CN1267522A

CN1267522A - 趋化因子产生促进剂

Info

Publication number: CN1267522A
Application number: CN00104066A
Authority: CN
Inventors: 小西甚右卫门; A·A·安萨里; M·E·吉施威
Original assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1999-03-19
Filing date: 2000-03-17
Publication date: 2000-09-27
Also published as: EP1038529A3; EP1038529A2; KR20000076874A; CA2300792A1

Abstract

本发明提供一种对艾滋病治疗有效的趋化因子产生促进剂。本发明的趋化因子产生促进剂的有效成分为接种牛痘病毒的炎症组织提取物。

Description

趋化因子产生促进剂

本发明涉及接种牛痘病毒的炎症组织提取物的新型药理作用，具体的说是涉及含有接种牛痘病毒的炎症组织提取物作为有效成分的趋化因子(chemokine)产生促进剂。

Cocchi等对存在于CD8阳性T细胞培养上清液中的抗HIV活性物质进行了精制和解析，结果发现MIP-1(macrophage inflammatoryprotein 1)α、MIP-1β、RANTES(regulated on activation，normalT expressed and secreted)等β趋化因子(CC趋化因子)是其主要构成成分(1995年，Science，270，1811页)。通过对β趋化因子的抗体，可以中和存在于CD8阳性T细胞的培养上清液中的抗HIV活性，另外HIV-1、HIV-2和SIV的复制可以通过基因重组制成的人MIP-1α、MIP-1β和RANTES被浓度依存的抑制。

现在使用或开发的艾滋病治疗药主要是叠氮胸腺嘧啶等逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂，这些都是抑制病毒增殖的药物。在临床上将这些药物组合进行联合治疗，确认在某种程度上是有效的。这样，作为目前艾滋病的有效治疗方法，实施的是联合疗法这种将多数药物组合进行治疗的方法，因此期望一种在作用机理上与现有药物不同的新型艾滋病治疗药。如上所述，MIP-1α、MIP-1β、RANTES作为抑制因子受到了瞩目，促进这些趋化因子产生的物质是我们所期待的具有新作用机理的抗HIV药。

本发明人对接种牛痘病毒的炎症组织提取物的药理活性进行了种种试验研究，结果发现该物质具有促进HIV抑制因子--MIP-1α、MIP-1β、RANTES产生的作用。

本发明的目的在于提供一种有效的具有新作用机理的治疗药，没有现存逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂所表现出的副作用，安全性高的药物。

已知对于病毒等外界的侵袭或内部病情的发展，为了具有二相性(对过剩反应的抑制作用和对机能低下的增强作用)并维持生物体的恒常性，调整生物体机能使之正常化，产生了各种生物体机能调节物质。例如在接种牛痘病毒的炎症组织中产生的生物体机能调节物质，对于由病态组织提取该物质的制备方法及其药理活性已有各种报道(特公昭63-39572号公报、特公昭63-25600号公报、特公平3-43279号公报、特许第2594222号公报等)。

另外，作为实际的药品有接种牛痘病毒的家兔炎症皮肤提取物制剂。该制剂如医疗药日本医药品集(1998-99·第22版，日本医药情报中心编，药业时报社发行)第1927-1928页记载的那样，是含有从接种牛痘病毒的家兔炎症皮肤组织提取分离出的非蛋白性活性物质的药剂，确认其适用于腰痛、颈肩腕综合症、肩周炎、变形性关节炎、综合性神经痛、皮肤疾病(湿疹、皮肤炎、寻麻疹)所伴有的搔痒、过敏性鼻炎、亚急性脊髓视神经病后遗症的冷感、痛感、异常知觉等，已经认可其作为医疗用药品可以制成皮下注射、肌肉注射、静脉注射用注射剂和片剂，而且市场上已经开始销售。

本发明的趋化因子产生促进剂的有效成分是上述由接种牛痘病毒的炎症组织提取出的非蛋白性生物体机能调整物质，上述医疗药日本医药品集中记载的接种牛痘病毒的家兔炎症皮肤提取物制剂已经认可能够制成药品而且已有销售，因而可以购得。另外，上述特许公报等文献中记载的各种接种牛痘病毒的炎症组织提取物均可以用作本发明的物质，其制备方法和优选给药量等在文献中也有说明。

对患者的给药方法已经确认市售药剂中注射剂可以皮下注射、肌肉注射、静脉注射给药，片剂可以口服给药；但是根据其它疾病的种类，其治疗也可以使用上述以外的剂型，采用最适给药方法。给药量应当根据接种牛痘病毒的炎症组织提取物的种类适当设定；市售制剂已经确认了其给药量，在上述医疗药日本医药品集(1927页)中描述了基本上按照内服为1日16神经托品(Neurotropin)单位(NU)、注射剂为1日3.6至7.2NU给药的医疗用药品；可以根据疾病的种类、疾病严重程度、患者个人差异、给药方法、给药时间等适当增减。

以下说明有关接种牛痘病毒的炎症组织提取物新型药理作用的试验结果。实施例(1)趋化因子产生促进作用

按照常规方法由正常健康未感染的红毛猴(猕猴)配制外周血单核细胞(PBMC)。也就是说，将肝素血以150×g的速度离心分离10分钟除去血浆后，用添加有与除去的血浆同量的100U/mL青霉素-100μg/mL链霉素、2mM L-谷氨酸的RPMI-1640(以下简称为培养基)再次悬浊。使血细胞悬浊液在Ficol-hypaque(Sigma Biochem.公司生产，St.Louis，MO)上分层，以450×g的速度倾斜离心。吸引中间层的单核细胞，再次悬浊于含有10％牛胎儿血清的培养基中。对细胞悬浊液的一部分计数，将PBMC浓度作为试验中必要的值。在含有最适浓度的PHA-P及各种浓度的被测物质(接种牛痘病毒的家兔炎症皮肤提取物制剂：商品名神经托品)的培养基中培养这样配制的PBMC，细胞密度为2×10⁶cells/mL。在5％二氧化碳存在下、37℃培养3天，洗涤细胞后，与相同浓度的被测物质一起感染SIVmac251 2小时。然后，洗涤培养物以除去未结合的病毒，在含有相同浓度被测物质的培养基中继续培养。之后，每周用含有相同浓度被测物质的培养基进行2次培养基交换，维持培养。培养10天后，按照酶免疫测定法(EIA)测定由培养物得到的上清液中的MIP-1α、MIP-1β、RANTES。其中一例的结果如表1所示。表中的％值是以未投给被测物质的对照组的趋化因子量为100％计算出的结果。表1

趋化因子种类	0.1μg/mL给药组	1μg/mL给药组
趋化因子种类	0.1μg/mL给药组	1μg/mL给药组	MIP-1α	118.6％	174.8％
MIP-1β	131.4％	212.6％	MIP-1α	118.6％	174.8％
MIP-1β	131.4％	212.6％	RANTES	101.4％	127.2％

(2)对靶细胞抑制SIV感染、增殖的作用

通过表1所示结果可以确认本发明的物质具有促进HIV抑制因子——MIP-1α、MIP-1β、RANTES的产生的作用。因此，采用与上述(1)相同的试验系统，考察接种牛痘病毒的炎症组织提取物对靶细胞中病毒感染、增殖的效果。病毒的定量通过使用p27 EIA kit(Coulter Corp.公司生产，Hialeah，FL)测定细胞培养上清液中的p27水平来进行。结果发现例如使用上述被测物质(1μg/mL)，在感染SIV后培养10天得到的培养上清液中p27量减少到对照组的1/10乃至1/4，培养液中SIV量显著降低。除测定培养上清液中p27的水平之外，对上清液中RT-PCR和细胞中QC-RT-PCR也进行了测定，结果再现了上述p27水平的结果，通过培养上清液和细胞内两者的病毒RNA水平可以观察到本发明物质的病毒抑制作用。

从上述药理试验结果可以看出本发明物质具有促进来源于CD8阳性T细胞的HIV抑制因子——MIP-1α、MIP-1β、RANTES等趋化因子产生的作用。另外，确认由此可以产生抑制猴免疫缺陷病毒(SIV)感染、增殖的效果。接种牛痘病毒的炎症组织提取物有长年市售、使用的制剂，已知是副作用极少的药物。与此相对，现在用于艾滋病治疗的逆转录酶抑制剂或蛋白酶抑制剂表现出严重的副作用，在艾滋病治疗的临床上期待出现一种比现有药物副作用少、可以安心使用的药物。本发明的药物是具有新型作用机理的抗HIV药，作为几乎没有副作用、安全性高的药物，具有很高的实用性。

Claims

1、趋化因子产生促进剂，含有接种牛痘病毒的炎症组织提取物作为有效成分。

2、如权利要求1所述的趋化因子产生促进剂，趋化因子为MIP-1α、MIP-1β、RANTES。

3、如权利要求1或2所述的药物，其中所说的炎症组织为皮肤组织。

4、如权利要求3所述的药物，其中所说的皮肤组织为兔的炎症皮肤组织。

5、如权利要求1至4中任意一项所述的药物，为注射剂。

6、如权利要求1至4中任意一项所述的药物，为口服制剂。