CN1405562A - 一种唾液酸酶测定试剂 - Google Patents
一种唾液酸酶测定试剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1405562A CN1405562A CN 02137627 CN02137627A CN1405562A CN 1405562 A CN1405562 A CN 1405562A CN 02137627 CN02137627 CN 02137627 CN 02137627 A CN02137627 A CN 02137627A CN 1405562 A CN1405562 A CN 1405562A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- salt
- detection reagent
- sialidase
- class
- sialidase detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于体外测定阴道分泌物中唾液酸酶活性的唾液酸酶测定试剂，它包括分散在载体中的底物，所述的底物是乙酰神经氨酸类及其盐。所述的乙酰基神经氨酸类及其盐可以是一种可在液相中稳定的乙酰基神经氨酸衍生物，也可以是一种百里酚酞乙酰基神经氨酸类及其盐、5－溴－4－氯－3－吲哚基－α－D－N－乙酰神经氨酸及其盐。这种唾液酸酶测定试剂，可以灵敏、快速、简易的通过对阴道分泌物中唾液酸酶的检测来诊断细菌性阴道病，可作为独立诊断指标，试剂稳定性强，准确性极高，检测重现性好，操作简单(一步法检测)，适宜普及，在BV诊断中具有广阔的应用前景，对于保护广大妇女身体健康、提高生育水平具有极大的实用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于体外测定阴道分泌物中唾液酸酶活性的测定试剂，也即一种唾液酸酶测定试剂。
技术背景
细菌性阴道病(bacterial vaginosis，简称BV)是指一类在细菌学上表现为生殖道正常菌群(产H2O2乳酸杆菌)数量减少、代之以一组厌氧菌群(bacteroides、mobiluncus spp、gardnerella vaginalis、prevotella spp、peptostreptococcus和mycoplasma hominis等)数量增加的临床症候群。BV是妇产科最常见的疾病之一，感染率在15％～50％，且易复发。患BV的妇女中有50％的人易早产或分娩低体重儿，她们所生下的孩子也很可能会因此带有各种后遗症。越来越多的证据表明，BV是导致组织性绒毛膜炎、羊水感染、剖腹产术后子宫内膜炎及其他妊娠不良和妊娠并发症的危险因素。另外在妇科中，BV主要与输卵管炎、盆腔炎、宫外孕、不孕症、泌尿系感染、术后感染及妇科肿瘤有关。
鉴于BV对妇女及其妊娠的危害性，在妇科、产科以及施行外科流产术前进行BV检查具有十分重要的意义。同时在临床上对BV也有了更为严格的定义，即符合以下4项指标中的3项可诊断为BV：(1)阴道pH＞4.5；(2)阴道分泌物增多，变稀如奶状，有异味；(3)胺试验(Whiff)阳性，即在阴道分泌物中加入10％KOH产生鱼腥味；(4)阴道涂片中可见线索细胞。以上即为传统的Amsel诊断方法，称为“金标准”。80年代后期，人们发现了BV与阴道中特有的微生物的代谢产物有关，并依此研究出一系列新的BV诊断技术和方法。在BV的诊断方面，临床上最为普遍采用的方法有传统的Amsel方法，然而要在实际中准确实施并非易事。首先，一些与感染无关的因素如近期性交、阴道灌洗、行经或是存在大量子宫颈粘液等同样可以导致阴道pH值升高，或使分泌产生异味；胺试验中对气味的鉴别因人而异；而对于作BV诊断最佳标志的线索细胞的识别则受到显微设备的质量、样本的采集以及操作者的经验等诸多因素的共同影响，主观性强，因而很难对判定结果进行统计和比较。
阴道分泌物培养：由于BV是阴道中乳酸杆菌与其他多种菌群间的平衡失调所致，BV发病是混合感染，因此对单一种类细菌的分离培养在BV的诊断中意义不大，必须同时结合临床表现方能作出判断。在一些与BV密切相关的细菌的培养试验中，不是特异性差就是敏感性不好。
革兰染色方法：其敏感性为62％～100％，阳性准确率为76％～100％，
脱落细胞巴氏染色法：与革兰染色方法具有极好的一致性，但特异性不如后者，结果判断标准尚未被正规应用。
以上两种染色方法在应用中的准确性均依赖于操作者的经验以及熟练程度。
寡核苷酸探针法：这是一种检测高浓度gardnerella vaginalis的快速试验方法。其优点在于良好的特异性，并且可以针对菌落浓度的高低不同来调整其敏感性。它为一些显微技术和设备不完善的实验室提供了选择。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述技术的不足而提供一种可以灵敏、快速、简易的进行唾液酸酶检测来诊断细菌性阴道病的一种唾液酸酶测定试剂。
为了达到上述目的，本发明所提供的一种唾液酸酶测定试剂，包括分散在载体中的底物，所述的底物是乙酰神经氨酸类及其盐。所述的乙酰基神经氨酸类及其盐可以是一种可在液相中稳定的乙酰基神经氨酸衍生物，也可以是一种百里酚酞乙酰基神经氨酸类及其盐、5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-N-乙酰神经氨酸及其盐。所述载体可以是蒸馏水，即可将所述的底物溶解于蒸馏水中成为唾液酸酶测定试剂，也可以是PH范围在3-10(优选范围为5-7)、离子强度在5-100mM(优选范围在10-45mM)的缓冲液。即可将所述的底物溶解于PH范围在3-10(优选范围为5-7)、离子强度在5-100mM(优选范围在10-45mM)的缓冲液中成为唾液酸酶测定试剂。所述的载体也可以是固体物，将所述的乙酰神经氨酸类及其盐的底物充分溶解，溶解后的乙酰神经氨酸类及其盐溶液涂于固体载体上固定，如涂于纸上，干燥之后成为唾液酸酶测定试剂。这种唾液酸酶测定试剂的测试方法，可以是在检测时取样品与含乙酰神经氨酸类及其盐的载体的唾液酸酶测定试剂接触，充分混合摇匀，于37℃温浴20分钟之后，观察棉拭子的颜色变化，拭子由兰灰色至紫褐色，且在1小时内不褪色判定为阳性，20分钟不变色则判定为阴性。
研究表明，阴道分泌物中唾液酸酶活性与BV之间存在一定的量的关系，患BV的妇女，其阴道分泌物中含有产生唾液酸酶的细菌，无BV的妇女阴道分泌物中不显示异常的唾液酸酶活性。细菌性唾液酸酶可以作用于各种天然和合成的唾液酸糖接合底物，通过底物的分解显色或颜色的改变来指示唾液酸酶的活性高低。本发明即根据此原理研制而成，选以百里酚酞乙酰基神经氨酸或其盐类为底物，检测时取样品与含该底物试剂接触，充分混合摇匀，于37℃温浴20分钟之后，观察棉拭子的颜色变化，拭子由兰灰色至紫褐色，且在1小时内不褪色判定为阳性，20分钟不变色则判定为阴性，此过程无须特殊仪器设备和另外的试剂，劳动强度小，结果判定清晰明了(色差明显)，与其它方法及类似产品相比，本发明由于采用的是唾液酸酶而不是多胺等其它生化标志物，能检测5种BV中的4种，可作为独立诊断指标，试剂稳定性强，准确性极高，检测重现性好，操作简单(一步法检测)，适宜普及，在BV诊断中具有广阔的应用前景。对于保护广大妇女身体健康、提高生育水平具有极大的实用价值。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步的描述。
细菌性阴道病(BV)感染与阴道分泌物中唾液酸酶的活性和阴道中存在的厌氧菌的代谢产物组织多胺有密切关系。唾液酸酶活性与组织多胺量的变化都表示着BV患者不同程度的感染，这两项指标是目前检测BV最有效和最准确的。
临床“金标准”诊断方法(即Amsel法)为：
1.阴道分泌物均匀、变稀；
2.PH＞4.5；
3.胺试验阳性；
4.细胞涂片有线索细胞。以上四现特征中的三项出现阳性就可诊断BV。
为更好的说明试剂的性能，供下列实施数据作参考
选取300例患者样品，做验证试剂盒(本试剂盒)和临床“金标准”诊断方法的检测。
实施例1：
反应瓶：含：
百里酚酞乙酰基神经氨酸0.1～5mM
Tris缓冲液10mM pH7.0
检测方法：
用棉拭子取患者的阴道分泌物，立即插入验证试剂盒的反应小瓶中，混合均匀后盖好瓶盖(棉签头可留于瓶子中)，于37℃温浴20分钟棉签由兰灰色变紫褐色为阳性，棉签不变色为阴性。对照例：检测方法：
观察阴道分泌物量，是否变稀如奶状，有无异味。
另取一支棉拭子测白带PH值：试纸检测范围为3.8-4.5(北京化工厂生产)。白带涂于试纸上半秒钟后，立即检查结果。
胺试验：在同一上述棉拭子上滴两滴10％KOH(北京化工厂生产)后立即检查。
通过上述两方法比较：
用Amsel方法诊断出BV阳性的103例样本中，本发明也检测出阳性103例，二者的阳性符合率为100％(103/103)；用Amsel方法诊断出BV阴性的197例样本中，本发明也检测出阴性197例，阴性符合率为100％(197/197)，总符合率为100％(300/300)。见表一
| 本发明 | Amsel法 | |
| 真阳性 | 真阴性 | |
| 阳性 | 103 | 0 |
| 阴性 | 0 | 197 |
| 总数 | 103 | 197 |
表一本发明与Amsel方法比较临床验证结果表(单位：例)结论：本发明与Amsel法比较，以Amsel法为标准。
本发明的灵敏度(真阳性率)为100％(103/103)。
特异度(真阴性率)为100％(197/197)。
假阳性率为0％(0/197)。
假阴性率为0％(0/103)。
从以上对300例临床标本的比较结果看，本发明的灵敏度、特异性与临床“金标准”一致。且具有操作简单，检测时间短、直观等特点。
为了进一步说明乙酰神经氨酸类及其盐的使用，本发明的唾液酸酶测定试剂举例如下，但该实施例不局限本发明的内容。
实施例2
百里酚酞乙酰基神经氨酸0.1～5mM
EDTA.2Na 0.1～5mM
CaCl 0.1～50mM
Tris缓冲液10mM pH7.0
实施例3
5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-N-乙酰神经氨酸及其盐0.1～5mM
CaCl 0.1～50mM
NaCl 150mM
PIPES缓冲液10mM pH6.5
Claims (8)
1、一种唾液酸酶测定试剂，包括分散在载体中的底物，其特征是所述的底物是乙酰神经氨酸类及其盐。
2、根据权利要求1所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述的乙酰基神经氨酸类及其盐是一种可在液相中稳定的乙酰基神经氨酸衍生物。
3、根据权利要求1所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述的乙酰基神经氨酸类及其盐是一种百里酚酞乙酰基神经氨酸类及其盐。
4、根据权利要求1所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述的乙酰基神经氨酸类及其盐是一种5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-N-乙酰神经氨酸及其盐。
5、根据权利要求1或2或3或4所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述载体是蒸馏水，可将所述的底物溶解于蒸馏水中。
6、根据权利要求1或2或3或4所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述载体是PH范围在3-10、离子强度在5-100mM的缓冲液。可将所述的底物溶解于PH范围在3-10、离子强度在5-100mM的缓冲液中。
7、根据权利要求1所述的一种唾液酸酶测定试剂，其特征是所述的载体是固体物，将所述的乙酰神经氨酸类及其盐的底物充分溶解，溶解后的乙酰神经氨酸类及其盐溶液涂于固体载体上固定，干燥之后成为唾液酸酶测定试剂。
8、一种唾液酸酶测定试剂的测试方法，检测时取样品与含乙酰神经氨酸类及其盐的载体的唾液酸酶测定试剂接触，充分混合摇匀，于37℃温浴20分钟之后，观察棉拭子的颜色变化，拭子由兰灰色至紫褐色，且在1小时内不褪色判定为阳性，20分钟不变色则判定为阴性。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02137627 CN1405562A (zh) | 2002-10-24 | 2002-10-24 | 一种唾液酸酶测定试剂 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 02137627 CN1405562A (zh) | 2002-10-24 | 2002-10-24 | 一种唾液酸酶测定试剂 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1405562A true CN1405562A (zh) | 2003-03-26 |
Family
ID=4749064
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 02137627 Pending CN1405562A (zh) | 2002-10-24 | 2002-10-24 | 一种唾液酸酶测定试剂 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1405562A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102251022A (zh) * | 2011-06-23 | 2011-11-23 | 泰普生物科学（中国）有限公司 | 一种阴道炎快速检测试剂盒 |
| CN102251021A (zh) * | 2011-06-23 | 2011-11-23 | 泰普生物科学（中国）有限公司 | 一种细菌性阴道病检测试剂盒及唾液酸酶检测方法 |
| CN104017787A (zh) * | 2004-09-10 | 2014-09-03 | 安迅生物制药公司 | 一类新颖的以蛋白质为基础的治疗用分子 |
| CN105695557A (zh) * | 2016-03-16 | 2016-06-22 | 四川大学华西第二医院 | 一种体外获能后精子质量评估的方法 |
| CN105779568A (zh) * | 2016-03-16 | 2016-07-20 | 四川大学华西第二医院 | 一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法 |
| CN108982493A (zh) * | 2018-09-17 | 2018-12-11 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种唾液酸苷酶干化学试纸及其制备方法 |
| US10525109B2 (en) | 2002-11-22 | 2020-01-07 | Ansun Biopharma, Inc. | Class of therapeutic protein based molecules |
-
2002
- 2002-10-24 CN CN 02137627 patent/CN1405562A/zh active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10525109B2 (en) | 2002-11-22 | 2020-01-07 | Ansun Biopharma, Inc. | Class of therapeutic protein based molecules |
| CN104017787A (zh) * | 2004-09-10 | 2014-09-03 | 安迅生物制药公司 | 一类新颖的以蛋白质为基础的治疗用分子 |
| CN104017787B (zh) * | 2004-09-10 | 2017-03-29 | 安迅生物制药公司 | 一类新颖的以蛋白质为基础的治疗用分子 |
| CN102251022A (zh) * | 2011-06-23 | 2011-11-23 | 泰普生物科学（中国）有限公司 | 一种阴道炎快速检测试剂盒 |
| CN102251021A (zh) * | 2011-06-23 | 2011-11-23 | 泰普生物科学（中国）有限公司 | 一种细菌性阴道病检测试剂盒及唾液酸酶检测方法 |
| CN105695557A (zh) * | 2016-03-16 | 2016-06-22 | 四川大学华西第二医院 | 一种体外获能后精子质量评估的方法 |
| CN105779568A (zh) * | 2016-03-16 | 2016-07-20 | 四川大学华西第二医院 | 一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法 |
| CN105695557B (zh) * | 2016-03-16 | 2019-09-24 | 四川大学华西第二医院 | 检测体外精子获能液中的唾液酸酶的试剂盒的使用方法 |
| CN108982493A (zh) * | 2018-09-17 | 2018-12-11 | 迪瑞医疗科技股份有限公司 | 一种唾液酸苷酶干化学试纸及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hillier | Diagnostic microbiology of bacterial vaginosis | |
| Donders | Definition and classification of abnormal vaginal flora | |
| Thomason et al. | Proline aminopeptidase activity as a rapid diagnostic test to confirm bacterial vaginosis | |
| US11434539B2 (en) | Diagnostic methods and marker for bacterial vaginosis | |
| CN112301169A (zh) | 一种同步检测多种生殖道感染相关的病原体的引物组、探针组及试剂盒 | |
| EP2407549B1 (en) | Detection of trichomonas and candida | |
| CN103266163B (zh) | 一种检测鉴别念珠菌和滴虫的联检试剂盒 | |
| Jung et al. | Growth forms of Gardnerella spp. and Lactobacillus spp. on vaginal cells | |
| CN109439775A (zh) | 一种猪病原体的多重pcr检测方法 | |
| CN102321730A (zh) | 一种阴道炎联合检测试剂盒 | |
| CN1405562A (zh) | 一种唾液酸酶测定试剂 | |
| Hay et al. | Evaluation of a novel diagnostic test for bacterial vaginosis:'the electronic nose' | |
| DE69128639T2 (de) | Verfahren und pharmazeutische sätze zum aufspüren von mikroorganismen assoziiert mit vaginalinfektionen | |
| CN107299127B (zh) | B族链球菌鉴定和药敏检测卡、b族链球菌鉴定和药敏检测试剂盒及其使用方法 | |
| CN109060798A (zh) | 一种用于阴道内感染的诊断试剂 | |
| CN101748188A (zh) | 一种细菌性阴道病的联合检测试剂 | |
| CN106319028A (zh) | 用于检测解脲支原体和人型支原体的试剂盒 | |
| Boggess et al. | Use of DNA hybridization to detect vaginal pathogens associated with bacterial vaginosis among asymptomatic pregnant women | |
| CN102251021A (zh) | 一种细菌性阴道病检测试剂盒及唾液酸酶检测方法 | |
| Romero et al. | Diagnosis of intra-amniotic infection: the acridine orange stain | |
| CN1229503C (zh) | 纸片法胺试验检测加德纳菌及胺试纸的制备方法 | |
| CN102277429B (zh) | 淋球菌、沙眼衣原体及解脲脲原体检测试剂盒 | |
| CN104911245B (zh) | 一种用于细菌性阴道病检测的试剂盒 | |
| CN101851661B (zh) | 非诊断目的的在a-peg-b列阵下加快检测支原体时间的方法 | |
| Nisha et al. | Analysis of Nugent and Amsel criteria for the detection of female genital tract infections in a tertiary care hospital, Coastal Karnataka |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |