CN1259565C - 西藏红景天药材hplc指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及西藏红景天〔Rhodiola tibetica(Hook.f.et Thomas)Fu〕药材HPLC指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱。首先，取西藏红景天药材粉末，加入乙醇，微波提取，在提取液中滴加醋酸铅溶液产生沉淀，离心，所得上清液作为供试品溶液；然后，进行高效液相色谱分析：精密吸取供试品溶液进样，色谱柱为hypersil ODS(5μm，250×4.0mm)，流动相为0.05%磷酸缓冲液(pH3)-甲醇，采用梯度洗脱方式；检测波长：360nm；获得西藏红景天药材HPLC指纹图谱。并通过对20批西藏红景天药材HPLC指纹图谱进行比较，确定其共有指纹特征，得到西藏红景天标准指纹图谱。利用HPLC指纹特征可全面监控西藏红景天药材的质量，保证其稳定、均一、可控。
Description
技术领域
本发明涉及西藏红景天〔Rhodiola tibetica(Hook.f.et Thomas)Fu〕药材HPLC指纹图谱的构建方法，以及由此方法所得到的西藏红景天药材标准指纹图谱。
背景技术
色谱指纹图谱质量控制技术是当前中药质量研究的一个亮点。对于成分复杂的中药，过去那种以单一有效成分作为其质量控制指标的做法是不全面的，用“盲人摸象”做比喻是再贴切不过的了。而色谱指纹图谱质量控制模式则以色谱分析为手段，从中获取反映中药内在质量的信息，通过对指纹特征的分析比较，评价中药内在质量的真实性、一致性和稳定性，这是现阶段综合评价中药质量的最优技术。
色谱指纹图谱在国际上易获得认可，美国在植物药制品指导原则(草案)中允许申报者提供产品色谱指纹图谱资料，英国草药典、加拿大药用及芳香植物学会、德国药用植物学会、印度草药典也接受色谱指纹图谱。因此，为中药材建立相应的指纹图谱，是现阶段控制中药内在质量的有效手段。国外对植物药指纹图谱也有相似的应用，德国银杏提取物制剂就是其中十分突出的一个例子。
西藏红景天〔Rhodiola tibetica(Hook.f.et Thomas)Fu〕是青藏高原特有的天然药用植物，但目前西藏红景天的质量标准极不完善。本发明用HPLC法构建了西藏红景天的指纹图谱，利用HPLC指纹特征可全面监控西藏红景天药材的质量，保证其稳定、均一、可控。
发明内容
本发明的目的是提供西藏红景天〔Rhodiola tibetica(Hook.f.et Thomas)Fu〕药材指纹图谱的构建方法，以及由此方法所得到的西藏红景天药材标准指纹图谱。
本发明的西藏红景天药材HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：精密称取药材粉末，每100g加入70-85％(V/V)乙醇0.1～30L，用MCL-3型连续微波反应器提取1～120min，在提取液中滴加10％(W/V)醋酸铅溶液，醋酸铅溶液滴加量为每100g药材0.1-1000ml，产生沉淀，离心，将所得上清液作为供试品溶液；
(2)高效液相色谱分析：精密吸取供试品溶液进样；色谱条件：色谱柱为hypersilODS，5μm，250×4.0mm；流动相为0.05％磷酸缓冲液(pH3)-甲醇；采用梯度洗脱方式：0min→1min→50min→55min，甲醇(V/V)：15％→15％→70％→70％；检测波长：360nm；得到西藏红景天药材HPLC指纹图谱。
按照上述本发明的方法，在制备供试品溶液时，优选每100g西藏红景天药材加入85％乙醇6L，用MCL-3型连续微波反应器提取的时间优选为30min。
按照上述本发明的方法，通过对20批西藏红景天药材构建HPLC指纹图谱并进行分析比较，找出其共有特征峰，标出各共有特征峰的保留时间Rt，得到西藏红景天药材标准指纹图谱。其共有峰为4、8、9、11、17、18、19、20八个峰(见图1)，其保留时间Rt值分别为8.7min、13.1min、13.4min、14.6min、23.9min、25.0min、27.1min、37.2min；它们构成了西藏红景天药材的指纹特征。
本发明具有以下优点及用途：由于中药具有成分复杂、有效成分不明确的特点，西藏红景天其成分的研究极少，没有一种能较好地控制其质量的方法。而本指纹图谱的构建，将西藏红景天作为一个整体来对待，通过指纹图谱中共有峰的有无，能有效地监控西藏红景天的质量，保证其质量的稳定、均一、可控。且本发明具有方法先进、稳定性和重现性好、可操作性强等优点。
下面结合实施例和附图对本发明做进一步的说明。
附图说明
图1是本发明的西藏红景天药材标准指纹图谱。图中从左到右的箭头所指分别是特征峰1至20。
具体实施方式
本发明的优选实施例如下：
1.仪器与试药
1.1仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪；色谱柱：hypersil ODS(5μm，250×4.0mm)。
1.2试药：西藏红景天药材共20批，均来自于西藏自治区，经鉴定均系景天科红景天属植物西藏红景天〔Rhodiola tibetica(Hook.f.et Thomas)Fu〕。实验所用试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1供试品溶液的制备：分别精密称取各批西藏红景天药材粉末100g，各加入85％乙醇6L，用MCL-3型连续微波反应器提取，提取时间30min，在提取液中滴加10％(W/V)醋酸铅溶液200ml，产生沉淀，离心，所得到上清液作为供试品溶液；分别制得上述20批西藏红景天药材的供试品溶液。
2.2高效液相色谱分析：分别精密吸取上述各供试品溶液10μl进样；色谱条件：流动相为0.05％磷酸缓冲液(pH3)-甲醇，采用梯度洗脱方式：0min→1min→50min→55min，甲醇(V/V)：15％→15％→70％→70％；检测波长：360nm。分别得到上述20批西藏红景天药材的HPLC指纹图谱。
2.3共有峰确定：将上述得到的20批西藏红景天药材的HPLC色谱峰进行比较，共出现1至20共20个色谱峰(特征峰)。其中：共有峰为4、8、9、11、17、18、19、20八个峰(见图1)，其保留时间Rt值分别为8.7min、13.1min、13.4min、14.6min、23.9min、25.0min、27.1min、37.2min；它们构成了西藏红景天药材的指纹特征，可作为西藏红景天药材的标准指纹图谱。
Claims (2)
1.一种西藏红景天药材HPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：精密称取药材粉末，每100g加入70-85％乙醇0.1～30L，用MCL-3型连续微波反应器提取1～120min，在提取液中滴加10％W/V醋酸铅溶液，醋酸铅溶液滴加量为每100g药材0.1-1000ml，产生沉淀，离心，将所得上清液作为供试品溶液；
(2)高效液相色谱分析：精密吸取供试品溶液进样；色谱条件：色谱柱为hypersilODS，5μm，250×4.0mm；流动相为pH3的0.05％磷酸缓冲液-甲醇；采用梯度洗脱方式：0min→1min→50min→55min，甲醇：15％→15％→70％→70％；检测波长：360nm；得到西藏红景天药材HPLC指纹图谱；
(3)测定20批西藏红景天药材的HPLC指纹图谱并进行比较，得到由其共有特征峰构成的西藏红景天药材HPLC标准指纹图谱，该指纹图谱具有的共有特征峰为(4)、(8)、(9)、(11)、(17)、(18)、(19)、(20)八个峰，其保留时间Rt值分别为8.7min、13.1min、13.4min、14.6min、23.9min、25.0min、27.1min、37.2min。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征是：在制备供试品溶液时，每100g西藏红景天药材加入85％乙醇6L，用MCL-3型连续微波反应器提取的时间为30min。
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