CN1850985A - 细菌性阴道病联合测定试剂盒 - Google Patents

细菌性阴道病联合测定试剂盒 Download PDF

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Abstract

一种细菌性阴道病联合测定试剂盒，包括干化学反应装置、稀释液和显色液；反应装置有三个分别放过氧化氢浓度、白细胞酯酶浓度和唾液酸苷酶活性试剂垫的盲孔；过氧化氢浓度试剂垫在过氧化物酶，磷酸盐缓冲液、4－氨基安替吡啉、3，5二氯二羟基苯磺酸和维生素C组成的酶液中经浸泡并干燥；白细胞酯酶浓度试剂垫在5溴－4氯－3吲哚乙酸盐和蔗糖组成的酶液中经浸泡并干燥；唾液酸苷酶活性试剂垫在5溴－4氯－3吲哚神经氨酸盐、乙酸盐缓冲液和海藻糖组成的酶液中经浸泡并干燥；稀释液由生理盐水和MES缓冲液组成；显色液为固紫B溶液。可同时评估受检者生殖道微生态环境、清洁度和细菌性阴道病致病菌状况；其操作简便、快速、成本低廉。

Description

细菌性阴道病联合测定试剂盒
技术领域
本发明属于体外诊断用具领域，特别设计一种细菌性阴道病联合测定试剂盒，用来评价妇女下生殖道微生态环境、清洁度和细菌性阴道病致病菌状况。
背景技术
细菌性阴道病(Bactarial Vaginosis简称BV)是一种在细菌学上表现为阴道正常菌群数量明显减少，代之以一组厌氧菌群(类杆菌属、莫比伦厌氧菌属、加德纳杆菌、消化链球菌属以及人类支原体属等)数量明显增加，阴道液生物化学性质发生明显改变等阴道微生态学变化而导致的临床征候群。
细菌性阴道病的诊断大致包括了临床诊断、微生物学诊断和阴道液生化诊断三类。(1)临床诊断标准是Amsel 1984年提出的，后来被确定为BV诊断金标准，但该法的可靠性近年来受到质疑，其中有些指标如阴道分泌物的pH与种族有关，胺试验可靠性与近期是否性交有关。(2)微生物学检查操作麻烦，已很少使用。(3)阴道液生化指标中，以酶活性测定最为常用。国外用于BV诊断的大部分商品试剂盒都是测定阴道分泌物酶活性的，如BV Blue等。但单项酶活性测定诊断BV的特异性较差，为提高BV诊断的可靠性，近年来国外大都采用同时测定几项生化指标的方法，如唾液酸苷酶+白细胞酯酶、唾液酸苷酶+三甲胺测定、唾液酸苷酶+过氧化氢等。考虑到商业成本问题，这些产品大都以单项的形式出售，用户使用不便，且分析成本高，如用国外产BV Blue和Leakostix两种产品测定唾液酸苷酶和白细胞酯酶，材料成本即达40元人民币，不便普及使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可同时评估受检者生殖道微生态环境、清洁度和细菌性阴道病致病菌状况的细菌性阴道病联合测定试剂盒，其操作简便、快速、不用仪器设备，成本低廉。
本发明技术方案如下：
本发明提供的细菌性阴道病联合测定试剂盒，主要包括干化学反应装置、稀释液和显色液；
所述干化学反应装置(如图1所示)为含有三个干化学反应盲孔的孔式盒状反应装置，盲孔内分别放入过氧化氢浓度试剂垫、白细胞酯酶浓度试剂垫和唾液酸苷酶活性试剂垫；可同时测定细菌性阴道病的过氧化氢浓度、白细胞酯酶和唾液酸苷酶活性，分别反映生殖道微生态环境、分泌物清洁度和细菌性阴道病致病菌状况；
所述干化学反应装置为含有三个干化学反应盲孔的孔式盒状反应装置，盲孔内分别放入过氧化氢浓度试剂垫、白细胞酯酶浓度试剂垫和唾液酸苷酶活性试剂垫；
所述过氧化氢浓度试剂垫、白细胞酯酶浓度试剂垫和唾液酸苷酶活性试剂垫的垫载体为滤纸、玻璃纤维膜或层析纸；
所述过氧化氢浓度试剂垫为将垫载体在由过氧化物酶、磷酸盐缓冲液、4-氨基安替吡啉、3，5二氯二羟基苯磺酸和维生素C还原剂组成的pH＝4.6±0.2酶液中经浸泡，之后进行干燥处理的试剂垫；所述氧化物酶在酶液中的浓度为1.2～2.0×105U/m2；所述磷酸盐缓冲液在酶液中的浓度为100mmol/L；所述4-氨基安替吡啉在酶液中的浓度为5～8.3g/m2；所述3，5二氯二羟基苯磺酸在酶液中的浓度为6.7～12.45g/m2；所述维生素C在酶液中的浓度为2.7g/m2；所述过氧化氢浓度试剂垫的直径与所述干化学反应盲孔的直径相同；
所述白细胞酯酶浓度试剂垫为将垫载体在由5溴-4氯-3吲哚乙酸盐和蔗糖或海藻糖保护剂组成的酶液中经浸泡，之后进行干燥处理的试剂垫；所述5溴-4氯-3吲哚乙酸盐在酶液中的浓度为425～435mg/m2，所述蔗糖或海藻糖保护剂在酶液中的质量百分浓度为10-20％；所述白细胞酯酶浓度试剂垫直径与所述干化学反应孔的直径相同；
所述唾液酸苷酶活性试剂垫为将垫载体在由5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐、乙酸盐缓冲液和蔗糖或海藻糖保护剂组成的pH＝5.0～5.4酶液中经浸泡，所述5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐在酶液中的浓度为130～140mg/m2；所述乙酸盐缓冲液在酶液中的浓度为200mmol/L；所述蔗糖或海藻糖保护剂在酶液中的质量百分浓度为10-20％；所述唾液酸苷酶活性试剂垫的直径与所述干化学反应孔的直径相同；
所述稀释液为由生理盐水和MES缓冲液组成的pH＝6.5±0.2稀释液；所述生理盐水在稀释液中的质量百分浓度为0.9％；所述MES缓冲液在稀释液中的浓度为10±2mmol/L；
所述显色液为由质量百分浓度0.05-0.3％的固紫B溶液。
所述的磷酸盐缓冲液为磷酸钠盐缓冲液或磷酸钾盐缓冲液。
所述的乙酸盐缓冲液为乙酸钠盐缓冲液或乙酸钾盐缓冲液。
使用本发明的试剂盒进行细菌性阴道病联合测定的步骤如下：
(1)用棉签从阴道后穹窿取分泌物后加入400ul稀释液稀释分泌物；
(2)在干化学反应装置的三个分别装有过氧化氢浓度试剂垫、白细胞酯酶活性试剂垫和唾液酸苷酶活性试剂垫的孔中每孔滴加一滴稀释的阴道液，每滴约35ul；
(3)再在装有“唾液酸苷酶活性试剂垫的孔中加入显色液1滴；
(4)将干化学反应装置在室温静置30分钟或放在37℃水浴箱中静置15分钟；
(5)判读结果：过氧化氢指标：正常显红色或紫色，不正常显兰色；唾液酸苷酶指标：正常不显色，显红色或紫色为阳性；白细胞酯酶指标：正常不显色，显蓝色或绿色为阳性。
与现有技术比较，本发明的细菌性阴道病联合测定试剂盒可同时测定过氧化氢浓度、白细胞酯酶和唾液酸苷酶活性，分别反映了生殖道微生态环境、分泌物清洁度和细菌性阴道病致病菌状况，使得下生殖道分泌物检测更全面，操作简便、快速、不用仪器设备，成本低廉。
附图说明
图1为本发明细菌性阴道病联合测定试剂盒的结构示意图。
具体实施方式
图1为本发明细菌性阴道病联合测定试剂盒的结构示意图，由图可知，本发明提供的细菌性阴道病联合测定试剂盒，主要包括干化学反应装置10、稀释液和显色液；
所述干化学反应装置10为含有三个直径相同的干化学反应指标孔(为盲孔：过氧化氢指标孔1，白细胞酯酶指标孔2和唾液酸苷酶指标孔3)的孔式盒状反应装置，过氧化氢指标孔1内装有过氧化氢浓度试剂垫，白细胞酯酶指标孔2内装有白细胞酯酶活性试剂垫；唾液酸苷酶指标孔3内装有唾液酸苷酶活性试剂垫；
所述过氧化氢浓度试剂垫、白细胞酯酶活性试剂垫和唾液酸苷酶活性试剂垫的垫载体为具有一定负载量的滤纸、玻璃纤维膜或层析纸；
所述过氧化氢浓度试剂垫为将垫载体在由过氧化物酶、磷酸盐缓冲液、4-氨基安替吡啉、3，5二氯二羟基苯磺酸和维生素C还原剂组成的pH＝4.6±0.2酶液中经浸泡，之后进行干燥处理的试剂垫；所述氧化物酶在酶液中的浓度为1.2～2.0×105U/m2；所述磷酸盐缓冲液在酶液中的浓度为100mmol/L；所述4-氨基安替吡啉在酶液中的浓度为5～8.3g/m2；所述3，5二氯二羟基苯磺酸在酶液中的浓度为6.7～12.45g/m2；所述维生素C在酶液中的浓度为2.7g/m2；所述过氧化氢浓度试剂垫的直径与所述干化学反应盲孔的直径相同；
所述白细胞酯酶浓度试剂垫为将垫载体在由5溴-4氯-3吲哚乙酸盐和蔗糖或海藻糖保护剂组成的酶液中经浸泡，之后进行干燥处理的试剂垫；所述5溴-4氯-3吲哚乙酸盐在酶液中的浓度为425～435mg/m2，所述蔗糖或海藻糖保护剂在酶液中的质量百分浓度为10-20％；所述白细胞酯酶浓度试剂垫直径与所述干化学反应孔的直径相同；
所述唾液酸苷酶活性试剂垫为将垫载体在由5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐、乙酸盐缓冲液和蔗糖或海藻糖保护剂组成的pH＝5.0～5.4酶液中经浸泡，所述5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐在酶液中的浓度为130～140mg/m2；所述乙酸盐缓冲液在酶液中的浓度为200mmol/L；所述蔗糖或海藻糖保护剂在酶液中的质量百分浓度为10-20％；所述唾液酸苷酶活性试剂垫的直径与所述干化学反应孔的直径相同；
所述稀释液为由生理盐水和MES缓冲液组成的pH＝6.5±0.2稀释液；所述生理盐水在稀释液中的质量百分浓度为0.9％；所述MES缓冲液在稀释液中的浓度为10±2mmol/L；
所述显色液为由质量百分浓度0.05～0.3％的固紫B溶液。
实施例1
实施例1的干化学反应装置的三孔内分别装有φ4.5mm的Whatman的3MM级色谱层析纸做载体的过氧化氢指标垫，白细胞酯酶指标垫和唾液酸苷酶活性试剂垫；
过氧化氢指标垫的制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由过氧化物酶1.2U/m2，pH＝4.6，100mmol/L的磷酸钠盐缓冲液，4-氨基安替吡啉5g/m2，3，5二氯二羟基苯磺酸6.7g/m2和维生素C 2.7g/m2组成；
白细胞酯酶指标垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚乙酸盐435mg/m2和蔗糖15％组成；
唾液酸苷酶活性试剂垫制作：5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐138mg/m2，pH＝5.2，200mmol/L的乙酸钠盐缓冲液，蔗糖16％。
稀释液：由质量百分浓度为0.9％NaCl与pH＝6.5，10mmol/L MES缓冲液组成；
显色液：质量百分浓度0.15％的固紫B溶液。
其细菌性阴道病联合测定步骤如下：
(1)用棉签从阴道后穹窿取分泌物后加入400ul稀释液稀释分泌物；
(2)在干化学反应装置的三个分别装有过氧化氢浓度试剂垫、白细胞酯酶浓度试剂垫和唾液酸苷酶活性试剂垫的孔中每孔滴加一滴稀释的阴道液，每滴约35ul；
(3)再在装有“唾液酸苷酶活性试剂垫的孔中加入显色液1滴；
(4)将干化学反应装置在室温静置30分钟或放在37℃水浴箱中静置15分钟；
(5)判读结果：过氧化氢指标：正常显红色或紫色，不正常显兰色；唾液酸苷酶指标：正常不显色，显红色或紫色为阳性；白细胞酯酶指标：正常不显色，显蓝色或绿色为阳性。
实施例2
实施例2的干化学反应装置的三孔内分别装有φ4.5mm的Whatman的3MM级色谱层析纸做载体的过氧化氢指标垫，白细胞酯酶指标垫和唾液酸苷酶活性试剂垫；
过氧化氢指标垫的制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由过氧化物酶1.8U/m2，pH＝4.6，100mmol/L的磷酸钾盐缓冲液，4-氨基安替吡啉7.5g/m2，3，5二氯二羟基苯磺酸10.05g/m2，维生素C 2.7g/m2；
白细胞酯酶指标垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚乙酸盐428mg/m2，蔗糖12％；
唾液酸苷酶活性试剂垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐130mg/m2，pH＝5.2，200mmol/L的乙酸钾盐缓冲液，海藻糖10％；
稀释液：由质量百分浓度为0.9％NaCl与pH＝6.5，8mmol/L MES缓冲液组成。
显色液：质量百分浓度0.3％的固紫B溶液。其细菌性阴道病联合测定步骤同
实施例1。
实施例3
实施例3的干化学反应装置的三孔内分别装有φ4.5mm的Whatman的3MM级色谱层析纸做载体的过氧化氢指标垫，白细胞酯酶指标垫和唾液酸苷酶活性试剂垫；
过氧化氢指标垫的制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由过氧化物酶1.8U/m2，pH＝4.6，100mmol/L的磷酸钠盐缓冲液，4-氨基安替吡啉8.35g/m2，3，5二氯二羟基苯磺酸11.1g/m2，维生素C 2.7g/m2。
白细胞酯酶指标垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚乙酸盐425mg/m2，海藻糖10％。
唾液酸苷酶活性试剂垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐140mg/m2，pH＝5.2，200mmol/L的乙酸钠盐缓冲液，海藻糖20％。
稀释液：由质量百分浓度为0.9％NaCl与pH＝6.5，10mmol/LMES缓冲液组成。
显色液：质量百分浓度0.05％的固紫B溶液。其细菌性阴道病联合测定步骤同实施例1。
实施例4
实施例4的干化学反应装置的三孔内分别装有φ4.5mm的Whatman的玻璃微纤维滤纸GF/A做载体的过氧化氢指标垫，白细胞酯酶指标垫和唾液酸苷酶活性试剂垫；
过氧化氢指标垫的制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由过氧化物酶1.5U/m2，pH＝4.6，100mmol/L的磷酸钾盐缓冲液，4-氨基安替吡啉6.3g/m2，3，5二氯二羟基苯磺酸8.4g/m2，维生素C 2.7g/m2；
白细胞酯酶指标垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚乙酸盐425mg/m2，蔗糖10％；
唾液酸苷酶活性试剂垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐130mg/m2，pH＝5.2，200mmol/L的乙酸钾盐缓冲液，海藻糖10％；
稀释液：由质量百分浓度为0.9％NaCl与pH＝6.5，8mmol/L MES缓冲液组成；
显色液：质量百分浓度0.3％的固紫B溶液。其细菌性阴道病联合测定步骤同
实施例1。
实施例5
实施例5的干化学反应装置的三孔内分别装有φ4.5mm的Whatman的纤维素滤纸Grade3做载体的过氧化氢指标垫，白细胞酯酶指标垫和唾液酸苷酶活性试剂垫；
过氧化氢指标垫的制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由过氧化物酶1.4U/m2，pH＝4.6，100mmol/L的磷酸钠盐缓冲液，4-氨基安替吡啉8.3g/m2，3，5二氯二羟基苯磺酸12.45g/m2，维生素C 2.7g/m2；
白细胞酯酶指标垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚乙酸盐425mg/m2，海藻糖10％；
唾液酸苷酶活性试剂垫制作：将上述载体在下述浸液中浸泡；所述浸液由5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐140mg/m2，pH＝5.2，200mmol/L的乙酸钠盐缓冲液，蔗糖20％；
稀释液：由质量百分浓度为0.9％NaCl与pH＝6.5，8mmol/L MES缓冲液组成；
显色液：质量百分浓度0.05％的固紫B溶液。其细菌性阴道病联合测定步骤同实施例1。

Claims (3)

1、一种细菌性阴道病联合测定试剂盒，其特征在于，包括干化学反应装置、稀释液和显色液；
所述干化学反应装置为含有三个干化学反应盲孔的孔式盒状反应装置，盲孔内分别放入过氧化氢浓度试剂垫、白细胞酯酶浓度试剂垫和唾液酸苷酶活性试剂垫；
所述过氧化氢浓度试剂垫、白细胞酯酶浓度试剂垫和唾液酸苷酶活性试剂垫的垫载体为滤纸、玻璃纤维膜或层析纸；
所述过氧化氢浓度试剂垫为将垫载体在由过氧化物酶、磷酸盐缓冲液、4-氨基安替吡啉、3，5二氯二羟基苯磺酸和维生素C还原剂组成的pH＝4.6±0.2酶液中经浸泡，之后进行干燥处理的试剂垫；所述氧化物酶在酶液中的浓度为1.2～2.0×105U/m2；所述磷酸盐缓冲液在酶液中的浓度为100mmol/L；所述4-氨基安替吡啉在酶液中的浓度为5～8.3g/m2；所述3，5二氯二羟基苯磺酸在酶液中的浓度为6.7～12.45g/m2；所述维生素C在酶液中的浓度为2.7g/m2；所述过氧化氢浓度试剂垫的直径与所述干化学反应盲孔的直径相同；
所述白细胞酯酶浓度试剂垫为将垫载体在由5溴-4氯-3吲哚乙酸盐和蔗糖或海藻糖保护剂组成的酶液中经浸泡，之后进行干燥处理的试剂垫；所述5溴-4氯-3吲哚乙酸盐在酶液中的浓度为425～435mg/m2，所述蔗糖或海藻糖保护剂在酶液中的质量百分浓度为10-20％；所述白细胞酯酶浓度试剂垫直径与所述干化学反应孔的直径相同；
所述唾液酸苷酶活性试剂垫为将垫载体在由5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐、乙酸盐缓冲液和蔗糖或海藻糖保护剂组成的pH＝5.0～5.4酶液中经浸泡，所述5溴-4氯-3吲哚神经氨酸盐在酶液中的浓度为130～140mg/m2；所述乙酸盐缓冲液在酶液中的浓度为200mmol/L；所述蔗糖或海藻糖保护剂在酶液中的质量百分浓度为10-20％；所述唾液酸苷酶活性试剂垫的直径与所述干化学反应孔的直径相同；
所述稀释液为由生理盐水和MES缓冲液组成的pH＝6.5±0.2稀释液；所述生理盐水在稀释液中的质量百分浓度为0.9％；所述MES缓冲液在稀释液中的浓度为10±2mmol/L；
所述显色液为由质量百分浓度0.05-0.3％的固紫B溶液。
2、按权利要求1所述的细菌性阴道病联合测定试剂盒，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液为磷酸钠盐缓冲液或磷酸钾盐缓冲液。
3、按权利要求1所述的细菌性阴道病联合测定试剂盒，其特征在于，所述的乙酸盐缓冲液为乙酸钠盐缓冲液或乙酸钾盐缓冲液。
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