CN1785965A - 抗真菌化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种化学式(I)的抗真菌化合物，系统命名为腈基({5－硝基－2－甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯(英文：methylcyano({5－nitro－2－methoxyphenyl}hydrazono)acetate)，其中R1表示卤素、硝基、烷基(1～6个碳)；R2表示卤素、硝基、烷基(1～6个碳)。本发明还公开了该抗真菌化合物的制备方法。此外，本发明还公开了一种以该抗真菌化合物为活性成分的药物组合物以及该抗真菌化合物在制备治疗真菌引起感染性疾病的药物中的应用。

Description

抗真菌化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种化合物，尤其涉及一种抗真菌化合物，此外本发明还涉及该抗真菌化合物的制备方法及其应用。

背景技术

真菌是自然界广泛存在的一种真核微生物。迄今为止，已经发现有200多种真菌能够导致人体疾病或者动植物危害(如危害水稻的稻瘟菌等)。真菌引起的人体疾病分为浅表性感染和深部感染。浅表性真菌感染主要由表皮癣菌属、小孢霉菌属和毛癣菌属引起，表现为头癣、体癣、花斑癣及甲真菌病。深部真菌病的主要病原菌则包括念珠菌、隐球菌、曲霉、孢子丝菌等，主要感染消化道和呼吸系统，其危害性极大，病死率高。随着临床上高效广谱抗生素、肾上腺皮质激素和免疫抑制剂的广泛应用，以及AIDS、器官组织移植和化疗等免疫受损病人的逐渐增多，使得真菌感染日益严重。目前，抗真菌药已成为抗感染类药物中的重要组成部分，在临床和OTC领域均有大量的应用。

目前临床上抗真菌药物应用比较多的是抗生素类，如灰黄霉素、两性霉素B、克念霉素等和唑类，如酮康唑、伊曲康唑、氟康唑等。最新研制的抗真菌类药物是刺白菌素，如卡泊芬净(caspofungin)，其作用的机制是抑制真菌细胞壁合成途径的一个关键酶-1，3β-葡聚糖合成酶的活性。由于使用抗真菌药物后都会出现耐药性菌株，所以，发展新类型的抗真菌药物是长期的任务。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种具有药用价值的抗真菌化合物。

本发明要解决的技术问题之二是提供一种上述抗真菌化合物的制备方法。

本发明要解决的技术问题之三是提供一种以上述抗真菌化合物为活性成分的药物组合物。

本发明要解决的技术问题之四是提供上述抗真菌化合物在制备治疗真菌引起感染性疾病的药物中的应用。

本发明提供了下述化学式(I)的抗真菌化合物，为腈基({5-硝基-2-甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯。

                       化学式(I)

其中R1表示可以选择卤素、硝基、C₁～C₆的烷基；

R2表示可以选择卤素、硝基、C₁～C₆的烷基。

上述C₁～C₆的烷基是指具有1～6个碳原子的直链或支链烷基。例如：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基。

本发明还提供该抗真菌化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)硝基苯依次在硫酸、硝酸的氧化作用下，反应生成1，3-硝基，4-羟基苯；(2)丁烯酮在催化剂(CH₃CH₂)₂AlCN的作用下于首位引入氮原子，而后在催化剂NaOMe、溶剂MeOH作用下在末位引入羧基，最后在催化剂DMF作用下，在末位的邻位引入氨基，反应生成1-氰，2-氨乙酸；(3)上述两步所合成的终产物在Et₃N，DBU，CH₃CN存在的条件下反应，生成腈基({5-硝基-2-甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯。

化学式(I)抗菌化合物可与有机酸和无机酸形成可药用酸加成盐。化学式(I)化合物的药理上容许的酯衍生物、醚衍生物、氨基甲酰基的N-烷基衍生物及其可药用酸加成盐可通过本领域已知的方法制得。

本发明还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的上述化学式为(I)的抗真菌化合物，以及含有一种或多种药学上可接受的载体。

上述可接受的载体是无毒的、能辅助施用并且对化学式为(I)的化合物的治疗益处没有不利影响。此类载体可以是本领域的技术人员通常能得到的任何固体赋形剂、液体赋形剂、半固体赋形剂或者在气雾剂组合物中可以是气体赋形剂。固体药物赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、甘油硬脂酰酯、氯化钠、无水脱脂乳等。液体和半固体赋形剂可以选自甘油、丙二醇、水、乙醇和各种油，包括那些源于石油、动物、植物或人工合成的油，例如，花生油、豆油、矿物油、芝麻油等、优选的液体载体，特别是用于可注射溶液的，包括水、盐水、葡萄糖水溶液和甘醇。

本发明的化合物以治疗上的有效量施用，其施用方式可以是任何适合具有相似效能试剂的已接受的施用方式。本发明的化合物的实际施用量(即活性组分)依赖于许多因素，如待治疗疾病的严重性、治疗对象的年龄和相对健康程度、所使用的化合物的效能、施用途径和形式，以及其他因素。具有化学式(I)的化合物的治疗上的有效量可以在大约每天0.05-50毫克每千克受体体重范围内；优选约0.5-10mg/kg/day。因此，要给70kg体重的人施用，剂量范围最优选约为35-700毫克每天。

本发明的化合物通过以下途径以药物组合物施用：口服、系统性施用(例如，透过皮肤的、鼻内的或者用栓剂)或肠胃外施用(例如，肌肉内、静脉内或皮下)。优选的施用方法是使用方便的日剂量方案的口服，它可以根据疾病程度调节。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规方法制备。例如使该化合物(活性成分)与一种或者多种载体混合，然后将其制成所需的剂型，如片剂、药丸、胶囊、半固体、粉末、缓释剂型、溶液、混悬液、配剂、气雾剂等等。

剂型中化合物的量可以在本领域技术人员所用的全部范围内变动。通常，按重量百分比(wt％)记，剂型中含有占总剂型约1-99wt％的具有化学式(I)的化合物，并且还有一种或多种合适的药物赋形剂作为平衡物。优选的，化合物以大约20-70wt％的比例存在。

本发明还提供上述抗真菌化合物在制备治疗真菌引起感染性疾病的药物中的应用。

本发明的抗真菌化合物具有优良的广谱抗真菌活性，对常见真菌，如酿酒酵母菌、构巢曲霉和马尔尼菲青霉菌都有较强的抑制作用，尤其对重要的医学真菌-白色念珠菌也有比较强的抑制效果，可用于治疗或预防真菌引起的感染性疾病。

具体实施方式

实施例1(抗真菌化合物的制备)

抗真菌化合物(腈基({5-硝基-2-甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯)的制备分成三个主要步骤：

(I)硝基苯在硫酸的氧化作用下，在对位引入羟基，在硝酸的进一步氧化作用下在间位引入第二个硝基，生成1，3-硝基，4-羟基苯。

(II)丁烯酮在如(II)反应式中所示，在催化剂((CH₃CH₂)₂AlCN)的作用下于首位引入氮原子，而后在末位引入羧基(NaOMe，MeOH)，最后在末位的邻位引入氨基(DMF)，生成1-氰，2-氨乙酸。

(III)上述两步所合成的终产物(1，3-硝基，4-羟基苯和1-氰，2-氨乙酸)在Et₃N，DBU，CH₃CN存在的条件下反应，生成腈基({5-硝基-2-甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯。

反应所涉及简略术语的详细名称如下：

DMF：二甲基缩醛

Et₃N：三乙胺

DBU：1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一烯-7

实施例2(抗真菌活性试验)

1.实验菌株：

(1)马尔尼菲青霉菌，本实验室(2)白色念珠菌(CMCC98001)(3)酿酒酵母菌(Y20)(4)构巢曲霉(M115)。

2.培养基：

马尔尼菲青霉菌和白色念珠菌选用沙氏培养基。酿酒酵母菌选用马铃薯培养基。构巢曲霉选用菜氏培养基。培养基具体配方如下：

沙氏培养基

蛋白胨                                                10g

葡萄糖                                                40g

加水配成1升溶液

菜氏培养基

NaNO₃                                                 3g

K₂HPO₄                                                     1g

MgSO₄·7H₂O                                                0.5g

KCl                                                           3g

FeSO₄·7H₂O                                                0.01g

蔗糖                                                          30g

加水配成1升溶液

马铃薯酵母膏培养基

马铃薯(去皮)                                                  200g

葡萄糖                                                        20g

酵母膏                                                        1.5g

加水配成1升溶液

3.菌悬液的制备：

菌株保存于斜面半固体培养基上，保持菌落的纯化和活性(4℃冰箱保藏)。使用时将菌落接种于液体培养基中，27℃摇床培养24～48小时，用血细胞计数器将菌悬液的浓度控制在1～5×10⁸个/ml之间。

4.抗菌化合物的配制：

将化合物溶解在(二甲基亚砜)DMSO中，配制成10mg/ml，0.2μm微空滤膜过滤，加样量均为10μl。

5.最小抑制真菌浓度的测定方法：

马尔尼菲青霉菌、白色念珠菌和酿酒酵母菌参考NCCLS方案。化合物浓度减半稀释观察菌液的生长情况。NCCLS方案将完全不生长的前一管判定为终点，有拖尾现象时采用80％抑制判定法，将生长对照管内的培养物进行1∶4稀释，将与其浓度近似的培养管判定为终点。

构巢曲霉选用纸片法测定抑菌圈大小(纸片直径5mm，加样量10μl)。选用酮康唑、伊曲康唑作为阳性对照药物。测定抑菌圈的大小。

所有数据都在真菌生长48h后测定。

6.抗真菌药效测定结果：

菌株	MIC(mg/ml)
		马尔尼菲青霉菌	16.1
白色念珠菌	23.2
		酿酒酵母	25.7

菌株	抑菌圈直径mm	抑菌能力
			构巢曲霉	15.4	强

实施例3(药物组合物制备：片剂)

采用亲水型辅料(羟丙基纤维素和玉米淀粉)，在活性成分中加入适当的稀释剂，再通过混合粉碎法的微粉化处理，使药物表面覆盖了一层亲水性辅料，使微粒均匀分散，改善了其溶解特性，有助于提高药物的生物利用度。一个具体的配方如下：

腈基({5-硝基-2-甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯             70mg

玉米淀粉                                            20mg

滑石粉                                              5mg

羟丙基纤维素                                        5mg

                                       总重量    100mg

实施例4(药物组合物制备：注射液)

将本发明的抗真菌化合物溶解于适量的注射用水中，加入NaCl和注射用活性炭，过滤可能的杂质即得。一个具体的配方如下：

腈基({5-硝基-2-甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯           20mg

NaCl                                             15ml

注射用水                                      加至100ml

Claims (4)

1.下述化学式(I)表示的抗真菌化合物，为腈基({5-硝基-2-甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯，

                     化学式(I)

其中：R1表示卤素、硝基、C₁～C₆的烷基；

R2表示卤素、硝基、C₁～C₆的烷基。

2.权利要求1所述抗真菌化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)硝基苯依次在硫酸、硝酸的氧化作用下，反应生成1，3-硝基，4-羟基苯；(2)丁烯酮在催化剂(CH₃CH₂)₂AlCN的作用下于首位引入氮原子，而后在催化剂NaOMe、溶剂MeOH作用下在末位引入羧基，最后在催化剂DMF作用下，在末位的邻位引入氨基，反应生成1-氰，2-氨乙酸；(3)上述两步所合成的终产物在Et₃N，DBU，CH₃CN存在的条件下反应，生成腈基({5-硝基-2-甲氧基苯基}亚肼基)乙酸酯。

3.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的抗真菌化合物。

4.权利要求1所述的抗真菌化合物在制备真菌引起感染性疾病的药物中的应用。