4-(3-叠氮丙基)苯基、4-(4-叠氮丁基)苯基、4-(4-叠氮苯基)苯基、4-(4-叠氮甲基苯基)苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-丙基苯基、4-丁基苯基、4-(2-溴乙基)苯基、4-(3-溴丙基)苯基、4-(4-溴丁基)苯基、4-(三氟甲基)苯基、4-(4-甲基苯基)苯基、4-(4-溴甲基苯基)苯基、4-(4-丁基苯基)苯基、4-(4-叔丁基苯基)苯基、2-氯苯基、4-氯苯基、2，4-二氯苯基、3，4-二氯苯基、2，5-二氯苯基、2，4-二甲基苯基、2，5-二甲基苯基、3，4-二甲基苯基、3，5-二甲基苯基、4-(4-氯苯基)苯基、4-(3，5-二氯苯基)苯基、4-(2，3-二氯苯基)苯基、4-(3，5-二甲基苯基)苯基、4-(2，4，5-三氯苯基)苯基、4-(4-三氟甲基苯基)苯基、2-菲基、3-吲哚基、2-吡咯基及4-(苄基)苯基。在某些实施方案中，Ar选自4-(2-溴乙基)苯基、4-(3-溴丙基)苯基、4-(2-叠氮乙基)苯基、4-(3-叠氮丙基)苯基、4-丁基苯基、4-叔丁基苯基、2-萘基、3-吲哚基、4-联苯基、4′-氯[1，1′-联苯基]-4-基、3′，5′-二氯[1，1′-联苯基]-4-基、2′，3′-二氯[1，1′-联苯基]-4-基、4′-甲基[1，1′-联苯基]-4-基、4′-三氟甲基[1，1′-联苯基]-4-基、4′-溴甲基[1，1′-联苯基]-4-基、3′，5′-二甲基[1，1′-联苯基]-4-基、4′-丁基[1，1′-联苯基]-4-基、4′-叔丁基[1，1′-联苯基]-4-基、4-(苯基甲基)苯基、9H-芴-2-基、9-蒽基、2-菲基、9-菲基。在某些实施方案中，Ar为2-菲基。在某些实施方案中，R选自氨基乙酰胺及胍。
另一本文所述实施方案为式II化合物：
Figure G2004800360073D00041
其中X选自烷基及卤烷基；R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN -CONH2
Figure G2004800360073D00042
或除非另有说明，否则R选自腈、乙腈、乙基腈、丙基腈、羧酰胺、脒、吡唑、肟、腙、乙脒、乙酰胺、胍及脲。在某些实施方案中，X为C1至C4卤烷基，而在某些实施方案中，X为CF3。在某些实施方案中，R为氨基乙酰胺或胍。式II同样包括其药学上可接受盐、代谢产物及其前体。
另一本文所述实施方案为式III化合物：
其中R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN -CONH2
Figure G2004800360073D00052
或除非另有说明，否则R选自腈、乙腈、乙基腈、丙基腈、羧酰胺、脒、吡唑、肟、腙、乙脒、乙酰胺、胍及脲。在某些实施方案中，R为氨基乙酰胺或胍。式III同样包括其药学上可接受盐、代谢产物及其前体。
某些另外的式III化合物包括下列R基团：
Figure G2004800360073D00054
在另外的实施方案中，该等化合物为式IV或V化合物：
Figure G2004800360073D00061
本发明同样提供使用式I至式V化合物在需要此治疗的受试者的不合要求增生的细胞内诱导细胞凋亡的方法。该方法包括用有效治疗量的式I至式V化合物或其衍生物、代谢物或药学上可接受盐来治疗需要此治疗的受试者。
本文所述化合物及方法可用于(但不限于)治疗、抑制或延缓癌症发作。该等化合物及方法同样可用于治疗前期癌及其它不合要求的细胞增殖事件。将式I、II、III、IV或V化合物或其组合给予经诊断患有特征为不合要求的细胞增殖的疾病或具有该疾病风险的受试者。该等化合物及方法用于治疗癌症，包括但不限于白血病、黑色素瘤、非小细胞肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌及前列腺癌。此外，该等化合物及方法可用于减缓患有前期癌的个体中以及倾向于这些疾病或对这些疾病具有遗传素因的个体中这些癌症的生长。
该等化合物可用于在不想要的快速增生的细胞中诱导细胞凋亡的方法中，该方法包含将治疗有效量的式I、II、III、IV或V化合物引入至不想要的快速增生的细胞中。按照本方法，不想要的快速增生的细胞可为癌细胞。该等癌细胞可选自白血病、黑素瘤、非小细胞肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、卵巢癌、乳腺癌、肾癌及前列腺癌症。
该等化合物可进一步用于在业已经历血管成形术或血管支架手术的受试者中预防再狭窄，其包括将治疗有效量的式I、II、III、IV或V化合物或其组合或其药学上可接受盐和/或代谢物给予所述业已经历血管成形术或血管支架手术的受试者。
本文所用下列术语包括但不限于下列定义。
术语“PDK-1/Akt信号传导抑制剂”是指不管是在体内或内外一特定化合物或化合物组合相对于空白所测的，能中断PDK-1/Akt信号传导途径。虽然在下面的实施例中提出了一种方法，但同样可使用其它现在已知或以后开发的方法。
本文所用术语“治疗”包括为提供预防或控制和/或治疗某病症的目的将一种或多种本文所述化合物给予和/或施用于受试者。本发明“治疗”目的可(但并非一定)提供治愈；更合适情况为，“治疗”为可控制该病症的形式。当将本文所述化合物用于治疗不想要的要增生的细胞(包括癌症)时，“治疗”包括部分或完全破坏所述不合要求增生的细胞且对正常细胞具最小破坏作用。在细胞水平治疗不想要的快速增生的细胞(包括癌细胞)的所期望的机制为细胞凋亡。
本文所用术语“预防”包括或者预防或减缓临床上明显的不想要的细胞增殖完全发作，或预防或减缓处于危险中的个体临床前明显的不想要的快速细胞增殖阶段的发作。该定义同样意欲包括预防或减缓恶性细胞转移，或阻止或逆转恶性细胞进展。此包括预防性治疗那些处于发展前期癌及癌症的受试者。该定义同样包括在业已经历血管成形术或血管支架手术的受试者中预防或减缓再狭窄。
术语“有效治疗”及“药理上有效”意味着限定每一药物的量，使其达到经过用本文所述化合物治疗而改进疾病严重程度及发生率的目的。治疗有效量或药理学上有效量可易于为本领域技术人员所确定。
对于治疗目的，术语“受试者”包括任何经诊断患有特征为不想要的快速细胞增殖的疾病或具有该疾病症状或有发展该疾病风险的人类或动物受试者。此等疾病包括但不限于癌症及前期癌。对于预防方法来说，该受试者可为任何人类或动物受试者。举例说明，对于预防目的，受试者可为有患特征为不想要的快速细胞增殖的疾病(例如癌症)风险或遗传素因的人类受试者。该受试者可由于接触致癌剂、对于特征为不想要的快速细胞增殖的疾病有遗传素因等等而处于风险中。除了可用于人类治疗外，本文所述化合物同样可用于兽医治疗哺乳动物，包括宠物及家畜，例如(但不限于)狗、猫、马、牛、羊及猪。
剂量与给药
初步的动物研究业已证明这些化合物可口服吸收，可产生数倍于TGI的平均血清浓度，而更重要的是，在每日口服给药1个月后，对动物几乎不引起毒性作用(数据未列出)。
本发明化合物可调配为合适的药物制剂，例如用于口服给药的片剂、胶囊剂或酏剂，或用于胃肠外给药的无菌溶液或悬浮液。可使用本领域熟知的技术及方法将本文所述治疗剂调配于药物组合物中。
本文所述PDK-1/Alct信号传导抑制剂可在普遍接受的药学实践中所谓的单位剂型中，与生理上可接受溶媒溶媒、载体、赋形剂、粘合剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂等等混合。在那些组合物或制剂中活性物质的量为获得所指范围内合适剂量的量。在某些实施方案中，该剂量可为0.1至1000毫克的PDK-1/Aft信号传导抑制剂。在某些实施方案中，该组合物可以单剂量形式调配，每一剂量含有1至500毫克。在另外的实施方案中，该剂量可为10至100毫克活性组分。术语“单位剂型”是指物理上离散的单位，其适于单一剂量给予人类受试者及其它哺乳动物，每一单位含有与合适药物赋形剂联合的经计算可产生所期望的治疗效果的预定量的活性物质。该剂量可视很多因素而定，例如受试者年龄及体型、拟治疗的病症、该病症的严重程度及其它为本领域技术人员所知的因素。本领域技术人员可考虑这些因素来确定剂量。
为制备组合物，将本发明方法中采用的一种或多种治疗剂与药学上可接受的合适载体混合。通过混合或加入治疗剂，得到的混合物可为溶液、悬浮液、乳状液或诸如此类。这些可按照本领域技术人员所知方法来制备。所得到的混合物的形式视多种因素而定，包括计划的给药方式、化合物在所选载体或溶媒中的溶解性。有效浓度可在不合要求的细胞(例如癌细胞)中充分诱导细胞凋亡，且可根据经验来决定。
适于给予本发明治疗剂的药物载体或溶媒包括任一此等适于特定给药方式的载体。另外，该活性物质同样可与其它不削弱所需作用的活性物质混合，或与补充所期望的作用的物质混合，或与具有另外作用的物质混合。本发明治疗剂可作为唯一的药学活性组分调配于组合物中，或可与其它活性组分组合。本发明治疗剂的衍生物(例如盐或前药)同样可用于调配有效的药物组合物。
本发明治疗剂可用保护其不从机体内快速排除的载体(例如延时释放制剂或包衣)来制备。此等载体包括控释制剂，例如(但不限于)微囊递送系统。活性化合物可以在拟治疗患者中足以发挥治疗有效性而无不合要求的副作用之量包括于药学上可接受载体中。
活性组分可一次给予，或可分为若干小剂量在间隔时段给予。应该理解，准确剂量及治疗持续时间随拟治疗的疾病而变，且可利用已知试验方案根据经验来确定，或通过体内或体外试验数据推断确定。应注意，浓度及剂量值同样可随拟减轻的病症的严重程度而变化。还应理解，对于任何具体受试者，具体给药方案应根据个体需要及施药人员或监督给予组合物的人员的专业判断随时间调整，且本文所提出的浓度范围仅为例示性，并非意欲限制所要求保护的组合物的范围或应用。
口服组合物一般应包括惰性稀释剂或可食用载体，且可被压成片剂或包封入明胶胶囊中。为经口治疗给药目的，所述活性化合物可与赋形剂混合，且以片剂、胶囊剂或锭剂形式使用。药学上可相容粘合剂及辅助物质可作为组合物部分包括在内。
片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等等可含有任一种下列相似特性的组分或化合物：粘合剂，例如(但不限于)西黄蓍胶、阿拉伯树胶、玉米粉或明胶；赋形剂，例如微晶纤维素、淀粉或乳糖；崩解剂，例如(但不限于)藻酸及玉米淀粉；润滑剂，例如(但不限于)硬脂酸镁；助流剂，例如(但不限于)胶质二氧化硅；甜味剂，例如蔗糖或糖精；及矫味剂，例如薄荷油、水杨酸甲酯或果味矫味剂。
式I至式V化合物可通过许多不同机制引发细胞死亡，但在大多数实施方案中，式I至式V化合物能在不想要的增生性细胞中诱导细胞凋亡。术语“细胞凋亡”是指细胞程序性死亡过程。每人每天有数十万的老细胞或受损细胞通过细胞凋亡过程死亡，并在维持体内恒定活细胞数目的消长中被取代。老细胞及受损细胞因响应目标细胞表面引发的自我毁灭的信号而死亡。细胞凋亡不同于其它细胞死亡机制，例如细胞坏死，其引起包括肿胀、充血、疼痛及触痛在内的炎症。细胞凋亡并不促进此等反应。在细胞凋亡过程中，细胞皱缩、分裂为碎片，内容物通过不会诱导炎症的方法悄悄地去掉。由于这些原因，非常理想的是在快速增生的细胞(例如癌细胞)中诱导细胞凋亡而不是细胞坏死。然而，某些癌细胞的突变使得这些细胞对细胞凋亡有抵抗力。现已发现式I至式V化合物甚至在因突变而对细胞凋亡有抗性的癌细胞中也可诱导细胞凋亡。细胞凋亡可通过为本领域所知方法(例如镜检法)与其它治疗机制区分开。
术语“增生性细胞”、“增生的细胞”、“快速增生的细胞”、“不合要求增生的细胞”、“不合要求快速增生的细胞”、“不想要的快速增生的细胞”等等是指受试者的癌细胞、前期癌细胞及其它不想要的快速分裂的细胞。
材料与方法
材料  用乙酸乙酯，接着从乙酸乙酯及己烷混合物中重结晶，从由Amerisource Health(Malvern.PA)获得的胶囊中提取4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑基-1-基]苯磺酰胺。细胞死亡检测ELISA试剂盒购自Roche Diagnostics(Mannheim，德国)。兔抗Akt多克隆抗体及磷酸-473Ser Akt来自Cell Signaling Technologies(Beverly，MA)。鼠单克隆抗多(ADP核糖)聚合酶(PARP)抗体由Pharmingen(Sari Diego，CA)提供。PDK-1激酶检测试剂盒购自Upstate(Lake Placid，NY)。除非另有说明，否则其它化学药品及生化药物皆来自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)。在Bruker 250MHz上测量核磁共振光谱(1H NMR)。除非另有说明，否则化学位移(δ)是用CDCl3作为溶剂相对子TMS峰以百万分率(ppm)来报告。用3-Tesla Finnigan FTMS-2000Fourier变换质谱仪实施高解析电子喷雾离子质谱分析。
化学药物的合成
列于表1中的化合物如下所述进行制备及检测。化合物名称、质子核磁共振(1H NMR)及高解析质谱分析(HRMS)数据概述如下。合成化合物1至化合物36所用步骤阐述于下面的实施例中。
表1  化合物1至化合物36的名称、1H NMR(质子核磁共振)及HRMS(高解析质谱分析)特性
Figure G2004800360073D00121
Figure G2004800360073D00141
Figure G2004800360073D00151
细胞培养  PC-3(p53-/-)人类雄激素不应答型前列腺癌细胞购自美国典型培养物保藏中心(American Type Tissue Collection)(Manassas，VA)。细胞在补充10％胎牛血清(FBS；Gibco)的RPMI 1640培养基(Gibco，Grand Island，NY)中于含有5％CO2的湿润培养箱内37℃培养。
细胞存活力检测  通过使用MTT{溴化[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑]}测定，作6次平行实验来评估4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺及其衍生物对PC-3细胞存活力的影响。细胞在补充10％FBS的RPMI 1640培养基中于96孔平底板生长24小时，与各种浓度的溶于存于含1％血清的RPMI 1640培养基的DMSO中的化合物1至化合物36(终浓度≤0.1％)接触不同的时间间隔。对照接受与药物处理细胞中同样浓度的DMSO溶媒。移除培养基，用200微升0.5毫克/毫升溶于含有10％FBS的RPMI-1640培养基中的MTT取代，细胞在CO2培养箱内于37℃培养2小时。移除孔中的上清液，将还原型MTT染料溶于200微升/孔DMSO中。在平板读取器上测定570纳米处的吸光值。
细胞增殖  将PC-3细胞以50,000细胞/孔接种于6-孔平板中含10％FBS的RPMI 1640培养基中。附着24小时后，用指定浓度的溶于含10％FBS的RPMI-1640培养基中的化合物1至化合物36或DMSO溶媒一式三份处理细胞。消化在不同时间间隔通过胰蛋白酶收获细胞，用Coulter counter model Z1 D/T(Beckman Coulter，Fullerton，CA)计数细胞。
细胞凋亡测定  用两种方法来评估药物诱导的细胞程序性死亡：通过细胞死亡检测ELISA试剂盒(Roche Diagnostics.Mannheim，德国)检测DNA片段化及蛋白质印迹分析多(ADP-核糖)聚合酶(PARP)裂解。ELISA按照制造商使用说明来实施，其基于定量测定于诱导细胞程序性死亡后产生的呈单核小体或寡核小体形式的细胞质组蛋白相关DNA片段。简言之，药物处理前于T-25烧瓶中将4 x 105个PC-3细胞培养24小时。用指定浓度的DMSO溶媒或试验药物处理细胞6至24小时，收集细胞，在ELISA中用相当于2x103个PC-3细胞的细胞裂解物。为进行PARP裂解测定，在药物处理后4至8小时收集用药物处理的细胞，用冰冷的PBS洗涤，重悬浮于含有20mM Tris-HCl(pH 8)、137mM NaCl、1mM CaCl2、10％甘油、1％Nonidet P-40、0.5％去氧胆酸盐、0.1％SDS、100μM 4-(2-氨基乙基)苯磺酰氟、10微克/毫升亮抑酶肽及10微克/毫升抑酶肽的裂解缓冲液中。在以10,000g离心5分钟后收集可溶性细胞裂解物。在8％SDS-聚丙烯酰胺凝胶中分离来自各裂解物的等量蛋白质(60-100μg)。将带转移至硝酸纤维素膜，并通过用抗PARP抗体免疫印迹来分析。
免疫印迹分析  蛋白质印迹分析Akt及磷-Akt的通用步骤如下所述。细胞在PBS中洗涤，重悬浮于SDS样品缓冲液中，通过超声波破碎仪超声处理5秒，煮沸5分钟。短暂离心后，在10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶中于Minigel电泳仪上分离来自可溶部分的等浓度蛋白质，用半干转移槽转移至硝酸纤维素膜。用含有0.05％Tween 20的TBS(TBST)洗涤该转印膜三次。在用含5％脱脂乳的TBST封闭60分钟后，将该膜用以TBST-5％低脂乳1∶1,000稀释的一级抗体于4℃温育12小时，然后用TBST洗涤三次。于室温用羊抗兔抗体结合物(1∶1,000)探测该膜1小时，用TBST洗涤三次。通过增强化学荧光来使免疫印迹显现。
PDK-1激酶活性  用PDK-1激酶测定试剂盒(Upstate，Lake Placid，NY)按照供应商使用说明实施该体外测定。这种无细胞测定基于重组PDK-1在DMSO溶媒或试验药物存在下激活其下游激酶——血清及糖皮质激素调节激酶(SGK)进而用[γ-32]-ATP使Akt/SGK特异性肽底物RPRAATF磷酸化的能力。然后用P81磷酸纤维素滤纸从残留的[γ-32]-ATP中分离该[32P]磷酸化的肽底物，用0.75％磷酸洗涤三次后通过闪烁计数器定量测定。报道值表示两次独立测定的平均值。
免疫沉淀Akt激酶测定  按照改良的已发表的方法实施Akt免疫沉淀反应。用指定浓度的DMSO溶媒或试验药物处理PC-3细胞2小时，然后于4℃在含有50mM Tris-HCl(pH 7.5)、1％Triton X-100、1mM EDTA、1mM EGTA、50mM氟化钠、10mM β-甘油磷酸钠、0.1％2-巯基乙醇、0.1mM苯基甲基磺酰(siilfonyl)氟及抑酶肽、抑胃肽与亮抑酶肽各1微克/毫升的缓冲液A中裂解PC-3细胞1小时。以10,000g将细胞裂解物离心5分钟，用抗Akt于4℃处理上清液60分钟，接着用蛋白G-琼脂糖珠再处理60分钟。如上所述通过使用Akt/SGK特异性肽底物RPRAATF，用免疫沉淀分析Akt激酶活性。数值表示两次独立测定的平均值。
统计学分析  除非另有说明，否则每一实验作三份平行。所有实验在不同场合至少进行两次。适当时，数据以平均值±95％置信区间表示。
24种代表性衍生物的结构、其抑制PDK-1激酶活性及抑制PC-3细胞生长的效力概述于表2中。
表2  4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺及化合物37至化合物60(1-24)的结构及其抑制重组PDK-1激酶活性和在PC-3细胞中诱导细胞程序性死亡的效力
Figure G2004800360073D00201
除吲哚衍生物44外，这些化合物与4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺相比，显示出改进的PDK-1抑制活性及抗增生活性。另外，这些化合物没有一个显示出可测量的COX-2抑制活性(数据未列出)。PDK-1抑制活性的总体增加明显随着芳香环的膨大而增加，即三环芳香环(化合物57至化合物59)＞取代的联苯基(化合物45至化合物55)＞取代的苯基(化合物37至化合物42)。这些数据提示芳香系统结合至酶口袋的大疏水区。如表2所报告，在所查的24个类似物中，化合物59代表最佳的衍生物，其抑制PDK-1活性及PC-3细胞生存力的IC50值分别为9μM及5μM。相对于4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺活性(分别为48μM及30μM)，这些IC50值改进5至6倍。然而，与化合物59比较，化合物60显示出PDK-1抑制活性降低，其可归因于三环芳香环的不宜定向所施加的空间位阻。
在检查的所有化合物中，PDK-1与PC-3生长抑制效力之间存在相关性，提示PDK-1抑制与抗增生作用在机理上相关。总的说来，抑制PC-3细胞增殖的IC50值大约为抑制PDK-1的IC50值的一半。这种差异可能起因于PDK-1抑制与伴随的由蛋白磷酸酶2A(PP2A)在经Aug处理的(Aug-treated)细胞中将Akt去磷酸化(其导致增加Akt失活)之间的机理性协同作用。为检查这一假定，用不同浓度化合物59处理PC-3细胞2小时，通过下面两种独立的测定来评估随之发生的对AM的作用：免疫沉淀Akt激酶活性与Akt磷酸化状态。两种测定给出一致的结果。
根据激酶测定，化合物59抑制细胞内Akt活化的IC50为5μM。化合物59和其它化合物皆没有表现出对免疫沉淀Akt活性有直接抑制作用。同时，蛋白质印迹分析显示，用化合物59以5μM及以上浓度处理PC-3细胞可引起明显的Akt去磷酸化作用。
PDK-1/Akt信号传导的抑制以剂量依赖方式引起在含1％FBS的RPMI 1640培养基中的PC-3细胞程序性死亡，如DNA片段化及PARP裂解所证明。在24小时时，诱导50％PC-3细胞死亡所需化合物59的剂量为5μM。在药物处理细胞中化合物59诱导PC-3细胞死亡的IC50值与抑制Akt活化的值一致。此外，在补充10％FBS的RPMI 1640培养基中检查了化合物59对PC-3细胞增殖的作用。1μM的化合物59显示出实质性的抗增生活性。这些数据合起来清楚地表明化合物59在PC-3生长抑制中的体外功效。
通过建模表明：化合物59对接至位于PDK-1两个突出部(lobe)之间的深裂口内的ATP结合区中。尽管化合物59与ATP竞争结合，但发现化合物59的结合方式与ATP的结合方式稍有不同。当苯磺酰胺部分占据腺嘌呤结合基元时，平坦的吡唑部分与核糖环垂直。这一排列使相邻菲环定位于三磷酸结合袋后面。菲环与由残基88-96(其包括由富甘氨酸环连接的两个相邻β折叠之部分)形成的非极性区形成疏水作用。
12个代表性衍生物的结构、其对PDK-1的效力及其在PC-3细胞中引起细胞程序性死亡的能力概述于表3中。
表3  化合物25-36的结构及用于其重组PDK-1激酶活性及在PC-3细胞中诱导细胞程序性死亡的效力。这些化合物的结构通式示于下表顶部
Figure G2004800360073D00222
在这些衍生物中，化合物70及71表现出PDK-1抑制IC50值分别为5μM及2μM，其相对于化合物59本别表现出2及5倍效力。化合物70及71分别含有2-氨基乙酰胺(-NHC(O)CH2NH2)及胍(-NHC(＝NH)NH2)侧链。象化合物59一样，它们在高达50μM浓度下检测时表现出对免疫沉淀Akt激酶活性无可感知的直接抑制作用，也无任何可测量的COX-2抑制活性。PC-3细胞与任一药物接触，即使是以1μM也可引起磷酸-Akt水平的实质降低。这种效力改进反映了这些衍生物蛋白质配体相互作用中氢键加强。这种假定得到了所建模型中化合物71对接至ATP结合位点的支持。化合物71的胍基类似于ATP嘌呤环的部分结构，其如对接模型所描绘的，使得与Ser160和Ala162之间可形成氢键。
PDK-1/Akt信号传导抑制剂的细胞作用  化合物70及71两者皆以剂量依赖方式诱导在含1％FBS的培养基中的PC-3细胞程序性死亡，如DNA片段化及PARP裂解所证明。这些药物在大于2.5μM浓度时在细胞凋亡诱导方面表现出高于化合物59的效力。而且，这些衍生物提交给美国国家癌症研究所(National Cancer Institute，NCI)的治疗药开发计划(Developmental Therapeutic Program，DTP)用于对60种人类肿瘤细胞系进行筛选，所述细胞系代表白血病、黑素瘤及肺癌、结肠癌、脑癌、卵巢癌、乳房癌、前列腺癌及肾癌。来自每一类肿瘤细胞的一种代表性细胞系在含5％FBS培养基中接触2天药物后的剂量反应数据示于图1C中，其包括：1，RPMI-8226白血病细胞；2，NCI-H322M非小细胞肺癌细胞；3，HT29结肠癌细胞；4，U251CNS癌细胞；5，SK-MEL-28黑素瘤癌细胞；6，SK-OV-3卵巢癌细胞；7，RXF393肾癌细胞；8，PC-3前列腺癌细胞；9，MDA-MD-231乳腺癌细胞。这些细胞系中的很多皆对浓度低至0.1μM的两种药物的生长抑制效果有反应。
在60种细胞系测定中，基于生长抑制曲线计算每一细胞系的三种剂量反应参数。这些参数包括GI50(引起50％生长抑制的浓度)、TGI(引起完全生长抑制的浓度)及LC50(在药物处理结束时与开始时比较引起所测蛋白质水平降低50％的浓度)。化合物70及71在60种不同细胞系中于处理2天后时的这些参数平均值分别如下：GI50：1.1及1.2μM；TGI：3.2及2.9μM；LC50：24及8μM。这些数据清楚地证明了化合物70及71的体外功效。两种药物在3至5μM治疗范围内皆能在不同范围的肿瘤细胞系中完全抑制细胞生长。
根据PDK-1/Akt信号传导在癌细胞生存及增殖中的保守作用，这一途径代表了一种开发口服生物可利用小分子抑制剂的治疗相关目标。
计算机模拟(in silico)中化合物59对接至ATP结合袋内显示该分子部分通过磺酰胺与Ala162氨基之间的氢键而锚定至ATP结合区。同样已报道Ala162在诸如ATP17及UCN-01等其它配体锚定到PDK-1过程中起着重要作用。这些数据合起来提示，化合物59的磺酰胺部分可能应该加以改造以便优化其效力。
因此，用2-氨基乙酰胺(-NHC(O)CH2NH2)及胍[-NHC(＝NH)NH2]取代磺酰胺官能团分别得到化合物70及71，这二者皆表现出改进的PDK-1抑制IC50值，分别为5μM及2μM。化合物71对接至ATP结合位点显示在胍部分与Ser160的骨架氧之间存在一额外的氢键，提示效力增强可能归因于氢键增加。然而，这些侧链对配体结合的作用很微妙，如概述于表3中的结构一活性关系所阐明。
化合物70及71抑制PDK-1的高效力反映其在低μM浓度下有效阻止Akt活化及诱导PC-3细胞程序性死亡的能力(图1A、B)。更重要的是，由于PDK-1/Akt信号传导在细胞增殖及生存中的保守作用，这些药物有效抑制所有60种所查人类肿瘤细胞系在含血清培养基中的细胞生长，且平均GI50(50％细胞生长抑制)值分别为1.2μM及1.3μM，而TGI(完全生长抑制)值分别为3.2μM及2.9μM。我们的初步动物研究证明这些化合物可口服吸收，可产生数倍于TGI的平均血清浓度，而更为重要的是，在口服给药1个月后对动物几乎不产生毒性(数据未列出)。
在裸鼠体内对不同肿瘤异体移植物的功效试验目前正在本实验室进行。另外，这些药物的毒物学及药理学试验将在NCI的干预发展快速通道(RAID)项目中进行。
化合物37-60的通用合成步骤
除非另有说明，否则所有化学试剂及有机溶剂皆购自Aldrich(St.Louis，MO)。化合物1-24按照流程1所述2步通用步骤来合成，其中Ar代表各自芳香环结构。
流程1
Figure G2004800360073D00251
化合物59此处用作示例以阐明化合物基团的合成(流程2)。其它化合物通过前体及具不同芳香环结构的各自中间体遵循同样步骤(化合物I及III)。
流程2  第1步    第2步
Figure G2004800360073D00261
实施例1  合成1，1，1-三氟-4-羟基-4-菲-2-基-丁-3-烯-2-酮前体(第1步)
在氩气中向悬浮于5毫升无水四氢呋喃(THF)的氢化钠(NaH；0.13克，5.4毫摩尔)悬浮液中加入三氟乙酸乙酯(CF3COOEt；0.64克，4.5毫摩尔)。在25℃搅拌10分钟后，将溶于5毫升THF的2-乙酰菲(1克，4.5毫摩尔)逐滴加入至该溶液中。该混合物在30分钟内变清澈并为橙色，搅拌另外2小时后，真空下浓缩。将残留物悬浮于水中，用乙酸乙酯(15毫升)萃取两次。分离有机相，经硫酸钠干燥，且真空下浓缩至干燥，得到产物(黄色固体；1.29克，90％产率)。该产物不需进一步纯化直接使用。
实施例2  合成化合物59(第2步)
将盐酸4-肼基苯-1-磺酰胺(1.1克；4.9毫摩尔)加入至溶于40毫升乙醇的搅拌过的1，1，1-三氟-4-羟基-4-菲-2-基-丁-3-烯-2-酮(1.29克，4.1毫摩尔)溶液中。将该混合物回流12小时，冷却至室温，且真空下浓缩至干。将残留物溶于乙酸乙酯，且用水洗涤。有机层经硫酸钠干，且真空下浓缩。通过硅胶快速层析纯化粗产物，得到化合物59(1.52克，80％产率)。
实施例3-14  合成化合物61-72
用1，1，1-三氟-4-羟基-4-菲-2-基-丁-3-烯-2-酮这种前述第1步产物作为共同前体，来合成化合物61-72(流程3，错！未发现原始参考资料。)。
实施例3  4-[5-(2-菲基(phenanthracenyl))-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯甲酰胺(61)(第3步)
将盐酸(4-氨基甲酰苯基)-肼(0.92克，4.9毫摩尔)在25℃加入至溶于40毫升乙醇的搅拌过的1，1，1-三氟-4-羟基-4-菲-2-基-丁-3-烯-2-酮(1.29克，4.1毫摩尔)溶液中。将该混合物回流12小时，冷却至室温，且真空下浓缩至干。将残留物溶于乙酸乙酯，且用水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，且真空下浓缩。通过硅胶快速层析纯化粗产物(乙酸乙酯-己烷，1∶1)，得到化合物61(1克，60％产率)。
实施例4  4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯甲腈(62)(第4步)
于25℃向溶于60毫升乙醇的搅拌过的1，1，1-三氟-4-羟基-4-菲-2-基-丁-3-烯-2-酮(2.45克，7.7毫摩尔)溶液中加入盐酸4-氰基苯肼(2.53克，15毫摩尔)。将该混合物回流搅拌12小时，冷却至室温，且真空下浓缩至干。将残留物溶于二氯甲烷(methylene chloride)，且用水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，且真空下浓缩。通过硅胶快速层析纯化粗产物(乙酸乙酯-己烷，1∶4)，得到化合物62(2.7克，85％产率)。
实施例5  4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-N-羟基苯甲脒(63)(第5步)
将盐酸羟胺(25毫克，0.36毫摩尔)加入至悬浮于甲醇(3毫升)的Na金属(8.3毫克，0.36毫摩尔)悬浮液中。将该混合物于室温搅拌10分钟，加入化合物62(1224毫克，0.3毫摩尔)。将该混合物回流2小时，然后于25℃再搅拌16小时，且真空下浓缩。通过硅胶快速层析纯化残留物(乙酸乙酯-己烷，1∶4至1∶1)，得到化合物63(120毫克，76％产率)。
实施例6  5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-(1H-四唑-5-基苯基)-1H-吡唑(64)(第6步)
加入于5毫升10％HCl中含有化合物62(125毫克，0.3毫摩尔)、NH4Cl(123.7毫克)及NaN3(58.5毫克，0.9毫摩尔)的混合物，用20毫升二氯甲烷萃取两次。有机层经硫酸钠干燥，且真空下浓缩至干。通过硅胶快速层析纯化粗产物(乙酸乙酯-己烷，1∶4)，得到化合物64(96毫克，70％产率)。
实施例7  4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯甲醛肟(65)(第7步)
于-40℃将DIBAL-H(3.1毫升，3.1毫摩尔，于己烷中1.0M)逐滴加入至溶于5毫升THF的化合物62(0.417克，1.1毫摩尔)溶液中。将该混合物搅拌8小时，倒入至5毫升10％乙酸中，搅拌30分钟。有机层经硫酸钠干燥，且真空下浓缩至干。通过硅胶快速层析纯化粗产物(乙酸乙酯-己烷，1∶4)，得到醛中间体(141毫克，0.34毫摩尔)，立即将其加入至溶于5毫升乙醇的含有盐酸羟酰胺(211毫克)及K2CO3的溶液中。将该混合物回流搅拌16小时。除去溶剂后，残留物用CH2C12萃取并用水洗涤。
实施例8  4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯甲醛腙(66)(第8步)
除了用一水合肼(153毫克，3.1毫摩尔)来取代盐酸羟胺外，用与化合物65同样方法合成化合物66(124毫克，85％产率)。
实施例9  {4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯基}-乙腈(67)(第9步)
(a)制备盐酸(4-肼基苯基)乙腈：将溶于水(20毫升)的亚硝酸钠(3.15克、45.7毫摩尔)溶液逐滴加入至一冷却的搅拌过的溶于浓盐酸溶液(55毫升)的4-氨基苯甲腈(5克，42.3毫摩尔)悬浮液中，其以保持温度低于-10℃的速率加入。加完后将反应混合物快速过滤除去固体，且将滤液分步加入冷却(-20℃)的搅拌过的溶于浓盐酸溶液(37毫升)的SnCl2.2H2O(47.7克，0.21摩尔)溶液中，其以保持温度低于-10℃的速率加入。将该溶液搅拌另外15分钟后，收集固体，用二乙醚(4x25毫升)洗涤并干燥，得到盐酸(4-肼基苯基)乙腈(5.6克，78％)。
(b)化合物67：将溶于乙醇(20毫升)的盐酸(4-肼基苯基)乙腈(0.32克，1毫摩尔)及1，1，1-三氟-4-羟基-4-菲-2-基-丁-3-烯-2-酮(0.18g，1.1毫摩尔)混合物回流搅拌24小时，冷却至室温，真空下浓缩至干，并溶于乙酸乙酯。有机层经硫酸镁干燥，且真空下浓缩至干。通过硅胶柱层析纯化粗产物(己烷-乙酸乙酯，2∶1)，得到化合物67(0.35克，81％产率)。
实施例10  2-{4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯基}-N-羟基-乙脒(68)(第10步)
将溶于乙醇(10毫升)的化合物67(0.43毫摩尔)及盐酸羟胺(0.075克、1.1毫摩尔)溶液回流搅拌8小时，且真空下浓缩至干。将该残留物溶于水，通过加入饱和NaHCO3溶液使得pH 8-9，且用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸镁干燥，且真空下浓缩至干。将该粗产物在二乙醚-己烷中重结晶，得到化合物68(0.32克，71％产率)。
实施例11  5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-4-1H-四唑基-5-基甲基苯基]-1H-吡唑(69)(第11步)
将溶于甲苯(5毫升)的含有化合物67(0.43克，1毫摩尔)、叠氮钠(0.08克、1.2毫摩尔)及盐酸三乙胺(0.12克，1.2毫摩尔)混合物于100℃搅拌5小时，冷却至室温并用水(10毫升)萃取。向该水相逐滴加入36％盐酸溶液以盐析得到的四唑69。过滤后，真空下干燥该固体，得到化合物33(0.39克，84％产率)。
实施例12-14  1-(4-硝基苯基)-5-苯基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(III)(第12步)
边搅拌边向溶于40毫升乙醇的1，1，1-三氟-4-羟基-4-菲-2-基-丁-3-烯-2-酮(1.29克，4.1毫摩尔)溶液中加入盐酸4-硝基苯肼(0.93克，4.9毫摩尔)，回流1小时，冷却至室温，且真空下浓缩至干。将残留物溶于乙酸乙酯，且用水洗涤。有机层经硫酸镁干燥，且真空下浓缩至干。通过硅胶柱层析纯化粗产物，得到化合物III(0.88克，50％产率)。
4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯胺(第13步)
向溶于20毫升乙醇的化合物III(0.88克，2毫摩尔)溶液中加入氧化铂(27毫克，0.12毫摩尔)，在H2下于55psi搅拌12小时，过滤以除去催化剂，且真空下浓缩至干。通过硅胶层析纯化粗产物，得到化合物IV(0.57克，70％产率)。
实施例12  2-氨基-N-{4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯基}-乙酰胺(70)(第14及15步)
向溶于10毫升四氢呋喃的叔丁氧羰基(tBOC)-甘氨酸(0.25克，1.4毫摩尔)及化合物IV(0.57克，1.4毫摩尔)溶液中加入盐酸1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺(0.41克，2.1毫摩尔)，于25℃搅拌12小时，且于旋转蒸发器中真空下浓缩至干。将残留物悬浮于水中，该产物用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸镁干燥，且真空下浓缩至干，得到化合物V(0.67克，85％产率)。将化合物V(0.67克，1.2毫摩尔)溶于8毫升含有0.7毫升浓HCl溶液的乙酸乙酯中，于室温搅拌2小时，且真空下浓缩至干。通过硅胶柱层析纯化粗产物，得到化合物70，为白色粉末(0.49克，90％)。
实施例13  4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-苯基-胍(71)(第16步)
向溶于7毫升乙醇的化合物IV(0.57克，1.4毫摩尔)溶液中加入氨腈(89毫克，2.1毫摩尔)及1.5毫升1N HCl。将该混合物回流24小时，且真空下浓缩至干。通过硅胶柱层析纯化产物，得到化合物71，为白色固体(0.25克，40％产率)。
实施例14  4-[5-(2-菲基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯基脲(72)(第17步)
向含有乙酸(50毫升)、水(12毫升)及乙醇(20毫升)的250ml圆底烧瓶中加入化合物IV(2.25克，5.6毫摩尔)，然后加入异氰酸钠(0.74克，11.2毫摩尔)。将该反应物搅拌1.5小时，然后加入1N氢氧化钠接着加入氢氧化钠小块来中和直至pH变为7.0。分离该产物，然后用100毫升水洗涤，用硫酸镁干燥，然后除去溶剂，得到粗产物。通过用(己烷-乙酸乙酯，3∶2至己烷-丙酮，1∶3)实施硅胶层析纯化，得到化合物72。
实施例15  制备另外的化合物
表4中的化合物用上述实施例中的方法来制备。
表4.另外的化合物
Figure G2004800360073D00321
实施例16  化合物70及71对几种癌细胞系的筛选试验
癌症筛选组的人类肿瘤细胞系在含有5％胎牛血清及2mM L-谷酰胺的RPMI 1640培养基中生长。对于一典型的筛选实验来说，细胞以100微升接种于96孔微量滴定板，其接种密度介入5,000至40,000细胞/孔范围内，视单个细胞系倍增时间而定。接种细胞后，在加入实验药物之前，将微量滴定板置于37℃、5％CO2、95％空气及100％相对湿度下培养24小时。
24小时后，为表述加药时每一细胞系细胞群体的测量值(Tz)，每一细胞系的两块板用TCA原位固定。使用前实验药物以所期望最终最大试验浓度的400倍溶于二甲基亚砜中并冷冻保存。在加入药物时，将冷冻的浓缩等份试样融化，用含有50微克/毫升庆大霉素的完全培养基稀释为所期望最终最大试验浓度的2倍。另外四份以10倍或1/2log系列稀释，以提供总共5种药物浓度加对照。将这些不同药物稀释液的100微升等份试样加入至已含有100微升培养基的合适微量滴定板孔中，得到所需要的最终药物浓度。
加入药物后，将板置于37℃、5％CO2、95％空气及100％相对湿度下温育另外48小时。对于贴壁细胞，通过加入冷TCA终止测定。通过轻轻加入50微升冷50％(w/v)TCA(终浓度10％TCA)原位固定细胞，在4℃温育60分钟。弃掉上清液，用自来水漂洗5次，风干。将溶于1％乙酸的0.4％(w/v)磺酰罗丹明B(SRB)溶液(100微升)加入至各孔中，将板在室温温育10分钟。染色后通过用1％乙酸漂洗5次去掉未结合的染料，让板风干。随后用10mM trizma碱溶解结合的染料，在自动平板读取器上于515纳米处读出吸光值。对于悬浮液细胞，除了通过轻轻加入50微升80％(w/v)TCA(终浓度16％TCA)固定孔底的沉降细胞来终止测定外，方法是一样的。使用7种吸光度测量值[零时间(Tz)、对照生长(C)及在5种浓度水平药物存在时试验生长(Ti)]，计算每一药物浓度水平的生长百分率。生长抑制百分率如下计算：
对于Ti＞/＝Tz的浓度，则公式为[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x 100
对于Ti＜Tz的浓度，则公式为[(Ti-Tz)/Tz]]x 100
计算出每一实验药物的三种剂量反应参数。从[(Ti-Tz)/(C-Tz)]x100＝50计算50％生长抑制(GI50)，其为在药物温育期间在对照细胞中引起净蛋白增加(如通过SRB染色法所测)降低50％的药物浓度。从Ti＝Tz计算引起完全生长抑制的药物浓度。从[(Ti-Tz)/Tz]]x 100＝-50计算指示药物处理后细胞净损失的LC50(在药物处理结束时与开始时比较引起所测蛋白质水平降低50％的药物浓度)。若达到活性水平，则这三个参数中的每一个值皆可计算出；然而，若该作用达不到或超过，则参数值表现为大于或小于所测最大或最小浓度。
所述方法用于在由美国国家健康研究所(National Institute ofHealth)的治疗药开发计划提供的筛选服务中于一组60种细胞系上测试化合物70及71。图1C中所示为：1，RPMI-8226白血病细胞；2，NCI-H322M非小细胞肺癌细胞；3，HT29结肠癌细胞；4，U251CNS癌细胞；5，SK-MEL-28黑素瘤癌细胞；6，SK-OV-3卵巢癌细胞；7，RXF 393肾癌细胞；8，PC-3前列腺癌细胞；9，MDA-MB-231乳腺癌细胞。
试验化合物70及71对全部60种细胞系的结果示于下表中。该试验通过美国国家癌症研究所的治疗药开发计划实施。所示结果为体外试验结果。
表5.试验化合物70对60种癌细胞系的结果
表6.试验化合物71对60种癌细胞系的结果
本文所述实施例意欲阐明所述化合物的合成及应用。该等实施例并非意欲限制本文所述发明的范围。

Claims (25)

1.一种式(I)化合物或其药学上可接受盐：
其中X选自烷基及卤烷基；
Ar选自苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基及芴基；其中Ar任选在任何合适位置被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、叠氮基、C1-C4叠氮烷基、芳基、烷基芳基、卤代芳基、卤烷基芳基；
R选自如下：
-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN，
Figure F2004800360073C00012
2.权利要求1所述化合物，其中X为C1至C4卤烷基。
3.权利要求2所述化合物，其中X为CF3。
4.权利要求1所述化合物，其中Ar在任何可取代位置为一个或多个选自卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、叠氮基、C1-C4叠氮烷基、芳基、烷基芳基、卤代芳基、卤烷基芳基及其组合的基团所取代。
5.权利要求1所述化合物，其中Ar选自2-萘基、4-联苯基、9-蒽基、2-芴基、4-叠氮苯基、4-叠氮甲基苯基、4-(2-叠氮乙基)苯基、4-(3-叠氮丙基)苯基、4-(4-叠氮丁基)苯基、4-(4-叠氮苯基)苯基、4-(4-叠氮甲基苯基)苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-丙基苯基、4-丁基苯基、4-(2-溴乙基)苯基、4-(3-溴丙基)苯基、4-(4-溴丁基)苯基、4-(三氟甲基)苯基、4-(4-甲基苯基)苯基、4-(4-溴甲基苯基)苯基、4-(4-丁基苯基)苯基、4-(4-叔丁基苯基)苯基、2-氯苯基、4-氯苯基、2，4-二氯苯基、3，4-二氯苯基、2，5-二氯苯基、2，4-二甲基苯基、2，5-二甲基苯基、3，4-二甲基苯基、3，5-二甲基苯基、4-(4-氯苯基)苯基、4-(3，5-二氯苯基)苯基、4-(2，3-二氯苯基)苯基、4-(3，5-二甲基苯基)苯基、4-(2，4，5-三氯苯基)苯基、4-(4-三氟甲基苯基)苯基、2-菲基、3-吲哚基、2-吡咯基、4-(苄基)苯基、4-叔丁基苯基、9H-芴-2-基和9-菲基。
6.权利要求5所述化合物，其中Ar为2-菲基。
7.权利要求1所述化合物，其中R选自氨基乙酰胺及胍。
8.权利要求1所述化合物，其中X为CF3，Ar为2-菲基，而R选自氨基乙酰胺及胍。
9.一种式II化合物或其药学上可接受盐：
Figure F2004800360073C00021
其中X选自烷基及卤烷基；
R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN，
Figure F2004800360073C00022
10.权利要求9所述化合物，其中X为C1至C4卤烷基。
11.权利要求10所述化合物，其中X为CF3。
12.权利要求9所述化合物或其药学上可接受盐，其中R选自氨基乙酰胺及胍。
13.一种式III化合物或其药学上可接受盐：
其中
R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN，
14.权利要求13所述化合物或其药学上可接受盐，其中R选自氨基乙酰胺及胍。
15.一种式IV化合物或其药学上可接受盐
16.一种式V化合物或其药学上可接受盐
17.一种以下式I化合物或其药学上可接受盐在制备用于在需要患者中诱导癌细胞或前期癌细胞细胞凋亡的药物中的用途：
其中X选自烷基及卤烷基；
Ar选自苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基及芴基；其中Ar任选在任何合适位置被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、叠氮基、C1-C4叠氮烷基、芳基、烷基芳基、卤代芳基、卤烷基芳基；
R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN，
Figure F2004800360073C00043
18.权利要求17所述用途，其中所述癌细胞或前期癌细胞选自白血病、非小细胞肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、黑素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌及乳腺癌。
19.权利要求17所述用途，其中该化合物选自化合物IV及V、或其组合、或它们的药学上可接受盐
Figure F2004800360073C00051
20.一种以下式I化合物或其药学上可接受盐在制备用于在需要治疗的受试者中治疗、抑制或延缓癌症发作的药物中的用途，其中该癌症选自白血病、非小细胞肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、黑素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌及乳腺癌：
Figure F2004800360073C00052
其中X选自烷基及卤烷基；
Ar选自苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基及芴基；其中Ar任选在任何合适位置被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、叠氮基、C1-C4叠氮烷基、芳基、烷基芳基、卤代芳基、卤烷基芳基；
R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN，
。
21.权利要求20所述用途，其中该化合物选自化合物IV及V、或其组合、或它们的药学上可接受盐
22.权利要求20所述用途，其中该受试者为人类。
23.一种以下式I化合物或其药学上可接受盐在制备用于在业已经历血管成形术或血管支架手术的受试者中预防再狭窄的药物中的用途：
其中X选自烷基及卤烷基；
Ar选自苯基、联苯基、萘基、蒽基、菲基及芴基；其中Ar任选在任何合适位置被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、C1-C4卤烷基、叠氮基、C1-C4叠氮烷基、芳基、烷基芳基、卤代芳基、卤烷基芳基；
R选自如下：
-CN，-CH2CN，-CH2CH2CN，-CH2CH2CH2CN，
Figure F2004800360073C00071
24.一种用于在需要患者中诱导癌细胞或前期癌细胞细胞凋亡的药用组合物，其包含权利要求1-16任一项的化合物。
25.权利要求24的药用组合物，其中所述癌细胞选自白血病、非小细胞肺癌、结肠癌、中枢神经系统癌、黑素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌及乳腺癌。
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