CN1683018A - 断奶仔猪腹泻和猪水肿病的基因工程疫苗 - Google Patents

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CN1683018A CN 200510038480 CN200510038480A CN1683018A CN 1683018 A CN1683018 A CN 1683018A CN 200510038480 CN200510038480 CN 200510038480 CN 200510038480 A CN200510038480 A CN 200510038480A CN 1683018 A CN1683018 A CN 1683018A
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高崧
刘秀梵
施慧
杨健美
曹传闺
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Abstract

断奶仔猪腹泻和猪水肿病的基因工程疫苗，属于畜牧兽医技术领域。依据faeG(F4)、fedA(F18)和Stx 2e B亚单位的基因序列，设计含特异酶切位点的引物；以致PWD、ED大肠杆菌的质粒或基因组DNA为模板，采用PCR法扩增出上述保护性抗原基因；将上述基因定向串联于表达性质粒pGEX－6P－1，经转化宿主菌BL21后，进行IPTG诱导表达，并经SDS－PAGE和Western－blot证明目的基因确已表达。再将表达上述3个保护性抗原基因的重组菌，不同途径免疫小鼠和猪，评价其免疫原性及安全性。试验表明，该疫苗可有效预防PWD和ED，安全性和免疫原性可靠，免疫保护率达80％以上。

Description

断奶仔猪腹泻和猪水肿病的基因工程疫苗
技术领域
本发明涉及断奶仔猪腹泻和猪水肿病疫苗的研制，属于畜牧兽医
技术领域。
背景技术
断奶仔猪腹泻〔postweaning Escherichia coli diarrhoea，PWD〕和猪水肿病〔edema disease，ED〕是断奶仔猪死亡的重要病原，由大肠杆菌引起的断奶仔猪死亡高峰通常在5至10周龄，PWD和ED易感年龄相近。PWD患病仔猪拉淡黄或灰白稀粪，常持续1周或1周以上，仔猪逐渐消瘦，精神沉郁，食欲减退，被毛粗乱，部分仔猪死亡；ED以共济失调，面部或全身水肿，高死亡率为特征。特定血清型的大肠杆菌是引起PWD和ED的主要病原。引起PWD和ED的大肠杆菌主要产生F4〔K88〕和F18两类粘附素，除可产生这两类粘附素外，致PWD和ED大肠杆菌另一个显著特点是可产生志贺氏菌毒素2e变异体〔Shigatoxin 2e，Stx 2e〕，鉴于F4、F18粘附素在致PWD和ED大肠杆菌的高出现率及Stx 2e间较高的相关性，可以认定F4、F18和Stx 2e是上述大肠杆菌的主要致病因子。
在猪水肿病防制方面，菌体灭活苗需加多个菌株，即便达到有限效果，每个菌株均需达一定浓度，几个菌株加在一起势必造成疫苗中细菌总浓度较高，不可避免地产生副作用，特别值得一提的是，常规疫苗只考虑了菌株的O血清型，而没有考虑其主要保护性抗原，即F4、F18、Stx 2e等，因此常规疫苗的免疫保护效果必然有限。因此研制免疫保护效果好，副作用低的基因工程疫苗为大势所趋。断奶仔猪腹泻疫苗则未见报道。国内外尚无PWD、ED基因工程疫苗产品。
发明内容
本发明的目的是克隆并表达致PWD、ED大肠杆菌免疫保护性抗原F4、F18、Stx 2e基因，从而研制出相应的基因工程疫苗。经过一系列免疫保护试验，证明研制的预防断奶仔猪腹泻和猪水肿病的基因工程疫苗的高效性。
实现本发明目的的技术方案：
依据faeG(F4)、fedA(F18)和Stx 2e B亚单位的基因序列，设计含特异酶切位点的引物；以致PWD、ED大肠杆菌的质粒或基因组DNA为模板，采用PCR法扩增出上述保护性抗原基因；将上述基因定向串联于表达性质粒pGEX-6P-1，经转化宿主菌BL21后，进行IPTG诱导表达，并经SDS-PAGE和Western-blot证明目的基因确已表达。再将表达上述3个保护性抗原基因的重组菌，不同途径免疫小鼠和猪，评价其免疫原性及安全性。
本发明通过构建表达大肠杆菌免疫保护性抗原F4、F18、Stx 2e基因的重组菌，并对小鼠进行腹腔免疫，结果显示经重组菌免疫后的小鼠血清中，产生了分别针对F4、F18、Stx2e抗原特异性的IgG，相应的抗体水平从免疫后7天开始逐步升高，在第二次免疫后21天左右达到了较高的水平，并且在攻毒后对小鼠提供了较好的保护，免疫保护率均达80％以上。
附图说明
图1为重组菌质粒图谱；
具体实施方式
1.用PCR方法克隆出F4、F18、Stx 2e等免疫保护性抗原基因。
2.用分子生物学方法将上述基因串联于表达载体pGEX-6P-1中，并进行成功表达。
3.在鼠、猪体内进行免疫保护试验，证明研制的基因工程疫苗可有效预防PWD和ED。

Claims (1)

1、一种断奶仔猪腹泻和猪水肿病的基因工程疫苗，其特征是依据faeG(F4)、fedA(F18)和Stx 2e B亚单位的基因序列，设计含特异酶切位点的引物；以致PWD、ED大肠杆菌的质粒或基因组DNA为模板，采用PCR法扩增出上述保护性抗原基因；将上述基因定向串联于表达性质粒pGEX-6P-1，经转化宿主菌BL21后，进行IPTG诱导表达，并经SDS-PAGE和Western-blot证明目的基因确已表达。
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CN104593397B (zh) * 2015-01-12 2018-11-20 东北农业大学 一种优化的产肠毒素性大肠杆菌多价抗原基因序列及其在预防断奶仔猪腹泻中的应用
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