CN1448725A - 在全自动酶免分析仪上实施abo血型全自动鉴定的方法及其装置 - Google Patents

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CN1448725A CN 02116296 CN02116296A CN1448725A CN 1448725 A CN1448725 A CN 1448725A CN 02116296 CN02116296 CN 02116296 CN 02116296 A CN02116296 A CN 02116296A CN 1448725 A CN1448725 A CN 1448725A
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沈民强
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Abstract

本发明涉及一种医学上的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法及其装置。本方法包括:a加样、b孵育、c规范凝集、d振荡悬浮、e静置、f读板、g计算、h打印输出鉴定结果的步骤。本装置是在其移板机械手可及的位置增设全自动离心机,该全自动离心机通过串孔线联接计算机,计算机增设全自动离心机驱动程序。因此,本发明方法具有操作方便,检测效率高、准确性好的优点;本发明装置具有结构简单,成本低,使用方便的优点。其技术方案具有广阔的推广前景,经济效益和社会效益显著。

Description

在全自动酶免分析仪上实施 ABO血型全自动鉴定的方法及其装置
技术领域
本发明涉及一种医学上的血型鉴定方法,特别是涉及一种在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法。本发明还涉及用于实施该方法的装置。
背景技术:
血型是人类血液的特征之一,其表达了产生抗原-抗体系统的遗传性,狭意来说是指红细胞抗原的差异。血型鉴定是为了减少输血发热反应和溶血性输血反应,其还可用于器官移植,肾脏移植和骨髓移植,另外还可用于疾病诊断和预防、亲生子鉴定、个体识别以及双生子卵生诊断等。
ABO血型鉴定是根据红细胞上有或无A抗原和B抗原,将血型分为A型、B型、AB型及O型四种典型类型。可利用红细胞凝集试验,通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原;所谓反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A和抗B抗体。
所需试剂和材料—
1、抗A(B型)、抗B(A型)及抗A(O型)分型血清。
2、5%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液。
3、受检者血清。
4、受检者5%红细胞盐水悬液。
现有鉴定方法—
1、平板法
(1)取洁净白磁砖或有凹槽玻板一块,用蜡笔划出反应小格,在正定型一端注明抗A、抗B、抗AB,反定型一端注出A细胞和O细胞。
(2)在正定型一端,各滴相应试剂血清一滴,滴被检测者5%红细胞1滴;在反定型一端各滴待检血清一滴,再滴相对应的5%试剂红细胞悬液(为3份的同型混合红细胞)1滴,混匀,18~22℃中放15min。然后摇动磁板,观察凝集效果。
2、试管法—
(1)取6只试管(12×60mm),3支分别用于正定型者注明抗A、抗B和抗AB;另三支用于反定型者注明A细胞、B细胞和O细胞。
(2)红细胞定型,将抗A、抗B和抗AB试剂血清1滴分别加到正定型的相应试管内,再加1滴待检的5%红细胞盐水悬液于以上各试管内,混匀,放室温5min。
(3)血清定型,分别将待检血清1滴,加到标记为A细胞、B细胞和O细胞的试管内,然后加相应的5%试剂红细胞1滴,混匀后放室温5min。
(4)将6只试管以1000r/min离心1min后观察结果。
(5)凝集强度判断标准;(该凝集强度可由分光光度仪根据不同凝集度的吸光度来判定)。
(+++++)表示红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。
(++++)表示红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。
(+++)表示红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。
(++)表示肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。
(+)表示镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。MF表示混合凝集外观,是指镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。
(-)表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。
(6)按下表报告受检者红细胞ABO血型
              ABO血型正反定型结果分型血清加受检者红细胞    受检者血型    受检者血清加各型试剂红细胞抗A    抗B      抗A+B                   A细胞     B细胞     O细胞+      -         +           A           -        +          --      +         +           B           +        -          --      -         -           O           +        +          -+      +         +           AB          -        -          -
上述平板法仅适用于手工操作,具有浪费人工的缺点,另外还存在试剂原因及人为操作失误所造成的误判。试管法既可用手工法操作,又可以用专用ABO鉴定仪来实施,其手工法同样存在浪费人力物力的缺点,现有专用ABO鉴定仪自动化程度低,价格昂贵,特别是因其不具备一体式的全自动离心机,不能实现真正意义上的全自动操作,其突出存在效率低的缺点。
现有全自动酶免分析仪即改进的高通量分光光度计,其是根据着色反应后的试样对特定波长光的吸收率来判定结果,其具有更高的自动化程度,已能实现从加样、孵育、试剂加注、洗板到结果判读的全程自动运行。目前,全自动酶免分析仪的种类繁多,常见的有TKA系列、迈克雷.费米、赛勒(变色龙)等等。酶免试验全过程自动化的意义,并非仅仅限于降低劳动强度,减少人为的误差,而且还在于可以普遍地、显著地提高酶免试验的特异性。现以瑞士哈美顿公司的迈克雷.费米、赛勒全自动酶免分析仪为例作简要介绍:
其包括计算机和主机两大部分,按功能可分为:
进板系统:可设定任意批量进板时间表,连续进板,可达数百批。每批可进入多达数块板,每块都将判读条码确定分析项目,进行正确识别(API),自动进入已编程相关方法处理,酶标板在系统中的运载是由独立的二维轨道系统快速实现的。
孵育系统:可控温(常温-750℃)20-30个孵育槽,具完善的防蒸发,精密控温与传感检控系统。特别是具有三种可编程控制的加热速度,以保障可选择的最佳孵育条件,孵育时间可任意设定。
洗板系统:三排24通道洗板系统,板孔液体传感器,可确保抽净洗板液,实现完美洗板。75种洗板动作,每板洗涤仅20秒。
试剂系统:可装载16-24种试剂,每种试剂具独立试剂瓶,注射器及条码识别,决无交叉污染与错加试剂。在吸前与分配后,完全液体水平控制,可检测并控制气泡形成,避免“假加试剂”造成的假阳性与假阴性。每板试剂分配不超过45秒。
混合系统:可编程控制的混合振荡器,可选择不同的振荡幅度与时间,以避免气泡形成,满足加酶试剂,加产色剂,加终止剂后的充分混匀要求。
读数系统:高灵敏度,块试后置8+1滤光及测光系统;8滤光位置,5滤光片标准配置。整板读数7秒种完成。
传感系统:所有部件、模块、系统均置于传感系统的监测之下,并由系统跟踪系统(TRACE)全自动追踪记录、诊断,实现CGMP对设备进行状态实时监控与记载要求,以利于输血后感染事件调查取证。
通过研究分析,我们发现前述ABO血型试管鉴定法的1、2、3和5、6步骤完全可在全自动酶免分析仪上实现(现有全自动酶免分析仪是根据着色反应后的试样对特定波长光的吸收率来判定结果,而ABO血型则是根据透过不同凝集块的光密度情况来判定结果,二者读板方式相同),其用于ABO血型鉴定的缺点是不具备能促使试样产生规范凝集块的离心功能。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述缺点,提供一种在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法。本发明还涉及用于实施该方法的装置。
为实现上述目的,本发明在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法其包括:a加样、b孵育、c规范凝集、d振荡悬浮、e静置、f读板、g计算、h打印输出鉴定结果的步骤。这样a、b、d、e、f、g、h步骤能直接在现有的全自动酶免分析仪上实现,为使试样形成规范的凝集扣,则在孵育步骤后增加规范凝集步骤,能使ABO血型鉴定在现有的全自动酶免分析仪上得到很好的实现,能充分利用各医院和血站已有的昂贵的全自动酶免分析仪,可大大提高设备利用率和节省社会资源。
作为优化,所述规范凝集的步骤是将孵育后的微孔板试样进行离心。
作为优化,所述微孔板试样的离心操作是由一体式的全自动离心机来实现。
作为优化,所述的全自动离心机安装在现有全自动酶免分析仪的移板机械手可及的位置,该全自动离心机由控制整机的计算机操控;或如果现有全自动酶免分析仪不具备移板机械手,则全自动离心机安装在该全自动酶免分析仪的空闲位置上,并装配搬移微孔板的移板机械手,且该全自动离心机和机械手同样由控制整机的计算机操控;或如果现有全自动酶免分析仪具有微孔板传送带,则全自动离心机通过微孔板传输装置装配在微孔板传送带附近。这样该类方法能保证ABO血型鉴定在现有全自动酶免分析仪上更好的实施,且能适应现有各种全自动酶免分析仪。
作为优化,所述的读板步骤是以580-660nm波长的光沿微孔最大直径进行多点扫描;所述的计算步骤是每孔中的最大吸光值减最小吸光值再除以最小吸光值,该得数如果大于介定值则为阳性,该得数如果小于介定值则为阴性。
作为优化,所述的读板步骤是以600-630nm波长的光沿微孔最大直径进行15-17点扫描。
用于实施在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,其包括现有的全自动酶免分析仪,其是在其移板机械手可及的位置增设全自动离心机,该全自动离心机通过串孔线联接计算机,计算机增设全自动离心机驱动程序;如果该全自动酶免分析仪不具备移盘机械手,则全自动离心机安装在该全自动酶免分析仪的空闲位置上,并装配搬移微孔板的移板机械手,且该全自动离心机和移板机械手通过串孔线联接计算机,该计算机增设全自动离心机和移板机械手的驱动程序;或如果现有全自动酶免分析仪具有微孔板传送带,则全自动离心机通过微孔板传输装置装配在微孔板传送带附近。
作为优化,其包括带移板机械手的全自动酶免分析仪,全自动离心机设置在全自动酶免分析仪的左侧,全自动离心机通过减振垫安装在全自动酶免分析仪的底座上,全自动离心机的控制信号线接入全自动酶免分析仪的计算机,该计算机同时增设全自动离心机的驱动程序。
作为优化,其包括不带移板机械手的全自动酶免分析仪,全自动离心机安装在该全自动酶免分析仪的空闲位置上,并装配搬移微孔板的移板机械手,且该全自动离心机和移板机械手通过串孔线联接计算机,该计算机增设全自动离心机和移板机械手的驱动程序。
作为优化,其包括带微孔板传送带的全自动酶免分析仪,则全自动离心机通过微孔板传输装置装配在微孔板传送带附近。
采用上述技术方案后,本发明在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法因为不需手工操作离心步骤,具有操作简便和检测速度快的优点,其不仅能降低劳动强度,减少人为的误差,而且还可以普遍地、显著地提高血型鉴定的特异性,使血型鉴定更安全可靠。这样可将血型鉴定步骤转化为连续的流水化作业过程,可大大节省人力和时间,更便于应用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)或甲基纤维等试剂来加速和规范凝集反应,减少孵育时间和提高判读的准确性。
采用上述技术方案后,本发明用于实施在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,具有一机两用功能,即能用于全自动酶免分析,又能用于全自动ABO血型鉴定,还能用于除红细胞以外的所有其它血型如ABO亚型、Rh型、Du型、MN型和P型血型的鉴定,购置一台本发明装置即可具备上述多种检测条件,能大大节省设备投资。
因此,本发明方法具有操作方便,检侧效率高、准确性好的优点;本发明装置具有结构简单,成本低,使用方便的优点。其技术方案具有广阔的推广前景,经济效益和社会效益显著。
图1是本发明装置实施例一的结构示意图;
图2是本发明装置实施例二的结构示意图:
图3是本发明装置实施例三的结构示意图;
图4是本发明装置实施例三的微孔板传输装置的结构示意图。
具体实施方式
本发明方法的实施例一
本发明在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法包括:a加样、b孵育、c规范凝集、d振荡悬浮、e静置、f读板、g计算、h打印输出鉴定结果的步骤。所述的abdefgh步骤由现有的赛勒“迷你雷斯”全自动酶免分析仪来实现,规范凝集的步骤是由一体式的全自动离心机来实现,其离心时间为1min。所述的全自动离心机安装在现有赛勒“迷你雷斯”全自动酶免分析仪的移板机械手可及的位置,其机体右侧及移板机械手轨道向外延伸,在其移板机械手可及的延伸位置增设全自动离心机,该全自动离心机由控制整机的计算机操控。所述的读板步骤是以620nm波长的光沿微孔最大直径进行16点扫描;所述的计算步骤是每孔中的最大吸光值减最小吸光值再除以最小吸光值,该得数如果大于介定值则为阳性,该得数如果小于介定值则为阴性。具体检测方法是:1、正定型:自动加样仪将样品血细胞连同生理盐水一同加入到样品血细胞稀释微孔板上,使每份样品血细胞浓度为4%,从稀释微孔板上吸取25ul样品血细胞,再加入经过适当稀释的抗-A、抗-B抗血清25ul,将U型板置于温控振荡器上孵育,条件:28℃、8min、400r/min、3accel。再置于平板全自动离心机上离心[1],条件:400r/min,离心1min。离心后再次置于温控振荡器上振荡,条件:28℃、1000r/min、2min、2accel;经过振荡、静置5~10min后凝集细胞沉积在孔底,不凝集细胞仍呈悬浮状态。将微孔板放在酶标仪上借助于Medusa2000软件分析判读结果,测定波长620nm,扫描点数16。反定型:自动加样仪分别将每份待测血浆各50ul加入到U型微孔板双孔中,并加入25ul相应的A型和B型红细胞,经过(1)孵育:28C、400r/min、8min、3accel(2)离心:400r/min、1min;(3)振荡悬浮:28℃、1000r/min、2min、2accel;(4)静置:5~10min。(5)判读:扫描点数16、测定波长620nm。见表1。
            表1正反配对定型结果判定
正定型            反定型           结果抗-A    抗-B    A型细胞    B型细胞+       -        -         +             A-       +        +         -             B-       -        +         +             O+       +        -         -             AB
注:“+”表示凝集,“-”表示不凝集
微板法ABO血型自动检测原理:启动计算机进入Medusa2000判读软件的读板程序后,待测微板进入自动扫描仪的暗室内,扫描方式为96孔同时进行,每孔沿最大孔径成线性扫描。若扫描点数取16个点,凝集孔和非凝集孔可获得两种不同曲线。凝集孔的红细胞凝块聚集于孔中央,吸光度大。而外周游离的红细胞减少甚至没有,吸光度小,非凝集孔的红细胞均匀分布,16个扫描点均较大,曲线平缓,经自动扫描后每孔都可获得一最小吸光度和一最大吸光度。凝集孔最大吸光度和最小吸光度差值较大,当超过界定值,结果判为阳性。非凝集孔吸光度差值较小,未超过界定值,结果判为阴性,每孔OK值计算公式为:
根据ABO血型系统的正反定型的原则[2]确定其血型。
试剂红细胞浓度为4%。
临界值选择
阴性临界值:对2000个阴性OD值进行数值统计,OD值在0~0.3(0.310)的为1个,占阴性OD值总数的0.05%,故把阴性临界值设定为0.35。阳性临界值:同样对2000个阳性OD值进行分析,OD值在0.6~4.5的为1998.OD值0.600的为2个,最低OD值是0.532,占阳性OD值总数的0.05%。故把阳性临界值设定为0.55。0.351~0.549为可疑区域,以此临界值判断,可疑区域样本数为万分之五。因此该临界值具有99.95的可靠性。可疑区域样本需进一步检测判断。
本发明方法的实施例二:
本发明在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法包括:a加样、b孵育、c规范凝集、d振荡悬浮、e静置、f读板、g计算、h打印输出鉴定结果的步骤。所述的abdefgh步骤直接由现有的TKA1HD型全自动酶免分析仪来实现,所述规范凝集的步骤是由一体式的全自动离心机来实现,其离心时间为1min。因为现有TKA1HD全自动酶免分析仪不具备移板机械手,则在该全自动酶免分析仪的前部增设全自动离心机,并在现有的两维活动架上装配与之配套的搬移微孔板的移板机械手,且该全自动离心机和机械手同样由控制整机的计算机操控。所述的读板步骤是以620nm波长的光沿微孔最大直径进行16点扫描;所述的计算步骤是每孔中的最大吸光值减最小吸光值再除以最小吸光值,该得数如果大于介定值则为阳性,该得数如果小于介定值则为阴性。具体检测方法同上。
本发明装置的实施例一:
用于实施本发明在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,其包括现有的赛勒“迷你雷斯”全自动酶免分析仪2,其机体及移板机械手1轨道向左侧延伸,在其移板机械手1可及的延伸位置增设全自动离心机3,为了减振全自动离心机3同底座4间装有橡胶缓冲垫,该全自动离心机3通过串孔线联接计算机,计算机增设全自动离心机驱动程序,该离心程序设定的离心时间为1min。
本发明装置的实施例二:
用于实施本发明在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,其包括现有的不具备移板机械手的TKA1HD全自动酶免分析仪2,在该全自动酶免分析仪2的前部增设全自动离心机3,并在现有的两维活动架6上装配与之配套的搬移微孔板的移板机械手1,且该全自动离心机3和移板机械手1通过串孔线联接计算机,该计算机增设全自动离心机3和移板机械手1的驱动程序,该离心程序设定的离心时间为1min。
本发明装置的实施例三:
用于实施本发明在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,其包括带微孔板传送带5的迈克雷费米全自动酶免分析仪2,全自动离心机3通过微孔板传输装置装配在微孔板传送带5的外侧,所述的微孔板传输装置包括位于微孔板传送带5内侧的推板器和全自动离心机3上的推板器,所述位于传送带5内侧的推板器是位于微孔板传送带5与全自动离心机3的微孔板相对应的位置,该推板器包括与板位相对应的推柄,该推柄的下面制有齿条,由主机控制的步进电机通过齿轮驱动该推柄。所述全自动离心机3的推板器包括与其板位相对应的推杆,该推杆的下面制有齿条,由主机控制的步进电机通过齿轮驱动该推杆。

Claims (10)

1、一种在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法,其包括:a加样、b孵育、c规范凝集、d振荡悬浮、e静置、f读板、g计算、h打印输出鉴定结果的步骤。
2、根据权利要求1所述的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法,其特征在于所述规范凝集的步骤是将孵育后的微孔板试样进行离心。
3、根据权利要求2所述的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法,其特征在于所述微孔板试样的离心操作是由一体式的全自动离心机来实现。
4、根据权利要求3所述的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法,其特征在于所述的全自动离心机安装在现有全自动酶免分析仪的移板机械手可及的位置,该全自动离心机由控制整机的计算机操控;或如果现有全自动酶免分析仪不具备移板机械手,则全自动离心机安装在该全自动酶免分析仪的空闲位置上,并装配搬移微孔板的移板机械手,且该全自动离心机和机械手同样由控制整机的计算机操控;或如果现有全自动酶免分析仪具有微孔板传送带,则全自动离心机通过微孔板传输装置装配在微孔板传送带附近。
5、根据权利权利要求1、2、3或4所述的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法,其特征在于所述的读板步骤是以580-660nm波长的光沿微孔最大直径进行多点扫描;所述的计算步骤是每孔中的最大吸光值减最小吸光值再除以最小吸光值,该得数如果大于介定值则为阳性,该得数如果小于介定值则为阴性。
6、根据权利要求5所述的在全自动酶免分析仪实施ABO血型全自动鉴定的方法,其特征在于所述的读板步骤是以600-630nm波长的光沿微孔最大直径进行15-17点扫描。
7、用于实施权利要求1、2、3或4所述的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,其包括现有的全自动酶免分析仪(2),其特征是在其移板机械手(1)可及的位置增设全自动离心机(3),该全自动离心机(3)通过串孔线联接计算机,计算机增设全自动离心机(3)驱动程序;如果该全自动酶免分析仪(2)不具备移盘机械手,则全自动离心机(3)安装在该全自动酶免分析仪(2)的空闲位置上,并装配搬移微孔板的移板机械手(1),且该全自动离心机(3)和移板机械手(1)通过串孔线联接计算机,该计算机增设全自动离心机(3)和移板机械手(1)的驱动程序;或如果现有全自动酶免分析仪(2)具有微孔板传送带(5),则全自动离心机(3)通过微孔板传输装置装配在微孔板传送带(5)附近。
8、根据权利要求7所述的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,其包括带移板机械手(1)的全自动酶免分析仪(2),其特征在于全自动离心机(3)设置在全自动酶免分析仪(2)的左侧,全自动离心机(3)通过减振垫安装在全自动酶免分析仪(2)的底座(4)上,全自动离心机(3)的控制信号线接入全自动酶免分析仪(2)的计算机,该计算机同时增设全自动离心机(3)的驱动程序。
9、根据权利要求7所述的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,其包括不带移板机械手的全自动酶免分析仪(2),其特征在于全自动离心机(3)安装在该全自动酶免分析仪(2)的空闲位置上,并装配搬移微孔板的移板机械手(1),且该全自动离心机(3)和移板机械手(1)通过串孔线联接计算机,该计算机增设全自动离心机(3)和移板机械手(3)的驱动程序。
10、根据权利要求7所述的在全自动酶免分析仪上实施ABO血型全自动鉴定的方法的装置,其包括带微孔板传送带(5)的全自动酶免分析仪(2),其特征在于全自动离心机(3)通过微孔板传输装置装配在微孔板传送带(5)附近。
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