CN1329171A - 一种核酸样品靶分子的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种核酸样品靶分子的制备方法,包括使待检核酸样品与参照样品相混合,然后扩增与参照分子相杂交的核酸靶分子,其特征是在靶分子与参照分子形成杂交分子后,将靶分子两末端延伸出与参照分子相互补的序列。本发明用一个反应器在核酸样品制备过程中制备大量靶分子,因此可以减少工作量,降低诊断成本。
Description
本发明涉及一种核酸样品靶分子的制备方法。
核酸是生物遗传物质。分子诊断是用分子生物学方法对核酸进行测定，它具有广泛的用途，例如分子诊断可用于测定个体的基因型，因而适用于遗传病诊断、亲子鉴定，另外也有利于器官移植，优生优育等。分子诊断技术也可用于物种鉴定，这对环境保护、卫生监测有重要作用。此外，用分子诊断技术还可观察生物体的基因表达，通过基因表达研究可了解药的作用，因而能促进药物开发。核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)，DNA和RNA分别由脱氧核苷酸和核苷酸组成。DNA中的四种脱氧核苷酸的特征决定于其相应的四种碱基(A、C、G、T)、RNA中的四种核苷酸的特征决定于其相应的四种碱基(A、C、G、U)。在所有这些碱基中，A与T(或U)配对，G与C配对。具有连续配对碱基序列及方向相反的二条核酸链可以结合(杂交)成双链分子结构。运用碱基配对与分子杂交原理可对核酸进行复制。常用的复制方法为聚合酶反应法、逆转录酶反应法。核酸也可进行分子内和分子间的修饰。常用的方法有连接酶反应，末端转移酶反应、内切酶反应和外切酶反应。此外，核酸也可在体外进行扩增，由一个分子产生多个分子。常见的扩增方法有聚合酶链反应(PCR)和滚环式反应。从生物体中分离出的核酸样品具有很高的复杂性，在分子诊断中，核酸中的待检(靶)分子须经过上述的酶反应进行扩增、富集和修饰这一样品制备过程，然后才能用相关的物理或化学方法鉴定。样品中的靶分子测定也往往有求于源于非被测样品，但具有与靶分子相似特征的核酸样品(参照样品或参照分子)。常见的分子鉴定技术有电泳、质谱和分子杂交等方法。根据分子杂交原理发展出来的基因芯片技术具有高通量的优点。但目前分子诊断的成本和诊断速度主要受限于样品制备的方法。按现有的核酸样品靶分子的制备方法，一个反应器在一个样品制备过程中只能对一个或者数个靶分子进行扩增或修饰，不能满足高通量分子诊断的需求。如要制备大量的有效的靶分子，则要进行大量的平行反应。这种方法有工作量大、成本高的缺点。
本发明的目的是提供一种核酸样品靶分子的制备方法，它能弥补现有技术的上述不足。
一种核酸样品靶分子的制备方法，包括使待检核酸样品与参照样品相混合，然后扩增与参照分子相杂交的核酸靶分子，其特征是在靶分子与参照分子形成杂交分子后，将靶分子两末端延伸出与参照分子相互补的序列。
本发明用一个反应器在核酸样品制备过程中制备大量靶分子，因此可以减少工作量，降低诊断成本。
下面通过实施例说明本发明。
在进行器官或骨髓移植时，供体和受体组织必须具有相容性，人的组织相容性决定于近百个基因的基因型。根据本发明，收集与组织相容性相关的基因片段，并在片段两端加上外源的序列，然后使其转化成RNA。在进行与组织相容性相关的基因型测定时，用这些RNA分子作为参照分子。在对受体或供体的DNA核酸样品进行分子修饰后，使该DNA样品与参照样品RNA进行混合，并使相关的DNA靶分子与RNA参照分子形成杂交分子。然后用连接酶反应或逆转录酶反应加连接酶反应在杂交的DNA分子两端延伸出与RNA中外源序列相互补的DNA片段，在完成这一修饰以后，对与参照RNA分子杂交并在末端进行延伸的DNA分子进行PCR扩增，并进行荧光标记，然后使标记的分子与相应的基因芯片进行分子杂交，从杂交的结果中分析出受体或供体的基因型，当两者的基因型达到一定吻合程度时，两者间的器官移植就有实现的可能。
用本发明的方法制备的靶分子可以通过电泳、质谱、分子杂交等方法对靶分子的特征性进行鉴定。这一方法可用于基因型测定、物种鉴定、基因表达观察。根据这一方法也可制出诊断试剂盒。该试剂盒包括参照分子样品和必要的生物化学试剂。参照分子样品包含十种以上不同的分子序列。
Claims (1)
1.一种核酸样品靶分子的制备方法，包括使待检核酸样品与参照样品相混合，然后扩增与参照分子相杂交的核酸靶分子，其特征是在靶分子与参照分子形成杂交分子后，将靶分子两末端延伸出与参照分子相互补的序列。
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| CN 01115032 CN1329171A (zh) | 2001-06-15 | 2001-06-15 | 一种核酸样品靶分子的制备方法 |
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| CN 01115032 CN1329171A (zh) | 2001-06-15 | 2001-06-15 | 一种核酸样品靶分子的制备方法 |
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| CN1329171A true CN1329171A (zh) | 2002-01-02 |
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Country Status (1)
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| CN (1) | CN1329171A (zh) |
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2001
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