CN1666604A - 一种尘螨的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属生物技术领域，具体涉及一种户尘螨的培养方法。本方法通过采集含螨灰尘、初期小量培养和毛发针挑取尘螨进行大瓶大量培养及反复饱和盐水浮聚法收获等步骤，在可控的温度和湿度下培养户尘螨，达到较好效果。本方法避免了传统方法挑取螨类费事、费时及采用开放式培养容器易造成污染、培养物繁殖速度慢，纯度低的缺陷；采用的培养基方便易得，配比合理，培养物繁殖速度快，纯度达90％以上。
Description
技术领域
本发明属生物技术领域，涉及一种尘螨的培养方法，具体涉及一种户尘螨的培养方法。
背景技术
当前，变应性疾病日趋严重，尘螨是重要的室内变应原，其中，与人类过敏性疾病关系最密切的有户尘螨和粉尘螨等。作为重要的变应原种类，尘螨可以引起过敏性哮喘、鼻炎、遗传过敏性皮炎等多种变应性疾病。流行病学调查发现，80％的哮喘患者对尘螨过敏，且儿童的过敏率高于成人。
尘螨的纯培养为实验室研究螨体或其排泄物的变应原性以及螨性变应性疾病的疫苗发展提供了物质基础。另外，目前广泛应用于临床的脱敏治疗所用制剂亦为稀释的天然抗原。目前对粉尘螨的培养，各方面条件都比较成熟，国内亦有相关文献发表，但尚无成功建立起户尘螨培养体系的单位；国际上，也只有泰国等为数不多的几个实验室能大量培养户尘螨并作为商品出售。对于户尘螨的培养，其温度和湿度的控制没有争议，在培养基的选择上有所不同，国外有用酵母粉、鱼粉、肝粉、人皮屑、动物饲料等其中若干种混合使用，但其培养成本价格高，培养物的纯度及繁殖速度尚不理想。一般粉尘螨培养用面粉、米粉等就可满足培养条件，但户尘螨的培养条件尚未见详细报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种尘螨的培养方法，尤其涉及一种户尘螨的培养方法。
本发明方法选用的培养基方便易得，配比合理，在可控的温度和湿度下，对户尘螨进行培养，达到较好效果，培养物繁殖速度快，纯度达90％以上。
本发明方法通过下述步骤实现，
1、采集含螨灰尘，
取床褥、草席、沙发等处灰尘镜检，经形态鉴定后进入初期培养阶段；
2、初期小量培养，
传统方法挑取螨类，一般采用解剖针。但由于解剖针为刚性材质，螨类爬上以后，不易使其落下，浪费时间。
本发明方法采用毛发针从上述采集的灰尘中挑取尘螨5～10对至盛有2mm左右培养基的小号玻璃瓶(底面积4cm2左右，高度1cm左右)中培养，6～8周后确定增长良好且无杂螨，可转入大瓶大量饲养。
所述培养基含下述组分：1)酵母粉(日本和光纯药工业株式会社/国产)，2)实验室动物饲料(市售)，3)鱼粉(市售)，动物饲料磨碎后过100目网筛，鱼粉过100目网筛，小鼠饲料和鱼粉分别120℃干热消毒1小时，装瓶备用。
使用前，将酵母粉，小鼠饲料和鱼粉按1～3∶1～3∶0～2的比例混合，具体可视所购各组份的实际成分进行调整。大量培养时，可直接在培养基中加入10-20％(w/w)高压灭菌水，调节培养基湿度，充分摇匀。
为利于湿热消毒和易镜下观察，本方法所述培养瓶选用玻璃材质，瓶口光滑，高度大于1cm；底面积：＞4cm2，Wattman 3MM滤纸封口。
一般培养螨类多采用开放式培养容器，加盖，需隔两三天取出透气，但较难避免杂螨或其它昆虫进入培养系统，造成污染；或有用棉花、纸塞塞堵瓶口，此法虽可以保证空气的进出，但孔隙大小较难控制，仍然难以杜绝螨类进出。
本方法的培养温度为25℃，湿度为75％。
本发明采用饱和食盐水或雾化器控制培养湿度，所述饱和食盐水溶液含0.1～0.5％的新洁尔灭(苯扎溴铵)防止培养系统内霉菌生长。
培养物繁殖速度快，小量培养6～8周后确定增长良好，挑取100只户尘螨转入2.5g培养基，12～16周后可以达到收获标准(计数每0.01克培养基内含50～100个左右尘螨)，纯度达90％以上，采用反复饱和盐水浮聚法收获。
具体实施方式
实施例1
取床褥、草席、沙发等处灰尘镜检，经形态鉴定后进行初期小量培养，采用毛发针从上述采集的灰尘中挑取尘螨5～10对至盛有2mm左右培养基的小号玻璃瓶中培养，，所述玻璃瓶底面积4cm2，高度1cm，6～8周后确定增长良好且无杂螨，转入大瓶大量饲养。
所述培养基含下述组分：1)酵母粉(日本和光纯药工业株式会社/国产)，2)实验室动物饲料(市售)，3)鱼粉(市售)，动物饲料磨碎后过100目网筛，鱼粉过100目网筛，小鼠饲料和鱼粉分别120℃干热消毒1小时，装瓶备用。
使用前，将酵母粉，小鼠饲料和鱼粉按1∶1∶1的比例按常规方法混合。大量培养时，直接在培养基中加入10％(w/w)高压灭菌水，调节培养基湿度，充分摇匀。
为利于湿热消毒和易镜下观察，本方法所述培养瓶选用玻璃材质，瓶口光滑，Wattman 3MM滤纸封口。培养温度为25℃。
采用饱和食盐水控制培养湿度在75％，溶液含0.1～0.5％的新洁尔灭(苯扎溴铵)防止培养系统内霉菌生长。
培养物繁殖速度快，小量培养6～8周后确定增长良好，挑取100只户尘螨转入2.5g培养基，12～16周后可以达到收获标准(计数每0.01克培养基内含50～100个左右尘螨)，纯度达90％以上，采用反复饱和盐水浮聚法收获。
实施例2
取床褥、草席、沙发等处灰尘镜检，经形态鉴定后进行初期小量培养，采用毛发针从上述采集的灰尘中挑取尘螨5～10对至盛有2mm左右培养基的小号玻璃瓶中培养，，所述玻璃瓶底面积4cm2，高度1cm，6～8周后确定增长良好且无杂螨，转入大瓶大量饲养。
所述培养基含下述组分：1)酵母粉(日本和光纯药工业株式会社/国产)，2)实验室动物饲料(市售)，3)鱼粉(市售)，动物饲料磨碎后过100目网筛，鱼粉过100目网筛，小鼠饲料和鱼粉分别120℃干热消毒1小时，装瓶备用。
使用前，将酵母粉，小鼠饲料和鱼粉按2∶2∶1的比例按常规方法混合。大量培养时，直接在培养基中加入16％(w/w)高压灭菌水，调节培养基湿度，充分摇匀。
为利于湿热消毒和易镜下观察，本方法所述培养瓶选用玻璃材质，瓶口光滑，Wattman 3MM滤纸封口。培养温度为25℃。
采用雾化器控制湿度在75％。
培养物繁殖速度快，小量培养6～8周后确定增长良好，挑取100只户尘螨转入2.5g培养基，12～16周后可以达到收获标准(计数每0.01克培养基内含50～100个左右尘螨)，纯度达90％以上，采用反复饱和盐水浮聚法收获。
Claims (7)
1、一种尘螨的培养方法，其特征是包括下述步骤，
1)采集含螨灰尘，
取床褥、草席、沙发等处灰尘镜检，经形态鉴定后进入初期培养阶段；
2)初期小量培养，
采用毛发针挑取尘螨至盛有培养基的玻璃瓶中培养，6～8周后转入大瓶大量培养，
所述培养基含下述配比的组分：酵母粉∶实验室动物饲料∶鱼粉为1～3∶1～3∶0～2，动物饲料磨碎后过100目网筛，鱼粉过100目网筛，实验室动物饲料和鱼粉分别120℃干热消毒1小时，装瓶备用，
采用饱和食盐水或雾化器控制湿度在75％；
3).采用反复饱和盐水浮聚法收获。
2、按权利要求1所述的尘螨的培养方法，其中所述的毛发针选自人的头发或睫毛或眉毛或猪鬃，以棉线固定于竹签。
3、按权利要求1所述的尘螨的培养方法，其中所述的培养基含下述配比的组分：酵母粉∶实验室动物饲料∶鱼粉为1∶1∶1。
4、按权利要求1所述的尘螨的培养方法，其中所述的培养基含下述配比的组分：酵母粉∶实验室动物饲料∶鱼粉为2∶2∶1。
5、按权利要求1所述的尘螨的培养方法，其特征是所述的玻璃培养瓶采用Wattman滤纸封口。
6、按权利要求1所述的尘螨的培养方法，其特征是所述的培养基，大量培养时，在其中加入10-20％(w/w)高压灭菌水。
7、按权利要求1所述的尘螨的培养方法，其特征是所述的饱和食盐水溶液含0.1～0.5％的新洁尔灭。
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