CN1689398A - 一种紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法，其特征在于：采单孢子苗上网(即是将放散的单孢子接种到空白网帘上)在封闭的陆上水槽中进行；在水槽内放散和接种单孢子：对母苗网放散单孢子的过程进行跟踪计数，对采单孢子苗上网过程实施监控，每次接种网帘的数量依单孢子的数量来定，按每亩网帘接种1～3亿单孢子的密度采苗；母苗网的来源应是能够大量放散单孢子的良种品系苗网；可以是当年用传统的贝壳丝状体育苗技术育成，亦可以是从一年半之内(18个月)采单孢子苗上网育成的子苗网中选择优质苗网进行冷冻保存，经过复苏后作为母苗网。本发明去掉了紫菜传统育苗繁杂的贝壳育苗生产环节，操作简便易行且可靠、稳定，易于应用。

Description

一种紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法

技术领域

本发明涉及海藻栽培，具体地说是一种紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法。

背景技术

紫菜是最重要的人工栽培海藻，其产值占世界上全部人工栽培海藻的三分之二，目前只有中日韩三个国家有人工栽培紫菜的产业。三国的紫菜育苗99％以上都是采用传统的贝壳丝状体育苗技术，每公顷(相当于15亩)紫菜网帘最少需要有15平方米的室内水池培养贝壳丝状体，育苗期长达5～10个月，长期存在育苗效率低、稳定性差、费时费力成本高等问题有待研究解决。寻找更为先进和稳定可靠的无贝壳丝状体育苗新技术，一直是国内外藻类学界数十年来的理想和努力追求的目标。单孢子本来就是紫菜的繁殖细胞，极具应用开发的潜力，尽管藻类学家和生产者知道和认识单孢子已有50多年，但始终未能被研究开发成为一种令人满意的生产性单孢子育苗技术体系。

发明内容

为了克服上述不足，本发明的目的是提供一种育苗效率高、稳定性好、省时省力的紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法。

为了实现上述目的，本发明技术方案如下：

1)采单孢子苗上网在封闭的陆上水槽中进行，将放散的单孢子接种到空白网帘上；2)在水槽内放散和接种单孢子：对母苗网放散单孢子的过程进行跟踪计数，对采单孢子苗上网过程实施监控，每次接种网帘的数量依单孢子的数量来定，按每亩网帘接种1～3亿单孢子的密度采苗；3)母苗网的来源应是能够大量放散单孢子的良种品系苗网；可以是当年用传统的贝壳丝状体育苗技术专门育成，亦可以是从18个月之内采单孢子苗上网育成的子苗网中选择优质苗网进行冷冻保存，经过复苏后作为母苗网。其中：

步骤1)中所述采单孢子苗上网是在封闭的水槽内进行，实施上网的日期需与当年当地的单孢子苗网适宜下海季节相一致；步骤2)中所述监控条件为：槽内海水为洁净过滤海水，水温16～22℃，母苗网在水槽内放散单孢子的时间每次10～30分钟，期间每隔5～6分钟轻轻摆动槽内母苗网一次，母苗网与海水用量比为每亩苗网0.5～1.0吨海水；所述对放散过程进行跟踪计数是指：每次放散后将母苗网取出晾放，立即取槽内水样计数，当水样中的单孢子浓度达到100个/ml以上时即可放入空白网采单孢子苗；步骤2)中所述在水槽内放散和接种单孢子可持续进行2～4天；步骤4)中所述在水槽内放散和接种单孢子可以在一天内进行1～4次；冷冻温度为-18～-24℃，保存期3～18个月；所述冷藏网出库后在海水中的复苏适宜温度为20～16℃，复苏期1～3天；海面水温16～22℃为合宜的采单孢子苗下海接种季节。

本发明具有如下优点：

1.本发明去掉了紫菜传统育苗繁杂的贝壳育苗生产环节，不但操作简便易行而且更为可靠、稳定，易于迅速推广应用。

2.实施本发明，育苗劳力不到传统技术的三分之一，育苗成本不到传统技术的二分之一，具有创造巨大社会经济效益的潜力。

3.本发明育苗效率极高，由母苗网到子苗网的接种比在100倍以上，比现有技术中海上采单孢子育苗提高了10余倍，或相当于传统的贝壳育苗技术的100倍以上，可以满足大规模、高效率和低成本紫菜育苗生产的实用化要求，属于突破性的进展，是紫菜人工育苗栽培史上的重大创新。

4.本发明技术路线以现代细胞生物技术为依托，基本完整、成熟、配套、自成体系，特别适用于条斑紫菜等具有放散单孢子特性的紫菜种类。中国长江以北地区以及日本、韩国都以条斑紫菜为主要栽培对象，本发明在这些海域的应用前景非常之广阔。

具体实施方式

实施例1

母苗网来源于能够大量放散单孢子的条斑紫菜0106品系(野生型)，先采用传统育苗技术于4月20日将经过长期保存的0106品系悬浮丝状体细胞接种到贝壳上，培养成单一品系的贝壳丝状体，9月20日进行了专一性的室内采壳孢子苗上网，采苗后立即将这批壳孢子苗网移植到海区进行海上出苗，至10月15日已在海上发育成长为大量放散单孢子的母苗网。将其由开放的海上取回，放在封闭的陆上水槽中进行采单孢子苗上网，对单孢子放散过程实施有效的跟踪计数和监控，每次接种网帘的数量依放散的单孢子数量来定，本实施例接种密度为每亩空白苗网接种2亿单孢子，当水槽中的孢子浓度达到100个以上时放入空白网进行采苗水槽内的海水为洁净过滤海水，水温16℃，每亩母苗网海水用量为1吨；第一天母苗网移入水槽中，稍加搅动槽内海水5分钟单孢子很快放出，10分钟后结束放散，将母苗网取出晾放，立即取样计数结果表明，该张30m²的母苗网第一次放散了5亿单孢子，接着就进行了采单孢子苗上网；当天这种放散和接种单孢子反复进行了4次，第二天进行了2次，两天内一共放出了22亿单孢子，一共采了11亩单孢子子苗网，总采苗效率达到1∶72，放出的单孢子细胞健康，附着、萌发正常；一周后对这些子苗网分别作检查，显微镜下很容易检查到3～0细胞幼苗，4周后再次作检查时，每厘米网线上的小紫菜都在100株以上，网帘出苗均匀达到生产要求。本实施例表明了在封闭型水槽内采单孢子苗的高效率和优越性，以及以单孢子育苗代替传统贝壳丝状体育苗的巨大潜力。

实施例2

与实施例1不同之处在于：

母苗网来源于上一年经海上制备单孢子苗网试验育成的条斑紫菜0316品系优质子苗网，正在大量放散单孢子。当年10月24日选择其中一张优质苗网(面积10m²)，放在零下18℃冰柜内冷冻保存。来年10月6日(保存期为374日)将其作为母苗网取出，放入20℃海水槽内复苏处理2天，10月8日上午将该网经晾晒后放回至20℃水槽中，接种密度为每亩空白苗网接种1亿单孢子，仅10分钟(含摆动6分钟)就开始大量放散单孢子，30分钟结束放散，取出母苗网晾干，取水样计数放散量后立即放入空白网进行采苗。每亩母苗网海水用量为0.5吨；当天在水槽内放散和接种单孢子反复进行了3次，第2天又进行了2次；两天内一共放散了8亿单孢子，一共顺利接种制备了144张子苗网共1440m²，一周后网帘上已出现0.3～1mm的幼苗，4周后取样测定3～10mm紫菜的出苗密度为256～545株/cm。大多数均长成为新一代的优质母苗网。挑选出其中最好的母苗网进入零下20℃冷库保存，备作来年之用。本实施例显示将正在大量放散单孢子的优质母苗网长期冷冻保存、返回海水中复苏后，放散单孢子的数量多、质量好、采苗上网效率达到1∶144，展示出巨大的应用前景。

本实施例所述保存期可以延至18个月。

实施例3

与实施例1、2不同之处在于：

母苗网来源于室内经悬浮丝状体育苗试验育成的条斑紫菜0312品系优质母苗网，正在大量放散单孢子。选择其中一张优质小苗网(面积2m²)，放在零下24℃冰柜内冷冻保存了3个月将其作为母苗网取出，在人工控制温度为18℃条件下复苏仅一天就放至水槽中开始放散单孢子，接种子苗网的接种密度为3亿孢子，水槽内的海水水温18℃，放散单孢子时间为30分钟(含摆动6分钟)，每亩母苗网海水用量为0.7吨；每次放散后都将母苗网取出晾放，并立即取槽内水样计数，然后进行水槽内采苗上网，当天在水槽内放散和接种单孢子反复进行了2次，后来又持续进行了3天，6次上网；四天内一共接种制备了8次共204m²网帘，该实施例的采苗上网效率达到了1∶102的高效率。后来都育成了合格的母苗网。选出其中的优质母苗网进入20℃冷库保存备用。本实施例是为进行小型试验设计的方法，它从另一侧面反映了本发明的稳定性和成熟性。

所述0312单孢子母苗网的制备操作如下：

采用培养容器为5L细口瓶(可培养25g紫菜丝状体细胞)，设置在温度、光线、营养和通气均可调的育苗室内，安放在46×133×230cm的四层结构培养架上。使用条斑紫菜紫菜0312品系，所述藻丝发育期15℃配以18小时长光照26周，孢子囊枝发育时期26℃配以8小时短光照10周；壳孢子囊发育时期20℃配以12小时短光照10周；壳孢子囊成熟时期降温至17℃配以8小时短光照7周。经过322天的培养，至3期结束其同步发育率达到了80％以上，第4个发育期的前6周未曾冲水，孢子放散少，第7周的增加在夜间冲水，2天后即进入孢子放散，冲水延续了7天，累计放散孢子的总量达到4000万/g细胞。在室内按每亩网帘接种1.5亿孢子进行采苗，顺利采苗上网，网帘留水槽内长出0.3～1mm幼苗，当年10月5日下海，下海2周后取样镜检，发现幼苗长1～2mm，密度210株/cm并大量放散单孢子，成为本发明实施例3需要的母苗网。上述的夜间冲水的简单装置如附图，用可漏水的300目的尼龙筛网作冲水袋，傍晚(如下午16时)采用潜水泵(每小时流量可以为3t)，使盛放在冲水袋底部的细胞在水流的冲击下，整夜保持不断翻滚的状态，凌晨(如5时)结束冲水，转移到水槽中进行悬浮丝状体细胞采苗上网。

以上三个实施例说明单孢子母苗网的获得可以是多途径的，来自不同途径的单孢子子苗网都能够成长为健康的生产网，育苗的稳定性比传统育苗技术大大提高，长期困扰我国紫菜栽培业的育苗效率低下和优质苗网育成率低的技术难题将可通过采用本发明获得根本性的解决。

Claims (7)

1.一种紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法，其特征在于：1)采单孢子苗上网在封闭的陆上水槽中进行，将放散的单孢子接种到空白网帘上；2)在水槽内放散和接种单孢子：对母苗网放散单孢子的过程进行跟踪计数，对采单孢子苗上网过程实施监控，按每亩网帘接种1～3亿单孢子的密度采苗；3)母苗网的来源应是能够大量放散单孢子的良种品系苗网；可以是当年用传统的贝壳丝状体育苗技术育成，亦可以是从18个月内采单孢子苗上网育成的子苗网中选择优质苗网进行冷冻保存，经过复苏后作为母苗网。

2.按权利要求1所述紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法，其特征在于：步骤1)中所述采单孢子苗上网是在封闭的水槽内进行，实施上网的日期需与当年当地的单孢子苗网适宜下海季节相一致。

3.按权利要求1所述紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法，其特征在于：步骤2)中所述监控条件为：槽内海水为洁净过滤海水，水温16～22℃，母苗网在水槽内放散单孢子的时间每次10～30分钟，期间每隔5～6分钟摆动槽内母苗网一次，母苗网与海水用量比为每亩苗网0.5～1.0吨海水；所述对放散过程进行跟踪计数是指：每次放散后将母苗网取出晾放，立即取槽内水样计数，当水样中的单孢子浓度达到100个/ml以上时即可放入空白网采单孢子苗。

4.权利要求1所述紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法，其特征在于：步骤2)中所述在水槽内放散和接种单孢子可持续进行2～4天。

5.按权利要求1所述紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法，其特征在于：步骤2)中所述在水槽内放散和接种单孢子可以在一天内进行1～4次。

6.按权利要求1所述紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法，其特征在于：冷冻温度为-18～-24℃，保存期3～18个月；所述冷藏网出库后在海水中的复苏适宜温度为20～16℃，复苏期1～3天。

7.按权利要求1所述紫菜无贝壳单孢子细胞育苗方法，其特征在于：海面水温16～22℃为合宜的采单孢子苗下海接种季节。