CN1225943A - 大豆β-淀粉酶的制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种高酶活力大豆β-淀粉酶的制备工艺,包括脱脂豆粉浸提液的超滤浓缩,二次沉淀及沉淀的冻融处理步骤,该工艺耗能较低、生产效率高、更适合工业生产。本发明还提供了依据该工艺生产的产品性能好的大豆β-淀粉酶,其特性为:最适作用温度为60℃,作用温度范围45—65℃,最适作用pH5.0—6.0,作用pH范围4.0—7.0,不含α-淀粉酶。
Description
本发明涉及一种植物中的β-淀粉酶生产工艺,具体地涉及一种高酶活力大豆β-淀粉酶的制备工艺。
β-淀粉酶是外切型糖化酶,它作用于淀粉时,从α-1,4糖甘键的非还原性末端依次切下麦芽糖单位,水解道谢产物有麦芽糖、麦芽三糖和β-界限糊精。β-淀粉酶主要用于食品工业,如高麦牙糖浆及超高麦芽糖浆的生产。目前,已有技术中,用微生物发酵法生产的商品β-淀粉酶耐热性差,而且成本较高。植物中的β-淀粉酶活力高、耐热性好,作用pH范围广,但现有技术中曾经生产过的甘薯β-淀粉酶酶活力极低,品质粗糙,已经淘汰。据谷海先、郭庆文报道的大豆β-淀粉酶制备方法(见谷海先、郭庆文,1997,大豆β-淀粉酶的制备及酶学性质的研究,仪器与发酵工业23(6)45-49),包括糊精吸附并酒精沉淀,该方法的酶活力虽然较甘薯β-淀粉酶高,但制备过程耗用大量酒精,必须配套建立酒精回收装置,从而使操作复杂,成本高。迄今为止,由于缺乏相关的工艺技术,高酶活力植物β-淀粉酶仍未实现工业规模生产。
本发明的目的是克服已有技术的上述缺点,提供一种耗能较低、生产效率高、更适合工业生产的高酶活力大豆β-淀粉酶制备工艺。进一步提供依据该工艺生产的产品性能好的大豆β-淀粉酶。
为了实现本发明的上述目的,本发明提供了如下的技术方案:
大豆β-淀粉酶的制备工艺,包括脱脂豆粉浸提液的超滤浓缩,二次沉淀及沉淀的冻融处理步骤,具体地,脱脂豆粉经缓冲液在30-40℃浸提后,过滤,加入0.2-1.0%的硫酸钠,超滤浓缩,调整浓缩液的pH为3.6-5.0,加入硫酸纳至浓度为24%-31%,过滤或离心收集沉淀,将沉淀置于-10℃至-1℃速冻至冻结态或置于1℃至5℃冷藏10小时以上,取出沉淀,加蒸馏水溶解,过滤或离心收集清液,将上述滤液调至pH为3.6-5.0,加入15%-20%硫酸钠,过滤或离心收集沉淀,烘干,粉碎过筛。
上述工艺中,超滤浓缩可优选用排阻分子量20K-30K道尔顿的中空纤维柱。
上述工艺中,烘干可优选温度35-40℃。
同时,本发明还提供了依据上述工艺生产出的大豆β-淀粉酶。其特性为:最适作用温度为60℃,作用温度范围45-65℃,最适作用pH5.0-6.0,作用pH范围4.0-7.0,不含α-淀粉酶。
本发明的优异效果足基于下述原理得出的:脱脂豆粉经缓冲液浸提后,过滤,向滤液加入0.2-1.0%的硫酸钠,作为蛋白保护剂,用排阻分子量20K道尔顿的中空纤维柱进行超滤浓缩,调整浓缩液的pH为3.6-5.5,进行第一次沉淀,加入硫酸纳至浓度为24%-31%,过滤或离心收集沉淀。此时酶活回收率为85%。将沉淀置于-10℃至-1℃速冻至冻结态或置于1℃至5℃冷藏10小时以上,取出沉淀,加适量蒸馏水解溶,过滤或离心收集清液,弃不溶物。分析不溶物为杂蛋白和淀粉等多糖类物质,因为这些物质具冷沉性,经过深度冷却甚至冷冻后,不再溶解于冷水中,而作为沉淀被去除;经检测,沉淀中仪有极微量的β-淀粉酶活力残留,而这部分沉淀的干重占干酶粉的五分之一到四分之一;因此,经过该纯化步骤,酶的比活力提高25%-33%。此时,滤液中β-淀粉酶的比活力已达30Ku/ml(1u即1个酶活力单位,它是指在适宜反应条件下,每小时产生1毫克麦芽糖的酶量),加入一定的保存剂,可作为液体酶直接使用。若要制得酶的干粉,可对溶解清液进行第二次沉淀,即将上述滤液调至pH为3.6-5.0,加入15%-20%硫酸钠,过滤或离心收集沉淀,于35-40℃烘干后粉碎过筛,得高酶活力大豆β-淀粉酶,色泽浅黄,酶活力高达430Ku/g,总酶活回收率为70%。这些指标均优于用现有技术得到的制品。可见本发明克服了已有技术的上述缺点,提供了一种耗能较低、生产效率高、更适合工业生产的高酶活力大豆β-淀粉酶制备工艺。同时还提供了依据本发明工艺生产的产品性能好的大豆β-淀粉酶。其特性为:最适作用温度为60℃,作用温度范围45-65℃,最适作用pH5.0-6.0,作用pH范围4.0-7.0,不含α-淀粉酶。
下面用实施例来进一步说明本发明的实质性内容,但本发明的内容并不局限于此。
实施例1:称取1公斤脱脂豆粉,加入9公斤缓冲液,40℃提取30分钟后,过滤,滤渣加入蒸馏水1公斤,搅拌后过滤,合并滤液,向滤液加入硫酸钠45克,溶解完全后,用排阻分子量20K道尔顿的中空纤维柱进行超滤浓缩,调整浓缩液的pH为4.5,加入硫酸纳560克,待硫酸钠晶体完全溶解后,6000rpm离心20分钟,收集沉淀并置于-8℃速冻。向冻结之沉淀加入蒸馏水450ml,溶解后6000rpm离心25分钟,上清液调至pH4.5,加入硫酸钠104克,待硫酸钠晶体完全溶解后,离心收集沉淀,将沉淀分散在不锈钢筛网上,40℃热烘20小时,粉碎后过120目筛网,得酶粉39克,测定β-淀粉酶活力为432Ku/g。
实施例2:称取2公斤脱脂豆粉,加入17公斤缓冲液,30℃提取40分钟后,过滤,滤渣加入蒸馏水2公斤,搅拌后过滤,合并滤液,向滤液加入硫酸钠88克,溶解完全后,用排阻分子量30K道尔顿的中空纤维柱进行超滤浓缩,调整浓缩液的pH为3.8,加入硫酸纳990克,待硫酸钠晶体完全溶解后,6000rpm离心20分钟,收集沉淀置冰箱内冷藏过夜。向冷藏之沉淀加入蒸馏水900ml,溶解后6000rpm离心25分钟,上清液调至pH3.8,加入硫酸钠200克,待硫酸钠晶体完全溶解后,离心收集沉淀,将沉淀分散在不锈钢筛网上,38℃热烘24小时,粉碎后过120目筛网,得酶粉80克,测定β-淀粉酶活力为424Ku/g。
实施例3:称取5公斤脱脂豆粉,加入45公斤缓冲液,35℃提取40分钟后,过滤,滤渣加入蒸馏水5公斤,搅拌后过滤,合并滤液,向滤液加入硫酸钠225克,溶解完全后,用排阻分子量30K道尔顿的中空纤维柱进行超滤浓缩,调整浓缩液的pH为4.2,加入硫酸钠2600克,待硫酸钠晶体完全溶解后,6000rpm离心20分钟,收集沉淀置冰箱内冷藏过夜。向冷藏之沉淀加入蒸馏水2250ml,溶解后6000rpm离心25分钟,上清液调至pH4.2,加入硫酸钠500克,待硫酸钠晶体完全溶解后,离心收集沉淀,将沉淀分散在不锈钢筛网上,40℃热烘20小时,粉碎后过120目筛网,得酶粉197克,测定β-淀粉酶活力为430Ku/g。
上述实施例1-3制备出的大豆β-淀粉酶。其特性为:最适作用温度为60℃,作用温度范围45-65℃,最适作用pH5.0-6.0,作用pH范围4.0-7.0,不含α-淀粉酶。
Claims (4)
1、大豆β-淀粉酶的制备工艺,包括脱脂豆粉浸提液的超滤浓缩,二次沉淀及沉淀的冻融处理步骤,其特征在于脱脂豆粉经缓冲液在30-40℃浸提后,过滤,加入0.2-1.0%的硫酸钠,超滤浓缩,调整浓缩液的pH为3.6-5.0,加入硫酸纳至浓度为24%-31%,过滤或离心收集沉淀,将沉淀置于-10℃至-1℃速冻至冻结态或置于1℃至5℃冷藏10小时以上,取出沉淀,加蒸馏水溶解,过滤或离心收集清液,将上述滤液调至pH为3.6-5.0,加入15%-20%硫酸钠,过滤或离心收集沉淀,烘干,粉碎过筛。
2、根据权利要求1所述的制备工艺,其特征在于超滤浓缩优选用排阻分子量20K-30K道尔顿的中空纤维柱。
3、根据权利要求1所述的制备工艺,其特征在于烘干优选温度35-40℃。
4、依据权利要求1或2或3所述的制备工艺生产出的大豆β-淀粉酶。
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