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3 Nakamura,K.,Tanaka,Y.,Antidepressant-like effects of aniracetam in agedrats and its mode of action,Psychopharmacology(Berl),158(2001)205-212.
4 Kaufeler,R.,Meier,B.,Brattstrom,A.,Efficacy and tolerability of Ze 117St.John’s wort extract in comparison with placebo,imipramine and fluoxetinefor the treatment of mild to moderate depression according to ICD-10.Anoverview,Pharmacopsychiatry,34 Suppl 1(2001)S49-S50.
具体实施方式:
1、实验目的:观察芬克罗酮的抗抑郁作用。
2、受试药物:
名称:中文名,芬克罗酮;英文名,phenchlobenpyrrone;曾用名,KMBZ-009。
含量:99.77%
批号:940090
提供单位:中国科学院昆明植物研究所。
保存方法:室温下干燥密封保存。
助溶剂:聚己二醇。悬浮剂:CMC-Na;现配现用。
3、对照药物:
名称:中文名,丙米嗪,英文名,imipramine
助溶剂:生理盐水。
4主要仪器:
行为操作箱:美国Med Association Inc.公司产品;
5动物:
5.1来源、种属、合格证号:中国科学院昆明动物研究所实验动物中心提供昆明品系小鼠(饲养合格证号:云卫,动管第B05号。)。昆明总医院实验动物中心提供Wistar大鼠(饲养合格证号:滇实动证字9701号。)。
5.2年龄、体重:小鼠年龄为5周龄,大鼠年龄为9周龄。
5.3性别:小鼠雌雄各半;大鼠全部为雄性。
5.4动物数:小鼠每组为10只,大鼠每组5-8只。
5.5饲养条件:从实验动物中心购得的小鼠和大鼠,在本实验室适应1周。12小时光照,12小时无光照,充分供给小鼠饲料和饮水,让其自由取食和饮水。大鼠可自由取食,但控制饮水。饲料购自中国医学科学院医学生物所。实验室保持安静。
6实验设计:
6.1 72秒低频差式强化程序(DRL72-s)实验:
(1)药物的配制方法、剂量设置、给药途径、容积和给药次数:精确称取芬克罗酮,加入所需体积的聚己二醇充分溶解,丙米嗪用生理盐水配置,当天使用当天配制;芬克罗酮的剂量为20mg/kg,丙米嗪的剂量为15mg/kg;药物经腹腔注射(0.2ml/只),每天单次给药,连续给药3天。
(2)实验装置:行为操作箱中有照明灯(实验中始终使之亮着)和杠杆,杠杆附近装有饮水装置,当大鼠压杆(反应)符合程序要求时,自动给其供水一次。该程序要求,大鼠只有在与上一次反应间隔一定时间或一定时间以上作出另一次反应才能被强化(供水奖励),否则,大鼠的任何反应不但不被强化,而且时间间隔又要重新开始。
(3)操作步骤:大鼠在受训前禁水22.5小时,每次受训结束后允许其有20min的自由饮水时间。训练步骤:①压杆操作训练:首先训练大鼠在操作箱中学会压杆取得饮水。即动物压杆反应一次给予一次饮水强化,没有反应发生时每60s给一次强化。在连续3天每日1h训练中仍未学会操作的大鼠,由实验者另单独训练。②DRL18-s训练:所有学会操作压杆的大鼠接受2周的DRL18-s,在此训练中,动物只有在距上一次压杆(反应)18s后再压杆,才能得到饮水奖励,每天训练1h。③DRL72-s训练:在此训练中,动物只有在距上次压杆(反应)18s后再压杆,才能得到饮水奖励。每天训练1h。当每只大鼠在连续5d以上的压杆反应达到稳定后开始药物测试。④给药测试:连续3天,每天1次给各组大鼠分别腹腔注射丙米嗪或芬克罗酮,每次注射后30min进行DRL72-s测试。给药前3天的平均成绩被设定为基线水平。
(4)观察指标:强化率,即获得饮水的压杆操作次数占对照操作次数的百分率。
6.2 MFST实验:
(1)药物的配制方法、剂量设置、给药途径、容积和给药次数:精确称取芬克罗酮,加入所需体积的CMC-Na使其均匀悬浮,丙米嗪用生理盐水配置,当天使用当天配制;芬克罗酮的剂量为2.5、5和10mg/kg,丙米嗪的剂量为15mg/kg;药物经口灌服(0.2ml/只),单次给药。
(2)测试装置、操作方法和观察指标:实验装置为高25cm,直径15cm的玻璃桶。测试时,玻璃桶中装入18cm深的温水(23-25℃),该水深须使小鼠的尾巴不能触即桶底而支撑身体。实验前经口给小鼠灌服药物或悬浮剂,60分钟后立即将动物放入装水的玻璃桶中观察6min,比较给药组和对照组小鼠在后4min内的不动时间,即小鼠表现出绝望行为的累计时间。所谓不动即动物在水中除保持身体平衡外无其它动作。
7统计分析:数据表示为平均值±标准误,对数据进行ANOVA单因素方差分析,p<0.05被看成有显著差异。
8结果和评价:
8.1 DRL72-s的验结果:以给药前3天的平均强化率为基础水平,设定为1。每只动物给药后的强化率和基础强化率相比得到一个相对变化量。结果发现:腹腔注射阳性对照药丙米嗪(15mg/kg)后,连续3天测试结果均表明,大鼠的强化率明显提高;腹腔注射20mg/kg芬克罗酮后,第一天测试结果表明,大鼠的强化率有所提高,但没达到显著性差异,在第二天和第三天腹腔注射芬克罗酮后,大鼠的强化率显著提高;(结果见表1、图1)。本研究结果表明,芬克罗酮具有一定的抗抑郁作用,其活性与丙米嗪相当。
表1:芬克罗酮对大鼠操作DRL72-s强化率的影响(
$p<0.05,
$$p<0.01和丙米嗪组基线相比;
*p<0.05,
**p<0.01和芬克罗酮组基线相比)。
|
测试时间 |
丙米嗪(15mg/kg) |
芬克罗酮(20mg/kg) |
强化率变化 |
给药前连续3天(基线)第1天给药后第2天给药后第3天给药后 |
1±0.021.21±0.03$1.33±0.02$$1.31±0.02$ |
1±0.051.20±0.091.21±0.06**1.51±0.2* |
8.2 MFST实验结果:溶剂对照组小鼠的不动时间在100秒以上,表明对照组小鼠在该模型上表现出明显的抑郁样行为,而测试前60分钟单次灌服15mg/kg的丙米嗪后,小鼠在水中的不动时间明显较溶剂对照组小鼠缩短。在强迫游泳测试前60分钟给小鼠灌服5或10mg/kg的芬克罗酮后,实验小鼠在水中的不动时间明显较溶剂对照组小鼠减少,2.5mg/kg剂量的芬克罗酮对小鼠在水中的不动时间未显示显著影响。表明芬克罗酮呈剂量依赖性地减轻小鼠的绝望行为(结果见图2)。
以上两组实验结果表明,芬克罗酮具有明显的抗抑郁作用,芬克罗酮的作用和丙米嗪的作用相当,但芬克罗酮的毒副作用较小,因此可作为制备治疗抑郁症药物的应用。