CN1418537A - 利用辣椒杂交种的花药培育近似杂交种的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及利用辣椒杂交种的花药培育近似杂交种的方法，1.播种辣椒杂交种，在植株现蕾期取蕾做花药培养；2.花药培养获单倍体植株，经染色体加倍获原辣椒杂交种双单倍体品系；3.在众多双单倍体品系中，据主要经济性状与原杂交种近似性，选原辣椒杂交种可使用的亲本品系，配数个辣椒杂交种；4.对比试验选育成与原辣椒杂交种在诸多主要经济性状无显著差异的近似杂交种。采用花药培养技术使分离、筛选原辣椒杂交种亲本自交系成为可能，将其与辣椒杂交育种技术结合经比较、筛选可得与原辣椒杂交种近似杂交种。可据某辣椒杂交种分离、筛选可能使用的双亲育成近似杂交种。
Description
技术领域：
本发明属于植物杂交种的育种方法，更具体地涉及一种采用花药培养技术筛选辣椒杂交种亲本并进而育成近似杂交种的育种方法。
背景技术：
目前国内外广泛应用的辣椒杂交种育种技术为常规育种技术，一般包括以下几个步骤：首先选育成数个辣椒自交系(品系)，再以两个自交系人工配对授粉的方法配成杂交组合，其后再经过一系列选育种过程，育成可在生产中推广应用的杂交种。
花药培养技术是二十世纪60年代发展起来的育种技术，目前已成为现代生物技术的重要组成部分。该技术的要点是将杂交种的花药离体培养，诱导花粉分化为单倍体植株，经染色体人工加倍或自然加倍后形成二倍体植株。这种二倍体植株是纯合的、且可以稳定传递其遗传信息。其优点是育种速度快，提高了育种效率，因而花药培养技术被广泛应用到育种领域，但目前，尚未见有仅根据获得的辣椒杂交种来分离、筛选出亲本自交系，并进而育成原辣椒杂交种的近似杂交种的报道。
发明内容：
本发明提供一种根据辣椒杂交种来分离、筛选出亲本自交系并培育出原辣椒杂交种的近似杂交种的方法。
本发明所述的方法，是通过如下步骤实现的：
步骤1：播种辣椒杂交种种子，在植株现蕾期开始取蕾做花药培养；
步骤2：通过花药培养获得单倍体植株，经染色体加倍后获得原辣椒杂交种的双单倍体品系；
步骤3：在获得的众多双单倍体品系中，根据其主要经济性状与原杂交种近似性，选定原辣椒杂交种可能使用的亲本品系，配成数个辣椒杂交种；
步骤4：通过对比试验，从中选育成与原辣椒杂交种在诸多主要经济性状上无显著差异的近似杂交种。
在本发明的方法步骤1中，优选在单核靠边期的花蕾长度为0.30至0.55厘米时，剥掉花瓣取下花药。
在本发明的方法步骤2中，花药培养所使用的是固体培养基，优选的固体培养基为SPD固体培养基，含有：
各种成分名称 各种成分含量/每升培养基
NH4NO3 15.0～17.5g
CaCl2·2H2O 3.4～5.4g
MgSO4·7H2O 2.7～4.5g
KNO3 17～20g
KH2PO4 0.9～2.0g
ZnSO4·7H2O 0.8～1.2g
H3BO3 0.8～1.2g
MnSO4·4H2O 2.0～3.0g
CuSO4·5H2O 2.0～3.0mg
Na2M0O4·2H2O 18～30mg
肌醇 90～130mg
FeSO47H2O 25.8～29.0mg
Na2EDTA 36.0～37.8mg
盐酸噻胺 0.25～0.75mg
盐酸吡哆醇 0.25～0.75mg
叶酸 0.35～0.95mg
烟酸 2.5～7.5mg
甘氨酸 2.0～4.0mg
NAA 0.5～1.5mg
KT 0.25～2.0mg
6BA 0.5～2.5mg
活性碳 0.25～1.0％
蔗糖 3.0～5.0％
琼脂 0.7～1.0％
PH 5.8
在本发明的方法步骤2中，花药培养时在接种的最初3-10天内维持温度在34-36℃高温，之后可维持25℃～30℃的恒温。
在本发明的方法步骤2中，花药培养时的光照条件可安排为1500-2000勒克斯条件下每天光照10-12小时。
在本发明的步骤2中，当在培养基上生长的甜椒单倍体幼苗长至4-7个页并且根、茎、叶和生长点均正常的时候，取下幼苗冲洗干净后，移植到经消毒的土壤上，待移栽后的幼苗在长出2-3片新叶时，应将其再适时移植到园田土上，当幼苗从培养基移植到净土后长到8至10片叶且生长正常健壮时，即可进行染色体加倍。
在本发明的方法步骤2中，染色体加倍的方法是使用0.1％～0.2％浓度的秋水仙碱和2.0％二甲基亚砜的混合加倍液，连续24～48小时。
在本发明的方法步骤3中，根据辣椒原杂交种的果形、果型指数、果色、果实味道，叶形、叶色，株型及座果习性等方面来确定原杂交种可能使用的双亲，从所获得的辣椒双单倍体品系中，选出可能是原杂交种双亲的品系，然后，利用可能是原杂交种双亲的品系，经人工辅助授粉两两配成新杂交种，并尽可能多配一些杂交种。
在本发明的方法步骤4中，在同一地段，分别种植原杂交种与新配杂交种，生长期间通过对产量和果实经济性状及植株形态等的观测对比，选留和原杂交种最为近似的杂交种4～5份，在第二年和第三年进行品种比较试验，通过新杂交种与原杂交种的果实性状和产量的生物学统计分析，及果实品质的测定，确定与原杂交种在果实性状和产量及品质均无显著差异的新杂交种。并初步确定新杂交种可能是原杂交种的近似杂交种。在原杂交种种植面积较大的地区，安排新杂交种的多点试验，通过生长期间对产量和果实经济性状及植株形态等的观测对比，进一步确定新杂交种与原杂交种极为近似，从而可用新杂交种代替原杂交种。
在本发明的方法中，辣椒杂交种的双亲可以互换，即母本可作为父本，父本可作为母本。
由于本发明的方法采用花药培养技术，使分离、筛选出原辣椒杂交种的亲本自交系在实践中成为可能，同时将其与辣椒杂交育种技术进行结合，通过进一步的比较、筛选，可以得到与原辣椒杂交种近似的杂交种。因此，本发明的方法可以仅根据某个辣椒杂交种分离、筛选出该杂交种可能使用的双亲，并进而育成近似杂交种。
具体实施方式：
下面以从国外引种的一种长方灯笼形甜椒杂交种为材料，具体说明筛选原辣椒杂交种亲本并进而育成近似杂交种的方法，但本实施例并不是对本发明的限制。
实施例：一个从国外引种的长方灯笼形甜椒杂交种(编号为97-1001)。
1997年在温室内种植97-1001，植株现蕾时开始取蕾，将花蕾消毒灭菌后，取下花药，接种于SPD固体培养基进行培养，在最初7天内维持在35℃高温，7天后维持28℃～30℃左右的恒温。在1500勒克斯光照下，每天光照10小时。
当在培养基上生长的辣椒单倍体幼苗长至6片叶时，取下幼苗冲洗干净后，移栽到经消毒的土壤上，待移栽后的幼苗长出3片新叶时，将其适时移栽到园田土上。当幼苗长到10片叶且生长正常健壮时，将脱脂棉棉球紧紧压在幼苗的生长点部位，向棉球滴加0.1％～0.2％秋水仙碱和2.0％二甲基亚砜的混合加倍液，加倍时间为连续36小时，其后将棉球取下，用蒸馏水冲洗生长点。
1998年从原杂交种97-1001共获得经人工加倍的双单倍体植株127株，根据果形(因原杂交种为方灯笼形、故选方灯笼形的)、果型指数(因原杂交种为长方灯笼形、故选果型指数大于2的)、果色(因原杂交种为绿色、故选不同深度绿色的)、果实味道(因原杂交种为无辣味纯甜、故选无辣味纯甜的)，叶形(选不同叶形的)、叶色(选不同叶色的)，株型(选不同分枝类型的)及座果习性(选不同座果习性的)选出可能是97-1001杂交种双亲的双单倍体单株46个，试配新杂交种12个。为了鉴定97-1001是否为杂交种，同时做了97-1001的自交留种。
1999年种植原杂交种及其自交后代、新配杂交种及花培品系，生长期观察其植物学特性(果实经济性状及植株形态)，初步确定可能与原杂交种近似的杂交种。
2000年，在97-1001的新配杂交种中选出4个编号分别为Z-1，Z-2，Z-3，Z-4的新配杂交种与原杂交种97-1001进行随机区组排列(三次重复)试验；在2000年盛果期，取所有参试品种同一节位的果实各1000克，送交农业部蔬菜品质监督检验中心进行品质测定。最后分析其植物学特性、产量性状、品质性状，来确定近似或优于原杂交种的新配杂交种。2001在大棚内继续安排了近似杂交种与原杂交种的随机区组排列(三次重复)试验。
将97-1001自交获得的杂种二代(F2)和原杂交种97-1001的果实经济性状及植株形态做比较，发现F2各项指标(果实经济形状、植株形态)的变异系数均明显大于原杂交种97-1001，可以确认97-1001为杂交种。
2000年和2001年的比较试验结果如下表1-5。其中，表1显示出，从果实经济性状的观测结果看，新杂交种Z-2及Z-3与“97-1001”在果实经济性状的三项指标上无显著差异，田间观察也可看出Z-2的果实最象97-1001的果实。表2表明，从植株形态的调查结果看，在始花节位、分枝数、叶形、株高、开展度几项上，新杂交种均与“97-1001”近似。表3说明，Z-1，Z-2，Z-4的产量与“97-1001”差异不显著。最后，综合考虑植株形态、果实经济性状和果实产量的因素，可以认定新杂交种Z-2和原杂交种“97-1001”最近似。
表1：97-1001与四个新杂交种的果实经济性状对比(单位：厘米，克)
| 杂交种 | 果 形 | 果肉厚度 | 单果重 | ||
| 长 | 宽 | 指数 | |||
| 97-1001 | 14.1 | 6.34 | 2.23b A | 0.45 | 172.5 |
| Z-1 | 16.8 | 5.97 | 2.82a A | 0.42 | 182.0 |
| Z-2 | 16.4 | 6.02 | 2.73ab A | 0.49 | 171.0 |
| Z-3 | 16.5 | 6.18 | 2.67ab A | 0.42 | 163.0 |
| Z-4 | 17.6 | 5.84 | 3.03a A | 0.45 | 175.5 |
表2：“97-1001”与四个新杂交种的植株形态对比(单位：厘米)
| 杂交种编号 | 始花节位 | 分枝数 | 叶形 | 株高 | 开展度 | ||
| 长 | 宽 | 指数 | |||||
| 97-1001 | 12.5 | 2.9 | 15.1 | 7.9 | 1.92 | 45.1 | 50.0×54.0 |
| Z-1 | 13.5 | 2.9 | 14.9 | 7.3 | 2.06 | 56.0 | 54.0×56.0 |
| Z-2 | 13.5 | 2.8 | 15.7 | 7.9 | 2.00 | 50.0 | 52.0×57.0 |
| Z-3 | 13.9 | 3.0 | 15.9 | 7.7 | 2.08 | 60.0 | 58.0×62.0 |
| Z-4 | 13.4 | 2.9 | 15.4 | 7.6 | 2.02 | 60.7 | 58.0×63.0 |
表3：Z-1，Z-2，Z-3，Z-4与“97-1001”的产量对比(单位：kg/666.7m2
| 杂交种编号 | 前期产量 | 总产量 | 育种评价 |
| 97-1001 | 2464.7a A | 3270.0a A | |
| Z-1 | 2113.2a A | 2839.1ab A | 新甜椒杂交种 |
| Z-2 | 2136.0a A | 2722.4ab A | 97-1001的近似杂交种 |
| Z-3 | 1943.3ab A | 2751.3ab A | 新甜椒杂交种 |
| Z-4 | 1327.9b A | 2492.9b A | 新甜椒杂交种 |
2001年安排Z-2和原杂交种的比较试验，实验结果如表4-5。表4说明，经生物学统计Z-2的果实性状和产量与原杂交种的果实性状和产量无显著差异；表5中果实品质指标的测定表明：Z-2的总糖、粗蛋白质和Vc含量均高于97-1001。
表4：新杂交种与原杂交种的比较试验结果：单位：cm，kg/666.7
| 杂交种 | 果长 | 果宽 | 果型指数 | 果实形状 | 果色 | 果味 | 果面 | 总产量 |
| 97-1001 | 14.6 | 6.67 | 2.19 | 长方灯笼形 | 绿 | 甜 | 光滑有光泽 | 1688.0A |
| Z-2 | 14.2 | 4.99 | 2.84 | 长方灯笼形 | 绿 | 甜 | 光滑有光泽 | 1490.7A |
表5：新甜椒杂交种与“97-1001”各项品质指标比较
| 杂交种编号 | 总糖 | 粗蛋白 | Vc含量 | |||
| ％ | ±％ | ％ | ±％ | (mg/100g) | ± | |
| 97-1001 | 2.55 | 0 | 1.00 | 0 | 110.0 | 0 |
| Z-2 | 2.92 | +14.5 | 1.01 | +1.0 | 113.0 | +2.73 |
综合2000年和2001年两年试验结果：Z-2为最近似97-1001的杂交种。
Claims (9)
1.一种利用辣椒杂交种的花药培育近似杂交种的方法，包括如下步骤：
步骤1：播种辣椒杂交种种子，在植株现蕾期开始取蕾做花药培养；
步骤2：通过花药培养获得单倍体植株，经染色体加倍后获得原辣椒杂交种的双单倍体品系；
步骤3：在获得的众多双单倍体品系中，根据其主要经济性状与原杂交种近似性，选定原辣椒杂交种可能使用的亲本品系，配成数个辣椒杂交种；
步骤4：通过对比试验，从中选育成与原辣椒杂交种在诸多主要经济性状上无显著差异的近似杂交种。
2.根据权利要求1所述的方法，在本发明的方法步骤1中，在单核靠边期的花蕾长度为0.30至0.55厘米时，剥掉花瓣取下花药。
3.根据权利要求1所述的方法，在本发明的方法步骤2中，花药培养所使用的是固体培养基，优选的固体培养基为SPD固体培养基，含有：
各种成分名称 各种成分含量/每升培养基
NH4NO3 15.0～17.5g
CaCl2·2H2O 3.4～5.4g
MgSO4·7H2O 2.7～4.5g
KNO3 17～20g
KH2PO4 0.9～2.0g
ZnSO4·7H2O 0.8～ 1.2g
H3BO3 0.8～1.2g
MnSO4·4H2O 2.0～3.0g
CuSO4·5H2O 2.0～3.0mg
Na2M0O4·2H2O 18～30mg
肌醇 90～130mg
FeSO4·7H2O 25.8～29.0mg
Na2EDTA 36.0～37.8mg
盐酸噻胺 0.25～0.75mg
盐酸吡哆醇 0.25～0.75mg
叶酸 0.35～0.95mg
烟酸 2.5～7.5mg
甘氨酸 2.0～4.0mg
NAA 0.5～1.5mg
KT 0.25～2.0mg
6BA 0.5～2.5mg
活性碳 0.25～1.0％
蔗糖 3.0～5.0％
琼脂 0.7～1.0％
PH 5.8
4.根据权利要求1所述的方法，在本发明的方法步骤2中，花药培养时在接种的最初3-10天内维持温度在34-36℃高温，之后可维持25℃～30℃的恒温。
5.根据权利要求1所述的方法，在本发明的方法步骤2中，花药培养时的光照条件可安排为1500-2000勒克斯条件下每天光照10-12小时。
6.根据权利要求1所述的方法，在本发明的步骤2中，当在培养基上生长的甜椒单倍体幼苗长至4-7个页并且根、茎、叶和生长点均正常的时候，取下幼苗冲洗干净后，移植到经消毒的土壤上，待移栽后的幼苗在长出2-3片新叶时，应将其再适时移植到园田土上，当幼苗从培养基移植到净土后长到8至10片叶且生长正常健壮时，即可进行染色体加倍。
7.根据权利要求1所述的方法，在本发明的方法步骤2中，染色体加倍的方法是使用0.1％～0.2％浓度的秋水仙碱和2.0％二甲基亚砜的混合加倍液，连续24～48小时。
8.根据权利要求1所述的方法，在本发明的方法步骤3中，根据辣椒原杂交种的果形、果型指数、果色、果实味道，叶形、叶色，株型及座果习性等方面来确定原杂交种可能使用的双亲，从所获得的辣椒双单倍体品系中，选出可能是原杂交种双亲的品系，然后，利用可能是原杂交种双亲的品系，经人工辅助授粉两两配成新杂交种，并尽可能多配一些杂交种。
9.根据权利要求1所述的方法，在本发明的方法步骤4中，在同一地段，分别种植原杂交种与新配杂交种，生长期间通过对产量和果实经济性状及植株形态等的观测对比，选留和原杂交种最为近似的杂交种4～5份，在第二年和第三年进行品种比较试验，通过新杂交种与原杂交种的果实性状和产量的生物学统计分析，及果实品质的测定，确定与原杂交种在果实性状和产量及品质均无显著差异的新杂交种。并初步确定新杂交种可能是原杂交种的近似杂交种。在原杂交种种植面积较大的地区，安排新杂交种的多点试验，通过生长期间对产量和果实经济性状及植株形态等的观测对比，进一步确定新杂交种与原杂交种极为近似，从而可用新杂交种代替原杂交种。
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| CN100339476C (zh) * | 2004-10-28 | 2007-09-26 | 北京市农林科学院 | 一种辣椒游离小孢子细胞团培养方法 |
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- 2002-12-26 CN CN 02158574 patent/CN1236668C/zh not_active Expired - Lifetime
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| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: BEIJING HAIHUA BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: PLANT TISSUE CULTURE TECHNOLOGY LAB, HAIDIAN DISTRICT, BEIJING Effective date: 20101216 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 100091 NO. A-3, EAST OF NEWLY-BUILT GATE OF SUMMER PALACE, HAIDIAN DISTRICT, BEIJING TO: 100091 NO. 2, XIYUAN PLAYGROUND, HAIDIAN DISTRICT, BEIJING |
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| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20101216 Address after: 100091 No. 2, Xiyuan playground, Beijing, Haidian District Patentee after: BEIJING HAIHUA BIO-TECH Co.,Ltd. Address before: 100091 Beijing city Haidian District the Summer Palace new palace east No. 3 Patentee before: Beijing Haidian Technology Of Plant Tissue Culture Laboratory |
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| CX01 | Expiry of patent term |
Granted publication date: 20060118 |
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| CX01 | Expiry of patent term |