CN1708317A - 用ⅲ类抗cea单克隆抗体和治疗剂进行联合治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种包含裸的人源化的、嵌合的和人的III类抗CEA单克隆抗体以及一种治疗剂的组合物，它用于治疗表达CEA的癌症和其它疾病，以及提供了利用该组合物进行治疗的方法。

Description

用III类抗CEA单克隆抗体和治疗剂进行联合治疗
                    发明背景
A.发明领域
本发明涉及治疗表达癌胚抗原(“CEA“)的癌症，特别是甲状腺髓样癌(MTC)、非甲状腺髓样癌(non-MTC)、结肠直肠癌、肝细胞癌、胃癌、肺癌、乳癌和其它表达CEA的癌症的方法，其中所述治疗是通过给予一种包含一种与至少一种其它治疗剂组合的抗体的免疫试剂，所述的其它治疗剂如化学治疗剂、放射剂、免疫调节物、免疫偶联物或其组合。本发明进一步涉及包含免疫试剂和至少一种以非偶联形式存在的治疗剂的药物组合物。特别地，本发明涉及通过在给予治疗剂之前、同时或之后给予III类抗癌胚抗原(抗“CEA”)单克隆抗体(“MAb”)，特别是具有结合亲和性特性和相应的鼠III类抗-CEA MAb的特异性的MAb，更加特别地是具有多种人抗体的抗原性和效应物特性的人源化的、嵌合的或人的MAbs，来治疗表达CEA的癌症的方法。在治疗的方法中特别有用的MAbs是人源化的MAbs，其中将抗CEA的鼠MAb的互补决定区(“CDRs”)嫁接入人抗体的构架区。
B.背景
CEA是一种通常在许多种上皮癌症中表达的癌胚抗原，所述上皮癌症是那些大多数出现在结肠还有在乳房、肺、胰、甲状腺(髓型)和卵巢中的癌症(Goldenberg等，J Natl.CancerInst.57：11-22(1976)，Shively，等，Crit.Rev.Oncol.Hematol.2：355-399(1985))。一开始CEA被认为是结肠直肠癌的肿瘤特异性抗原(Gold等，J Exper.Med.，122：467(1965))。但是，后来发现它存在于多种癌、良性肿瘤和病理组织中，以及正常的人结肠中(Shively等，Crit.Rev.Oncol.Hemato.，2：355(1985)；von Kleist等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，69：2492(1972))。CEA已经显示通过同型和异型相互作用调节细胞-细胞吸附，这接着提示了CEA在肿瘤发生的各个方面的作用。
限于甲状腺的甲状腺髓样癌(MTC)是可以通过甲状腺全部切除和中枢淋巴节解剖而冶愈的。但是，病症在这些病人的大约50％中复发。此外，患有不可切除的疾病或远端转移的病人的预后很糟，小于30％的病人存活10年(Rossi等，Amer.J Surgery，139：554(1980)；Samaan等，J Clin.Endocrinol.Metab.，67：801(1988)；Schroder等，Cancer，61：806(1988)。这些病人剩下不多的治疗机会(Principles and Practice of Oncology，DeVita，Hellman和Rosenberg(编辑)，纽约：JB Lippincott Co.1333-1435(1989)；Cance等，Current Problems Surgery，22：1(1985))。化疗价值不大而放疗仅可用于控制局部疾病(Cance等；Tubiana等，Cancer，55：2062(1985))。因而，需要新的治疗形式以控制这种疾病。
一种对癌症治疗和诊断有用的方法包括利用靶向抗体直接向肿瘤位点递送治疗剂和诊断剂。在过去的十年中，已经发展了许多肿瘤特异性抗体和抗体片段，以及将抗体偶联结合到如药物的治疗剂、毒素、放射性核素、如细胞因子的免疫调节剂和其它药剂上，并且将靶向肿瘤的偶联物对病人给药的方法。但是，用复合以鼠单克隆抗体(它是最常用的对于人的靶向抗体)的药物或放射性核素治疗的病人产生循环性的人抗小鼠抗体(HAMAs)，有些时候产生对偶联物的抗体部位的一般性的立即的III型过敏性反应。但是通过由许多不同的方法令这些鼠抗体的免疫原性更少已经使得这些问题最小化了，所述方法包括通过化学修饰靶向抗体，如通过将聚乙二醇偶联到靶向抗体上(聚乙二醇化)，或通过鉴定抗体中的抗原性位点并且随后将它去除来产生人源化的、嵌合的或人的抗体；例如，Fab′、F(ab)2和其它代替完整的IgG使用的抗体片段。此外，已经通过血浆去除将HAMA从血中除去来进行减少HAMA副作用的尝试。还使用抑制免疫力的技术来改善外源抗体的副作用，所述外源抗体足以允许与靶向药剂一起进行多次治疗
尽管有这些治疗进步，依然存在提供更有效的治疗表达CEA的癌症的方法的需要。本发明提供利用抗CEA抗体，如在美国专利号5,874,540和Hansen等，Cancer，71：3478(1993)中所介绍的III类抗CEAMAb鼠MN-14 MAb，和也是在美国专利号5,874,540中所介绍的III类抗CEA MAb的嵌合的和人源化的MN-14，以及在Primus等的美国专利号4,818,709中所定义的NP-4，在此将所有文献的全部内容引入作为参考。优选地，III类抗CEA MAb是人源化的，并且与一种治疗剂，特别是一种化疗剂相结合使用，以用最小的毒性产生对表达CEA的癌症有效的治疗。另外，这两种组分的分别给药提供了增强的结果以及适用于个别治疗方法的多用性和灵活性。
                        发明概述
本发明中所要保护的是治疗甲状腺髓样癌和非甲状腺髓样癌的组合物和方法。
本发明的第一个实施方案是一种至少包含至少一种III类抗CEA单克隆抗体(MAb)或其片段和至少一种治疗剂的组合物。优选地，抗体片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。还要优选地，III类抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，并且其中嵌合的MAb基本保留鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。仍然要优选地，III类抗CEA MAb或其片段为完全的人MAb，并且其中所述完全的人MAb基本保留鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
在本发明的一个实施方案中，III类抗CEA单克隆抗体或其片段优选为MN-14抗体或其片段。更加优选地，MN-14单克隆抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中MN-14抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；并且III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。还要优选地，MN-14单克隆抗体与CEA反应并且与正常的交叉反应抗原(NCA)和胎粪抗原(MA)不反应。最优选地，MN-14单克隆抗体或其片段是人源化的、嵌合的或完全的人MN-14抗体或其片段。
在一个优选的实施方案中，人源化MN-14抗体的轻链和重链可变区的构架区(FRs)包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。具体地，人源化MN-14抗体或其片段优选包含至少一个来自鼠MN-14抗体的相应FR的氨基酸，所述氨基酸选自图14A-C的鼠重链可变区(KLHuVhAIGA)的氨基酸残基24(A)、28(D)、30(T)、48(1)、49(G)、74(A)和94(S)。同样地，人源化的MN-14抗体或其片段还可以包含至少一个来自所述鼠MN-14轻链可变区的相应FR的氨基酸。仍然要优选地，人源化的MN-14抗体或其片段包含如图13A所示的轻链可变区，以及图14A-C中所示标明为KLHuVhAIGA的重链可变区，所述轻链可变区是由来自这些抗体的两个Vks的序列的组合组成的MN14VK和REIVK之间的中间序列。
在本发明的第一个实施方案中，治疗剂选自裸抗体、细胞毒性剂、药物、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂、免疫偶联物、激素或其组合，任选配制在一种可药用的载体中。这里还要求治疗剂不是达卡巴嗪(DTIC)。
本发明的第二个实施方案描述了一种治疗髓样以及非髓样甲状腺髓样癌的方法，包括同时或按顺序向受试者给予治疗有效量的III类抗CEA单克隆抗体或其片段以及至少一种治疗剂，并且任选配制在一种可药用的载体中。优选地，抗体片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。还要优选地，III类抗CEA单克隆抗体或其片段为人源化的，其中所述人源化的单克隆抗体基本保留了鼠III类抗CEA单克隆抗体的III类抗CEA结合特异性。还考虑了III类抗CEA单克隆抗体或其片段为嵌合的单克隆抗体，并且其中所述嵌合性单克隆抗体基本保留了鼠III类抗CEA单克隆抗体的III类抗CEA结合特异性。
在一个优选的实施方案中，III类抗CEA单克隆抗体或其片段为MN-14抗体或其片段。优选地，MN-14抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中所述MN-14单克隆抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；并且III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。还要优选地，MN-14单克隆抗体是人源化的、嵌合的或完全的人MN-14抗体，与CEA反应并且与正常的交叉反应抗原(NCA)和胎粪抗原不反应。还要优选地，MN-14抗体或其片段以100-600毫克/剂/注射的剂量进行给药。最为优选地，MN-14抗体或其片段以300-400毫克/剂/注射的剂量进行给药。
在本发明的方法中，所述人源化MN-14抗体或其片段的轻链和重链可变区的构架区(FRs)包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。更加优选地，包含至少一个来自所述鼠MN-14抗体的所述相应FR的氨基酸的人源化MN-14抗体或其片段选自如上面所提到的图14A-C的鼠重链可变区的氨基酸残基24、28、30、48、49、74和94。还要优选地，人源化的MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14轻链可变区的相应FR的氨基酸。最为优选地，人源化的MN-14抗体或其片段包含如图13A(中间序列)或图22A(hMN-14)或图16A所示的轻链可变区，以及图14A-C中所示标明为KLHuVhAIGA的或图15B(hMN-14)或图16B中所示的重链可变区。
本发明的方法还包括选自下组的治疗剂：与EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、VEGF或其它肿瘤血管发生抗原、Ga 733或其组合反应的人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段。类似地，这些方法可以包括同时或按顺序向受试者给予治疗有效量的第二人源化的、嵌合的、人或鼠单克隆抗体或其片段，所述单克隆抗体或其片段选自II类或III类抗CEA单克隆抗体或其片段。优选地，第二抗体或其片段既可以是裸的也可以是偶联到一种治疗剂上的。
在本文所述方法的一个优选实施方案中，治疗剂选自裸抗体、细胞毒性剂、药物、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂、CEA或非CEA抗体的免疫偶联物、激素或其组合，任选配制在一种可药用的载体中。这里还要求治疗剂不是达卡巴嗪(DTIC)。
优选地，治疗剂为一种选自药物或毒素的细胞毒性剂。例如，考虑药物具有选自抗有丝分裂剂、烷化剂、抗代谢物、抗血管生成剂、凋亡剂、生物碱、COX-2和抗生素及其组合的药理学特性。优选地，药物选自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环霉素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、抗代谢物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、铂配位化合物、长春花生物碱、取代脲、甲肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、拮抗剂、内皮他丁、紫杉醇、喜树碱、阿霉素和它们的类似物，及其组合。
当治疗剂为微生物的、植物或动物的毒素时，该药剂可以选自蓖麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、金葡菌肠毒素A、商陆抗病毒素、白树毒素(gelonin)、白喉毒素、假单胞菌外毒素和假单胞菌内毒素。
在本发明的方法中还考虑治疗剂为选自细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干扰素(IFN)、干细胞生长因子、红细胞生成素、血小板生成素及其组合的免疫调节剂。优选地，淋巴毒素为肿瘤坏死因子(TNF)，所述造血因子为白介素(IL)，所述集落刺激因子为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，所素干扰素为干扰素α、β或γ，所述干细胞生长因子指定为″S1因子″。还要优选地，免疫调节剂包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ干扰素、TNF-α或其组合。还要优选地，治疗剂为一种为色素原或染料的光敏治疗剂或者一种为达卡巴嗪的烷化剂。
还要优选地，治疗剂为具有20-10,000keV的能量的放射性核素。优选地，该放射性核素选自125I、131I、90Y、88Y、225Ac、177Lu、188Re、186Re及其组合。
                        附图简述
图1.在单独以hMN-14、单独以DTIC或以hMN-14和DTIC联合治疗之后比较肿瘤大小的图表。图1A显示以25和100μg/剂单独或与250μg hMN-14抗体一起给药的DTIC。图1B显示以50和75μg/剂单独或与100μg hMN-14抗体一起给药的DTIC。
图2.以131I和90Y-MN-14进行放射免疫治疗(RAIT)之后比较肿瘤大小的图表。
图3.比较几种化疗药物在患有TT的小鼠中对肿瘤大小治疗效果的图表。
图4.比较RAIT和90Y标记的抗CEA单克隆抗体MN-14的联合治疗与在RAIT之后24小时开始的4种药物的组合对于肿瘤大小的治疗效果的图表。
图5.比较RAIT加上DTIC和RAIT加上阿霉素和DTIC在患有TT小鼠中的效果的图表。
图6.比较在患有TT的异种移植小鼠中裸hMN-14治疗方案的效果的图表。动物被给予TT细胞的皮下注射，并且被留下不进行治疗(A)或在第1天(B)或更迟的第11天(C)给予静脉内注射0.5mg hMN-14。
图7.比较人源化的或鼠MN-14抗体在治疗甲状腺髓样癌中的效果。给予动物皮下注射TT细胞，并且留下不进行治疗或在之后的第1天给予静脉内注射MAb(0.5mg)。
图8.比较不同的hMN-14剂量在治疗甲状腺髓样癌中的效果。在皮下注射TT细胞之后的第1天，给予静脉内注射逐渐增多的hMN-14剂量。
图9.在患有TT的裸鼠中比较不同治疗时间的效果的图表。
图10.比较用hMN-14加上DTIC、单独的DTIC、单独的hMN-14治疗患有TT的裸鼠和未治疗小鼠的图表。
图11.图11A和11B显示鼠MN-14的可变区重链(VH)的共有DNA序列以及由该DNA序列编码的氨基酸序列。CDRs被括于框中。
图12.图12A和12B显示鼠MN-14的可变区轻链(VK)的共有DNA序列以及由该DNA序列编码的氨基酸序列。CDRs被括于框中。
图13.图13A和13B显示鼠MN-14的可变区与人可变区NEWM VH和REI VK(图13A)以及人KOL VH区(图13B)的比对。CDRs括入框中，掺入人源化VH的鼠VH FRs以它们根据Kabat等，SEQUENCES OFPROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST，U.S.Government PrintingOffice，Washington，D.C.，1987的计数系统的位置进行标记。包括于KLHuVH中的CDRs之外的鼠残基用一个实心圆指示。
图14.图14A-14C显示在鼠和人源化MN-14 VH f构架残基(FR)之间的氨基酸序列的比较。只显示不同于小鼠的人FR残基。NEWM和KOL的CDRs也没有显示。在各个FRs中的氨基酸取代的区域以粗体进行突出，取代位置根据Kabat等的编号系统进行指示。将3个CDR括入框中。
图15.图15A和图15B显示人REI和KOL抗体的Vk和VH区的人、鼠和人源化序列分别与鼠和人源化MN-14的比较。将图15A中REIVk的人序列与鼠和人源化MN-14 Vk序列比较。实心圆指示由人REI Vk序列保留的序列。将CDRs括入框中。将图15B中KOL VH的人序列与鼠和人源化MN-14 VH序列比较。实心圆指示由人REI Vk序列保留的序列。将CDRs括入框中。
图16.图16A和16B显示hMN-14的Vk、可变轻链和VH、可变重链序列，所述hMN-14是一种人源化的III类抗CEA抗体。CDR区以粗体和下划线显示。氨基酸残基和核苷酸按顺序编号。轻链可变区显示于图16A中，而重链可变区显示于图16B中。
            优选实施方案的详细描述
1.概述
本发明提供治疗的方法，其中在治疗期中按顺序地或同时地给予裸的III类抗CEA抗体或其片段以及至少一种治疗剂。该方法对于治疗甲状腺髓样癌特别有用，但是对于治疗非甲状腺髓样癌、结肠直肠癌、肝细胞癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、头和颈癌、膀胱癌、子宫癌和卵巢癌以及甚至不高水平表达CEA的癌症也令人惊奇地有用。例如，考虑在以至少100ng/克组织的水平表达CEA的癌症中进行治疗。本方法进一步提供包含III类抗CEA抗体或抗体片段的组合物，其中抗体和治疗剂彼此没有偶联或连接。如本文所用的，短语“III类抗CEA”抗体或抗体片段意为结合CEA抗原(或CD66e)的抗体或片段并且与正常的交叉反应抗原(NCA)、胎粪抗原(MA)、粒细胞和CD66a-d不反应(见，Primus等，美国专利号4,818,709，引入作为参考)。裸III类抗CEA抗体或其片段可以是人源化的、嵌合的、人或鼠抗体。在一个优选的实施方案中，裸III类抗CEA抗体或其片段为人源化的MN-14抗体或其片段。
令人惊奇的是，本文所述的组合物和方法还对于治疗非甲状腺髓样癌，包括结肠直肠癌、胰腺癌、乳癌、肺癌、肝细胞癌、膀胱癌、头和颈癌以及卵巢癌有用。由于这类形式的癌症比甲状腺髓样癌表达较少的CEA，所以出人意料的是裸III类抗CEA抗体与治疗剂的组合会对治疗非甲状腺髓样癌有用。
裸III类抗CEA抗体杀死肿瘤细胞的机制并不是确定地已知的并且可能包括几种机制。假设单独的裸抗体或与治疗剂组合可以通过阻断其各自的抗原的生物学活性或通过刺激天然免疫功能，如抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性(ADCC)或补体介导的溶胞作用来影响肿瘤的生长。此外，单独的裸抗体或与治疗剂结合可以通过抑制细胞生长和细胞周期进程、诱导细胞凋亡、抑制血管发生、抑制转移活性和/或影响肿瘤细胞粘附来治疗和控制癌症。事实上，本发明的抗CEA抗体或其片段可以在治疗转移灶中比治疗原发癌症更为有效，因为转移灶可能对于肿瘤细胞粘附的拮抗剂更为敏感。本治疗方法提供了一种治疗计划，它可以通过允许对抗体和一种或多种不同治疗剂进行滴定提供有效治疗方案来进行优化以提供对个体病人最大的抗肿瘤活性。
在本发明的一个方面中，裸的III类抗CEA抗体或其片段和治疗剂可以补充至少一种额外的治疗剂，如裸的或偶联的人源化的、鼠的、嵌合的或人的抗体、融合蛋白或其片段。例如，另一种非阻断性的并且不结合粒细胞或CD66a-d的III类CEA抗体或抗体片段；非阻断性的并且不结合粒细胞或CD66a-d的II类抗CEA抗体或抗体片段；或针对与不同癌症相关的表位或抗原的抗体，可以被用作治疗剂来与优选的人源化MN-14抗体一起进行联合治疗。如下面更加详细介绍的，这种额外的抗体、融合蛋白或其片段可以结合CEA或另一种与癌症或肿瘤相关的抗原。
2.定义
在接下来的介绍中，使用了许多术语并且提供下列定义以帮助理解本发明。
如本文所述的， 抗体是指一种全长的(即，天然存在的或由正常的免疫球蛋白基因片段重组过程所形成的)免疫球蛋白分子(例如，一种IgG抗体)或免疫球蛋白分子的一种免疫活性(即，特异性结合)部分，比如一种抗体片段。
“ 抗体片段”是抗体的一部分，如F(ab’)2、F(ab)2、Fab’、Fv、scFv(单链Fv)等。不考虑结构，抗体片段与被完整抗体识别的相同抗原结合。
术语“抗体片段”还包括任何一种合成的或遗传工程改造过的蛋白，它通过与特异性抗原结合形成复合物而像抗体一样发挥作用。例如，抗体片段包括由可变区组成的分离片段，如由重链和轻链可变区组成的“Fv”片段、其中轻链和重链可变区通过肽键进行连接的重组的单链多肽分子(“sFv蛋白”)，和由模拟高变区的氨基酸残基组成的最小识别单位。Fv片段可以以不同方式进行构建以产生多价体的和/或多特异性结合的形式。对于前者多价体来说，它们与针对CEA表位与一个以上的结合位点反应，而对于多特异性形式来说，结合一个以上的表位(既可以是CEA的表位，也可以是针对CEA的和一种不同抗原的)。
如本文所用的，术语 抗体组分包括完整抗体、融合蛋白及其片段。
裸抗体通常是一种不与治疗剂偶联的完整抗体。之所以如此是因为抗体分子的Fc部分提供效应物或免疫功能，如补体固定和ADCC(抗体依赖的细胞毒性)，它使可以导致细胞裂解的机制得以实施。然而，Fv部分可能不是抗体的治疗功能所必需的，但是其它机制，如凋亡、抗血管发生、抗转移活性、抗粘附活性如对异型或同型粘附的抑制，和对信号传递途径的干扰可以得以发挥作用并且干扰疾病的进程。裸抗体包括多克隆和单克隆抗体及其片段，包括鼠抗体以及某些重组抗体，如嵌合的、人源化的或人抗体及其片段。如在本发明中所定义的，“裸的”是与“未偶联的”同义的，并且意为不与它一起给药的治疗剂相连接或偶联。
嵌合抗体是一种重组的蛋白，它含有抗体重链和轻链的可变区，包括来源于一个物种，优选为啮齿动物的抗体的互补决定区(CDRs)和可变结构域，而抗体分子的恒定区则来源于人抗体的那些。对于兽医应用，嵌合抗体的恒定区可以来源于其它物种，如猫或狗。
人源化抗体是一种重组蛋白，其中来源于一个物种的抗体，例如啮齿类的抗体的CDRs，被从啮齿类抗体的重链和轻链中转移到人重链和轻链可变区中。抗体分子的恒定区来源于人抗体的那些。
人抗体是一种由转基因小鼠所获得的抗体，它已经进行“工程化”以产生反应于抗原性侵袭的特异性人抗体。在本技术中，将人重链和轻链基因座元件导入源自胚胎干细胞系的小鼠品系中，所述胚胎干细胞系包含靶向的内源重链和轻链位点的破坏。转基因小鼠可以合成对人抗原特异的人抗体，并且该小鼠可以用于生产分泌人抗体的杂交瘤。Green等，Nature Genet.7：13(1994)，Lonberg等，Nature368：856(1994)，和Taylor等，Int.Immun.6：579(1994)介绍了从转基因小鼠中获得人抗体的方法。通过基因或染色体转染方法以及噬菌体展示技术还可以构建完全的人抗体，所有这些技术都是本领域已知的。见例如，McCafferty等，Nature 348：552-553(1990)关于从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变区的基因所有组成成分体外生产人抗体或其片段的描述。在本技术中，将抗体可变区基因框内克隆入丝状噬菌体的大的或小的外壳蛋白基因，并且在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。由于丝状噬菌体颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，基于该抗体功能特性的筛选还导致对编码表现那些特性的抗体基因的筛选。以此方式，噬菌体模拟B细胞的一些特性。噬菌体展示能够以许多形式进行，关于它们的综述，见例如Johnson和Chiswell，Current Opinion in Structural Biology 3：5564-571(1993)。
人抗体还可以通过体外激活的B细胞生产。见美国专利号5,567,610和5,229,275，将它们的全部内容引入作为参考。
治疗剂是一种单独地、与抗体组分即抗体或抗体片段，或其亚片段一起同时或按顺序给药的分子或原子，在疾病的治疗中有用。治疗剂的例子包括抗体、抗体片段、免疫偶联物、药物、细胞毒性剂、毒素、核酸酶、激素、免疫调节剂、螯合剂、硼化合物、光敏剂或染料、放射性同位素或放射性核素、免疫偶联物或其组合。
免疫偶联物是一种与治疗剂偶联的抗体组分。合适的治疗剂如上所述。
如本文所用的，术语 抗体融合蛋白是一种重组生产的抗原结合分子，其中两个或更多的相同或不同的天然抗体、单链抗体或具有相同或不同特异性的抗体片段部分相连。III类抗CEA融合蛋白包含至少一个CEA结合位点。优选地，III类抗CEA融合蛋白是MN-14融合蛋白。
融合蛋白的价态表明融合蛋白的结合臂或位点具有抗原或表位；即单价、二价、三价或多价的。抗体融合蛋白的多价性意指可以利用在与抗原结合中的多重相互作用，因而增强与抗原或不同抗原结合的亲和力。特异性表明抗体融合蛋白能够结合多少种不同类型的抗原或表位；即，单特异性的、双特异性的、三特异性的、多特异性的。利用这些定义，天然抗体，例如IgG是二价的，因为它具有两个结合臂，但是为单特异性的，因为它结合一种类型的抗原或表位。一种单特异性的多价的融合蛋白具有一个以上的对于相同抗原或表位的结合位点。例如，单特异性的双抗体是具有与相同抗原反应的两个结合位点的融合蛋白。融合蛋白可以包含不同抗体组分或相同抗体组分的多个拷贝的多价或多特异性组合。融合蛋白还可以包含治疗剂。
免疫调节剂是在本发明中所定义的当呈现、改变、抑制或刺激身体免疫系统时的治疗剂。一般地，在本发明中有用的免疫调节剂刺激免疫细胞增殖或在免疫反应级联中被激活，如巨噬细胞、B细胞和/或T细胞。如本文所述的免疫调节剂的一个例子是一种细胞因子，它是一种细胞群落(例如，激发的T淋巴细胞)在接触特异性抗原之后释放的大约5-20kDa的可溶性小蛋白质，它作为细胞之间的胞间介质发挥作用。如熟练的技术人员会理解的，细胞因子的例子包括淋巴因子、单核因子、白介素和几种相关的信号传递分子，如肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素。趋化因子是细胞因子的一个亚类。某些白介素和干扰素是刺激T细胞或其它免疫细胞增殖的细胞因子的例子。
单克隆抗体，包括嵌合的、人源化的和人抗体的制备
单克隆抗体(MAbs)是特定抗原的抗体的同类群体并且该抗体仅包含一种类型的抗原结合位点并且只结合抗原决定簇上的一个表位。通过本领域技术人员所公知的方法可以获得特定抗原的啮齿类单克隆抗体。见，例如，Kohler和Milstein，Nature256：495(1975)，和Coligan等(编辑)，CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY，VOL.1，2.5.1-2.6.7页(John Wiley和Sons 1991)[下文中″Coligan″]。简言之，单克隆抗体可以通过用含有抗原的组合物注射小鼠、通过移除血清样品来检验抗体产品的存在、移除脾以获得B淋巴细胞、将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞相融合来产生杂交瘤、克隆该杂交瘤、选择产生针对该抗原的抗体的阳性克隆、培养产生针对该抗原的抗体的克隆以及从杂交瘤培养物中分离抗体而获得。
通过许多充分建立的技术可以从杂交瘤培养物中分离和纯化MAbs。这种分离技术包括使用蛋白-A琼脂糖凝胶的亲和层析法、大小排阻层析法和离子交换层析法。参见，例如，Coligan于2.7.1-2.7.12页和2.9.1-2.9.3页。还参见Baines等，“免疫球蛋白G(IgG)的纯化”，分子生物学的方法，第10卷，79-104页(The Humana Press，Inc.1992)。
通过公知的抗体生产方法来生产针对肽骨架的抗体。例如，注射完全弗氏佐剂中的免疫原，如(肽)n-KLH，其中KLH是匙孔血蓝蛋白，n＝1-30，随后向免疫感受态动物中注射两次相同的悬浮于不完全弗氏佐剂中的免疫原。最后给予动物静脉内注射强化抗原，接着在三天后收集脾细胞。随后将收集的脾细胞与Sp2/0-Ag14骨髓瘤细胞相融合并且利用直接结合ELISA对得到的克隆的培养物上清液的抗肽反应性进行分析。利用起始免疫原的肽片段可以分析产生抗体的良好特异性。利用自动肽合成仪可以轻易地制备这些片段。对于抗体生产来说，分离酶缺陷的杂交瘤以能够筛选融合的细胞系。这种技术还能够用于针对一种或多种包含联结子的螯合物，例如In(III)-DTPA螯合物来培育抗体。针对In(III)-DTPA的单克隆小鼠抗体是已知的(授予Barbet的美国专利号5,256,395)。
生产抗体的另一种方法是通过在转基因家畜的乳中进行生产。见，例如，Colman，A.，Biochem.Soc.Symp.，63：141-147，1998；美国专利5,827,690，在此将二者的全部内容引入作为参考。制备两种分别含有编码成对的免疫球蛋白重链和轻链的DNA片段的构建体。将DNA片段克隆入含有一个启动子序列的表达载体中，所述启动子序列优选在哺乳动物上皮细胞中进行表达。例子包括但不限于来自兔、牛和羊酪蛋白基因、牛α-乳球蛋白基因、羊β-乳球蛋白基因和小鼠乳清酸蛋白基因的启动子。优选地，插入的片段在来自哺乳动物特异性基因的同源基因组序列3’端的侧翼。这提供了多聚腺苷酸化位点和转录稳定序列。将表达盒共注入受精的哺乳动物卵的前核中，随后将该卵移植入受体雌体的子宫中并且让其孕育。出生后，通过Southern分析就两种转基因的存在对后代进行筛选。抗体要存在，重链和轻链基因都必须同时在相同的细胞中表达。利用本领域已知的标准免疫学方法就抗体或抗体片段的存在和功能性对转基因雌性动物的乳汁进行分析。可以利用本领域已知的标准方法从乳汁中纯化抗体。
在开始培育针对免疫原的抗体之后，可以将单克隆抗体的可变基因从杂交瘤细胞中进行克隆、测序并且随后通过重组技术进行制备。例如，出版物Orlandi等，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 86：3833(1989)介绍了克隆鼠免疫球蛋白可变区的一般方法，将该文献的全部内容引入作为参考。鼠抗体和抗体片段的人源化和嵌合化是本领域技术人员所公知的。嵌合抗体是一种重组蛋白，它包含包括CDRs的可变区，所述CDRs源自动物的一个物种，如一种啮齿类抗体，而抗体分子的其它部分，即恒定区则源自人抗体。源自人源化和嵌合的单克隆抗体的抗体组分的使用减少了与鼠恒定区免疫原性相关联的潜在的问题。构建嵌合抗体的技术是本领域技术人员所公知的。作为一个例子，Leung等，Hybridoma 13：469(1994)，描述了他们是如何通过将编码LL2单克隆抗体的Vk和VH结构域的DNA序列分别与人k和IgG1恒定区结构域组合来生产LL2嵌合体的，所述LL2单克隆抗体是一种抗CD22抗体。
还可以通过用一个或多个不同的人FR替换嵌合的MAb的可变区中的鼠FR的序列来将嵌合的单克隆抗体(MAb)人源化。具体地，通过将小鼠互补决定区由小鼠免疫球蛋白的重链和轻链可变区转移到人可变区中，并且随后取代鼠对应部分的构架区中的人残基来生产人源化的单克隆抗体。由于简单地将小鼠CDRs转移到人FRs中经常导致抗体亲和性的减弱甚至是丧失，因此可能需要额外的修饰以便恢复鼠抗体的原始亲和性。这可以通过将FR区中的一个或多个人残基用它们的鼠的对应物进行替换来实现，以便获得一种对其表位具有良好的结合亲和性的抗体。见，例如，Tempest等，Biotechnology 9：266(1991)和Verhoeyen等，Science 239：1534(1988)。
在一个优选的实施方案中，在人源化的抗CEA抗体或其片段中的一些人残基被它们的鼠对应物所替换。此外，已知嵌合的抗CEA与其鼠的对应物显示相似的结合亲和性，在人源化抗CEA MAb的起始形式中的缺陷性设计，如果有的话，可以通过将嵌合的抗CEA的轻链和重链与人源化形式的那些相混合和匹配而进行鉴定。优选地，人源化的抗CEA抗体为人源化的MN-14抗体，它的制备和序列在U.S.5,874,540中进行了介绍，将它的全部内容引入作为参考。尽管两种人抗体REI和NEWM是用于制备人源化的和嵌合的MN-14优选的抗体，还可以将来自2种或多种不同人抗体的构架序列的组合用作VH和VK。Jones等，Nature321：522(1986)，Riechmann等，Nature 332：323(1988)，Verhoeyen等，Science239：1534(1988)，Carter等，Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 89：4285(1992)，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12：437(1992)，和Singer等，J Immun.150：2844(1993)介绍了人源化MAbs的生产，特此将每一篇文献都引入作为参考。另外，针对一个具体表位的人源化的、嵌合的和人MAbs的亲和性可以通过CDRs的诱变得以提高，从而较低剂量的抗体与较高剂量的突变前较低亲和力的MAb一样有效。参见例如，WO0029584A1。
在另一个实施方案中，本发明的抗体为人III类抗CEA单克隆抗体。可以从转基因非人动物中获得抗CEA MAb或另一种人抗体。见，例如，Mendez等，Nature Genetics，15：146-156(1997)和美国专利号5,633,425，将它们的全部内容引入作为参考。例如，可以从具有人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中回收人抗体。优选地，抗CEA抗体为MN-14抗体。通过灭活内源免疫球蛋白基因和导入人免疫球蛋白基因座来对小鼠体液免疫系统进行人源化。人免疫球蛋白基因座非常复杂并且包含大量的不连续片段，它总共占了人基因组的大约0.2％。为了确保转基因小鼠能够产生足够的抗体组成成分，人重链和轻链基因座的大片段必须被导入小鼠基因组中。这通过一个逐步的过程得以实现，开始是形成在种系构型中含有人重链或轻链免疫球蛋白基因座的酵母人工染色体(YACs)。由于每个插入片段的大小为大约1Mb，所以YAC构建需要免疫球蛋白基因座重叠片段的同源重组。通过融合含有YAC的酵母球芽和小鼠胚胎干细胞将两种YAC分别导入融合小鼠，所述两种YAC中的一种含有重链基因座，另一种含有轻链基因座。随后将胚胎干细胞的克隆微注射入小鼠胚泡中。对得到的嵌合雄性就其通过它们的胚系转运YAC的能力进行筛选，并且与鼠抗体生产缺陷的小鼠一杂交。杂交两种转基因品系，一种含有人重链基因座而另一种含有人轻链基因座，产生了反应于免疫而生产人抗体的后代。
还可以通过微细胞介导的染色体转移(MMTC)来将未重排过的人免疫球蛋白基因导入小鼠胚胎干细胞中。见，例如，Tomizuka等，Nature Genetics，16：133(1997)。在该方法中含有人染色体的微细胞与小鼠胚胎干细胞相融合。转移的染色体被稳定地保持，并且成年嵌合体显示合适的组织特异性表达。
作为一种选择，本发明的抗体或抗体片段可以源于分离自免疫球蛋白组合文库的人抗体片段。见，例如，Barbas等，METHODS：ACompanion to Methods in Enzymology 2：119(1991)，和Winter等，Ann.Rev.Immunol.12：433(1994)，将它们引入作为参考。利用噬菌体展示通过工程化并且在大肠杆菌(E.Coli)中表达抗体片段可以克服与由B细胞无限增殖化产生单克隆抗体相关联的许多困难。为了确保高亲和性单克隆抗体的回收，免疫球蛋白组合文库必须包含大的全部组成成分。一种典型的策略利用由免疫过的小鼠的淋巴细胞或脾细胞获得的mRNA利用反转录酶合成cDNA。通过PCR分别扩增重链和轻链基因并且连接入噬菌体克隆载体。产生两种不同的文库，一种含有重链基因，一和含有轻链基因。从每种文库中分离噬菌体DNA，将重链和轻链序列连接在一起并且进行包装以形成组合文库。每个噬菌体都包含重链和轻链cDNAs的随机配对，并且在大肠杆菌的感染之后指导感染细胞中抗体链的表达。为了鉴定识别目标抗原的抗体，将噬菌体文库涂平板，将存在于噬斑中的抗体分子转移至滤器。将滤器与放射性标记的抗原一起温育并且随后进行洗涤以除去多余的未结合的配体。在放射自显影照片上的放射性斑点鉴定了含有结合该抗原的抗体的斑。可以例如，从STRATAGENE Cloning Systems(LaJolla，CA)中获得对于生产人免疫球蛋白噬菌体文库有用的克隆和表达载体。
在一个实施方案中，如在Hansen等，美国专利号5,874,540；Hansen等，Cancer，71：3478(1993)；Primus等，美国专利号4,818,709，和Shively等，美国专利号5,081,235中所介绍的来生产本发明的抗体，将这些文献的全部内容引入作为参考。
抗体片段的生产
本发明考虑III类抗CEA抗体，优选MN-14抗体的片段的应用。本发明的III类抗CEA抗体或其片段并不结合粒细胞或66a-d。识别特异性表位的抗体片段可以通过已知的技术进行生产。例如，可以通过抗体的蛋白水解或通过编码该片段的DNA在大肠杆菌中的表达来制备抗体片段。抗体片段是一种抗体的抗原结合部分，如F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv、scFv等，可以通过传统方法对完整抗体进行胃蛋白酶和木瓜蛋白酶消化而获得。
例如，可以通过用胃蛋白酶进行酶切以提供称作F(ab′)2的100Kd的片段来产生抗体片段。该片段可以利用一种硫醇还原剂，以及任选地一种巯基的封闭基团进一步切割，以产生50Kd的Fab′单价片段。或者，利用木瓜蛋白酶的酶切直接产生两个单价Fab片段和一个Fc片段。Goldenberg，美国专利号4,036,945和4,331,647以及包含其中的参考文献对这些方法进行了介绍，这里将这些专利的全部内容引入作为参考。还见Nisonoff等，ArchBiochem.Biophys.89：230(1960)；Porter，Biochem.J 73：119(1959)，Edelman等，inMETHODS IN ENZYMOLOGY VOL.1，422页(学术出版社1967)，和Coligan于2.8.1-2.8.10和2.10.-2.10.4页。
还可以使用其它切割抗体的方法，如重链的分离以形成单价轻-重链片段，进一步切割片段，或可以使用其它酶学的、化学的或遗传学的技术，只要片段能结合被完整抗体所识别的抗原。
例如，Fv片段包含VH和VL链的缔合体。如在Inbar等，Proc.Nat′l.Acad.Sci.U.S.A.69：2659(1972)中所述，这种缔合可以是非共价的。或者，可变链可以通过分子间二硫键连接或通过化学物质如戊二醛进行交联。见，例如，Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12：437(1992)。
优选地，Fv片段包含通过肽键连接的VH和VL链。通过构建一种含有通过寡核苷酸连接的编码VH和VL区的DNA序列的结构基因来制备这些单链抗原结合蛋白质(sFv)。将该结构基因插入一种表达载体中，随后将所述的表达载体导入一种宿主细胞，如大肠杆菌中。重组的宿主细胞合成一种单链多肽，在两个V区之间有一个连接肽。Whitlow等，Methods：A Companion to Methods in Enzymology，2：97(1991)介绍了生产sFvs的方法。还见Bird等，Science 242：423(1988)，Ladner等，美国专利号4,946,778；Pack等，Bio Technology 11：1271(1993)和Sandhu，同上。
抗体片段的另一种形式是编码单个互补决定区(CDR)的肽。CDR是抗体可变区的一段，它在结构上与抗体结合的表位相互补并且比可变区的其余部分更加易变。因此，CDR一些时候称为高变区。一个可变区包含三个CDRs。CDR肽可以通过构建编码目标抗体的CDR的基因而获得。这种基因例如是通过利用聚合酶链式反应以合成来自抗体生产细胞的RNA的可变区而进行制备的。参见例如，Larrick等，Methods：A Companion to Methods in Enzymology 2：106(1991)；Courtenay-Luck，″Genetic Manipulation of MonoclonalAntibodies，″in MONOCLONAL ANTIBODIES：PRODUCTION，ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION，Ritter等(编辑)，166-179页(剑桥大学出版社1995)；和Ward等，″GeneticManipulation and Expression of Antibodies，″in MONOCLONALANTIBODI ES：PRINCIPLES AND APPLICATIONS，Birch等(编辑)，137-185页(Wiley-Liss，Inc.1995)。
还可以使用其它切割抗体的方法，如分离重链以形成单价轻-重链片段，进一步切割片段，或其它酶学的、化学的或遗传学的技术，只要片段能结合被完整抗体所识别的抗原。
治疗用的人源化、嵌合的和人抗CEA抗体
本发明中所介绍的是利用鼠、嵌合的、人源化的和人III类抗CEA抗体或其片段进行治疗的组合物和方法。优选地，III类抗CEA抗体或其片段为MN-14抗体或其片段。本发明的抗体可以用于治疗甲状腺髓样癌(MTC)，以及非MTC的表达CEA的癌症。例示性的非MTC的表达CEA的癌症包括结肠直肠癌、胰腺癌、肝细胞癌、胃癌、肺癌、头颈癌、膀胱癌、子宫癌、乳癌和卵巢癌。
                    组合物
本文考虑的是含有至少一种III类抗CEA单克隆抗体(MAb)或其片段以及至少一种治疗剂的组合物，所述抗体和治疗剂彼此不相偶联，并且因而作为每种组分的非偶联形式存在于组合物中。在包含一种以上的抗体或其片段，如第二种III类抗CEA抗体的组合物中，该第二种抗体为非阻断性的(即，不会阻断第一种III类抗CEA抗体或抗体片段的结合)。
在一个实施方案中，III类抗CEA单克隆抗体或其片段是人源化的、嵌合的或完全的人的，其中人源化的、嵌合的，或完全的人MAb基本上保持鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
在一个优选的实施方案中，III类抗CEA单克隆抗体或其片段是MN-14抗体或其片段。优选地，MN-14单克隆抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中所述MN-14单克隆抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；并且所述III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。还要优选地，MN-14单克隆抗体与CEA反应并且与正常的交叉反应抗原(NCA)和胎粪抗原(MA)不反应。但是，针对这些交叉反应性决定簇的抗体可以用于和CEA特异性抗体一起进行的联合治疗，如与MN-14单克隆抗体组合。
在本发明的另一个实施方案中，MN-14单克隆抗体或其片段是人源化的或完全的人MN-14抗体或其片段。人源化MN-14抗体或其片段的轻链和重链可变区的构架区(FRs)优选包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。还要优选地，人源化MN-14抗体或其片段包含鼠MN-14抗体的相应FR的氨基酸，选自如上面所提到的图14A-C或图15B或图16B的鼠重链可变区(KLHuVhAIGA)的氨基酸残基24、28、30、48、49、74和94。优选的人源化重链可变区的氨基酸序列还在Hansen等，美国专利号5,874,540中给出，将其全部内容引入作为参考。还要优选地，人源化重链可变区包含图14A-C中所示的氨基酸序列，表示为KLHuVhAIG和KLHuVhAIGAY。在另一个实施方案中，人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自鼠MN-14轻链可变区的相应FR的氨基酸。最为优选地，人源化的MN-14抗体或其片段包含图13A或图15A或图16A的轻链可变区。本发明的另一个实施方案是一种包含嵌合MN-14单克隆抗体或其片段以及至少一种治疗剂的组合物，所述抗体和治疗剂彼此不相偶联，并且因而作为每种组分的非偶联形式存在于组合物中。优选地，嵌合MN-14抗体或其片段包含图13A或图15A或图16A中所示的鼠MN-14轻链可变区的CDRs以及如图14A-C或图15B或图16B中所示的鼠MN-14重链可变区的CDRs。
本文还介绍了一种包含裸的鼠、人源化、嵌合或人的III类抗CEA抗体或其片段和一种治疗剂，以及第二种裸的或偶联的III类抗CEA抗体或其抗体片段的组合物，所述第二种抗体或其抗体片段是非阻断性的，即，不会阻断第一种III类抗CEA抗体或其片段的结合，并且在一种可药用的载体中配制。换句话说，III类抗CEA抗体或其片段对于彼此都是非阻断性的，因而允许抗体或其片段结合CEA(66e)。此外，本发明的III类CEA抗体或其抗体片段，以及用于联合治疗中的那些，并不结合粒细胞或CD66a-d。与本发明的抗体片段的裸III类抗CEA抗体一起作为裸抗体或作为免疫偶联物的组分适于联合治疗的其它III类抗体包括在Kuroki等，JP R Cancer Res.，78(4)：386(1987)和Hammarstrom(Cancer Res.52(8)：2329(1992))中所述的非阻断性抗体或其片段，它也不结合粒细胞或CD66a-d。
此外，其它的抗CEA抗体，如II类抗体，可以以裸的或偶联的形式用于与本发明的III类抗CEA抗体组合。这种可以用作联合治疗的II类抗体或抗体片段是非阻断性的并且不结合粒细胞或CD66a-d。例如，一种或多种嵌合的或人源化的II类抗CEA抗体或其片段，如MN-6或NP-3，可以与本发明的一种III类抗CEA抗体或其片段组合。这两种抗体不与CD66a-d或粒细胞反应(Hansen等，Cancer 1993 Jun1；71(11)：3478-85)。许多出版物公开了识别CEA和CEA基因家族不同成员的MAbs，如Thompson等，J Clin.Lab.Anal.5：344(1991)；Kuroki等，J BioL Chem.266：11810(1991)；Nagel等，Eur.JBiochem.214：27(1993)；Skubitz等，J Immunol.155：5382(1995)；Skubitz等，J.Leukoc.Biol.60：106(1996)；和Chen等，Proc.Natl.Acad.Sci.93：14851(1996)。
而且，第二抗体或抗体片段是未偶联(裸的)的或与至少一种治疗剂(免疫偶联物)偶联的。可以通过间接地将一种治疗剂偶联至一种抗体组分而制备免疫偶联物。在Shih等，Int.R Cancer，41：832(1988)；Shih等，Int.J Cancer，46：1101(1990)；和Shih等，美国专利号5,057,313中介绍了一般的技术。一般的方法涉及将一种具有氧化的糖部分的抗体组分与一种载体聚合物反应，所述载体聚合物具有至少一种游离的胺功能并且加载了多种药物、毒素、螯合剂、硼附加物或其它治疗剂。这种反应导致起始的Schiff碱(亚胺)键，它可以通过还原成仲胺进行稳定化以形成最终的偶联物。优选地，用于治疗的组合物中的抗CEA抗体或其片段为MN-14抗体或其片段。更加优选地，MN-14抗体或其片段是人源化的。
本发明还考虑一种含有裸的人源化的、嵌合的、鼠的或人的III类抗CEA抗体或其片段和一种治疗剂，以及一种例如偶联的或非偶联的抗体或其片段的第二治疗剂，所述抗体不是II类或III类抗CEA抗体。在一个实施方案中，第二治疗剂(或第二种抗体或其片段)是非偶联的(裸的)或偶联到至少一种治疗剂上。适于联合治疗的非II类或III类抗CEA抗体及其片段包括，但不限于，癌相关抗体及其片段。癌相关抗体和抗体片段的例子结合EGP-1、BGP-2(如17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、VEGF或其它肿瘤血管发生抗原、Ga 733或其组合。如上面所讨论的，不结合CD66a-d或粒细胞的非阻断性的II类和III类抗CEA MAbs也可以与III类CEA抗体组合使用。适于联合治疗的其它抗体和抗体片段也包括靶向癌基因标记或产物的那些，或针对肿瘤脉管系统标记，如血管发生因子、胎盘生长因子(P1GF)的抗体，和针对某些免疫反应调节剂的抗体，如针对CD40的抗体。
                        方法
本发明中还介绍了治疗甲状腺髓样癌和非甲状腺髓样癌的方法。非甲状腺髓样癌包括结肠直肠癌和任何其它表达CEA的肿瘤，如胰腺癌、乳癌、肝细胞癌、卵巢癌，某些类型的表达可变数量的CEA的肺癌、头颈癌、子宫内膜癌、膀胱癌和肝癌。在这些类型的癌症中CEA的水平比存在于甲状腺髓样癌中的要低得多，但是必要的是CEA的水平足够高从而III类抗CEA疗法提供有效的治疗。正常的结肠粘膜层具有大约500ng/克但是以100ng/克组织的水平表达CEA的癌适于用本发明所述的方法进行治疗。
例如，此处考虑一种治疗甲状腺髓样癌或非甲状腺髓样癌的方法，包括向受试者同时或按顺序地给予治疗有效量的III类抗CEA单克隆抗体或其片段和至少一种治疗剂，并且任选在一种可药用的载体中进行配制。优选地，III类抗CEA单克隆抗体或其片段是嵌合的、鼠的、人源化的或人的，其中嵌合的、人源化的、鼠的或人的III类抗CEA MAb基本上保留了鼠MAb的III类抗CEA抗体的结合特异性。更加优选地，III类抗CEA抗体是人源化的，最优选地，是如本文和美国专利5,874,540中所述的人源化的MN-14单克隆抗体。治疗剂优选是一种细胞毒性剂，更加优选是一种烷化剂，最优选是达卡巴嗪(DTIC)。其它类别的抗肿瘤的细胞抑制剂和细胞毒性剂，如CPT-11也可以用于与这些抗体组合，特别是在结肠直肠癌的治疗中。但是在另一个实施方案中，治疗剂也可以不是DTIC。
本文还考虑一种治疗甲状腺髓样癌或非甲状腺髓样癌的方法，包括向受试者同时或按顺序给予治疗有效量的第一种III类抗CEA单克隆抗体或其片段和至少一种治疗剂，以及裸的或偶联的第二种人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，并且任选在一种可药用的载体中进行配制。优选地，第一种III类抗CEA MAb是人源化的MN-14抗体或其片段。在一个实施方案中，第二种抗体或其片段(即第二治疗剂)是癌相关的抗体或其片段，选自与TAG-72、EGFR、HER2/neu、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、BGP-1、EGP-2、AFP、Tn或另一种如上所述的这类与肿瘤相关的抗原反应的单克隆抗体或其片段。在另一个实施方案中，第二种抗体或其片段可以是一种不同的IIII类抗CEA抗体或其片段，它是非阻断性的并且不结合粒细胞或CD66a-d。
在另一个实施方案中，第二种抗CEA抗体是一种II类抗体或其片段，如在Hammarstrom和Kuroki中所述的那些，条件是它们不与粒细胞或CD66a-d结合。抗体及其片段可以同时或按顺序地给药或与治疗剂一起给药。在一个实施方案中，第二种抗体或其片段可以是裸的也可以是偶联到一种治疗剂上的。
因此，本发明考虑按顺序地或同时地与一种或多种治疗剂一起给予鼠的、人源化的、嵌合的和人的抗CEA抗体及其片段，或作为多模式疗法进行给药。本发明的多模式疗法包括使用一种III类抗CEA抗体或其片段和一种治疗剂的免疫治疗，补充以一种非偶联的或偶联的抗体、非偶联的或偶联的融合蛋白或其片段的给药。例如，一种非偶联的人源化的、嵌合的、鼠的或人的MN-14MAb或其片段可以与另一种裸的人源化的、鼠的、嵌合的或人的III类抗CEA抗体(如一种针对CEA上不同表位的并且也不结合粒细胞或CD66a-d的抗体)组合，或与一种人源化的、嵌合的、鼠的或人的III类抗CEA抗体的免疫偶联物组合，所述免疫偶联物偶联到一种放射性同位素、化疗剂、细胞因子、酶、酶抑制剂、激素或激素拮抗剂、金属、毒素或其组合。裸的III类抗CEA抗体或其片段也可以与一种偶联的或非偶联的鼠融合蛋白、人源化的、嵌合的或人的III类抗CEA抗体组合。但是，用于联合治疗的III类抗CEA抗体彼此是非阻断性的并且不能结合粒细胞或CD66a-d。优选地，将裸的III类抗CEA抗体与第二种裸的或偶联的抗体、融合蛋白或其片段按顺序地或同时进行给药。还要优选地，用于联合治疗的抗体或抗体片段之一是一种裸的人源化的MN-14抗体或其片段。此外，作为裸的或偶联的抗体、融合蛋白或其片段使用的第二抗体可以是一种人的、人源化的、嵌合的或鼠的II类CEA抗体或其片段，它是非阻断性的并且不能结合粒细胞或CD66a-d。
在本文所述的方法中，受试者至少接受一种裸的III类抗CEA抗体或其片段，它是在一种治疗剂之前、之后或与之一起给药。优选地，治疗剂为用于标准的癌症化疗中的药物，如卵巢癌中的紫杉烷或铂药物、结肠直肠癌中的奥沙利铂药物，用在胰腺癌和其它癌症中的吉西他滨，或用在乳癌中的紫杉烷衍生物。COX-2抑制剂仍然代表另一类药剂，它在癌症化疗中与典型的细胞毒性剂相组合而显示活性，并且可以在本发明中以同样的方式使用，但是组合以除了单独的CEA抗体之外的药剂以及组合以其它的癌症相关的抗体。任选地，这些药物可以与放射性标记的抗体联合使用，所述放射性标记的抗体既有CEA抗体偶联物也有与上述种类的其它相关抗体偶联的放射性偶联物。还优选地，III类抗CEA抗体或其片段是MN-14抗体或其片段。还要优选地，MN-14抗体或其片段是人源化的。
在一个优选的实施方案中，裸的III类抗CEA抗体或其片段与达卡巴嗪(DTIC)、阿霉素、环磷酰胺或长春新碱，或这些的任意组合按顺序地(之前或之后)或同时地进行给药。例如，DTIC和环磷酰胺可以与裸的III类抗CEA抗体或其片段按顺序地或同时地进行给药。优选地，抗CEA抗体或其片段是人源化的MN-14抗体或其片段。类似地，5-氟尿嘧啶组合以单独的或组合以依立替康(CPT-11)的亚叶酸，是用于治疗结肠直肠癌的一种疗法。其它合适的联合化疗疗法对于本领域技术人员是公知的，如单独用奥沙利铂，或组合以这些其它的药物。因此，根据所用的疗法，与任何这些化疗剂和裸III类抗CEA抗体或其片段的联合疗法都能够用于治疗MTC或非MTC。在甲状腺髓样癌中，仍然可以优选其它化疗剂，如一种烷化剂(例如，DTIC)，以及吉西他滨和其它更加新近类别的细胞毒性剂。化疗药物和裸III类抗CEA抗体或其片段可以以任何顺序或一起给药。换句话说，抗体和治疗剂可以同时或按顺序地进行给药。在一个优选的多模式疗法中，在给予一种根据本发明的偶联的或非偶联的抗CEA抗体、融合蛋白或其片段之前、之后或同时给予化疗药物和裸III类抗CEA抗体或其片段。优选地，III类抗CEA抗体或其片段为人源化MN-14抗体或其片段。
一种优选的多模式疗法的治疗方案是给予hMN-14和DTIC 3天，仅在第7、14、21天给予hMN-14，并且随后每21天给药一次，持续12个月的治疗期。hMN-14的剂量是0.5-15mg/kg体重/每次输注，更加优选2-8，并且依然更加优选3-5mg/kg体重/每次输注，而DTIC的剂量如目前临床应用的优选剂量，但是也可以给予应用的最大优选剂量的2/3或更少，由此降低与药物相关的副作用。可以给予重复的药物循环，如每3-6个月，伴随着持续的裸抗体治疗，或伴随着放射标记的抗体、药物偶联的抗体，以及包括某些细胞因子如G-CSF和/或GM-CSF的不同方案，调整每种剂量从而使对于病人的毒性不被治疗组合所增强。细胞因子生长因子，如G-CSF的应用，可以使要给予甚至更高剂量的骨髓抑制剂，如放射性标记的抗体或细胞毒性药物成为可能，并且这些方案和剂量将根据病人的疾病状态和以往的治疗而对病人个别地进行调整，所有的疾病状态和以往的治疗都影响骨髓状态和对于其它细胞毒性治疗的耐受性。在一个优选的实施方案中，以100-600毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予MN-14抗体或其片段。仍要优选地，以300毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予MN-14抗体或其片段，优选重复的剂量。
治疗剂
这里所列举的治疗剂是在与如本文所述的裸抗体分开给药也有用的那些药剂。合适的治疗剂可以选自细胞毒性剂、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂(如色素原或染料)、免疫偶联物、另一种裸抗体、激素，或其组合。治疗剂包括，例如化疗药物如长春花生物碱和其它生物碱、蒽环霉素、表鬼臼毒素、紫杉烷、抗代谢药、烷化剂、抗生素、COX-2抑制剂、抗有丝分裂剂、抗血管生成剂和凋亡剂，特别是阿霉素、氨甲蝶呤、紫杉醇、CPT-11、喜树碱，和来自这些和其它类别的抗癌剂的其它药剂等。其它对于制备免疫偶联物和抗体融合蛋白有用的癌症化疗药物包括氮芥、烷基磺酸酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、铂配位化合物、激素、毒素(例如，核糖核酸酶、假单胞菌外毒素)等。根据要治疗的恶性肿瘤的不同，优选的治疗剂包括DTIC、CPT-11、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、奥沙利铂、阿霉素、环磷酰胺和长春新碱，或其组合。更优选地，阿霉素、DTIC、环磷酰胺和长春新碱在本发明的组合物和方法中单独或组合使用。因此，此处描述的组合物和方法可以包括一种以上的治疗剂。合适的化疗剂在REMINGTON′S PHARMACEUTICALSCIENCES，19th Ed.(Mack Publishing Co.1995)，和在GOODMAN ANDGILMAN′S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS，第七版.(MacMillan Publishing Co.1985)，以及这些出版物的修订版本中进行了介绍。其它合适的化疗剂，如实验性的药物，是本领域技术人员公知的。
毒素，如假单胞菌外毒素，也可以与一种裸III类抗CEA抗体或其片段一起给药。优选地，III类抗CEA抗体或其片段是人源化的MN-14或其片段。其它在裸的III类抗CEA抗体或其片段给药之前、之后或同时地非偶联给药的合适微生物、植物或动物毒素包括蓖麻毒素、相思豆毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、金葡菌肠毒素A、商陆抗病毒素、白树毒素、白喉毒素、假单胞菌外毒素和假单胞菌内毒素。见，例如，Pastan等，Cell 47：641(1986)，和Goldenberg，CA-ACancer Journalfor Clinicians 44：43(1994)。其它的适用于本发明的毒素是本领域技术人员所公知的并且在美国专利号6,077,499中公开，将它的全部内容引入作为参考。这些可以源自，例如动物、植物和微生物来源，或化学地或重组地工程化设计的。该毒素可以是一种植物的、微生物的或动物的毒素，或其合成变体。
免疫调节剂，如细胞因子也可以与本发明的嵌合的、人源化的或人的III类抗CEA抗体或其片段非偶联地进行给药。如本文所用的，术语“免疫调节物”包括细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素如肿瘤坏死因子(TNF)、造血因子如白介素(例如，白介素1(IL-1)、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12和IL-18)、集落刺激因子(例如，粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF))、干扰素(例如，干扰素α、β或γ)、被指定为″S1因子″的干细胞生长因子、红细胞生成素和血小板生成素。合适的免疫调节剂部分的例子包括IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、γ干扰素、TNF-α等。所以，受试者可以接受一种裸的III类抗CEA抗体或其片段以及一种分开给药的细胞因子，所述细胞因子可以在裸的III类抗CEA抗体或其片段的给药之前、同时或之后进行给药。由于一些抗原也可以是免疫调节剂，例如，CD40抗原，也可以与一种裸III类抗CEA抗体或其片段联合给药，在裸抗体或抗体组合的给药之前、同时或之后进行给药。此外，适于治疗患病组织的放射性核素包括，但不限于，32P、33P、47Sc、59Fe、64Cu、67Cu、75Se、77As、89Sr、90Y、99Mo、105Rh、109Pd、111Ag、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、161Tb、166Ho、169Er、177Lu、186Re、188Rc、189Re、194Ir、198Au、199Au、211Pb、212Pb，和213Bi、58Co、67Ga、80mBr、99mTc、103mRh、109Pt、111In、119Sb、161Ho、189mOs、192Ir、152Dy、211At、212Bi、223Ra、219Rn、215Po、211Bi、225Ac、221Fr、217At、213Bi、88Y和255Fm。优选的放射性核素为125I、131I、90Y、177Lu和225Ac。还优选地，放射性核素的能量为20-10,000keV。
可药用的载体
要递送给受试者的裸的鼠、人源化、嵌合和人的III类抗CEA MAbs可以包含一种或多种可药用的载体、一种或多种其它的成分，或这些的某种组合。
本发明的非偶联的III类抗CEA抗体及其片段可以根据已知的制备药用组合物的方法进行配制。优选地，III类抗CEA抗体或其片段为MN-14抗体或其片段。灭菌的磷酸缓冲液盐水是可药用载体的一个例子。其它可接受的载体是本领域公知的。见，例如，Ansel等，PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS，第5版(Lea & Febiger 1990)，和Gennaro(编辑)，REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版(Mack Publishing Company1990)，及其修订版。
可以将本发明的非偶联的III类抗CEA抗体及其片段配制以进行静脉内给药，所述静脉内给药通过例如弹丸注射或持续输注的方式进行。优选地，III类抗CEA抗体或其片段为MN-14抗体或其片段。注射用的剂型可以以单位剂型存在，例如，与添加的防腐剂一起共存于安瓿瓶中或共存于多剂容器中。组合物可以采用在油状或水性载体中的悬浮液、溶液或乳剂的形式，并且可以包含成型剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，在使用前活性成分可以是粉末形式以构成一种合适的载体，如灭菌的无热原水。
可以利用其它的药学方法控制药剂和裸抗体或其片段作用的持续时间。控制释放的制剂可以通过使用聚合物来复合或吸附裸抗体来制备。例如，生物相容性的聚合物包括聚(乙烯-共-醋酸乙烯酯)的基质和硬脂酸二聚体和癸二酸的聚酐共聚物的基质。Sherwood等，BiolTechnology 10：1446(1992)。从这种基质中释放抗体或其片段的速率依赖于免疫偶联物或抗体的分子量、基质内抗体的量和分散颗粒的大小。Saltzman等，Biophys.R 55：163(1989)；Sherwood等，见前。其它固体配药形式在Ansel等，PHARMACEUTICAL DOSAGEFORMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS，第5版(Lea & Febiger 1990)，和Gennaro(编辑)，REMINGTON′S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第18版(Mack Publishing Company 1990)，及其修订版中进行了介绍。
非偶联的III类抗CEA抗体或其片段也可以以皮下方式或甚至通过其它肠胃外途径对哺乳动物给药。而且，给药可以是通过连续输注或通过单次或多次的弹丸注射。通常，给予人类裸抗体或其片段的剂量将根据病人的年龄、体重、身高、性别、一般医学状况和以往病史而变化。一般地，给接受者单次静脉输注大约0.5mg/kg-20mg/kg的裸抗体或其片段的剂量是合乎需要的，尽管根据情况要求可以给予更低或更高的剂量。这种剂量可以如需要进行重复，例如每月1次持续4-10个月，优选每两周一次持续16周，并且更加优选每周一次持续8周。还可以以更少的频率给药，如每两周一次持续几个月或者以更大的频率和/或持续更长时间地给药。可以通过各种肠胃外途径给药，适当调整剂量和方案。
为了治疗的目的，向哺乳动物给予治疗有效量的III类抗CEA抗体或其片段以与未处理的对照实验相比减小肿瘤的大小。优选地，III类抗CEA抗体或其片段是人源化的MN-14抗体或其片段。适于本发明的受试者通常是人，尽管还考虑非人的哺乳动物或动物受试者。如果给药的量是生理上有意义的，则认为给予的抗体制剂是“治疗有效量”。如果一种药剂的存在导致受体哺乳动物生理上可检测的变化，那么这种药剂是生理上有意义的。特定地，如果本发明的抗体制剂的存在引起抗肿瘤反应，则它是生理上有意义的。生理上有意义的效应还可以是受体哺乳动物中体液和/或细胞免疫的诱发。
尽管前面提到的是特别优选的实施方案，可以理解，本发明并不受到如此限定。本领域技术人员可以理解，可以对公开的实施方案进行适当的改进，这种改进也包括在本发明的范围内，本发明的范围是通过权利要求限定的。在此引入所有引用的公开的文章、专利和专利申请的全文作为参考。
实施例1：材料和方法
单克隆抗体和细胞系
从美国典型培养物保藏中心购买了一种人甲状腺髓样细胞系TT。该细胞单层生长于DMEM(Life Technologies，Gaithersburg，MD)中，所述DMEM添加了10％的胎牛血清、青霉素(100U/ml)、链霉素(100pg/ml)和L-谷氨酰胺(2mM)。在以胰蛋白酶、0.2％ EDTA分离后对细胞进行常规传代。
MN-14是一种III类抗CEA MAb，与CEA反应并且与正常的交叉反应抗原NCA和胎粪抗原不反应(Hansen等，Cancer，71：3478(1993))。这里用作阴性对照的MN-14和LL2，即抗CD22 MAb的人源化形式的构建和特征描述之前曾进行过介绍。(Sharkey等，CancerRes.，55：5935s(1995)；Leung等，Mol.Immunol.，32：1416(1995))。P3x63Ag8(MOPC-21)是从美国典型培养物保藏中心(Rockville，MD)获得的一种不相关的小鼠骨髓瘤IgG1。通过蛋白A层析法纯化抗体。
                    体内研究
通过皮下注射2×108个洗涤的TT细胞在雌性nu/nu小鼠(TaconicFarms，Germantown，NY)中增殖肿瘤，所述肿瘤已在组织培养中进行过增殖。将抗体经由侧尾静脉静脉注射进患肿瘤的动物内。注射的抗体量和给药时间的细节在每个研究的结果部分指出。结果作为个别动物的肿瘤体积以及平均值±SE给出。通过每周利用测径器测量肿瘤的长度、宽度和深度来监测肿瘤大小。将肿瘤体积计算为三种测量值的乘积。利用Student′s T检验进行统计学比较以比较肿瘤的体积和生长曲线下的面积。
实施例2.在注射TT(人甲状腺髓样)肿瘤细胞后2天递送裸hMN-14和DTIC的联合治疗
在前面的研究中，在肿瘤移植2天之后，利用100μg和25μg剂量的DTIC(第2、3和4天)和在第2天以及之后每周给予的250μg剂量的hMN-14，与TT联合给予裸hMN-14和达卡巴嗪。100μg的DTIC剂量联合以hMN-14比两种单独的治疗都更加有效(图1A)。但是，100μgDTIC的剂量产生太强的反应，而25μg的剂量则无效。令人惊奇的是，单独的MN-14和单独的DTIC的效果并不是加和性的。换句话说，给定单独用250μg hMN-14和单独用100μgDTIC治疗的结果，并不会预测250μg hMN-14和100μgDTIC的组合会具有这样一种显著的效果。见图1A。
在本研究中，如以往研究中的一样，治疗开始于TT细胞注射2天之后。在第2，3，4，5，7，8，9，10，11，15和22天以100μg/剂给药hMN-14，随后每7天给药一次直到动物死亡、肿瘤达到2.0cm3或研究由于人道原因而终止。DTIC的剂量为50和75μg/每剂，它介于以往的研究中给予的剂量之间。在60只裸鼠中皮下注射TT细胞。注射日为星期一，第0天。参见图1B。
结果显示肿瘤生长的显著延迟是由单独的MAb治疗或单独的化疗引起的(图1B)。75μg剂量的DTIC结合以这种hMN-14抗体的方案比两种单独的治疗都显著地更为有效(p＜0.02)。出乎意料的是，组合的DTIC和MAb治疗不是加和性的。在第7周，与在只有75μg DTIC组中的1/10只小鼠和在未处理的和MAb组中的0/10只小鼠相比，在75μg DTI C和MAb组中的8/10只小鼠没有明显的肿瘤。
在第7周平均肿瘤体积为0.018±0.039cm3(75μg DTIC加MN-14)、0.284±0.197cm3(仅有75μg DTIC)、0.899±0.545cm3(仅有hMN-14)和1.578±0.959cm3(未处理的)。裸的抗CEA抗体和DTIC的联合治疗增强了单独用抗体或化疗的抗肿瘤效果，而无增长的毒性。组合型治疗的优势是令人吃惊的。
给药方案概述：(1)在第2天到11天，除了星期六，以100μg/剂/小鼠每天给予hMN-14。抗体治疗与DTIC治疗在同一天开始。在第2、3和4天以50和70μg/剂给予DTIC，所述剂量相应于5％和7.5％的MTD。只给一个疗程的DTIC。
组：6组小鼠，每组包含10只小鼠。
组1：未处理。
组2.在第2、3和4天以50μg/剂给予DTIC(星期三、星期四和星期五)。
组3.在第2、3和4天以75μg/剂给予DTIC。
组4.在第2、3和4天以50μg/剂给予DTIC，加上第2、3、4、5、7、8、9、10、11、15和22天的hMN-14(100μg/剂)，随后每7天给药一次直到动物死亡，肿瘤达到2.0cm3的体积，或研究终止。
组5.在第2、3和4天以25μg/剂给予DTIC，加上第2、3、4、5、7、8、9、10、11、15和22天的hMN-14(100μg/剂)，随后每7天给药一次直到动物死亡，肿瘤达到2.0cm3的体积，或研究终止。
组6.在第2、3、4、5、7、8、9、10、11、15和22天给予hMN-14(确定100μg/剂)，随后每7天给药一次直到动物死亡，肿瘤达到2.0cm3的体积，或研究终止。
监测动物的存活。每周测量肿瘤和体重。
方法：在第二天，将2,200mg/管形瓶的DTIC用19.7ml灭菌水进行重构用于注射。得到的溶液包含10mg/ml的达卡巴嗪，pH范围为3.0-4.0。根据需要利用该溶液进行下面所述的稀释并且将剩余物以1ml的小份进行冷冻作随后的使用。
组2和4：制备5ml 0.5mg/ml的溶液。静脉注射100μl的0.5mg/ml/小鼠溶液。
组3和5：制备5ml 0.75mg/ml的溶液。静脉注射100μl的0.75mg/ml/小鼠溶液。
估计hMN-14的量。将100μl的1mg/ml hMN-14腹膜内注射于组4、5和6中的小鼠中。
实施例3.在人MTC异种移植模型中的放射性免疫疗法研究
申请人开发了一种利用生产CEA和降钙素的命名为TT的人MTC细胞系的人MTC异体移植物，使用放射性标记的抗CEA MAbs进行MTC的实验放射性免疫疗法的模型([Stein，1999 &num；82]，见附录)。通过皮下接种2×108个细胞在裸鼠中建立MTC肿瘤并且让它在注射MAbs之前生长2-5周。随后以MN-14进行生物分布和RAIT研究，其为流式细胞计数法显示与TT细胞反应。在这些研究中都利用Ag8和Mu-9作为阴性对照MAbs。利用约0.08g的较小肿瘤的初步研究显示注射131I-MN-14之后7天，与只有12.6％ID/g的共注射125I-Ag8对照相比，注射剂量/克肿瘤的百分比(％ID/g)是68.9％。使用更大的肿瘤(在裸鼠中生长五个星期；平均肿瘤重量＝0.404g)，在注射125I-MN-14之后7天观察到的肿瘤的ID/g％是12.4％。但是，共注射的88Y-MN-14的ID/g％是50.5％，或比125I-MN-14高4.1倍。用88Y-MN-14的肿瘤与血液、肺、肝、脾和肾的比率也比用125I-MN-14的更高，而用这两种药剂的肿瘤与骨的比率相等。当利用125I-MN-14和88Y-MN-14生物分布数据来分别预测用131I-MN-14和90Y-MN-14的肿瘤放射剂量时，在90Y-MN-14的MTD上递送的放射吸收剂量(150μCi)比在131I-MN-14的MTD上递送的放射吸收剂量(275μCi)高1.75倍(4900cGy对2800cGy)。
在该模型中的治疗研究确定90Y-MN-14是比131I-MN-14更好的治疗剂。在5周大的肿瘤中，与用131I-MN-14仅有肿瘤生长延迟相比在90Y-MN-14的MTD上见到了5周的肿瘤生长完全抑制(图2)。而且，当治疗较小的2周大的肿瘤时，在90Y-MN-14的MTD上见到了平均60％的肿瘤体积减小，伴随着一些完全的肿瘤消退。与在未治疗动物或那些以对照MAbs治疗的MTD中的相对快速的肿瘤生长相比，这些抗肿瘤效应是非常显著的。因而，我们的临床前研究显示这种动物模式是非常适于以抗CEA MAbs进行的实验性RAIT的。
与131I相比90Y较长的路径长度和较高能量，加上90Y被靶细胞保持较长时间的事实导致了递送给肿瘤提高的放射剂量并且因而导致了在等毒性下更加有效的疗效。如果我们的用残余131I(refs)的结果可以推广到MTC中的MN-14，那么我们可以预期残余131I在这里研究的大小的肿瘤中与90Y至少同样有效，并且很可能在处置微转移疾病中或作为手术后的辅助治疗具有优势。
实施例4：化疗
对四种药物，阿霉素、DTIC(达卡巴嗪)、环磷酰胺和长春新碱，单独地或组合地评估它们在裸鼠中TT MTC异种移植物生长的效应。基于每种药物在临床上以mg/m2为基础对人给药的剂量来选择剂量。监测动物的存活，每周测量肿瘤的体积和体重。图3显示本研究中动物的肿瘤生长曲线。通过个别地给药，阿霉素、DTIC和环磷酰胺产生了显著的生长抑制，但长春新碱没有产生显著的生长抑制，尽管由DTIC引起的生长延迟比其它药物的显著更长。对于每组加倍的大致平均时间为：未处理的，1周；阿霉素，2.5周；DTIC，7.5周；环磷酰胺，3周；和长春新碱，1.5周。阿霉素和DTIC的组合与单独的两种药物相比提高了效力，将加倍的平均时间增至10周。但是，与单独的DTIC相比，阿霉素和DTIC组合的提高的效力没有达到95％的置信水平。AUC比较的P值如下：阿霉素+DTIC对阿霉素，P＜0.01，而阿霉素+DTIC对DTIC，P＜0.1。4种药物的疗法将加倍的平均时间延长至12周；对于阿霉素和DTIC二者的比较P＜0.01。
个别药物对未处理组的存活数据的对数秩分析仅对DTIC和环磷酰胺显示了显著的差异。分别与DTIC和环磷酰胺治疗组的11周和8周相比，未处理对照组的平均存活时间为4周，并且药物组合大于12周。如通过体重损失所测量的毒性对于所有研究组都在可接受的范围之内。在以所有4种药物处理的小鼠中的治疗1周之后，观察最大重量损失，体重损失在3-12％范围之间。
实施例5.联合放射免疫治疗和化疗进行MTC的治疗
RAIT加4种药物组合
通过将在未处理小鼠中的TT生长与上述使用4种药物(阿霉素、DTIC、环磷酰胺和长春新碱)方案治疗的小鼠相比较，来评估把用90Y抗CEA MAb MN-14进行的RAIT和4种药物组合组合起来的效果，RAIT的100％最大耐受剂量(MTD)(105μCi)、RAIT的50％ MTD，以及RAIT的50％ MTD组合以4种药物处理的那些。图4显示在给予各种治疗方案的小鼠中TT肿瘤的生长曲线。与未治疗的动物相比，所有四个治疗组都在效力上产生了显著的提高。鉴于未治疗动物中大致的平均加倍时间为1.5周，以4种药物进行的化疗将平均加倍时间延长至10周而单独的RAIT分别于50％和100％MTD时得出了4周和8周的加倍时间。如所预期的，100％RAIT组和4种药物治疗方案组二者都比50％RAIT组显著地更好。最重要的是，与两种疗法相比，将50％RAIT和4种药物方案组合起来改善了结果，进一步将平均加倍时间延长至12.5周。对于联合治疗与4种药物方案的比较来说，P＜0.02，对于与100％RAIT的比较来说，P＜0.01。
治疗后1周的平均重量损失(nadir)对于100％ RAIT和4种药物方案来说是9％，但是对于组合的50％ RAIT加上4种药物方案来说是15％。此外，在组合疗法组，一只动物死于治疗3周之后而第二只动物有大于20％的重量损失。因而，该治疗超出了最大耐受剂量。
RAIT加2种药物方案的化疗
还在这种MTC异种移植物模型中，评估把用90Y抗CEA MAb MN-14进行的RAIT和2种药物组合结合起来的效果，所述2种药物组合由阿霉素和DTIC组成。各组的大致加倍时间为：未处理的，1.5周；阿霉素加DTIC，8周；RAIT的MTD，10周；结合以25-75％的2种药物方案的RAIT的MTD，大于12周。因而，单独的RAIT比2种药物方案更加有效，并且最为显著地，将RAIT和2种药物方案组合起来与任一种单独的疗法相比产生了改善的结果。对于结合治疗与2种药物方案的比较来说，P＜0.005，对于与单独的RAIT的比较来说，P＜0.02。
对于各组来说治疗后(nadir)1-2周的平均重量损失为2-8％，除了100％RAIT加75％的2种药物化疗组在第2周时观察到13％的重量损失以外。此外，在该联合治疗组，两只动物死于治疗后3-4周并且一只经历了大于20％的重量损失。因而，向100％RAIT的治疗中加入75％剂量水平的阿霉素和DTIC超出了MTD，而该2种药物组合的50％与100％RAIT组合则可以被耐受。
RAIT加阿霉素
由于以往的出版物已经报道过在该模型中RAIT与阿霉素的组合(Stein等，Clin CancerRes.，5：3199s(1999)；Behr等，CancerRes.57：5309(1997))，可以对RAIT加阿霉素方案作直接的比较。还对RAIT加4种药物方案作直接的比较。与未处理的动物相比，所有的治疗都产生了显著的效力。RAIT加阿霉素的平均加倍时间为12周。在本研究中，将RAIT的全MTD与50％的阿霉素和DTIC或4种药物方案组合起来将平均加倍时间延长至15周，在这两组之间没有统计学上的显著性差异。在这些研究中观察了客观反应的基本数目。在以RAIT加阿霉素治疗后有3只动物完全反应，2只动物部分反应，并且在全部10只小鼠中，5只动物病情稳定至少4周。RAIT加2种药物方案将客观反应增至12只动物的10只有完全反应和2只有部分反应，而RAIT加4种药物治疗方案导致9只小鼠的7只小鼠完全反应和2只部分反应。
RAIT加DTIC
由于DTIC是在单独给药时最有效的化疗剂，所以通过与RAIT加阿霉素和DTIC的效力来评估RAIT加DTIC的效力。将阿霉素从治疗方案中删去对于临床应用来说将是重要的，以便避免该药的额外毒性，特别是已知的心脏毒性。如图5中所示的，两个接受化疗联合RAIT的研究组，阿霉素和DTIC或只有DTIC，彼此大致上等同，二者都比单独形式的治疗更有效。AUC比较的P值如下：RAIT+DTIC对DTIC，P＜0.01，RAIT+DTIC对RAIT，P＜0.05。分别与单独的DTIC和RAIT 7.5周和9周相比，RAIT加DTIC以及RAIT加阿霉素和DTIC组的平均加倍时间分别为15.5周和14周。因而，RAIT加DTIC的联合形式的治疗将平均加倍时间在DTIC化疗之上延长了100％。通过AUC或时序分析在RAIT加DTIC以及RAIT加阿霉素和DTIC组之间没有观察到显著的差异。
实施例6：用裸的抗CEA单独进行的研究
用裸hMN-14进行的治疗
为了研究未标记的hMN-14对于在裸鼠中TT肿瘤生长的影响，在肿瘤细胞注射之后的一天或十一天，通过静脉内给药单次注射hMN-14。图6显示与未处理的对照相比，用0.5mg hMN-14/小鼠处理的动物的肿瘤生长曲线。未处理组包含16只动物；两个处理组每组包含10只动物。在未处理组和肿瘤注射后1天的处理组之间观察到显著的生长延迟。从第32天到93天观察到平均肿瘤大小的显著性差异(p＜0.05)。与未处理动物相比，在MN-14处理组中于第32天和60天之间有肿瘤大小的64-70％的抑制。在第11天组和未处理组的平均肿瘤大小之间没有显著的差异。通过在生长曲线下的t检验分析还见到肿瘤生长的显著延迟。对于与肿瘤注射后1天处理的组相比较的未处理组来说，P＜0.05，但是对于肿瘤注射后11天处理的组来说并非如此。
治疗的特异性
图7总结了对于抗肿瘤反应的特异性研究的结果。将裸鼠中未标记的hMN-14对于TT肿瘤生长的效果与阴性对照人源化MAb、hLL2(抗CD22)和鼠MN-14的效果相比较。在TT细胞之后的一天给药(静脉内地)MAbs(0.5mg/小鼠)，随后给予三次每周一次的0.5mg/小鼠的剂量。研究15只动物的组。在第一个研究中观察到的缘于以0.5mghMN-14治疗的生长抑制在本研究中得到确认。从第23天开始，观察到在hMN-14和未处理组之间平均肿瘤大小的显著性差异(p＜0.05)。在第37天用hMN-14处理的组中的平均肿瘤体积是未处理的对照动物的42.7％。以鼠MN-14进行的处理产生与hMN-14相似的结果。以hLL2进行的处理没有放慢肿瘤生长；相反在生长速率上有小的(不显著的)增长。例如，与未处理的40％和hLL2处理组的29％相比，在第37天87％的用hMN-14处理的肿瘤小于0.5cm3。对在生长曲线以下面积的T检验分析显示在未处理组和用hMN-14或鼠MN-14处理组之间的显著性差异(p＜0.05)，但是与hLL2处理的组却没有显著性差异。此外，hMN-14组显著不同于hLL2组，但是与鼠MN-14处理的动物却没有显著的不同。
剂量的效果
为了研究未标记的hMN-14的剂量对于裸鼠中TT肿瘤生长的影响，对逐渐增加的hMN-14剂量进行了评估。在TT细胞1天后给予多个抗体剂量，随后每周一次直到研究终止。在六只小鼠的组中每周的剂量在0.125mg到2.0mg hMN-14/小鼠的范围内。在未处理组和所有处理组之间观察到平均肿瘤大小和生长曲线以下面积的显著性差异(图8)。例如，在第21天和第49天之间两个最低hMN-14处理组中的平均肿瘤体积是未处理动物中肿瘤大小的27-40％。用较低剂量0.125mg和0.25mg进行的处理似乎比用较高剂量进行的处理更有效，但差异没有达到统计学上的显著性。
时间测定
通过变化MAb的给药日期来评估介于TT注射和hMN-14的起始剂量之间的时间对于裸鼠中TT肿瘤生长的影响。在TT细胞之后1、3或7天给药hMN-14(0.25mg)，随后每周一次直到研究结束。研究7-8只动物的组。结果总结于图9中。在未处理组和所有三个处理组之间观察到平均肿瘤大小的显著性差异(p＜0.05)。但是，在未处理的小鼠和第7天处理组之间平均肿瘤大小的差异仅仅在一个时间点，第28天是显著的。第1天处理的小鼠在第21-77天产生显著的差异，而第3天处理的小鼠在第21-70天产生显著的差异。对生长曲线下的面积的T检验分析显示，对于在TT细胞给药之后1天或3天用hMN-14处理的组显示与未处理组相比的显著的生长抑制。该分析对于在未处理组和在第7天处理的组之间的差异没有达到95％的置信限(在第五周p＝0.057)。
实施例7：组合的裸的抗CEA加DTIC对MTC的治疗
为了研究裸hMN-14是否能够增强DTIC的效力，给予长有TT细胞的裸小鼠以DTIC(75μg/剂)，联合以一段未标记的MAb的疗程。在皮下注射TT细胞后2天开始，连续3天以75μg/剂给药DTIC作为一个疗程。hMN-14 MAb治疗与第一剂DTIC开始于同一天，在首先的两周以100μg/剂/天持续5天，随后每周两次。这些MAb疗法或单独的化疗引起肿瘤生长的显著延迟(图10)。75μg剂量的DTIC组合以本方案的hMN-14比两种单独的治疗显著地更加有效(P＜0.02)。7周后，与在仅有75μgDTIC组中的1/10只和在未处理组和只有MAb组中的0/10只相比，在75μgDTIC+MAb组中的8/10只小鼠没有可触及的肿瘤。第7周时的平均肿瘤体积为0.018+0.039cm3(75μgDTIC+hMN-14)、0.284+0.197cm3(75μg DTIC)、0.899+0.545cm3(hMN-14)和1.578+0.959cm3(未处理的)。
抗CEA MAb MN-14已显示了出乎意料的在MTC中的抗肿瘤效力，而不必偶联到一种细胞毒性剂上。在3周开始并且至少持续2个月，在hMN-14处理的和未处理的组之间观察到平均肿瘤大小的差异。用同种型匹配的阴性对照MAbs进行的处理并不减慢肿瘤的生长。这是用“裸”抗CEA MAb抑制肿瘤的第一个证据。但是，裸的抗CEA MAb与DTIC的联合治疗增强了单独的抗体或化疗的抗肿瘤效果。联合形式治疗的优势支持将CEA-MAb疗法并入化疗方案中以进行MTC控制。MN-14的肿瘤细胞杀伤机理是未知的，可能涉及一些机理。此处提出的研究将提供理解这些观察结果的基础以及支持临床试验的基础。
尽管前面提到的是特别优选的实施方案，可以理解，本发明并不受到如此限定。本领域技术人员可以理解，可以对公开的实施方案进行适当的改进，这种改进也包括在本发明的范围内，本发明的范围是通过权利要求限定的。
在此引入所有引用的公开的文章、专利和专利申请的全文作为参考。
权利要求书
(按照条约第19条的修改)
1.一种包含至少一种III类抗CEA单克隆抗体(MAb)或其片段和至少一种治疗剂的组合物。
2.权利要求1的组合物，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述的人源化的MAb基本上保留了鼠III类抗CEAMAb的III类抗CEA结合特异性。
3.权利要求1的组合物，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是一种嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III类抗CEAMAb的III类抗CEA结合特异性。
4.权利要求1的组合物，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是完全的人MAb，其中所述完全的人MAb基本上保留了鼠III类抗CEAMAb的III类抗CEA结合特异性。
5.权利要求1的组合物，其中所述的III类抗CEA单克隆抗体或其片段是MN-14抗体或其片段。
6.权利要求5的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中所述MN-14抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA(SEQ ID：20)的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT(SEQ ID：21)的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS(SEQ ID：22)的CDR3；并且所述的III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS(SEQ ID：23)的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD(SEQ ID：24)的CDR2；和含有LYFGFPWFAY(SEQID：25)的CDR3。
7.权利要求5的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体与CEA反应，但不与正常的交叉反应性抗原(NCA)和胎粪抗原(MA)反应。
8.权利要求7的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段是人源化的MN-14抗体或其片段。
9.权利要求7的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段是嵌合的MN-14抗体或其片段。
10.权利要求7的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段是完全的人MN-14抗体或其片段。
11.权利要求8的组合物，其中所述的人源化MN-14抗体或其片段的轻链和重链可变区的构架区(FRs)包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。
12.权利要求11的组合物，其中所述的人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14抗体的所述相应FR的氨基酸，所述氨基酸选自图14A-C或图15B(hMN-14)或图16B的鼠重链可变区(KLHuVhAIGA)的氨基酸残基24、28、30、48、49、74和94(均示于SEQ ID：14)。
13.权利要求11的组合物，其中所述的人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14轻链可变区的所述相应FR的氨基酸。
14.权利要求8的组合物，其中所述的人源化MN-14抗体或其片段包含如图13A或图15A或图16A中所示的轻链可变区(均示于SEQID：19)，以及图14A-C中所示标明为KLHuVhAIGA的或图15B(hMN-14)或图16B中所示的重链可变区(均示于SEQ ID：14)。
15.权利要求9的组合物，其中所述的嵌合的MN-1 4抗体或其片段包含如图13A中所示标明为鼠MN-14Vκ的轻链可变区(SEQ ID：4)和图14A-C中标明为鼠MN-14VH的重链可变区(SEQ ID：2)。
16.权利要求1-15的任意一项的组合物，其中所述片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。
17.权利要求1-15的任意一项的组合物，其中所述的治疗剂选自裸抗体、细胞毒性剂、药物、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂、免疫偶联物、激素或其组合，任选配制于一种可药用的载体中。
18.权利要求17的组合物，其中所述的其组合包含长春新碱、阿霉素、DTIC和环磷酰胺。
19.权利要求17的组合物，其中所述的治疗剂是裸抗体或免疫偶联物。
20.权利要求19的组合物，其中所述的裸抗体或所述的免疫偶联物的抗体部分包含一种人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，所述的单克隆抗体或其片段选自与EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、VEGF或其它肿瘤血管发生抗原、Ga733或其组合反应的单克隆抗体或其片段。
21.权利要求20的组合物，其中所述的片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。
22.权利要求1-15的任意一项的组合物，其中所述的治疗剂不是DTIC。
23.一种治疗非甲状腺髓样癌的方法，包括同时或按顺序地给予受试者治疗有效量的III类抗CEA抗体或其片段和至少一种治疗剂，它们任选配制于一种可药用的载体中。
24.权利要求23的方法，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述人源化的MAb基本上保留了鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
25.权利要求23的方法，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
26.权利要求23的方法，其中所述的III类抗CEA单克隆抗体或其片段是MN-14抗体或其片段。
27.权利要求23的方法，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中所述MN-14抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA(SEQ ID：20)的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT(SEQ ID：21)的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS(SEQ ID：22)的CDR3；并且所述的III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS(SEQ ID：23)的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD(SEQ ID：24)的CDR2；和含有LYFGFPWFAY(SEQID：25)的CDR3。
28.权利要求27的方法，其中所述的MN-14单克隆抗体与CEA反应，但不与正常的交叉反应性抗原(NCA)和胎粪抗原(MA)反应。
29.权利要求28的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是人源化的MN-14抗体或其片段。
30.权利要求28的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是嵌合的MN-14抗体或其片段。
31.权利要求28的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是完全的人MN-14抗体或其片段。
32.权利要求29的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段的轻链和重链可变区的构架区(FRs)包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。
33.权利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14抗体的所述相应FR的氨基酸，所述氨基酸选自图14A-C标明为KLHuVhAIGA或图15B(hMN-14)或图I6B的鼠重链可变区的氨基酸残基24、28、30、48、49、74和94(均示于SEQID：14)。
34.权利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14轻链可变区的所述相应FR的氨基酸。
35.权利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含如图13A或图15A(hMN-14)或图16A中所示的轻链可变区(均示于SEQ ID：19)，以及图14A-C中所示标明为KLHuVhAIGA的或图15B(hMN-14)或图16B中所示的重链可变区(均示于SEQ ID：14)。
36.权利要求23-35的任意一项的方法，其中所述的片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和sFv。
37.权利要求23-35的任意一项的方法，其中所述的治疗剂选自人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，所述的单克隆抗体或其片段选自II类抗CEA单克隆抗体、III类抗CEA单克隆抗体及其片段，并且以治疗有效量同时地或按顺序地进行给药。
38.权利要求37的方法，其中所述抗体或其片段是裸的或偶联到另一种治疗剂上的抗体。
39.权利要求23-35的任意一项的方法，其中所述的治疗剂选自裸抗体、细胞毒性剂、药物、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂、CEA或非CEA抗体的免疫偶联物、激素或其组合，任选配制于一种可药用的载体中。
40.权利要求39的方法，其中所述的治疗剂选自与EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、VEGF或其它肿瘤血管发生抗原、Ga733及其组合反应的人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，并且以治疗有效量同时地或按顺序地对所述的受试者进行给药。
41.权利要求40的方法，其中所述的抗体或其片段是裸的或被偶联到另一种治疗剂上。
42.权利要求23-35的任意一项的方法，其中所述的治疗剂不是DTIC。
43.权利要求39的方法，其中所述的细胞毒性剂是一种药物或毒素。
44.权利要求43的方法，其中所述的药物具有选自抗有丝分裂剂、烷化剂、抗代谢物、抗血管生成剂、凋亡剂、生物碱、COX-2和抗生素及其组合的药理学特性。
45.权利要求43的方法，其中所述的药物选自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环霉素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、抗代谢物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、铂配位化合物、长春花生物碱、取代的脲、甲肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、拮抗剂、内皮他丁、紫杉醇、喜树碱、阿霉素和它们的类似物及其组合。
46.权利要求43的方法，其中所述毒素为微生物的、植物的或动物的毒素，选自蓖麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、葡萄球菌肠毒素A、商陆抗病毒素、白树毒素、白喉毒素、假单胞菌外毒素和假单胞菌内毒素。
47.权利要求39的方法，其中所述的免疫调节剂选自细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干扰素(IFN)、干细胞生长因子、红细胞生成素、血小板生成素及其组合。
48.权利要求47的方法，其中所述的淋巴毒素是肿瘤坏死因子(TNF)，所述的造血因子为白介素(IL)，所述的集落刺激因子为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，所述的干扰素是干扰素α、β或γ，所述的干细胞生长因子被指定为″S1因子″。
49.权利要求47的方法，其中所述的免疫调节剂包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ干扰素、TNF-α或其组合。
50.权利要求39的方法，其中所述的放射性核素的能量为20-10,000keV。
51.权利要求50的方法，其中所述的放射性核素选自125I、131I、90Y、88Y、225Ac、177Lu、188Re、186Re及其组合。
52.权利要求39的方法，其中所述的光敏治疗剂为一种色素原或染料。
53.权利要求44的方法，其中所述烷化剂为达卡巴嗪。
54.权利要求53的方法，其中以100-600毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予所述MN-14抗体或其片段。
55.权利要求54的方法，其中以300毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予所述MN-14抗体或其片段。
56.一种治疗甲状腺髓样癌的方法，包括同时或按顺序地给予受试者治疗有效量的III类抗CEA抗体或其片段和至少一种治疗剂，它们任选配制于一种可药用的载体中。
57.权利要求56的方法，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述人源化的MAb基本上保留了鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
58.权利要求56的方法，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
59.权利要求56的方法，其中所述的III类抗CEA单克隆抗体或其片段是MN-14抗体或其片段。
60.权利要求59的方法，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中所述MN-14抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA(SEQ ID：20)的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT(SEQ ID：21)的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS(SEQ ID：22)的CDR3；并且所述的III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS(SEQ ID：23)的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD(SEQ ID：24)的CDR2；和含有LYFGFPWFAY(SEQID：25)的CDR3。
61.权利要求60的方法，其中所述的MN-14单克隆抗体与CEA反应，但不与正常的交叉反应性抗原(NCA)和胎粪抗原(MA)反应。
62.权利要求61的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是人源化的MN-14抗体或其片段。
63.权利要求61的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是嵌合的MN-14抗体或其片段。
64.权利要求61的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是完全的人MN-14抗体或其片段。
65.权利要求62的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段的轻链和重链可变区的构架区(FRs)包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。
66.权利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14抗体的所述相应FR的氨基酸，所述氨基酸选自图14A-C或图15B(hMN-14)的鼠重链可变区的氨基酸残基24、28、30、48、49、74和94(均示于SEQ ID：14)。
67.权利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14轻链可变区的所述相应FR的氨基酸。
68.权利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含如图13A或图15A(hMN-14)或图16A中所示的轻链可变区(均示于SEQ ID：19)，以及图14A-C或图15B(hMN-14)或图16B中所示的重链可变区(均示于SEQ ID：14)。
69.权利要求56-68的任意一项的方法，其中所述的片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和sFv。
70.权利要求56-68的任意一项的方法，其中所述的治疗剂选自人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，所述的单克隆抗体或其片段选自II类抗CEA单克隆抗体、III类抗CEA单克隆抗体及其片段，并且以治疗有效量同时地或按顺序地进行给药。
71.权利要求70的方法，其中所述抗体或其片段是裸的或偶联到另一种治疗剂上的抗体。
72.权利要求56-68的任意一项的方法，其中所述的治疗剂选自裸抗体、细胞毒性剂、药物、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂、CEA或非CEA抗体的免疫偶联物、激素或其组合，任选配制于一种可药用的载体中。
73.权利要求72的方法，其中所述的治疗剂选自与EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、VEGF或其它肿瘤血管发生抗原、Ga733及其组合反应的人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，并且以治疗有效量同时地或按顺序地对所述的受试者进行给药。
74.权利要求73的方法，其中所述的抗体或其片段是裸的或被偶联到另一种治疗剂上。
75.权利要求56-68的任意一项的方法，其中所述的治疗剂不是DTIC。
76.权利要求72的方法，其中所述的细胞毒性剂是一种药物或毒素。
77.权利要求72的方法，其中所述的药物具有选自抗有丝分裂剂、烷化剂、抗代谢物、抗血管生成剂、凋亡剂、生物碱、COX-2和抗生素及其组合的药理学特性。
78.权利要求76的方法，其中所述的药物选自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环霉素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、抗代谢物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、铂配位化合物、长春花生物碱、取代的脲、甲肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、拮抗剂、内皮他丁、紫杉醇、喜树碱、阿霉素和它们的类似物及其组合。
79.权利要求76的方法，其中所述毒素为微生物的、植物的或动物的毒素，选自蓖麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、葡萄球菌肠毒素A、商陆抗病毒素、白树毒素、白喉毒素、假单胞菌外毒素和假单胞菌内毒素。
80.权利要求72的方法，其中所述的免疫调节剂选自细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干扰素(IFN)、干细胞生长因子、红细胞生成素、血小板生成素及其组合。
81.权利要求80的方法，其中所述的淋巴毒素是肿瘤坏死因子(TNF)，所述的造血因子为白介素(IL)，所述的集落刺激因子为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，所述的干扰素是干扰素α、β或γ，所述的干细胞生长因子被指定为″S1因子″。
82.权利要求72的方法，其中所述的免疫调节剂包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ干扰素、TNF-α或其组合。
83.权利要求72的方法，其中所述的放射性核素的能量为20-10,000keV。
84.权利要求83的方法，其中所述的放射性核素选自125I、131I、90Y、88Y、225Ac、177Lu、188Re、186Re及其组合。
85.权利要求72的方法，其中所述的光敏治疗剂为一种色素原或染料。
86.权利要求77的方法，其中所述烷化剂为达卡巴嗪。
87.权利要求86的方法，其中以100-600毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予所述MN-14抗体或其片段。
88.权利要求87的方法，其中以300毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予所述MN-14抗体或其片段。

Claims (88)

1.一种包含至少一种III类抗CEA单克隆抗体(MAb)或其片段和至少一种治疗剂的组合物。
2.权利要求1的组合物，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述的人源化的MAb基本上保留了鼠III类抗CEAMAb的III类抗CEA结合特异性。
3.权利要求1的组合物，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是一种嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III类抗CEAMAb的III类抗CEA结合特异性。
4.权利要求1的组合物，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是完全的人MAb，其中所述完全的人MAb基本上保留了鼠III类抗CEAMAb的III类抗CEA结合特异性。
5.权利要求1的组合物，其中所述的III类抗CEA单克隆抗体或其片段是MN-14抗体或其片段。
6.权利要求5的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中所述MN-14抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；并且所述的III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。
7.权利要求5的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体与CEA反应，但不与正常的交叉反应性抗原(NCA)和胎粪抗原(MA)反应。
8.权利要求7的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段是人源化的MN-14抗体或其片段。
9.权利要求7的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段是嵌合的MN-14抗体或其片段。
10.权利要求7的组合物，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段是完全的人MN-14抗体或其片段。
11.权利要求8的组合物，其中所述的人源化MN-14抗体或其片段的轻链和重链可变区的构架区(FRs)包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。
12.权利要求11的组合物，其中所述的人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14抗体的所述相应FR的氨基酸，所述氨基酸选自图14A-C或图15B(hMN-14)或图16B的鼠重链可变区(KLHuVhAIGA)的氨基酸残基24、28、30、48、49、74和94。
13.权利要求11的组合物，其中所述的人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14轻链可变区的所述相应FR的氨基酸。
14.权利要求8的组合物，其中所述的人源化MN-14抗体或其片段包含如图13A或图15A或图16A中所示的轻链可变区，以及图14A-C中所示标明为KLHuVhAIGA的或图15B(hMN-14)或图16B中所示的重链可变区。
15.权利要求9的组合物，其中所述的嵌合的MN-14抗体或其片段包含如图13A中所示标明为鼠MN-14Vκ的轻链可变区和图14A-C中标明为鼠MN-14VH的重链可变区。
16.权利要求1-15的任意一项的组合物，其中所述片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。
17.权利要求1-15的任意一项的组合物，其中所述的治疗剂选自裸抗体、细胞毒性剂、药物、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂、免疫偶联物、激素或其组合，任选配制于一种可药用的载体中。
18.权利要求17的组合物，其中所述的其组合包含长春新碱、阿霉素、DTIC和环磷酰胺。
19.权利要求17的组合物，其中所述的治疗剂是裸抗体或免疫偶联物。
20.权利要求19的组合物，其中所述的裸抗体或所述的免疫偶联物的抗体部分包含一种人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，所述的单克隆抗体或其片段选自与EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、VEGF或其它肿瘤血管发生抗原、Ga733或其组合反应的单克隆抗体或其片段。
21.权利要求20的组合物，其中所述的片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和scFv。
22.权利要求1-15的任意一项的组合物，其中所述的治疗剂不是DTIC。
23.一种治疗非甲状腺髓样癌的方法，包括同时或按顺序地给予受试者治疗有效量的III类抗CEA抗体或其片段和至少一种治疗剂，它们任选配制于一种可药用的载体中。
24.权利要求23的方法，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述人源化的MAb基本上保留了鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
25.权利要求23的方法，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
26.权利要求23的方法，其中所述的III类抗CEA单克隆抗体或其片段是MN-14抗体或其片段。
27.权利要求23的方法，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中所述MN-14抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；所述III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。
28.权利要求27的方法，其中所述的MN-14单克隆抗体与CEA反应，但不与正常的交叉反应性抗原(NCA)和胎粪抗原(MA)反应。
29.权利要求28的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是人源化的MN-14抗体或其片段。
30.权利要求28的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是嵌合的MN-14抗体或其片段。
31.权利要求28的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是完全的人MN-14抗体或其片段。
32.权利要求29的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段的轻链和重链可变区的构架区(FRs)包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。
33.权利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14抗体的所述相应FR的氨基酸，所述氨基酸选自图14A-C标明为KLHuVhAIGA或图15B(hMN-14)或图16B的鼠重链可变区的氨基酸残基24、28、30、48、49、74和94。
34.权利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14轻链可变区的所述相应FR的氨基酸。
35.权利要求32的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含如图13A或15A(hMN-14)或16A中所示的轻链可变区，以及图14A-C中所示标明为KLHuVhAIGA的或图15B(hMN-14)或图16B中所示的重链可变区。
36.权利要求23-35的任意一项的方法，其中所述的片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和sFv。
37.权利要求23-35的任意一项的方法，其中所述的治疗剂选自人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，所述的单克隆抗体或其片段选自II类抗CEA单克隆抗体、III类抗CEA单克隆抗体及其片段，并且以治疗有效量同时地或按顺序地进行给药。
38.权利要求37的方法，其中所述抗体或其片段是裸的或偶联到另一种治疗剂上的抗体。
39.权利要求23-35的任意一项的方法，其中所述的治疗剂选自裸抗体、细胞毒性剂、药物、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂、CEA或非CEA抗体的免疫偶联物、激素或其组合，任选配制于一种可药用的载体中。
40.权利要求39的方法，其中所述的治疗剂选自与EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、VEGF或其它肿瘤血管发生抗原、Ga733及其组合反应的人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，并且以治疗有效量同时地或按顺序地对所述的受试者进行给药。
41.权利要求40的方法，其中所述的抗体或其片段是裸的或被偶联到另一种治疗剂上。
42.权利要求23-35的任意一项的方法，其中所述的治疗剂不是DTIC。
43.权利要求39的方法，其中所述的细胞毒性剂是一种药物或毒素。
44.权利要求43的方法，其中所述的药物具有选自抗有丝分裂剂、烷化剂、抗代谢物、抗血管生成剂、凋亡剂、生物碱、COX-2和抗生素及其组合的药理学特性。
45.权利要求43的方法，其中所述的药物选自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环霉素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、抗代谢物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、铂配位化合物、长春花生物碱、取代的脲、甲肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、拮抗剂、内皮他丁、紫杉醇、喜树碱、阿霉素和它们的类似物及其组合。
46.权利要求43的方法，其中所述毒素为微生物的、植物的或动物的毒素，选自蓖麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、葡萄球菌肠毒素A、商陆抗病毒素、白树毒素、白喉毒素、假单胞菌外毒素和假单胞菌内毒素。
47.权利要求39的方法，其中所述的免疫调节剂选自细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干扰素(IFN)、干细胞生长因子、红细胞生成素、血小板生成素及其组合。
48.权利要求47的方法，其中所述的淋巴毒素是肿瘤坏死因子(TNF)，所述的造血因子为白介素(IL)，所述的集落刺激因子为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，所述的干扰素是干扰素α、β或γ，所述的干细胞生长因子被指定为″S1因子″。
49.权利要求47的方法，其中所述的免疫调节剂包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ干扰素、TNF-α或其组合。
50.权利要求39的方法，其中所述的放射性核素的能量为20-10,000keV。
51.权利要求50的方法，其中所述的放射性核素选自125I、131I、90Y、88Y、225Ac、177Lu、188Re、186Re及其组合。
52.权利要求39的方法，其中所述的光敏治疗剂为一种色素原或染料。
53.权利要求44的方法，其中所述烷化剂为达卡巴嗪。
54.权利要求53的方法，其中以100-600毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予所述MN-14抗体或其片段。
55.权利要求54的方法，其中以300毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予所述MN-14抗体或其片段。
56.一种治疗甲状腺髓样癌的方法，包括同时或按顺序地给予受试者治疗有效量的III类抗CEA抗体或其片段和至少一种治疗剂，它们任选配制于一种可药用的载体中。
57.权利要求56的方法，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述人源化的MAb基本上保留了鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
58.权利要求56的方法，其中所述的III类抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠III类抗CEA MAb的III类抗CEA结合特异性。
59.权利要求56的方法，其中所述的III类抗CEA单克隆抗体或其片段是MN-14抗体或其片段。
60.权利要求59的方法，其中所述的MN-14单克隆抗体或其片段包含鼠MN-14单克隆抗体的互补决定区(CDRs)，其中所述MN-14抗体的轻链可变区的CDRs包含含有氨基酸序列KASQDVGTSVA的CDR1；含有氨基酸序列WTSTRHT的CDR2；和含有氨基酸序列QQYSLYRS的CDR3；所述III类抗CEA抗体的重链可变区的CDRs包含含有TYWMS的CDR1；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2；和含有LYFGFPWFAY的CDR3。
61.权利要求60的方法，其中所述的MN-14单克隆抗体与CEA反应，但不与正常的交叉反应性抗原(NCA)和胎粪抗原(MA)反应。
62.权利要求61的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是人源化的MN-14抗体或其片段。
63.权利要求61的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是嵌合的MN-14抗体或其片段。
64.权利要求61的方法，其中所述MN-14单克隆抗体或其片段是完全的人MN-14抗体或其片段。
65.权利要求62的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段的轻链和重链可变区的构架区(FRs)包含至少一个取代自鼠MN-14单克隆抗体的相应FRs的氨基酸。
66.权利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14抗体的所述相应FR的氨基酸，所述氨基酸选自图14A-C或15B(MN-14)的鼠重链可变区的氨基酸残基24、28、30、48、49、74和94。
67.权利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含至少一个来自所述鼠MN-14轻链可变区的所述相应FR的氨基酸。
68.权利要求65的方法，其中所述人源化MN-14抗体或其片段包含如图13A或15A(hMN-14)或16A中所示的轻链可变区，以及图14A-C或15B(hMN-14)或16B中所示的重链可变区。
69.权利要求56-68的任意一项的方法，其中所述的片段选自F(ab′)2、Fab′、Fab、Fv和sFv。
70.权利要求56-68的任意一项的方法，其中所述的治疗剂选自人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，所述的单克隆抗体或其片段选自II类抗CEA单克隆抗体、III类抗CEA单克隆抗体及其片段，并且以治疗有效量同时地或按顺序地进行给药。
71.权利要求70的方法，其中所述抗体或其片段是裸的或偶联到另一种治疗剂上的抗体。
72.权利要求56-68的任意一项的方法，其中所述的治疗剂选自裸抗体、细胞毒性剂、药物、放射性核素、免疫调节剂、光敏治疗剂、CEA或非CEA抗体的免疫偶联物、激素或其组合，任选配制于一种可药用的载体中。
73.权利要求72的方法，其中所述的治疗剂选自与EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、EGP-2、HER2/neu、BrE3、Le-Y、A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、VEGF或其它肿瘤血管发生抗原、Ga733及其组合反应的人源化的、嵌合的、人的或鼠的单克隆抗体或其片段，并且以治疗有效量同时地或按顺序地对所述的受试者进行给药。
74.权利要求73的方法，其中所述的抗体或其片段是裸的或被偶联到另一种治疗剂上。
75.权利要求56-68的任意一项的方法，其中所述的治疗剂不是DTIC。
76.权利要求72的方法，其中所述的细胞毒性剂是一种药物或毒素。
77.权利要求72的方法，其中所述的药物具有选自抗有丝分裂剂、烷化剂、抗代谢物、抗血管生成剂、凋亡剂、生物碱、COX-2和抗生素及其组合的药理学特性。
78.权利要求76的方法，其中所述的药物选自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、蒽环霉素、紫杉烷、COX-2抑制剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、抗代谢物、抗生素、酶、表鬼臼毒素、铂配位化合物、长春花生物碱、取代的脲、甲肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、拮抗剂、内皮他丁、紫杉醇、喜树碱、阿霉素和它们的类似物及其组合。
79.权利要求76的方法，其中所述毒素为微生物的、植物的或动物的毒素，选自蓖麻毒素、相思豆毒素、α毒素、皂草毒素、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、葡萄球菌肠毒素A、商陆抗病毒素、白树毒素、白喉毒素、假单胞菌外毒素和假单胞菌内毒素。
80.权利要求72的方法，其中所述的免疫调节剂选自细胞因子、干细胞生长因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、干扰素(IFN)、干细胞生长因子、红细胞生成素、血小板生成素及其组合。
81.权利要求80的方法，其中所述的淋巴毒素是肿瘤坏死因子(TNF)，所述的造血因子为白介素(IL)，所述的集落刺激因子为粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，所述的干扰素是干扰素α、β或γ，所述的干细胞生长因子被指定为″S1因子″。
82.权利要求72的方法，其中所述的免疫调节剂包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ干扰素、TNF-α或其组合。
83.权利要求72的方法，其中所述的放射性核素的能量为20-10,000keV。
84.权利要求83的方法，其中所述的放射性核素选自125I、131I、90Y、88Y、225Ac、177Lu、188Re、186Re及其组合。
85.权利要求72的方法，其中所述的光敏治疗剂为一种色素原或染料。
86.权利要求77的方法，其中所述烷化剂为达卡巴嗪。
87.权利要求86的方法，其中以100-600毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予所述MN-14抗体或其片段。
88.权利要求87的方法，其中以300毫克蛋白质/剂/注射的剂量给予所述MN-14抗体或其片段。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101607985B (zh) * 2008-12-24 2013-03-27 中国科学院生物物理研究所 抗人cea的单克隆抗体，包含其的组合物，及其用途
CN107033248A (zh) * 2017-05-03 2017-08-11 重庆精准生物技术有限公司 识别癌胚抗原的嵌合抗原受体及其应用

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8038994B2 (en) * 1996-05-15 2011-10-18 Quest Pharmatech Inc. Combination therapy for treating disease
JP4790413B2 (ja) * 2002-10-08 2011-10-12 イミューノメディクス、インコーポレイテッド 抗体療法
JP3989936B2 (ja) * 2005-04-07 2007-10-10 進 須永 抗腫瘍剤及び新規ｄｎアーゼ
AR065803A1 (es) * 2007-03-23 2009-07-01 Smithkline Beecham Corp Uso de un polipeptido de il- 18 humana y un anticuerpo anti- cd para preparar unmedicamento
KR20180077322A (ko) 2009-04-30 2018-07-06 텔 하쇼머 메디컬 리서치 인프라스트럭쳐 앤드 서비시스 리미티드． 항-ｃｅａｃａｍ1 항체들과 이를 이용하는 방법들
CA2774260C (en) * 2009-09-16 2018-10-09 Immunomedics, Inc. Class i anti-cea antibodies and uses thereof
CN102946904A (zh) * 2010-06-18 2013-02-27 埃克斯生物科技公司 关节炎治疗
DK2686020T3 (en) 2011-03-17 2017-05-01 Univ Birmingham REDIRECTED IMMUNTERY
WO2013054320A1 (en) 2011-10-11 2013-04-18 Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam)
KR20150008171A (ko) * 2012-05-10 2015-01-21 자임워크스 인코포레이티드 단일군 일가 항체 구조물 및 그의 용도
US11427647B2 (en) 2014-04-27 2022-08-30 Famewave Ltd. Polynucleotides encoding humanized antibodies against CEACAM1
MD20160130A2 (ro) 2014-04-27 2017-04-30 Ccam Biotherapeutics Ltd. Anticorpi umanizaţi contra CEACAM1
JP2018508481A (ja) 2015-02-02 2018-03-29 ザ ユニバーシティ オブ バーミンガム 複数のｔ細胞エピトープを有する標的化部分ペプチドエピトープ複合体
CN107663240B (zh) 2016-07-29 2021-01-12 中国人民解放军第四军医大学 高度糖基化cea特异性结合的单链抗体及其在检测和治疗上的应用
JP2022514262A (ja) 2018-12-17 2022-02-10 レビトープ リミテッド 双子型免疫細胞エンゲージャー
JP2022539344A (ja) 2019-06-26 2022-09-08 江蘇恒瑞医薬股▲ふん▼有限公司 抗ｃｅａ抗体及びその応用
CN114729035B (zh) * 2019-12-16 2024-04-16 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗cea抗体-依喜替康类似物偶联物及其医药用途
CN112557662B (zh) * 2021-02-22 2021-07-06 和卓生物科技（上海）有限公司 一种结直肠癌检测试剂盒
CN114560944B (zh) * 2022-03-30 2022-08-09 北京科跃中楷生物技术有限公司 胶体金颗粒标记的抗体及其应用
CN114409789B (zh) * 2022-03-30 2022-06-07 北京科跃中楷生物技术有限公司 一种胶体金颗粒标记方法及检测试剂盒

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4970071A (en) * 1985-01-18 1990-11-13 Mcmichael John Immunotherapeutic methods and compositions employing antigens characteristic of non human malignant neoplasms
US6096289A (en) * 1992-05-06 2000-08-01 Immunomedics, Inc. Intraoperative, intravascular, and endoscopic tumor and lesion detection, biopsy and therapy
US5874540A (en) * 1994-10-05 1999-02-23 Immunomedics, Inc. CDR-grafted type III anti-CEA humanized mouse monoclonal antibodies
CA2253904A1 (en) * 1996-05-03 1997-11-13 Immunomedics, Inc. Targeted combination immunotherapy of cancer

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101607985B (zh) * 2008-12-24 2013-03-27 中国科学院生物物理研究所 抗人cea的单克隆抗体，包含其的组合物，及其用途
CN107033248A (zh) * 2017-05-03 2017-08-11 重庆精准生物技术有限公司 识别癌胚抗原的嵌合抗原受体及其应用

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