CN122580098A

CN122580098A - 用于在治疗癌症或自身免疫病的方法中使用的bcl6的调节剂

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Publication number: CN122580098A
Application number: CN202480071745.9A
Authority: CN
Inventors: D·S·莫滕森; D·黄; M·D·亚历山大; B·W·怀特菲尔德; H·P·舒纳特纳; D·S·多德; G·米西奥; N·霍尔伯格-道格拉斯; J·罗德斯; J·格里芬
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2023-09-14
Filing date: 2024-09-13
Publication date: 2026-08-14
Also published as: WO2025059429A1; EP4777110A1; KR20260093302A

Abstract

本文提供了用于调节BCL6的化合物及其组合物。在一些实施方案中，提供了所述化合物和组合物用于治疗癌症或自身免疫病。在一些实施方案中，所述化合物具有式 (IA)：

Description

用于在治疗癌症或自身免疫病的方法中使用的BCL6的调节剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2023年9月14日提交的美国临时申请号63/538,402的优先权权益，将其通过引用以其整体并入本文。

技术领域

本公开文本总体上涉及化合物、组合物和制备方法以及所述化合物和组合物用于治疗癌症或自身免疫病的用途。

背景技术

BCL6（B细胞淋巴瘤6）是BTB/POZ-锌指家族的成员，其含有N末端BTB/POZ结构域和C末端处的锌指。作为滤泡性辅助性T（Tfh）细胞的转录因子，BCL6是幼稚B细胞的生发中心（GC）形成所必需的，并且因此是抗体亲和力成熟所必需的。BCL6最初被发现作为弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中的癌基因，并且其作用与许多类型的疾病（包括B-急性成淋巴细胞性白血病、慢性髓系白血病、乳腺癌和非小细胞肺癌（NSCLC））有关（Cardenas等人, ClinCancer Res 2017, 23, 885-893）。N末端BTB/POZ结构域结合并募集辅阻遏物分子（诸如SMRT、NCOR1和BCOR），以形成I类和II类组蛋白脱乙酰酶复合物，并且C末端锌指结合特异性DNA识别序列（Yang等人, Cell Dev. Biol. 2019, 7, 272）。在与其靶基因结合并形成复合物时，BCL6降低其靶标（包括几种关键的肿瘤抑制因子）的RNA表达。BCL6的过表达（常见于恶性肿瘤，诸如非霍奇金淋巴瘤（NHL））导致细胞周期和DNA修复检查点蛋白的异位抑制，导致不受限制的细胞增殖和肿瘤发生。

已知GC反应引起导致几种疾病的致病性自身抗体的产生增加，这表明抑制或降解BCL6的方法具有潜在的治疗适用性。BCL6 BTB/POZ结构域和辅阻遏物的共晶结构的结构表征表明，结合发生在由BCL6 BTB/POZ同二聚体之间的界面形成的侧向沟槽处（Melnick等人, Mol. Cell Biol. 2002, 22, 1804-1818；Ghetu等人, Mol. Cell. 2008, 29, 384-391）。从那时起，已经研究了与此位点结合的特异性配体，目的是利用对侧向沟槽的结合亲和力以使BCL6成为可成药靶标。

蛋白质降解是维持细胞稳态的受高度调节且至关重要的过程。通过泛素-蛋白酶体途径（UPP）实现对受损的、错误折叠的或过量的蛋白质的选择性鉴定和去除。UPP是调节几乎所有细胞过程的核心。蛋白质的泛素化通过E3泛素连接酶完成，所述E3泛素连接酶与蛋白质结合并且将泛素分子添加到蛋白质上，从而标记蛋白质用于蛋白酶体降解。

利用UPP用于治疗用途已经引起了极大的兴趣（Zhou等人, Mol. Cell 2000, 6,751-756）。一种有希望的疗法使用蛋白水解靶向嵌合体（通常称为PROTAC）通过蛋白质降解来实现不需要的蛋白质的去除（Scheepstra等人, Comp. Struct. Biotech. J. 2019,17, 160-176）。PROTAC是将E3连接酶和待降解的靶蛋白结合在一起的配体定向降解剂。这些二价分子通常由E3连接酶配体组成，所述E3连接酶配体通过接头部分与结合靶蛋白的小分子连接。PROTAC将E3连接酶定位在距靶蛋白的适当距离和方向处，从而允许后者泛素化。泛素化的靶蛋白随后被蛋白酶体识别，所述泛素化的靶蛋白在蛋白酶体处被降解。

因此，在一方面，本文提供了靶向BCL6进行降解的化合物。

发明内容

在某些实施方案中，本文描述了用于调节BCL6的化合物及其组合物。在各种实施方案中，所述化合物及其组合物可用于治疗癌症。

通过参考具体实施方式和实施例可以更全面理解本发明的实施方案，所述具体实施方式和实施例旨在举例说明非限制性实施方案。

附图说明

图1. BMS-986458作为BCL6-LDD的机制的示意图表示。化合物诱导的与CRBN E3连接酶的接近促进了BCL6的泛素化，从而导致被26S蛋白酶体的降解。在DLBCL中，BCL6的丧失导致细胞周期停滞、DNA损伤修复的丧失、以及通过细胞凋亡的最终细胞死亡。

图2. 在用BMS-986458处理之后，分别在 (A) OCI-LY-1和 (B) WSU-DLCL-2中在2h和4 h，通过MSD-ECL测定评价的BCL6蛋白水平。在OCI-LY-1中独立地评估了两种非对映异构体BMT-648592（实心圆形）和BMT-648599（实心菱形）相对于BMS-986458（1 : 1混合物）（实心正方形）的相对BCL6蛋白水平 (C) 和5天增殖反应 (D)。用10 nM BMS-986458处理的OCI-LY-1细胞实现了在2 h内BCL6的完全降解 (F)，并且当以10 nM给药时，保持大于90%BCL6降解持续5天 (G)，如通过蛋白质印迹所证明的。在OCI-LY-1 CRBN-/-中未观察到在OCI-LY-1亲本对照中观察到的对BMS-986458的5天抗增殖反应 (H)。浓度以µM列出。缩写：DC50，半最大降解时的浓度；DMSO，二甲基亚砜；POC，占DMSO对照的百分比。

图3. 用BMS-986458处理的OCI-LY-1细胞的质谱蛋白质组学分析。火山图展现了在处理4 h时化合物诱导的降解的高度底物特异性 (A)。在24 h时维持BCL6降解，然而下游功能效应物的水平也受到影响 (B)。与基于CRBN的降解机制相关的历史新底物（IKZF1、IKZF2、IKZF3、ZFP91、CSNK1A1、GSPT1）以蓝色突出显示。建立统计学稳健性阈值，其中FDR p值 < 0.05，以黄色和红色方块突出显示。在log倍数变化 = +/- 1处建立有意义的生物影响的截止值，竖直红色虚线。浓度以µM列出。缩写：FDR，错误发现率。

图4. 在BMS-986458处理之后的急性和延迟抗增殖反应。AUC值（μM • h）描述了在等效剂量范围（0.015-100 nM）中经5天（对角线填充）和10天（实心填充）处理，对BMS-986458的抗增殖反应。通过在仅有DMSO的对照上的5天处理之后获得的增殖因子来调节10天DRC。使用CTG发光细胞活力测定来评估活性。通过（*）指示GCB COO。

图5. 急性和延迟反应细胞系中的对BMS-986458的细胞凋亡反应和抗增殖反应。在代表急性反应分类和延迟反应分类两者的六个DLBCL细胞系模型中，暴露于高达40 nM的BMS-896458剂量范围持续5天之后的活力（三角形数据点，实线回归；左轴）和细胞凋亡（圆形数据点，虚线回归；右轴）。使用流式细胞术来评估细胞凋亡活性。缩写：PoC，占对照的百分比；FC，流式细胞术；AUC，浓度-时间曲线下面积。

图6. BMS-986458抗增殖反应与BCL6表达水平的相关性。来自DLBCL组细胞系对BMS-986458的反应的10天AUC值的排序 (6A)。使用十天AUC < 7 μM • h阈值来定义迟发敏感模型与耐药模型，如通过黑色实线指示的。对由BCL6基线蛋白表达水平表示的BMS-986458敏感性进行排序 (6B)。

图7. 多柔比星耐药DLBCL模型对BMS-986458的抗增殖反应和细胞凋亡反应。在三种获得性多柔比星耐药性（虚线）和相应匹配的亲本DLBCL细胞系（实线）中暴露于连续稀释的多柔比星或BMS-986458持续5天之后的活力和细胞凋亡曲线 (A)。在72 h处理时间段内获得性多柔比星耐药性的DLBCL模型及其相应的匹配亲本系响应于10 nM单剂量BMS-986458的蛋白质印迹蛋白质分析 (B)。缩写：DoxR，多柔比星耐药性。

图8. 在BID x 5或BID x 3给药30 mg/kg BMS-986458之后，OCI-LY-1异种移植物中的血浆/肿瘤暴露量和BCL6降解百分比。将具有大约500 mm³的OCI-LY-1肿瘤的雌性CB.17-SCID小鼠以30 mg/kg每日两次给药BMS-986458持续连续五天（BID×5，AP9506）或连续三天（BID×3，AP9721）（n = 4只/时间点）。在最后剂量后6、10和14 h时收获血浆和肿瘤样品以确定BMS-986458浓度。处理肿瘤以用蛋白质印迹检测BCL6水平（上图图像）。BMS-986458的血浆（蓝线）和肿瘤（红线）浓度（左轴）呈现在下图的曲线图中。绿色条表示与媒介物相比，BMS-986458治疗的肿瘤中的BCL6降解百分比。相对于媒介物对照（0% BCL6降解）计算BCL6降解百分比。使用单因素方差分析与邓尼特多重比较检验（Dunnett’s multiplecomparisons test）对所有治疗组进行统计分析，并且将所示数据与媒介物对照组进行比较。结果呈现为平均值，其中误差条表示平均值的标准误差。缩写：BCL6，B细胞淋巴瘤6；h，小时；BIDx5，每日两次给药持续连续5天；BIDx3，每日两次给药持续连续3天；****p <0.0001。

图9. 在OCI-LY-1异种移植模型中用每日两次给药（BID）持续连续21天，BMS-986458的抗肿瘤活性（研究AP9776）。将雌性CB.17-SCID小鼠用在1 : 1基质胶中的5 x 10⁶个OCI-LY-1肿瘤细胞接种到右侧腹中。在治疗开始时，将小鼠随机分配到各治疗组（n = 9只/组）。测试制品治疗在第19天开始，此时平均肿瘤体积为大约196 mm³。肿瘤体积减小计算为BMS-986458治疗的小鼠与媒介物治疗的小鼠之间的平均肿瘤体积的中心差。第37天，最终肿瘤测量日。结果呈现为平均值，其中误差条表示SEM。使用双因素方差分析与邦费罗尼多重比较检验（Bonferroni’s multiple comparisons test）对所有治疗组进行统计分析，并且将所示数据与媒介物对照组进行比较。缩写：BID，每日两次给药；媒介物，在25 mM柠檬酸盐缓冲液中的10% Captisol，pH 3；****p < 0.0001。

图10. 在最终剂量之后6 h (A)、10 h (B) 和14 h (C) 收集的在用每日两次给药BMS-986458持续连续21天治疗的OCI-LY-1肿瘤中的BCL6降解。在第19天开始，此时平均肿瘤体积为大约196 mm³。在最终肿瘤测量后三天，在第40天，将每个BMS-986458治疗组（n= 9只）分成三个队列（每个队列3只小鼠）用于PD和PK取样。在最终剂量之后6、10和14 h收集肿瘤，并且将其分为两半用于PD和PK分析。对于PD分析，将肿瘤加工成裂解物，并且通过蛋白质印迹分析BCL6蛋白的降解（上图，印迹图像）。血浆和肿瘤BMS-986458浓度和BCL6降解描绘在下图（曲线图）中。结果呈现为平均积分强度值，其中误差条表示平均值的标准误差。使用单因素方差分析（ANOVA）与邓尼特多重比较检验对所有治疗组进行统计分析，并且将所示数据与媒介物对照组进行比较。缩写：BID，每日两次给药；媒介物，在25 mM柠檬酸盐缓冲液中的10% Captisol，pH 3；****p < 0.0001，将雌性CB.17-SCID小鼠用在1 : 1基质胶中的5 x 10⁶个OCI-LY-1肿瘤细胞接种到右侧腹中。

图11.BMS-986458治疗诱导滤泡性辅助性T细胞身份的丧失和细胞因子分泌的扰动。在从来自三个独立健康供体的PBMC分离的iTfh中评价对BMS-986458的表型反应。A示出了由幼稚CD4+CD45RA+ T细胞诱导iTfh分化所遵循的治疗时间表以及使用所示门控策略的流动分析的时间设定 (B)。在第4天对iTfh的分析示出了BCL6表达的诱导、Tfh表面标志物CXCR5/PD1的表达和典范Tfh细胞因子IL-21的分泌 (C)。如通过流式细胞术确定的，通过CXCR5+PD1+的丧失获得的BCL6蛋白和Tfh表型的BMS-986458剂量和时间依赖性调节 (D-F)。分别在BMS-986458治疗后第4天和第8天使用ECL-MSD评估IL-10和IL-121分泌（图G）。使用GraphPad Prism v9.4.0进行非线性回归分析。使用2因素方差分析评价所有测定中供体变化的显著性，显著性 = p值 > 0.05（图H）。缩写：ActA，激活素A；iTfh，滤泡性辅助性T细胞；D4，第4天；DMSO，二甲基亚砜；ns，不显著。

图12. BMS-986458治疗不影响离体嗜中性粒细胞活力或成熟动力学。将源自HD骨髓的CD34+细胞暴露于以指定浓度的BMS-986458持续14天，每两天更新处理和细胞培养基。通过流式细胞术随时间评估嗜中性粒细胞成熟阶段。数据表示三个供体中每个骨髓群体中细胞的平均百分比。缩写：DMSO，二甲基亚砜。

图13A. 实施例B4的A1部分第1阶段中BOIN设计的流程图。

图13B. 实施例B4的A1部分第2阶段中的TITE-BOIN12设计的流程图。

具体实施方式

定义

如本文所用，术语“包含”和“包括”可以互换使用。术语“包含”和“包括”应被解释为指定所提及的所陈述特征或组分的存在，但是不排除一个或多个特征、或组分或其组的存在或添加。另外，术语“包含”和“包括”旨在包括由术语“由……组成”所涵盖的例子。因此，可以使用术语“由……组成”来替代术语“包含”和“包括”，以提供本发明的更具体的实施方案。

术语“由……组成”意指主题具有至少90%、95%、97%、98%或99%的组成所述主题的所陈述特征或组分。在另一个实施方案中，术语“由……组成”从任何随后的列举内容的范围中排除了任何其他的特征或组分，除了对于要实现的技术效果不必需的那些特征或组分。

如本文所用，术语“或”应被解释为包含性的“或”，意指任一种或任何组合。因此，“A、B或C”意指以下中的任一种：“A；B；C；A和B；A和C；B和C；A、B和C”。只有当元素、功能、步骤或动作的组合以某种方式固有地相互排斥时，才会出现此定义的例外。

在本发明的说明书中，除非另有指示，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括所列举范围内的任何整数及（在适当时）其分数（诸如整数的十分之一和百分之一）的值。此外，除非另有指示，否则本文所列举的与任何物理特征（诸如聚合物亚基、大小或厚度）相关的任何数字范围应理解为包括所列举范围内的任何整数。除非另有指示，否则如本文所用，术语“约”和“大约”意指所指示范围、值或结构的± 20%、± 10%、± 5%或± 1%。

“氨基”是指-NH₂基团。

“氰基”是指-CN基团。

“硝基”是指-NO₂基团。

“氧杂”是指-O-基团。

“氧代基”是指=O基团。

“硫亚基”是指=S基团。

“亚氨基”是指=N-H基团。

“肟基”是指=N-OH基团。

“肼基”是指=N-NH₂基团。

“烷基”是指直链或支链烃链基团，其仅由碳和氢原子组成，不含不饱和，具有一至十五个碳原子（例如，C₁-C₁₅烷基）。在某些实施方案中，烷基包含一至十三个碳原子（例如，C₁-C₁₃烷基）。在某些实施方案中，烷基包含一至八个碳原子（例如，C₁-C₈烷基）。在其他实施方案中，烷基包含一至五个碳原子（例如，C₁-C₅烷基）。在其他实施方案中，烷基包含一至四个碳原子（例如，C₁-C₄烷基）。在其他实施方案中，烷基包含一至三个碳原子（例如，C₁-C₃烷基）。在其他实施方案中，烷基包含一至两个碳原子（例如，C₁-C₂烷基）。在其他实施方案中，烷基包含一个碳原子（例如，C₁烷基）。在其他实施方案中，烷基包含五至十五个碳原子（例如，C₅-C₁₅烷基）。在其他实施方案中，烷基包含五至八个碳原子（例如，C₅-C₈烷基）。在其他实施方案中，烷基包含二至五个碳原子（例如，C₂-C₅烷基）。在其他实施方案中，烷基包含三至五个碳原子（例如，C₃-C₅烷基）。在其他实施方案中，烷基选自甲基、乙基、1-丙基（正丙基）、1-甲基乙基（异丙基）、1-丁基（正丁基）、1-甲基丙基（仲丁基）、2-甲基丙基（异丁基）、1,1-二甲基乙基（叔丁基）和1-戊基（正戊基）。烷基通过单键附接至分子的剩余部分。除非在说明书中另外具体说明，否则烷基任选地被以下取代基中的一种或多种取代：卤代基、氰基、硝基、氧代基、硫亚基（thioxo）、亚氨基、肟基、三甲基甲硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)- N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tR^a（其中t是1或2）和-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）。

“烷基-OH”是指如上定义的无支链烷基或支链烷基，其中一个或多个氢原子被-OH替代。例如，“C₁-C₆烷基-OH”是指被一个或多个-OH基团取代的C₁-C₆烷基。烷基-OH可以含有与相同碳原子或多个碳原子附接的多个羟基。

“烷氧基”是指式-O-烷基的经由氧原子键合的基团，其中烷基是如上文所定义的烷基链。

“烯基”是指直链或支链烃链基团，其仅由碳和氢原子组成，含有至少一个碳-碳双键并且具有二至十二个碳原子。在某些实施方案中，烯基包含二至八个碳原子。在其他实施方案中，烯基包含二至四个碳原子。烯基通过单键附接至分子的剩余部分，例如，乙烯基（ethenyl）（即，乙烯基（vinyl））、丙-1-烯基（即，烯丙基）、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。除非在说明书中另外具体说明，否则烯基任选地被以下取代基中的一种或多种取代：卤代基、氰基、硝基、氧代基、硫亚基、亚氨基、肟基、三甲基甲硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)- N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tR^a（其中t是1或2）和-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）。

“炔基”是指直链或支链烃链基团，其仅由碳和氢原子组成，含有至少一个碳-碳三键，具有二至十二个碳原子。在某些实施方案中，炔基包含二至八个碳原子。在其他实施方案中，炔基具有二至四个碳原子。炔基通过单键附接至分子的剩余部分，例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。除非在说明书中另外具体说明，否则炔基任选地被以下取代基中的一种或多种取代：卤代基、氰基、硝基、氧代基、硫亚基、亚氨基、肟基、三甲基甲硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)-N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tR^a（其中t是1或2）和-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）。

“亚烷基”或“亚烷基链”是指将分子的剩余部分与基团连接的直链或直链二价烃链，其仅由碳和氢组成，不含不饱和并且具有一至十二个碳原子，例如，亚甲基、亚乙基、亚丙基、正亚丁基等。亚烷基链经由单键附接至分子的剩余部分并且经由单键附接至基团。亚烷基链与分子的剩余部分和与基团的附接点可以是经由亚烷基链中的一个碳或经由链中的任意两个碳。在某些实施方案中，亚烷基包含一至八个碳原子（例如，C₁-C₈亚烷基）。在其他实施方案中，亚烷基包含一至五个碳原子（例如，C₁-C₅亚烷基）。在其他实施方案中，亚烷基包含一至四个碳原子（例如，C₁-C₄亚烷基）。在其他实施方案中，亚烷基包含一至三个碳原子（例如，C₁-C₃亚烷基）。在其他实施方案中，亚烷基包含一至二个碳原子（例如，C₁-C₂亚烷基）。在其他实施方案中，亚烷基包含一个碳原子（例如，C₁亚烷基）。在其他实施方案中，亚烷基包含五至八个碳原子（例如，C₅-C₈亚烷基）。在其他实施方案中，亚烷基包含二至五个碳原子（例如，C₂-C₅亚烷基）。在其他实施方案中，亚烷基包含三至五个碳原子（例如，C₃-C₅亚烷基）。除非在说明书中另外具体说明，亚烷基链任选地被以下取代基中的一种或多种取代：卤代基、氰基、硝基、氧代基、硫亚基、亚氨基、肟基、三甲基硅烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)- N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tR^a（其中t是1或2）和-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）。

“芳基”是指通过从环碳原子去除氢原子而衍生自芳族单环或多环烃环系统的基团。芳族单环或多环烃环系统仅含有来自五至十八个碳原子的氢和碳，其中环系统中的至少一个环是完全不饱和的，即，其含有根据休克尔理论（Hückel theory）的环状离域(4n+2)π-电子系统。由其衍生芳基的环系统包括但不限于诸如苯、芴、茚满、茚、萘满和萘的基团。除非说明书中另外具体说明，否则术语“芳基”或前缀“芳”（诸如在“芳烷基”中）意在包括任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代的芳基：烷基、烯基、炔基、卤代基、氟烷基、氰基、硝基、任选地经取代的芳基、任选地经取代的芳烷基、任选地经取代的芳烯基、任选地经取代的芳炔基、任选地经取代的碳环基、任选地经取代的碳环基烷基、任选地经取代的杂环基、任选地经取代的杂环基烷基、任选地经取代的杂芳基、任选地经取代的杂芳基烷基、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-R^b-S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-R^b-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代），每个R^b独立地是直接键或者直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且R^c是直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且其中除非另外指示，否则以上取代基中的每个是未经取代的。

“芳烷基”是指式-R^c芳基的基团，其中R^c是如上文所定义的亚烷基链，例如，亚甲基、亚乙基等。芳烷基的亚烷基链部分如上文针对亚烷基链所述任选地被取代。芳烷基的芳基部分如上文针对芳基所述任选地被取代。

“芳烯基”是指式-R^d-芳基的基团，其中R^d是如上文所定义的亚烯基链。芳烯基的芳基部分如上文针对芳基所述任选地被取代。芳烯基的亚烯基链部分如上文针对亚烯基所定义任选地被取代。

“芳炔基”是指式-R^e-芳基的基团，其中R^e是如上文所定义的亚炔基链。芳炔基的芳基部分如上文针对芳基所述任选地被取代。芳炔基的亚炔基链部分如上文针对亚炔基链所定义任选地被取代。

“碳环基”是指仅由碳和氢原子组成的稳定非芳族单环或多环烃基，所述基团包含稠合或桥接环系统，具有三至十五个碳原子。在某些实施方案中，碳环基包含三至十个碳原子。在其他实施方案中，碳环基包含五至七个碳原子。碳环基通过单键附接至分子的剩余部分。碳环基可以是饱和的（即，仅含有单个C-C键）或不饱和的（即，含有一个或多个双键或三键）。完全饱和碳环基也称为“碳环基”。单环碳环基的例子包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。不饱和碳环基也称为“环烯基”。单环环烯基的例子包括例如环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和环辛烯基。多环碳环基包括例如金刚烷基、降冰片基（即，双环[2.2.1]庚烷基）、降冰片烯基、十氢萘基、7,7-二甲基双环[2.2.1]庚烷基等。除非在说明书中另外具体说明，否则术语“碳环基”意在包括任选地被一个或多个独立地选自以下的取代基取代的碳环基：烷基、烯基、炔基、卤代基、氟烷基、氧代基、硫亚基、氰基、硝基、任选地经取代的芳基、任选地经取代的芳烷基、任选地经取代的芳烯基、任选地经取代的芳炔基、任选地经取代的碳环基、任选地经取代的碳环基烷基、任选地经取代的杂环基、任选地经取代的杂环基烷基、任选地经取代的杂芳基、任选地经取代的杂芳基烷基、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)-N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tR^a（其中t是1或2）和-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代），每个Rb独立地是直接键或者直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且R^c是直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且其中除非另外指示，否则以上取代基中的每个是未经取代的。

“碳环基烷基”是指式-R^c-碳环基的基团，其中R^c是如上文所定义的亚烷基链。亚烷基链和碳环基如上文所定义任选地被取代。

“羰基”是指式-C(O)R¹⁰R²⁰的基团，其中R¹⁰和R²⁰独立地选自-OH、卤代基、氰基、硝基、氧代基、硫亚基、亚氨基、肟基、三甲基甲硅烷基、-R^a、-OR^a、-SR^a、-OC(O)-R^a、-N(R^a)₂、-C(O)R^a、-C(O)OR^a、-C(O)N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)OR^a、-OC(O)- N(R^a)₂、-N(R^a)C(O)R^a、-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）、-S(O)_tR^a（其中t是1或2）和-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）。

“卤代基”或“卤素”是指溴、氯、氟或碘取代基。

“卤代烷基”是指被如上文所定义的一个或多个卤代基取代的如上文所定义的烷基，例如，三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,2-二氟乙基、3-溴-2-氟丙基、1,2-二溴乙基等。在一些实施方案中，卤代烷基具有一至六个碳原子并且被一个或多个卤代基取代（C₁-C₆卤代烷基），或所述卤代烷基具有一至五个碳原子并且被一个或多个卤代基取代（C₁-C₅卤代烷基），或所述卤代烷基具有一至三个碳原子并且被一个或多个卤代基取代（C₁-C₃卤代烷基）。卤代基可以全部相同，或者卤代基可以不同。除非另外特别说明，否则卤代烷基是任选地经取代的。

“氟烷基”是指被如上文所定义的一个或多个氟基取代的如上文所定义的烷基，例如，三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、2,2,2-三氟乙基、1-氟甲基-2-氟乙基等。氟烷基的烷基部分可以如上文针对烷基所定义任选地被取代。

“杂环基”是指包含二至十二个碳原子和一至六个选自氮、氧和硫的杂原子的稳定3至18元非芳族环基团。除非在说明书中另外具体说明，否则杂环基是可以包含稠合或桥接环系统的单环、二环、三环或四环环系统。杂环基中的杂原子可以任选地被氧化。一个或多个氮原子（如果存在）任选地被季铵化。杂环基是部分或完全饱和的。杂环基可以经由一个或多个环的任意原子附接至分子的剩余部分。此类杂环基的例子包括但不限于二氧杂环戊基、噻吩基[1,3]二噻烷基、十氢异喹啉基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑烷基、奎宁环基、噻唑烷基、四氢呋喃基、三噻烷基、四氢吡喃基、硫代吗啉基、噻吗啉基、1-氧代-硫代吗啉基和1,1-二氧代-硫代吗啉基。除非在说明书中另外具体说明，否则术语“杂环基”意在包括任选地被一个或多个选自以下的取代基取代的如上文所定义的杂环基：烷基、烯基、炔基、卤代基、氟烷基、氧代基、硫亚基、氰基、硝基、任选地经取代的芳基、任选地经取代的芳烷基、任选地经取代的芳烯基、任选地经取代的芳炔基、任选地经取代的碳环基、任选地经取代的碳环基烷基、任选地经取代的杂环基、任选地经取代的杂环基烷基、任选地经取代的杂芳基、任选地经取代的杂芳基烷基、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-R^b-S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-R^b-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代），每个R^b独立地是直接键或者直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且R^c是直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且其中除非另外指示，否则以上取代基中的每个是未经取代的。

“N-杂环基”或“N附接的杂环基”是指如上文所定义的杂环基，其含有至少一个氮并且其中杂环基与分子的剩余部分的附接点经由杂环基中的氮原子。N-杂环基如上文针对杂环基所述任选地被取代。此类N-杂环基的例子包括但不限于1-吗啉基、1-哌啶基、1-哌嗪基、1-吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑啉基和咪唑烷基。

“C-杂环基”或“C附接的杂环基”是指如上文所定义的杂环基，其含有至少一个杂原子并且其中杂环基与分子的剩余部分的附接点经由杂环基中的碳原子。C-杂环基如上文针对杂环基所述任选地被取代。此类C-杂环基的例子包括但不限于2-吗啉基、2-或3-或4-哌啶基、2-哌嗪基、2-或3-吡咯烷基等。

“杂环基烷基”是指式-R^c-杂环基的基团，其中R^c是如上文所定义的亚烷基链。如果杂环基是含氮杂环基，则所述杂环基任选地在氮原子处附接至烷基。杂环基烷基的亚烷基链如上文针对亚烷基链所定义任选地被取代。杂环基烷基的杂环基部分如上文针对杂环基所定义任选地被取代。

“杂环基烷氧基”是指式-O-R^c杂环基的经由氧原子键合的基团，其中R^c是如上文所定义的亚烷基链。如果杂环基是含氮杂环基，则所述杂环基任选地在氮原子处附接至烷基。杂环基烷氧基的亚烷基链如上文针对亚烷基链所定义任选地被取代。杂环基烷氧基的杂环基部分如上文针对杂环基所定义任选地被取代。

“杂芳基”是指衍生自包含二至十七个碳原子和一至六个选自氮、氧和硫的杂原子的3至18元芳族环基团的基团。如本文所用，杂芳基可以是单环、二环、三环或四环环系统，其中环系统中的至少一个环是完全不饱和的，即，其含有根据休克尔理论的环状离域 (4n+2) π-电子系统。杂芳基包括稠合或桥接环系统。杂芳基中的一个或多个杂原子任选地被氧化。一个或多个氮原子（如果存在）任选地被季铵化。杂芳基可以经由一个或多个环的任意原子附接至分子的剩余部分。杂芳基的例子包括但不限于氮杂卓基、吖啶基、苯并咪唑基、苯并吲哚基、1,3-苯并间二氧杂环戊烯基、苯并呋喃基、苯并噁唑基、苯并[d]噻唑基、苯并噻二唑基、苯并[b][1,4]二氧杂环庚烯基、苯并[b][1,4]噁嗪基、1,4-苯并二噁烷基、苯并萘并呋喃基、苯并噁唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并二噁烷基、苯并吡喃基、苯并吡喃酮基、苯并呋喃基、苯并呋喃酮基、苯并噻吩基（benzothienyl）（苯并噻吩基（benzothiophenyl））、苯并噻吩并[3,2-d]嘧啶基、苯并三唑基、苯并[4,6]咪唑并[1,2-a]吡啶基、咔唑基、噌啉基、环戊二烯并[d]嘧啶基、6,7-二氢-5H-环戊二烯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6-二氢苯并[h]喹唑啉基、5,6-二氢苯并[h]噌啉基、6,7-二氢-5H-苯并[6,7]环庚三烯并[1,2-c]哒嗪基、二苯并呋喃基、二苯并噻吩基、呋喃基、呋喃酮基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛四烯并[d]嘧啶基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛四烯并[d]哒嗪基、5,6,7,8,9,10-六氢环辛四烯并[d]吡啶基、异噻唑基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、吲唑基、异吲哚基、吲哚啉基、异吲哚啉基、异喹啉基、吲嗪基、异噁唑基、5,8-桥亚甲基-5,6,7,8-四氢喹唑啉基、萘啶基、1,6-萘啶酮基、噁二唑基、2-氧代氮杂卓基、噁唑基、环氧乙烷基、5,6,6a,7,8,9,10,10a-八氢苯并[h]喹唑啉基、1-苯基-1H-吡咯基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡咯基、吡唑基、吡唑并[3,4-d]嘧啶基、吡啶基、吡啶并[3,2-d]嘧啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡咯基、喹唑啉基、喹喔啉基、喹啉基、异喹啉基、四氢喹啉基、5,6,7,8-四氢喹唑啉基、5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、6,7,8,9-四氢-5H-环庚并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶基、5,6,7,8-四氢吡啶并[4,5-c]哒嗪基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、噻吩并[3,2-d]嘧啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基、和噻吩基（thiophenyl）（即，噻吩基（thienyl））。除非在说明书中另外具体说明，否则术语“杂芳基”意在包括任选地被一个或多个选自以下的取代基取代的如上文所定义的杂芳基：烷基、烯基、炔基、卤代基、氟烷基、卤代烯基、卤代炔基、氧代基、硫亚基、氰基、硝基、任选地经取代的芳基、任选地经取代的芳烷基、任选地经取代的芳烯基、任选地经取代的芳炔基、任选地经取代的碳环基、任选地经取代的碳环基烷基、任选地经取代的杂环基、任选地经取代的杂环基烷基、任选地经取代的杂芳基、任选地经取代的杂芳基烷基、-R^b-OR^a、-R^b-OC(O)-R^a、-R^b-OC(O)-OR^a、-R^b-OC(O)-N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)₂、-R^b-C(O)R^a、-R^b-C(O)OR^a、-R^b-C(O)N(R^a)₂、-R^b-O-R^c-C(O)N(R^a)₂、-R^b-N(R^a)C(O)OR^a、-R^b-N(R^a)C(O)R^a、-R^b-N(R^a)S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-R^b-S(O)_tR^a（其中t是1或2）、-R^b-S(O)_tOR^a（其中t是1或2）和-R^b-S(O)_tN(R^a)₂（其中t是1或2），其中每个R^a独立地是氢、烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、氟烷基、碳环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、碳环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、芳烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂环基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）、杂芳基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代）或杂芳基烷基（任选地被卤素、羟基、甲氧基或三氟甲基取代），每个R^b独立地是直接键或者直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且R^c是直链或支链亚烷基或亚烯基链，并且其中除非另外指示，否则以上取代基中的每个是未经取代的。

“N-杂芳基”是指如上文所定义的杂芳基，其含有至少一个氮，并且其中杂芳基与分子单独剩余部分的附接点经由杂芳基中的氮原子。N-杂芳基如上文针对杂芳基所述任选地被取代。

“C-杂芳基”是指如上文所定义的杂芳基，并且其中杂芳基与分子的剩余部分的附接点经由杂芳基中的碳原子。C-杂芳基如上文针对杂环基所述任选地被取代。

“杂芳基烷基”是指式-R^c-杂芳基的基团，其中R^c是如上文所定义的亚烷基链。如果杂芳基是含氮杂芳基，则所述杂芳基任选地在氮原子处附接至烷基。杂芳基烷基的亚烷基链如上文针对亚烷基链所定义任选地被取代。杂芳基烷基的杂芳基部分如上文针对杂芳基所定义任选地被取代。

“杂芳基烷氧基”是指式-O-R^c杂芳基的经由氧原子键合的基团，其中R^c是如上文所定义的亚烷基链。如果杂芳基是含氮杂芳基，则所述杂芳基任选地在氮原子处附接至烷基。杂芳基烷氧基的亚烷基链如上文针对亚烷基链所定义任选地被取代。杂芳基烷氧基的杂芳基部分如上文针对杂芳基所定义任选地被取代。

本公开文本的实施方案意在涵盖本文提供的化合物（诸如式 (I) 的化合物）的药学上可接受的盐、互变异构体、同位素体和立体异构体。

如本文所用，术语“一种或多种药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒酸或碱（包括无机酸和碱以及有机酸和碱）制备的盐。式 (I) 的化合物的合适的药学上可接受的碱加成盐包括但不限于由铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌制成的金属盐或由赖氨酸、N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺（N-甲基-葡糖胺）和普鲁卡因制成的有机盐。合适的无毒酸包括但不限于无机酸和有机酸，诸如乙酸、海藻酸、氨茴酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富马酸、呋喃甲酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、粘酸、硝酸、帕莫酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸和对甲苯磺酸。具体的无毒酸包括盐酸、氢溴酸、马来酸、磷酸、硫酸和甲磺酸。因此，具体盐的例子包括盐酸盐、甲酸盐和甲磺酸盐。其他是本领域熟知的，参见例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences, 第18版, Mack Publishing, Easton PA(1990) or Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第19版, MackPublishing, 宾夕法尼亚州伊斯顿 (1995)。

如本文所用并且除非另有说明，否则术语“立体异构体”或“立体异构体纯的”意指特定化合物的一种立体异构体，其基本上不含该化合物的其他立体异构体。例如，具有一个手性中心的立体异构纯的化合物将基本上不含所述化合物的相反对映异构体。具有两个手性中心的立体异构体纯的化合物将基本上不含所述化合物的其他非对映异构体。典型的立体异构体纯的化合物包含按重量计大于约80%的化合物的一种立体异构体和按重量计小于约20%的化合物的其他立体异构体、按重量计大于约90%的化合物的一种立体异构体和按重量计小于约10%的化合物的其他立体异构体、按重量计大于约95%的化合物的一种立体异构体和按重量计小于约5%的化合物的其他立体异构体、或按重量计大于约97%非化合物的一种立体异构体和按重量计小于约3%的化合物的其他立体异构体。本文公开的化合物可以具有手性中心，并且可以作为外消旋体、单个对映异构体或非对映异构体及其混合物存在。所有此类异构体形式均包括在本文公开的实施方案中，包括其混合物。

本文公开的实施方案涵盖了本文公开的化合物的立体异构纯形式的用途以及那些形式的混合物的用途。例如，包含等量或不等量的特定化合物的对映异构体的混合物可用于本文公开的方法和组合物中。这些异构体可以使用标准技术诸如手性柱或手性拆分剂不对称合成或拆分。参见例如，Jacques, J.,等人, Enantiomers, Racemates和Resolutions (Wiley-Interscience, 纽约, 1981)；Wilen, S. H.,等人, Tetrahedron33:2725 (1977)；Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, 纽约, 1962)；Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and OpticalResolutions 第268页 (E.L. Eliel, 编辑, Univ. of Notre Dame Press, 印第安纳州圣母, 1972)；Todd, M., Separation Of Enantiomers : Synthetic Methods (Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 德国魏因海姆, 2014)；Toda, F., EnantiomerSeparation: Fundamentals and Practical Methods (Springer Science & BusinessMedia, 2007)；Subramanian, G. Chiral Separation Techniques: A PracticalApproach (John Wiley & Sons, 2008)；Ahuja, S., Chiral Separation Methods forPharmaceutical and Biotechnological Products (John Wiley & Sons, 2011)。

“互变异构体”是指化合物的彼此平衡的异构体形式。异构体形式的浓度将取决于发现化合物的环境，并且可以根据例如化合物是固体还是在有机溶液或水溶液中而不同。例如，在水溶液中，吡唑可以展现出以下异构体形式，其被称为彼此的互变异构体：

。

如本领域技术人员容易理解的，多种多样的官能团和其他结构可以展现出互变异构现象，并且式 (I) 的化合物的所有互变异构体都在本公开文本的范围内。

通过用无限附加的进一步取代基限定取代基而得到的聚合物或类似的不确定结构（例如，具有经取代的烷基的经取代的芳基，所述经取代的烷基自身被经取代的芳基取代，所述经取代的芳基进一步被经取代的杂烷基取代，等）并不旨在包括在本文中。类似地，上述定义不旨在包括不允许的取代模式（例如，被5个氟取代的甲基或具有两个相邻氧环原子的杂芳基）。此类不允许的取代模式是熟练技术人员熟知的。

还应注意，本文公开的化合物可以在一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素（诸如例如氚（³H）、碘-125（¹²⁵I）、硫-35（³⁵S）或碳-14（¹⁴C））进行放射性标记，或可以诸如用氘（²H）、碳-13（¹³C）或氮-15（¹⁵N）进行同位素富集。如本文所用，“同位素体”是同位素富集的化合物。术语“同位素富集的”是指这样的原子，所述原子具有不同于该原子的天然同位素组成的同位素组成。“同位素富集的”还可以是指含有至少一个这样的原子的化合物，所述原子的同位素组成不同于该原子的天然同位素组成。术语“同位素组成”是指给定原子存在的每种同位素的量。放射性标记的和同位素富集的化合物可用作治疗剂，例如癌症治疗剂、研究试剂（例如，结合测定试剂）和诊断试剂（例如，体内成像剂）。如本文所述的化合物的所有同位素变型，无论是否具有放射性，都旨在涵盖在本文提供的实施方案的范围内。在一些实施方案中，提供了本文公开的化合物的同位素体，例如，同位素体是富集氘、碳-13和/或氮-15的化合物。如本文所用，“氘代”意指其中至少一个氢（H）已经被氘（由D或²H指示）替代的化合物，即所述化合物在至少一个位置处富集氘。

本公开文本还包括本文所述的化合物的“氘代类似物”，其中与碳原子附接的1至n个氢被氘替代，其中n是分子中氢的数目。当化合物中存在多个氘原子时，氘原子可以在分子的相同部分上（例如，在单个烷基或单个环上）或在分子的不同部分上（例如，在单独的烷基或单独的环上）。此类化合物可以展现出增加的代谢抗性，并且因此当向哺乳动物（特别是人）施用时可用于增加任何化合物的半衰期。参见例如，Foster, “Deuterium IsotopeEffects in Studies of Drug Metabolism,” Trends Pharmacol. Sci. 5(12):524-527(1984)。此类化合物通过本领域熟知的手段来合成，例如通过采用一个或多个氢已经被氘替代的起始材料来合成。

应当理解，独立于立体异构或同位素组成，本文公开的每种化合物可以以本文讨论的任何药学上可接受的盐的形式提供。同样地，应当理解，同位素组成可以独立于本文提及的每种化合物的立体异构组成而变化。此外，同位素组成虽然限于存在于本文公开的相应化合物或其盐中的那些元素，但是可以另外独立于相应化合物的药学上可接受的盐的选择而变化。

应当注意，如果所描绘的结构与该结构的名称之间存在差异，则所描绘的结构将被赋予更大权重。

如本文所用，“治疗”意指障碍、疾病或病症或者与障碍、疾病或病症相关的一种或多种症状的全部或部分缓解；或者减缓或停止这些症状的进一步进展或恶化；或者减轻或消除障碍、疾病或病症本身的一种或多种原因。在一个实施方案中，障碍是如本文所述的癌症或其症状。

如本文所用，“预防”意指这样一种方法，所述方法延迟和/或排除障碍、疾病或病症的全部或部分发作、复发或扩散；阻止受试者获得障碍、疾病或病症；或者降低受试者获得障碍、疾病或病症的风险。在一个实施方案中，障碍是如本文所述的癌症或其症状。

与本文公开的化合物相关的术语“有效量”意指能够治疗或预防本文公开的障碍、疾病或病症或其症状的量。

如本文所用，术语“受试者”或“患者”包括动物，包括但不限于诸如奶牛、猴、马、绵羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠的动物，在一个实施方案中是哺乳动物，在另一个实施方案中是人。在一个实施方案中，受试者是患有BCL6介导的疾病或其症状的人或有风险患上BCL6介导的疾病或其症状的人。

尽管本发明的各种特征可以在单个实施方案的上下文中描述，但所述特征也可以单独提供或以任何合适的组合提供。相反，尽管为了清楚起见，本文可以在分开的实施方案的背景下描述本发明，但是本发明也可以在单个实施方案中实现。

化合物

在一方面，本文提供了一种式 (IA) 的化合物：

(IA)

或其药学上可接受的盐，其中：

X¹和X²各自独立地是N或CH，条件是X¹和X²中的至少一个是N；

R^1a和R^1b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R^2a和R^2b各自独立地是H、C₁-C₆烷基、-O(C₁-C₆烷基)、-OH、卤代基、C₁-C₆卤代烷基或C₁-C₆烷基-OH，

或者R^2a和R^2b与它们所附接的碳原子一起形成螺C₃-C₅环烷基，

或者R^2a和R^2b一起形成氧代基；

或者R^1a和R^2a一起形成桥接C₂-C₃亚烷基；

R^3a和R^3b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R^4a和R^4b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基，

或者R^4a和R^4b与它们所附接的碳原子一起形成螺C₃-C₅环烷基；

R^5a和R^5b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

w是0或1；

R⁶是H或C₁-C₆烷基；

R⁷是H或C₁-C₆烷基；

x和y各自独立地是0或1，条件是x和y不都是1；

R⁸是Cl或-CN；

R⁹是F；

X³是N或CH；

z是0或1；

R^10a和R^10b各自独立地是H或卤代基；

R¹¹是H、C₁-C₆烷基、-(C₁-C₆亚烷基)-(5至6元杂环基)、-(C₁-C₆亚烷基)-O(C₁-C₆烷基)、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷基-OH或-(C₁-C₆亚烷基)-NH(C₁-C₆烷基)，

其中所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子；

R¹²是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R¹³是H或卤代基；

R¹⁴是H或C₁-C₆烷基；

X⁴是N或CR¹⁵；

R¹⁵是H或C₁-C₆烷基；

X⁵和X⁶各自独立地是N或CH；并且

是单键或双键；

其中所述化合物中的一个或多个氢原子任选地被氘替代。

在另外的方面，本文提供了一种式 (I) 的化合物：

(I)

或其药学上可接受的盐，其中：

X¹和X²各自独立地是N或CH，条件是X¹和X²中的至少一个是N；

R^1a和R^1b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R^2a和R^2b各自独立地是H、C₁-C₆烷基、-OH、卤代基或C₁-C₆烷基-OH，

或者R^2a和R^2b一起形成氧代基；

或者R^1a和R^2a一起形成桥接C₂-C₃亚烷基；

R^3a和R^3b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R^4a和R^4b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基，

R^5a和R^5b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

w是0或1；

R⁶是H或C₁-C₆烷基；

R⁷是H或C₁-C₆烷基；

x和y各自独立地是0或1，条件是x和y不都是1；

R⁸是Cl或-CN；

R⁹是F；

X³是N或CH；

z是0或1；

R^10a和R^10b各自独立地是H或卤代基；

其中所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子；

R¹²是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R¹³是H或卤代基；

R¹⁴是H或C₁-C₆烷基；

X⁴是N或CR¹⁵；

R¹⁵是H或C₁-C₆烷基；

X⁵和X⁶各自独立地是N或CH；并且

是单键或双键；

其中所述化合物中的一个或多个氢原子任选地被氘替代。

在一些实施方案中，X¹是CH并且X²是N。在一些实施方案中，X¹是N并且X²是CH。在一些实施方案中，X¹和X²两者都是N。

在一些实施方案中，R^1a是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^1a是H、卤代基或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^1a是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^1a是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R^1a是H。

在一些实施方案中，R^1a是卤代基。在一些实施方案中，R^1a是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^1a是F。

在一些实施方案中，R^1a是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^1a是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^1a是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^1a是甲基。

在一些实施方案中，R^1b是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^1b是H、卤代基或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^1b是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^1b是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R^1b是H。

在一些实施方案中，R^1b是卤代基。在一些实施方案中，R^1b是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^1b是F。

在一些实施方案中，R^1a和R^1b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^1a和R^1b各自独立地是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^1a和R^1b各自独立地是H或-CH₃。

在一些实施方案中，R^1b是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^1b是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^1b是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^1b是甲基。

在一些实施方案中，R^2a是H、C₁-C₆烷基、-O(C₁-C₆烷基)、-OH、卤代基、C₁-C₆卤代烷基或C₁-C₆烷基-OH。在一些实施方案中，R^2a是H、C₁-C₃烷基、-O(C₁-C₃烷基)、-OH、F、Cl、Br、I、C₁-C₃卤代烷基或C₁-C₃烷基-OH。在一些实施方案中，R^2a是H、甲基、乙基、丙基、-OCH₃、-OH、F、Cl、Br、I、-CF₃、-CHF₂、-CCl₃、-CH₂OH、-(CH₂CH₂)OH或-(CH₂CH₂CH₂)OH。

在一些实施方案中，R^2a是H。

在一些实施方案中，R^2a是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^2a是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^2a是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^2a是甲基。

在一些实施方案中，R^2a是-O(C₁-C₆烷基)。在一些实施方案中，R^2a是-O(C₁-C₃烷基)。在一些实施方案中，R^2a是-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂CH₃或-OCH(CH₃)₂。在一些实施方案中，R^2a是-OCH₃。

在一些实施方案中，R^2a是-OH。

在一些实施方案中，R^2a是卤代基。在一些实施方案中，R^2a是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^2a是F。

在一些实施方案中，R^2a是C₁-C₆卤代烷基。在一些实施方案中，R^2a是含有1-13个卤素原子的C₁-C₆卤代烷基。在一些实施方案中，R^2a是C₁-C₃卤代烷基。在一些实施方案中，R^2a是含有1-7个卤素原子的C₁-C₃卤代烷基。在一些实施方案中，R^2a是-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CCl₃、-CHCl₂、-CH₂Cl、-CF₂Cl、-CFCl₂、-CH₂CF₃、-CH₂CHF₂或-CH₂CCl₃。在一些实施方案中，R^2a是-CF₃。

在一些实施方案中，R^2a是C₁-C₆烷基-OH。在一些实施方案中，R^2a是C₁-C₃烷基-OH。在一些实施方案中，R^2a是-CH₂OH、-(CH₂CH₂)OH或-(CH₂CH₂CH₂)OH。在一些实施方案中，R^2a是-CH₂OH。

在一些实施方案中，R^2b是H、C₁-C₆烷基、-OH、卤代基或C₁-C₆烷基-OH。在一些实施方案中，R^2b是H、C₁-C₃烷基、-OH、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基-OH。在一些实施方案中，R^2b是H、甲基、乙基、丙基、-OH、F、Cl、Br、I、-CH₂OH、-(CH₂CH₂)OH或-(CH₂CH₂CH₂)OH。

在一些实施方案中，R^2b是H。

在一些实施方案中，R^2b是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^2b是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^2b是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^2b是甲基。

在一些实施方案中，R^2b是-O(C₁-C₆烷基)。在一些实施方案中，R^2b是-O(C₁-C₃烷基)。在一些实施方案中，R^2b是-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂CH₃或-OCH(CH₃)₂。在一些实施方案中，R^2b是-OCH₃。

在一些实施方案中，R^2b是-OH。

在一些实施方案中，R^2b是卤代基。在一些实施方案中，R^2b是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^2b是F。

在一些实施方案中，R^2b是C₁-C₆卤代烷基。在一些实施方案中，R^2b是含有1-13个卤素原子的C₁-C₆卤代烷基。在一些实施方案中，R^2b是C₁-C₃卤代烷基。在一些实施方案中，R^2b是含有1-7个卤素原子的C₁-C₃卤代烷基。在一些实施方案中，R^2b是-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CCl₃、-CHCl₂、-CH₂Cl、-CF₂Cl、-CFCl₂、-CH₂CF₃、-CH₂CHF₂或-CH₂CCl₃。在一些实施方案中，R^2b是-CF₃。

在一些实施方案中，R^2b是C₁-C₆烷基-OH。在一些实施方案中，R^2b是C₁-C₃烷基-OH。在一些实施方案中，R^2b是-CH₂OH、-(CH₂CH₂)OH或-(CH₂CH₂CH₂)OH。在一些实施方案中，R^2b是-CH₂OH。

在一些实施方案中，R^2a和R^2b与它们所附接的碳原子一起形成螺C₃-C₅环烷基。在一些实施方案中，R^2a和R^2b与它们所附接的碳原子一起形成螺C₃-C₄环烷基。在一些实施方案中，R^2a和R^2b与它们所附接的碳原子一起形成螺环丁基。

在一些实施方案中，R^2a和R^2b一起形成氧代基。

在一些实施方案中，R^1a和R^1b两者都是H，并且R^2a和R^2b中的至少一个不是H。

在一些实施方案中，R^1a和R^2a一起形成桥接C₂-C₃亚烷基。在一些实施方案中，R^1a和R^2a一起形成桥接亚乙基。

在一些实施方案中，R^3a是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^3a是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^3a是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R^3a是H。

在一些实施方案中，R^3a是卤代基。在一些实施方案中，R^3a是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^3a是F。

在一些实施方案中，R^3a是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^3a是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^3a是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^3a是甲基。

在一些实施方案中，R^3b是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^3b是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^3b是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R^3b是H。

在一些实施方案中，R^3b是卤代基。在一些实施方案中，R^3b是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^3b是F。

在一些实施方案中，R^3b是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^3b是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^3b是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^3b是甲基。

在一些实施方案中，R^4a是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^4a是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^4a是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R^4a是H。

在一些实施方案中，R^4a是卤代基。在一些实施方案中，R^4a是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^4a是F。

在一些实施方案中，R^4a是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^4a是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^4a是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^4a是甲基。

在一些实施方案中，R^4b是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^4b是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^4b是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R^4b是H。

在一些实施方案中，R^4b是卤代基。在一些实施方案中，R^4b是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^4b是F。

在一些实施方案中，R^4b是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^4b是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^4b是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R^4b是甲基。

在一些实施方案中，R^4a和R^4b与它们所附接的碳原子一起形成螺C₃-C₅环烷基。在一些实施方案中，R^4a和R^4b与它们所附接的碳原子一起形成螺C₃-C₄环烷基。在一些实施方案中，R^4a和R^4b与它们所附接的碳原子一起形成螺环丁基。

在一些实施方案中，R^3a、R^3b、R^4a和R^4b各自是H。

在一些实施方案中，R^3a和R^3b中的至少一个不是H，并且R^4a和R^4b中的至少一个不是H。

在一些实施方案中，R^5a是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^5a是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^5a是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R^5a是H。

在一些实施方案中，R^5b是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R^5b是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R^5b是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R^5b是H。

在一些实施方案中，R^5a和R^5b各自是H。

在一些实施方案中，R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a和R^5b中的至少一个不是H。

在一些实施方案中，R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a和R^5b中的一个、两个或三个不是H。

在一些实施方案中，R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a和R^5b中的一个或两个不是H。

在一些实施方案中，w是0。在一些实施方案中，w是1。

在一些实施方案中，是：

。

在一些实施方案中，x和y各自是0。在一些实施方案中，x是0并且y是1。在一些实施方案中，x是1并且y是0。

在一些实施方案中，R⁶是H或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R⁶是H或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R⁶是H、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R⁶是H。

在一些实施方案中，R⁶是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R⁶是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R⁶是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R⁶是甲基。

在一些实施方案中，x是0，y是1并且R⁶是H。

在一些实施方案中，x是0，y是1并且R⁶是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，x是0，y是1并且R⁶是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，x是0，y是1并且R⁶是甲基。

在一些实施方案中，R⁷是H或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R⁷是H或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R⁷是H、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R⁷是H。

在一些实施方案中，R⁷是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R⁷是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R⁷是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R⁷是甲基。

在一些实施方案中，x是1，y是0并且R⁷是H。

在一些实施方案中，x是1，y是0并且R⁷是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，x是1，y是0并且R⁷是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，x是1，y是0并且R⁷是甲基。

在一些实施方案中，R⁸是Cl。在一些实施方案中，R⁸是-CN。

在一些实施方案中，R⁹是F。

在一些实施方案中，X³是N。在一些实施方案中，X³是CH。

在一些实施方案中，z是0。在一些实施方案中，z是1。

在一些实施方案中，R^10a是H或卤代基。在一些实施方案中，R^10a是H、F、Cl、Br或I。

在一些实施方案中，R^10a是H。

在一些实施方案中，R^10a是卤代基。在一些实施方案中，R^10a是H、F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^10a是F。

在一些实施方案中，R^10b是H或卤代基。在一些实施方案中，R^10b是H、F、Cl、Br或I。

在一些实施方案中，R^10b是H。

在一些实施方案中，R^10b是卤代基。在一些实施方案中，R^10b是H、F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R^10b是F。

在一些实施方案中，R¹¹是H、C₁-C₆烷基、-(C₁-C₆亚烷基)-(5至6元杂环基)、-(C₁-C₆亚烷基)-O(C₁-C₆烷基)、C₁-C₆卤代烷基、C₁-C₆烷基-OH或-(C₁-C₆亚烷基)-NH(C₁-C₆烷基)，其中杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子。在一些实施方案中，R¹¹是H、C₁-C₃烷基、-(C₁-C₃亚烷基)-(5至6元杂环基)、-(C₁-C₃亚烷基)-O(C₁-C₃烷基)、C₁-C₅卤代烷基、C₁-C₅烷基-OH或-(C₁-C₃亚烷基)-NH(C₁-C₃烷基)，其中杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子。在一些实施方案中，R¹¹是H、C₁-C₃烷基、-(C₁-C₃亚烷基)-(5至6元杂环基)、-(C₁-C₃亚烷基)-O(C₁-C₃烷基)、C₁-C₅卤代烷基、C₁-C₅烷基-OH或-(C₁-C₃亚烷基)-NH(C₁-C₃烷基)，其中杂环基含有1-2个选自N和O的杂原子。在一些实施方案中，R¹¹是H、甲基、乙基、丙基、-CD₃、-(CH₂)-(5至6元杂环基)、-(CH₂CH₂)-(5至6元杂环基)、-(CH₂CH₂CH₂)-(5至6元杂环基)、-CH₂OCH₃、-CH₂OCH₂CH₃、-CH₂OCH₂CH₂CH₃、-CH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OCH₂CH₃、-CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₃、-CH₂CH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₃、-CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₃、-(CH₂)₃CF₃、-(CH₂)₃CHF₂、-(CH₂)₃CH₂F、-CH₂CF₂CH₃、-CH₂CHFCH₃、-CH₂CF₂CH₃、-CH₂CH₂CF₃、-CH₂CH₂CF₂(CH₃)、-CH₂CH₂CF(CH₃)₂、-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、-CH₂CH₂CH₂OH、-CH₂CH₂CH(OH)(CH₃)、-CH₂CH₂C(OH)(CH₃)₂、-CH₂-N(H)CH₃、-CH₂-N(H)CH₂CH₃、-CH₂-N(H)CH₂CH₂CH₃、-CH₂CH₂-N(H)CH₃、-CH₂CH₂-N(H)CH₂CH₃、-CH₂CH₂-N(H)CH₂CH₂CH₃、-CH₂CH₂CH₂-N(H)CH₃、-CH₂CH₂CH₂-N(H)CH₂CH₃或-CH₂CH₂CH₂-N(H)CH₂CH₂CH₃，其中杂环基含有1-2个选自N和O的杂原子。

在一些实施方案中，R¹¹是H。

在一些实施方案中，R¹¹是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R¹¹是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R¹¹是甲基、乙基、丙基或-CD₃。在一些实施方案中，R¹¹是-CH₃。在一些实施方案中，R¹¹包括一个或多个氘原子。在一些实施方案中，R¹¹是-CD₃。在一些实施方案中，R¹¹是-CH₂CH₃。在一些实施方案中，R¹¹是-CH(CH₃)₂。

在一些实施方案中，R¹¹是-(C₁-C₆亚烷基)-(5至6元杂环基)，其中杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子。在一些实施方案中，R¹¹是-(C₁-C₃亚烷基)-(5至6元杂环基)，其中杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子。在一些实施方案中，R¹¹是-(C₁-C₃亚烷基)-(5至6元杂环基)，其中杂环基含有1-2个选自N和O的杂原子。在一些实施方案中，R¹¹是。

在一些实施方案中，R¹¹是-(C₁-C₆亚烷基)-O(C₁-C₆烷基)。在一些实施方案中，R¹¹是-(C₁-C₃亚烷基)-O(C₁-C₃烷基)。在一些实施方案中，R¹¹是-CH₂OCH₃、-CH₂OCH₂CH₃、-CH₂OCH₂CH₂CH₃、-CH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OCH₂CH₃、-CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₃、-CH₂CH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₃或-CH₂CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₃。在一些实施方案中，R¹¹是-CH₂CH₂OCH₃。

在一些实施方案中，R¹¹是C₁-C₆卤代烷基。在一些实施方案中，R¹¹是C₁-C₅卤代烷基。在一些实施方案中，R¹¹是-CF₃、-CH₂CH₂F₃、-(CH₂)₂CHF₃、-(CH₂)₃CF₃、-CH₂CF(CH₃)₂、-CH₂CF₂CH₃、-CH₂CF₃、-CH₂CH₂CF(CH₃)₂、-CH₂CH₂CF₂CH₃或-CH₂CH₂CF₃。在一些实施方案中，R¹¹是-(CH₂)₃CF₃、-CH₂CF₂CH₃、-CH₂CH₂CF(CH₃)₂或-CH₂CF(CH₃)₂。

在一些实施方案中，R¹¹是C₁-C₆烷基-OH。在一些实施方案中，R¹¹是C₁-C₅烷基-OH。在一些实施方案中，R¹¹是-CH₂OH、-CH₂CH₂OH、-CH₂CH₂CH₂OH、-CH₂CH₂CH(OH)(CH₃)或-CH₂CH₂C(OH)(CH₃)₂。在一些实施方案中，R¹¹是-CH₂CH₂C(OH)(CH₃)₂。

在一些实施方案中，R¹¹是-(C₁-C₆亚烷基)-NH(C₁-C₆烷基)。在一些实施方案中，R¹¹是-(C₁-C₃亚烷基)-NH(C₁-C₃烷基)。在一些实施方案中，R¹¹是-CH₂-N(H)CH₃、-CH₂-N(H)CH₂CH₃、-CH₂-N(H)CH₂CH₂CH₃、-CH₂CH₂-N(H)CH₃、-CH₂CH₂-N(H)CH₂CH₃、-CH₂CH₂-N(H)CH₂CH₂CH₃、-CH₂CH₂CH₂-N(H)CH₃、-CH₂CH₂CH₂-N(H)CH₂CH₃或-CH₂CH₂CH₂-N(H)CH₂CH₂CH₃。在一些实施方案中，R¹¹是-CH₂CH₂N(H)CH₃。

在一些实施方案中，是：

。

在一些实施方案中，R¹²是H、卤代基或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R¹²是H、F、Cl、Br、I或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R¹²是H、F、Cl、Br、I、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R¹²是H。

在一些实施方案中，R¹²是卤代基。在一些实施方案中，R¹²是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R¹²是F。

在一些实施方案中，R¹²是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R¹²是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R¹²是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R¹²是甲基。

在一些实施方案中，是：

。

在一些实施方案中，R¹³是H或卤代基。在一些实施方案中，R¹³是H、F、Cl、Br或I。

在一些实施方案中，R¹³是H。

在一些实施方案中，R¹³是卤代基。在一些实施方案中，R¹³是F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，R¹³是F。

在一些实施方案中，R¹⁴是H或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R¹⁴是H或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R¹⁴是H、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R¹⁴是H。

在一些实施方案中，R¹⁴是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R¹⁴是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R¹⁴是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R¹⁴是甲基。

在一些实施方案中，R¹⁴是H。在一些实施方案中，R¹⁴是甲基。

在一些实施方案中，X⁴是N。在一些实施方案中，X⁴是CR¹⁵。

在一些实施方案中，R¹⁵是H或C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R¹⁵是H或C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R¹⁵是H、甲基、乙基或丙基。

在一些实施方案中，R¹⁵是H。

在一些实施方案中，R¹⁵是C₁-C₆烷基。在一些实施方案中，R¹⁵是C₁-C₃烷基。在一些实施方案中，R¹⁵是甲基、乙基或丙基。在一些实施方案中，R¹⁵是甲基。

在一些实施方案中，X⁵是N。在一些实施方案中，X⁵是CH。

在一些实施方案中，X⁶是N。在一些实施方案中，X⁶是CH。

在一些实施方案中，是单键。在一些实施方案中，是双键。

在一些实施方案中，是：

。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (II) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、R⁷、R⁸、R⁹、R^10a、R^10b、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、w、z和是如针对式 (IA) 或式 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IIa) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、R⁷、R⁸、R⁹、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、w、z和是如针对式 (IA) 或式 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IIb) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、R⁷、X¹、X²和w是如针对式 (IA) 或式(I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IIc) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R⁷、X¹和X²是如针对式 (IA) 或 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (III) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、R⁶、R⁸、R⁹、R^10a、R^10b、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、w、z和是如针对式 (IA) 或式 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IIIa) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、R⁶、R⁸、R⁹、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、w、z和是如针对式 (IA) 或 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IIIb) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b和R¹¹是如针对式 (IA) 或式 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IV) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、R⁸、R⁹、R^10a、R^10b、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、w、z和是如针对式 (IA) 或式 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IVa) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、R⁸、R⁹、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴、R¹⁵、X¹、X²、X³、X⁴、X⁵、X⁶、w、z和是如针对式 (IA) 或式 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IVb) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、X¹、X²和w是如针对式 (IA) 或式 (I)所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IVc) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、X¹和X²是如针对式 (IA) 或式 (I) 所述的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物是式 (IVd) 的化合物：

其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a和R^4b是如针对式 (IA) 或式 (I) 所述的。

应当理解，本文所述的任何化合物可以包括用氘替换一个或多个氢原子。式 (IA)或式 (I) 的取代基中的任一个或多个可以是氘代的，诸如X¹、X²、X³、X⁵、X⁶、R^1a、R^1b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a、R^5b、R⁶、R⁷、R^10a、R^10b、R¹¹、R¹²、R¹³、R¹⁴和R¹⁵中的一个或多个。例如，在一些实施方案中，R¹¹是氘代基团，诸如-CD₃。

在本文的说明书中，应当理解，式 (IA) 或式 (I) 的所有描述、变型、实施方案或方面在适用的情况下等同地适用于本文详述的其他式，并且被等同地描述，就好像每种描述、变型、实施方案或方面被分开且单独地列出一样。还应理解，式 (IA) 或式 (I) 的所有描述、变型、实施方案或方面在适用的情况下等同地适用于本文详述的其他式，并且被等同地描述，就好像每种描述、变型、实施方案或方面针对所有式被分开且单独地列出一样。例如，式 (IA) 或式 (I) 的所有描述、变型、实施方案或方面在适用的情况下等同地适用于本文详述的任何式，诸如式 (II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IV)、(IVa)、(IVb)、(IVc) 和 (IVd)，并且被等同地描述，就好像每种描述、变型、实施方案或方面针对所有式被分开且单独地列出一样。

在一些实施方案中，提供了选自表1中的化合物的化合物或其药学上可接受的盐。尽管本公开文本（包括表1中）中所述的某些化合物以特定立体异构体和/或非立体化学形式呈现，但是应当理解，本文描述了本公开文本（包括表1）中的任何化合物的任何或所有立体化学形式（包括任何对映异构体或非对映异构体形式）以及任何互变异构体或其他形式。

表1.

或其药学上可接受的盐。

以游离碱或酸形式存在的所有式 (IA) 或式 (I) 的化合物可以通过本领域技术人员已知的方法，通过用适当的无机或有机碱或酸处理转化为其药学上可接受的盐。式(IA) 或式 (I) 的化合物的盐可通过标准技术转化为其游离碱或酸形式。

合成方法

本文所述的化合物可以使用常规有机合成和可商购获得的起始材料或本文提供的方法制备。通过举例而非限制，式 (I-a) 至式 (I-h) 的化合物可以如方案1-4以及本文所阐述的实施例中的概述来制备。应注意，本领域技术人员将知道如何修改示例性方案和实施例中阐述的程序以获得希望的产物。

如方案1中概述的，可以从以下方式来合成含有羟吲哚基序的式 (i-1) 的化合物：将吲哚衍生物a与中间体化合物b偶联以形成中间体化合物c，然后将其硝化以形成中间体化合物d。将硝基还原以形成中间体化合物e，随后与中间体f偶联以形成式 (i-1) 的化合物。

方案2提供了用于合成含有戊二酰亚胺基序的式 (i-2) 的化合物的两种途径。可以将吲唑衍生物g与中间体化合物h偶联以得到中间体化合物i。中间体化合物i的脱保护和进一步还原形成中间体化合物j，使其经受脱保护以形成式 (i-2) 的化合物。可替代地，可以将吲唑衍生物g与中间体化合物k偶联以得到中间体化合物l。中间体化合物l的脱保护和进一步还原形成中间体化合物i，使其经受胺的脱保护以形成式 (i-2) 的化合物。

方案3提供了含有二氢尿苷基序的式 (i-2) 的化合物的合成。可以将吲唑衍生物n与中间体化合物h偶联以得到中间体化合物o，将其进行脱保护以形成中间体化合物p并且随后进行脱保护以形成式 (i-2) 的化合物。

方案4提供了用于合成式 (IA) 或式 (I) 的各种化合物的多种途径。可以将式(i-1) 的化合物与式 (i-2) 的化合物的各种衍生物（表示为式 (i-2a) 至式 (i-2h)）偶联以得到式 (I-a) 至式 (I-h) 的化合物。

使用方法

本公开文本的实施方案提供了一种用于调节有需要的受试者的BCL6的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。可以通过本领域已知的多种方式来评估和证明BCL6的调节（例如，抑制或激活）。可以利用试剂盒和可商购获得的测定来确定BCL6是否被调节以及调节到何种程度（例如，抑制或激活）。

在一方面，本文提供了一种调节BCL6的方法，所述方法包括使BCL6与有效量的式(IA) 或式 (I) 的化合物或其任何实施方案或变型接触。在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物抑制BCL6。在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物引起BCL6的降解。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物将BCL6的活性调节约1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物将BCL6的活性调节约1%-100%、5%-100%、10%-100%、15%-100%、20%-100%、25%-100%、30%-100%、35%-100%、40%-100%、45%-100%、50%-100%、55%-100%、60%-100%、65%-100%、70%-100%、75%-100%、80%-100%、85%-100%、90%-100%、95%-100%、5%-95%、5%-90%、5%-85%、5%-80%、5%-75%、5%-70%、5%-65%、5%-60%、5%-55%、5%-50%、5%-45%、5%-40%、5%-35%、5%-30%、5%-25%、5%-20%、5%-15%、5%-10%、10%-90%、20%-80%、30%-70%或40%-60%。

本公开文本的某些实施方案中还提供了一种用于降解有需要的受试者的BCL6的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。可以通过本领域已知的多种方式评估和证明BCL6的降解。试剂盒和可商购获得的测定（包括基于细胞的测定）可用于确定BCL6是否已经被降解以及降解到何种程度。

在一方面，本文提供了一种降解BCL6的方法，所述方法包括使BCL6与有效量的式(IA) 或式 (I) 的化合物或其任何实施方案或变型接触。在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物使BCL6部分降解。在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物使BCL6完全降解。

在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物使BCL6降解约1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在一些实施方案中，式 (IA) 或式 (I) 的化合物使BCL6降解约1%-100%、5%-100%、10%-100%、15%-100%、20%-100%、25%-100%、30%-100%、35%-100%、40%-100%、45%-100%、50%-100%、55%-100%、60%-100%、65%-100%、70%-100%、75%-100%、80%-100%、85%-100%、90%-100%、95%-100%、5%-95%、5%-90%、5%-85%、5%-80%、5%-75%、5%-70%、5%-65%、5%-60%、5%-55%、5%-50%、5%-45%、5%-40%、5%-35%、5%-30%、5%-25%、5%-20%、5%-15%、5%-10%、10%-90%、20%-80%、30%-70%或40%-60%。

在另一方面，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，本文提供了一种用于预防有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。癌症的非限制性例子包括鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、肝细胞癌、肾细胞癌、膀胱癌、肠癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、食管癌、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、白血病、良性淋巴瘤、恶性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤（NHL）、良性黑色素瘤、恶性黑色素瘤、骨髓增生性疾病、肉瘤、尤因肉瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、脂肪肉瘤、肌肉瘤、外周神经上皮瘤、滑膜肉瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、节细胞神经瘤、神经节细胞胶质瘤、髓母细胞瘤、松果体细胞瘤、脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经纤维瘤和许旺氏细胞瘤、前列腺癌、子宫癌、睾丸癌、甲状腺癌、星形细胞瘤、胃癌、黑色素瘤、癌肉瘤、霍奇金病、肾母细胞瘤、畸胎癌、T谱系急性成淋巴细胞性白血病（T-ALL）、T谱系成淋巴细胞性淋巴瘤（T-LL）、外周T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病、前B ALL、前B淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、B细胞ALL、费城染色体阳性ALL、费城染色体阳性CML、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞白血病（CLL）、小淋巴细胞淋巴瘤（SLL）、血管内大B细胞淋巴瘤、B细胞白血病、慢性髓系白血病和非小细胞肺癌。

在一些实施方案中，癌症是淋巴瘤，诸如B细胞淋巴瘤。在一些实施方案中，癌症是非霍奇金淋巴瘤，诸如B细胞非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）、滤泡性淋巴瘤（FL）、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤（例如，粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤）、伯基特淋巴瘤或淋巴浆细胞性淋巴瘤（华氏巨球蛋白血症）。在一些实施方案中，癌症是弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）或滤泡性淋巴瘤（FL）。在一些实施方案中，癌症是DLBCL（例如，复发性和/或难治性DLBCL）。在一些实施方案中，癌症是FL（例如，复发性和/或难治性FL）。

在一些实施方案中，癌症是复发性和/或难治性的。

在一些实施方案中，式 (IA) 或 (I) 的化合物作为一线疗法施用。在其他实施方案中，式 (IA) 或 (I) 的化合物作为非一线疗法（例如，作为二线或后续疗法，诸如挽救疗法）施用。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物减弱受试者的癌症的程度（诸如肿瘤大小、肿瘤生长速率、转移）。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物使癌症稳定（预防或延迟按照的恶化）。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物延迟癌症的发生或复发。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物减缓癌症的进展。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物提供癌症的部分缓解。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物提供癌症的完全缓解。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物降低治疗癌症所需的一种或多种其他药物的剂量。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式(IA) 或式 (I) 的化合物增强用于治疗癌症的另一种药物的效应。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物延迟癌症的进展。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物提高患有癌症的受试者的生活质量。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物延长患有癌症的受试者的生存期。

在一些方面，本文提供了一种减缓受试者的癌症的进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，本文提供了一种稳定受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，所述方法预防癌症的进展。在一些实施方案中，所述方法延迟癌症的进展。在一些实施方案中，所述方法提供癌症的部分或完全缓解。

在另一方面，本文提供了一种延迟受试者的癌症的发生或复发的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。

在另外的方面，本文提供了一种降低治疗受试者的癌症所需的一种或多种其他药物的剂量的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，本文提供了一种增强用于治疗受试者的癌症的另一种药物的效应的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。

此处还提供了一种延迟受试者的癌症的进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，所述方法提高患有癌症的受试者的生活质量。在一些实施方案中，所述方法延长患有癌症的受试者的生存期。

在另外的方面，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，本文提供了一种用于预防有需要的受试者的自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。自身免疫病可以被分为两个类别。当免疫系统靶向特定的细胞、组织或器官时，就会发生器官特异性自身免疫病。当免疫系统在不区分不同类型的组织或靶细胞的情况下攻击机体时，就会发生泛发性自身免疫病。示例性器官特异性自身免疫病包括特应性皮炎、哮喘、胰岛素依赖性糖尿病、桥本甲状腺炎、格雷夫斯病、恶性贫血、重症肌无力、寻常型天疱疮和克罗恩病。示例性泛发性自身免疫病包括系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿性关节炎、硬皮病、结节病和吉兰-巴雷综合征（GBS）。本公开文本涵盖所有类型的自身免疫病的治疗，所述所有类型的自身免疫病包括器官特异性和泛发性自身免疫病，包括但不限于红斑狼疮、强直性脊柱炎、查加斯病（Chagas disease）、慢性阻塞性肺疾病、克罗恩病、皮肌炎、1型糖尿病、子宫内膜异位症、肺出血肾炎综合征（Goodpasture's syndrome）、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征（GBS）、桥本病、化脓性汗腺炎、川崎病、IgA肾病、特发性血小板减少性紫癜、间质性膀胱炎、混合性结缔组织病、硬斑病、多发性硬化、重症肌无力、发作性睡病、神经性肌强直、寻常型天疱疮、恶性贫血、银屑病、银屑病性关节炎、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、复发性多软骨炎、类风湿性关节炎、结节病、精神分裂症、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、血管炎、白癜风和韦氏肉芽肿病。

在另一方面，本文提供了一种用于治疗有需要的受试者的TH17相关病症诸如TH17相关自身免疫性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式 (IA) 或式 (I)的化合物。

在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物减弱或减轻受试者的自身免疫病的症状（诸如炎症、慢性发热、乏力、关节痛、肌痛和疲劳）。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物缩短或减轻自身免疫病的症状的持续时间。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物消除自身免疫病的症状。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I)的化合物延迟自身免疫病的发生或复发。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式(IA) 或式 (I) 的化合物减缓自身免疫病的进展。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物降低治疗自身免疫病所需的一种或多种其他药物的剂量。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物增强用于治疗自身免疫病的另一种药物的效应。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物延迟自身免疫病的进展。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用式(IA) 或式 (I) 的化合物提高患有自身免疫病的受试者的生活质量。

在一些方面，本文提供了一种减缓受试者的自身免疫病的进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，本文提供了一种稳定受试者的自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，所述方法预防自身免疫病的进展。在一些实施方案中，所述方法延迟自身免疫病的进展。在一些实施方案中，所述方法提高患有自身免疫病的受试者的生活质量。

在另外的方面，本文提供了一种降低治疗受试者的自身免疫病所需的一种或多种其他药物的剂量的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，本文提供了一种增强用于治疗受试者的自身免疫病的另一种药物的效应的方法，所述方法包括向所述受试者施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。

在本文所述的任何方法的一些实施方案中，在一个或多个治疗周期（例如，三个或更多个治疗周期、六个或更多个治疗周期、12个或更多个治疗周期、15个或更多个治疗周期、18个或更多个治疗周期或24个或更多个治疗周期）中施用式 (IA) 或 (I) 的化合物。在特定实施方案中，治疗周期是28天治疗周期。

在一些实施方案中，在28天治疗周期的每一天每日施用式 (IA) 或 (I) 的化合物，例如，在28天治疗周期的每一天每日一次或两次施用式 (IA) 或 (I) 的化合物。在一些实施方案中，在28天治疗周期的第1-14天每日施用并且在28天治疗周期的第15-28天不施用式 (IA) 或 (I) 的化合物，例如，在28天治疗周期的第1-14天每日一次或两次施用式(IA) 或 (I) 的化合物。在一些实施方案中，在28天治疗周期的第1-21天每日施用并且在28天治疗周期的第22-28天不施用式 (IA) 或 (I) 的化合物，例如，在28天治疗周期的第1-21天每日一次或两次施用式 (IA) 或 (I) 的化合物。

式 (IA) 或 (I) 的化合物的施用可以根据本文所述的方法无限期地继续，或直到达到临床上显著的疾病进展、不可接受的毒性或以其他方式停止施用的决定。在一些实施方案中，式 (IA) 或 (I) 的化合物的施用持续长达三年，例如长达两年，并且之后中止。

在本文所述的任何方法的一些实施方案中，施用式 (IA) 或 (I) 的化合物与另外的疗法的组合。因此，一些实施方案进一步包括向受试者施用另外的疗法，诸如另外的治疗剂。在一些实施方案中，另外的疗法是标准护理（SOC）。

目前的用于DLBCL的SOC是CHOP（环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙）与利妥昔单抗的组合施用（R-CHOP）。用于二线复发性/难治性DLBCL的SOC是高剂量化学疗法，随后是自体干细胞移植（autoSCT）。CAR-T细胞疗法也已经用于治疗复发性/难治性DLBCL。用于FL的SOC是与或不与化学疗法一起的抗CD20免疫疗法。

在一些实施方案中，另外的疗法包括抗淋巴瘤疗法（例如，抗淋巴瘤药剂）。抗淋巴瘤疗法包括本文所述的用于DLBCL和FL的SOC，以及细胞毒性剂、放射疗法、放射免疫疗法以及自体和同种异体移植物。抗淋巴瘤药剂包括本文所述的用于DLBCL和FL的SOC药剂（例如，环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙、利妥昔单抗），以及细胞毒性剂和抗CD20抗体。

利妥昔单抗是一种针对CD20抗原（一种位于正常前B淋巴细胞和成熟B淋巴细胞上的疏水性跨膜蛋白）的重组嵌合鼠/人抗体。在结合之后，利妥昔单抗触发针对CD20阳性细胞的细胞毒性免疫反应。利妥昔单抗被指示用于多种肿瘤治疗和非肿瘤治疗。例如，利妥昔单抗被指示用于：(i) 与CHOP（环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙）或其他基于蒽环类的化学疗法方案组合治疗患有先前未治疗的弥漫性大B细胞CD20阳性NHL的患者；(ii)与CVP（环磷酰胺、长春新碱、泼尼松龙）化学疗法组合治疗患有先前未治疗的滤泡性CD20阳性B细胞NHL的患者；和/或 (iii) 作为单一药剂治疗患有复发性或难治性、低级别或滤泡性、CD20阳性、B细胞NHL的患者。例如，利妥昔单抗被指示用于：(i) 与CHOP化学疗法组合治疗患有CD20阳性弥漫性大B细胞非霍奇金淋巴瘤的患者；(ii) 与化学疗法组合治疗患有先前未治疗的患有III-IV期FL的患者；(iii) 作为单一疗法治疗化疗耐药性的或在化学疗法后处于其第二次或随后复发的III-IV期FL的患者；和/或 (iv) 作为维持疗法治疗对诱导疗法有反应的患有FL的成年患者。利妥昔单抗也是大多数挽救性化学免疫疗法方案（例如，R-ICE、R-DHAP、R-ESHAP、R-吉西他滨/奥沙利铂）的组分，并且在NCCN和欧洲肿瘤内科学会（European Society of Medical Oncology，ESMO）指南中被列为用于B细胞淋巴瘤的二线（和后续）治疗的治疗选择，并且在这些背景下常规地用于标准实践。此外，在美国和欧盟，利妥昔单抗被指示用于与来那度胺组合用于治疗复发性/难治性FL。

在一些实施方案中，所述方法进一步包括向受试者施用抗CD20抗体（例如，治疗有效量的抗CD20抗体），诸如利妥昔单抗。在特定实施方案中，所述方法进一步包括向受试者施用利妥昔单抗（例如，治疗有效量的利妥昔单抗）。例如，一些实施方案包括静脉内施用利妥昔单抗（例如，作为静脉内（IV）输注）。一些实施方案包括施用约375 mg/m²利妥昔单抗。一些实施方案包括静脉内（例如，以IV输注）施用约375 mg/m²利妥昔单抗。在一些实施方案中，将利妥昔单抗与式 (IA) 或 (I) 的化合物同时施用或在式 (IA) 或 (I) 的化合物之后长达2小时内施用。一些实施方案包括将利妥昔单抗每28天施用一次（例如，在28天周期的第1天）。在一些实施方案中，利妥昔单抗每28天施用一次（例如，在28天周期的第1天）持续长达12个月，例如，持续长达6个月。

药物组合物和施用途径

本文提供的化合物可以以制剂的常规形式（诸如胶囊剂、微胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、糖锭、丸剂、栓剂、注射剂、混悬剂、糖浆剂、贴剂、乳膏、洗剂、软膏剂、凝胶、喷雾剂、溶液和乳剂）口服、局部或肠胃外施用于受试者。

本文公开的化合物可以以制剂的常规形式（诸如胶囊剂、微胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、糖锭、丸剂、栓剂、注射剂、混悬剂、糖浆剂、贴剂、乳膏、洗剂、软膏剂、凝胶、喷雾剂、溶液和乳剂）口服、局部或肠胃外施用于受试者。合适的配制品可以通过通常采用的使用常规有机或无机添加剂的方法制备，所述添加剂诸如赋形剂（例如，蔗糖、淀粉、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙或碳酸钙）、结合剂（例如，纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、阿拉伯胶、聚乙二醇、蔗糖或淀粉）、崩解剂（例如，淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、碳酸氢钠、磷酸钙或柠檬酸钙）、润滑剂（例如，硬脂酸镁、轻质无水硅酸、滑石或月桂基硫酸钠）、调味剂（例如，柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸或橙粉）、防腐剂（例如，苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯）、稳定剂（例如，柠檬酸、柠檬酸钠或乙酸）、助悬剂（例如，甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸铝）、分散剂（例如，羟丙基甲基纤维素）、稀释剂（例如，水）和基质蜡（例如，可可脂、白凡士林或聚乙二醇）。药物组合物中式 (IA) 或式 (I) 的化合物的有效量可以处于将发挥所希望的效应的水平；例如，以单位剂量的约0.005 mg/kg受试者体重至约10 mg/kg受试者体重用于口服施用和肠胃外施用两者。

待施用于受试者的式 (IA) 或式 (I) 的化合物的剂量是相当广泛可变的，并且可以取决于健康护理从业者的判断。通常，本文公开的化合物可以以约0.001 mg/kg受试者体重至约10 mg/kg受试者体重的剂量每天施用一至四次，但是上述剂量可以根据受试者的年龄、体重和医学状况以及施用类型适当变化。在一个实施方案中，剂量为约0.001 mg/kg受试者体重至约5 mg/kg受试者体重、约0.01 mg/kg受试者体重至约5 mg/kg受试者体重、约0.05 mg/kg受试者体重至约1 mg/kg受试者体重、约0.1 mg/kg受试者体重至约0.75 mg/kg受试者体重或约0.25 mg/kg受试者体重至约0.5 mg/kg受试者体重。在一个实施方案中，每天给予一个剂量。在任何给定情况下，所施用的式 (IA) 或式 (I) 的化合物的量将取决于诸如活性组分的溶解度、所用配制品和施用途径等因素。

在一些实施方案中，将式 (IA) 或式 (I) 的化合物以约0.01 mg/天至约750 mg/天、约0.1 mg/天至约375 mg/天、约0.1 mg/天至约150 mg/天、约0.1 mg/天至约75 mg/天、约0.1 mg/天至约50 mg/天、约0.1 mg/天至约25 mg/天或约0.1 mg/天至约10 mg/天的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，将式 (IA) 或式 (I) 的化合物以约10 mg/天至约750 mg/天的剂量每日一次或每日两次施用于受试者。

在特定实施方案中，将式 (IA) 或 (I) 的化合物以约20 mg/天、约40 mg/天、约80 mg/天、约160 mg/天、约260 mg/天、约400 mg/天或约640 mg/天的剂量每日一次（QD）或每日两次（BID）施用于受试者。在另外的实施方案中，施用是QD。可替代地，施用是BID。

在另一个实施方案中，本文提供了单位剂量配制品，所述单位剂量配制品包含在约0.1 mg与500 mg、约1 mg与250 mg、约1 mg与约100 mg、约1 mg与约50 mg、约1 mg与约25mg之间，或在约1 mg与约10 mg之间的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。

在特定实施方案中，本文提供了单位剂量配制品，所述单位剂量配制品包含约0.1mg或100 mg的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，单位剂量配制品包含约10mg至约100 mg的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一些实施方案中，单位剂量配制品包含约20 mg的式 (IA) 或 (I) 的化合物（例如，化合物70或其药学上可接受的盐）。在一些实施方案中，单位剂量配制品包含约80 mg的式 (IA) 或 (I) 的化合物（例如，化合物70或其药学上可接受的盐）。

在另一个实施方案中，本文提供了单位剂量配制品，所述单位剂量配制品包含0.5mg、1 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、30 mg、35 mg、50 mg、70 mg、100 mg、125 mg、140 mg、175 mg、200 mg、250 mg、280 mg、350 mg、500 mg、560 mg、700 mg、750 mg、1000 mg或1400mg的式 (IA) 或式 (I) 的化合物。

式 (IA) 或式 (I) 的化合物可以每日施用一次、两次、三次、四次或更多次。在特定实施方案中，将100 mg或更小的剂量作为每日一次剂量施用，并且将大于100 mg的剂量以等于总日剂量的一半的量每日两次施用。在一些实施方案中，将式 (IA) 或 (I) 的化合物每日一次施用。在一些实施方案中，将式 (IA) 或 (I) 的化合物每日两次施用。

可以口服施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物。在一个实施方案中，当口服施用时，将式 (IA) 或式 (I) 的化合物与膳食和水一起施用。在另一个实施方案中，将式 (IA) 或式 (I) 的化合物分散于水或果汁（例如，苹果汁或橙汁）或任何其他液体中，并且作为溶液或混悬剂口服施用。可替代地，在一个实施方案中，当口服施用时，将式 (IA) 或 (I) 的化合物施用于处于禁食状态的受试者。例如，在一些实施方案中，将式 (IA) 或 (I) 的化合物施用于受试者，所述受试者在施用式 (IA) 或 (I) 的化合物前至少约2小时没有吃或喝除了水之外的任何东西。在一些实施方案中，禁食状态在施用式 (IA) 或 (I) 的化合物之前至少约2小时开始，并且在施用式 (IA) 或 (I) 的化合物后持续至少约1小时。

本文公开的化合物还可以皮内、肌内、腹膜内、经皮、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下、脑内、阴道内、透皮、直肠、经粘膜、通过吸入或局部施用于耳、鼻、眼或皮肤。施用方式由健康护理从业者决定，并且可以部分取决于在医学状况的部位。

在另一个实施方案中，本文提供了包含有效量的式 (IA) 或式 (I) 的化合物和药学上可接受的载体或媒介物的组合物，其中药学上可接受的载体或媒介物可以包含赋形剂、稀释剂或其混合物。在一个实施方案中，组合物是药物组合物。

在一些实施方案中，药物组合物包含式 (IA) 或 (I) 的化合物和以下中的两种或更多种：无水乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅和硬脂酰富马酸钠。在一些实施方案中，药物组合物包含无水乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅和硬脂酰富马酸钠。

在一些实施方案中，组合物呈分散体（例如，喷雾干燥分散体）的形式。组合物可以任选地用例如在可预测的时间段内抵抗溶出的膜包被。

式 (IA) 或 (I) 的化合物可以以任何有效量存在于组合物中。在一些实施方案中，式 (IA) 或 (I) 的化合物以1%重量/重量（w/w）至75% w/w、5% w/w至50% w/w、10% w/w至40% w/w、30% w/w至40% w/w、约5% w/w、约10% w/w、约15% w/w、约20% w/w、约25% w/w、约30% w/w、约35% w/w、约40% w/w、约45% w/w或约50% w/w存在于组合物中。在特定实施方案中，药物组合物包含约35% w/w的式 (IA) 或 (I) 的化合物。

组合物可以呈片剂、咀嚼片、胶囊剂、溶液、肠胃外溶液、糖锭、栓剂和混悬剂的形式。在一些实施方案中，组合物呈片剂或胶囊剂的形式。在一些实施方案中，组合物呈片剂（例如，膜包被的片剂）的形式。在一些实施方案中，组合物呈胶囊剂的形式。

组合物可以被配制为在剂量单位中含有日剂量或日剂量的适宜分剂量，所述剂量单位可以是单个片剂或胶囊剂或适宜体积的液体。在一个实施方案中，溶液由水溶性盐诸如盐酸盐制备。通常，根据药物化学中的已知方法制备所有组合物。可以通过将式 (IA) 或式 (I) 的化合物与合适的载体或稀释剂混合并且将适当量的混合物填充到胶囊中来制备胶囊剂。常用的载体和稀释剂包括但不限于惰性粉末状物质，诸如许多不同种类的淀粉；粉末状纤维素，尤其是结晶纤维素和微晶纤维素；糖，诸如果糖、甘露醇和蔗糖；谷物粉和类似的可食用粉末。

可以通过直接压片、湿法制粒、干法制粒或喷雾干燥来制备片剂。它们的配制品通常掺入稀释剂、粘合剂、润滑剂和崩解剂以及化合物。典型的稀释剂包括例如各种类型的淀粉、乳糖、甘露糖醇、高岭土、磷酸钙或硫酸钙、无机盐诸如氯化钠、和糖粉。粉末状纤维素衍生物也是有用的。典型的片剂粘合剂是这样的物质，诸如淀粉，明胶和糖诸如乳糖、果糖、葡萄糖等。天然胶和合成胶也是适宜的，包括阿拉伯胶、海藻酸盐、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷等。聚乙二醇、乙基纤维素和蜡也可以用作粘合剂。

在片剂配制品中可能需要润滑剂，以防止片剂和冲头在染料中发生粘连。润滑剂可以选自诸如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙、硬脂酸和氢化植物油等的滑性固体。片剂崩解剂是这样的物质，所述物质在润湿时溶胀以使片剂破碎并且释放化合物。它们包括淀粉、粘土、纤维素、褐藻胶和树胶。更具体地，可以使用例如玉米淀粉和马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、木质纤维素、粉末状天然海绵、阳离子交换树脂、海藻酸、瓜尔胶、柑橘渣和羧甲基纤维素以及月桂基硫酸钠。可以将片剂用糖作为调味剂和密封剂包被，或者用成膜保护剂包被以改变片剂的溶出特性。组合物也可被配制为咀嚼片，例如通过在配制品中使用诸如甘露糖醇的物质来配制。

当希望以栓剂施用式 (IA) 或式 (I) 的化合物时，可以使用典型的基质。可可脂是一种传统的栓剂基质，其可以通过添加蜡来改性以稍微提高其熔点。特别地包含各种分子量的聚乙二醇的水混溶性栓剂基质被广泛使用。

式 (IA) 或式 (I) 的化合物的效应可以通过适当的配制而延迟或延长。例如，可以制备式 (IA) 或式 (I) 的化合物的缓溶微丸并且将其掺入片剂或胶囊剂中，或将其作为缓慢释放可植入装置掺入。所述技术还包括制备具有几种不同溶出速率的微丸并且用微丸混合物填充胶囊。可以将片剂或胶囊剂用在可预测的时间段内抵抗溶出的膜包被。甚至可以通过将式 (IA) 或式 (I) 的化合物溶解或悬浮在油性或乳化媒介物中来将肠胃外制剂制成长效的，所述媒介物使所述化合物在血清中缓慢分散。在一些实施方案中，例如通过将式 (IA) 或 (I) 的化合物与Eudragit L100-55一起配制来配制片剂或胶囊剂用于肠溶释放。

应当理解，本文所述的药物组合物可以包括式 (IA) 或式 (I) 的化合物的混合物，包括本文所述的任何化合物的外消旋混合物。

编号实施方案

根据本公开文本有用的化合物通过以下实施方案进一步描述。每个实施方案的特征可以在适当和实际的情况下与任何其他实施方案组合。

实施方案P1.一种式 (IA) 的化合物：

(IA)

或其药学上可接受的盐，其中：

X¹和X²各自独立地是N或CH，条件是X¹和X²中的至少一个是N；

R^1a和R^1b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

或者R^2a和R^2b一起形成氧代基；

或者R^1a和R^2a一起形成桥接C₂-C₃亚烷基；

R^3a和R^3b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R^4a和R^4b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基，

R^5a和R^5b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

w是0或1；

R⁶是H或C₁-C₆烷基；

R⁷是H或C₁-C₆烷基；

x和y各自独立地是0或1，条件是x和y不都是1；

R⁸是Cl或-CN；

R⁹是F；

X³是N或CH；

z是0或1；

R^10a和R^10b各自独立地是H或卤代基；

其中所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子；

R¹²是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R¹³是H或卤代基；

R¹⁴是H或C₁-C₆烷基；

X⁴是N或CR¹⁵；

R¹⁵是H或C₁-C₆烷基；

X⁵和X⁶各自独立地是N或CH；并且

是单键或双键；

其中所述化合物中的一个或多个氢原子任选地被氘替代。

实施方案P2.一种式 (I) 的化合物：

(I)

或其药学上可接受的盐，其中：

X¹和X²各自独立地是N或CH，条件是X¹和X²中的至少一个是N；

R^1a和R^1b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

或者R^2a和R^2b一起形成氧代基；

或者R^1a和R^2a一起形成桥接C₂-C₃亚烷基；

R^3a和R^3b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R^4a和R^4b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基，

R^5a和R^5b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

w是0或1；

R⁶是H或C₁-C₆烷基；

R⁷是H或C₁-C₆烷基；

x和y各自独立地是0或1，条件是x和y不都是1；

R⁸是Cl或-CN；

R⁹是F；

X³是N或CH；

z是0或1；

R^10a和R^10b各自独立地是H或卤代基；

其中所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子；

R¹²是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R¹³是H或卤代基；

R¹⁴是H或C₁-C₆烷基；

X⁴是N或CR¹⁵；

R¹⁵是H或C₁-C₆烷基；

X⁵和X⁶各自独立地是N或CH；并且

是单键或双键；

其中所述化合物中的一个或多个氢原子任选地被氘替代。

实施方案P3.根据实施方案P1或P2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X¹是CH；并且

X²是N。

实施方案P4.根据实施方案P1或P2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X¹是N；并且

X²是CH。

实施方案P5.根据实施方案P1或P2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X¹和X²各自是N。

实施方案P6.根据实施方案P1-P5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^1a和R^1b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₃烷基。

实施方案P7.根据实施方案P6所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^1a和R^1b各自独立地是H或-CH₃。

实施方案P8.根据实施方案P1-P7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^2a和R^2b各自独立地是H、C₁-C₃烷基、-O(C₁-C₃烷基)、-OH、卤代基、C₁-C₃卤代烷基或C₁-C₃烷基-OH，

或者R^2a和R^2b与它们所附接的碳原子一起形成螺C₃-C₄环烷基，

或者R^2a和R^2b一起形成氧代基。

实施方案P9.根据实施方案P8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^2a和R^2b各自独立地是H、-CH₃、-OCH₃、-OH、F、-CF₃或-CH₂OH，

或者R^2a和R^2b与它们所附接的碳原子一起形成螺环丁基，

或者R^2a和R^2b一起形成氧代基。

实施方案P10.根据实施方案P1-P9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^1a和R^1b各自是H，并且R^2a和R^2b中的至少一个不是H。

实施方案P11.根据实施方案P1-P9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^1a和R^2a一起形成桥接亚乙基。

实施方案P12.根据实施方案P1-P11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^3a和R^3b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₃烷基。

实施方案P13.根据实施方案P12所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^3a和R^3b各自独立地是H、F或-CH₃。

实施方案P14.根据实施方案P1-P13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^4a和R^4b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₃烷基，

或者R^4a和R^4b与它们所附接的碳原子一起形成螺C₃-C₄环烷基。

实施方案P15.根据实施方案P14所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^4a和R^4b各自独立地是H、F或-CH₃，

或者R^4a和R^4b与它们所附接的碳原子一起形成螺环丁基。

实施方案P16.根据实施方案P1-P15中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^3a、R^3b、R^4a和R^4b各自是H。

实施方案P17.根据实施方案P1-P15中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^3a和R^3b中的至少一个不是H，并且R^4a和R^4b中的至少一个不是H。

实施方案P18.根据实施方案P1-P17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

w是0。

实施方案P19.根据实施方案P1-P17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

w是1。

实施方案P20.根据实施方案P19所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^5a和R^5b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₃烷基。

实施方案P21.根据实施方案P20所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^5a和R^5b各自是H。

实施方案P22.根据实施方案P1-P21中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a和R^5b中的至少一个不是H。

实施方案P23.根据实施方案P22所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R^1a、R^1b、R^2a、R^2b、R^3a、R^3b、R^4a、R^4b、R^5a和R^5b中的一个或两个不是H。

实施方案P24.根据实施方案P1-P23中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中是：

。

实施方案P25.根据实施方案P1-P24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

x是1；

y是0；并且

R⁷是H或C₁-C₃烷基。

实施方案P26.根据实施方案P25所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R⁷是H或-CH₃。

实施方案P27.根据实施方案P1-P24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

x是0；

y是1；并且

R⁶是H或C₁-C₃烷基。

实施方案P28.根据实施方案P27所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R⁶是H或-CH₃。

实施方案P29.根据实施方案P1-P24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

x和y各自是0。

实施方案P30.根据实施方案P1-P29中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R⁸是Cl。

实施方案P31. 根据实施方案P1-P29中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R⁸是-CN。

实施方案P32.根据实施方案P1-P31中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X³是CH。

实施方案P33.根据实施方案P1-P31中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X³是N。

实施方案P34.根据实施方案P1-P33中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

z是0。

实施方案P35.根据实施方案P1-P33中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

z是1。

实施方案P36.根据实施方案P1-P35中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R^10a和R^10b各自独立地是H或F。

实施方案P37.根据实施方案P1-P36中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R¹¹是H、C₁-C₃烷基、-(C₁-C₃亚烷基)-(6元杂环基)、-(C₁-C₃亚烷基)-O(C₁-C₃烷基)、C₁-C₅卤代烷基、C₁-C₅烷基-OH或-(C₁-C₃亚烷基)-NH(C₁-C₃烷基)，

其中所述杂环基含有1-2个选自N和O的杂原子。

实施方案P38.根据实施方案P37所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R¹¹是H、-CH₃、-CD₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-CH₂CH₂OCH₃、-CH₂CH₂OH、-CH₂CH₂C(OH)(CH₃)₂、-CH₂CH₂N(H)CH₃、-(CH₂)₃CF₃、-CH₂CF₂CH₃、-CH₂CH₂CF(CH₃)₂、-CH₂CF(CH₃)₂或。

实施方案P39.根据实施方案P1-P38中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中是：

。

实施方案P40.根据实施方案P1-P39中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R¹²是H、卤代基或C₁-C₃烷基。

实施方案P41.根据实施方案P40所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R¹²是H、F或-CH₃。

实施方案P42.根据实施方案P1-P41中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中是：

。

实施方案P43.根据实施方案P1-P42中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R¹³是H或F。

实施方案P44.根据实施方案P1-P43中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R¹⁴是H或C₁-C₃烷基。

实施方案P45.根据实施方案P44所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R¹⁴是H或-CH₃。

实施方案P46.根据实施方案P1-P45中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X⁴是N。

实施方案P47.根据实施方案P1-P45中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X⁴是CR¹⁵；并且

R¹⁵是H或C₁-C₃烷基。

实施方案P48.根据实施方案P47所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X⁴是CR¹⁵；并且

R¹⁵是H或-CH₃。

实施方案P49.根据实施方案P1-P48中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X⁵是N。

实施方案P50.根据实施方案P1-P48中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X⁵是CH。

实施方案P51.根据实施方案P1-P50中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X⁶是N。

实施方案P52.根据实施方案P1-P50中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

X⁶是CH。

实施方案P53.根据实施方案P1-P52中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

是单键。

实施方案P54.根据实施方案P1-P52中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

是双键。

实施方案P55.根据实施方案P1-P54中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中是：

。

实施方案P56.根据实施方案P1-P55中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式 (II)、(III) 或 (IV)：

。

实施方案P57.根据实施方案P56所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式 (IIIb)：

(IIIb)。

实施方案P58.一种化合物，所述化合物选自表1的化合物及其药学上可接受的盐。

实施方案P59.一种药物组合物，所述药物化合物包含根据实施方案P1-P58中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂。

实施方案P60.一种降解B细胞淋巴瘤6蛋白（BCL6）的方法，所述方法包括使BCL6与有效量的根据实施方案P1-P58中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据实施方案P59所述的药物组合物接触。

实施方案P61.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据实施方案P1-P58中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据实施方案P59所述的药物组合物。

实施方案P62.根据实施方案P61所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤。

实施方案P63.根据实施方案P62所述的方法，其中所述淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤。

实施方案P64.一种治疗有需要的受试者的自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据实施方案P1-P58中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或根据实施方案P59所述的药物组合物。

实施方案P65.根据实施方案P64所述的方法，其中所述自身免疫病选自特应性皮炎、哮喘、红斑狼疮、强直性脊柱炎、查加斯病、慢性阻塞性肺疾病、克罗恩病、皮肌炎、1型糖尿病、子宫内膜异位症、肺出血肾炎综合征、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征（GBS）、桥本病、化脓性汗腺炎、川崎病、IgA肾病、特发性血小板减少性紫癜、间质性膀胱炎、混合性结缔组织病、硬斑病、多发性硬化、重症肌无力、发作性睡病、神经性肌强直、寻常型天疱疮、恶性贫血、银屑病、银屑病性关节炎、多肌炎、原发性胆汁性肝硬化、复发性多软骨炎、类风湿性关节炎、结节病、精神分裂症、硬皮病、干燥综合征、僵人综合征、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、血管炎、白癜风和韦氏肉芽肿病。

实施方案P66.一种药物组合物，所述药物组合物包含下式的化合物：

(70)，

或其异构体，或前述物质的药学上可接受的盐，以及以下中的两种或更多种：无水乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅和硬脂酰富马酸钠。

实施方案P67.根据实施方案P66所述的药物组合物，其中所述化合物是

，

或其药学上可接受的盐。

实施方案P68.根据实施方案P66或P67所述的药物组合物，所述药物组合物包含无水乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅和硬脂酰富马酸钠。

实施方案P69.根据实施方案P66-P68中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物包含约35%重量/重量（w/w）的化合物 (70) 或其异构体，或前述物质的药学上可接受的盐。

实施方案P70.根据实施方案P66-P69中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物被配制用于口服施用。

实施方案P71.根据实施方案P70所述的药物组合物，所述药物组合物被配制用于肠溶释放。

实施方案P72.一种单位剂量配制品，所述单位剂量配制品包含根据实施方案P66-P71中任一项所述的药物组合物，其中所述化合物 (70) 或其异构体或前述物质的药学上可接受的盐以约10 mg至约100 mg的量存在于所述单位剂型中。

实施方案P73.根据实施方案P72所述的单位剂量配制品，所述单位剂量配制品包含约20 mg或约80 mg的所述化合物 (70) 或其异构体，或前述物质的药学上可接受的盐。

实施方案P74.根据实施方案P72或P73所述的单位剂量配制品，所述单位剂量配制品呈片剂的形式。

实施方案P75.根据实施方案P74所述的单位剂量配制品，其中所述片剂是膜包被的。

实施方案P76.一种治疗有需要的受试者的癌症或自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抗CD20抗体和根据实施方案P1-P58中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或根据实施方案P59和P66-P71中任一项所述的药物组合物，或根据实施方案P72-P75中任一项所述的单位剂量配制品。

实施方案P77.一种治疗有需要的受试者的癌症或自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据实施方案P1-P58中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或根据实施方案P59和P66-P71中任一项所述的药物组合物，或根据实施方案P72-P75中任一项所述的单位剂量配制品，

其中如下施用所述化合物或其药学上可接受的盐：(i) 在28天周期的每一天，每日施用；或 (ii) 在28天周期的第1-14天施用，并且在所述28天周期的第15-28天不施用：或 (iii) 在28天周期的第1-21天施用，并且在所述28天周期的第22-28天不施用。

实施方案P78.一种治疗有需要的受试者的癌症或自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据实施方案P1-P58中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，或根据实施方案P59和P66-P71中任一项所述的药物组合物，或根据实施方案P72-P75中任一项所述的单位剂量配制品，

其中将所述化合物或其药学上可接受的盐以约20 mg/天、约40 mg/天、约80 mg/天、约160 mg/天、约260 mg/天、约400 mg/天或约640 mg/天的剂量每日一次或每日两次施用于所述受试者。

实施方案P79.根据实施方案P76或P77所述的方法，其中将所述化合物或其药学上可接受的盐以约20 mg/天、约40 mg/天、约80 mg/天、约160 mg/天、约260 mg/天、约400mg/天或约640 mg/天的剂量每日一次或每日两次施用于所述受试者。

实施方案P80.根据实施方案P76-P79中任一项所述的方法，其中将所述化合物或其药学上可接受的盐每日一次施用于所述受试者。

实施方案P81.根据实施方案P76-P79中任一项所述的方法，其中将所述化合物或其药学上可接受的盐每日两次施用于所述受试者。

实施方案P82.根据实施方案P76-P81中任一项所述的方法，其中如下施用所述化合物或其药学上可接受的盐：(i) 在28天周期的每一天，每日施用；或 (ii) 在28天周期的第1-14天施用，并且在所述28天周期的第15-28天不施用：或 (iii) 在28天周期的第1-21天施用，并且在所述28天周期的第22-28天不施用。

实施方案P83.根据实施方案P82所述的方法，其中在28天周期的每一天每日施用所述化合物或其药学上可接受的盐。

实施方案P84.根据实施方案P82所述的方法，其中在28天周期的第1-14天施用，并且在所述28天周期的第15-28天不施用所述化合物或其药学上可接受的盐。

实施方案P85.根据实施方案P82所述的方法，其中在28天周期的第1-21天施用，并且在所述28天周期的第22-28天不施用所述化合物或其药学上可接受的盐。

实施方案P86.根据实施方案P77-P85中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用抗CD20抗体。

实施方案P87.根据实施方案P76或P86所述的方法，其中所述抗CD20抗体是利妥昔单抗。

实施方案P88.根据实施方案P87所述的方法，其中静脉内施用利妥昔单抗。

实施方案P89.根据实施方案P87或P88所述的方法，其中每28天一次施用约375mg/m²利妥昔单抗。

实施方案P90.根据实施方案P87-P89中任一项所述的方法，其中在28天治疗周期的第1天施用利妥昔单抗并且如下施用所述化合物或其药学上可接受的盐：(i) 在所述28天治疗周期的每一天，每日施用；或 (ii) 在所述28天治疗周期的第1-14天施用，并且在所述28天治疗周期的第15-28天不施用：或 (iii) 在所述28天治疗周期的第1-21天施用，并且在所述28天治疗周期的第22-28天不施用。

实施方案P91.根据实施方案P76-P90中任一项所述的方法，其中所述方法是治疗癌症的方法。

实施方案P92.根据实施方案P91所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤。

实施方案P93.根据实施方案P92所述的方法，其中所述淋巴瘤是B细胞淋巴瘤。

实施方案P94.根据实施方案P92或P93所述的方法，其中所述淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤。

实施方案P95.根据实施方案P92-P94中任一项所述的方法，其中所述淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤或淋巴浆细胞性淋巴瘤。

实施方案P96.根据实施方案P95所述的方法，其中所述淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤或滤泡性淋巴瘤。

实施方案P97.根据实施方案P91-P96中任一项所述的方法，其中所述癌症是复发性或难治性的。

实施例

通过说明而非限制的方式，呈现以下实施例。将化合物使用ChemBiodraw Ultra（Cambridgesoft）中提供的自动名称生成工具命名，所述工具在支持立体化学的Cahn-Ingold-Prelog规则的情况下生成化学结构的系统名称。本领域技术人员可以修改说明性实施例中阐述的程序以获得所希望的产品。

本文所述的化合物的盐可以通过标准方法（诸如在色谱纯化期间在流动相中包含酸（例如，TFA、甲酸或HCl），或在色谱纯化后将产物与酸的溶液（例如，HCl水溶液）一起搅拌）来制备。

以下缩写可能与本申请相关。

缩写

合成实施例

通用程序1：到嘧啶上的第一SNAr。

向5-氨基-1-甲基吲哚啉-2-酮（1当量）在干四氢呋喃 [0.4 M] 中的-40ºC混合物中添加DIPEA（1.1当量）。将5-氯-2,4-二氟嘧啶（1当量）在干四氢呋喃 [1.5 M] 中的溶液缓慢添加到上述混合物中并且允许缓慢温热至室温。将反应混合物在室温下搅拌16 h。在此时间后，将反应混合物过滤并且用乙腈洗涤。将固体在真空下干燥以得到呈棕褐色固体的标题化合物。

通用程序2：胺与吲唑CBM的布赫瓦尔德偶联（Buchwald Coupling）。

将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑1a（1.1当量）、胺（1.0当量）、Ruphos-Pd-G3（0.20当量）和NaOtBu（1.5当量）在1,4-二噁烷 [0.3 M] 中的混合物加热至90ºC持续16 h并且然后冷却至室温。将混合物在硅藻土上过滤并且将滤饼用EtOAc洗涤。将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度进行纯化以得到标题化合物。

通用程序3：胺的甲基化

向胺（1.0当量，14.2 mmol）在DMF [0.15 M] 中的溶液中添加NaH（4.4当量）并且在0ºC下搅拌1 h。在0ºC下向混合物中添加碘甲烷（2.8当量）。将所得反应混合物在室温下搅拌16 h。然后将反应混合物用水淬灭并且用EA萃取。将萃取物合并并且用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法用PE/EA（15 : 1）洗脱进行纯化以获得标题化合物。

通用程序4：将CBM用氢气还原。

使吲唑中间体（1.0当量）和Pd/C（10 wt.%钯；按重量计40%）在EtOH : THF（1 :1.5；[0.05 M]）中的混合物在50ºC下经受氢气（1 atm）持续4 h。将混合物用氮气脱气并且通过硅藻土过滤。将滤饼用EtOH和THF依序洗涤。将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度进行纯化以得到标题化合物。

通用程序5：用HCl或TFA进行BOC脱保护。

向BOC保护的胺（1.0当量）在1,4-二噁烷 [0.3 M] 中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的4 N HCl（14当量），并且将反应混合物在室温下搅拌12 h。在减压下蒸发挥发物以得到呈固体的标题化合物（定量），将其不经进一步纯化用于下一步骤。

通用程序6：经装饰的TBM与CBM的SNAr。

将胺盐酸盐（1.0当量）、氯/氟嘧啶（1.0当量）、N,N-二异丙基乙胺（3至5当量）在DMSO [0.1-0.2 M] 中的溶液在80ºC下搅拌2 h。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干以得到标题化合物。

实施例i-1. 中间体1的合成：3-(1-甲基-6-(4-(甲基氨基)哌啶-1-基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐

步骤1：(1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成。将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（300mg，0.6000 mmol）、N-甲基-N-(哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯（192.72 mg，0.9000 mmol）、碳酸铯（390.68 mg，1.2 mmol）和RuPhos-Pd-G3（50.14 mg，0.0600 mmol）添加到1打兰小瓶中并且用氮气吹扫1 min。此后，添加1,4-二噁烷（0.8 mL）并且将反应混合物在100ºC下搅拌过夜。使用柱色谱法（10 g SNAP柱筒，0-7%甲醇/DCM 25 CV，7%甲醇/DCM 10 CV）从粗混合物中纯化产物，以得到呈白色固体的标题化合物（106 mg，0.1673 mmol，27.8%产率）。MS(ESI) m/z 634.0 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6 ) δ ppm 7.89 (d, J=8.19 Hz, 1H), 7.26 - 7.51 (m, 11 H), 6.88 (d, J=1.59 Hz, 1 H), 6.82 (dd, J=9.17, 1.96Hz, 1 H), 6.57 (d, J=8.19 Hz, 1 H), 5.44 (d, J=13.57 Hz, 4 H), 3.97 (s, 3 H),3.87 (br d, J=12.59 Hz, 2 H), 2.77 (br t, J=11.55 Hz, 2 H), 2.70 (s, 3 H),1.71 - 1.89 (m, 2 H), 1.61 - 1.70 (m, 2 H), 1.42 (s, 9 H)。

步骤2：(1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成。将N-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯（106 mg，0.1700 mmol）和乙醇（4.1813 mL）溶解于配备有搅拌棒的40 mL小瓶中。将混合物用氮气吹扫并且添加钯碳（17.8 mg，0.1700 mmol）。将混合物用氮气再次吹扫并且然后用氢气吹扫。将反应在氢气球下搅拌过夜。将浆料通过硅藻土过滤并且浓缩。将残余物加载在SNAP25G柱上并且用0-50% EtOAC/己烷（含2%-5%MeOH添加剂）纯化，以得到呈黄色油状物的标题化合物（50 mg，0.110 mmol，65.6%产率）。

步骤3：3-(1-甲基-6-(4-(甲基氨基)哌啶-1-基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成。将N-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯（50 mg，0.1100 mmol）添加到配备有搅拌棒的小瓶中并且添加二氯甲烷（1 mL）。然后将在1,4-二噁烷中的HCl 4 N（0.4400 mmol）添加到混合物中并且搅拌2小时。去除搅拌棒并且在真空中去除溶剂以得到呈灰白色固体的标题化合物（42 mg，0.107mmol，97.6%产率）。

实施例i-2. 中间体2的合成：3-(1-甲基-6-(哌啶-4-基氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐

步骤1：6-溴-3-碘-1-甲基-吲唑的合成。向6-溴-1-甲基-吲唑（8.00 g，37.9mmol）在DMF（100 mL）中的溶液中添加NIS（25.58 g，113.7 mmol）。将反应混合物加热至150ºC持续过夜并且然后冷却至室温。在减压下蒸发挥发物。将材料通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-20%乙酸乙酯的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（4.95 g，14.7mmol，39%产率）。MS (ESI) [M+H]⁺ 336.90。

步骤2：6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑的合成。在N₂下向6-溴-3-碘-1-甲基-吲唑（2. g，5.94 mmol）在1,4-二噁烷（30 mL）和水（3 mL）中的溶液中添加(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)硼酸（1.99 g，5.94 mmol）、磷酸钾（3.78 g，17.81 mmol）和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)（0.43 g，0.5900 mmol），然后在N₂下将混合物在80ºC下搅拌17 h。LCMS显示反应物被完全消耗，并且所希望的MS为主峰。然后将反应冷却至室温并且过滤。将滤液用乙酸乙酯（3 x 40 mL）萃取，用盐水（2 x 40 mL）洗涤，经无水Na₂SO₄干燥并且在减压下浓缩。将粗品通过柱色谱法（二氧化硅，梯度：在石油醚中的0-30%乙酸乙酯）纯化为呈淡黄色固体的标题化合物（2.1 g，4.20 mmol，71%产率）。MS (ES) [M+H]⁺500.3。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.96 (s, 1H), 7.91 (d, J= 8.1 Hz, 1H),7.62 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.50 – 7.24 (m, 10H), 7.12 (dd, J= 8.7, 1.4 Hz, 1H),6.60 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.45 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.05 (s, 3H)。

步骤3：4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（4.0 g，7.99 mmol）、4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯（1.92 g，9.59 mmol）、XPhos-Pd-G3（1.35 g，1.6 mmol）和Cs₂CO₃（5.2 g，15.99 mmol）在1,4-二噁烷（53.292 mL）中的混合物加热至110ºC持续28 h并且然后冷却至室温。将混合物通过硅藻土过滤并且用EtOAc（3 x 10 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩。将材料通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-90%乙酸乙酯的梯度进行纯化，以得到呈固体的4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（2.81 g，4.53 mmol，57%产率）。MS (ESI) [M+H]⁺:620.4;¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ7.89 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.45 – 7.42 (m, 2H), 7.39– 7.27 (m, 7H), 7.25 – 7.22 (m, 1H), 6.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.36 (dd, J =8.8, 1.9 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.06(br, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.73 (br, 1H), 3.57 – 3.46 (m, 2H), 3.00 (t, J = 11.9Hz, 2H), 2.10 (dd, J = 13.0, 2.8 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H)。

步骤4：4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。使4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（600 mg，0.970 mmol）和珀尔曼催化剂（Pearlman's Catalyst）（167 mg，0.240mmol）在THF（5 mL）和乙醇（3 mL）中的混合物在1 atm和50ºC下经受氢化4 h。此时，仅观察到烯烃产物。添加另外的珀尔曼催化剂（33.4 mg，0.0500 mmol）并且使混合物在1 atm和50ºC下经受氢化24 h。将混合物通过硅藻土过滤并且用MeOH : MeCN（1 : 1比率，3 x 50.0mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩以得到呈固体的4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（495 mg，0.9496 mmol，98.085%产率）。MS (ESI) [M+H]⁺: 442.4;¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.81 (s, 1H), 7.33 (d, J = 8.7 Hz, 1H),6.52 (dd, J = 8.8, 1.8 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H), 5.79 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.18(dd, J = 8.7, 5.2 Hz, 1H), 3.93 – 3.86 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.96 (br, 2H),2.60 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 2.30 – 2.20 (m, 1H), 2.18 – 2.11 (m, 1H), 1.94 (d,J = 11.0 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.30 – 1.19 (m, 3H)。

步骤5：3-[1-甲基-6-(4-哌啶基氨基)吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成。向4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（1.22 g，2.76 mmol）在1,4-二噁烷（20 mL）中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的氯化氢4 N（3.45 mL，13.8 mmol）。将反应混合物在80ºC下搅拌2小时。通过过滤收集固体，以得到呈白色固体的标题化合物（1.0 g，2.65 mmol，96%产率）。MS (ESI) m/z 342.2 [M+H]⁺。¹H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ ppm 10.85 (s, 1 H), 9.01 (br d, J=2.45 Hz, 1 H), 8.76 - 8.95 (m, 1H), 7.48 (br s, 1 H), 6.72 (br s, 3 H), 4.21 - 4.30 (m, 1 H), 3.87 (s, 3 H),3.63 - 3.75 (m, 1 H), 3.32 (br d, J=12.59 Hz, 2 H), 2.99 (br d, J=10.39 Hz, 2H), 2.55 - 2.69 (m, 2 H), 2.22 - 2.34 (m, 1 H), 2.07 - 2.22 (m, 3 H), 1.72(br s, 2 H)。

实施例i-3. 中间体3的合成：3-(6-氨基-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮

步骤1：(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酸叔丁酯的合成。将3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（160 g，320 mmol）在N₂气氛下在机械搅拌下吸收在配备有回流冷凝器的3000 ml多口RBF中的1,4-二噁烷（1600mL）中。接下来，添加氨基甲酸叔丁酯（56.2 g，480 mmol），随后添加K₂CO₃（133 g，959 mmol）并且然后吹扫5分钟，随后添加XPhos Pd G2（25.2 g，32.0 mmol），再次吹扫5分钟并且然后在110ºC下回流过夜。将反应混合物通过硅藻土床过滤，用乙酸乙酯洗涤。将获得的滤液蒸发以得到粗产物，将其使用硅胶中的ISCO用PE/EtOAc作为洗脱剂进行纯化，以得到呈白色固体的标题化合物（148 g，275 mmol，86%产率）。MS (ESI) m/z 537.30 [M+H]⁺。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.5 (s, 1H), 7.89 – 7.91 (m, 1H), 7.28 - 7.54 (m, 12H), 6.94 (d, 1 H), 6.58 (d, 1 H), 5.41-5.45 (d, 4 H), 3.96 (s, 3 H), 1.50 (s,9 H), 1.37 (s, 1H)。

步骤2：(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酸叔丁酯的合成。向烧瓶中添加(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酸叔丁酯（25 g，46.6 mmol）和THF（500 mL）。将此混合物用氮气吹扫5 min并且然后添加钯碳（24.79 g，23.29 mmol）并且然后在55ºC下在H₂气氛下搅拌过夜。在此时间后，将反应混合物通过硅藻土过滤，用THF（2 L）洗涤并且然后将获得的滤液蒸发，以得到呈白色固体的标题化合物（15.69 g，43.8 mmol，94%产率）。MS (ESI) m/z 359.1 [M+H]⁺; ¹H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.90 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 7.82 (m, 1H), 7.55 - 7.57(d, 1 H), 7.04 (d, 1 H), 4.30 (m, 1 H), 3.90 (s, 3 H), 2.30 – 2.70 (m, 2 H)2.13 – 2.37 (m, 2 H), 1.36 (s, 9H)。

步骤3：3-(6-氨基-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮HCl盐的合成。将(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酸叔丁酯（25 g，69.8 mmol）在磁力搅拌下溶解于在2 L RBF中的1,4-二噁烷（250 mL）中。缓慢添加HCl（在二噁烷中4 M）（250mL，69.8 mmol）并且然后将反应在室温下搅拌48小时。在此时间后，将混合物过滤并且然后将获得的固体吸收在甲醇中并且然后充分搅拌20分钟，并且然后再次过滤，以得到呈淡黄色固体的标题化合物（18 g，57.2 mmol，82%产率）。MS (ESI) m/z 259.1 [M+H]⁺。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.80 - 7.82 (d, 1 H), 7.53 (s, 1 H), 7.08 - 7.11 (d1 H), 4.39 - 4.43 (m, 1 H), 3.99 (s, 3 H), 2.50 – 2.73 (m, 2 H), 2.38 – 2.40(m, 1 H), 2.18 - 2.36 (m, 1 H)。

实施例i-4. 中间体4的合成：3-(1-甲基-6-(甲基(哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐

步骤1：4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（500 mg，1 mmol）、4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯（240 mg，1.2 mmol）、RuPhos-Pd-G3（83 mg，0.1000 mmol）和Cs₂CO₃（651 mg，2 mmol）在1,4-二噁烷（5 mL）中的混合物加热至90ºC持续18 h并且然后冷却至室温。将混合物通过硅藻土过滤并且用EtOAc（3 x 10 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩。将材料通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（550 mg，89%）。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.89 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.47(d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.45 – 7.41 (m, 2H), 7.39 – 7.24 (m, 8H), 6.49 (d, J =8.1 Hz, 1H), 6.36 (dd, J = 8.7, 1.9 Hz, 1H), 6.31 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 5.46(s, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.13 – 4.03 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.73 (s, 1H), 3.57– 3.50 (m, 1H), 3.00 (t, J = 12.1 Hz, 2H), 2.10 (d, J = 10.8 Hz, 2H), 1.48(s, 9H), 1.43 – 1.35 (m, 2H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 620.5。

步骤2：4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（550 mg，0.89 mmol）在DMSO（3.6 mL）和乙酸（0.9 mL）中的溶液中依序添加甲醛的水溶液（0.13 mL，1.8 mmol）和NaBH(OAc)₃（282 mg，1.3 mmol）。将反应混合物在室温下搅拌1 h。添加水（10 mL）和EtOAc（25 mL）并且分离各层。将有机层用NaHCO₃的饱和水溶液（5 mL）、水（3 x 5 mL）、盐水（5 mL）洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤并且在减压下浓缩。将材料通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（467 mg，83%产率）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.91 (d, J = 8.1 Hz,1H), 7.56 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.46 – 7.40 (m, 2H), 7.40 – 7.30 (m, 5H), 7.29– 7.23 (m, 3H), 6.72 (dd, J = 9.3, 2.1 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 8.1 Hz, 1H),6.48 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 5.47 (s, 2H), 5.38 (s, 2H), 4.25 (s, 2H), 4.01 (s,3H), 3.80 (td, J = 10.8, 5.3 Hz, 1H), 2.84 (s, 3H), 2.83 – 2.74 (m, 2H), 1.81– 1.64 (m, 4H), 1.49 (s, 9H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 635.5。

步骤3：4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯。使4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（467 mg，0.74 mmol）和20% Pd(OH)₂/C（117 mg，25 wt%）在THF（7 mL）和EtOH（7 mL）中的混合物在1 atm和50ºC下经受氢化2 h。将混合物通过硅藻土过滤。用MeCN和MeOH的混合物（1 : 1，3 x 10 mL）洗涤，并且将滤液在减压下浓缩。将材料通过硅胶上的柱色谱法使用在DCM中的0-20% MeOH的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（258 mg，77%）。¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10.83 (s, 1H), 7.46 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.87(dd, J = 9.2, 2.0 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 4.23 (dd, J = 9.0, 5.1Hz, 1H), 4.09 – 3.99 (m, 2H), 3.98 – 3.91 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 2.86 (br s,2H), 2.76 (s, 3H), 2.64 – 2.56 (m, 2H), 2.33 – 2.25 (m, 1H), 2.21 – 2.13 (m,1H), 1.67 – 1.54 (m, 4H), 1.41 (s, 9H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 456.3。

步骤4：3-[1-甲基-6-[甲基(4-哌啶基)氨基]吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮；盐酸盐的合成。向4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（258 mg，0.57 mmol）在1,4-二噁烷（10 mL）中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的4 MHCl（1.42 mL，5.66 mmol）。将反应混合物加热至100ºC持续3 h，然后冷却至室温。在减压下蒸发挥发物。添加Et₂O（5 x mL）并且通过过滤收集所得沉淀物，用1,4-二噁烷（3 x 1 mL）和Et₂O（10 x 2 mL）洗涤，然后在真空下干燥，以得到呈固体的标题化合物（217 mg，92%）。¹HNMR (400 MHz, D₂O) δ 7.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.0Hz, 1H), 4.56 (dd, J = 10.8, 4.2 Hz, 1H), 4.18 – 4.09 (m, 1H), 4.07 (s, 3H),3.61 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 3.33 (s, 3H), 3.11 (t, J = 12.9 Hz, 2H), 2.91 –2.79 (m, 2H), 2.61 – 2.48 (m, 1H), 2.44 – 2.35 (m, 1H), 2.28 (d, J = 12.0 Hz,2H), 2.05 – 1.90 (m, 2H)。注释：未观察到可交换质子，含有< 1 wt% 1,4-二噁烷。MS(ESI) [M+H]⁺ 356.2。

实施例i-5. 中间体5的合成：5-氨基-1-(2-吗啉代乙基)吲哚啉-2-酮

步骤1：1-(2-吗啉代乙基)-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成。在氮气下在0ºC下向三苯基膦（1.104 g，4.21 mmol）在THF（20 mL）中的搅拌溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二异丙酯（1.091 mL，5.61 mmol）并且搅拌20 min。然后添加2-吗啉代乙-1-醇（736 mg，5.61 mmol）并且搅拌15 min。随后，添加5-硝基吲哚啉-2-酮（500 mg，2.81 mmol）并且缓慢温热至25ºC并且搅拌16 h。将反应混合物在减压下浓缩，以得到粗产物，将其通过硅胶上的快速柱色谱法用60%-80%乙酸乙酯/石油醚进行纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（273 mg，0.937 mmol，24%产率）。MS (ESI) [M+H]⁺ 292.0。

步骤2：5-氨基-1-(2-吗啉代乙基)吲哚啉-2-酮的合成。在25ºC下在氮气下向1-(2-吗啉代乙基)-5-硝基吲哚啉-2-酮（300 mg，1.030 mmol）在乙醇（5.0 mL）和THF（5.0mL）中的搅拌悬浮液中添加10% Pd/C（150 mg）。将反应混合物在氢气气氛下搅拌8 h。将反应混合物通过硅藻土过滤并且将硅藻土垫用乙醇（2 x 50 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以获得呈灰色固体的标题化合物（280 mg，1.071 mmol，45%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺ 262.2。

实施例i-6. 中间体6的合成：5-氨基-1-(4,4,4-三氟丁基)吲哚啉-2-酮

步骤1：5-氨基-1-(4,4,4-三氟丁基)吲哚啉-2-酮的合成：与中间体5类似并且使用4,4,4-三氟丁-1-醇作为起始材料完成标题化合物的合成。

实施例i-7. 中间体7的合成：5-氨基-6-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮

步骤1：6-氟-1-甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成。在0ºC下向6-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮（100 mg，0.605 mmol）在TFA（1 mL）中的溶液中添加硝酸钠（51.5 mg，0.605 mmol），允许将反应混合物温热至室温并且搅拌3小时。LCMS指示反应完成。然后将反应混合物用饱和碳酸氢钠（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯乙基）纯化，以得到呈白色固体的标题化合物（100 mg，0.476 mmol，79%产率）；MS (ESI) m/z 211.0 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ ppm 8.06 (br d, J=7.46 Hz, 1 H), 6.95 - 7.10 (m, 1 H), 3.63 (s, 2H), 3.28 - 3.33 (m, 43 H), 3.24 (s, 3 H)。

步骤2：5-氨基-6-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。在室温下在氢气（1 atm）下将6-氟-1-甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮（100 mg，0.476 mmol）在甲醇（10 mL）中的悬浮液与钯碳（50.6 mg，0.476 mmol）一起搅拌2 h。将反应混合物过滤。将滤液在减压下浓缩得到呈灰白色固体的标题化合物（80 mg，0.444 mmol，93%产率）；MS (ESI) m/z 181.2 [M+H]⁺。

实施例i-8. 中间体8的合成：5-氨基-7-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮

步骤1：7-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。向7-氟吲哚啉-2-酮（0.400 g，2.65mmol）在水（10 mL）中的悬浮液中添加氢氧化钠1 N（3.97 mL，3.97 mmol）和硫酸二甲酯（0.379 mL，3.97 mmol），将反应混合物在120ºC下搅拌40 min。LCMS指示反应不完全，剩余20% SM。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层干燥（无水硫酸钠），经硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-50%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈黄色固体的标题化合物7-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮（0.3 g，1.82 mmol，69%产率）；MS (ESI) m/z 331.2 [M+H]⁺。

步骤2：5-氨基-7-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。与中间体7类似并且使用7-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮作为起始材料完成标题化合物的合成。

实施例i-9. 中间体9的合成：5-氨基-4-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮

步骤1：4-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。向4-氟吲哚啉-2-酮（1.0 g，6.62 mmol）在水（18 mL）中的悬浮液中添加氢氧化钠1 N（9.92 mL，9.92 mmol）和硫酸二甲酯（0.695mL，7.28 mmol），将反应混合物在120ºC下搅拌40 min。LCMS指示反应不完全，剩余20% SM。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层干燥（无水硫酸镁），经硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-50%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈白色固体的标题化合物（1.48 g，100%）；MS (ESI) m/z 166.2[M+H]⁺。

步骤2：4-氟-1-甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成。向4-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮（0.68 g，4.12 mmol）在硫酸（10 mL）中的-30ºC溶液中缓慢添加在硫酸98（1 mL）中的硝酸90%（0.195 mL，4.53 mmol）。将反应混合物在-30ºC下搅拌并且允许经30 min温热至0ºC。将反应混合物倒在100 g冰上，然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将合并的有机相用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，经硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化，以得到呈黄色固体的标题化合物4-氟-1-甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮（0.260 g，1.24 mmol，30.0%产率）；MS (ESI) m/z 211.2[M+H]⁺。

步骤3：5-氨基-4-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。在室温下在氢气（1 atm）下将4-氟-1-甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮（60 mg，0.285 mmol）在甲醇（10 mL）中的悬浮液与钯碳（30.4 mg，0.285 mmol）一起搅拌2 h。将反应混合物过滤。将洗脱液在减压下浓缩得到呈白色固体的标题化合物（44 mg，0.244 mmol，86%产率）；MS (ESI) m/z 181.2 [M+H]⁺; ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.68 (t, J = 8.56 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 8.07 Hz,1H), 4.76 (s, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.04 (s, 3H)。

实施例i-10. 中间体10的合成：5-氨基-1-异丙基吲哚啉-2-酮

步骤1：1-异丙基-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成：将2-(2-氟-5-硝基苯基)乙酸（0.5g，2.51 mmol）、丙-2-胺（0.445 g，7.53 mmol）在DMSO（4 mL）中的溶液在60ºC下搅拌15 h。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层干燥（无水硫酸钠），过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈黄色固体的2-(2-(异丙基氨基)-5-硝基苯基)乙酸（0.528 g，87%）。然后在室温下将固体2-(2-(异丙基氨基)-5-硝基苯基)乙酸（0.528 g）与2 N HCl 10 mL一起搅拌15小时。通过过滤收集所得固体，以得到呈黄色固体的标题化合物（0.45 g，2.043mmol，81%产率）；MS (ESI) m/z 221.2 [M+H]⁺。

步骤2：5-氨基-1-异丙基吲哚啉-2-酮的合成：在室温下在氢气（1 atm）下将1-异丙基-5-硝基吲哚啉-2-酮（450 mg，2.043 mmol）在甲醇（10 mL）中的悬浮液与钯碳（217mg，2.043 mmol）一起搅拌15 h。将反应混合物过滤。将洗脱液在减压下浓缩得到呈灰白色固体的标题化合物5-氨基-1-异丙基吲哚啉-2-酮（350 mg，1.840 mmol，90%产率）；MS(ESI) m/z 191.2 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.80 (d, J=8.31 Hz, 1H), 6.55 (d, J=1.96 Hz, 1 H), 6.43 (dd, J=8.31, 2.32 Hz, 1 H), 4.72 (br s, 2H), 4.45 (spt, J=6.99 Hz, 1 H), 3.35 (s, 2 H), 1.34 (d, J=7.09 Hz, 6 H)。

实施例i-11. 中间体11的合成：5-氨基-1-乙基吲哚啉-2-酮

步骤1：5-氨基-1-乙基吲哚啉-2-酮的合成：与中间体10类似并且使用乙胺盐酸盐作为起始材料完成标题化合物的合成。

实施例i-12. 中间体12的合成：5-氨基-1-(2-羟乙基)吲哚啉-2-酮

步骤1：5-氨基-1-(2-羟乙基)吲哚啉-2-酮的合成：与中间体10类似并且使用2-氨基乙醇作为起始材料完成标题化合物的合成。

实施例i-13. 中间体13的合成：5-氨基-1-(2-甲氧基乙基)吲哚啉-2-酮

步骤1：2-(2-((2-甲氧基乙基)氨基)-5-硝基苯基)乙酸的合成。在25ºC下在氮气下向2-(2-氟-5-硝基苯基)乙酸（1，500 mg，2.51 mmol）在THF（5.0 mL）中的溶液中添加2-甲氧基乙-1-胺（2，377 mg，5.02 mmol）和DIPEA（0.877 mL，5.02 mmol）。将反应混合物加热至60ºC并且搅拌16 h。将反应混合物在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的标题化合物（550mg，0.543 mmol，21%产率）。

步骤2：1-(2-甲氧基乙基)-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成。向2-(2-((2-甲氧基乙基)氨基)-5-硝基苯基)乙酸（550 mg，2.16 mmol）在水（2.0 mL）中的溶液中添加1.5 N HCl（3.0 mL）。将反应混合物加热至60ºC并且搅拌16 h。在0ºC下将反应混合物缓慢倒入碳酸氢钠溶液中并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈浅棕色固体的标题化合物（240 mg，0.95 mmol，44%产率）。

步骤3：5-氨基-1-(2-甲氧基乙基)吲哚啉-2-酮的合成。在25ºC下在氮气下向1-(2-甲氧基乙基)-5-硝基吲哚啉-2-酮（240 mg，0.945 mmol）在乙醇（10 mL）中的搅拌溶液中添加10% Pd/C（101 mg）。将反应混合物在氢气气氛下搅拌8 h。将反应混合物通过硅藻土过滤并且将硅藻土垫用乙醇（3 x 10 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以获得标题化合物（200 mg，0.563 mmol，59%产率）。将所述产物不经进一步纯化而用于下一步骤。MS (ESI)m/z 207.2 [M+H]⁺。

实施例i-14. 中间体14的合成：5-氨基-1-甲基-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮

步骤1：3,3-二溴-1-甲基-5-硝基-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮的合成。在0ºC下向1-甲基-5-硝基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶（800 mg，3.66 mmol）在叔丁醇（1mL）和水（1 mL）中的搅拌溶液中添加NBS（1.37 g，7.68 mmol）。将反应混合物在25ºC下搅拌2 h。通过TLC和LCMS监测反应混合物。当反应完成时，将反应混合物用水（100 mL）稀释并且用EtOAc（3 x 100 ml）萃取。将合并的有机层蒸发，以获得粗标题化合物，将其不经进一步纯化使用。

步骤2：5-氨基-1-甲基-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮的合成：向3,3-二溴-1-甲基-5-硝基-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮（1.4 g，3.99 mmol）在AcOH（20mL）中的搅拌溶液中添加锌粉（1.30 g，20.0 mmol）并且将反应混合物在25ºC下搅拌6 h。通过TLC和LCMS监测反应混合物。在此时间后，将反应混合物蒸发。将所得残余物通过使用NaOH溶液（100 ml）碱化，并且用在DCM中的10% MeOH萃取。将有机级分蒸发，以获得标题化合物，将其不经进一步纯化使用。MS (ESI) m/z 164.1 [M+H]⁺。

实施例i-15. 中间体15的合成：6-氨基-1-(3-羟基-3-甲基丁基)吲哚啉-2-酮

步骤1：2-甲基-4-(6-硝基-1H-吲哚-1-基)丁-2-醇的合成：在25ºC下向6-硝基-1H-吲哚（1，1.0 g，6.17 mmol）在DMF（10 mL）中的搅拌溶液中添加化合物3-羟基-3-甲基丁基4-甲基苯磺酸盐（2，2.30 g，8.02 mmol）和碳酸铯（3.01 g，9.25 mmol）。将反应混合物加热至120ºC持续16 h。然后将反应混合物冷却至室温并且用水处理并且用乙酸乙酯（3 x 50mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗化合物，将其通过二氧化硅上的快速柱色谱法用20%-30%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈棕色半固体的标题化合物（1.4 g，5.44 mmol，88%产率）。MS (ESI) m/z 249.1 [M+H]⁺。

步骤2：3,3-二溴-1-(3-羟基-3-甲基丁基)-6-硝基吲哚啉-2-酮的合成。在0ºC下向2-甲基-4-(6-硝基-1H-吲哚-1-基)丁-2-醇（100 mg，0.380 mmol）在t-BuOH（1 mL）和水（1.0 mL）中的搅拌溶液中添加NBS（142 mg，0.797 mmol）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌2 h。将反应混合物用水（30 mL）处理并且用乙酸乙酯（2 x 50 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到标题化合物（150 mg，94%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。

步骤3：6-氨基-1-(3-羟基-3-甲基丁基)吲哚啉-2-酮的合成。在0ºC下向3,3-二溴-1-(3-羟基-3-甲基丁基)-6-硝基吲哚啉-2-酮（150 mg）在AcOH（3.0 mL）中的搅拌溶液中添加锌粉（116 mg，1.78 mmol）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌8 h。将反应混合物在减压下浓缩，以得到粗化合物。将粗品通过二氧化硅上的快速柱色谱法用6%甲醇/DCM纯化，以得到呈棕色胶状固体的标题化合物（100 mg，0.333 mmol，87%产率）。MS (ESI) m/z235.2 [M+H]⁺。

实施例i-16. 中间体16的合成：6-氨基-1-(3-羟基-3-甲基丁基)-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮

步骤1：N-(2-溴-5-硝基-苯基)-2-甲基-丙-2-烯酰胺的合成。向2-溴-5-硝基-苯胺（1.00 g，4.61 mmol）在DMA（20 mL）中的溶液中添加2-甲基丙-2-烯酰氯（0.45 mL，4.61mmol）并且将反应混合物在室温下搅拌12 h。添加水（5.0 mL）并且通过过滤收集所得沉淀物，用水（20 mL）洗涤，然后在真空下干燥，以得到呈固体的标题化合物（950 mg，72%）。¹HNMR (400 MHz, DMSO d6): δ 9.69 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.00 (d, J = 1.2 Hz,2H), 5.97 (s, 1H), 5.63 (s, 1H), 2.00 (s, 3H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 285.1。

步骤2：3,3-二甲基-6-硝基-吲哚啉-2-酮的合成。在氮气下向N-(2-溴-5-硝基-苯基)-2-甲基-丙-2-烯酰胺（950 mg，3.33 mmol）在DMF（33 mL）中的溶液中依序添加三乙胺（1.16 mL，8.33 mmol）、TBAB（1.07 g，3.33 mmol）和Pd(OAc)₂（15.0 mg，0.07 mmol），并且将反应混合物在80ºC下搅拌1 h。添加HCOONa（227 mg，3.33 mmol）并且将反应混合物在80ºC下搅拌12 h。添加水（5 mL）和乙酸乙酯（15 mL）并且分离各层。将有机层用盐水（3 x 10mL）洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤并且在减压下浓缩。添加Et₂O（5 mL）并且通过过滤收集所得沉淀物并且在真空下干燥，以得到呈固体的标题化合物（180 mg，26%）。¹H NMR (400 MHz,DMSO d6): δ 10.75 (s, 1H), 7.90 (dd, J = 8.2, 2.1 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.2Hz, 1H), 7.57 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 1.30 (s, 6H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 207.0。

步骤3：1-(3-羟基-3-甲基-丁基)-3,3-二甲基-6-硝基-吲哚啉-2-酮的合成。向3,3-二甲基-6-硝基-吲哚啉-2-酮（180 mg，0.87 mmol）在DMF（3 mL）中的溶液中依序添加(3-羟基-3-甲基-丁基)4-甲基苯磺酸盐（271 mg，1.05 mmol）和K₂CO₃（362 mg，2.62 mmol），并且将反应混合物在80ºC下搅拌12 h。添加水（10 mL）和乙酸乙酯（60 mL）并且分离各层。将有机层用盐水（10 mL）洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（145 mg，57%）。¹H NMR (500 MHz, DMSO d6): δ 7.96 (dd, J = 8.1, 2.1 Hz, 1H),7.77 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.86 – 3.78(m, 2H), 1.69 – 1.62 (m, 2H), 1.31 (s, 6H), 1.17 (s, 6H)。MS (ESI) [M+H]⁺275.2。

步骤4：6-氨基-1-(3-羟基-3-甲基-丁基)-3,3-二甲基-吲哚啉-2-酮的合成。使1-(3-羟基-3-甲基-丁基)-3,3-二甲基-6-硝基-吲哚啉-2-酮（145 mg，0.50 mmol）和Pd(OH)₂/C（70.0 mg，0.10 mmol）在iPrOH（3 mL）中的混合物在室温下经受氢化（1 atm）过夜。将混合物通过硅藻土过滤并且用MeOH（10 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈固体的标题化合物（125 mg，96%），将其不经进一步纯化直接用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺263.2。

实施例i-17. 中间体17的合成：(2-(5-氨基-2-氧代吲哚啉-1-基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

步骤1：1-(2-(甲基氨基)乙基)-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成：在25ºC下在氮气下向2-(2-氟-5-硝基苯基)乙酸（1，1.0 g，5.02 mmol）在THF（30 mL）中的搅拌溶液中添加(2-氨基乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯（2，1.750 g，10.04 mmol）和DIPEA（1.754 mL，10.04mmol）。将反应混合物加热至65ºC并且搅拌16 h。将反应混合物在减压下浓缩，以得到呈棕色液体的粗品。将粗品溶解于水（20 mL）中并且在25ºC下逐滴添加6.0 N HCl（6 ml，36.0mmol）。将反应混合物加热至65ºC并且搅拌16 h。将反应混合物冷却至室温并且用碳酸氢钠中和并且用乙酸乙酯（3 x 100 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到标题化合物（400 mg，0.909 mmol，18%产率），将其不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤2：甲基(2-(5-硝基-2-氧代吲哚啉-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成。在氮气下在0ºC下向1-(2-(甲基氨基)乙基)-5-硝基吲哚啉-2-酮（400 mg，0.909 mmol）在DCM（10 mL）中的搅拌溶液中逐滴添加DIPEA（0.397 mL，2.272 mmol）和Boc-酸酐（0.422 mL，1.818 mmol）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌16 h。将反应混合物用水（50 mL）处理并且用乙酸乙酯（3 x 100 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗化合物，将其通过硅胶上的快速柱色谱法用20%-40%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到标题化合物（240 mg，0.697 mmol，77%产率）。

步骤3：(2-(5-氨基-2-氧代吲哚啉-1-基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成。在25ºC下在氮气下向甲基(2-(5-硝基-2-氧代吲哚啉-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯（240 mg，0.716 mmol）在乙醇（2.5 mL）和THF（2.5 mL）中的搅拌溶液中添加10% Pd/C（120 mg）。将反应混合物在氢气气氛下搅拌6 h。将反应混合物通过硅藻土过滤并且将硅藻土垫用乙醇（2x 50 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以获得呈深棕色液体的化合物5（200 mg，0.504mmol，70%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。

实施例i-18. 中间体18的合成：5-氨基-1-(2,2-二氟丙基)吲哚啉-2-酮

步骤1：2,2-二氟丙基4-甲基苯磺酸盐的合成。在25ºC下向2,2-二氟丙-1-醇（1，1.0 g，10.4 mmol）在DCM（10 mL）中的溶液中添加三乙胺（2.18 mL，15.61 mmol）。将混合物冷却至0ºC并且添加4-二甲基氨基吡啶（0.127 g，1.041 mmol），随后添加4-甲基苯磺酰氯（2.381 g，12.49 mmol）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌16 h。将所得反应混合物添加到水（25 mL）中并且用DCM（3 x 50 mL）萃取。将合并的有机层用盐水（20 mL）洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈灰白色固体的标题化合物（2.0 g，7.95mmol，76%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。MS (ESI) m/z 268.0 [M+H₂O]。

步骤2：1-(2,2-二氟丙基)-5-硝基-1H-吲哚的合成。在25ºC下向2,2-二氟丙基4-甲基苯磺酸盐（931 mg，3.70 mmol）在DMF（5 mL）中的溶液中添加碳酸铯（1507 mg，4.63mmol）和5-硝基-1H-吲哚（3，500.0 mg，3.08 mmol）。将混合物加热至120ºC并且搅拌16 h。将反应混合物通过添加水（15 mL）淬灭并且用乙酸乙酯（3 x 30 mL）萃取。将合并的有机层用盐水（15 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗品通过二氧化硅上的快速柱色谱法用35%-40%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈淡黄色固体的标题化合物（250.0 mg，0.997 mmol，32%产率）。MS (ESI) m/z 240.9 [M+H]⁺。

步骤3：3,3-二溴-1-(2,2-二氟丙基)-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成。在0ºC下向1-(2,2-二氟丙基)-5-硝基-1H-吲哚（250.0 mg，0.997 mmol）在叔丁醇（2.5 mL，26.1 mmol）和水（2.5 mL）中的溶液中分批添加NBS（373 mg，2.094 mmol）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌6 h。将反应混合物用水（15 mL）淬灭并且用乙酸乙酯（3 x 30 mL）萃取。将合并的有机层用盐水（15 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈淡黄色固体的标题化合物（350.0 mg，0.619 mmol，62%产率）。MS (ESI) m/z 415.0 [M+H]⁺。

步骤4：5-氨基-1-(2,2-二氟丙基)吲哚啉-2-酮的合成。在25ºC下向3,3-二溴-1-(2,2-二氟丙基)-5-硝基吲哚啉-2-酮（350.0 mg，0.619 mmol）在乙酸（5.0 mL）中的搅拌溶液中缓慢添加锌粉（202 mg，3.10 mmol）并且继续搅拌6 h。将反应混合物在减压下浓缩并且通过添加水（15 mL）稀释。将所得残余物用乙酸乙酯（3 x 30 mL）萃取。将合并的有机层用盐水（10 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈棕色固体的标题化合物（150.0 mg，0.299 mmol，48%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。MS(ESI) m/z 227.0 [M+H]⁺。

实施例i-19. 中间体19的合成：5-氨基-1-(3-氟-3-甲基丁基)吲哚啉-2-酮

步骤1：5-氨基-1-(3-氟-3-甲基丁基)吲哚啉-2-酮的合成。与中间体18类似使用3-氟-3-甲基丁-1-醇作为起始材料合成标题化合物。

实施例i-20. 中间体20的合成：5-氨基-1-(2-氟-2-甲基丙基)吲哚啉-2-酮

步骤1：2-氟-2-甲基丙基三氟甲磺酸酯的合成。在-10ºC下向三氟甲磺酸酐（2.75mL，16.28 mmol）在DCM（10 mL）中的搅拌混合物中缓慢添加2,6-二甲基吡啶（2.26 mL，19.5mmol）并且然后逐滴添加2-氟-2-甲基丙-1-醇（1.50 g，16.3 mmol）在DCM（35 mL）中的溶液。将反应混合物在0ºC下搅拌4 h。将反应混合物在减压下浓缩，以获得残余物。将残余物溶解于DCM中并且用1.0 N HCl溶液洗涤，随后用饱和碳酸氢盐溶液洗涤并且然后用盐水洗涤。将有机相经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩，以得到呈棕色液体的标题化合物（2.5 g，11.2mmol，68%产率）。将粗产物不经纯化用于下一步骤。

步骤2：1-(2-氟-2-甲基丙基)-5-硝基-1H-吲哚的合成。向5-硝基-1H-吲哚（700mg，4.32 mmol）在DMF（10 mL）中的搅拌溶液中添加化合物2-氟-2-甲基丙基三氟甲磺酸酯（2419 mg 10.79 mmol）。将反应混合物加热至100ºC并且搅拌4 h。将反应混合物倒入冰冷的水中，用乙酸乙酯（3 x 50 mL）萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩，以得到标题化合物（600 mg，2.41 mmol，56%产率）。将粗产物不经纯化用于下一步骤。MS (ESI)m/z 237.1 [M+H]⁺。

5-氨基-1-(2-氟-2-甲基丙基)吲哚啉-2-酮的合成。在0ºC下向1-(2-氟-2-甲基丙基)-5-硝基-1H-吲哚（100 mg，0.423 mmol）在叔丁醇（2.0 mL）中的搅拌溶液中添加溴（0.218 mL，4.23 mmol）并且将反应混合物搅拌5 min。然后缓慢添加水（2 mL）并且温热至25ºC并且搅拌4 h。将反应混合物用水处理并且用乙酸乙酯（3 x 10 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到 110 mg粗材料。将残余物溶解于乙酸（3.5 mL）中并且添加锌粉（88 mg，1.34 mmol）并且在25ºC下搅拌1 h。将反应混合物在减压下浓缩以得到粗产物。将粗品溶解于乙酸乙酯中并且用碳酸氢钠溶液处理。将有机层经硫酸钠干燥，过滤并且浓缩，以得到标题化合物（55 mg，0.132 mmol，49%产率）。将粗产物不经纯化用于下一步骤。

实施例i-21. 中间体21的合成：5-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-2-酮

步骤1：5-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-2,3-二酮的合成。向冷却至0ºC的5-硝基吲哚啉-2,3-二酮（0.96 g，5.00 mmol）在DMF（35.0 mL）中的溶液中添加NaH（在矿物油中的60%分散体，220.0 mg，5.50 mmol）。在0ºC下搅拌45 min后，添加2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯（1.28 g，5.50 mmol）。将反应混合物温热至室温持续1 h。添加NH₄Cl的饱和水溶液（300.0 mL）和EtOAc并且分离各层。将水层用EtOAc萃取并且将合并的有机层用水、盐水洗涤，干燥（Na₂SO₄），过滤并且在减压下浓缩。将材料通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的20%-70%乙酸乙酯的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（910.0 mg，66%）。¹H NMR(500 MHz, DMSO) δ 8.60 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 2.4 Hz, 1H),7.55 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.77 (q, J = 9.3 Hz, 2H)。

步骤2：5-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-2,3-二酮的合成。将5-硝基-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-2,3-二酮（548..0 mg，2.00 mmol）和10% Pd/C（106.0 mg，0.10 mmol）在甲醇（25.0 mL）中的混合物在帕尔烧瓶（Parr flask）中在50 psi氢气气氛下在室温下振荡1 h。将混合物通过硅藻土过滤并且用MeOH洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈固体的标题化合物（450.0 mg，92%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺247.1。

步骤3：5-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-2-酮的合成。将5-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-2,3-二酮（450.0 mg，1.84 mmol）和水合肼（65%，10.0 mL，133.0 mmol）的混合物加热至115ºC持续1 h并且然后冷却至室温。在减压下蒸发挥发物。将材料通过反相色谱法（C18）使用10%-70%乙腈和水（甲酸铵缓冲液pH 4）的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（150.0 mg，35%）。¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 6.79 (d, J = 8.3 Hz, 1H),6.57 (s, 1H), 6.47 (dd, J = 8.3, 2.1 Hz, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.47 (q, J = 9.5Hz, 2H), 3.54 (s, 2H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 231.1。

实施例i-22. 中间体22的合成：4-氨基-5-甲基环庚烷-1-甲酸苄酯

步骤1：1-苄基4-乙基5-氧代氮杂环庚烷-1,4-二甲酸酯的合成：在-25ºC下向4-氧代哌啶-1-甲酸苄酯（2.5 g，10.72 mmol）和2-重氮乙酸乙酯（9.78 g，12.86 mmol）在THF（50 mL）中的搅拌溶液中添加BF₃OEt₂（1.358 mL，10.72 mmol）。将反应混合物在25ºC下搅拌4 h。之后，将反应混合物用碳酸氢钠溶液（100 ml）碱化并且将有机物用EtOAc（3 x 100ml）萃取。将合并的有机级分干燥并且浓缩，以得到粗材料。将其通过Combi-flash柱色谱法纯化，其中在PE中的15% EA下洗脱出产物。将含有产物的级分合并并且浓缩，以得到呈无色液体的1-苄基4-乙基5-氧代氮杂环庚烷-1,4-二甲酸酯（3.5 g，3.40 mmol，31.7%产率）。(ESI) [M+H]⁺ 320.0, RT = 2.15。

步骤2：1-苄基4-乙基4-甲基-5-氧代氮杂环庚烷-1,4-二甲酸酯的合成：在0ºC下向1-苄基4-乙基5-氧代氮杂环庚烷-1,4-二甲酸酯（3.5 g，10.96 mmol）在DMF（8 mL）中的搅拌溶液中添加Cs₂CO₃（7.14 g，21.92 mmol）和MeI（1.371 mL，21.92 mmol）。将反应混合物温热至室温并且在25ºC下搅拌6 h。将反应混合物蒸发，以获得粗材料，将其通过combi-flash柱色谱法纯化。将在PE中的25%-30% EA下洗脱的产物和含有产物的级分合并并且浓缩得到呈无色液体的1-苄基4-乙基4-甲基-5-氧代氮杂环庚烷-1,4-二甲酸酯（2.5 g，76%）。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.35 (br m, 5H), 5.07 (br m, 2H), 4.15 ( br m,2H), 3.68 (m, 2H), 3.40 (br m, 1H), 2.81 (br m, 2H), 2.15 (br m, 1H), 1.59(br m, 1H), 1.19 – 1.24 (br m, 6H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 334.1

步骤3：4-甲基-5-氧代氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯的合成：在25ºC下向1-苄基4-乙基4-甲基-5-氧代氮杂环庚烷-1,4-二甲酸酯（2.5 g，5.70 mmol）在MeOH（20 mL）和水（20 mL）中的搅拌溶液中添加KOH（0.959 g，17.10 mmol）。将反应混合物在60ºC下搅拌4 h。之后，将反应混合物用水（50 ml）稀释并且用DCM（2 x 100 ml）萃取。将其经由反相制备型HPLC用在5 mm甲酸铵pH 3.3中的2%-98% MeCN的梯度进行纯化。将含有所希望的产物的级分合并并且浓缩得到呈黄色油状物的4-甲基-5-氧代氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯（1.50 g，80%）。¹H NMR(400 MHz, DMSO) δ 7.31 - 7.39 (m, 5H), 5.07 (s, 2H), 3.82 - 3.98 (m, 2H),3.46 (m, 1H), 3.34 (m, 1H), 3.19 (m, 1H), 3.01 (m, 1H). 2.59 (m, 1H), 1.66(m, 1H), 1.30 (m, 1H), 0.95 (d, 2H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 262.2

步骤4：4-氨基-5-甲基氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯的合成：在25ºC下向4-甲基-5-氧代氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯（1.0 g，3.02 mmol）在2-丙醇（20 mL）中的搅拌溶液中添加乙酸铵（4.66 g，60.5 mmol）和NaCNBH₄（1.140 g，18.14 mmol）。将反应混合物在50ºC下搅拌3 h并且通过TLC和LCMS监测。之后，将反应混合物用水（80 ml）稀释并且用DCM（3 x 80 ml）萃取。将有机级分浓缩，以得到呈黄色固体的4-氨基-5-甲基氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯（700mg，65%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 263.2, RT = 0.78

实施例i-23. 中间体23的合成：4-氨基-3-甲基氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯

步骤1：1-苄基3-乙基4-氧代氮杂环庚烷-1,3-二甲酸酯的合成：在-78ºC下向3-氧代哌啶-1-甲酸苄酯（5.0 g，21.43 mmol）和2-重氮乙酸乙酯（21.20 g，27.9 mmol）在THF（50 mL）中的搅拌溶液中添加BF₃OEt₂（2.72 mL，21.43 mmol）。将反应混合物温热至室温并且在25ºC下搅拌4 h。之后，将反应混合物用碳酸氢钠溶液（100 ml）碱化并且将有机物用EtOAc（3 x 100 ml）萃取。将合并的有机级分干燥并且浓缩，以得到粗材料。将其通过Combi-flash柱色谱法纯化，其中在PE中的20%-30% EA下洗脱出产物。将含有产物的级分合并并且浓缩，以得到呈无色液体的1-苄基3-乙基4-氧代氮杂环庚烷-1,3-二甲酸酯（4.5 g，10.00 mmol，46.7%产率）。(ESI) [M+H]⁺320.1, RT = 2.11。

步骤2：1-苄基3-乙基3-甲基-4-氧代氮杂环庚烷-1,3-二甲酸酯的合成：在0ºC下向1-苄基3-乙基4-氧代氮杂环庚烷-1,3-二甲酸酯（4.0 g，10.02 mmol）在DMF（1 mL）中的搅拌溶液中添加Cs₂CO₃（6.53 g，20.04 mmol）和MeI（1.253 mL，20.04 mmol）。并且将反应混合物在25ºC下搅拌16 h。将反应混合物温热至室温并且在25ºC下搅拌6 h。将反应混合物蒸发，以获得粗材料，将其通过combi-flash柱色谱法纯化。将在PE中的20% EtOAc下洗脱的产物和含有产物的级分合并并且浓缩，以获得呈无色液体的1-苄基3-乙基3-甲基-4-氧代氮杂环庚烷-1,3-二甲酸酯（2.2 g，5.61 mmol，56.0%产率）。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ7.32 - 7.40 (m, 5H), 5.08 (s, 2H), 3.34 – 4.04 (m, 6H), 2.71 (m, 2H), 1.64 –1.78 (m, 3H). 1.10 - 1.24 (m, 5H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 334.2

步骤3：3-甲基-4-氧代氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯的合成：向1-苄基3-乙基3-甲基-4-氧代氮杂环庚烷-1,3-二甲酸酯（1.0 g，2.55 mmol）在MeOH（7.5 mL）和H₂O（7.5 mL）中的搅拌溶液中添加KOH（0.429 g，7.65 mmol）并且将反应混合物在60ºC下搅拌2 h。通过TLC和LCMS监测反应混合物。将反应混合物在60ºC下搅拌4 h。之后，将反应混合物用水（50 ml）稀释并且用DCM（2 x 100 ml）萃取。将其经由反相制备型HPLC用在5 mm甲酸铵pH 3.3中的2%-98% MeCN的梯度进行纯化。将含有所希望的产物的级分合并并且浓缩得到呈黄色油状物的3-甲基-4-氧代氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯（550 mg，76%）。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.29- 7.37 (m, 5H), 5.08 (s, 2H), 3.33 – 4.04 (m, 6H), 2.51 (m, 2H), 1.99 (m,1H), 1.76 (m, 1H), 1.64 (m, 1H). 1.09 - 1.23 (m, 6H)。MS (ESI) [M+H]⁺ 262.1

步骤4：4-氨基-3-甲基氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯的合成：在25ºC下向3-甲基-4-氧代氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯（100 mg，0.352 mmol）在2-丙醇（4 mL）中的搅拌溶液中添加乙酸铵（543 mg，7.04 mmol）和NaCNBH₄（133 mg，2.112 mmol）。将反应混合物在50ºC下搅拌3h。之后，将反应混合物用水稀释并且用EtOAC萃取。将有机级分浓缩，以得到呈黄色固体的4-氨基-3-甲基氮杂环庚烷-1-甲酸苄酯（100 mg，40%）。MS (ESI) [M+H]⁺263.2, RT =1.35。

实施例S1. 3-(6-((5-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-5-氮杂螺[3.5]壬-8-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (1) 的合成

步骤1：5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。在-40ºC下向5-氨基-1-甲基吲哚啉-2-酮（2.0 g，12.3 mmol）在四氢呋喃（32 mL）中的溶液中添加DIPEA（2.37 ml，13.6 mmol）。将5-氯-2,4-二氟嘧啶（1.86 g，12.3 mmol）在干四氢呋喃（8mL）中的溶液缓慢添加到上述混合物中并且允许缓慢温热至室温。将反应混合物在室温下搅拌16 h。在此时间后，将反应混合物过滤并且用乙腈（约50 mL）洗涤。将固体在真空下干燥以得到呈棕褐色固体的标题化合物。MS (ESI) [M+H]⁺ 293.1。

步骤2：8-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-5-氮杂螺[3.5]壬烷-5-甲酸叔丁酯的合成。向3-(6-氨基-1-甲基-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐（200 mg，0.68 mmol）、8-氧代-5-氮杂螺[3.5]壬烷-5-甲酸叔丁酯（201 mg，0.81 mmol）和AcOH（1 mL）在DMSO（5 mL）中的溶液中添加癸硼烷（38 mg，0.34 mmol）。将反应混合物在室温下搅拌5 h并且在减压下蒸发挥发物。将残余物通过反相色谱法（C18）使用0-80% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（325 mg，76%）。MS(ESI) [M+H]⁺ 482.3。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.82 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.7Hz, 1H), 6.52 – 6.40 (m, 1H), 6.48 (br s, 1H), 5.78 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.18(dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.73 – 3.68 (m, 2H), 2.75 – 2.68 (m,1H), 2.62 – 2.59 (m, 2H), 2.30 – 2.13 (m, 4H), 1.98 – 1.86 (m, 4H), 1.72 –1.60 (m, 3H), 1.40 (s, 9H), 1.06 – 0.98 (m, 1H)。

步骤3：3-[6-(5-氮杂螺[3.5]壬-8-基氨基)-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮2,2,2-三氟乙酸的合成。向8-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-5-氮杂螺[3.5]壬烷-5-甲酸叔丁酯（325 mg，0.67 mmol）在DCM（5 mL）中的溶液中添加三氟乙酸（0.31 mL，4.1 mmol），并且将反应混合物在室温下搅拌18 h。在减压下蒸发挥发物，以得到呈固体的标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺ 382.3。¹HNMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.82 (s, 1H), 8.98 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.75 – 8.71(m, 1H), 7.37 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.55 (dd, J = 8.7, 1.8 Hz, 1H), 6.51 (brs, 1H), 4.19 (dd, J = 8.9, 5.1 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.63 – 3.57 (m, 1H),3.30 – 3.27 (m, 1H), 3.02 – 2.96 (m, 1H), 2.63 – 2.60 (m, 2H), 2.36 (d, J =12.9 Hz, 1H), 2.30 – 2.23 (m, 4H), 2.17 – 2.12 (m, 2H), 2.01 – 1.97 (m, 1H),1.95 – 1.87 (m, 2H), 1.63 – 1.58 (m, 1H), 1.40 – 1.32 (m, 1H)。

步骤4：3-[6-[[5-[5-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-5-氮杂螺[3.5]壬-8-基]氨基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮的合成。在N₂（1 atm）下向3-[6-(5-氮杂螺[3.5]壬-8-基氨基)-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮2,2,2-三氟乙酸（20 mg，40 µmol）在NMP（0.7 mL）中的溶液中添加5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（11 mg，40 µmol）。将反应混合物加热至160ºC持续18 h并且然后冷却至室温。将粗反应混合物通过反相色谱法（C18）使用0-100% MeCN和水（含0.1%甲酸）的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（13 mg，44%）。LCMS：C₃₄H₃₆ClN₉O₃理论值为653.3，实测值为654.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ 10.80 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.38 –7.36 (m, 1H), 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.48 – 6.45(m, 2H), 5.65 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 4.17 (dd, J =8.9, 5.1 Hz, 1H), 3.83 –3.80 (m, 1H), 3.81 (s, 3H) 3.51 – 3.50 (m, 2H), 3.09(s, 3H), 2.88 (t, J = 10.0 Hz, 1H), 2.62 – 2.59 (m, 2H), 2.38 –2.34 (m, 2H),2.26 – 2.24 (m, 1H), 2.19 – 2.12 (m, 2H), 1.96 –1.88 (m, 3H), 1.67 – 1.56 (m,3H), 1.07 – 0.99 (m, 1H)。

实施例S2. 3-(6-(8-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (2) 的合成

步骤1：2-[2-双-[3,5-双-(三氟甲基)苯基]磷烷基-3,6-二甲氧基-苯基]-N1,N1,N3,N3-四甲基-苯-1,3-二胺[2-[2-(甲基氨基)苯基]苯基]-甲基磺酰基氧基-钯的合成。将(2'-甲基氨基-1,1'-联苯基-2-基)甲磺酸钯(II)二聚体（406 mg，0.53 mmol）和2-[2-双-[3, 5-双-(三氟甲基)苯基]磷烷基-3,6-二甲氧基-苯基]-N1,N1,N3,N3-四甲基-苯-1,3-二胺（800 mg，1.06 mmol）的混合物抽真空并且用氩气回填。经由注射筒添加DCM（5 mL）并且将混合物在室温下搅拌2 h。将反应混合物用Et₂O（5 mL）稀释并且过滤。将滤液浓缩并且将戊烷（5 mL）添加到残余物中并且将混合物在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的标题化合物（1.08 g，90%）。¹H NMR (500 MHz, MeOD-d₄) δ 8.38 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.00(t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 7.62 (d, J = 11.4 Hz, 2H),7.59 – 7.55 (m, 1H), 7.51 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.42 (dd, J = 7.5, 1.4 Hz,1H), 7.34 – 7.28 (m, 3H), 7.25 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.1 Hz, 1H),7.16 – 7.13 (m, 1H), 7.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.84 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.33– 6.29 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.42 (s, 3H), 2.78 (s, 6H), 2.69 (s, 3H), 2.61– 2.54 (m, 1H), 2.15 (dd, J = 5.9, 2.9 Hz, 3H), 2.09 (s, 6H)。¹⁹F NMR (471 MHz,MeOD-d₄) δ –64.20, –64.42。³¹P NMR (203 MHz, MeOD-d₄) δ 33.80。

步骤2：N-[5-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-5-氮杂螺[3.5]壬-8-基]氨基甲酸叔丁酯的合成。将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（600mg，1.20 mmol）、N-(5-氮杂螺[3.5]壬-8-基)氨基甲酸叔丁酯（375 mg，1.56 mmol）、NaOtBu（288 mg，3.0 mmol）、2-[2-双-[3,5-双-(三氟甲基)苯基]磷烷基-3,6-二甲氧基-苯基]-N1,N1,N3,N3-四甲基-苯-1,3-二胺[2-[2-(甲基氨基)苯基]苯基]-甲基磺酰基氧基-钯（137 mg，0.12 mmol）在环戊基甲基醚（12 mL）中的混合物加热至85ºC持续4 h并且然后冷却至室温。将混合物通过硅藻土过滤并且用EtOAc（3 x 15 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-60% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（600 mg，76%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 660.2。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.50 – 7.43 (m, 3H), 7.42 – 7.32 (m, 5H),7.32 – 7.25 (m, 3H), 6.79 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.62(dd, J = 9.0, 1.8 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.42 (s,2H), 3.95 (s, 3H), 3.69 – 3.57 (m, 1H), 3.51 – 3.43 (m, 1H), 3.12 – 3.00 (m,1H), 2.17 – 2.04 (m, 4H), 1.98 – 1.89 (m, 1H), 1.80 – 1.68 (m, 2H), 1.59 –1.48 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.27 – 1.16 (m, 1H)。

步骤3：N-[5-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-5-氮杂螺[3.5]壬-8-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯的合成。向N-[5-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-5-氮杂螺[3.5]壬-8-基]氨基甲酸叔丁酯（1.05 g，1.59 mmol）和NaH（159mg，3.98 mmol，在矿物油中的60%分散体）在DMF（6 mL）中的冰冷溶液中添加碘甲烷（198 µL，3.18 mmol），并且将混合物在室温下搅拌2 h。使用相同程序制备另一批。添加水（50 mL）并且将合并的混合物用EtOAc（3 x 75 mL）萃取。将有机级分用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩。将残余物通过反相色谱法（C18）使用20%-100% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（700 mg，65%合并产率）。MS (ESI) [M+H]⁺674.4。

步骤4：N-[5-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-5-氮杂螺[3.5]壬-8-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯的合成。将N-[5-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-5-氮杂螺[3.5]壬-8-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯（700 mg，1.04 mmol）和珀尔曼催化剂（365 mg，0.26 mmol）在EtOH（15 mL）和THF（15 mL）中的混合物在氢气气氛（1atm）下在50ºC下搅拌2 h。将混合物通过硅藻土过滤，用MeOH（3 x 15 mL）洗涤并且将滤液浓缩，以得到呈固体的标题化合物（425 mg，83%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS(ESI) [M+H]⁺ 496.2。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.86 (s, 1H), 7.48 (d, J = 8.7Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.77 – 6.73 (m, 1H), 4.30 – 4.22 (m, 1H), 3.89 (s,3H), 3.62 – 3.53 (m, 1H), 3.16 – 3.05 (m, 1H), 2.70 – 2.57 (m, 5H), 2.38 –2.25 (m, 1H), 2.19 – 2.07 (m, 4H), 2.06 – 1.93 (m, 2H), 1.93 – 1.81 (m, 1H),1.78 – 1.67 (m, 1H), 1.62 – 1.31 (m, 4H), 1.41 (s, 9H)。

步骤5：3-[1-甲基-6-[8-(甲基氨基)-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基]吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成。向N-[5-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-5-氮杂螺[3.5]壬-8-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯（425 mg，0.86 mmol）在DCM（4 mL）中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的4N HCl（4 mL，16 mmol），并且将混合物在室温下搅拌4 h。通过过滤收集所得沉淀物，用Et₂O（2 x 5 mL）洗涤，并且在真空下干燥，以得到呈固体的标题化合物（340 mg，92%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺ 396.3。¹H NMR (500MHz, DMSO-d₆) δ 10.49 (s, 1H), 9.08 (br s, 2H), 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 1H),6.95 (s, 1H), 6.87 (dd, J = 8.8, 1.4 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 8.8, 5.2 Hz, 1H),3.92 (s, 3H), 3.60 (dt, J = 13.6, 3.2 Hz, 1H), 3.43 – 3.32 (m, 1H), 3.25 –3.16 (m, 1H), 2.68 – 2.63 (m, 2H), 2.56 (t, J = 5.3 Hz, 3H), 2.49 – 2.43 (m,1H), 2.39 – 2.29 (m, 1H), 2.27 – 2.20 (m, 2H), 2.20 – 2.13 (m, 2H), 2.13 –2.04 (m, 2H), 1.96 – 1.89 (m, 1H), 1.82 – 1.70 (m, 1H), 1.64 – 1.53 (m, 2H)。

步骤6：3-[6-[8-[[5-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-甲基-氨基]-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮的合成。在室温下向3-[1-甲基-6-[8-(甲基氨基)-5-氮杂螺[3.5]壬-5-基]吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐（46.5 mg，0.11 mmol）和DIPEA（110 µL，0.61 mmol）在DMSO（1 mL）中的混合物中添加5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（30 mg，0.10 mmol），并且将反应混合物加热至80ºC持续16 h。将粗反应混合物通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用48%-58% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（14.9 mg，22%）。LCMS：C₃₄H₃₆ClN₉O₃理论值为667.3，实测值为668.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ10.49 (br s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.54 – 7.49 (m,2H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.80 – 6.76 (m, 2H), 4.89 – 4.80 (m, 1H), 4.26(dd, J = 8.6, 5.2 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.57 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.54 (s,2H), 3.15 (s, 3H), 2.89 (s, 3H), 2.74 – 2.60 (m, 2H), 2.40 – 2.30 (m, 1H),2.27 – 2.16 (m, 2H), 2.13 – 2.05 (m, 2H), 2.01 – 1.88 (m, 3H), 1.69 – 1.55(m, 2H), 1.55 – 1.41 (m, 2H)。注释：一个CH被水信号遮蔽。

实施例S3. 3-(6-(((反式)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)环己基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (3) 的合成

与实施例S2类似使用反式-N-(4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。分离呈灰白色固体的标题化合物（36.7 mg，0.05 mmol，20.6%产率）。LCMS：C₃₃H₃₆ClN₉O₃理论值为641，实测值为642 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.83 (s,1H), 8.14 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.54 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.7Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H),4.30 (s, 1H), 4.22 (dd, J = 9.0, 5.1 Hz, 1H), 3.86(s,3H), 3.59 (s, 2H), 3.36(s, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.95 (s, 3H), 2.62 (s, 2H), 2.28 (s, 1H), 2.20 – 2.09(m, 3H), 1.76 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.25 (s, 2H)。

实施例S4. 3-(6-((2R,4R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (4) 的合成

步骤1：N-[(2R,4R)-1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-2-甲基-4-哌啶基]氨基甲酸酯的合成。根据通用程序2使用N-[(2R,4R)-2-甲基-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯作为反应物在甲苯中在110ºC下持续18 h来合成标题化合物。通过反相色谱法（C18）使用30%-100% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度分离出呈固体的标题化合物（700mg，86%）。LCMS：C₃₈H₄₃N₅O₄理论值为633.3，实测值为635.9 [M+H]⁺。

步骤2：N-[(2R,4R)-1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-2-甲基-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯的合成。向冷却至0ºC的N-[(2R,4R)-1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-2-甲基-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯（800 mg，1.26mmol）在DMF（13 mL）中的溶液中添加NaH（151 mg，3.8 mmol），并且将反应混合物在0ºC下搅拌15 min。添加碘甲烷（0.24 mL，3.79 mmol），将反应混合物温热至室温并且搅拌1 h。将反应通过逐滴添加水（5 mL）进行稀释。添加水（50 mL）和EtOAc（100 mL）并且分离各层。将有机层用水（5 x 20 mL）、盐水（50 mL）洗涤，干燥（MgSO₄），过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过反相色谱法（C18）使用30%-100% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（700 mg，86%）。LCMS：C₃₉H₄₅N₅O₄理论值为647.4，实测值为648.4 [M+H]⁺。

步骤3：3-(6-((2R,4R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。使用通用程序4、5和6用N-[(2R,4R)-1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-2-甲基-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯作为起始材料完成标题化合物的合成。将粗残余物通过反相色谱法（C18）使用10%-70% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（19 mg，25%）。LCMS C₃₃H₃₆ClN₉O₃理论值为641.3，实测值为642.3[M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.88 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.02 (s, 1H),7.70 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.98 –6.89 (m, 2H), 4.59 (br s, 1H), 4.33 (dd, J = 9.5, 4.9 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H),3.59 (s, 2H), 3.28 – 3.21 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.81 (br s,1H), 2.68 – 2.59 (m, 2H), 2.38 – 2.31 (m, 1H), 2.22 – 2.13 (m, 1H), 1.95 –1.86 (m, 1H), 1.76 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.70 – 1.58 (m, 2H), 0.93 (d, J =5.7 Hz, 3H)。

实施例S5. 3-(6-(4-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基-6-氧代哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (5) 的合成

步骤1：6-甲基哌嗪-2-酮的合成。在0ºC下在氮气下向6-甲基哌嗪-2-酮（1.0 g，8.76 mmol）和三乙胺（1.83 mL，13.14 mmol）在CH₂Cl₂（20 mL）中的搅拌溶液中添加Boc-酸酐（2.24 mL，9.64 mmol）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌3 h。将反应混合物用0.5N HCl（2.0 mL）、水（50 mL）处理并且用DCM（2 x 50 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈灰白色固体的标题化合物（1.81 g，8.43 mmol，96%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。

步骤2：4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3-甲基-5-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成。将6-甲基哌嗪-2-酮（750 mg，3.49 mmol）和3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（1.50 g，3.00 mmol）在DMF（10 mL）中的搅拌溶液用氮气脱气5 min。然后添加碘化铜(I)（571 mg，3.00 mmol）、K₂CO₃（621 mg，4.50 mmol）和N₁,N₂-二甲基乙烷-1,2-二胺（264 mg，3.00 mmol）并且脱气10 min。将反应混合物加热至100ºC并且搅拌16 h。将反应混合物冷却至室温并且用水（30 mL）处理并且用乙酸乙酯（2 x 50mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗化合物。将粗品通过二氧化硅上的快速柱色谱法用80%-100%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（650 mg，0.779 mmol，26%产率）。MS (ESI) m/z 634.8 [M+H]⁺。

步骤3：3-(6-(4-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基-6-氧代哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：使用通用程序4、5和6用4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3-甲基-5-氧代哌嗪-1-甲酸叔丁酯作为起始材料开始完成标题化合物的合成。LCMS C₃₁H₃₀ClN₉O₄理论值为627.2，实测值为628.2[M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.92 (s, 1H), 8.83 (s, 1H),8.10 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.55-7.53 (m, 2H), 7.01- 6.96 (m, 2H), 4.58 - 4.50 (m, 1H), 4.39 (dd, J = 5.1 Hz 和 10.2 Hz, 1H),4.24 - 4.16 (m, 2H), 4.25 - 4.07 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.90 - 3.83 (m, 1H),3.55 (s, 2H), 3.12 (s, 3H), 2.73 - 2.66 (m, 2H), 2.66 - 2.61 (m, 1H), 2.43 -2.36 (m, 1H), 1.07 (d, J = 6.3 Hz, 3H)。

下表2中的实施例是根据表中概述的通用程序用本文件中发现的它们各自的商业起始材料和中间体开始制备的。

实施例S52. 3-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (52) 的合成

步骤1：3-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。将3-[1-甲基-6-(4-哌啶基氨基)吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮（40.3 mg，0.120 mmol）、5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（28.8 mg，0.100 mmol）、N,N-二异丙基乙胺（0.03 mL，0.2000mmol）和DMSO（0.1969 mL）添加到配备有搅拌棒的1打兰小瓶中并且加热至80ºC过夜。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈灰白色固体的标题化合物（3.0 mg，0.0049 mmol，4.9%产率）。LCMS C₃₁H₃₂ClN₉O₃理论值为613.2，实测值为614.2[M+H]⁺；¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10.7-10.8 (m, 1H), 8.5-8.6 (m, 1H), 7.95(s, 1H), 7.45 (s, 2H), 7.2-7.3 (m, 1H), 6.8-6.9 (m, 1H), 6.4-6.5 (m, 3H),5.7-5.7 (m, 1H), 4.2-4.4 (m, 2H), 4.0-4.1 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.5-3.6 (m,1H), 3.4-3.5 (m, 2H), 3.03 (s, 5H), 2.5-2.6 (m, 1H), 2.0-2.2 (m, 3H), 1.9-2.0(m, 2H), 1.2-1.3 (m, 2H)。

实施例S53. 相对-(R)-3-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮（单个异构体，未确定立体化学）(53) 的合成

步骤1：相对-(R)-3-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S52的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt= 11.0 min。LCMS C₃₁H₃₂ClN₉O₃理论值为614.2，实测值为614.2 [M+H]⁺；¹H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10.7-10.8 (m, 1H), 8.5-8.6 (m, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.45 (s, 2H),7.2-7.3 (m, 1H), 6.8-6.9 (m, 1H), 6.4-6.5 (m, 3H), 5.7-5.7 (m, 1H), 4.2-4.4(m, 2H), 4.0-4.1 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.5-3.6 (m, 1H), 3.4-3.5 (m, 2H),3.03 (s, 5H), 2.5-2.6 (m, 1H), 2.0-2.2 (m, 3H), 1.9-2.0 (m, 2H), 1.2-1.3 (m,2H)。

实施例S54. 相对-(S)-3-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮（单个异构体，未确定立体化学）(54) 的合成

步骤1：相对-(S)-3-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 μ柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S52的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt= 18.9 min。LCMS C₃₁H₃₂ClN₉O₃理论值为614.2，实测值为614.2 [M+H]⁺；¹H NMR (DMSO-d6,400 MHz) δ 10.7-10.8 (m, 1H), 8.5-8.6 (m, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.45 (s, 2H),7.2-7.3 (m, 1H), 6.8-6.9 (m, 1H), 6.4-6.5 (m, 3H), 5.7-5.7 (m, 1H), 4.2-4.4(m, 2H), 4.0-4.1 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.5-3.6 (m, 1H), 3.4-3.5 (m, 2H),3.03 (s, 5H), 2.5-2.6 (m, 1H), 2.0-2.2 (m, 3H), 1.9-2.0 (m, 2H), 1.2-1.3 (m,2H)。

实施例S55. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮 (55) 的合成

步骤1：6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶的合成。向6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶（1 g，3.58 mmol）在DMF（20 mL）中的0ºC溶液中添加氢化钠（0.150 g，3.76mmol），将反应混合物搅拌30 min。然后逐滴添加氢化钠（0.150 g，3.76 mmol）。允许将反应混合物温热至室温并且再搅拌一小时。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，经硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈白色固体的标题化合物（0.75 g，2.56 mmol，71%产率）；MS (ESI) m/z 293.8 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ ppm 8.59 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 4.06 (d, J=0.98 Hz, 3 H)。

步骤2：3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-氯-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶的合成。在100ºC下将6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶（500 mg，1.704 mmol）、(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)硼酸（628 mg，1.874 mmol）和碳酸钠（379 mg，3.58 mmol）在1,4-二噁烷（6 mL）和水（2 mL）中的溶液与四(三苯基膦)钯(0)（197 mg，0.170 mmol）一起搅拌15 h。在此时间之后，将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，经硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-50%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈白色固体的标题化合物（520 mg，1.14mmol，67%产率）；MS (ESI) m/z 456.8 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 8.25(d, J=8.44 Hz, 1 H), 8.02 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.45 - 7.51 (m, 2 H), 7.28 -7.44 (m, 8 H), 7.11 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 6.62 (d, J=8.19 Hz, 1 H), 5.49 (s, 2H), 5.44 (s, 2 H), 4.04 (s, 3 H)。

步骤3：(3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)氨基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-氯-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶（500 mg，1.094 mmol）、RuPhos Pd G3（92 mg，0.109mmol）和(3R,4R)-4-氨基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯（237 mg，1.094 mmol）在1,4-二噁烷（5 mL）中的溶液中添加碳酸铯（713 mg，2.189 mmol）。将反应混合物用氩气脱气1 min并且然后在100ºC下搅拌15 h。LCMS指示反应完成。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，经硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到粗品。将粗品通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1% TFA（0.1% TFA），经30 min）进一步纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（120 mg，0.188 mmol，17%产率）；MS (ESI) m/z 636.8 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm7.95 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.65 (d, J=8.93 Hz, 1 H), 7.43 - 7.50 (m, 2 H),7.28 - 7.43 (m, 8 H), 6.97 (d, J=7.09 Hz, 1 H), 6.56 (d, J=8.07 Hz, 1 H),6.24 (d, J=8.93 Hz, 1 H), 5.46 (s, 2 H), 5.39 - 5.44 (m, 2 H), 5.18 (d, J=4.65 Hz, 1 H), 3.71 - 3.98 (m, 6 H), 3.40 (tt, J=9.00, 4.63 Hz, 1 H), 2.94(br d, J=1.47 Hz, 1 H), 2.69 - 2.85 (m, 1 H), 1.99 - 2.15 (m, 1 H), 1.41 (s,9 H), 1.24 - 1.34 (m, 1 H)。

步骤4：3-(6-(((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。在50ºC下在氢气（1 atm）下将(3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)氨基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯（0.120 g，0.188 mmol）在乙醇（10 mL）中的溶液与钯碳10% w/w（0.020 g，0.019 mmol）一起搅拌15 h。将反应混合物通过硅藻土过滤，将滤液浓缩并且然后在室温下将残余物与在DCM（1 mL）中的1 mL TFA一起搅拌30 min。在减压下去除挥发物，以得到呈TFA盐的所希望的产物（67 mg，0.187 mmol，99%产率），将其不经进一步纯化使用。

步骤5：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-羟基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。向3-(6-(((3R,4R)-3-羟基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮（68 mg，0.190 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（55.5 mg，0.190 mmol）在DMSO（3 mL）中的溶液中添加DIPEA（0.10 mL，0.57 mmol）。将反应混合物在80ºC下搅拌16小时。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（3.7 mg，5.86 µmol，3.09%产率）；MS (ESI) m/z630.8 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 10.83 (s, 1 H), 8.68 (s, 1 H),8.02 (s, 1 H), 7.65 (d, J=8.68 Hz, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.50 (dd, J=8.44,2.20 Hz, 1 H), 6.99 (br d, J=7.21 Hz, 1 H), 6.94 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 6.37(d, J=8.80 Hz, 1 H), 5.16 (dd, J=5.07, 1.77 Hz, 1 H), 4.39 - 4.53 (m, 1 H),4.24 - 4.38 (m, 1 H), 4.14 (dd, J=9.35, 5.07 Hz, 1 H), 3.89 - 4.02 (m, 1 H),3.77 (s, 3 H), 3.54 (s, 2 H), 3.44 (tt, J=9.25, 4.88 Hz, 1 H), 3.29 (s, 1 H),3.11 (s, 3 H), 3.05 (br t, J=11.19 Hz, 1 H), 2.88 (dd, J=12.78, 9.60 Hz, 1H), 2.55 - 2.64 (m, 2 H), 2.21 - 2.31 (m, 1 H), 2.06 - 2.20 (m, 2 H), 1.26 -1.42 (m, 1 H)。

实施例S56. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((3,3-二氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(56) 的合成

步骤1：3,3-二氟-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成。向5-硝基吲哚啉-2,3-二酮（2.2 g，11.5 mmol）在二氯甲烷（50 mL）中的-78ºC悬浮液中逐滴添加二乙基氨基三氟化硫（4.06g，25.2 mmol）。允许将反应混合物温热至室温并且搅拌2天。LCMS指示反应完成。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层干燥（无水硫酸镁），经硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-75%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈黄色固体的标题化合物3,3-二氟-5-硝基吲哚啉-2-酮（1.52 g，7.10mmol，62.0%产率）；MS (ESI) m/z 215.2 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm11.89 (br s, 1 H), 8.56 - 8.60 (m, 1 H), 8.43 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 7.20 (d, J=8.68 Hz, 1 H)。

步骤2：3,3-二氟-1-甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮的合成。向3,3-二氟-5-硝基吲哚啉-2-酮（0.53 g，2.475 mmol）在DMF（1 mL）中的溶液中添加DBU（0.485 mL，3.22 mmol），随后添加碘甲烷（0.185 mL，2.97 mmol）。将反应混合物在室温下搅拌15小时。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 50 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层干燥（无水硫酸镁），经硅藻土过滤并且浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-80%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈黄色固体的标题化合物（0.339 g，1.485 mmol，60%产率）；MS (ESI) m/z229.2 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.61 (d, J=1.96 Hz, 1 H), 8.54(d, J=8.91 Hz, 1 H), 7.46 (d, J=8.80 Hz, 1 H), 3.25 (s, 3 H)。

步骤3：5-氨基-3,3-二氟-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。在室温下在氢（45 psi）下将3,3-二氟-1-甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮（360 mg，1.578 mmol）在乙醇（15 mL）中的悬浮液搅拌15 h。将反应混合物经硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩得到呈黄色固体的标题化合物（300 mg，1.514 mmol，96%产率）；MS (ESI) m/z 199.2 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ ppm 6.90 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 6.87 (d, J=1.96 Hz, 1 H), 6.75 (d, J=7.91 Hz, 1 H), 5.22 (s, 2 H), 3.09 (s, 3 H)。

步骤4：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((3,3-二氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。使用通用程序1和6使用5-氨基-3,3-二氟-1-甲基吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐作为起始材料完成标题化合物的合成。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈黄色固体的标题化合物（8 mg，0.012 mmol，23.46%产率）；MS (ESI) m/z 664.2 [M+H]⁺; ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.81 (s, 1 H), 8.94 (s, 1 H), 8.03 - 8.14 (m, 2H), 7.77 (br d, J=8.56 Hz, 1 H), 7.31 (d, J=8.80 Hz, 1 H), 7.21 (d, J=8.44Hz, 1 H), 6.51 (br d, J=8.80 Hz, 1 H), 6.44 (s, 1 H), 5.70 (br d, J=8.80 Hz,1 H), 4.47 (br s, 2 H), 4.17 (dd, J=8.62, 5.07 Hz, 1 H), 3.81 (s, 3 H), 3.17(s, 3 H), 3.04 (br t, J=12.10 Hz, 1 H), 2.65 - 2.76 (m, 1 H), 2.56 - 2.63 (m,2 H), 2.19 - 2.31 (m, 1 H), 2.11 - 2.19 (m, 1 H), 2.06 (br d, J=10.64 Hz, 1H), 1.46 - 1.66 (m, 1 H), 1.07 - 1.28 (m, 2 H), 0.96 (d, J=6.36 Hz, 3 H)。

实施例S57. 3-[6-[[(3S,4R)-1-[5-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-3-(羟甲基)-4-哌啶基]氨基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮 (57) 的合成

步骤1：O5-乙基4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1,5-二甲酸叔丁酯的合成。向O1-叔丁基O3-乙基4-氧代哌啶-1,3-二甲酸酯（22 g，81 mmol）和(1R)-1-苯基乙胺（12.5 mL，97.2 mmol）在甲苯（400 mL）中的溶液中添加PTSA（1.39 g，8.1 mmol）并且将混合物用迪安-斯塔克分水器（Dean-Stark trap）加热至回流持续18 h。将混合物冷却至室温，用NaHCO₃的饱和水溶液（2 x 200 mL）和盐水（2 x 200 mL）洗涤。将合并的有机级分经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩。将残余物在二氧化硅垫上过滤，用DCM（2 x 100 mL）冲洗并且浓缩，以得到呈油状物的标题化合物（30.2 g，99%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺ 375.2。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.25 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.36– 7.28 (m, 2H), 7.26 – 7.18 (m, 3H), 4.66 – 4.54 (m, 1H), 4.24 – 4.14 (m,2H), 4.07 (br s, 2H), 3.48 – 3.35 (m, 1H), 3.35 – 3.24 (m, 1H), 2.39 (dd, J =13.0, 6.2 Hz, 1H), 2.09 – 2.00 (m, 1H), 1.50 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.43 (s,9H), 1.29 (t, J = 7.0 Hz, 3H)。

步骤2：叔丁基O3-乙基(3S,4R)-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1,3-二甲酸酯和叔丁基O3-乙基(3R,4S)-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1,3-二甲酸酯的合成：向冷却至0ºC的叔丁基O5-乙基4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1,5-二甲酸酯（15 g，40.1 mmol）在MeCN（200 mL）和AcOH（100 mL）中的溶液中经2 h逐份添加三乙酰氧基硼氢化钠（34 g，160 mmol），并且将反应混合物在0ºC下搅拌2 h。然后将混合物冷却至-10ºC并且用NaOH的1 M水溶液（100 mL）、NaOH的4 M水溶液（100 mL）、NaOH的6 M水溶液（100mL）缓慢处理，随后用NaOH的50%水溶液（50 mL）缓慢处理。将混合物温热至室温并且分离各层。将水层用DCM（3 x 80 mL）萃取。将合并的有机层用MgSO₄干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-50% EtOAc梯度纯化，以得到呈油状物的标题化合物（14.8 g，98%）的4 : 1混合物。将标题化合物的4 : 1混合物的一部分（7 g）通过SFC分离，以得到呈油状物的叔丁基O3-乙基(3S,4R)-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1,3-二甲酸酯（3.7 g）和呈油状物的标题化合物叔丁基O3-乙基(3R,4S)-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1,3-二甲酸酯（1.1 g）。

步骤3：(3S,4R)-3-(羟甲基)-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向叔丁基O3-乙基(3S,4R)-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1,3-二甲酸酯（500mg，1.33 mmol）在THF（3 mL）中的溶液中添加LiBH₄（1.33 mL，2.66 mmol），并且将混合物加热至回流持续2 h，然后冷却至室温。添加冰-水（10 mL）并且将混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOAc（3 x 30 mL）萃取。将合并的有机级分经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩，以得到呈油状物的标题化合物（404 mg，91%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺335.3。

步骤4：(3S,4R)-3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向(3S,4R)-3-(羟甲基)-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（404 mg，1.21 mmol）在DCM（5 mL）中的溶液中依序添加叔丁基氯二甲基硅烷（218 mg，1.45 mmol）和咪唑（123 mg，1.81 mmol），并且将反应混合物在室温下搅拌3 h。添加水（15 mL）和Et₂O（20 mL）并且分离各层。将水层用Et₂O（3 x 10 mL）洗涤并且将合并的有机级分经Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩，以得到呈油状物的标题化合物（540 mg，99%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。注释：SFC分析确认存在仅一种非对映异构体。MS(ESI) [M+H]⁺ 449.4。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.35 – 7.26 (m, 4H), 7.23 –7.16 (m, 1H), 3.86 – 3.68 (m, 3H), 3.68 – 3.54 (m, 1H), 3.48 (t, J = 9.6 Hz,1H), 2.89 – 2.68 (m, 1H), 2.81 (dd, J = 13.1, 3.2 Hz, 1H), 2.59 – 2.52 (m,1H), 1.82 – 1.72 (m, 1H), 1.36 (s, 9H), 1.34 – 1.27 (m, 1H), 1.26 – 1.18 (m,1H), 1.22 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.90 (s, 9H), 0.07 (d, J = 3.1 Hz, 6H)。

步骤5：(3S,4R)-4-氨基-3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将(3S,4R)-3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（530 mg，1.18 mmol）、甲酸铵（596 mg，9.45 mmol）和Pd/C（126 mg，0.12 mmol）在EtOH（15 mL）中的混合物加热至65ºC持续2 h。将混合物通过硅藻土过滤并且用MeOH（3 x 15 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈固体的标题化合物（320mg，79%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺ 345.3。¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ 3.61 (dd, J = 10.2, 4.9 Hz, 1H), 3.49 – 3.41 (m, 2H), 3.39 – 3.24(m, 3H), 3.23 – 3.08 (m, 1H), 3.06 – 2.98 (m, 1H), 1.71 – 1.55 (m, 2H), 1.55– 1.44 (m, 1H), 1.40 – 1.33 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 0.89 – 0.84 (m, 9H), 0.06– 0.01 (m, 6H)。

步骤6：(3S, 4R)-3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[[3-(2, 6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（471 mg，0.94 mmol）、(3S,4R)-4-氨基-3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（270 mg，0.78 mmol）、Cs₂CO₃（638 mg，1.96mmol）和RuPhos Pd G3（98.3 mg，0.12 mmol）在1,4-二噁烷（7 mL）中的混合物加热至90ºC持续16 h并且然后冷却至室温。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-50%EtOAC梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（458 mg，67%）。注释：重复反应并且在纯化前将粗残余物合并。MS (ESI) [M+H]⁺ 764.4。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.87 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.50 – 7.44 (m, 2H), 7.42 – 7.26 (m, 9H), 6.55 (d, J = 7.9Hz, 1H), 6.52 (dd, J = 9.0, 1.9 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 5.78 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.41 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.85 – 3.77 (m, 1H),3.67 – 3.61 (m, 1H), 3.60 – 3.41 (m, 4H), 3.39 – 3.32 (m, 1H), 2.10 – 2.00(m, 1H), 1.67 – 1.53 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.82 (s, 9H), –0.05 (d, J = 15.0Hz, 6H)。

步骤7：(3S,4R)-3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将(3S,4R)-3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（458 mg，0.60 mmol）和珀尔曼催化剂（210 mg，0.15 mmol）在EtOH（10 mL）和THF（10 mL）中的混合物在50ºC下经受氢化（1 atm）2 h。将混合物通过硅藻土过滤并且用MeOH（3 x 15 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈固体的标题化合物（350mg，定量），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺ 586.4。

步骤8：3-[6-[[(3S,4R)-3-(羟甲基)-4-哌啶基]氨基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐的合成。向(3S,4R)-3-[[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基甲基]-4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（350 mg，0.60mmol）在DCM（2.5 mL）中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的4N HCl（1.5 mL，6.0 mmol）并且将混合物在室温下搅拌2 h。通过过滤收集所得沉淀物，用Et₂O（3 x 5 mL）洗涤并且在真空下干燥，以得到呈固体的标题化合物（250 mg，77%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS(ESI) [M+H]⁺ 372.2。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.82 (s, 1H), 8.89 – 8.68 (m,2H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.66 (dd, J = 8.8, 1.7 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H),4.18 (dd, J = 9.0, 5.1 Hz, 1H), 3.99 – 3.92 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.51 –3.41 (m, 2H), 3.27 – 3.15 (m, 2H), 3.15 – 3.04 (m, 2H), 2.67 – 2.54 (m, 2H),2.32 – 2.21 (m, 2H), 2.18 – 2.10 (m, 1H), 1.98 – 1.89 (m, 1H), 1.87 – 1.78(m, 1H)。

步骤9：3-[6-[[(3S,4R)-1-[5-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-3-(羟甲基)-4-哌啶基]氨基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮的合成。在室温下向5-[(5-氯-2-氟-嘧啶-4-基)氨基]-1-甲基-吲哚啉-2-酮（35 mg，0.12 mmol）和DIPEA（0.10 mL，0.60 mmol）在DMF（2 mL）中的混合物中添加3-[6-[[(3S,4R)-3-(羟甲基)-4-哌啶基]氨基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮二盐酸盐（77.8 mg，0.14 mmol），并且将反应混合物加热至80ºC持续2 h。在减压下去除挥发物并且将残余物通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用31%-41% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（22.1 mg，28%）。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₄理论值为643.2，实测值为644.4 [M+H]⁺；¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.81 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.75 – 7.57(m, 1H), 7.52 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.4Hz, 1H), 6.65 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.85 (d, J = 8.5 Hz, 1H),4.46 (s, 1H), 4.18 (dd, J = 8.4, 5.1 Hz, 1H), 3.96 – 3.85 (m, 2H), 3.81 (s,3H), 3.80 – 3.75 (m, 1H), 3.75 – 3.63 (m, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.51 – 3.46 (m,1H), 3.09 (s, 3H), 2.66 – 2.55 (m, 2H), 2.31 – 2.21 (m, 1H), 2.20 – 2.11 (m,1H), 2.11 – 2.02 (m, 1H), 1.79 – 1.69 (m, 1H), 1.67 – 1.56 (m, 1H)。

实施例S58. 3-(6-(((3R,4S)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-(羟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (58)的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4S)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-(羟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。与实施例S57类似用从实施例S57步骤2分离的其他非对映异构体开始合成标题化合物。将粗反应混合物通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用44%-54% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（5.5 mg，14%）。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₄理论值为643.2，实测值为644.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.61 (s, 1H), 8.00 (s, 1H),7.66 (br s, 1H), 7.53 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.90 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 8.8, 1.7 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 5.85 (d, J =8.5 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 8.8, 5.1 Hz, 1H), 3.92 – 3.84 (m, 2H), 3.81 (s,3H), 3.80 – 3.74 (m, 1H), 3.52 (s, 2H), 3.51 – 3.46 (m, 2H), 3.39 – 3.29 (m,2H), 3.09 (s, 3H), 2.63 – 2.57 (m, 2H), 2.30 – 2.19 (m, 1H), 2.19 – 2.11 (m,1H), 2.11 – 2.01 (m, 1H), 1.78 – 1.69 (m, 1H), 1.67 – 1.52 (m, 1H)。

实施例S59. 3-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮 (59)的合成

步骤1：6-溴-3-碘-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成。向6-溴-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶（3.75 g，18.9 mmol）在MeCN（90 mL）中的溶液中添加NIS（5.11 g，22.7 mmol）。将反应混合物加热至85ºC持续18 h并且然后冷却至室温。在减压下蒸发挥发物并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-15% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（6.05 g，98%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 324.0。

步骤2：6-溴-3-碘-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成。与通用程序3类似使用6-溴-3-碘-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶作为起始材料合成标题化合物。

步骤3：6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶的合成。将6-溴-3-碘-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶（900 mg，2.66 mmol）、(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)硼酸（5.36 g，7.99 mmol，由Celgene提供的中间体）、Pd(PPh₃)₂Cl₂（374 mg，0.53 mmol）和Na₂CO₃（2.66 mL，5.33 mmol）在1,4-二噁烷（18 mL）中的2 M水溶液的混合物加热至80ºC持续16 h并且然后冷却至室温。在减压下蒸发挥发物并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-20% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（835 mg，62%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 502.2。

步骤4：N-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯的合成。根据通用程序2使用6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶和N-甲基-N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯作为起始材料在甲苯中合成标题化合物。

步骤5：3-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。使用通用程序4、5和6使用N-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-b]吡啶-6-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯作为起始材料完成标题化合物的合成。将粗反应混合物通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用44%-54% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（5.4 mg，12%）。LCMS C₃₁H₃₃ClN₁₀O₃理论值为628.2，实测值为629.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.89 – 10.82 (m, 1H), 8.59 (s,1H), 8.41 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.57 (d, J = 7.9Hz, 1H), 7.37 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.28 (dd, J =9.8, 5.2 Hz, 1H), 3.97 – 3.91 (m, 5H), 3.55 (s, 2H), 3.28 (s, 2H), 3.08 (s,3H), 2.92 (s, 3H), 2.87 – 2.72 (m, 2H), 2.72 – 2.64 (m, 1H), 2.62 – 2.55 (m,1H), 2.22 – 2.10 (m, 1H), 1.97 – 1.84 (m, 2H), 1.76 – 1.66 (m, 2H)。

实施例S60. 3-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮 (60)的合成

步骤1：6-溴-3-碘-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶：向6-溴-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶（3.5g，17.7 mmol）在MeCN（177 mL）中的溶液中添加NIS（7.95 g，35.4 mmol）。将反应混合物加热至85ºC持续18 h并且然后冷却至室温。添加水（50 mL）并且通过过滤收集所得沉淀物，用水（50 mL）、DCM（50 mL）洗涤，并且在真空下干燥，以得到呈固体的标题化合物（6.21 g，定量）。MS (ESI) [M+H]⁺ 325.8。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.44 (s, 1H), 7.57 (s,1H)。

步骤2：6-溴-3-碘-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶。在0ºC下向6-溴-3-碘-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶（100 mg，0.31 mmol）在DMF（2 mL）中的混合物中添加NaH（在矿物油中的60%分散体，31 mg，0.77 mmol），并且将反应混合物在0ºC下搅拌15 min。添加碘甲烷（50 µL，0.77mmol）在DMF（1 mL）中的溶液并且将反应温热至室温并且搅拌2 h。添加水（20 mL）和DCM（20mL），并且分离各层。将水层用DCM（2 x 20 mL）萃取。将合并的有机级分用盐水（40 mL）洗涤，经MgSO₄干燥，过滤，在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的10%-35% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（46 mg，44%）。¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 8.58 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 4.05 (s,3H)。

步骤3：6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶。将6-溴-3-碘-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶（100 mg，0.30 mmol）、(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)硼酸（595 mg，0.89 mmol）、Pd(PPh₃)₂Cl₂（41.5 mg，60 µmol）和Na₂CO₃（300 µL，0.59 mmol）在1,4-二噁烷（1.5 mL）中的2 M水溶液的混合物加热至80ºC持续16 h并且然后冷却至室温。添加水（40 mL）和EtOAc（40 mL）并且分离各层。将水层用EtOAc（2 x 20 mL）萃取。将合并的有机级分用盐水（40 mL）洗涤，干燥（MgSO₄）、过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-15% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（99.0mg，67%）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.87 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.09 – 7.96 (m,2H), 7.49 – 7.44 (m, 2H), 7.43 – 7.39 (m, 2H), 7.38 – 7.33 (m, 3H), 7.33 –7.24 (m, 3H), 6.63 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.52 (s, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.06 (s,3H)。

步骤4：N-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯。将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶（1.44 g，2.87 mmol）、N-甲基-N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯（677 mg，3.16mmol）、RuPhos-Pd-G3（480 mg，0.57 mmol）和NaOtBu（552 mg，5.74 mmol）在1,4-二噁烷（58mL）中的混合物加热至90ºC持续16 h并且然后冷却至室温。在减压下蒸发挥发物并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-40% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（1.08 g，59%）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.71 (d, J = 1.0 Hz, 1H),7.97 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.51 – 7.43 (m, 2H), 7.43 – 7.33 (m, 5H), 7.33 –7.23 (m, 3H), 6.72 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.51 (s,2H), 5.40 (s, 2H), 4.47 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.82 (t, J = 12.5Hz, 2H), 2.72 – 2.66 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 1.80 – 1.52 (m, 4H), 1.40 (s,9H)。

步骤5：N-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯。使N-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯（1.59 g，1.88 mmol）和Pd(OH)₂/C（200 mg，0.38 mmol）在THF（12.5 mL）和EtOH（12.5 mL）中的混合物在室温下经受氢化（1atm）2 h。将混合物通过硅藻土过滤并且用DMF（60 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（927 mg，定量）。MS (ESI) [M+H]⁺ 457.4。

步骤6：3-[1-甲基-6-[4-(甲基氨基)-1-哌啶基]吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐。向N-[1-[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-基]-4-哌啶基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯（927 mg，2.03 mmol）在DCM（40.6 mL）中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的4 N HCl（5.08 mL，20.3 mmol），并且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应用Et₂O（20 mL）稀释，过滤并且用Et₂O（2 x 10 mL）冲洗，以得到呈固体的标题化合物（688 mg，86%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺ 357.3。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.99 (s, 1H), 9.06 (s, 2H), 8.91 (s, 1H), 7.17 (s, 1H),4.51 (dd, J = 10.9, 4.9 Hz, 1H), 4.33 (d, J = 13.3 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H),3.36 – 3.17 (m, 1H), 3.07 (t, J = 12.6 Hz, 2H), 2.77 – 2.60 (m, 2H), 2.56 (t,J = 5.4 Hz, 3H), 2.48 – 2.38 (m, 1H), 2.25 – 2.15 (m, 1H), 2.14 (d, J = 13.4Hz, 2H), 1.75 – 1.57 (m, 2H)。

步骤7：3-[6-[4-[[5-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-甲基-氨基]-1-哌啶基]-1-甲基-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基]哌啶-2,6-二酮：向3-[1-甲基-6-[4-(甲基氨基)-1-哌啶基]吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐（50 mg，0.13mmol）在DMSO（1.6 mL）中的溶液中依序添加5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（34 mg，0.12 mmol）和DIPEA（0.2 mL，1.16 mmol）。将反应混合物加热至100ºC持续18 h并且然后冷却至室温。将粗反应混合物通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用44%-54%MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（18.6 mg，25%）。LCMS C₃₁H₃₃ClN₁₀O₃理论值为628.2，实测值为629.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.90 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.11 – 7.84 (m, 1H), 7.64(s, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H),4.53 (d, J = 12.9 Hz, 2H), 4.35 – 4.25 (m, 1H), 3.98 – 3.82 (m, 3H), 3.54 (s,1H), 3.30 – 3.26 (m, 3H), 3.09 (s, 2H), 2.91 –2.73 (m, 4H), 2.73 – 2.54 (m,3H), 2.41 – 2.29 (m, 1H), 2.23 – 2.13 (m, 1H), 1.82 – 1.59 (m, 4H)。

实施例S61. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (61) 的合成

步骤1：1-甲基-6-硝基吲哚啉-2,3-二酮的合成。在氮气下在0ºC下向6-硝基吲哚啉-2,3-二酮（1.0 g，5.20 mmol）在DMF（20 mL）中的搅拌溶液中添加氢化钠（0.312 g，7.81mmol）并且搅拌10 min。将碘甲烷（0.651 mL，10.41 mmol）添加到反应混合物中并且缓慢温热至25ºC。将反应混合物搅拌1 h，用饱和NH₄Cl溶液（100 mL）处理并且用乙酸乙酯（3 x100 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到标题化合物，将其通过硅胶上的快速柱色谱法用40%-50%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（320 mg，1.531 mmol，29%产率）。

步骤2：1-甲基-6-硝基吲哚啉-2-酮的合成。在25ºC下向1-甲基-6-硝基吲哚啉-2,3-二酮（200 mg，0.957 mmol）在正丁醇（5.0 mL）中的搅拌溶液中添加水合肼（144 mg，2.87mmol）。将反应加热至80ºC并且搅拌4 h。然后将反应混合物冷却至25ºC并且添加三乙胺（0.533 mL，3.83 mmol）并且在80ºC下搅拌14 h。将反应混合物冷却至室温并且在减压下浓缩，以获得粗化合物，将其通过硅胶上的快速柱色谱法用35%-45%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（40 mg，0.171 mmol，18%产率）。LCMS实测值为193.2 [M+H]⁺，Rt 1.686 min

步骤3：6-氨基-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。在25ºC下在氮气下向1-甲基-6-硝基吲哚啉-2-酮（40 mg，0.171 mmol）在乙醇（2.5 mL）和THF（2.5 mL）中的搅拌溶液中添加10%Pd/C（20 mg）。将反应混合物在氢气气氛下搅拌6 h。将反应混合物通过硅藻土过滤并且将硅藻土垫用乙醇（2 x 20 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以获得标题化合物（35 mg，粗品），将其不经进一步纯化用于下一步骤。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃): δ 6.86 (d, J = 8.4Hz, 1H), 6.20-6.18 (m, 2H), 5.11 (brs, 2H), 3.32 (s, 2H), 3.02 (s, 3H)。

步骤4：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。使用通用程序1和6使用6-氨基-1-甲基吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料完成标题化合物的合成。将粗材料通过制备型HPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（18 mg，0.028 mmol，17%产率）。LCMSC₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ10.84 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.32 (d, J = 8.80Hz, 1H), 7.26 (d, J = 9.20 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 6.52 (dd, J =8.80, 1.60 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.79 (brs, 1H), 4.55-4.47 (m, 2H), 4.19-4.16 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.12-3.06 (m, 4H), 2.75-2.70 (m, 1H), 2.66-2.58(m, 3H), 2.28-2.19 (m, 1H), 2.16-2.08 (m, 2H), 1.62-1.53 (m, 1H), 1.25-1.18(m, 1H), 0.97 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。

实施例S62. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮 (62) 的合成

步骤1. 6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶：向6-氯-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶（2 g，7.16 mmol）在DMF（20 mL）中的0ºC溶液中添加氢化钠（0.301 g，7.51mmol），将反应混合物搅拌30 min并且然后逐滴添加氢化钠（0.301 g，7.51 mmol）。允许将反应混合物温热至室温并且搅拌1 h。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）处理并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤并且在减压下浓缩。将粗材料通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈白色固体的标题化合物6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶（1.7 g，5.79 mmol，81%产率）；MS(ESI) m/z 293.8 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 7.99 (d, J=8.31 Hz, 1H), 7.32 (d, J=8.31 Hz, 1 H), 4.03 (s, 3 H)。

步骤2. (3R,4R)-4-((3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯：向6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶（500 mg，1.704 mmol）和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺（0.607 mL，3.41 mmol）在DMSO（1 mL）中的溶液中添加(3R,4R)-4-氨基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（365 mg，1.704 mmol）。将反应混合物在120ºC下搅拌48 h。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（250 mg，0.530 mmol，31.1%产率）。MS (ESI) m/z 472.2 [M+H]⁺; ¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 7.33 (dd, J=8.68, 1.71 Hz, 1 H), 7.18 (br d, J=7.83Hz, 1 H), 6.33 - 6.46 (m, 1 H), 3.86 - 4.05 (m, 2 H), 3.81 (d, J=1.83 Hz, 4H), 2.79 - 2.99 (m, 1 H), 2.56 - 2.64 (m, 1 H), 1.98 (br d, J=12.35 Hz, 1 H),1.47 - 1.63 (m, 1 H), 1.41 (d, J=1.71 Hz, 9 H), 1.17 - 1.32 (m, 1 H), 0.88(br d, J=4.89 Hz, 3 H)。

步骤3. (3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯。在80ºC下将(3R,4R)-4-((3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（250 mg，0.530 mmol）、2,6-双(苄氧基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶（243 mg，0.583mmol）和碳酸氢钠（98 mg，1.167 mmol）在1,4-二噁烷（10 mL）和水（2 mL）的混合溶剂中的溶液与四(三苯基膦)钯(0)（61.3 mg，0.053 mmol）一起搅拌15 h。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤并且在减压下浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到粗产物，将其通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）进一步纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（110 mg，0.173 mmol，32.7%产率）。MS (ESI) m/z 372.0 [M+H]⁺; ¹HNMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 7.94 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.64 (d, J=8.80 Hz, 1H), 7.43 - 7.51 (m, 2 H), 7.36 - 7.42 (m, 4 H), 7.26 - 7.36 (m, 4 H), 6.92(d, J=8.19 Hz, 1 H), 6.55 (d, J=8.19 Hz, 1 H), 6.19 (d, J=8.93 Hz, 1 H), 5.46(s, 2 H), 5.41 (s, 2 H), 3.86 - 3.99 (m, 2 H), 3.81 - 3.85 (m, 3 H), 3.69 -3.81 (m, 1 H), 2.75 - 3.07 (m, 1 H), 1.91 - 2.07 (m, 1 H), 1.45 - 1.64 (m, 1H), 1.41 (s, 9 H), 1.24 - 1.32 (m, 2 H), 0.88 (d, J=6.60 Hz, 3 H)。

步骤4. 3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮。在50ºC下在氢气（1 atm）下将(3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（0.105 g，0.165 mmol）在乙醇（10 mL）中的溶液与钯碳10% w/w（0.018 g，0.017 mmol）一起搅拌15 h。将反应混合物经硅藻土过滤，将滤液浓缩并且然后在室温下将残余物与在DCM（1 mL）中的1 mL TFA一起搅拌30 min。在减压下去除TFA和溶剂，以得到呈TFA盐的所希望的产物3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮（60 mg，0.168 mmol，定量产率），将其不经进一步纯化使用。

步骤5. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮：使用通用程序6使用3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐（40 mg，0.102 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（29.8 mg，0.102 mmol）完成标题化合物的合成。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（13 mg，0.02mmol，19.4%）。MS (ESI) m/z 628.8 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 10.83(s, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 8.02 (s, 1 H), 7.63 (d, J=8.80 Hz, 1 H), 7.57 (s, 1H), 7.52 (dd, J=8.44, 2.08 Hz, 1 H), 6.87 - 6.98 (m, 2 H), 6.31 (d, J=8.80Hz, 1 H), 4.48 (br s, 2 H), 4.13 (dd, J=9.35, 5.07 Hz, 1 H), 3.82 - 3.95 (m,1 H), 3.77 (s, 3 H), 3.53 (s, 2 H), 3.06 - 3.15 (m, 3 H), 2.92 - 3.03 (m, 1H), 2.64 - 2.73 (m, 1 H), 2.52 - 2.64 (m, 2 H), 2.21 - 2.31 (m, 1 H), 2.09 -2.19 (m, 1 H), 2.02 (br d, J=9.29 Hz, 1 H), 1.54 - 1.67 (m, 1 H), 1.21 - 1.37(m, 1 H), 0.93 (d, J=6.48 Hz, 3 H)。

实施例S63. 3-(6-((1-(5-氯-4-((2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (63) 的合成

步骤1：3-(6-((1-(5-氯-4-((2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。与上述实施例S62类似使用3-[1-甲基-6-(4-哌啶基氨基)吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮和5-氨基吲哚啉-2-酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₀H₃₀ClN₉O₃理论值为599.2，实测值为600.0 [M+H]⁺；¹H NMR (DMSO-d₆,400 MHz) δ 10.8-10.9 (m, 1H), 10.3-10.4 (m, 1H), 8.0-8.1 (m, 1H), 7.4-7.5 (m,1H), 7.3-7.4 (m, 2H), 6.8-6.8 (m, 1H), 6.4-6.6 (m, 2H), 4.2-4.4 (m, 2H), 4.1-4.2 (m, 1H), 3.9-4.0 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.6-3.7 (m, 1H), 3.49 (s, 2H),3.1-3.2 (m, 2H), 2.6-2.6 (m, 2H), 2.2-2.3 (m, 1H), 2.1-2.2 (m, 1H), 2.0-2.1(m, 2H), 1.3-1.4 (m, 2H)。

实施例S64. 3-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (64) 的合成

步骤1：3-(6-((3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成。在环境温度下将3-(6-氨基-1-甲基-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮（500 mg，1.94 mmol）、3,3-二氟-4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯水合物（500.9 mg，2.13 mmol）和癸硼烷(14)（108.54 mg，0.9700 mmol）的混合物在DMSO（5 mL）和乙酸（0.22 mL，3.87 mmol）中搅拌。在2小时后，根据LCMS反应完成。将反应用甲醇（1 mL）稀释，这导致鼓泡。在10 min后，鼓泡消退并且将溶液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤并且然后用盐水洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并且浓缩。将所得固体与乙醚一起研磨。然后将所得固体使用硅胶色谱法使用4%甲醇和在己烷中的0-50%乙酸乙酯的梯度进行纯化。将所得中间体4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯（230 mg，0.4817 mmol，24.8%产率）分离并且用2 mL的在1,4-二噁烷中的4 N HCL处理并且搅拌3 h。在此时间后，将反应混合物浓缩，以得到呈浅黄色粉末的标题化合物（270 mg，0.6524 mmol，33.7%产率）。

步骤2：3-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：将3-{6-[(3,3-二氟哌啶-4-基)氨基]-1-甲基-1H-吲唑-3-基}哌啶-2,6-二酮盐酸盐（278 mg，0.650 mmol）、5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（172 mg，0.590 mmol）、N,N-二异丙基乙胺（0.2 mL，1.17 mmol）和DMSO（1.17 mL）添加到配备有搅拌棒的1打兰小瓶中并且加热至80ºC持续15小时。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到标题化合物（12 mg，0.0184 mmol，3.14%产率）。¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10.8-10.9 (m, 1H), 8.8-8.9 (m, 1H), 8.2-8.2 (m, 1H), 8.0-8.1 (m, 1H), 7.4-7.5 (m,2H), 7.3-7.4 (m, 1H), 6.9-7.0 (m, 1H), 6.6-6.7 (m, 2H), 5.9-6.1 (m, 1H), 4.6-4.8 (m, 1H), 4.4-4.5 (m, 1H), 4.2-4.3 (m, 2H), 3.8-3.9 (m, 3H), 3.4-3.6 (m,3H), 3.2-3.3 (m, 1H), 3.1-3.1 (m, 3H), 2.6-2.7 (m, 2H), 2.5-2.6 (m, 4H), 2.2-2.3 (m, 1H), 2.1-2.2 (m, 1H), 1.9-2.0 (m, 1H), 1.5-1.7 (m, 1H)。

实施例S65. 1-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮 (65)的合成

步骤1：4-[[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向1-(6-氨基-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮（900mg，3.47 mmol）、3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯（980 mg，4.17 mmol）在乙酸（5 mL）和DMSO（25 mL）中的溶液中添加癸硼烷(14)（195 mg，1.74 mmol）并且在室温下将混合物搅拌6 h。去除挥发物并且将残余物通过反相色谱法（C18）用20%-100% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（450 mg，27%）。MS (ESI) [M-H]^-477.3。

步骤2：1-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。根据通用程序5和6使用4-[[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₀H₂₉ClF₂N₁₀O₃理论值为650.2，实测值为651.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.47 (s, 1H), 8.82 (s,1H), 8.06 (s, 1H), 7.51 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 1H),7.31 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 8.9, 1.9Hz, 1H), 6.61 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.77 – 4.63 (m,1H), 4.49 – 4.36 (m, 1H), 4.33 – 4.17 (m, 1H), 3.87 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.81(s, 3H), 3.55 – 3.51 (m, 2H), 3.58 – 3.44 (m, 1H), 3.28 – 3.18 (m, 1H), 3.11(s, 3H), 2.72 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.03 – 1.95 (m, 1H), 1.70 – 1.57 (m, 1H)。

实施例S66. 3-(6-(((R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (66) 的合成

步骤1：3,3-二氟-4-(((R)-1-苯基乙基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将3,3-二氟-4-氧代-哌啶-1-甲酸叔丁酯（3.53 g，15.0 mmol）和(1R)-1-苯基乙胺（2.18 g，18.0mmol）在甲苯（35 mL）中的混合物用迪安-斯塔克分水器加热至回流持续18 h。将混合物冷却至室温并且在减压下去除挥发物。添加DCM（35 mL），随后经1 h分批添加三乙酰氧基硼氢化钠（7.15 g，33.7 mmol）。将混合物加热至50ºC持续18 h。添加另一批三乙酰氧基硼氢化钠（3.56 g，16.8 mmol）并且将反应混合物加热至50ºC再持续6 h。将混合物冷却至室温并且在减压下去除挥发物。添加Na₂CO₃（50 mL）的2 M溶液并且在室温下将混合物搅拌1 h，随后添加EtOAc（50 mL）。分离各相并且将水相用EtOAc（3 x 50 mL）萃取。将合并的有机级分用盐水（50 mL）洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在DCM中的0-3% MeOH纯化，以得到呈油状物的标题化合物（4.21 g，82%）。¹H NMR(500 MHz,甲醇-d₄) δ 7.29 – 7.35 (m, 4H), 7.20 – 7.25 (m, 1H), 5.48 (s, 1H),4.08 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.04 (br s, 1 H), 3.73 – 3.79 (m, 1H), 3.17 (br s,1H), 2.91 (br s, 1H), 2.70 – 2.80 (m, 1H), 1.65 – 1.72 (m, 1H), 1.45 – 1.50(m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.31 (d, J = 6.62 Hz, 3H)。

步骤2：(4R)-3,3-二氟-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯4-甲基苯磺酸盐的合成。在室温下向3,3-二氟-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（4.21 g，12.4 mmol）在EtOH（50 mL）中的溶液中添加4-甲基苯磺酸水合物（2.35 g，12.4mmol），并且将混合物加热至60ºC持续1 h。在减压下去除挥发物，以得到呈固体的非对映异构体混合物。将中间体的粗混合物（6.07 g）溶解于丙酮 : EtOH的10 : 1混合物（68.5 mL）中并且将混合物加热至回流。将烧瓶从油浴中取出并且静置过夜。将沉淀的固体过滤，用冷丙酮（2 x 1 mL）冲洗并且干燥，以得到第一次收获的标题化合物，将其带入后续过程。

步骤3：(4R)-3,3-二氟-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将化合物(4R)-3,3-二氟-4-[[(1R)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯4-甲基苯磺酸盐（1.99 g，3.88 mmol）在EtOAc（50 mL）与NaHCO3饱和水溶液（50 mL）之间分配。将有机层分离并且将水相用EtOAc（3 x 40 mL）萃取。将合并的有机层干燥（MgSO4），过滤并且在减压下浓缩，以得到呈油状物的标题化合物（1.30 g，98%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 341.3。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.36 – 7.27 (m, 4H), 7.26 – 7.15 (m, 1H), 4.01 – 3.95(m, 1H), 3.94 – 3.80 (m, 1H), 3.66 – 3.54 (m, 1H), 3.29 – 3.20 (m, 1H), 3.04– 2.91 (m, 1H), 2.71 – 2.64 (m, 1H), 2.37 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 1.64 – 1.58(m, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.22 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。

步骤4：(4R)-4-氨基-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在室温下在氢气气氛（50 psi）下将(4R)-3,3-二氟-4-[[(1SR)-1-苯基乙基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯（1.29 g，3.79 mmol）和10% Pd/C（202 mg，0.19 mmol）在EtOH（41 mL）中的混合物在帕尔烧瓶中振荡18 h。将混合物在硅藻土上过滤并且用MeOH（3 x 50 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈油状物的标题化合物（845 mg，94%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI)[M-丁烯]+ 181.0。[α]D +0.19° (c = 0.142, EtOH)。¹H NMR (400 MHz, 甲醇-d4) δ4.22 – 4.12 (m, 1H), 3.96 (dt, J = 13.7, 4.0 Hz, 1H), 3.25 – 3.15 (m, 1H),3.14 – 3.00 (m, 2H), 1.93 – 1.82 (m, 1H), 1.59 – 1.48 (m, 1H), 1.46 (s, 9H)。

步骤5：(4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在室温下向6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（200 mg，0.40 mmol）、(4R)-4-氨基-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯（123 mg，0.520mmol）和tBuONa（57.7 mg，0.60 mmol）在THF（2 mL）中的脱气混合物中添加tBuXPhos-Pd-G3（33.9 mg，40 µmol）。将反应器皿密封并且将反应混合物加热至80ºC持续18 h并且冷却至室温。添加DCM（10 mL）并且将混合物在硅藻土上过滤并且用DCM（3 x 10 mL）冲洗。将挥发物在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-60% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（200 mg，76%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 657.6。¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.50 – 7.43 (m, 2H), 7.42 –7.23 (m, 9H), 6.59 (s, 1H), 6.58 – 6.52 (m, 2H), 6.00 (d, J = 9.1 Hz, 1H),5.44 (s, 2H), 5.41 (s, 2H), 4.25 – 4.08 (m, 2H), 3.97 – 3.92 (m, 1H), 3.89(s, 3H), 3.50 – 3.36 (m, 1H), 3.19 – 3.00 (m, 1H), 1.97 – 1.87 (m, 1H), 1.65– 1.52 (m, 1H), 1.42 (s, 9H)。

步骤6：3-(6-(((R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序4、5和6使用(4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3,3-二氟-哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₁H₃₀ClF₂N₉O₃理论值为649.2，实测值为650.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.82 (s, 1H), 8.41 (s,1H), 8.06 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.47 (dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 7.35 (d, J =8.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.66 (dd, J = 8.8, 1.8 Hz, 1H), 6.62(s, 1H), 6.00 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.75 – 4.64 (m, 1H), 4.41 (d, J = 11.6 Hz,1H), 4.26 – 4.13 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.60 – 3.42 (m, 3H), 3.23 (t, J =11.7 Hz, 1H), 3.11 (s, 3H), 2.65 – 2.55 (m, 2H), 2.30 – 2.22 (m, 1H), 2.20 –2.11 (m, 1H), 2.04 – 1.94 (m, 1H), 1.70 – 1.52 (m, 1H)。

实施例S67. 3-(6-(((S)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (67) 的合成

步骤1：3-(6-(((S)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3,3-二氟哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：与实施例S66类似在步骤1中使用(1S)-1-苯基乙胺开始合成标题化合物。LCMS C₃₁H₃₀ClF₂N₉O₃理论值为649.2，实测值为650.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.81 (s, 1H), 8.82(s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.48 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.35 (d, J =8.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.62 (s,1H), 6.00 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.78 – 4.63 (m, 1H), 4.47 – 4.33 (m, 1H), 4.30– 4.18 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.60 – 3.45 (m, 3H), 3.26 – 3.19 (m, 1H), 3.11(s, 3H), 2.69 – 2.57 (m, 2H), 2.31 – 2.23 (m, 1H), 2.15 (dd, J= 12.8, 5.9 Hz,1H), 2.05 – 1.92 (m, 1H), 1.70 – 1.56 (m, 1H)。

实施例S68. 3-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (68) 的合成

步骤1：3-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序2、4、5和6使用(3,3-二氟哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMSC₃₁H₃₀ClF₂N₉O₃理论值为649，实测值为650 [M+H]⁺；¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 10.8-10.9 (m, 1H), 8.5-8.7 (m, 1H), 7.9-8.1 (m, 1H), 7.6-7.8 (m, 1H), 7.4-7.6 (m,2H), 7.2-7.4 (m, 1H), 6.9-7.0 (m, 3H), 4.2-4.4 (m, 1H), 4.0-4.2 (m, 1H), 3.92(s, 4H), 3.56 (s, 2H), 3.3-3.3 (m, 1H), 3.1-3.2 (m, 3H), 3.0-3.1 (m, 1H),2.9-2.9 (m, 1H), 2.7-2.7 (m, 1H), 2.6-2.7 (m, 1H), 2.2-2.3 (m, 1H), 2.1-2.2(m, 1H), 1.9-2.0 (m, 2H)。

实施例S69. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-乙基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (69) 的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-乙基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序1和6使用5-氨基-1-乙基吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₃H₃₆ClN₉O₃理论值为641.3，实测值为642.4 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.82 (s,1H), 9.03 (br s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.50 (dd, J = 8.50, 1.90Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.68 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.44 Hz, 1H), 6.51 (dd, J =8.68, 1.59 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.54 - 6.00 (m, 1H), 4.39 (br d, J = 7.70Hz, 2H), 4.17 (dd, J = 8.68, 5.14 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.68 (q, J = 7.09Hz, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.25 - 3.37 (m, 1H), 3.08 (br t, J = 12.10 Hz, 1H),2.75 (br t, J = 12.41 Hz, 1H), 2.54 - 2.64 (m, 2H), 2.20 - 2.31 (m, 1H), 2.04- 2.19 (m, 2H), 1.52 - 1.69 (m, 1H), 1.16 - 1.27 (m, 1H), 1.13 (t, J = 7.09Hz, 3 H), 0.97 (d, J = 6.48 Hz, 3H)。

实施例S70. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (70) 的合成

步骤1：(3R,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（中间体24）的合成。将6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（1.92 g，3.84 mmol）、(3R,4R)-4-氨基-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（685 mg，3.20mmol）、RuPhos Pd G3（668.6 mg，0.80 mmol）和Cs₂CO₃（1.25 g，3.84 mmol）在1,4-二噁烷（15 mL）中的混合物加热至90ºC持续20 h。将混合物冷却至室温，通过硅藻土过滤并且用EtOAc（4 x 30 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-40% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（1.37 g，68%）。MS(ESI) [M+H]⁺ 634.1。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.50– 7.46 (m, 1H), 7.46 – 7.25 (m, 10H), 6.54 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.43 (d, J =1.8 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.70 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.44 (s,2H), 5.40 (s, 2H), 3.97 – 3.89 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.24 – 3.14 (m, 1H),2.99 – 2.87 (m, 1H), 2.05 – 2.01 (m, 1H), 2.01 – 1.98 (m, 1H), 1.57 – 1.47(m, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.17 – 1.08 (m, 1H), 0.93 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

步骤2：(3R,4R)-4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将(3R,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（1.40 g，2.21 mmol）和Pd(OH)₂/C（1.18 g，1.10 mmol）在MeOH（25 mL）和THF（75 mL）中的混合物在50ºC下在H₂（1 atm）下氢化9 h。将混合物通过硅藻土过滤并且用MeOH（2 x 50 mL）和THF（2 x 100 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在DCM中的0-5% MeOH的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（695 mg，69%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 456.3。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.81 (s, 1H), 7.31 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 8.8, 1.7 Hz,1H), 6.40 (s, 1H), 5.72 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.17 (dd, J = 8.7, 5.2 Hz, 1H),3.98 – 3.88 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.26 – 3.14 (m, 1H), 3.00 – 2.86 (m, 1H),2.65 – 2.56 (m, 3H), 2.34 – 2.20 (m, 1H), 2.18 – 2.09 (m, 1H), 2.05 – 1.94(m, 1H), 1.60 – 1.46 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.22 – 1.05 (m, 1H), 0.92 (d, J =6.5 Hz, 3H)。

步骤3：3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成。在25ºC下向(3R,4R)-4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（8 g，17.6 mmol）在乙酸乙酯（35 mL）中的溶液中添加在乙酸乙酯中的4 M HCl（35 mL）。添加后，将反应混合物在25ºC下搅拌16 h。将反应混合物过滤，以得到呈灰白色固体的标题化合物（8 g，100%产率）。MS (ESI) [M+H]⁺356.2。400 MHz MeOD δ: 8.04 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J =8.8 Hz, 1H), 4.59-4.55 (m, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.75-7.71 (m, 1H), 3.49-3.46(m,2 H), 3.20-3.15 (m, 1H), 3.03 (s, 2H), 2.93-2.89 (m, 1H), 2.83-2.81 (m,2H), 2.52-2.48 (m, 1H), 2.40-2.35 (m, 1H), 2.30-2.26 (m, 1H), 2.20-2.15 (m,1H), 2.02 (s, 1H), 1.80-1.75 (m, 1H), 1.24-1.22 (m, 3H)。

步骤4：3-[6-[[(3R,4R)-1-[5-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-3-甲基-4-哌啶基]氨基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮的合成。向3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐（50.0 mg，0.130 mmol）在DMSO（0.50 mL）中的溶液中依序添加5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（41.1 mg，0.140 mmol）和DIPEA（90 μL，0.510 mmol），并且将其加热至80ºC持续2 h。将反应混合物冷却至室温并且通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用44%-54% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度直接纯化，以得到呈固体的标题化合物（13.5 mg，16%）。LCMSC₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.81(s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.4 Hz, 1H),7.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 8.8 Hz, 1H),6.43 (s, 1H), 5.68 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.53 – 4.39 (m, 2H), 4.17 (dd, J =8.7, 5.2 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 3.27 – 3.21 (m, 1H), 3.10 (s,3H), 3.02 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 2.76 – 2.65 (m, 1H), 2.64 – 2.56 (m, 2H),2.32 – 2.19 (m, 1H), 2.18 – 2.09 (m, 1H), 2.10 – 2.02 (m, 1H), 1.65 – 1.51(m, 1H), 1.21 – 1.11 (m, 1H), 0.97 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

实施例S71. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (71) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 RR或SS柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S70的产物。将标题化合物作为第一峰洗脱，Rt = 10.01min。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.4 [M+H]⁺；¹H NMR (DMSO-d₆, 400MHz) δ 10.7-10.9 (m, 1H), 8.5-8.8 (m, 1H), 7.9-8.1 (m, 1H), 7.5-7.7 (m, 2H),7.2-7.4 (m, 1H), 6.9-7.1 (m, 1H), 6.4-6.7 (m, 2H), 5.6-5.7 (m, 1H), 4.4-4.7(m, 2H), 4.0-4.3 (m, 1H), 3.8-3.9 (m, 3H), 3.4-3.6 (m, 2H), 2.9-3.2 (m, 4H),2.7-2.8 (m, 2H), 2.0-2.3 (m, 5H), 1.5-1.6 (m, 1H), 1.1-1.3 (m, 1H), 0.8-1.1(m, 3H)。

实施例S72. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (72) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 RR或SS柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S70的产物。将标题化合物作为第二峰洗脱，Rt = 14.87min。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.4 [M+H]⁺；¹H NMR (DMSO-d6, 400MHz) δ 10.7-10.9 (m, 1H), 8.6-8.8 (m, 1H), 7.9-8.1 (m, 1H), 7.5-7.7 (m, 2H),7.2-7.4 (m, 1H), 6.9-7.0 (m, 1H), 6.3-6.6 (m, 2H), 5.6-5.9 (m, 1H), 4.4-4.6(m, 2H), 4.1-4.4 (m, 1H), 3.8-3.9 (m, 3H), 3.5-3.6 (m, 2H), 2.9-3.2 (m, 4H),2.7-2.8 (m, 2H), 2.0-2.3 (m, 5H), 1.5-1.7 (m, 1H), 1.1-1.3 (m, 1H), 0.9-1.0(m, 3H)

实施例S73. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (73)的合成

步骤1：(3R,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向(3R,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（1.55 g，2.45 mmol）和在矿物油中的60% NaH分散体（245 mg，6.11 mmol）在DMF（20 mL）中的冰冷溶液中添加碘甲烷（305 µL，4.89 mmol），并且将混合物在室温下搅拌48 h。使用相同程序制备另一批。将水（50 mL）添加到合并的混合物中并且分离各层。将水层用EtOAc（3 x 75 mL）萃取。将合并的有机级分用盐水（20 mL）洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且浓缩。将残余物通过反相色谱法（C18）使用20%-100% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（700mg，44%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 649.34。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.88 (d, J = 8.1Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 3H), 7.43 – 7.23 (m, 8H), 6.78 (dd, J =9.4, 2.0 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.44(s, 2H), 5.40 (s, 2H), 4.05 – 3.99 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.65 – 3.59 (m,1H), 2.92 – 2.85 (m, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.60 – 2.54 (m, 1H), 1.72 – 1.77 (m,1H), 1.60 – 1.54 (m, 2H), 1.42 (s, 9H), 0.75 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

步骤2：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序4、5和6使用(3R,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为641.3，实测值为642.4 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.80 (s, 1H),8.62 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 9.1 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.59 (s,1H), 4.58 – 4.51 (m, 2H), 4.19 (dd, J = 8.9, 5.2 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.74– 3.65 (m, 1H), 3.49 (s, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.97 – 2.90 (m, 1H), 2.69 (s,3H), 2.63 – 2.57 (m, 3H), 2.30 – 2.23 (m, 1H), 2.16 – 2.09 (m, 1H), 1.86 –1.76 (m, 1H), 1.60 – 1.53 (m, 2H), 0.77 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

实施例S74. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (74) 的合成

步骤1：5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮的合成。在-25ºC下向5-氨基-1-甲基-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮（1.2g，1.18 mmol）在EtOH（30 mL）中的搅拌溶液中添加DIPEA（0.617 mL，3.53 mmol）和5-氯-2,4-二氟嘧啶（0.266 g，1.765 mmol）。在1 h后允许将反应缓慢温热至室温并且然后将反应在下25ºC搅拌16 h。在此时间后，将反应混合物蒸发。将粗残余物通过硅胶色谱法使用在PE中的50%-100% EtOAc纯化，以获得呈淡黄色固体的标题化合物（190 mg，0.252 mmol，21.44%产率）。MS (ESI) m/z 294.0 [M+H]⁺。

步骤2：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。向5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮（80 mg，0.104 mmol）和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮（49.1 mg，0.104 mmol）在DMSO（1 mL）中的搅拌溶液中添加DIPEA（0.054 mL，0.311 mmol）并且将反应混合物在90ºC下搅拌4 h。将反应混合物通过制备型HPLC纯化，以获得呈灰白色固体的标题化合物（30 mg，0.047 mmol，45.8%产率）。LCMSC₃₁H₃₃ClN₁₀O₃理论值为628.2，实测值为629.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ10.82 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.36 (d, J = 2.00 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.86(s, 1H), 7.31 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.44-6.52 (m, 2H), 5.69 (d, J = 8.80 Hz,1H), 4.44 (d, J = 9.20 Hz, 2H), 4.17 (q, J = 5.20 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.61(s, 2H), 3.13 (s, 3H), δ 3.02 (t, J = Hz, 1H), 2.53-2.68 (m, 3H), 2.33 (t, J= 1.60 Hz, 1H), 2.25 (t, J = 6.00 Hz, 1H), 2.06-2.17 (m, 2H), 1.58 (d, J =4.80 Hz, 1H), 1.15-1.17 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.40 Hz, 3H)。

实施例S75. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-甲氧基乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(75) 的合成

步骤1：5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-(2-甲氧基乙基)吲哚啉-2-酮的合成。在-45ºC下在氮气气氛下向5-氨基-1-(2-甲氧基乙基) 吲哚啉-2-酮（200 mg，0.97 mmol）在THF（5 mL）中的搅拌溶液中添加DIPEA（0.254 mL，1.46 mmol）和5-氯-2,4-二氟嘧啶（219mg，1.46 mmol）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌12 h。将反应混合物在减压下浓缩，以获得粗品。将粗产物通过硅胶上的快速柱色谱法用30%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（80 mg，0.210 mmol，21%产率）。MS: 337.0 [M+H]⁺。

步骤2：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-甲氧基乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。在25ºC下向3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮（117 mg，0.238 mmol）在DMSO（2.0 mL）中的搅拌溶液中添加5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-(2-甲氧基乙基)吲哚啉-2-酮（80 mg，0.238 mmol）和DIPEA（0.166 mL，0.95mmol）。将反应混合物加热至80ºC，搅拌4 h。将粗品通过制备型HPLC纯化，以得到标题化合物（24 mg，0.028 mmol，25%产率）。LCMS C₃₄H₃₈ClN₉O₄理论值为671.3，实测值为672.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.83 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.02 (s, 1H),7.56 (s, 1H), 7.50 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 7.01 (d,J = 8.40 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 1.6 Hz和8.8 Hz, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.71 (d, J= 9.20 Hz, 1H), 4.51-4.44 (m, 2H), 4.18 (dd, J = 5.2 Hz 和8.4 Hz, 1H), 3.84-3.82 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.56-3.52 (m, 4H), 3.22 (s, 3H), 3.05-2.99 (m,1H), 2.68-2.65 (m, 1H), 2.62-2.58 (m, 2H), 2.28-2.23 (m, 1H), 2.17-2.06 (m,2H), 1.60-1.57 (m, 1H), 1.18-1.16 (m, 1H), 0.97 (d, J = 6.40 Hz, 3H)。

实施例S76. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-甲氧基乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (76) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-甲氧基乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S75的产物，作为第一洗脱峰分离，Rt = 9.85 min。LCMS C₃₄H₃₈ClN₉O₄理论值为671.3，实测值为672.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ (ppm) = 10.81 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.56 (s,1H), 7.49 (dd, J = 2.0, 8.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.00 (d, J =8.6 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.7, 8.8 Hz, 1H), 6.43 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 5.69(d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.53 - 4.40 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 5.2, 8.7 Hz, 1H),3.86 - 3.79 (m, 5H), 3.58 - 3.48 (m, 4H), 3.21 (s, 3H), 3.06 - 2.96 (m, 1H),2.73 - 2.56 (m, 3H), 2.35 - 2.01 (m, 4H), 1.63 - 1.50 (m, 1H), 1.23 - 1.10(m, 1H), 0.96 (d, J = 6.6 Hz, 3H)。

实施例S77. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-甲氧基乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (77) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-甲氧基乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S75的产物，作为第二洗脱峰分离，Rt= 13.85 min。LCMS C₃₄H₃₈ClN₉O₄理论值为671.3，实测值为672.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ (ppm) = 10.81 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.56 (s, 1H),7.49 (dd, J = 2.1, 8.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 8.6Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.7, 8.8 Hz, 1H), 6.43 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 5.69 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.52 - 4.41 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 5.2, 8.7 Hz, 1H), 3.86 -3.79 (m, 5H), 3.58 - 3.48 (m, 4H), 3.21 (s, 3H), 3.07 - 2.96 (m, 1H), 2.73 -2.56 (m, 3H), 2.34 - 2.02 (m, 4H), 1.63 - 1.53 (m, 1H), 1.22 - 1.10 (m, 1H),0.97 (d, J = 6.5 Hz, 3H)。

实施例S78. 3-(6-((2R,6R)-4-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (78) 的合成

步骤1：(3R,5R)-4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成。将3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（2.335 g，4.67 mmol）和(3R,5R)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（1.0 g，4.67 mmol）在甲苯（25 ml）中的搅拌溶液用氮气脱气15 min。然后添加叔丁醇钠（0.673 g，7.00 mmol）和CPhos-Pd-G3（0.188 g，0.233 mmol）。将反应混合物加热至100ºC并且搅拌8 h。将反应混合物冷却至室温并且用水（150 mL）处理并且用乙酸乙酯（3 x 100 ml）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗化合物。将粗品通过二氧化硅上的快速柱色谱法用35%-40%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（950mg，1.364 mmol，29%产率）。MS (ESI) m/z 634.8 [M+H]⁺。

步骤2：(3R,5R)-4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯的合成。在氮气下向(3R,5R)-4-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（950 mg，1.364 mmol）在乙醇（20mL）和THF（20 mL）中的搅拌溶液中添加20%氢氧化钯碳（192 mg）。将反应混合物在氢化压力下在25ºC下搅拌8 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用乙腈和甲醇的1 :1混合物（3 x 25 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到粗化合物。将粗品通过二氧化硅上的快速柱色谱法用5% MeOH/DCM纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（330 mg，0.719mmol，52.7%产率）。MS (ESI) m/z 456.2 [M+H]⁺。

步骤3：3-(6-((2R,6R)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮TFA盐的合成。在0ºC下向(3R,5R)-4-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯（250 mg，0.450 mmol）在DCM（5 mL）中的搅拌溶液中添加TFA（0.34 mL）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌4 h。将反应混合物在减压下浓缩，以得到粗化合物。将粗化合物与乙醚一起研磨并且在减压下干燥，以得到呈灰白色固体的标题化合物（220 mg，0.410 mmol，91%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。MS (ESI) m/z 356.0 [M+H]⁺。

步骤4：3-(6-((2R,6R)-4-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。在25ºC下向3-(6-((2R,6R)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮TFA盐（70mg，0.137 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（40.2 mg，0.137mmol）在DMSO（1 mL）中的搅拌溶液中添加DIPEA（0.096 mL，0.549 mmol）。将反应混合物加热至80ºC并且搅拌6 h。将反应混合物冷却至室温并且通过制备型HPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（26 mg，0.040 mmol，29%产率）。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.88 (s, 1H), 8.72 (s, 1H),8.04 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.57-7.52 (m, 2H), 7.01 (s, 1H), 6.96 (d, J =8.40 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 4.31-4.27 (m, 1H), 3.92 (s, 3H),3.93-3.90 (m, 2H), 3.81-3.77 (m, 2H), 3.69-3.65 (m, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.12(s, 3H), 2.67-2.64 (m, 2H), 2.33-2.30 (m, 1H). 2.19-2.15 (m, 1H), 0.96 (d, J= 6.4 Hz, 6H)。

实施例S79. (R)-3-(6-((2R,6R)-4-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (79) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-((2R,6R)-4-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S78的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 10.08 min。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.2 [M+H]⁺；¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) = 10.86 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.60(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 2H), 7.00 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.95 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 1.6, 8.9 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 5.1, 9.5 Hz,1H), 3.91 (s, 5H), 3.82 - 3.73 (m, 2H), 3.67 (dd, J = 5.3, 12.8 Hz, 2H), 3.56(s, 2H), 3.12 (s, 3H), 2.69 - 2.58 (m, 2H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.21 - 2.10(m, 1H), 0.95 (d, J = 6.2 Hz, 6H)。

实施例S80. (S)-3-(6-((2R,6R)-4-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (80) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-((2R,6R)-4-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S78的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 13.90 min。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.2 [M+H]⁺；¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) = 10.86 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.60(d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.57 - 7.50 (m, 2H), 7.00 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.95 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 1.6, 8.9 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 5.2, 9.4 Hz,1H), 3.91 (s, 5H), 3.82 - 3.74 (m, 2H), 3.67 (dd, J = 5.3, 12.7 Hz, 2H), 3.56(s, 2H), 3.12 (s, 3H), 2.70 - 2.56 (m, 2H), 2.37 - 2.29 (m, 2H), 2.22 - 2.12(m, 1H), 0.95 (d, J = 6.1 Hz, 6H)。

实施例S81. 3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (81) 的合成

步骤1：(2S,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将6-溴-3-(2, 6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（1.9 g，3.80 mmol）、(2S,4R)-4-氨基-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯盐酸盐（1.05 g，4.18mmol）和tBuXPhos-Pd-G3（302 mg，0.380 mmol）以及在MeTHF（38 mL）中的NaOtBu（912 mg，9.49 mmol）的混合物抽真空并且用氮气回填3个循环。将混合物加热至85ºC持续1.5 h并且冷却至室温。添加DCM（30 mL）并且将混合物在硅藻土垫上过滤并且用DCM（3 X 30 mL）冲洗。将挥发物在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-60%EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（2.01 g，84%）。MS (ESI) [M+H]⁺634.1。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 6.9Hz, 2H), 7.42 – 7.21 (m, 9H), 6.55 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.47 – 6.36 (m, 2H),5.66 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.41 (s, 2H), 4.45 – 4.33 (m, 1H),3.89 (s, 3H), 3.88 – 3.86 (m, 1H), 3.76 – 3.62 (m, 1H), 3.01 (t, J = 13.9 Hz,1H), 2.05 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.87 – 1.83 (m, 1H), 1.48 – 1.43 (m, 1H),1.41 (s, 9H), 1.23 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.16 – 1.05 (m, 1H)。

步骤2：3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序4、5和6使用(2S,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.81 (s, 1H), 8.63 (s,1H), 8.01 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.54 – 7.46 (m, 1H), 7.33 (d, J = 8.7 Hz,1H), 6.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.52 (dd, J = 8.8, 1.7 Hz, 1H), 6.47 (s, 1H),5.67 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.91 (br s, 1H), 4.48 (br s, 1H), 4.18 (dd, J =8.8, 5.1 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.81 – 3.74 (m, 1H), 3.54 (s, 2H), 3.11 (s,3H), 3.06 (td, J = 13.1, 1.7 Hz, 1H), 2.66 – 2.56 (m, 2H), 2.31 – 2.22 (m,1H), 2.17 – 2.08 (m, 2H), 1.92 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 1.47 (td, J = 13.0, 5.7Hz, 1H), 1.26 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.15 (td, J = 13.9, 5.3 Hz, 1H)。

实施例S82. (R)-3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (82) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S81的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 11.30 min。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.3 [M+H]⁺；¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 10.81 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.61 -7.42 (m, 2H), 7.33 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.62 - 6.40(m, 2H), 5.67 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.09 - 4.32 (m, 2H), 4.18 (dd, J = 5.1,8.8 Hz, 1H), 3.91 - 3.69 (m, 4H), 3.54 (s, 2H), 3.11 (s, 4H), 2.31 - 2.06 (m,3H), 1.91 (br d, J = 10.5 Hz, 1H), 1.46 (dt, J = 5.2, 11.9 Hz, 1H), 1.26 (brd, J = 6.7 Hz, 3H), 1.20 - 1.09 (m, 1H)。

实施例S83. (S)-3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (83) 的合成

步骤2：(S)-3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S81的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 19.77 min。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.3 [M+H]⁺；¹H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 10.81 (br s, 1H), 8.62 (br s, 1H), 8.01 (br s,1H), 7.65 - 7.44 (m, 2H), 7.33 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.93 (br d, J = 8.1Hz, 1H), 6.58 - 6.39 (m, 2H), 5.67 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 5.13 - 4.32 (m,2H), 4.31 - 4.10 (m, 1H), 3.97 - 3.71 (m, 4H), 3.54 (br s, 2H), 3.11 (br s,4H), 2.33 - 2.08 (m, 3H), 1.97 - 1.86 (m, 1H), 1.55 - 1.41 (m, 1H), 1.26 (brd, J = 6.6 Hz, 3H), 1.20 - 1.07 (m, 1H)。

实施例S84. 3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (84)的合成

步骤1：(2S,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将6-溴-3-(2, 6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（1.9 g，3.80 mmol，由Celgene提供的中间体）、(2S,4R)-4-氨基-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯盐酸盐（1.05 g，4.18 mmol）和tBuXPhos-Pd-G3（302 mg，0.380 mmol）以及在MeTHF（38mL）中的NaOtBu（912 mg，9.49 mmol）的混合物抽真空并且用氮气回填3个循环。将混合物加热至85ºC持续1.5 h并且冷却至室温。添加DCM（30 mL）并且将混合物在硅藻土垫上过滤并且用DCM（3 X 30 mL）冲洗。将挥发物在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-60% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（2.01 g，84%）。MS(ESI) [M+H]⁺ 634.1。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.46(d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.42 – 7.21 (m, 9H), 6.55 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.47 –6.36 (m, 2H), 5.66 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.44 (s, 2H), 5.41 (s, 2H), 4.45 –4.33 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.88 – 3.86 (m, 1H), 3.76 – 3.62 (m, 1H), 3.01(t, J = 13.9 Hz, 1H), 2.05 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 1.87 – 1.83 (m, 1H), 1.48 –1.43 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.23 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 1.16 – 1.05 (m, 1H)。

步骤2：(2S,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向(2S,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（525 mg，0.83 mmol）在DMSO（6.5 mL）中的溶液中依序添加甲醛溶液（0.53 mL，7.09 mmol，37%）和癸硼烷（152 mg，1.24 mmol）。将混合物在室温下搅拌2 h。添加水（25 mL），并且通过过滤收集沉淀的固体。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-50% EtOAc梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（449 mg，84%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 648.7; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 7.89 (d, J =8.1 Hz, 1H), 7.51 – 7.44 (m, 3H), 7.42 – 7.36 (m, 4H), 7.36 – 7.24 (m, 4H),6.77 (dd, J = 9.3, 2.0 Hz, 1H), 6.63 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 8.1Hz, 1H), 5.48 – 5.41 (m, 2H), 5.41 (s, 2H), 4.51 – 4.36 (m, 1H), 4.10 (t, J =11.9 Hz, 1H), 4.00 – 3.86 (m, 4H), 3.17 – 2.96 (m, 1H), 2.75 (s, 3H), 1.83 –1.72 (m, 1H), 1.70 – 1.55 (m, 2H), 1.48 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H),1.25 – 1.19 (m, 3H)。

步骤3：(2S,4R)-4-[[3-(2,6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将(2S,4R)-4-[[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（446 mg，0.69 mmol）和珀尔曼催化剂（96.7 mg，0.340 mmol）在THF（9 mL）和EtOH（9 mL）中的混合物在50ºC下在氢气气氛（1 atm）下搅拌6 h并且冷却至室温。将混合物在硅藻土垫上过滤并且用THF（3 x 30 mL）冲洗。将挥发物在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的10%-100%EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（303 mg，94%）。MS (ESI) [M+H]⁺470.3。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.83 (s, 1H), 7.48 (d, J = 9.0 Hz, 1H),6.88 (dd, J = 9.2, 1.9 Hz, 1H), 6.64 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 4.49 – 4.36 (m,1H), 4.24 (dd, J = 8.9, 5.1 Hz, 1H), 4.18 – 4.08 (m, 1H), 3.99 – 3.91 (m,1H), 3.86 (s, 3H), 3.15 – 2.97 (m, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.68 – 2.55 (m, 2H),2.33 – 2.23 (m, 1H), 2.22 – 2.12 (m, 1H), 1.84 – 1.71 (m, 1H), 1.71 – 1.55(m, 2H), 1.49 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.25 – 1.17 (m, 3H)。

步骤4：3-[1-甲基-6-[甲基-[(2S,4R)-2-甲基-4-哌啶基]氨基]吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成。向(2S,4R)-4-[[3-(2, 6-二氧代-3-哌啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-甲基-氨基]-2-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（400 mg，0.85 mmol）在1,4-二噁烷（5 mL）中的溶液中添加在1,4-二噁烷中的4 N HCl（2.13 mL，8.52 mmol），并且将混合物在室温下搅拌15 h。在减压下蒸发挥发物并且将残余物在Et₂O（10 mL）中研磨，以得到呈固体的标题化合物（295 mg，85%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M+H]⁺370.3。¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.88 (s, 1H), 9.12 (br s, 1H), 9.05 – 8.83 (m, 1H),7.71 (br s, 1H), 7.21 (br s, 1H), 4.40 – 4.30 (m, 1H), 4.27 – 3.98 (m, 6H),3.95 (s, 3H), 3.89 – 3.73 (m, 1H), 3.34 – 3.24 (m, 1H), 3.22 – 3.11 (m, 1H),3.07 – 2.85 (m, 2H), 2.75 – 2.55 (m, 2H), 2.42 – 2.29 (m, 1H), 2.19 – 2.11(m, 1H), 1.35 (d, J = 5.4 Hz, 3H)。

步骤5：3-[6-[[(2S,4R)-1-[5-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-2-甲基-4-哌啶基]-甲基-氨基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮的合成。向3-[1-甲基-6-[甲基-[(2S,4R)-2-甲基-4-哌啶基]氨基]吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮盐酸盐（64.1 mg，0.16 mmol）在DMF（2 mL）和DMSO（0.5 mL）中的溶液中依序添加5-[(5-氯-2-氟-嘧啶-4-基)氨基]-1-甲基-吲哚啉-2-酮（42 mg，0.14 mmol）和DIPEA（0.2 mL，1.15 mmol）。将混合物加热至100ºC持续18 h并且然后冷却至室温。在减压下去除挥发物并且将残余物通过使用20%-75% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（47 mg，48%）。LCMS C₃₃H₃₆ClN₉O₃理论值为641.3，实测值为642.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500MHz, DMSO-d₆) δ 10.83 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.56 (br s, 1H),7.52 – 7.43 (m, 2H), 6.96 – 6.85 (m, 2H), 6.65 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.17 –4.78 (m, 1H), 4.72 – 4.36 (m, 1H), 4.29 – 4.16 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.54(s, 2H), 3.15 – 3.03 (m, 4H), 2.75 (s, 3H), 2.68 – 2.54 (m, 2H), 2.34 – 2.26(m, 1H), 2.17 (td, J = 11.9, 6.0 Hz, 1H), 1.86 – 1.71 (m, 2H), 1.71 – 1.52(m, 2H), 1.25 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。

实施例S85. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮(85) 的合成

步骤1：6-溴-1-甲基-吲唑-3-甲醛的合成：向6-溴-1H-吲唑-3-甲醛（5.000 g，22.22 mmol，1.00当量）在二甲基甲酰胺（50 mL）中的溶液中添加碳酸铯（14.480 g，44.44mmol，2.00当量）和碘甲烷（3.780 g，26.66 mmol，1.7 mL，1.20当量），将混合物在50ºC下搅拌12 h。将反应混合物冷却至室温。将混合物过滤并且将滤液添加到乙酸乙酯（100 mL）和水（50 mL）中并且将有机层分离。将水相用乙酸乙酯（50 mL x 2）萃取。将合并的萃取物用饱和盐水（50 mL）洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并且将滤液浓缩，以得到产物。将残余物通过硅胶柱（在石油醚中的5%-10%乙酸乙酯）纯化。获得呈白色固体的标题化合物（3.500 g，14.64mmol，65.9%产率）。LCMS：240.9 [M+H]⁺。

步骤2：(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)甲醇的合成：在0ºC下向6-溴-1-甲基-吲唑-3-甲醛（2.800 g，11.71 mmol，1.00当量）在乙醇（40 mL）中的溶液中添加硼氢化钠（0.886 g，23.42 mmol，2.00当量）。将混合物在20ºC下搅拌1 h。6-溴-1-甲基-吲唑-3-甲醛被消耗并且通过LCMS检测到所希望的质量。将混合物过滤并且将滤液在压力下添加到乙酸乙酯（50mL）和水（50 mL）中并且将有机层分离。将水相用乙酸乙酯（50 mL x 2）萃取。将合并的萃取物用饱和盐水（50 mL）洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并且将滤液浓缩，以得到呈白色固体的标题化合物（3.000 g，粗品）。LCMS：242.0 [M+H]⁺。

步骤3：6-溴-3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吲唑的合成：在0ºC下向(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)甲醇（3.000 g，12.44 mmol，1.00当量）在二氯甲烷（50 mL）中的溶液中添加亚硫酰氯（2.960 g，24.89 mmol，1.8 mL，2.00当量）。将混合物在20ºC下搅拌2 h。(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)甲醇被消耗并且通过LCMS检测到所希望的质量。将混合物在压力下浓缩。将混合物过滤，并将滤液浓缩。将残余物通过硅胶柱（在石油醚中的5%-20%乙酸乙酯）纯化。获得呈黄色固体的标题化合物（1.600 g，6.16 mmol，49.5%产率）。LCMS: 260.9[M+1]+。¹HNMR (400MHz, 氯仿-d) δ, 7.69 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.31 (m, J =1.2, 8.4 Hz, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.02 (s, 3H)

步骤4：2-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙腈的合成：向6-溴-3-(氯甲基)-1-甲基-1H-吲唑（1.95 g，7.51 mmol）在DMF（25.05 ml）中的溶液中添加氰化钠（0.479 g，9.77mmol），将混合物在60ºC下搅拌3 h。将反应混合物冷却至室温，并且添加乙酸乙酯（100 mL）和水（50 mL）。将水相用乙酸乙酯（50 mL x 2）萃取。将合并的萃取物用饱和盐水（50 mL）洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩，以得到呈黄色固体的（1.867 g，7.47 mmol，99%产率）。按原样用于以下步骤。LCMS：249.8 [M+H]⁺。

步骤5：2-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)丙腈的合成：在-20ºC下向2-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)乙腈（1.867 g，7.47 mmol）在四氢呋喃（46.7 ml）中的溶液中添加叔丁醇钾（1.005 g，8.96 mmol），在将混合物在-20ºC下搅拌30 min后，逐滴添加碘甲烷的溶液（0.467 ml，7.47 mmol）。将混合物搅拌过夜，同时温热至室温。将混合物过滤，并将滤液浓缩。将残余物用在己烷中的20% EtOAc纯化并且获得呈黄色油状物的标题化合物（0.5885g，2.228 mmol，29.8%产率）。LCMS: 265.1 [M+H]⁺。¹H NMR (氯仿-d, 400 MHz) δ 7.6-7.8(m, 1H), 7.5-7.6 (m, 1H), 7.3-7.5 (m, 1H), 4.3-4.4 (m, 1H), 4.39 (s, 1H),3.9-4.1 (m, 5H), 1.6-1.9 (m, 3H)

步骤6：4-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-氰基戊酸叔丁酯的合成：向2-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)丙腈（0.300 g，1.136 mmol）和丙烯酸叔丁酯（0.333 ml，2.272mmol）在甲苯（4.54 ml）中的溶液中添加碳酸钾（0.314 g，2.272 mmol）和N-苄基-N,N-二乙基乙铵氯化物（0.026 g，0.114 mmol）。将混合物在65ºC下搅拌12 h。在冷却后，将混合物过滤并且将滤液浓缩。将残余物通过制备型TLC（在己烷中的20%乙酸乙酯）进一步纯化。获得呈黄色油状物的（0.212 g，0.540 mmol，47.6%产率）。LCMS: 336.1 (M-^tBu+H)⁺。¹H NMR (氯仿-d, 400 MHz) δ 7.84 (s, 1H), 7.8-7.9 (m, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.5-7.7 (m,1H), 7.30 (s, 1H), 7.3-7.3 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 2.3-2.6 (m, 4H), 1.87 (s,3H), 1.41 (s, 9H)

步骤7：(3R,4R)-4-((3-(5-(叔丁氧基)-2-氰基-5-氧代戊-2-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：向0.5-2 mL微波小瓶中装入4-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-氰基戊酸叔丁酯（25 mg，0.064 mmol）、双(二亚苄基丙酮)钯(0)（0.366 mg，0.637 µmol）、叔丁醇钠（12.25 mg，0.127 mmol）、2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘（1.190 mg，1.912 µmol）、(3R,4R)-4-氨基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（20.49 mg，0.096 mmol）和PhMe（319 µL）。将其用N₂吹扫五分钟，然后在80ºC下加热过夜。将其通过硅藻土塞过滤，用EtOAc和DCM冲洗，以得到粗产物。将其经由正相色谱法用在DCM中的MeOH纯化。获得呈黄色固体的此标题化合物。LCMS: 470.0 [M+H]⁺。¹H NMR (氯仿-d, 400 MHz) δ7.5-7.8 (m, 1H), 6.1-6.6 (m, 2H), 4.0-4.2 (m, 3H), 3.7-3.9 (m, 3H), 3.0-3.2(m, 2H), 2.8-3.0 (m, 3H), 2.3-2.7 (br m, 2H), 2.0-2.2 (m, 3H), 1.6-1.8 (m,3H), 1.47 (s, 11H), 1.2-1.3 (m, 8H), 0.9-1.1 (m, 3H), 0.8-0.9 (m, 2H), 0.8-0.9 (m, 2H)

步骤8：5-氨基-4-(6-(((3R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-甲基-5-氧代戊酸的合成：在0ºC下向(3R,4R)-4-((3-(5-(叔丁氧基)-2-氰基-5-氧代戊-2-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（32.3 mg，0.061 mmol）在DMSO（307 µL）和乙醇（307 µL）中的混合物中添加氢氧化钠（123µL，0.123 mmol）和过氧化氢（126 µL，1.229 mmol）。将反应混合物在20ºC下搅拌12 h。4-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-氰基戊酸叔丁酯被消耗并且通过LCMS检测到所希望的质量。将混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭。将pH用1 M盐酸调节至5，并且将混合物用乙酸乙酯（30 mL x 2）萃取，然后将有机层经无水硫酸钠干燥并且过滤。将滤液在减压下浓缩，获得呈白色固体的标题化合物（30 mg，0.062 mmol，100%产率）。LCMS: 488.20 [M+H]⁺。¹H NMR(氯仿-d, 400 MHz) δ 7.4-7.5 (m, 1H), 6.4-6.5 (m, 1H), 6.2-6.3 (m, 1H), 5.9-6.0 (m, 1H), 4.6-4.9 (m, 2H), 3.9-4.0 (m, 3H), 3.1-3.2 (m, 2H), 2.7-2.9 (m,3H), 2.2-2.5 (m, 2H), 2.1-2.2 (m, 1H), 2.0-2.1 (m, 1H), 1.5-1.6 (m, 2H), 1.47(s, 9H), 1.2-1.4 (m, 7H), 1.0-1.1 (m, 3H)

步骤9：(3R,4R)-3-甲基-4-((1-甲基-3-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成：向5-氨基-4-(6-(((3R,4R)-1-(叔丁氧基羰基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-甲基-5-氧代戊酸（30 mg，0.062mmol）在THF（615 µL）中的溶液中添加CDI（29.9 mg，0.185 mmol）和DMAP（0.752 mg，6.15 µmol）并且将混合物在70ºC下搅拌12 h。将混合物过滤并且将滤液浓缩。将其经由反相（accqprep）用在水中的0-100%乙腈的梯度进行纯化。将级分浓缩，以得到呈白色固体的标题化合物（21.89 mg，0.047 mmol，76%产率）。LCMS: 470.0 [M+H]⁺。¹H NMR (氯仿-d, 400 MHz) δ7.86 (s, 1H), 7.8-8.1 (m, 1H), 7.5-7.7 (m, 1H), 6.4-6.6 (m, 1H), 6.2-6.3 (m,1H), 4.0-4.2 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.0-3.2 (m, 1H), 2.5-3.0 (m, 5H), 2.0-2.3(m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.6-1.7 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 1.2-1.3 (m, 2H), 1.0-1.1 (m, 3H)

步骤10：3-甲基-3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：向2打兰小瓶中装入在DCM（466 µL）中的(3R,4R)-3-甲基-4-((1-甲基-3-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯（21.89 mg，0.047 mmol）并且逐滴添加盐酸（在二噁烷中4 M）（58.3 µL，0.233 mmol）。将其在室温下搅拌1小时。之后，将溶液浓缩，以得到呈白色固体的标题化合物（17.22 mg，0.047mmol，100%产率）。按原样用于下一步骤。LCMS：370.5 [M+H]⁺。

步骤11：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮的合成：将3-甲基-3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮（17 mg，0.046 mmol）、5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（13.47 mg，0.046 mmol）、DIPEA（0.020 mL，0.115 mmol）在DMSO（0.5 mL）中的溶液在80ºC下搅拌2小时。之后，将反应用在DMSO中的10%甲酸淬灭并且通过注射筒过滤器过滤。将粗材料通过制备型HPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（30 mg，0.045 mmol，23%产率）。LCMSC₃₁H₃₀ClFN₁₀O₃理论值为642.2，实测值为642.8 [M+H]⁺；¹H NMR (氯仿-d, 400 MHz) δ 7.98(s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.7-7.8 (m, 1H), 7.5-7.6 (m, 2H), 7.4-7.5 (m, 1H),6.9-7.1 (m, 1H), 6.7-6.8 (m, 1H), 6.4-6.6 (m, 1H), 6.2-6.3 (m, 1H), 4.5-4.7(m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.6-3.8 (m, 1H), 3.4-3.6 (m, 2H), 3.21 (s, 3H), 3.0-3.1 (m, 1H), 2.8-2.9 (m, 1H), 2.7-2.8 (m, 2H), 2.5-2.7 (m, 1H), 2.2-2.3 (m,1H), 2.0-2.1 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.6-1.7 (m, 1H), 1.2-1.4 (m, 1H), 1.0-1.1(m, 3H)

实施例S86. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮 (86) 的合成

步骤1. 6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶：向6-氯-3-碘-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶（1 g，3.58 mmol）在DMF（20 mL）中的0ºC溶液中添加氢化钠（0.150 g，3.76mmol），将反应混合物搅拌30 min。然后逐滴添加氢化钠（0.150 g，3.76 mmol）。允许将反应混合物温热至室温并且再搅拌1 h。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）淬灭并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤并且在减压下浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈白色固体的标题化合物（0.75 g，2.56 mmol，71.4%产率）。MS (ESI) m/z 293.8 [M+H]⁺; ¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ ppm 8.59 (s, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 4.06 (d, J=0.98 Hz, 3 H)。

步骤2. 3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶：在100ºC下将6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶（415 mg，1.414 mmol）、(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)硼酸（521 mg，1.555 mmol）和碳酸氢钠（261 mg，3.11 mmol）在DME（10mL）和水（2 mL）的混合溶剂中的溶液与四(三苯基膦)钯(0)（163 mg，0.141 mmol）一起搅拌15 h。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25 mL）处理并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1 X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤并且在减压下浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到呈白色固体的标题化合物（300 mg，0.657mmol，46.4%产率）。MS (ESI) m/z 457.2 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm8.89 (d, J=0.98 Hz, 1 H), 8.02 (d, J=8.19 Hz, 1 H), 7.86 (d, J=0.98 Hz, 1 H),7.26 - 7.49 (m, 10 H), 6.63 (d, J=8.19 Hz, 1 H), 5.52 (s, 2 H), 5.44 (s, 2H), 4.02 - 4.08 (m, 3 H)。

步骤3. (3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯：向3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-氯-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶（400 mg，0.875 mmol）、RuPhos Pd G3（73.2 mg，0.088mmol）和(3R,4R)-4-氨基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（188 mg，0.875 mmol）在1,4-二噁烷（5 mL）中的溶液中添加碳酸铯（570 mg，1.751 mmol）。将反应混合物用氩气吹扫1 min并且将它们在100ºC下搅拌15 h。LCMS指示反应完成。将反应混合物用饱和氯化钠水溶液（25mL）处理并且然后用乙酸乙酯（3 X 25 mL）萃取。将有机相合并并且用饱和氯化钠水溶液（1X 25 mL）洗涤。将有机层经无水硫酸镁干燥，通过硅藻土过滤并且在减压下浓缩。将粗品通过硅胶柱色谱法（在己烷中的0-100%乙酸乙酯）纯化。将所希望的级分在减压下浓缩得到固体，将其通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1% TFA（0.1% TFA），经30min）进一步纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（95 mg，0.150 mmol，17.1%产率）。MS (ESI) m/z 635.0 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 8.60 (br s, 1 H), 7.96 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 7.23 - 7.51 (m, 10 H),6.59 (d, J=8.07 Hz, 1 H), 6.34 (br s, 1 H), 5.49 (s, 2 H), 5.41 (s, 2 H),3.93 (br s, 2 H), 3.87 (s, 3 H), 3.44 - 3.56 (m, 1 H), 2.88 (br s, 1 H), 2.51- 2.62 (m, 1 H), 1.92 (br d, J=9.66 Hz, 1 H), 1.52 - 1.63 (m, 1 H), 1.41 (s,9 H), 1.16 - 1.29 (m, 1 H), 0.89 (d, J=6.48 Hz, 3 H)。

步骤4. 3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮：在80ºC下在氢气（1 atm）下将(3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（0.095 g，0.150 mmol）在乙醇（10 mL）中的溶液与钯碳10% w/w（0.016 g，0.015 mmol）一起搅拌15 h。将反应混合物通过硅藻土过滤，将洗脱物浓缩并且然后在室温下将残余物与在DCM（1 mL）中的1 mL TFA一起搅拌30 min。在减压下去除TFA和溶剂，以得到呈TFA盐的所希望的产物，将其不经进一步纯化使用（53 mg，0.149 mmol，99%产率）。

步骤5. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮：使用通用程序6使用3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-基)哌啶-2,6-二酮（53 mg，0.149 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（43.5 mg，0.149 mmol）完成的标题化合物合成。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（7.7 mg，0.012 mmol，8.23%产率）。MS (ESI) m/z 628.8 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 10.89(s, 1 H), 8.65 (s, 1 H), 8.49 (d, J=0.86 Hz, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 7.57 (s, 1H), 7.52 (dd, J=8.50, 1.90 Hz, 1 H), 6.94 (d, J=8.44 Hz, 1 H), 6.23 - 6.31(m, 2 H), 4.42 - 4.59 (m, 2 H), 4.28 (dd, J=9.84, 5.07 Hz, 1 H), 3.78 (s, 3H), 3.55 - 3.66 (m, 1 H), 3.53 (s, 2 H), 3.10 (s, 3 H), 2.89 - 3.04 (m, 1 H),2.54 - 2.65 (m, 2 H), 2.35 - 2.41 (m, 1 H), 2.09 - 2.23 (m, 1 H), 1.98 (br d,J=10.39 Hz, 1 H), 1.54 - 1.72 (m, 1 H), 1.16 - 1.37 (m, 1 H), 0.93 (d, J=6.36Hz, 3 H)。

实施例S87. (R)-3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(87) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% ACN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S84的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 13.41 min。LCMS C₃₃H₃₆ClN₉O₃理论值为641.3，实测值为642.3 [M+H]⁺；¹HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm) 10.84 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.01 (s, 1H),7.56 (br s, 1H), 7.52 - 7.45 (m, 2H), 6.96 - 6.88 (m, 2H), 6.65 (d, J = 1.6Hz, 1H), 4.24 (dd, J = 8.9, 5.1 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 3.15 -3.04 (m, 4H), 2.75 (s, 3H), 2.69 - 2.58 (m, 2H), 2.37 - 2.06 (m, 2H), 1.86 -1.52 (m, 4H), 1.25 (br d, J = 6.8 Hz, 3H)。

实施例S88. (S)-3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(88) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-(((2S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MECN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S84的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 23.26 min。LCMS C₃₃H₃₆ClN₉O₃理论值为641.3，实测值为642.3 [M+H]⁺；¹HNMR (400 MHz, CD₃SOCD₃, 298 K) δ (ppm) = 10.84 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.01 (s,1H), 7.56 (br s, 1H), 7.53 - 7.44 (m, 2H), 6.96 - 6.87 (m, 2H), 6.65 (d, J =1.6 Hz, 1H), 4.24 (dd, J = 9.1, 5.1 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.54 (s, 2H),3.15- 3.04 (m, 4H), 2.75 (s, 3H), 2.68 - 2.58 (m, 2H), 2.36 - 2.09 (m, 2H), 1.88- 1.51 (m, 4H), 1.24 (br d, J = 7.0 Hz, 3H)。

实施例S89. 3-(6-((1-(5-氯-4-((1-乙基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (89) 的合成

步骤1：3-(6-((1-(5-氯-4-((1-乙基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序1和6使用5-氨基-1-乙基吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(哌啶-4-基氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.64 (s, 1H), 8.44 (br, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.54(s, 1H), 7.54 – 7.49 (m, 1H), 7.32 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.98 (d, J= 8.4 Hz,1H), 6.52 (dd, J= 8.8, 1.7 Hz, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.82 – 5.73 (m, 1H), 4.42 –4.35 (m, 2H), 4.18 (dd, J= 8.8, 5.1 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.67 (q, J= 7.2Hz, 2H), 3.53 (s, 2H), 3.11 (t, J= 11.3 Hz, 2H), 2.64 – 2.56 (m, 2H), 2.30 –2.21 (m, 1H), 2.18 – 2.10 (m, 1H), 2.04 – 1.94 (m, 2H), 1.36 – 1.26 (m, 2H),1.13 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。

实施例S90. (R)-3-(6-((1-(5-氯-4-((1-乙基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (90) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-((1-(5-氯-4-((1-乙基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MECN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S89的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt =11.16 min。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz,DMSO) δ 10.81 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.60 - 7.47 (m, 2H), 7.32(d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.52 (dd, J = 1.5, 8.8 Hz,1H), 6.46 (s, 1H), 5.76 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.38 (br d, J = 13.4 Hz, 2H),4.18 (dd, J = 5.1, 8.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.71 - 3.59 (m, 3H), 3.53 (s,2H), 3.11 (br t, J = 11.0 Hz, 2H), 2.62 - 2.58 (m, 2H), 2.30 - 2.21 (m, 1H),2.19 - 2.09 (m, 1H), 2.00 (br d, J = 9.4 Hz, 2H), 1.38 - 1.26 (m, 2H), 1.13(t, J = 7.2 Hz, 3H)

实施例S91. (S)-3-(6-((1-(5-氯-4-((1-乙基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (91) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-((1-(5-氯-4-((1-乙基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S89的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt =18.20 min。LCMS C₃₂H₃₄ClN₉O₃理论值为627.3，实测值为628.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz,DMSO) δ 10.81 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.32(d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.55 - 6.49 (m, 1H), 6.46 (s,1H), 5.76 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.43 - 4.35 (m, 2H), 4.18 (dd, J = 5.2, 8.9Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.71 - 3.59 (m, 3H), 3.53 (s, 2H), 3.11 (br t, J =11.2 Hz, 2H), 2.62 - 2.58 (m, 2H), 2.32 - 2.20 (m, 1H), 2.19 - 2.11 (m, 1H),2.00 (br d, J = 8.6 Hz, 2H), 1.37 - 1.27 (m, 2H), 1.13 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。

实施例S92. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((6-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (92)的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((6-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序1和6使用5-氨基-6-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMSC₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ ppm10.81 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.27 - 7.33 (m, 2H), 7.02 (d, J =10.64 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 8.80, 1.59 Hz, 1H), 6.40 (s, 1H), 5.67 (d, J =9.05 Hz, 1H), 4.33 (br s, 2H), 4.16 (dd, J = 8.74, 5.32 Hz, 1H), 3.80 (s,3H), 3.53 (s, 2H), 3.23 (br d, J = 5.38 Hz, H), 3.10 (s, 3 H), 2.91 (br t, J= 11.74 Hz, 1H), 2.54 - 2.64 (m, 3H), 2.19 - 2.30 (m, 1H), 2.09 - 2.19 (m,1H), 1.99 (br d, J = 10.15 Hz, 1H), 1.45 - 1.56 (m, 1H), 1.10 (br d, J =13.33 Hz, 1H), 0.90 (br d, J = 6.48 Hz, 3H)。

实施例S93. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((6-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(93) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((6-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S92的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 8.86 min。LCMS C₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹HNMR (500 MHz, DMSO) δ ppm 10.80 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.36 -7.27 (m, 2H), 7.02 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 1.5, 8.8 Hz, 1H), 6.40(s, 1H), 5.66 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.42 - 4.25 (m, 2H), 4.16 (dd, J = 5.1,8.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 3.23 (dq, J = 3.9, 9.7 Hz, 1H), 3.10(s, 3H), 2.96 - 2.87 (m, 1H), 2.64 - 2.57 (m, 3H), 2.31 - 2.19 (m, 1H), 2.18- 2.09 (m, 1H), 1.99 (br d, J = 10.0 Hz, 1H), 1.58 - 1.43 (m, 1H), 1.17 -1.04 (m, 1H), 0.90 (br d, J = 6.3 Hz, 3H)。

实施例S94. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((6-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(94) 的合成

步骤1：(s)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((6-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S92的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 12.57 min。LCMS C₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ ppm10.80 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.35 -7.27 (m, 2H), 7.02 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 1.7, 8.8 Hz, 1H), 6.40(s, 1H), 5.66 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.45 - 4.23 (m, 2H), 4.16 (dd, J = 5.2,8.8 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 3.27 - 3.17 (m, 1H), 3.10 (s, 3H),2.97 - 2.86 (m, 1H), 2.61 - 2.57 (m, 3H), 2.29 - 2.19 (m, 1H), 2.18 - 2.09(m, 1H), 1.99 (br d, J = 9.9 Hz, 1H), 1.55 - 1.47 (m, 1H), 1.17 - 1.04 (m,1H), 0.90 (br d, J = 6.3 Hz, 3H)。

实施例S95. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((7-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (95)的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((7-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：根据通用程序1和6使用5-氨基-7-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMSC₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ ppm10.81 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.61 (br d, J = 13.57 Hz, 1H),7.43 (s, 1 H), 7.31 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.41 - 6.61 (m, 2H), 5.70 (d, J =8.93 Hz, 1H), 4.40 - 4.59 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 8.68, 5.26 Hz, 1H), 3.81 (s,3H), 3.61 (s, 2H), 3.26 (d, J = 2.45 Hz, H), 3.01 - 3.11 (m, 1H), 2.69 - 2.78(m, 1H), 2.56 - 2.64 (m, 2H), 2.19 - 2.30 (m, 1H), 2.04 - 2.18 (m, 2H), 1.53- 1.67 (m, 1H), 1.11 - 1.26 (m, 1H), 0.99 (d, J = 6.48 Hz, 3H)。

实施例S96. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((7-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(96) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((7-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S95的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 10.48 min。LCMS C₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ ppm 10.81 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.62(br d, J = 13.1 Hz, 1H), 7.44 (br s, 1H), 7.31 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.51(br d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.70 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.58 -4.41 (m, 2H), 4.25 - 4.12 (m, 1H), 3.82 (br s, 3H), 3.62 (br s, 2H), 3.27 (brs, 3H), 3.14 - 3.02 (m, 1H), 2.83 - 2.69 (m, 1H), 2.64 - 2.59 (m, 1H), 2.33 -2.04 (m, 3H), 1.69 - 1.55 (m, 1H), 1.31 - 1.13 (m, 1H), 0.99 (br d, J = 5.6Hz, 3H)

实施例S97. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((7-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(97) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((7-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S95的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 15.07 min。LCMS C₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ ppm10.81 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.62(br d, J = 14.2 Hz, 1H), 7.44 (br s, 1H), 7.32 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.52(br d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.70 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.49 (brt, J = 13.4 Hz, 2H), 4.18 (dd, J = 5.3, 8.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.62 (s,2H), 3.27 (br s, 3H), 3.07 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 2.82 - 2.69 (m, 1H), 2.66 -2.57 (m, 2H), 2.31 - 2.08 (m, 3H), 1.66 - 1.57 (m, 1H), 1.29 - 1.13 (m, 1H),1.00 (d, J = 6.3 Hz, 3H)。

实施例S98. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((4-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (98)的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((4-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序1和6使用5-氨基-4-氟-1-甲基吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMSC₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm10.81 (s, 1 H), 8.64 (s, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 7.35 (t, J=7.95 Hz, 1 H), 7.29(d, J=8.80 Hz, 1 H), 6.84 (d, J=8.31 Hz, 1 H), 6.49 (dd, J=8.86, 1.53 Hz, 1H), 6.40 (s, 1 H), 5.67 (d, J=8.93 Hz, 1 H), 4.21 - 4.48 (m, 2 H), 4.12 -4.21 (m, 1 H), 3.79 (s, 3 H), 3.53 - 3.70 (m, 2 H), 3.23 (qd, J=9.78, 3.79Hz, 1 H), 3.13 (s, 3 H), 2.86 - 2.98 (m, 1 H), 2.52 - 2.63 (m, 3 H), 2.19 -2.31 (m, 1 H), 2.08 - 2.19 (m, 1 H), 1.93 - 2.05 (m, 1 H), 1.43 - 1.60 (m, 1H), 0.99 - 1.17 (m, 1 H), 0.79 - 0.96 (m, 3 H)。

实施例S99. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((4-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(99) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((4-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S98的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 8.56 min。LCMS C₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.80 (br s, 1H), 9.99 - 9.96 (m, 1H), 8.63 (brs, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.39 - 7.26 (m, 2H), 6.84 (br d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.49(br d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.40 (br s, 1H), 5.66 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.45 -4.22 (m, 2H), 4.16 (br dd, J = 4.9, 8.5 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.70 - 3.51(m, 2H), 3.26 - 3.18 (m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.96 - 2.87 (m, 1H), 2.67 - 2.55(m, 3H), 2.29 - 2.19 (m, 1H), 2.18 - 2.10 (m, 1H), 1.99 (br d, J = 10.1 Hz,1H), 1.54 - 1.43 (m, 1H), 1.15 - 1.04 (m, 1H), 0.89 (br s, 3H)。

实施例S100. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((4-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(100) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((4-氟-1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S98的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 12.25 min。LCMS C₃₂H₃₃ClFN₉O₃理论值为645.2，实测值为646.4 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.80 (s, 1H), 8.63 (br s, 1H), 8.00 (s, 1H),7.46 - 7.20 (m, 2H), 6.84 (br d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.49 (br d, J = 8.8 Hz,1H), 6.40 (br s, 1H), 5.66 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.42 - 4.21 (m, 2H), 4.16(br dd, J = 5.0, 8.3 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.72 - 3.52 (m, 2H), 3.27 - 3.19(m, 1H), 3.12 (s, 3H), 2.97 - 2.87 (m, 1H), 2.59 (br d, J = 4.5 Hz, 3H), 2.29- 2.19 (m, 1H), 2.18 - 2.07 (m, 1H), 1.99 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.57 -1.42 (m, 1H), 1.18 - 1.02 (m, 1H), 0.89 (br s, 3H)。

实施例S101. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-吗啉代乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(101) 的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-吗啉代乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序1和6使用5-氨基-1-(2-吗啉代乙基)吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₇H₄₃ClN₁₀O₄理论值为726.3，实测值为727.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.84 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.64-7.53 (m, 2H), 7.31 (d,J = 8.80 Hz, 1H), 7.13-7.00 (m, 1H), 6.50 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H),5.70 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 4.52-4.45 (m, 2H), 4.19-4.16 (m, 1H), 4.08-3.90(m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.65-3.45 (m, 6H), 3.40-3.35 (m, 1H), 3.19-3.11 (s,1H), 3.05-2.95 (m, 1H), 2.71-2.60 (m, 1H), 2.59-2.54 (m, 2H), 2.46-2.42 (m,1H), 2.31-2.22 (m, 1H), 2.19-2.08 (m, 2H), 1.62-1.55 (m, 1H), 1.21-1.15 (m,1H), 0.98 (d, J = 6.0 Hz, 3H)。

实施例S102. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-吗啉代乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (102) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-吗啉代乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S101的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离。LCMS C₃₇H₄₃ClN₁₀O₄理论值为726.3，实测值为727.2 [M+H]⁺；¹H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 10.80 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.56 (br s,1H), 7.50 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.3Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.5, 8.9 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H), 5.68 (d, J = 8.9 Hz,1H), 4.51 - 4.41 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 5.2, 8.6 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.76(br t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.56 - 3.48 (m, 5H), 3.02 (br t, J = 12.3 Hz, 1H),2.73 - 2.57 (m, 4H), 2.42 (br s, 3H), 2.30 - 2.01 (m, 4H), 1.64 - 1.51 (m,1H), 1.23 - 1.11 (m, 1H), 0.96 (br d, J = 6.4 Hz, 3H)。

实施例S103. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-吗啉代乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (103) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-吗啉代乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S101的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离。LCMS C₃₇H₄₃ClN₁₀O₄理论值为726.3，实测值为727.2 [M+H]⁺；¹H NMR(500 MHz, DMSO-d6) δ 10.80 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.56 (s, 1H),7.50 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.99 (br d, J = 8.5Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.5, 8.8 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H), 5.68 (d, J = 9.1 Hz,1H), 4.46 (br s, 2H), 4.17 (dd, J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (brt, J = 6.2 Hz, 2H), 3.52 (br d, J = 16.2 Hz, 6H), 3.02 (br t, J = 12.6 Hz,1H), 2.74 - 2.56 (m, 4H), 2.42 (br s, 3H), 2.31 - 2.03 (m, 3H), 1.63 - 1.53(m, 1H), 1.22 - 1.12 (m, 1H), 0.97 (br d, J = 6.3 Hz, 3H)。

实施例S104. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-(甲基氨基)乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (104) 的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-(甲基氨基)乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序1、6和5使用(2-(5-氨基-2-氧代吲哚啉-1-基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₄H₃₉ClN₁₀O₃理论值为670.3，实测值为672.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.84 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.59(s, 1H), 7.51 (d, J = 8.40, 1.60 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.01 (d,J = 8.40 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 8.80, 1.60 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.69-5.58(m, 1H), 4.55-4.47 (m, 2H), 4.19-4.16 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.80-3.75 (m,2H), 3.53 (s, 2H), 3.05-2.96 (s, 1H), 2.85-2.75 (m, 2H), 2.72-2.65 (m, 1H),2.62-2.55 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.28-2.20 (m, 2H), 2.19-2.05 (m, 1H), 1.62-1.53 (m, 1H), 1.25-1.18 (m, 1H), 0.97 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。

实施例S105. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-(甲基氨基)乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (105) 的合成

然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S104的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 18.13 min。LCMS C₃₄H₃₉ClN₁₀O₃理论值为670.3，实测值为672.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.80 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.50 (dd, J = 1.8, 8.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.8 Hz,1H), 6.99 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.7, 8.8 Hz, 1H), 6.44 (s, 1H),5.68 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.53 - 4.41 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 5.1, 8.8 Hz,1H), 3.81 (s, 3H), 3.71 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.07 - 2.96 (m,1H), 2.73 - 2.57 (m, 7H), 2.32 - 2.20 (m, 5H), 2.19 - 2.02 (m, 3H), 1.64 -1.54 (m, 1H), 1.20 - 1.11 (m, 1H), 0.97 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。

实施例S106. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2-(甲基氨基)乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (106) 的合成

然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S104的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 40.27 min。LCMS C₃₄H₃₉ClN₁₀O₃理论值为670.3，实测值为672.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.80 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.01(s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.50 (dd, J = 1.7, 8.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.7 Hz,1H), 6.99 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.5, 8.8 Hz, 1H), 6.44 (s, 1H),5.68 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.53 - 4.39 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 5.1, 8.7 Hz,1H), 3.81 (s, 3H), 3.70 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.02 (br t, J =11.7 Hz, 1H), 2.74 - 2.58 (m, 7H), 2.31 - 2.20 (m, 4H), 2.19 - 2.03 (m, 2H),1.58 (br dd, J = 4.5, 5.8 Hz, 1H), 1.22 - 1.12 (m, 1H), 0.97 (d, J = 6.4 Hz,3H)。

实施例S107. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(3-氟-3-甲基丁基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (107) 的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(3-氟-3-甲基丁基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序1和6使用5-氨基-1-(3-氟-3-甲基丁基)吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₆H₄₁ClFN₉O₃理论值为701.3，实测值为702.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆): δ 10.82 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.46 (d,J = 8.40 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.53(d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.47 (s, 1H), 4.27-4.25 (m, 2H), 4.19-4.16 (m, 1H),3.81 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 3.36-3.31 (m, 1H), 3.18-3.12 (m, 1H), 2.88-2.82(m, 1H), 2.63-2.58 (m, 2H), 2.26-2.23 (m, 1H), 2.16-2.09 (m, 2H), 1.92-1.83(m, 2H), 1.65-1.63 (m, 1H), 1.36 (d, J = 21.60 Hz, 6H), 1.24-1.22 (m, 1H),0.96 (d, J = 6.40 Hz, 3H)。

实施例S108. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(3-氟-3-甲基丁基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (108) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(3-氟-3-甲基丁基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S107的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 7.46 min。LCMS C₃₆H₄₁ClFN₉O₃理论值为701.3，实测值为702.2 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.80 (s, 1H), 8.70 (br s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 1.8, 8.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.7 Hz,1H), 6.93 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.4, 8.8 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H),5.68 (br d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.52 - 4.39 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 5.1, 8.7 Hz,1H), 3.81 (s, 3H), 3.78 - 3.72 (m, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.02 (br t, J = 12.2Hz, 1H), 2.73 - 2.56 (m, 4H), 2.31 - 2.04 (m, 4H), 1.96 - 1.84 (m, 2H), 1.64- 1.52 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.26 - 1.10 (m, 2H), 0.96 (d, J =6.4 Hz, 3H)。

实施例S109. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(3-氟-3-甲基丁基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (109) 的合成

步骤1：(S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(3-氟-3-甲基丁基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S107的产物。将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 10.56 min。LCMS C₃₆H₄₁ClFN₉O₃理论值为701.3，实测值为702.2 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.80 (s, 1H), 8.68 (br s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 1.8, 8.5 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.7 Hz,1H), 6.92 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 1.4, 8.8 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H),5.68 (br d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.53 - 4.39 (m, 2H), 4.17 (dd, J = 5.2, 8.9 Hz,1H), 3.81 (s, 3H), 3.77 - 3.70 (m, 2H), 3.53 (s, 2H), 3.02 (br t, J = 12.3Hz, 1H), 2.72 - 2.58 (m, 4H), 2.30 - 2.03 (m, 4H), 1.94 - 1.83 (m, 2H), 1.63- 1.53 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.28 - 1.12 (m, 2H), 0.96 (d, J =6.4 Hz, 3H)。

实施例S110. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2,2-二氟丙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(110) 的合成

根据通用程序1和6使用5-氨基-1-(2,2-二氟丙基)吲哚啉-2-酮和3-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₄H₃₆ClF₂N₉O₃理论值为691.3，实测值为692.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆): δ 10.98 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.52(dd, J = 2.00 Hz和8.4 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 8.80Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 1.60 Hz和 8.8 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.70 (d, J = 8.80Hz, 1H), 4.54-4.46 (m, 2H), 4.19-4.10 (m, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.65 (s, 2H),3.02 (t, J = 12.80 Hz, 1H), 2.69-2.65 (m, 2H), 2.29-2.22 (m, 1H), 2.18-2.12(m, 1H), 2.09-2.06 (m, 1H), 1.67 (t, J = 19.2 Hz, 3H), 1.62-1.58 (m, 2H),1.18-1.13 (m, 1H), 0.97 (d, J = 6.80 Hz, 4H)。

实施例S111. (R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2,2-二氟丙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (111) 的合成

步骤1：(R)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2,2-二氟丙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1 mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S110的产物。将标题化合物作为第一洗脱峰分离，Rt = 6.18 min。LCMS C₃₄H₃₆ClF₂N₉O₃理论值为691.3，实测值为692.2[M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.80 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.02 (s, 1H),7.58 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 1.9, 8.6 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.02(d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.50 (dd, J = 1.6, 8.8 Hz, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.68 (brd, J = 9.1 Hz, 1H), 4.54 - 4.39 (m, 2H), 4.26 - 4.06 (m, 3H), 3.81 (s, 3H),3.64 (s, 2H), 3.02 (br t, J = 11.8 Hz, 1H), 2.74 - 2.56 (m, 4H), 2.38 - 2.34(m, 1H), 2.30 - 2.03 (m, 4H), 1.66 (t, J = 19.1 Hz, 3H), 1.60 - 1.53 (m, 1H),1.22 - 1.13 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。

实施例S112. (S)-3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-(2,2-二氟丙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (112) 的合成

然后在22ºC下使用制备型HPLC（具有Regis Whelk-O1 SS，21 x 250 mm，5 u柱，1mL/min流速，在100% MeCN（无添加剂）中的等度洗脱）分离实施例S110的产物.将标题化合物作为第二洗脱峰分离，Rt = 8.48 min。LCMS C₃₄H₃₆ClF₂N₉O₃理论值为691.3，实测值为692.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.80 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 1H), 7.30 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.02(d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.53 - 6.48 (m, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.68 (d, J = 9.1 Hz,1H), 4.52 - 4.40 (m, 2H), 4.20 - 4.08 (m, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.64 (s, 2H),3.07 - 2.96 (m, 1H), 2.73 - 2.58 (m, 6H), 2.38 - 2.34 (m, 1H), 2.31 - 2.03(m, 3H), 1.66 (t, J = 19.1 Hz, 3H), 1.60 - 1.53 (m, 1H), 1.23 - 1.12 (m, 1H),0.96 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。

下表3中的实施例是根据表中概述的通用程序用本文件中发现的它们各自的商业起始材料和中间体开始制备的。

实施例S124. 3-[6-[1-[5-氯-4-[(2-氧代吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮 (124) 的合成

步骤1：4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在反应小瓶中，将3-[6-苄氧基-2-(苯氧基甲基)-3-吡啶基]-6-溴-1-甲基-吲唑（300 mg，0.60 mmol）、4-溴哌啶-1-甲酸叔丁酯（250 mg，0.95 mmol）、[4,4′-双(1,1-二甲基乙基)-2,2′-联吡啶-N1,N1′]双[3,5-二氟-2-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基-N]苯基-C]铱(III)六氟磷酸盐（6.73 mg，0.0100 mmol）、三(三甲基甲硅烷基)硅烷（149.08 mg，0.6000mmol）和氢氧化锂（28.72 mg，1.2 mmol）添加到配备有搅拌棒的小瓶中。密封并且用氮气吹扫，然后添加1,4-二噁烷（2 mL）。分开制备预催化剂溶液。将氯化镍(II)乙二醇二甲醚复合物（6.59 mg，0.030 mmol）和4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶（8.05 mg，0.030 mmol）添加到配备有搅拌棒的小瓶中。密封并且用氮气吹扫。添加1,4-二噁烷（2 mL）并且搅拌/超声处理10min。将0.2 mL预催化剂溶液添加到初始反应小瓶中。此后，用氩气吹扫并且搅拌10分钟。用石蜡膜密封，并且在室温下用34 W蓝色LED灯辐照过夜。LCMS指示反应完成。将混合物浓缩并且用硅胶色谱法使用0-40% EA/己烷纯化，以得到呈淡黄色油状物的标题化合物（208mg，0.336 mmol，56.0%产率）。

步骤2：3-[6-[1-[5-氯-4-[(2-氧代吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮的合成：根据通用程序4、5和6使用4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₀H₂₉ClN₈O₃理论值为584.2，实测值为585.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ10.84 (s, 1H), 10.30 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.60 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.40 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.04 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.72 – 4.62 (m, 2H), 4.32 (dd, J =9.7, 5.1 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.46 (s, 2H), 2.97 – 2.87 (m, 3H), 2.69 –2.55 (m, 2H), 2.38 – 2.29 (m, 1H), 2.21 – 2.12 (m, 1H), 1.86 (d, J = 11.9 Hz,2H), 1.70 – 1.58 (m, 2H)。

实施例S125. 3-(6-(1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (125) 的合成

步骤1：3-(6-(1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成：根据通用程序4、5和6使用4-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₀H₂₉ClN₈O₃理论值为598.2，实测值为599.3 [M+H]⁺；¹H NMR (DMSO-d₆, 400MHz) δ 10.8-10.9 (m, 1H), 8.6-8.7 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.6-7.6 (m, 1H),7.5-7.6 (m, 2H), 7.4-7.5 (m, 1H), 7.0-7.1 (m, 1H), 6.9-7.0 (m, 1H), 4.6-4.7(m, 2H), 4.3-4.4 (m, 1H), 3.9-4.0 (m, 3H), 3.5-3.6 (m, 2H), 3.1-3.1 (m, 3H),2.9-3.0 (m, 3H), 2.5-2.7 (m, 2H), 2.3-2.4 (m, 1H), 2.1-2.2 (m, 1H), 1.8-1.9(m, 2H), 1.6-1.7 (m, 2H)。

实施例S126. 3-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (126) 的合成

步骤1：N-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-2-氧代-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯的合成。将N-(2-氧代-4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯（1.3 g，6.06 mmol）、6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（3.33 g，6.66 mmol）、Pd₂(dba)₃（277 mg，0.30 mmol）、Me₄tBuXphos（291 mg，0.61 mmol）和K₃PO₄（3.21 g，15.2 mmol）在tBuOH（60mL）中的混合物加热至100ºC持续24 h并且然后冷却至室温。将混合物在硅藻土上过滤并且用DCM（15 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在DCM中的0-10% MeOH的梯度进行纯化。将级分浓缩并且将残余物通过反相色谱法（C18）使用0-100% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进一步纯化，以得到呈固体的标题化合物（2.64g，69%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 634.7。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 7.91 (d, J = 8.1 Hz,1H), 7.66 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.50 – 7.45 (m, 2H),7.44 – 7.25 (m, 8H), 7.18 (s, 1H), 6.97 (dd, J = 8.7, 1.7 Hz, 1H), 6.60 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.48 (s, 2H), 5.43 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.91 (s, 1H), 3.77 –3.57 (m, 2H), 2.78 – 2.60 (m, 1H), 2.40 – 2.30 (m, 1H), 2.09 (d, J = 6.0 Hz,1H), 1.93 – 1.75 (m, 1H), 1.43 (s, 9H)。

步骤2：3-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。使用通用程序4、5和6使用N-[1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]-2-氧代-4-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯作为起始材料完成标题化合物的合成。将粗残余物通过反相色谱法（C18）使用0-100% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化。将级分在减压下浓缩并且将残余物通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用25%-35% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进一步纯化，以得到呈固体的标题化合物（8.6 mg，5%）。LCMS C₃₁H₃₀ClN₉O₄理论值为627.2，实测值为628.2 [M+H]⁺。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.91 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.98 (s,1H), 7.70 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.20(s, 1H), 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.38 (dd, J =10.1, 5.0 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.69 (s, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.12 (s, 3H),2.78 – 2.58 (m, 4H), 2.47 – 2.33 (m, 2H), 2.23 – 2.15 (m, 2H), 1.96 – 1.88(m, 1H)。

实施例S127. 3-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (127) 的合成

步骤1：4-[苄基(甲基)氨基]哌啶-2-酮的合成：向哌啶-2,4-二酮（1.0 g，8.8mmol）在DCE（25 mL）中的溶液中依序添加N-甲基-1-苯基-甲胺（1.1 mL，8.8 mmol）和AcOH（0.5 mL，8.8 mmol），并且将混合物在室温下搅拌2 h。此时，将NaBH₃CN（833 mg，13.3mmol）添加到反应混合物中并且继续搅拌36 h。添加NaHCO₃饱和水溶液（100 mL）和DCM（100mL）并且分离各层。将有机层用水（100 mL）、盐水（20 mL）洗涤，干燥（Na₂SO₄），过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈半固体的标题化合物（790 mg，41%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 219.2。¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 7.45 (br s, 1H), 7.35 – 7.28 (m, 4H), 7.27 – 7.19 (m, 1H),3.54 (q, J = 13.5 Hz, 2H), 3.22 – 3.16 (m, 1H), 3.08 – 2.99 (m, 1H), 2.89 –2.80 (m, 1H), 2.31 – 2.20 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.97 – 1.87 (m, 1H), 1.68 –1.54 (m, 1H)。

步骤2：4-[苄基(甲基)氨基]-1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-2-酮的合成：在室温下向4-[苄基(甲基)氨基]哌啶-2-酮（300 mg，1.24 mmol）、6-溴-3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑（681 mg，1.36 mmol，由Celgene提供的中间体）、Pd₂(dba)₃（226 mg，0.25 mmol）和XantPhos（358 mg，0.62 mmol）在1,4-二噁烷（6.2mL）中的溶液中添加Cs₂CO₃（564 mg，1.73 mmol）。将反应混合物加热至100ºC持续18 h并且然后冷却至室温。将混合物用DCM（100 mL）稀释，经硅藻土垫过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过硅胶色谱法使用在DCM中的0-20% MeOH的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（300 mg，38%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 639.3。

步骤3：3-[6-[4-[[5-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-2-基]-甲基-氨基]-2-氧代-1-哌啶基]-1-甲基-吲唑-3-基]哌啶-2,6-二酮的合成：使用通用程序4和6使用4-[苄基(甲基)氨基]-1-[3-(2,6-二苄氧基-3-吡啶基)-1-甲基-吲唑-6-基]哌啶-2-酮作为起始材料完成标题化合物的合成。将最终级分加热至100ºC持续18 h。然后通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用26%-36% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（13.6 mg，12%）。LCMS C₃₂H₃₂ClN₉O₄理论值为641.1，实测值为642.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.90 (br s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.04 (s, 1H),7.69 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.56 – 7.47 (m, 2H), 6.98 (d, J = 8.2Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.38 (dd, J = 10.1, 5.0 Hz, 1H), 3.98 (s,3H), 3.83 – 3.72 (m, 1H), 3.71 – 3.59 (m, 1H), 3.54 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 3.29(s, 1H), 3.09 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.76 – 2.60 (m, 4H), 2.44 – 2.31 (m,1H), 2.28 – 2.14 (m, 2H), 2.06 – 1.96 (m, 1H)。

实施例S128. 3-(6-((S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (128)的合成

步骤1：3-(6-((S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。使用实施例S128的产物使用手性SFC并且使用通用程序4、5和6中的第一洗脱异构体合成标题化合物。Rt 6.63 min，SFC柱：Lux C4；流动相：55 : 45（A : B），A = 液体CO₂，B = 在甲醇中的0.5%异丙胺；流速：5.0 mL/min；MS (ESI) 642.2 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ10.93 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.64(s, 1H), 7.54-7.52 (m, 2H), 6.99-6.94 (m, 2H), 4.94 (brs, 1H), 4.41-4.37 (m,1H), 3.99 (s, 3H), 3.82-3.75 (m, 1H), 3.67-3.62 (m, 1H), 3.55-3.54 (m, 2H),3.10 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.68-2.59 (m, 2H), 2.46-2.38 (m, 1H), 2.25-2.15(m, 2H), 2.05-1.95 (m, 1H)。

实施例S129. 3-(6-((R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (129)的合成

步骤1：3-(6-((R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。使用实施例S128的产物使用手性SFC并且使用通用程序4、5和6的第二洗脱异构体合成标题化合物。Rt 7.46 min，SFC柱：Lux C4; 流动相：55 : 45（A : B），A = 液体CO₂，B = 在甲醇中的0.5%异丙胺；流速：5.0 mL/min。MS (ESI) 642.2 [M+H]⁺; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ10.92 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.64(s, 1H), 7.53-7.51 (m, 2H), 6.99-6.94 (m, 2H), 4.95 (brs, 1H), 4.41-4.37 (m,1H), 3.99 (s, 3H), 3.81-3.76 (m, 1H), 3.67-3.64 (m, 1H), 3.55-3.54 (m, 2H),3.10 (s, 3H), 3.00 (s, 3H), 2.72-2.64 (m, 2H), 2.46-2.39 (m, 1H), 2.23-2.18(m, 2H), 2.03-1.98 (s, 1H)。

实施例S130. 3-(6-((3R,4S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-3-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (130) 的合成

步骤1：(S)-4-(苄基(甲基)氨基)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-2-酮（异构体2）的合成：将4-[苄基(甲基)氨基]哌啶-2-酮（3.66 g，16.8 mmol）和3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（7.0 g，14.0 mmol）在1,4-二噁烷（150 mL）中的搅拌溶液用氮气脱气5 min。然后添加Pd₂(dba)₃（1.28 g，1.40mmol）、Xantphos（1.619 g，2.80 mmol）和Cs₂CO₃（6.84 g，20.98 mmol）。将反应混合物加热至100ºC并且搅拌16 h。将反应混合物用水（200 mL）处理并且用乙酸乙酯（3 x 200 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并且在减压下浓缩。将粗产物通过硅胶上的快速柱色谱法用10%甲醇/二氯甲烷纯化，以得到呈灰白色固体的外消旋体（3.50 g）。将外消旋体通过手性制备型HPLC分离，以得到异构体1（Rt 8.73 min）和作为第二洗脱异构体的呈灰白色固体的标题化合物（异构体-2，1.55 g，2.408 mmol，17%产率）。手性HPLC方法：柱：Chiralpak IJ（250 x 4.6 mm），5.0 µm；在甲醇/异丙醇中的0.2%氨；流速：3.0 mL/min；Rt9.87 min。MS (ESI) [M+H]⁺ 638.3。

步骤2：(3R,4S)-4-(苄基(甲基)氨基)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3-甲基哌啶-2-酮的合成。在氮气下在-78ºC下向化合物(S)-4-(苄基(甲基)氨基)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-2-酮（250mg，0.392 mmol）在THF（8.0 mL）中的搅拌溶液中逐滴添加在己烷中的1.0 M LHMDS（0.784mL，0.784 mmol）并且搅拌45 min。然后添加碘甲烷（0.049 mL，0.784 mmol）并且缓慢温热至25ºC，搅拌1 h。将反应混合物用饱和NH₄Cl溶液（30 mL）处理并且用乙酸乙酯（3 x 50mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，以得到粗品。将粗产物通过硅胶上的快速柱色谱法用50%-70%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（180 mg，0.271 mmol，69%产率）。MS (ESI) [M+H]⁺ 652.3; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.53 (s, 1H),7.49-7.46 (m, 2H), 7.41-7.24 (m, 12 H), 6.93 (dd, J = 1.6 Hz和8.8 Hz, 1H),6.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.47 (s, 2H), 5.42 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.78 (d,J = 13.6 Hz, 1H), 3.68-3.66 (m, 2H), 3.52 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.80-2.76 (m,1H), 2.68-2.63 (m, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.18-2.13 (m, 1H), 1.96-1.91 (m, 1H),1.28 (d, J = 6.8 Hz, 1H)。

步骤3：3-(1-甲基-6-((3R,4S)-3-甲基-4-(甲基氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。在氮气下向(3R,4S)-4-(苄基(甲基)氨基)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3-甲基哌啶-2-酮（120 mg，0.180 mmol）在乙醇（2.5 mL）和THF（2.5 mL）中的搅拌溶液中添加TFA（0.014 L，0.180 mmol）和20%氢氧化钯碳（60 mg）。将反应混合物在50ºC下在氢化压力（5 atm）下搅拌16 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用THF和乙醇的1 : 1混合物（30 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈粗品的标题化合物（70 mg，0.172 mmol，96%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。MS (ESI) 384.2 [M+H]⁺。

步骤4：3-(6-((3R,4S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-3-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。在25ºC下向化合物3-(1-甲基-6-((3R,4S)-3-甲基-4-(甲基氨基)-2-氧代哌啶-1-基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮（50 mg，0.121 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（36.2 mg，0.121 mmol）在DMSO（1.0 mL）中的搅拌溶液中添加DIPEA（0.064 mL，0.364 mmol）。将反应混合物加热至80ºC并且搅拌5 h。将反应混合物冷却至室温并且通过制备型HPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（8 mg，0.012 mmol，10%产率）。LCMS C₃₃H₃₄ClN₉O₄理论值为655.2，实测值为656.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆): δ 10.93 (s, 1H), 8.93 (brs, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.8 Hz,1H), 7.63-7.48 (m, 3H), 6.99-6.96 (m, 2H), 4.81 (brs, 1H), 4.41-4.37 (m, 1H),3.99 (s, 3H), 3.69-3.62 (m, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.11 (s, 3H), 2.97 (s, 3H),2.21 - 2.18 (m, 2H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.02 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。

实施例S131. 3-(6-((3S,4R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-3-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (131) 的合成

步骤1：3-(6-((3S,4R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-3-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。通过针对实施例S131概述的程序并且使用来自实施例S131步骤1的第一洗脱异构体完成标题化合物的合成。LCMS C₃₃H₃₄ClN₉O₄理论值为655.2，实测值为656.2 [M+H]⁺；¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.62 - 10.53 (m, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.69(d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.52 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H),6.97 (dd, J = 1.4, 8.6 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.87 - 4.77 (m,1H), 4.36 (dd, J = 5.3, 9.3 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.76 - 3.66 (m, 2H), 3.53(s, 2H), 3.16 - 3.12 (m, 3H), 3.01 - 3.00 (m, 3H), 2.71 - 2.66 (m, 2H), 2.44- 2.33 (m, 2H), 2.29 - 2.19 (m, 2H), 2.05 - 1.96 (m, 1H), 1.07 (d, J = 7.0Hz, 3H)。

实施例S132. 2-((3R,4R)-4-((3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈 (132) 的合成

步骤1：1-(1-甲基-6-硝基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮的合成。将3-溴-1-甲基-6-硝基-吲唑（3.00 g，11.7 mmol）、六氢嘧啶-2,4-二酮（1.60 g，14.1 mmol）、磷酸三钾（6.22 g，29.3 mmol）、四甲基tBuXPhos（281 mg，0.58 mmol）和Pd₂(dba)₃（268 mg，0.29mmol）在叔丁醇（125 mL）中的混合物用氮气脱气3次。将反应混合物伴随搅拌加热至100ºC持续24 h并且然后冷却至室温。添加另外的Pd₂(dba)₃（268 mg，0.29 mmol）和四甲基tBuXPhos（281 mg，0.58 mmol）。将反应混合物加热至100ºC再持续16 h并且然后冷却至室温。在减压下蒸发挥发物。添加水（200 mL）并且通过在布氏漏斗上过滤收集所得沉淀物。然后将固体用水（3 x 50 mL）洗涤并且在真空下干燥。将材料在乙醚（100 mL）中研磨并且通过过滤收集，以得到呈固体的标题化合物（2.64 g，78%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS C₁₂H₁₁N₅O₄理论值为289.1，实测值为290.2 [M+H] +；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ10.67 (s, 1H), 8.70 (dd, J = 1.7, 0.7 Hz, 1H), 7.95 – 7.84 (m, 2H), 4.14 (s,3H), 3.97 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 2H)。

步骤2：1-(6-氨基-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮的合成。将1-(1-甲基-6-硝基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮（2.64 g，9.13 mmol）和10% Pd/C（0.97 g，0.91mmol）在甲醇（250 mL）中的混合物在氢气气氛下（1 atm）在室温下氢化6.5 h。将混合物通过硅藻土过滤并且用MeOH（5 x 45 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，将材料在乙醚中研磨并且通过过滤收集，以得到呈固体的标题（1.92 g，81%）。

步骤3：1-(6-碘-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮的合成。向冷却至0ºC的1-(6-氨基-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮（2.1 g，8.1 mmol）在乙酸（21 mL）中的溶液中依序添加H₂SO₄（1.11 mL，20.3 mmol）在水（5 mL）中的溶液，随后添加亚硝酸钠（838mg，12.15 mmol）在水（5 mL）中的溶液。将反应混合物在0ºC下搅拌2 h。此时，添加KI（4.0g，24 mmol）在水（5 mL）中的溶液并且将混合物在0ºC下搅拌2 h，然后温热至室温。将NaHSO₃的50%水溶液（50 mL）添加到混合物中并且搅拌18 h。通过过滤收集所得沉淀物，用水（3 x 10 mL）和Et₂O（3 x 10 mL）洗涤，然后在真空下干燥，以得到呈固体的标题化合物（1.98 g，66%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS C₁₂H₁₁IN₄O₂理论值为370.0，实测值为371.3 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.58 (s, 1H), 8.12 (d, J = 0.6Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 8.6, 1.3 Hz, 1H), 3.97 (s,3H), 3.92 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.75 (t, J = 6.7 Hz, 2H)。

步骤4：1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮的合成。将1-(6-碘-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮（500mg，1.35 mmol）、B₂pin₂（412 mg，1.62 mmol）、Pd(OAc)₂（30 mg，0.14 mmol）和KOAc（398 mg，4.05 mmol）在DMF（14 mL）中的混合物加热至80ºC持续18 h并且然后冷却至室温。将混合物通过硅藻土过滤并且用EtOAc（5 x 15 mL）洗涤。将水（50 mL）添加到滤液中并且分离各层。将有机层用水（5 x 25 mL）、盐水（25 mL）洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的50%-100% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（335 mg，67%）。LCMS C₁₈H₂₃BN₄O₄理论值为372.2，实测值为371.2 [M+H]⁺。

步骤5：[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]硼酸的合成。向1-[1-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮（403 mg，1.09 mmol）在THF（5 mL）和水（5 mL）中的溶液中依序添加NaIO₄（698 mg，3.27mmol）和1 M HCl水溶液（2.2 mL，2.2 mmol）。将反应混合物在室温下搅拌18 h。在减压下蒸发挥发物并且通过过滤收集所得沉淀物，用水（3 x 2 mL）和Et₂O（3 x 1 mL）洗涤，然后在真空下干燥，以得到呈固体的标题化合物（240 mg，76%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS C₁₂H₁₃BN₄O₄理论值为288.1，实测值为289.1[M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ10.54 (s, 1H), 8.16 (s, 2H), 8.01 (s, 1H), 7.59 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.92 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 6.6 Hz,2H)。

步骤6：(3R,4R)-4-[[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]硼酸（200 mg，0.69 mmol）、(3R,4R)-4-氨基-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯（228 mg，1.04mmol）、Cu(OAc)₂（152 mg，0.76 mmol）、Et₃N（190 µL，1.39 mmol）和3Å MS（100 mg）在DCE（12.6 mL）中的混合物在O₂（1 atm）下加热至50ºC持续18 h。将混合物通过硅藻土过滤并且用MeCN和MeOH的1 : 1混合物（3 x 10 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩并且将残余物通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用10%-80% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（76 mg，24%）。LCMS C₂₃H₃₂N₆O₄理论值为456.3，实测值为457.3 [M+H]⁺。

步骤7：2-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-5-甲腈的合成。

根据通用程序1使用2,4-二氯嘧啶-5-甲腈作为起始材料合成标题化合物。

步骤8：2-((3R,4R)-4-((3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈的合成。使用通用程序4和5使用(3R,4R)-4-[[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]-3-甲基-哌啶-1-甲酸叔丁酯和2-氯-4-[(1-甲基-2-氧代-吲哚啉-5-基)氨基]嘧啶-5-甲腈作为起始材料完成标题化合物的合成。将粗残余物通过制备型HPLC（BEH柱，C18）使用25%-55% MeCN和在水中的10 mM碳酸氢钠的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（6.7 mg，7%）。LCMS C₃₂H₃₃N₁₁O₃理论值为619.3，实测值为620.7 [M+H]⁺；¹H NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ 10.45 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.54 – 7.40 (m,2H), 7.26 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 8.8,1.9 Hz, 1H), 6.43 (s, 1H), 5.75 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.66 (br s, 1H), 4.44(s, 1H), 3.85 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.53 (s, 2H), 3.18 – 3.03(m, 3H), 2.85 – 2.75 (m, 1H), 2.72 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.14 – 2.06 (m, 1H),1.58 (s, 1H), 1.23 (s, 3H), 0.97 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。

实施例S133. 1-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮 (133) 的合成

步骤1：1-(6-(4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。与实施例S133类似在步骤6中使用N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯作为反应物合成标题化合物。LCMSC₃₂H₃₃N₁₁O₃理论值为614.2，实测值为615.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.50(br s, 1H), 8.53 (br s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.74 (br s, 1H), 7.56 (s, 1H),7.44 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.00 (br s, 1H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.83 (s,1H), 3.92 – 3.88 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.82 (d, J = 12.7 Hz, 2H), 3.69 (brs, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.82 (t, J = 11.8 Hz, 2H), 2.73 (t, J =6.7 Hz, 2H), 1.95 (br d, J = 10.5 Hz, 2H), 1.59 (br dd, J = 21.8, 10.6 Hz,2H)。

实施例S134. 1-(6-(1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮 (134) 的合成

步骤1：N-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成。向6-溴-1-甲基-吲唑-3-胺（1.0 g，4.42 mmol）在1,4-二噁烷（25 mL）中的溶液中添加Boc₂O（1.16 g，5.31mmol），并且将反应混合物加热至100ºC持续16 h并且然后冷却至室温。在减压下蒸发挥发物并且将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（1.18 g，82%）。MS (ESI) [M–tBu]⁺ 271.0。¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ 9.62 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.67 (dd, J = 8.6, 2.4 Hz, 1H), 7.20(dd, J = 8.7, 1.6 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 1.47 (s, 9H)。

步骤2：N-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-N-(2-氰基乙基)氨基甲酸叔丁酯的合成。向N-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基甲酸叔丁酯（1.18 g，3.61 mmol）在MeCN（15 mL）中的溶液中依序添加KF（429.4 mg，7.39 mmol）、丙烯腈（0.83 mL，12.6 mmol）和Al₂O₃（1.29 g，12.6 mmol），并且将反应混合物加热至回流持续18 h并且然后冷却至室温。将混合物在硅藻土上过滤并且用MeCN（20 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈油状物的标题化合物（1.0 g，73%），将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS (ESI) [M-tBu]⁺ 324.6。

步骤3：N-(3-氨基-3-氧代-丙基)-N-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成。在0ºC下向N-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)-N-(2-氰基乙基)氨基甲酸叔丁酯（12 g，31.6 mmol）在MeOH（90 mL）中的溶液中依序添加30% H₂O₂（128 mL，1.23 mol）和NH₄OH（118mL，0.92 mol），并且将反应混合物温热至室温并且搅拌6 h。添加水（500 mL）和DCM（500mL）并且分离各层。将有机层用Na₂SO₃饱和（200 mL）水溶液洗涤，干燥（Na₂SO₄），过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100% EtOAc的梯度纯化，随后使用和在DCM中的0-20% MeOH进行第二纯化，以得到呈固体的标题化合物（10.6 g，84%）。MS (ESI) [M+H]⁺ 397.1。

步骤4：1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮的合成。向N-(3-氨基-3-氧代-丙基)-N-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)氨基甲酸叔丁酯（10.6 g，26.7 mmol）在THF（125mL）中的溶液中添加KOtBu（6.0 g，53.4 mmol），并且将反应混合物在0ºC下搅拌2 h。添加EtOAc（100 mL）和1N HCl（40 mL）并且分离各层。将有机层用盐水（40 mL）洗涤，干燥（Na₂SO₄），过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过硅胶上的柱色谱法使用在己烷中的0-100%EtOAc的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（2.1 g，24%）。MS (ESI) [M+H]⁺323.1。

步骤5：4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将1-(6-溴-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮（600 mg，1.86 mmol）、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯（603 mg，1.95 mmol）、Pd(dppf)Cl₂∙DCM（75.8 mg，90 µmol）和K₃PO₄（1.18 g，5.57mmol）在1,4-二噁烷（16 mL）和水（4 mL）中的混合物加热至90ºC持续4 h并且然后冷却至室温。去除挥发物并且将残余物通过反相色谱法（C18）用20%-100% MeCN和在水中的10 mM甲酸铵的梯度进行纯化，以得到呈固体的标题化合物（200 mg，25%）。MS (ESI) [M–H]^–424.3。¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.54 (s, 1H), 7.62 – 7.57 (m, 2H), 7.26(dd, J = 8.6, 1.4 Hz, 1H), 6.29 (s, 1H), 4.07 – 4.02 (m, 2H), 3.99 (s, 3H),3.92 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.61 – 3.55 (m, 2H), 2.76 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.61– 2.55 (m, 2H), 1.44 (s, 9H)。

步骤6：1-(6-(1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。根据通用程序4、5和6使用4-[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₀H₃₀ClN₉O₃理论值为599.2，实测值为600.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 10.52 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.02 (d, J = 3.7Hz, 1H), 7.56 – 7.51 (m, 3H), 7.44 (s, 1H), 7.04 (dd, J = 8.6, 1.2 Hz, 1H),6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.72 – 4.62 (m, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.90 (t, J = 6.7Hz, 2H), 3.53 (s, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.98 – 2.88 (m, 3H), 2.74 (t, J = 6.7Hz, 2H), 1.90 – 1.83 (m, 2H), 1.71 – 1.58 (m, 2H)。

实施例S135. 1-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮 (135) 的合成

步骤1：4-[[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向1-(6-氨基-1-甲基-吲唑-3-基)六氢嘧啶-2,4-二酮（200 mg，0.77mmol）和4-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯（307 mg，1.54 mmol）在DCM（5 mL）中的搅拌溶液中添加乙酸（10 mg，0.77 mmol），将pH调节至6，并且在氮气气氛下在室温下分批添加三乙酰氧基硼氢化钠（490 mg，2.31 mmol）。在氮气气氛下在室温下将所得混合物搅拌2 h。通过LCMS监测反应。将反应混合物通过快速纯化，以得到呈黄色固体的标题化合物（240 mg，70%）。

步骤2：1-(6-((1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成：根据通用程序4、5和6使用4-[[3-(2,4-二氧代六氢嘧啶-1-基)-1-甲基-吲唑-6-基]氨基]哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₀H₃₁ClN₁₀O₃理论值为614，实测值为615 [M+H]⁺；¹H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.64 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.57 – 7.47 (m, 2H),7.27 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.55 – 6.44 (m, 2H), 4.38(d, J = 13.1 Hz, 2H), 3.83 (d, J = 11.9 Hz, 5H), 3.62 – 3.53 (m, 3H), 3.16 –3.12 (m, 5H), 2.73 – 2.70 (m, 3H), 2.09 – 1.94 (m, 2H), 1.36 – 1.20 (m, 2H)。

实施例S136. 1-(6-((1-(5-氯-4-((2-氧代-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(136) 的合成

步骤1：1-(6-((1-(5-氯-4-((2-氧代-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。根据通用程序1和6使用5-氨基-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚啉-2-酮和1-[1-甲基-6-(4-哌啶基氨基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₁H₃₀ClF₃N₁₀O₃理论值为682.2，实测值为683.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10.45 (s, 1H),8.69 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.58 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 8.6, 2.1Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.51 (dd, J =8.9, 1.8 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 5.82 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.58(q, J = 9.4 Hz, 2H), 4.43 – 4.33 (m, 2H), 3.86 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.82 (s,3H), 3.70 (s, 2H), 3.68 – 3.60 (m, 1H), 3.16 – 3.07 (m, 2H), 2.72 (t, J = 6.7Hz, 2H), 2.03 – 1.96 (m, 2H), 1.38 – 1.27 (m, 2H)。

实施例S137. 1-(6-((1-(5-氯-4-((1-(2-羟乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮 (137) 的合成

步骤1：1-(6-((1-(5-氯-4-((1-(2-羟乙基)-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。根据通用程序1和6使用5-氨基-1-(2-羟乙基)吲哚啉-2-酮和1-[1-甲基-6-(4-哌啶基氨基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₁H₃₃ClN₁₀O₄理论值为644.2，实测值为645.3 [M+H]⁺；¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10.45 (s, 1H), 8.63 (s,1H), 8.01 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.8Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.51 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 6.44 (s,1H), 5.82 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.79 (bs, 1H), 4.44 – 4.32 (m, 2H), 3.86 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.70 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.68 – 3.60 (m, 1H),3.57 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 3.53 (s, 2H), 3.16 – 3.07 (m, 2H), 2.72 (t, J = 6.7Hz, 2H), 2.04 – 1.96 (m, 2H), 1.38 – 1.26 (m, 2H)。

实施例S138. 2-(4-((3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈 (138) 的合成

步骤1：2-(4-((3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈的合成。根据通用程序1和6使用2,4-二氯嘧啶-5-甲腈和1-[1-甲基-6-(4-哌啶基氨基)吲唑-3-基]六氢嘧啶-2,4-二酮；盐酸盐作为起始材料合成标题化合物。LCMS C₃₁H₃₁N₁₁O₃理论值为605.3，实测值为606.5 [M+H]⁺; ¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10.45 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.45 (s,1H), 8.40 (s, 1H), 7.52 – 7.40 (m, 2H), 7.28 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.98 – 6.81(m, 1H), 6.51 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.84 (d, J = 8.2 Hz,1H), 4.67 – 4.50 (m, 1H), 4.41 – 4.27 (m, 1H), 3.86 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.82(s, 3H), 3.72 – 3.62 (m, 1H), 3.54 (s, 2H), 3.26 – 3.15 (m, 2H), 3.10 (s,3H), 2.72 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.03 (d, J = 10.1 Hz, 2H), 1.32 (td, J= 13.6,4.0 Hz, 2H)。MS (ESI) [M+H]⁺。

实施例S139. 1-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(139) 的合成

步骤1：1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)脲的合成。在密封管中向6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-胺（10 g，44.2 mmol）在乙腈（100 mL）中的搅拌溶液中添加异氰酸三甲基硅烷（20.4 g，177 mmol）。将反应混合物加热至65ºC并且搅拌16 h。将反应混合物冷却至25ºC并且在减压下浓缩，以获得粗产物。将粗产物通过硅胶上的柱色谱法用10%甲醇/DCM纯化，以得到呈棕色固体的标题化合物（4.0 g，13.7 mmol，30%产率）。

步骤2：1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。在0ºC下在氮气下向在0ºC下的1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)脲（4.0 g，13.67 mmol）在DMF（10mL）中的搅拌溶液中添加3,3-二甲氧基丙酸甲酯（2.431 g，16.40 mmol）。将反应混合物加热至90ºC并且搅拌3 h。将反应混合物冷却至室温并且用冰冷的水处理，以获得固体。将固体过滤并且用水洗涤，以得到呈黄色固体的标题化合物（4.1 g，4.63 mmol，33%产率）。LCMS: 320.9 [M+H]⁺。

步骤3：1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。向1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（4.0 g，12.46 mmol）在DMF（20 mL）中的搅拌溶液中添加碳酸铯（6.09 g，18.68 mmol）和1-(溴甲基)-4-甲氧基苯（3.76 g，18.68 mmol）。将反应混合物缓慢加热至80ºC并且搅拌3 h。将反应混合物倒入水中并且用乙酸乙酯（3 x 50 mL）萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以获得粗品。将粗产物通过硅胶上的快速柱色谱法用30%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到标题化合物（2.05 g，3.58 mmol，28%产率）。

步骤4：(3R,4R)-4-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（500 mg，0.872 mmol）在1,4-二噁烷（10 mL）中的搅拌溶液中添加碳酸铯（710 mg，2.181 mmol）和(3R,4R)-4-氨基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（280 mg 1.30 mmol），用氮气脱气10 min。然后添加CPhos-Pd-G3（703mg，0.872 mmol）。将反应混合物加热至90ºC并且搅拌18 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用乙酸乙酯洗涤。将滤液在减压下浓缩，以获得粗品。将粗产物通过硅胶上的快速柱色谱法用30%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈浅黄色固体的标题化合物（301mg，0.426 mmol，48%产率）。

步骤5：1-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。向(3R,4R)-4-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（300 mg，0.42mmol）在1,4-二噁烷（10 mL）中的搅拌溶液中添加TFA（5.0 mL）。将反应混合物加热至80ºC并且搅拌48 h。将反应混合物在减压下浓缩并且通过乙醚研磨，以得到呈棕色胶状固体的标题化合物（301 mg，0.426 mmol，48%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。

步骤6：1-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。在25ºC下向1-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（100 mg，0.172 mmol）在DMSO（2.0 mL）中的搅拌溶液中添加5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（50.3 mg，0.172 mmol）和DIPEA（0.15 mL，0.85 mmol）。将反应混合物加热至80ºC并且搅拌6 h。将反应混合物冷却至室温并且通过制备型HPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（7.0 mg，0.01 mmol，5%产率）。制备方法：Rt 10.5 min，柱：X-select C18 (150 x 19) mm，5.0 µm，在水中的0.1%甲酸/乙腈；流速：15.0 mL/min。LCMS C₃₁H₃₁N₁₀O₃理论值为626.2，实测值为627.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ11.55 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.74 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 7.57-7.52 (m, 2H), 7.23 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 6.58 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.5 (s, 1H), 5.90 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 5.71 (d, J = 7.60Hz, 1H), 4.52-4.46 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 3.11 (s, 3H), 3.06-2.99 (m, 1H), 2.72-2.69 (m, 1H), 2.33-2.29 (m, 1H), 2.09-2.07 (m, 1H), 1.62-1.58 (m, 1H), 1.31-1.17 (m, 2H), 0.98 (d, J = 5.60 Hz, 3H)。

实施例S140. 1-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-5-氟嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮 (140) 的合成

步骤1：5-氟-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。在氮气下在25ºC下向5-氟嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（5.0 g，38.4 mmol）在DMF（100 mL）中的搅拌溶液中添加三乙胺（5.36 mL，38.4 mmol）。将反应混合物冷却至0ºC并且逐滴添加氯甲酸甲酯（2.98mL，38.4 mmol）并且搅拌3 h。然后在0ºC下添加Et₃N（8.04 ml，57.6 mmol）和4-甲氧基苄基氯（7.82 mL，57.7 mmol）。将反应混合物缓慢温热至25ºC并且搅拌6 h。将反应混合物用冰冷的水（100 mL）处理并且用乙酸乙酯（2 x 100 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，以得到粗品。将粗品溶解于MeOH和DCM的1 : 1混合物（50 mL）中并且添加30% H₂O₂（4.32 mL，42.3 mmol），随后在0ºC下添加6.0 N NaOH（0.1 mL）。将反应混合物搅拌1 h并且用冰冷的水（100 mL）处理并且用二氯甲烷（2 x 100 mL）萃取。将合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗产物通过硅胶上的快速柱色谱法用50%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（5.10 g，17.58 mmol，46%产率）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 11.16 (d, J = 5.6 Hz, 1H),7.87 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.26-7.23 (m, 2H), 6.88-6.86 (m, 2H), 4.88 (s, 2H),3.72 (s, 3H)。

步骤2：1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-5-氟-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。在25ºC下向6-溴-1-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲唑（3.0 g，8.90 mmol）和分子筛（0.5 g）在DCM（40 mL）中的搅拌溶液中添加化合物5-氟-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（5.06 g，17.80 mmol）、Et₃N（2.481mL，17.80 mmol）和乙酸铜(II)（1.617 g，8.90 mmol）。将反应混合物在氧气下搅拌16 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液在真空下浓缩，以得到粗化合物。将粗产物通过硅胶上的快速柱色谱法用35%-45%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（1.2 g，2.61 mmol，29%产率）。¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 8.38 (d, J = 6.0 Hz,1H), 8.11 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 0.4 Hz和8.8 Hz, 1H), 7.37(dd, J= 1.2 Hz和8.4 Hz, 1H), 7.33-7.30 (m, 2H), 6.91-6.88 (m, 2H), 5.00 (s, 2H),4.07 (s, 3H), 3.73 (s, 3H)。

步骤3：(3R,4R)-4-((3-(5-氟-3-(4-甲氧基苄基)-2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将化合物1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-5-氟-3-(4-甲氧基苄基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（1.10 g，2.395 mmol）和(3R,4R)-4-氨基-3-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯（513 mg，2.395 mmol）在1,4-二噁烷（30.0 mL）中的搅拌溶液用氮气脱气5 min。然后添加CPhos-Pd-G3（97 mg，0.120mmol）和Cs₂CO₃（1.171 g，3.59 mmol）。将反应混合物加热至100ºC并且搅拌10 h。将反应混合物冷却至25ºC，用水（100 mL）处理并且用乙酸乙酯（2 x 100 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并且在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗产物通过硅胶上的快速柱色谱法用80%-100%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（400 mg，0.621mmol，26%产率）。LCMS：593.2 (M+H), Rt 3.467 min

步骤4：5-氟-1-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基-1-(2,2,2-三氟乙酰基)-1l4-哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。在25ºC下向化合物6（500mg，0.844 mmol）在TFA（0.65 mL，8.44 mmol）中的搅拌溶液中添加CF₃SO₃H（0.375 mL，4.22mmol）。将反应混合物加热至50ºC并且搅拌8 h。将反应混合物在真空下浓缩，以得到粗产物。将粗化合物与乙醚一起研磨并且在减压下干燥，以得到呈棕色固体的标题化合物（400mg，0.782 mmol，93%产率）。将粗产物不经进一步纯化而用于下一步骤。LCMS：372.7 [M+H]⁺。

步骤5：1-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-5-氟嘧啶-2,4 (1H,3H)-二酮的合成。在25ºC下向5-氟-1-(1-甲基-6-(((3R,4R)-3-甲基-1-(2,2,2-三氟乙酰基)-1l4-哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（100 mg，0.195 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（58.1 mg，0.195 mmol）在DMSO（2.0 mL）中的搅拌溶液中添加在DMSO（2.0 mL）中的DIPEA（0.102 mL，0.586 mmol）。将反应混合物加热至80ºC并且搅拌4 h。将反应混合物冷却至室温并且通过制备型HPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（30 mg，0.045 mmol，23%产率）。LCMS C₃₁H₃₀ClFN₁₀O₃理论值为644.2，实测值为645.2 [M+H]⁺；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 12.05 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.20(d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.52(dd, J = 1.6 Hz和8.8 Hz,1H), 7.27(d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.59 (dd, J = 1.6 Hz和9.2 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.90 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.49-4.46 (m, 2H),3.88 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 3.14 (s, 3H), 3.11-3.00 (m, 1H), 2.73-2.67 (m,1H), 2.09-2.07 (m, 1H), 1.56-1.63 (m, 1H), 1.24-1.15 (m, 1H), 0.98 (d, J =6.4 Hz, 3H)。

实施例S141-S144.化合物141-144的合成

下表4中的实施例是根据表中概述的通用程序用本文件中发现的它们各自的商业起始材料和中间体开始制备的。

实施例S145. 2-((3R,4R)-4-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈(145) 的合成

步骤1：(3R,4R)-4-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在0ºC下向(3R,4R)-4-氨基-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯（2.5 g，11.6 mmol）在DCM（10 mL）中的搅拌溶液中添加Cbz-Cl（1.97 g，11.6 mmol）和饱和碳酸钠水溶液（10 mL）。将反应混合物温热至25ºC并且搅拌2 h。将反应混合物用水（50 mL）淬灭并且用DCM（3 x 50 mL）萃取。将合并的有机层用水（50 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗残余物通过二氧化硅上的快速柱色谱法用40%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（3.3 g，9.42 mmol，81%产率）。

步骤2：(3R,4R)-4-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向氧化银(I)（10.9 g，47.1 mmol）和(3R,4R)-4-(((苄氧基) 羰基)氨基)-3-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯（3.3 g，9.42 mmol）在ACN（50 mL）中的搅拌溶液中逐滴添加碘甲烷（14.7 mL，235 mmol）。将反应混合物在25ºC下搅拌16 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用甲醇（3 x 50 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗残余物通过二氧化硅上的快速柱色谱法用25%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈无色液体的标题化合物（3.1g，8.45 mmol，90%产率）。

步骤3：(3R,4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在氮气下向(3R,4R)-4-(((苄氧基)羰基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯（3.0 g，8.23 mmol）在甲醇（20 mL）中的搅拌溶液中添加10%钯碳（1.0 g）。将反应混合物在1 atm氢化压力下在25ºC下搅拌3 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用甲醇（200 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈粗产物的标题化合物（1.7 g，7.38 mmol，90%产率）。将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤4：(3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将(3R,4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯（200 mg，0.87 mmol）和3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（435 mg，0.87 mmol）在甲苯（10 mL）中的搅拌溶液脱气10 min。然后在25ºC下添加NaO^tBu（167 mg，1.74 mmol）、Pd₂dba₃（80 mg，0.09 mmol）和CPhos（114 mg，2.26 mmol）。将反应混合物加热至100ºC并且搅拌12 h。将反应混合物倒入水（150 mL）中并且用乙酸乙酯（150 mL）稀释。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯（3 x 150 mL）萃取。将合并的有机层用盐水（150 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗残余物通过二氧化硅上的快速柱色谱法用25%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈浅棕色固体的标题化合物（485 mg，0.66 mmol，76%产率）。

步骤5：(3R,4R)-4-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。在氮气下向(3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯（485 mg，0.66 mmol）和三氟乙酸（0.05 mL，0.66 mmol）在乙醇（4 mL）和THF（4 mL）中的搅拌溶液中添加20%氢氧化钯碳（150 mg）。将反应混合物在1 atm氢化压力下在25ºC下搅拌3 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用甲醇（200 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈粗产物的标题化合物（300 mg，0.42 mmol，64%产率）。将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤6：3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序5使用(3R,4R)-4-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯（250 mg，0.53 mmol）作为起始材料合成标题化合物。

步骤7：2-((3R,4R)-4-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈的合成。使用通用程序6使用3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮（200 mg，0.38 mmol）和4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈（149 mg，0.38 mmol）完成标题化合物的合成。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（7.7 mg，0.012 mmol，8.23%产率）。MS (ESI) m/z 635.2 [M+H]⁺; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 10.82(s, 1H), 9.29 (s, 1H), 8.39 (d, J = 11.20 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 11.20 Hz,2H), 7.44 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 8.80Hz, 1H), 6.47 (s, 1H), 5.90 (s, 1H), 4.21- 4.07 (m, 2H), 4.21- 4.07 (m, 3H),3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.81 - 3.60 (m, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.53 -3.48 (m, 1H), 3.10 (m, 3H), 2.62 (d, J = 8.40 Hz, 2H), 2.30 - 2.00 (m, 3H),1.36 (brs, 1H)。

实施例S146. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (146) 的合成

步骤1：(3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（1750 mg，3.50 mmol）、(3R,4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯（1007mg，4.37 mmol）和叔丁醇钠（504 mg，5.25 mmol）的二噁烷（35 mL）溶液用氮气脱气15 min，然后添加Josiphos Pd G3（323 mg，0.350 mmol）。然后将反应混合物在100ºC下加热16 h。然后将混合物冷却至室温并且用饱和碳酸氢钠稀释并且用EtOAc（3X）萃取。将合并的有机物经硫酸镁干燥并且通过硅藻土过滤，然后浓缩并且用硅胶色谱法使用在己烷中的0至100% EtOAc纯化，以提供标题化合物（1.25 g，1.92 mmol）。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δppm 7.92 (d, J = 7.99 Hz, 1H), 7.54 - 7.29 (m, 11H), 7.28 - 7.25 (m, 1H),6.51 (d, J = 8.11 Hz, 1H), 6.47 - 6.41 (m, 2H), 5.49 (s, 2H), 5.41 (s, 2H),4.00 (s, 4H), 3.96 - 3.73 (m, 2H), 3.49 (s, 4H), 3.22 (td, J = 7.60, 3.87 Hz,2H), 2.30 - 2.19 (m, 1H), 1.51 (s, 9H)。

步骤2：3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐的合成。使用通用程序4和5使用(3R,4R)-4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯作为起始材料完成标题化合物的合成。

步骤3：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。使用通用程序6使用3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐（65 mg，0.159 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（46 mg，0.159 mmol）完成标题化合物的合成。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈白色固体的标题化合物（7.7 mg，0.012 mmol，8.23%产率）。MS(ESI) m/z 644.6 [M+H]⁺; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ ppm 10.82 (s, 1H), 8.67(s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.64 - 7.47 (m, 2H), 7.33 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.93(d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 1.7, 8.8 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 1.2 Hz,1H), 5.85 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.29 (br d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.18 (dd, J =5.1, 8.8 Hz, 1H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.67 - 3.56 (m, 1H),3.54 (s, 2H), 3.42 - 3.35 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.17 (dt, J = 3.9, 7.4 Hz,1H), 3.10 (s, 3H), 2.66 - 2.57 (m, 2H), 2.32 - 2.21 (m, 1H), 2.19 - 2.11 (m,1H), 2.07 - 1.99 (m, 1H), 1.42 - 1.31 (m, 1H)。

实施例S147. 相对-3-(6-(((3R,4S)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮，异构体1 (147) 的合成。

步骤1：4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（300 mg，0.600 mmol）、碳酸铯（391 mg，1.199 mmol）、4-氨基-3-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯（241 mg，0.899 mmol）和XPhos Pd G3（50.7 mg，0.060 mmol）添加到配备有搅拌棒的1打兰小瓶中并且用氮气吹扫1 min。接下来，添加二噁烷（5995 µl），并且将反应混合物在70ºC下搅拌过夜。LCMS指示显著的产物形成。将反应冷却至室温并且倒入具有水、饱和碳酸钾和二氯甲烷的分液漏斗中。将水层用二氯甲烷萃取3X。将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并且浓缩。将混合物用0-50% EA/己烷和1% MeOH纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到呈黄色固体的标题化合物4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯（354 mg，0.515 mmol，86%产率）。将对映异构体通过手性SFC使用方法（等度：25B，其中B是在甲醇中的0.1% FA；柱：ChiralPack IC，流速：2 ml/min）进行分离。这得到相对对映异构体相对-(3R,4S)-4-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，异构体1（90.1 mg，24.5%产率）和相对-(3R,4S)-4-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，异构体2（87.4 mg，24.5%产率）。LC MS在t = 3.89 (m+1 = 688.76)处显示出688.311。¹H NMR (氯仿-d, 400 MHz) δ7.8-8.0 (m, 1H), 7.3-7.5 (m, 8H), 6.4-6.6 (m, 1H), 6.3-6.4 (m, 2H), 5.3-5.5(m, 4H), 4.0-4.1 (m, 3H), 4.0-4.0 (m, 3H), 3.5-3.7 (m, 2H), 2.17 (s, 3H),2.0-2.1 (m, 1H), 1.6-1.8 (m, 2H), 1.5-1.5 (m, 9H)。

步骤2：相对-(3R,4S)-4-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，异构体1的合成。将4-((3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，异构体1（90.1mg，0.131 mmol）和MeOH（1310 µl）添加到配备有搅拌棒的40 mL小瓶中。将反应用氮气吹扫并且然后添加钯碳（27.9 mg，0.013 mmol）。将小瓶用氮气再次吹扫并且然后添加氢气球。将小瓶加热至50ºC持续15小时。将混合物经硅藻土过滤。将滤液浓缩，以得到标题化合物（56 mg，84%产率）。LCMS在t = 2.86和2.93 (m+1 = 510.2)处显示出510.2。¹H NMR (氯仿-d, 500 MHz) δ 8.0-8.2 (m, 1H), 7.4-7.6 (m, 1H), 6.5-6.6 (m, 1H), 6.3-6.4 (m,1H), 4.2-4.3 (m, 1H), 4.0-4.2 (m, 2H), 3.9-4.0 (m, 4H), 3.8-3.8 (m, 1H), 3.4-3.5 (m, 1H), 2.9-3.1 (m, 1H), 2.6-2.8 (m, 2H), 2.4-2.6 (m, 1H), 2.3-2.4 (m,1H), 2.0-2.1 (m, 1H), 1.9-1.9 (m, 1H), 1.7-1.9 (m, 1H), 1.50 (s, 10H)。

步骤3：3-(1-甲基-6-(((3R,4S)-3-(三氟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮，异构体1的合成。向圆底烧瓶中装入在DCM（1099 µL）中的相对-(3R,4S)-4-((3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-(三氟甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯（56.0 mg，0.110 mmol）。然后添加HCl（55.0 µL，0.220 mmol）并且将溶液在室温下搅拌1小时。接下来，将溶液浓缩，以得到呈白色固体的呈HCl盐的标题化合物（49 mg，0.110mmol，100%产率），将其不经进一步纯化用于下一步骤。LCMS在t = 141和1.53 (m+1 =410.2)处显示出410.2。

步骤4：相对-3-(6-(((3R,4S)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮，异构体1的合成。向3-(1-甲基-6-(((3R,4S)-3-(三氟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮，异构体1（28 mg，0.075 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（28.6 mg，0.075 mmol）在DMSO（1 mL）中的搅拌溶液中添加DIPEA（0.053 mL，0.302 mmol）。将反应在80ºC下搅拌4小时。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到标题化合物（3.2 mg，4.69 µmol，4.26%产率）。¹H NMR (氯仿-d, 400MHz) δ 8.0-8.1 (m, 1H), 7.8-7.9 (m, 1H), 7.4-7.6 (m, 3H), 6.9-7.0 (m, 1H),6.7-6.8 (m, 1H), 6.5-6.7 (m, 1H), 6.2-6.4 (m, 1H), 4.5-4.6 (m, 1H), 4.1-4.3(m, 4H), 3.91 (s, 3H), 3.6-3.7 (m, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 2.9-3.1(m, 1H), 2.6-2.8 (m, 2H), 2.3-2.6 (m, 2H), 2.0-2.2 (m, 1H), 2.0-2.0 (m, 1H),1.7-1.8 (m, 1H)。LC MS在t = 2.49 (m+1 = 682.1)处显示出682.3。

实施例S148. 3-(6-(((3S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮(148) 的合成

步骤1：3-(6-(((3S,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-(三氟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮，异构体2的合成。与实施例S147类似使用来自实施例S147步骤1的第二洗脱异构体合成标题化合物。向3-(1-甲基-6-(((3S,4R)-3-(三氟甲基)哌啶-4-基)氨基)-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮，异构体2（56 mg，0.137 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（40.0 mg，0.137 mmol）在DMSO（1 mL）中的搅拌溶液中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺（0.096 mL，0.547 mmol）。将反应在80ºC下搅拌4小时。将反应混合物过滤并且通过反相半制备型HPLC（10%-100%乙腈 + 在水中的0.1%甲酸（0.1%甲酸），经30 min）纯化。将含有干净产物的级分合并并且冻干，以得到标题化合物（21.7 mg，0.031 mmol，23.03%产率）。¹H NMR(CDCl₃, 400 MHz) δ 8.0-8.1 (m, 1H), 7.8-7.9 (m, 1H), 7.4-7.6 (m, 3H), 6.9-7.0(m, 1H), 6.7-6.8 (m, 1H), 6.5-6.7 (m, 1H), 6.2-6.4 (m, 1H), 4.5-4.6 (m, 1H),4.1-4.3 (m, 4H), 3.91 (s, 3H), 3.6-3.7 (m, 1H), 3.52 (s, 3H), 3.22 (s, 3H),2.9-3.1 (m, 1H), 2.6-2.8 (m, 2H), 2.3-2.6 (m, 2H), 2.0-2.2 (m, 1H), 2.0-2.0(m, 1H), 1.7-1.8 (m, 1H)。LCMS [M+1 = 682.1]显示出682.3。

实施例S149. 3-(6-((4R,5S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-5-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (149) 的合成

步骤1：(S)-(3-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-2-甲基-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯的合成。向(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸（10.00 g，46.7mmol）和2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮（7.41 g，51.4 mmol）在DCM（160 mL）中的搅拌溶液中添加EDC（13.44 g，70.1 mmol）和DMAP（8.57 g，70.1 mmol）。将反应混合物在25ºC下搅拌16 h。将反应混合物用DCM（300 mL）稀释，用10%硫酸氢钠水溶液（3 x 100 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的粗标题化合物（16.2 g，27.5 mmol，59%产率）。将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤2：(S)-5-甲基-2,4-二氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将(S)-(3-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-2-甲基-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯（16.2 g，27.5mmol）在乙酸乙酯（150 mL）中的溶液在80ºC下回流并且搅拌8 h。将反应混合物冷却至室温并且在减压下浓缩，以得到粗化合物。将粗材料通过二氧化硅上的快速柱色谱法用50%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈白色固体的标题化合物（6.92 g，27.4 mmol，定量产率）。

步骤3：(S)-5-甲基哌啶-2,4-二酮的合成。在0ºC下将三氟乙酸（21.1 mL，274mmol）逐滴添加到(S)-5-甲基-2,4-二氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯（6.92 g，27.4 mmol）在DCM（100 mL）中的搅拌溶液中。将所得溶液温热至25ºC并且搅拌16 h。将反应混合物在减压下浓缩，溶解于乙腈（100 mL）中，并且通过固体碳酸氢钠碱化直到溶液的pH大于8。将混合物再搅拌一小时，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈黄色油状物的粗标题化合物（8.5 g，26.9 mmol，98%产率）。将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤4：(S)-4-(苄基(甲基)氨基)-5-甲基-5,6-二氢吡啶-2(1H)-酮的合成。向(S)-5-甲基哌啶-2,4-二酮（8.5 g，26.9 mmol）和N-甲基-1-苯基甲胺（6.52 g，53.8 mmol）在MeOH（150 mL）中的搅拌溶液中添加AcOH（2.3 mL，40.4 mmol）。将反应混合物在60ºC下搅拌16 h。将反应混合物在减压下浓缩，以得到标题化合物，将其不经进一步纯化使用（20 g，26.4 mmol，98%产率）。

步骤5：(4R,5S)-5-甲基-4-(甲基氨基)哌啶-2-酮的合成。向(S)-4-(苄基(甲基)氨基)-5-甲基-5,6-二氢吡啶-2(1H)-酮（20 g，26.4 mmol）在甲醇（150 mL）中的溶液中添加氧化铂(IV)（3.0 g）。将反应混合物在7 atm氢化压力下在25ºC下搅拌72 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用甲醇（3 x 100 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩。将此材料通过制备型HPLC纯化，以得到呈白色固体的标题化合物（3.8 g，26.3 mmol，99%产率）。制备型HPLC方法：Rt 5.4 min；柱：XSelect C18 (300 x 30) mm，10.0 µm；在水/乙腈中的0.1% TFA；流速：20.0 mL/min。

步骤6：甲基((4R,5S)-5-甲基-2-氧代哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的合成。向(4R,5S)-5-甲基-4-(甲基氨基)哌啶-2-酮（3.8 g，26.3 mmol）在THF（38 mL）中的搅拌溶液中依序添加Et₃N（9.2 mL，65.8 mmol）和boc-酸酐（6.32 g，28.9 mmol）。将反应混合物在25ºC下搅拌16 h。将反应混合物用乙酸乙酯（30 mL）稀释并且用水（20 mL）淬灭。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯（3 x 30 mL）萃取。将合并的有机层用水（20 mL）和盐水（20 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到标题化合物（1.32 g，4.15 mmol，16%产率），将其不经进一步纯化使用。

步骤7：((4R,5S)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-5-甲基-2-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成。将3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（1.32 g，2.64 mmol）和甲基((4R,5S)-5-甲基-2-氧代哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯（0.7 g，2.20 mmol）在甲苯（25 mL）中的搅拌溶液用氮气脱气5 min。让添加碳酸铯（2.87 g，8.80 mmol）、Pd₂(dba)₃（0.20 g，0.22 mmol）和xantphos（0.51 g，0.88mmol）。将反应混合物加热至120ºC并且搅拌16 h。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯（50 mL）稀释并且用水（50 mL）淬灭。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯（3 x 50 mL）萃取。将合并的有机层用水（3 x 50 mL）和盐水（50 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗化合物，将其通过制备型HPLC纯化，以得到呈浅黄色固体的标题化合物（0.86 g，1.23 mmol，56%产率）。制备型HPLC方法：Rt 7.4 min；柱：XSelect C18 (300 x30) mm，10.0 µm；在水/乙腈中的0.1% TFA；流速：20.0 mL/min。

步骤8：((4R,5S)-1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-5-甲基-2-氧代哌啶-4-基) (甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成。在氮气下向((4R,5S)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-5-甲基-2-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯（860 mg，1.23 mmol）和三氟乙酸（0.10 mL，1.23 mmol）在乙醇（7.5 mL）和THF（7.5 mL）中的搅拌溶液中添加20%氢氧化钯碳（400 mg）。将反应混合物在4 atm氢化压力下在50ºC下搅拌4 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用乙醇/THF（1 : 1，200 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈粗产物的标题化合物（510 mg，0.70 mmol，57%产率）。将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤9：3-(6-((4R,5S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-5-甲基-2-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序5和6使用((4R,5S)-1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-5-甲基-2-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯（400 mg，0.55 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为656.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.92(s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 7.58-7.52 (m,3H), 6.99-6.95 (m, 2H), 5.05 (brs, 1H), 4.41-4.37 (m, 1H), 3.99 (s, 3H),3.70-3.65 (m, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.33-3.25 (m, 3H), 3.08 (s, 3H), 2.83-2.63(m, 5H), 2.40-2.34 (m, 1H), 2.21-2.17 (m, 1H), 0.99 (d, J = 6.80 Hz, 3H)。

实施例S150. 3-(6-((2R,4S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基-6-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (150) 的合成

步骤1：甲基((4R,5S)-5-甲基-2-氧代哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的合成。根据实施例S149步骤1-6使用(R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸作为原始起始材料合成标题化合物。

步骤2：((2R,4S)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基-6-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成。向3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-6-溴-1-甲基-1H-吲唑（4.13 g，8.25 mmol）和甲基((4R,5S)-5-甲基-2-氧代哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯（2.0 g，8.25 mmol）在二噁烷（40 mL）中的搅拌溶液中添加磷酸钾（5.26 g，49.5 mmol）、CuI（4.72 g，24.8 mmol）和DMEDA（4.37 g，49.5 mmol）。将反应混合物加热至120ºC并且搅拌48 h。将反应混合物冷却至室温，用饱和氯化铵水溶液（100 mL）淬灭并且用乙酸乙酯（3 x 200 mL）萃取。将合并的有机层用水（3 x 100 mL）和盐水（100 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗化合物，将其通过制备型HPLC纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（0.41 g，0.62 mmol，8%产率，峰1）。制备型HPLC方法：Rt 15.0 min和15.4 min；柱：YMC C18 Phenyl (250 x 21) mm，5.0 µm；在水/乙腈中的0.1% TFA；流速：15.0 mL/min。

步骤3：((2R,4S)-1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基-6-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成。在氮气下向((2R,4S)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基-6-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯（410 mg，0.62 mmol，峰1）和三氟乙酸（0.05 mL，0.62 mmol）在乙醇（3 mL）和THF（3mL）中的搅拌溶液中添加20%氢氧化钯碳（250 mg）。将反应混合物在4 atm氢化压力下在50ºC下搅拌4 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用乙醇/THF（1 : 1，150 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈粗产物的标题化合物（300 mg，0.61 mmol，99%产率）。将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤4：3-(6-((2R,4S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基-6-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序5和6使用((2R,4S)-1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基-6-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯（300 mg，0.61 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为656.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.92(s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H),7.51 - 7.46 (m, 2H), 6.93 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.00 (brs, 1H),4.42 - 4.38 (m, 1H), 4.05 - 4.00 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.54 - 3.52 (m, 2H),3.09 (s, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.66 - 2.64 (m, 3H), 2.45 - 2.41 (m, 2H), 2.22 -2.08 (m, 2H), 1.98 - 1.95 (m, 1H), 0.93 (d, J = 6.00 Hz, 3H)。

实施例S151. 3-(6-((2R,4R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基-6-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (151) 的合成

步骤1：((2R,4R)-1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基-6-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯的合成。在氮气下向((2R,4R)-1-(3-(2,6-双(苄氧基)吡啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基-6-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯（170 mg，0.26 mmol，来自实施例S150步骤2的峰2）和三氟乙酸（0.02 mL，0.26mmol）在乙醇（1 mL）和THF（1 mL）中的搅拌溶液中添加20%氢氧化钯碳（100 mg）。将反应混合物在4 atm氢化压力下在50ºC下搅拌4 h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将硅藻土垫用乙醇/THF（1 : 1，50 mL）洗涤。将滤液在减压下浓缩，以得到呈粗产物的标题化合物（135 mg，0.26 mmol，99%产率）。将粗产物不经进一步纯化用于下一步骤。

步骤2：3-(6-((2R,4R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基-6-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序5和6使用((2R,4R)-1-(3-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-2-甲基-6-氧代哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯（135 mg，0.26 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为656.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.91(s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.71 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H),7.46 (s, 2H), 6.97 (d, J = 8.40 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 5.14(brs, 1H), 4.42 - 4.38 (m, 1H), 4.13 - 4.10 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.57 (s,2H), 3.14 (s, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.61 - 2.60 (m, 4H), 2.44 - 2.33 (m, 2H),2.23 - 2.17 (m, 1H), 1.81 - 1.79 (m, 1H), 0.98 (s, 3H)。

实施例S152. 3-(6-((2S,4R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基-6-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (152) 的合成

步骤1：3-(6-((2S,4R)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基-6-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。与实施例S150类似使用(R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)丁酸（10.00 g，49.2 mmol）作为原始起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为656.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 10.91 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.71 - 7.69 (m, 1H), 7.61(s, 1H), 7.51 - 7.47 (m, 2H), 6.95 - 6.86 (m, 2H), 5.11 - 5.10 (m, 1H), 4.41- 4.38 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.55 - 3.52 (m, 2H), 3.13 (s, 3H), 3.03 (s,3H), 2.80 - 2.60 (m, 3H), 2.49 - 2.38 (m, 3H), 2.32 - 2.10 (m, 2H), 2.02 –1.92 (m, 1H), 0.93 (d, J = 6.4 Hz, 3H)。

实施例S153. 3-(6-((2S,4S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基-6-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮 (153) 的合成

步骤1：3-(6-((2S,4S)-4-((5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基-6-氧代哌啶-1-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)哌啶-2,6-二酮的合成。与实施例S151类似合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为656.2；¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆): δ 10.91 (s, 1H), 8.72 - 8.68 (m, 1H), 8.05 (d, J = 2.0 Hz, 1H),7.71 (dd, J = 4.40, 8.60 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.56 - 7.46 (m, 2H), 6.98 -6.88 (m, 2H), 5.21 -5.10 (m, 1H), 4.39 - 4.35 (m, 1H), 4.19 - 4.11 (m, 1H),4.00 (d, J = 4.80 Hz, 3H), 3.55 - 3.52 (m, 2H), 3.13 (d, J = 17.60 Hz, 3H),3.03 (d, J = 4.00 Hz, 3H), 2.80 - 2.67 (m, 2H), 2.62 - 2.60 (m, 1H), 2.47 -2.38 (m, 2H), 2.30 - 2.28 (m, 2H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.02 (d, J = 6.40 Hz,3H)。

实施例S154. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮(154) 的合成

步骤1：(3R,4R)-4-((3-(5-(叔丁氧基)-2-氰基-5-氧代戊-2-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将4-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-4-氰基戊酸叔丁酯（300 mg，0.77 mmol）和(3R,4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯（176 mg，0.77 mmol）在甲苯（10 mL）中的搅拌溶液脱气5 min。然后在25ºC下添加NaO^tBu（110 mg，1.15 mmol）、Pd₂dba₃（70.0 mg，0.08 mmol）和BINAP（47.6 mg，0.08 mmol）。将反应混合物加热至100ºC并且搅拌6 h。将反应混合物用水（20 mL）淬灭并且用乙酸乙酯（50 mL）稀释。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯（2 x 50 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗残余物通过二氧化硅上的快速柱色谱法用100%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（300 mg，0.41 mmol，54%产率）。

步骤2：(3R,4R)-3-甲氧基-4-((1-甲基-3-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。向(3R,4R)-4-((3-(5-(叔丁氧基)-2-氰基-5-氧代戊-2-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯（300 mg，0.55 mmol）在乙酸（5 mL）中的搅拌溶液中添加硫酸（0.03 mL，0.55 mmol）。将反应混合物加热至60ºC并且搅拌6 h。将反应混合物在减压下浓缩并且将所得粗混合物溶解于乙腈（5mL）中，随后添加DIPEA（0.27 mL，1.56 mmol）和BOC-酸酐（0.15 mL，0.62 mmol）。将反应混合物在25ºC下搅拌16 h。将反应混合物用水（20 mL）淬灭并且用乙酸乙酯（30 mL）稀释。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯（2 x 30 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗残余物通过二氧化硅上的快速柱色谱法用100%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈灰白色固体的标题化合物（180 mg，0.27 mmol，经2个步骤49%产率）。

步骤3：3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序5使用(3R,4R)-3-甲氧基-4-((1-甲基-3-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯（180 mg，0.37 mmol）作为起始材料合成标题化合物。

步骤4：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序6使用3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮（100 mg，0.20 mmol）和5-((5-氯-2-氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（59 mg，0.20 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为658.3；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.74 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.08 (s, 1H),7.53 - 7.44 (m, 3H), 6.96 - 6.94 (m, 1H), 6.58 - 6.56 (m, 1H), 6.49 - 6.47(m, 1H), 6.13 - 5.61 (m, 1H), 4.20 (br d, J = 12.5 Hz, 2H), 4.02 - 3.91 (m,2H), 3.81 (s, 3H), 3.65 - 3.59 (m, 1H), 3.47 - 3.34 (m, 2H), 3.29 (s, 3H),3.23 - 3.18 (m, 1H), 3.11 (s, 3H), 2.48 - 2.45 (m, 1H), 2.42 - 2.39 (m, 1H),2.13 - 1.99 (m, 2H), 1.59 (s, 3H), 1.44 - 1.31 (m, 1H)。

实施例S155. 2-((3R,4R)-3-甲氧基-4-((1-甲基-3-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈 (155) 的合成

步骤1：2-((3R,4R)-3-甲氧基-4-((1-甲基-3-(3-甲基-2,6-二氧代哌啶-3-基)-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈的合成。根据通用程序6使用3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮（150 mg，0.30 mmol）和2-氟-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈（103 mg，0.30 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为649.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.77 (s, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.40(br s, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 3H), 6.96 - 6.91 (m, 1H), 6.58 (br d, J = 8.0 Hz,1H), 6.46 (s, 1H), 4.14 - 4.04 (m, 1H), 3.82 - 3.77 (m, 3H), 3.67 - 3.59 (m,2H), 3.58 - 3.49 (m, 5H), 3.23 (br s, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.58 - 2.53 (m, 2H),2.48 - 2.45 (m, 1H), 2.43 - 2.37 (m, 1H), 2.13 - 1.98 (m, 2H), 1.59 (s, 3H),1.45 - 1.37 (m, 1H)。

实施例S156. 1-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮 (156) 的合成

步骤1：(3R,4R)-3-甲氧基-4-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的合成。将1-(6-溴-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-(4-甲氧基苄基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（1.00 g，2.26 mmol）和(3R,4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-甲酸叔丁酯（0.52 g，2.26 mmol）在甲苯（3 mL）中的搅拌溶液脱气10 min。然后在25ºC下添加Cs₂CO₃（1.47 g，4.51 mmol）和Pd-Ruphos-G3（0.19g，0.23 mmol）。将反应混合物加热至120ºC并且搅拌12 h。将反应混合物倒入水（150 mL）中并且用乙酸乙酯（150 mL）稀释。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯（3 x 150 mL）萃取。将合并的有机层用盐水（150 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到粗产物。将粗残余物通过二氧化硅上的快速柱色谱法用70%乙酸乙酯/石油醚纯化，以得到呈淡黄色固体的标题化合物（0.80 g，1.27 mmol，56%产率）。

步骤2：1-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。根据通用程序5使用(3R,4R)-3-甲氧基-4-((3-(3-(4-甲氧基苄基)-2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯（800 mg，1.27 mmol）作为起始材料合成标题化合物。

步骤3：1-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。根据通用程序6使用3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮（150 mg，0.30 mmol）和2-氟-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈（103 mg，0.30 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为634.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.45 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 2H), 7.28 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.40Hz, 1H), 6.55 (dd, J = 1.60, 8.80 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 1.20 Hz, 1H), 5.90(d, J = 8.00 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 10.80 Hz, 1H), 4.07 (brs, 1H), 3.86 (t, J= 6.80 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.63 - 3.59 (m, 2H), 3.38 - 3.26 (m, 5H) 3.18 -3.13 (m, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.73 (t, J = 6.80 Hz, 2H), 2.07 - 2.02 (m, 1H),1.35 (d, J = 9.60 Hz, 1H)。

实施例S157. 2-((3R,4R)-4-((3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈 (157) 的合成

步骤1：4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈的合成。向5-氨基-1-甲基吲哚啉-2-酮（1.0 g，6.17 mmol）和4-氯-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈（1.15g，6.17 mmol）在THF（10 mL）中的搅拌溶液中添加DIPEA（2.7 mL，15.4 mmol）。将反应混合物在25ºC下搅拌16 h。将反应混合物过滤，并且将沉淀的固体用水（4 x 50 mL）洗涤，以得到呈黄色固体的标题化合物（1.77 g，5.58 mmol，91%产率）。

步骤2：4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈的合成。向4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)-2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈（750 mg，2.41mmol）在DCM（25 mL）中的搅拌溶液中添加mCPBA（1.25 g，7.23 mmol）。将反应混合物在25ºC下搅拌3 h。将反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液（25 mL）淬灭并且用乙酸乙酯（50 mL）稀释。分离各层，并且将水层用乙酸乙酯（3 x 50 mL）萃取。将合并的有机层用盐水（50 mL）洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈黄色固体的标题化合物（715 mg，1.57 mmol，65%产率）。

步骤3：2-((3R,4R)-4-((3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基)-3-甲氧基哌啶-1-基)-4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲腈的合成。根据通用程序6使用3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮（100 mg，0.26 mmol）和4-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)-2-(甲基磺酰基)嘧啶-5-甲腈（103 mg，0.26 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为636.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.46 (s, 1H), 9.29 (s,1H), 8.40 (s, 1H), 7.48 - 7.43 (m, 2H), 7.30 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.94 (s, 1H), 4.30 -4.12 (m, 2H), 3.86 (t, J = 6.80 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.65 (brs, 2H), 3.54(s, 3H), 3.40 – 3.30 (m, 2H),3.25 – 3.12(m, 2H), 3.10 (s, 3H), 2.73 (t, J =6.40 Hz, 2H), 2.08 (brs, 1H), 1.41 (brs, 1H)。

实施例S158. 1-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-氟-6-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮 (158) 的合成

步骤1：5-((5-氯-2,6-二氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮的合成。在0ºC下向5-氨基-1-甲基吲哚啉-2-酮（500 mg，3.08 mmol）和5-氯-2,4,6-三氟嘧啶（519 mg，3.08 mmol）在ACN（25 mL）中的搅拌溶液中添加DIPEA（0.5 mL，3.08 mmol）添加。将反应混合物在0ºC下搅拌2 h。将反应混合物用水（10 mL）淬灭并且用DCM（3 x 25 mL）萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩，以得到呈灰白色固体的标题化合物（550 mg，1.59 mmol，52%产率）。

步骤2：1-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-氟-6-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮的合成。根据通用程序6使用1-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（150 mg，0.39 mmol）和5-((5-氯-2,6-二氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（148 mg，0.43 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS[M+H]⁺实测值为663.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.45 (s, 1H), 8.99 (s, 1H),7.45 -7.49 (m, 2H), 7.29 (d, J = 8.80 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.40 Hz, 1H),6.56 (q, J = 1.60 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 1.20 Hz, 1H), 5.91 (d, J = 8.00 Hz,1H), 4.12 (d, J = 12.40 Hz, 1H), 3.86 (t, J = 6.80 Hz, 3H), 3.81 (s, 3H),3.60 - 3.63 (m, 1H), 3.53 (s, 2H), 3.41 - 3.47 (m, 2H), 3.31 – 3.28 (m, 3H),3.19 (s, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.72 (t, J = 6.80 Hz, 2H), 2.01 - 2.07 (m, 1H),1.50 - 1.60 (m, 1H)。

实施例S159. 3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-氟-6-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮 (159) 的合成

步骤1：3-(6-(((3R,4R)-1-(5-氯-4-氟-6-((1-甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮的合成。根据通用程序6使用3-(6-(((3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基)氨基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)-3-甲基哌啶-2,6-二酮（150 mg，0.30 mmol）和5-((5-氯-2,6-二氟嘧啶-4-基)氨基)-1-甲基吲哚啉-2-酮（93 mg，0.30 mmol）作为起始材料合成标题化合物。LCMS [M+H]⁺实测值为676.2；¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.77 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 7.52- 7.44 (m, 3H), 6.98 - 6.91 (m, 1H), 6.62 - 6.55 (m, 1H), 6.50 - 6.41 (m,1H), 6.02 - 5.83 (m, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 1H), 3.92 - 3.84 (m, 1H), 3.80 (s,3H), 3.52 - 3.47 (m, 5H) 3.35 - 3.25 (m, 3H), 3.25 - 3.14 (m, 2H), 3.11 (s,3H), 2.48 - 2.39 (m, 2H), 2.11 - 1.98 (m, 2H), 1.59 (s, 3H), 1.45 - 1.35 (m,1H)。

配制实施例

实施例F1.化合物70的配制。

选择化合物70用于剂型开发。化合物70是两种非对映异构体化合物71和化合物72的混合物。

将化合物70的膜包被片剂开发为两种剂型：20 mg和80 mg。20 mg和80 mg规格片剂含有化合物70的喷雾干燥分散体（SDD）和以下非活性成分：无水乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅、硬脂酰富马酸钠和Opadry膜包衣。SDD含有35%重量/重量（w/w）的化合物70，通过将化合物70和Eudragit L100-55在二氯甲烷和甲醇中的溶液喷雾干燥制备。20 mg片剂为粉灰色圆形双凸面膜包被片剂，并且80 mg片剂为粉灰色椭圆形双凸面膜包被片剂。片剂供应在具有干燥剂和防儿童封闭件的紧密密闭的高密度聚乙烯（HDPE）瓶中。

生物学实施例

实施例B1. BCL6_HiBiT降解测定。

生成使用CRISPR将HiBiT-标签敲入内源性BCL6基因座的DHL-4细胞系。将DHL-4_BCL6_HiBiT细胞分配到用化合物预先点样的384孔板（Corning号3570）中。通过声学分配器（来自EDC Biosystems的ATS声学转移系统）以10点剂量反应曲线（使用从1-10 μM开始并下降到0.0015-0.00015 μM的3倍稀释）将化合物分配到384孔板中。将含有2500的DHL-4的25μL培养基（RPMI-1640 + 10%热灭活FBS + 1×Pen/Strep）分配到每个孔中。将测定板在37ºC与5% CO₂下孵育2小时。在孵育后，将25 μL Nano-Glo HiBiT裂解检测工作溶液（Promega，目录号N3040，威斯康星州麦迪逊）添加到每个孔中并且在室温下避光孵育15-30 min。在30min后，在Envision或PHERAstar发光读取器上读取发光。为了确定BCL6降解剂的EC₅₀值（半最大有效浓度）和梯度水平（Y常数），使用Dotmatics中的四参数剂量-反应模型（Y = (A+((B-A)/1+((C/x)^D）来拟合通过DMSO对照归一化的发光信号（Y）和化合物浓度（x）。拟合的值C是降解EC₅₀并且最小值A是Y常数。

DHL-4结果中在2 h时BCL6的降解示出于表5中，其中EC₅₀是半最大效应并且Y_con是剩余最大效应%。

表5.

* < 0.1 µM

** 0.1至1 µM

*** > 1 µM

^ > 60%

^^ 20%-60%

^^^ < 20%

†来自24 h降解测定的数据

实施例B2. 单独的化合物70以及其与抗淋巴瘤药剂的组合在复发性/难治性非霍奇金淋巴瘤（R/R NHL）中的I期研究。

此研究是一项多中心、开放标签、剂量发现、1期研究，以确定化合物70在患有R/RNHL的参与者中的安全性、耐受性、PK、药效学和初步功效。这项研究将分两部分进行。剂量递增（A部分）将在患有弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）和滤泡性淋巴瘤（FL）的参与者中评价递增口服剂量的化合物70，以评价安全性、耐受性和PK，并且指导确定化合物70作为单一药剂（A1部分）或其与利妥昔单抗的组合（A2部分）的最大耐受剂量（MTD）和/或最佳生物剂量（OBD）。剂量扩展（B部分）将进一步评价在一个或多个扩展队列中以或低于MTD/OBD施用的化合物70的安全性、初步功效和PK，以确定作为单一药剂（B1部分）或与抗淋巴瘤药剂的组合（B2部分）以一个或多个剂量的推荐的2期剂量（RP2D）。可以考虑评估其他组合（B2部分）或选定患者群体（B3部分）的另外扩展队列。

参与者将完成长达三个研究时间段：筛选（长达28天 [+ 3天]）、治疗（长达104周[大约2年]）（从研究干预的第一剂量起，无论是否有治疗延迟）以及随访。随访时间段包括安全性随访（研究干预的最后剂量后28天 [± 3天]）、生存期随访（从研究干预的第一剂量起长达156周 [大约3年]）和功效随访（长达52周 [大约1年]）。研究参与的最长持续时间将为大约160周（大约3年）（长达4周的筛选、长达104周的治疗和长达52周的随访）。A1部分涉及化合物70的BID给药。基于新出现的安全性、PK和PD数据，可以开放QD给药探索性队列；起始剂量将不超过BID给药中显示为耐受的剂量。

总共可以入组大约273名参与者，包括A部分中的73名参与者（A1部分中41名，和A2部分中32名），以及B部分中的200名可评价参与者（每个队列中大约20名：B1部分和B2部分中最多80名，和B3部分中最多40名）。

入选标准包括：

•参与者必须年满18岁或根据当地法规的法定成年年龄，患有R/R NHL（包括DLBCL[例如，未特指型（NOS）DLBCL和弥漫性大B细胞淋巴瘤/高级别B细胞淋巴瘤伴MYC和BCL2重排] 和FL），其中根据以下要求（如适用于每个适应证）之一为复发性或难治性疾病：

−对于R/R DLBCL（从头）和FL 3b：在至少两个先前疗法线（例如，已经接受过含有利妥昔单抗、蒽环类、烷基化剂和类固醇的一线组合化学疗法方案，并且已经接受至少一种另外的 [二线/挽救] 治疗）之后。

−对于R/R DLBCL（转化型淋巴瘤）：在至少两个先前疗法线（其必须在转化后施用；因此，必须已经接受过至少两种针对DLBCL的标准治疗方案）之后。

−对于R/R FL（除FL 3b之外）：在至少两个先前疗法线之后并且在入组时符合治疗标准（例如，根据但不限于滤泡性淋巴瘤研究组 [Group d’Etude des LymphomesFolliculaires，GELF] 标准）。−参与者必须患有可测量疾病，通过以下来定义：对于FDG亲性疾病，具有至少一个氟脱氧葡萄糖（FDG）亲性病灶，并且通过计算机断层成像（CT）或磁共振成像（MRI）进行横断面成像，具有一个二维可测量疾病并且至少一个病灶横径 > 1.5cm，如通过NHL的卢加诺分类（Lugano classification）所定义的。可测量疾病不能是先前被辐照的。

•参与者应具有以下实验室值：

−绝对嗜中性粒细胞计数 ≥ 1 x 10⁹/L，且无生长因子支持持续7天（如果是培非格司亭，则14天）

−天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）≤ 3.0 x 正常值上限（ULN）或 ≤5.0 x ULN（如果肝受累）

−总胆红素 ≤ 1.5 x ULN

−钾、镁和钙（校正的Ca或游离 [离子化的] Ca）浓度在正常范围内，或可用补充剂校正

−血小板计数 ≥ 75 x 10⁹/L

−血红蛋白计数 ≥ 9 g/dL

−使用肾病饮食改良（MDRD）方法得出的估计血清肌酐清除率 ≥ 50 mL/min

•参与者必须接受并遵循妊娠预防计划。

排除标准包括：

•东部肿瘤协作组（ECOG）体能状态 ≥ 3的参与者。

•具有与先前或当前抗癌疗法相关的非血液学毒性（其未消退、恢复至基线或 ≤2级、或被认为不可逆）的参与者。

•具有已知的吞咽困难、短肠综合征、胃轻瘫或限制口服施用的药物的消化或胃肠道吸收的其他病症/手术的参与者。

•在筛选时或在C1D1前1个月内具有未被控制的高血压（收缩压 [BP] > 180 mmHg或舒张BP > 100 mm Hg）或低血压（收缩BP < 90 mm Hg或舒张BP < 60 mm Hg）的参与者。

•临床上显著的心血管或脑血管疾病，包括以下中的任一种：(i) 筛选时完全左束支或双束支阻滞或其他临床上显著的异常ECG发现结果；(ii) 先天性长QT综合征的病史；(iii) 筛选时持续性或临床上有意义的室性心律失常；(iv) 筛选ECG时使用Fridericia公式针对心率校正的QT间期（QTcF）≥ 470毫秒；(v) 开始研究干预前 ≤ 6个月内不稳定型心绞痛、心肌梗死或卒中或者临床上显著的心律失常（诸如室性心动过速、心室颤动或尖端扭转）病史；(vi) 筛选时纽约心脏协会（New York Heart Association）心血管功能受损状态 ≥ 3级（3级被定义为导致体能活动明显受限的心脏病，并且参与者在休息时感到舒适，但是少于普通水平的体能活动导致疲劳、心悸、呼吸困难或心绞痛）；(vii) 筛选时LVEF <45%，如通过超声心动图（ECHO）或多门控采集（MUGA）扫描确定的。

•不能遵守限制、注意事项和禁忌的治疗。

•如果参与者参与此研究，则将参与者置于不可接受的风险中的任何状况（包括显著的急性或慢性医学疾患、活动性或未被控制的感染、或存在实验室异常）。

•在第1周期第1天前，在10天内具有轻度或无症状感染或在20天内具有重度/危重疾患的患有已知SARS-CoV-2感染的参与者。

•需要现行的持续全身性治疗的并存的第二癌症的病史。

•具有已知或疑似中枢神经系统受累或原发性CNS淋巴瘤的病史的参与者（包括处于缓解的那些）。

•以下先前伴随疗法：(i) 开始干预前 ≤ 4周内的先前活病毒疫苗。(ii) 在开始干预前7天内的先前COVID-19疫苗（对于需要多于1个剂量的疫苗，当可行时并且当开始研究干预的延迟不会使研究参与者处于风险时，则应在开始研究干预前至少7天完成全系列（例如，2个剂量系列的两个剂量）；(iii) 参与者已经接受过 ≤ 5个半衰期的或在开始研究干预前4周（以较短者为准）已经接受过先前全身性抗癌治疗（已批准的或试验用的）；(iv) 参与者在开始研究干预前 ≤ 4周接受过先前CAR-T或其他T细胞靶向治疗（批准的或试验用的）；(v) 参与者在开始研究干预前 ≤ 4周已经接受过用调节小脑蛋白（CRBN）的药物（例如，来那度胺、阿伐度胺（avadomide）、泊马度胺、CC-99282）的先前疗法；(vi) 参与者正在使用慢性全身性免疫抑制疗法或皮质类固醇（例如，在过去14天内每天超过10 mg的泼尼松或等效物）或参与者患有临床上显著的移植物抗宿主病（GVHD），以下情况除外：(a) 允许稳定使用吸入性皮质类固醇；(b) 允许使用用于正在进行的皮肤和眼GVHD的局部类固醇。

•参与者在开始研究干预前 ≤ 3个月内接受过先前自体SCT。如果参与者在开始研究干预前 > 3个月内接受过先前自体SCT，则任何治疗相关毒性未消退（> 2级）。

•参与者在开始研究干预前 ≤ 6个月内接受过标准或降低强度预处理的先前同种异体SCT。如果参与者在开始研究干预前 > 6个月内接受过先前同种异体SCT，则任何治疗相关毒性未消退（> 2级）。

•参与者在开始研究干预前 ≤ 2周内接受过大手术。参与者必须已经从近期手术的任何临床上显著的效应中恢复。

•有证据表明存在器官功能障碍或在体格检查、生命体征、ECG或临床实验室确定中存在任何临床上显著的偏离正常值（其超出与目标群体一致的范围）。

•具有已知HIV血清阳性或活动性感染、或乙型肝炎病毒（HBV）或丙型肝炎病毒活动性感染（通过丙型肝炎抗体；乙型肝炎表面抗原和抗乙型肝炎表面抗体、或HIV-1和HIV-2抗体的血液筛选阳性证明）的参与者。

•对利妥昔单抗或任何赋形剂的过敏史。

化合物70将在28天周期中从第1周期第1天开始每日两次（BID）连续口服施用，直到临床上显著的疾病进展、不可接受的毒性、或参与者/医生决定退出，持续长达2年的总治疗。替代时间表包括21/28天时间表和14/28天时间表，或在这些时间表中的任一个中每日一次（QD）。利妥昔单抗将按照药品说明书和机构标准规范以375 mg/m²的固定剂量施用持续最多六次输注（第1-6周期第1天）。生存期随访从第一次治疗起持续长达3年（156周）。参与者可以入组研究持续长达大约160周（包括筛选时间段、治疗时间段和随访时间段）。

对于A1部分，第1阶段的贝叶斯最优区间（BOIN）设计之后将是第2阶段的TITE-BOIN12设计，以指导做出剂量递增决定以及确定MTD和/或一个或多个OBD。对于A2部分，将通过BOIN指导剂量递增/递减决定。对于B部分，参与者将被随机分配到每个剂量水平/时间表的大约20名可评价参与者的扩展队列，每个队列接受单独的化合物70或其与抗淋巴瘤药剂的组合。将呈现出按剂量水平的DLT率和具有不良事件（AE）的参与者的频率分布。将提供PK参数的概括统计。将通过克洛珀-皮尔逊方法（Clopper-Pearson method）产生ORR的点估计值与95%置信区间（CI）。将使用KM方法估计到事件终点的中值时间（例如，无进展生存期（PFS））和95% CI。

将在A部分中评价递增剂量的化合物70。化合物70剂量递增的临时给药队列汇总于表6中。A1部分中化合物70的起始剂量将为BID口服给予40 mg。如果化合物70的起始剂量不耐受，则可以探索较低的剂量水平（例如，队列-1，20 mg BID）。临时剂量增量将遵循从80mg BID及以上起的改良斐波纳契设计，其中连续剂量队列中的剂量可以按先前队列中的剂量的100%、62.5%、53.8%、33%等进行增加。在考虑所有可用的临床数据时，对于剂量递增可以推荐较小增量。基于新出现的安全性、PK和药效学数据，可以开放QD给药探索性队列；起始剂量将不超过BID给药中显示为耐受的总日剂量。可以提出替代剂量、时间表和频率。在所有情况下，用于下一个队列的推荐剂量将不超过相对于先前总日剂量的大约100%的增加。

表6.

将基于来自A1部分和B1部分的新出现的安全性、PK和药效学数据来确定A2部分中化合物70的起始剂量和时间表，并且将比B1部分中探索的最大化合物70单一疗法剂量低至少一个剂量水平。将利用单一疗法中以OBD治疗的最少25名参与者的数据来确定A2部分中化合物70的起始剂量。

在完成剂量递增之后，在以随机化方式分配的多个队列中，可以按化合物70 OBD和/或替代的可耐受给药时间表进行扩展。以既定剂量水平和时间表进行剂量扩展的决定将基于（但不限于）总体安全性概况、初步阳性功效信号和可用的PK/药效学数据。按每个剂量水平/时间表且具有充分随访的大约20名参与者将入组B1部分和B2部分，以进一步评价按OBD和/或更低剂量水平和/或替代时间表施用的单独的化合物70或其与利妥昔单抗的组合的安全性和功效。将针对每种适应证（B1部分）或每种组合（B2部分）评估两种剂量时间表。在剂量扩展中按OBD和/或更低剂量水平和/或替代时间表治疗的参与者的数据可以与在剂量递增中以相同剂量水平、时间表和治疗臂治疗的参与者的数据（如果来自相同群体）组合。可以考虑评估其他组合或选定患者群体的另外扩展队列，并且所述另外扩展队列将经由方案修订被包括在B2部分或B3部分中。将使用贝叶斯连续监测在单一疗法和组合扩展队列中监测毒性。

将在28天周期中从第1周期第1天（C1D1）开始BID连续口服施用化合物70。替代时间表包括28天周期中的21/28天时间表（21天给药/7天停药）和14/28天时间表（14天给药/14天停药），或这些时间表中的任一个中的每日一次（QD）给药。接受BID给药的参与者必须在每天早上和晚上在大约相同的时间服用化合物70片剂。2个剂量之间的间隔应为大约12小时 ± 2小时。接受QD给药的参与者将每天在早上在大约相同时间每天一次服用化合物70。

参与者应从研究干预开始之前5天直到最终剂量的化合物70之后24小时避免食用塞维利亚橙（Seville orange）、葡萄柚或葡萄柚汁 [柚子、外来柑橘类水果、葡萄柚杂交品或果汁]。

要求所有组中的参与者在施用化合物70之前大约2小时直到之后1小时禁食（不吃或除水之外不喝任何东西）。在某些情况下，可以允许参与者在施用化合物70之前2小时和之后1小时避免食物和饮料（除水之外）的限制。如果参与者遗漏化合物70的剂量，则将仍可以在他们将通常服用所述剂量的时间后对于BID给药而言长达6小时（或对于QD给药，长达12小时）内服用所述剂量。如果过去超过6小时（或对于QD给药，12小时），应指示他们跳过遗漏的剂量。在下一个安排的剂量时，他们应在通常的时间服用化合物70。参与者不应服用2个剂量来弥补他们遗漏的剂量。

如果参与者在化合物70摄入的30分钟内呕吐，则可以再次摄入化合物70片剂。如果在化合物70的30分钟后发生呕吐，则参与者不得摄入另外的化合物70片剂，除非在呕吐物中可见完整的药物。

可以服用化合物70持续长达104周（大约2年）或直到临床上显著的疾病进展、不可接受的毒性或撤回同意书。如果满足以下标准，则可以考虑用化合物70再治疗：(i) 参与者由于除AE、进展或开始新的抗淋巴瘤疗法之外的原因中止治疗，(ii) 参与者实现了基于恶性淋巴瘤国际工作组标准（The International Workshop Criteria for MalignantLymphoma）的用化合物70证明的反应，(iii) 参与者在生存期随访时间段期间具有基于恶性淋巴瘤国际工作组标准的疾病复发的证据，(iv) 继续符合资格。接受再治疗的参与者将遵循从第1周期第1天开始的活动时间表，但是可以以其最近的剂量水平以及本研究中至少一个参与者队列显示出充分耐受的时间表或剂量水平继续。在研究期间参与者只能进行一次再治疗。

利妥昔单抗将在第1周期至第6周期的第1天以375 mg/m²的剂量以IV输注施用。不允许减少利妥昔单抗的剂量。利妥昔单抗可以与早晨剂量的化合物70一起施用或在早晨剂量的化合物70之后最多2小时内施用。

建议的体表面积估计方法包括Mosteller和DuBois。

BSA = √ ((身高 (cm) x 体重 (kg))/3600)

BSA = 0.20247 x 身高 (m)0.725 x 体重 (kg)0.425

在每次利妥昔单抗输注前，应施用由对乙酰氨基酚和抗组胺药组成的前驱给药（参考当前当地利妥昔单抗处方信息）。根据机构实践，也可以在开始利妥昔单抗输注前施用类固醇。应如制造商和当前指南所推荐的那样应用在利妥昔单抗的输注期间和输注后的监测措施。

利妥昔单抗可以在住院或门诊临床背景下施用。对于剂量调整，推荐遵循药品说明书和当地实践。不允许减少利妥昔单抗的剂量。

允许不需要剂量中断的参与者进入下一个治疗周期（例如，血液学毒性必须消退至 ≤ 2级）。如果由于研究干预相关的毒性而中断利妥昔单抗剂量，则一旦毒性消退至 ≤2级，可以重新开始利妥昔单抗。在第1周期中，将不会重新安排因毒性而跳过的剂量。在 ≥2的周期中，利妥昔单抗的遗漏剂量可以在2周内（即，周期的第1天至第14天）进行弥补。如果在周期的第15天至第28天期间毒性消退至 ≤ 2级，则将在下一周期的第1天重新开始利妥昔单抗剂量。将在整个输注期间以及在持续输注后至少1小时内密切监测参与者，并且获得一系列生命体征并且进行脉搏血氧饱和度监测。在具有需要永久利妥昔单抗中止的4级输注反应或复发性3级输注反应的参与者中，可在症状发作的15至60分钟内获得另外的血液测试，以评价重度过敏反应。实验室测试可以包括免疫球蛋白E（IgE）、总类胰蛋白酶和血浆组胺。

在评价化合物70的1期研究中，将收集一系列药效学、预测性和探索性生物标志物以促进剂量/时间表选择，并且潜在地鉴定生物标志物以预测反应并且告知潜在组合。

预期化合物70的主要药效学生物标志物是BCL6蛋白的降解。为此目的，将在外周血单个核细胞（PBMC）中测量BCL6水平的表达相对于基线的变化。将由经由细针抽吸物（FNA）或肿瘤活检收集的样品使用基于流式细胞术的测定来测量BCL6和下游标志物，以鉴定肿瘤细胞中靶标接合和对化合物70反应的潜在标志物。将进行循环肿瘤脱氧核糖核酸（ctDNA）和淋巴结（LN）肿瘤细胞的细胞凋亡的纵向定量作为评估研究治疗对总体肿瘤负荷的早期效应的手段。为了探索化合物70作为单一药剂和其与抗淋巴瘤药剂的组合的演变的免疫反应和剂量时间表效应，免疫相关的评估将包括将在用化合物70治疗之前和期间评价的T细胞、B细胞和NK细胞亚群的免疫谱分析以及细胞因子分泌。将在基线时以及在进行研究治疗中探索对单一药剂化合物70及其与其他抗淋巴瘤药剂的组合的反应的预测标志物。这些研究将包括收集治疗前和治疗中的配对肿瘤活检。基于RNA表达谱分析、BCL6蛋白表达水平和免疫细胞浸润（例如，T细胞、B细胞、巨噬细胞和/或NK细胞）表征的测定将被探索为反应的潜在预测因子。还将分析诊断活检的可能与对化合物70作为单一药剂或其与其他抗淋巴瘤药剂的组合的富集反应相关的基因表达特征，所述基因表达特征包括下游标志物（例如，c-Myc、NCOR1/2、PELI1）和与不良预后相关的生物标志物（例如，COO、c-Myc、BCL2或BCL6基因重排、c-Myc、BCL2或BCL6蛋白表达、淋巴瘤相关基因的突变状态等）。将根据实验室手册进行生物标志物评估。

表7列出了用于计划的各种生物标志物评估的样品类型和计划的分析技术。

表7.

实施例B3.

此实施例通过引用将研究者手册（Investigator’s Brochure）（版本号：01；版本日期：2023年6月21日）的披露内容以其整体并入本文。

实施例B3中对章节、表格、参考文献和/或附录的引用是指实施例B3中的其他章节、表格、参考文献和/或附录。

缩写词列表

ADME吸收、分布、代谢和排泄

AE不良事件

ALT丙氨酸转氨酶

ANOVA方差分析

AUC浓度-时间曲线下面积

AUC（INF）从0到无限的浓度-时间曲线下面积

BCL 6B细胞淋巴瘤6

BCRP乳腺癌耐药蛋白

BID一天两次

BLQ低于定量限

BMSBristol-Myers Squibb

BSA体表面积

BSEP胆盐输出泵

BUN血尿素氮

Caco-2高加索结肠腺癌细胞系

Cmax最大观察浓度

CDX细胞系来源的异种移植物

CELMoD小脑蛋白E3连接酶调节药物

CLTp血浆清除率

COO起源细胞

CV变异系数

CYP人细胞色素P450

DBP舒张压

DC50使蛋白质降解50%的半最大降解浓度

DCN文件控制编号

DDI药物-药物相互作用

DLBCL弥漫性大B细胞淋巴瘤

DMAC二甲基乙酰胺

ECG心电图

EMA欧洲药品管理局

F绝对口服生物利用度

FDA美国食品药品监督管理局

FIH首次人体

FL滤泡性淋巴瘤

FOB粪便隐血

fu未结合分数

fu,p血浆中的未结合分数

GALT肠相关淋巴样组织

GC生发中心

GLP良好实验室规范

HDPE高密度聚乙烯

HEK人胚胎肾

hiPSC-CM人诱导多能干细胞来源的心肌细胞

HPLC高效液相色谱法

HNSTD最高非重度毒性剂量

HPMC-AS-HF羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯

IC₅₀观察到50%抑制时的浓度

ICH国际协调会议

IFN干扰素

IL白细胞介素

IV静脉内

Ka吸收速率常数

KI抑制常数

Kinact酶失活率

KLH钥孔虫戚血蓝蛋白

LC-MS/MS液相色谱串联质谱法

LC-UV/MS液相色谱-紫外光谱/质谱法

LDD配体定向降解剂

LLOQ定量下限

MAP平均动脉压

MATE多药和毒素外排蛋白

MDCKMadin-Darby犬肾上皮细胞

MDR1多药耐药1基因

mRNA信使核糖核酸

MRP多药耐药相关蛋白

MRSD最大推荐起始剂量

MRT平均停留时间

MTD最大耐受剂量

NA不可用

NADPH烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸

NHL非霍奇金淋巴瘤

NK自然杀伤细胞

NOAEL未观察到不良效应的水平

OATP有机阴离子转运多肽

OCT有机阳离子转运蛋白

OECD经济合作与发展组织

P-gpP-糖蛋白

PD药效学

PDX患者来源的异种移植物

PEG-400聚乙二醇400

PK药代动力学

PMBL原发性纵膈B细胞淋巴瘤

PO口服

QC质量控制

RBC红细胞

R-CHOP利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松

R/R复发性/难治性

SBP收缩压

SDD喷雾干燥分散体

Sf9草地贪夜蛾9

STD10动物中 ≤ 10%的重度毒性剂量

T-HALF表观终末半衰期

Tfh辅助性T细胞

Tmax达到最大观察浓度的时间

THL/TEL三重打击淋巴瘤或三表达淋巴瘤

TK毒代动力学

TNF肿瘤坏死因子

UDP尿苷二磷酸

ULOQ定量上限

UGT葡萄糖醛酸基转移酶

US美国

UV紫外线

Vss稳态分布容积

WBC白细胞

1 概述。此研究者手册含有关于BMS-986458（一种BCL6的小分子双功能小脑蛋白依赖性配体定向降解剂（LDD），最初被开发用于治疗患有复发性和/或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤（R/R DLBCL）和滤泡性淋巴瘤（R/R FL）的患者）的信息。DLBCL是非霍奇金淋巴瘤（NHL）的一种侵袭性亚型，总体上占美国（US）所有癌症的大约4%，在2020年在美国有估计29,108例新病例¹，占确诊的NHL赘生物的所有病例的26%。R/R FL是在美国和西欧确诊的第二常见淋巴瘤，占NHL病例的大约22%，并且70%为惰性淋巴瘤。²

BMS-986458是两种非对映异构体的混合物。每种异构体中的三个立体异构源中心中的两个具有 (R) 构型。第三个立体异构源中心在BMT-648592中具有 (R) 构型，并且在BMT-648599中具有 (S) 构型。还在药代动力学和药效学研究中测试了单独异构体。单独非对映异构体在进行的所有体外药理学测试中显示出等效的活性³。在体内OCI-LY-1异种移植模型中，对于相同剂量水平的BMS-986458及其单独非对映异构体观察到相似的肿瘤BCL6降解程度¹⁵。另外的手性分析表明，在小鼠体内发生显著的差向异构化。

已经对BMS-986458进行了药理学、安全性药理学和药代动力学（PK）评价。使用口服途径（临床试验中的预期施用途径）在大鼠和狗中进行了关键的符合良好实验室规范（GLP）的毒性研究，以评估和表征BMS-986458的潜在毒性。

1.1 背景。DLBCL的当前的标准护理是由利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松（R-CHOP）组成的强化免疫化学疗法方案。将单克隆抗CD20利妥昔单抗添加到CHOP疗法中导致总生存期的15%增加，但是尽管存在这种改善，仍有40%的患者最终经历复发性或难治性疾病，并且代表了大面积未满足的医学需求。^4,5,6,7,8,9

临床研究已经证明了与高风险NHL相关的许多细胞遗传学和突变概况，其中最具破坏性由涉及癌基因c-Myc、BCL2和BCL6的三联体的扰动定义，称为三重打击淋巴瘤或三表达淋巴瘤（THL/TEL）。在THL/TEL中，这些因子或者在免疫球蛋白基因座内遗传易位，导致外源性上调，或者展现出具有驱动癌基因过表达或蛋白质稳定的调节因子的突变特征。总之，这些癌基因导致转化的B细胞淋巴瘤的异常增殖和对治疗剂的耐药性。

BCL6是控制B细胞分化和抗体亲和力成熟程序的主转录调节因子。激活的B细胞中的BCL6表达在转变到生发中心（GC）中时升高，并且促进对与体细胞超突变和类别转换重组（分化为表达或分泌高亲和力抗体B细胞受体的血浆或记忆B细胞所需的过程）相关的基因毒性应激的耐受。在20%的新确诊的表达外源水平的BCL6的DLBCL患者中，细胞周期检查点和DNA损伤反应途径被多效性抑制，导致不受调节的细胞增殖和恶性转化。DLBCL细胞系模型中BCL6的降解和遗传扰动已经表明，在下游程序的去抑制时，细胞周期被阻止或受损，并且DNA损伤反应被激活，最终导致细胞凋亡和细胞死亡。

BMS-986458强效且选择性地降解DLBCL细胞系和正常免疫细胞两者中的BCL6。在体外，BMS-986458在表达高水平BCL6蛋白的DLBCL细胞系亚群中诱导急性细胞凋亡反应，所述BCL6蛋白在生发中心B细胞（GCB）细胞来源（COO）模型中普遍存在。在所有情况下，细胞凋亡和对BMS-986458的抗增殖反应两者均比小脑蛋白E3连接酶调节药物（CELMoD）来那度胺显著更强效。相对于对照组，在R/R DLBCL模型中观察到对BMS-986458的增强的敏感性。除了体外活性，BMS-986458在两个DLBCL细胞系来源的异种移植物（CDX）模型中还展现出强的体内抗肿瘤活性并且从离体患者来源的异种移植物（PDX）模型中展现出抗增殖反应。

1.2 非临床药理学。将BMS-986458在几个体外NHL模型中进行评价，并且在DLBCL的广谱GCB和原发性纵隔B细胞淋巴瘤（PMBL）亚型中显示出快速且强效的抗增殖和促细胞凋亡肿瘤细胞杀伤。还在对标准护理药剂多柔比星的获得性耐药性的几个模型中评估了抗肿瘤反应，相对于多柔比星敏感对照，所述标准护理药剂多柔比星展现出对BMS-986458的显著致敏和从抗增殖到细胞凋亡反应的转变。

广泛地说，对BMS-986458的抗肿瘤反应与BCL6表达水平相关并且因此与富含导致BCL6上调或蛋白稳定的扰动的GCB亚型模型相关。来自表达BCL6的细胞系模型的反应的性质被细分为两个类别，急性细胞凋亡或迟发性抗增殖反应。急性反应系在化合物处理的5天内显示出细胞凋亡信号传导，而迟发性致敏剂在5天后展示出对增殖的可忽略或轻度的影响，然后所述影响在BMS-986458再暴露5天后增强。不表达BCL6的细胞系模型在延长的化合物暴露后未展现出增殖能力的任何丧失。

BMS-986458的作用机制需要与CRL4CRBN E3泛素连接酶底物受体小脑蛋白（CRBN）相互作用以诱导靶蛋白BCL6的募集。随后的BCL6泛素化触发靶标的蛋白酶体破坏，导致生长抑制和细胞凋亡的诱导。此外，蛋白质组学和机制研究证明，在评价的DLBCL模型中，BCL6是被BMS-986458降解的唯一底物，并且几种下游途径的调节介导BMS-986458的抗增殖活性。在药物治疗的24 h内，关键调节因子和抗增殖蛋白被去抑制；这些包括细胞周期检查点抑制剂p27/CDKN1和PTEN/SHP1（一种关键的抑制性磷酸酶）。

在体内，在用一天两次（BID）给药方案的OCI-LY-1和WSU-DLCL2 DLBCL异种移植模型（分别代表急性和迟发性敏感的临床前模型）中评价了BMS-986458的抗肿瘤活性。在荷瘤小鼠中的初始药代动力学/药效学（PK/PD）研究建立了BMS-986458的肿瘤浓度与肿瘤组织中BCL6降解的深度/持续时间之间的明确相关性。BID给药方案PK/PD研究导致适用于在24h内诱导肿瘤中BCL6的几乎完全降解（95%至100%）的血浆和肿瘤浓度。在两个DLBCL异种移植模型中，BMS-986458以BID给药模式在体内展现出抗肿瘤活性，实现了显著的肿瘤体积减小（TVR）。此TVR与PK暴露量和BCL6降解的深度/持续时间相关。在这些研究结束时收集的肿瘤的PK和PD分析揭示了BMS-986458的显著血浆和肿瘤浓度，并且在OCI-LY-1异种移植模型中，持续降解 ≥ 95%肿瘤BCL6似乎是显示最少大约65%肿瘤体积减小所必需的。在OCI-LY-1异种移植模型中，这种程度的肿瘤BCL6降解和相应的抗肿瘤反应可以用重复BID给药15-30 mg/kg BMS-986458来实现。在体内OCI-LY-1异种移植模型中，对于相同剂量水平的BMS-986458及其单独非对映异构体，观察到相似程度的肿瘤BCL6降解。此外，在相同剂量水平下，在体内WSU-DLCL-2异种移植模型中观察到相似的反应。另外的手性分析表明在小鼠体内发生显著的差向异构化。

在GC内，B细胞在暗区与明区之间循环，因为它们经历连续几轮的亲和力成熟。在明区，B细胞与滤泡性辅助性T细胞（Tfh）相互作用，其中通过细胞-细胞相互作用和细胞因子信号传导，它们促进高亲和力克隆的选择和生存。还需要Tfh细胞来维持GC的结构，并且因此Tfh细胞对于免疫攻击时产生高亲和力抗体至关重要。在淋巴结内增殖的NHL的亚型（诸如滤泡性淋巴瘤（FL））的生存依赖于Tfh支持。BCL6是Tfh细胞的谱系决定因子，是维持GC内细胞身份和功能所需要的。在体外评价了BMS-986458对诱导的Tfh群体的影响，其中显示BCL6的降解通过典范标志物CXCR5和PD1的表达导致Tfh细胞身份的渗透性丧失。

尽管BCL6降解下游的分子途径对淋巴样分化和功能至关重要，但是在其他免疫群体中也可能存在潜在的生物学作用。嗜中性粒细胞减少症是许多目前的血液学治疗剂中观察到的常见II级AE；因此，在体外评估了BMS-986458治疗对嗜中性粒细胞活力和成熟途径的影响。相比于媒介物对照，在临床相关浓度下未观察到CD34+CD33-CD11b-细胞成熟至CD34-CD33-CD11b+阶段的活力丧失。

1.3 非临床药代动力学。已经进行了体外和体内研究，以表征BMS-986458的吸收、PK、分布、代谢和药物相互作用潜力。

在小鼠、大鼠、狗和猴中，BMS-986458显示出低至中等的全身清除率（≤ 肝血流量的44%）、低至中等的稳态分布容积（Vss；全身总水量的0.4-3.5倍）、中等口服生物利用度（22%至37%），其中相应的表观终末半衰期范围为0.9至5.5小时。此外，在大鼠、狗和猴中在IV输注或PO施用单独非对映异构体之后，观察到BMS-986458（BMT-648592或BMT-648599）的非对映异构体之间的显著相互转化（基于AUC高达41%）。

在小鼠、大鼠、兔、狗、猴和人中，BMS-986458与血浆蛋白高度结合，未结合分数（fu）< 1%。在人与狗之间观察到fu的物种差异（5.3×），而在人相比于大鼠或兔之间未观察到显著差异（≤ 2×）。在向Sprague-Dawley大鼠10至300 mg/kg单个口服剂量之后，脑BMS-986458浓度为 < 0.22 µM（脑/血浆比率是在≥ 100 mg/kg下 ≤ 0.10并且在 ≤ 30 mg/kg下无法适当评估，因为分别在雌性和雄性大鼠中在给药后24小时和48小时浓度低或不可测量），表明跨越血脑屏障的穿透最小。

在口服施用之后，在人肝细胞、以及来自临床前物种的肝细胞中以及在来自大鼠和狗的血浆样品中评价了BMS-986458的代谢。BMS-986458在测试的物种中的主要代谢途径包括去甲基化、氧化，随后是葡萄糖醛酸化和水解。BMS-986458是大鼠和狗血浆中主要的药物相关的循环化合物。尽管各物种之间代谢物的形成存在定量差异，但是定性地，在人肝细胞中形成的所有代谢物也在来自大鼠和/或狗（用于临床前安全性测试的两种物种）的肝细胞中形成，表明不存在独特的人代谢物。

人细胞色素P450（CYP）亚型和人肝微粒体的反应表型分型研究表明，BMS-986458主要由CYP3A4/5代谢，并且CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9和CYP2C19的参与较少。在体外，BMS-986458展现出对CYP3A4的时间依赖性抑制，其中酶失活速率（kinact）为0.054/min并且抑制常数（KI）为28 μM。在人肝细胞中，高达20 µM的BMS-986458显示出对CYP1A2的弱诱导并且对CYP3A4或CYP2B6无诱导。这些数据表明，如果BMS-986458与CYP3A4的强抑制剂或诱导剂、敏感CYP3A底物或具有窄治疗窗口的CYP3A底物共同施用，则存在药物-药物相互作用（DDI）的潜力。

另外，BMS-986458显示出对尿苷二磷酸（UDP）-葡萄糖醛酸基转移酶（UGT）1A1的抑制，IC50为0.15 µM。

体外测定表明，BMS-986458是外排转运蛋白P-糖蛋白（P-gp）的底物并且很可能是乳腺癌耐药蛋白（BCRP）的底物。BMS-986458也是P-gp和BCRP的抑制剂，其中半最大抑制浓度（IC50）值分别为3.3和1.6 µM。这些数据表明，BMS-986458有潜力在肠道中引起P-gp和/或BCRP的抑制，并且在存在P-gp抑制剂的情况下BMS-986458的吸收可能增加。

此外，BMS-986458显示出对以下多种肝胆和肾转运蛋白的抑制：有机阴离子转运多肽（OATP）1B1、OATP1B3、多药耐药性相关蛋白（MRP）2、有机阳离子转运蛋白（OCT）1、OCT2、胆盐输出泵（BSEP）、多药和毒素外排蛋白（MATE）1和MATE2K，其中IC50值范围为0.29至9.5µM。总体而言，基于预期的临床暴露量（在预计有效剂量范围内），与这些药物转运蛋白发生全身性相互作用的潜力似乎低。然而，由于临床暴露量是可获得的，将持续评价DDI的潜力。

1.4 非临床毒理学。在一系列全面的非临床毒性研究中评价了BMS-986458（非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的混合物）的非临床毒理学，所述非临床毒性研究包括在大鼠和狗中BID给药长达28天持续时间的单剂量和重复剂量毒性研究、体外和体内遗传毒性研究、体外光毒性研究以及体外和体内心血管安全性药理学研究。根据提出的40 mgBID起始临床剂量下的预测暴露量（AUC和Cmax）计算以下所示的暴露倍数。使用通量方法使用蛋白质结合的预测物种差异并且通过对于体外测定而言假设99%的蛋白质结合，已经针对游离分数校正了Cmax倍数。

已经在体外和体内表征了BMS-986458影响心血管系统的潜力。BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599在体外在大致相当的浓度下抑制心脏离子通道，其中hERG IC50分别为0.44、0.52和0.16 µg/mL（0.7、0.83和0.25 µM）（对于BMS-986458为519×）。在0.628 µg/mL（1 µM）的最高测试浓度下，BMT-648592和BMT-648599分别将心脏L型钙通道抑制9.4%和7.4%。在人诱导多能干细胞来源的心肌细胞（hiPSC-CM）中的多电极测定中，BMS-986458在≥ 0.19 µg/mL的浓度（0.3 µM；224x）下使场电位持续时间（FPDc）、心律失常搏动增加并且使传导速度降低，并且在1.9 µg/mL（3µM；2240×）下观察到搏动频率的增加。在探索性兔电生理学研究中，通过IV输注施用12 mg/kg BMS-986458（游离血浆浓度 = 1.16 µg/mL，0.729 µM；1365×）时，注意到QTc间期增加（Fridericia校正的QT [QTcF] = 51.2 ms；Vande Water校正的QT [QTcV] = 24.4 ms），但是心率的增加（34%）和平均血压的降低（-34%）干扰了解释。在遥测大鼠和狗的非GLP研究中以及在1个月GLP大鼠和狗研究中，在高达500mg/kg/BID的剂量下在大鼠（游离Cmax = 0.194 µg/mL；228×）中和在高达50 mg/kg/BID的剂量下在狗（游离Cmax = 0.866 µg/mL；192×）中都未注意到BMS-986458相关的心脏、神经系统和/或呼吸系统发现结果。

在体外，BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599在Ames测定中致突变性呈阴性，但是在CHO和/或TK6细胞中的探索性体外测定中在存在或不存在S9组分的情况下致碎裂性（clastogenicity）和致非整倍体性（aneugenicity）呈阳性。分别在非GLP的2周大鼠毒性研究中和在独立的符合GLP的体内遗传毒性研究中，在高达500 mg/kg BID的日剂量下，未注意到对外周微核或彗星（十二指肠和肝）测定的BMS-986458相关效应，表明BMS-986458在体内无遗传毒性。

在Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞中的符合GLP的中性红摄取光毒性测定中，BMS-986458的光毒性潜力呈阳性。将在体内研究中进行光毒性潜力的随访确认。

在大鼠和狗中进行持续时间长达1个月的重复给药毒性研究。在大鼠中进行的关键1个月口服毒性研究（剂量为50、150和500 mg/kg BID）中，在高达500 mg/kg BID（总共1000 mg/kg/天）的高剂量下不存在不良发现结果。因此，500 mg/kg BID被认为是未观察到不良效应的水平（NOAEL）。在狗中的关键1个月口服毒性研究中，以0、5、15和50 mg/kg BID的剂量口服施用BMS-986458。在50 mg/kg BID的剂量下，在第1天注意到食物消耗降低，导致体重减轻和临床病症下降，需要在第7天对10只狗中的3只进行早期安乐死，并且没有临床状态衰退（clinical decline）的明确原因。在50 mg/kg BID下的所有其他狗均存活至安排的尸检，而没有显著的临床体征。不存在其他不良发现结果，并且BMS-986458在剂量 ≤15 mg/kg BID下是良好耐受的。因此，NOAEL和最高非重度毒性剂量（HNSTD）被认为是15mg/kg BID。

在重复剂量毒性研究中，在大鼠和狗中观察到几种剂量反应性非不良发现结果。与BCL6作为免疫系统调节因子的作用一致^10,11，在大鼠和狗中观察到免疫抑制和促炎变化，包括循环WBC、嗜中性粒细胞、淋巴细胞以及T细胞、B细胞和/或自然杀伤（NK）细胞的增加；抗钥孔虫戚血蓝蛋白（KLH）IgM和/或IgG抗体产生的降低；仅在大鼠中细胞因子（白细胞介素 [IL]-1β、IL-2、IL6、肿瘤坏死因子 [TNF]α、干扰素 [IFN]γ）的降低；胸腺、肠相关淋巴样组织（GALT）和淋巴结（狗）或脾边缘区（大鼠）中的淋巴样细胞量的降低；4只狗的股胫关节的混合细胞炎症以及1只狗的心房室瓣膜的极小嗜中性粒细胞炎症（两种发现结果均仅在高剂量下）。这些发现结果与已发表的BCL6作为免疫系统的主调节因子的作用一致。在两个物种中都观察到具有再生反应的红细胞（RBC）参数降低。在大鼠中，观察到血小板增加，其中在各研究中凝血参数没有一致的变化。在狗中注意到胆红素的增加，其中无显微镜下相关异常（correlate）或转氨酶增加，并且潜在地是由UGT1A1抑制介导的。在两个物种中均观察到肝肥大和体重增加，其中在大鼠中观察到的发现结果与酶诱导和继发性甲状腺上皮肥大相关。在狗中，观察到粪便组成的不一致变化和阳性粪便隐血（FOB）测试，而没有相关的胃肠道病理学。在两个物种中均注意到较少肾脏效应且无病理相关异常，其中狗的肾脏重量增加并且大鼠的血尿素氮（BUN）轻度增加。最后，在大鼠中观察到束状带的极小肥大。

BMS-986458不降解经典CELMoD新底物，诸如Aiolos、CK1α、Ikaros、GSPT1和SALL4。因此，预期BMS-986458毒性特征将与CELMoD存在差异，包括潜在的生殖毒性。然而，由于迄今为止尚未进行生殖毒性评估，并且BMS-986458的机制是小脑蛋白依赖性的，将BMS-986458作为推定的选择性发育有毒物质进行处理。

总体而言，非临床毒理学评估支持BMS-986458向临床试验的进展。

1.5 首次人体临床研究。研究CA123-1000是一项多中心、开放标签、剂量发现结果、1期研究，以确定BMS-986458在患有R/R NHL的参与者中的安全性、耐受性、PK、药效学和初步功效。这项研究将分2部分进行。剂量递增（A部分）将评价递增口服剂量的BMS-986458，以评价安全性、耐受性和PK，并且指导确定BMS-986458作为单一药剂或其与利妥昔单抗的组合在患有DLBCL和FL的参与者中的最大耐受剂量（MTD）和/或OBD。剂量扩展（B部分）将进一步评价在一个或多个扩展队列中以或低于MTD/OBD施用的BMS-986458的安全性、初步功效和PK，以确定作为单一药剂或其与抗淋巴瘤药剂的组合以一个或多个剂量的RP2D。

2 介绍。BMS-986458正在处于开发中，用于治疗R/R DLBCL和R/R FL。

存在几种显示出治疗血液恶性肿瘤的前景的药剂。患有R/R NHL和FL的受试者代表了具有差期望寿命的异质群体。在体外，BMS-986458已展现出多种药理活性，包括在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系（包括具有获得性多柔比星耐药性的细胞系）中的抗增殖效应和对细胞凋亡的强效诱导。BMS-986458还在正常淋巴细胞（诸如滤泡性辅助性T细胞群体）中展现出强的免疫调节活性。在体内，BMS-986458已经在多种DLBCL异种移植模型中展现出强效抗肿瘤活性。

3 物理/化学和药学特性及配制品

3.1 物理/化学特性。选择BMS-986458-01用于剂型开发，并且其也被称为BMS-986458。原料药（drug substance）是2种非对映异构体（BMT-648592和BMT-648599）的混合物。每种异构体中的三个立体异构源中心中的两个具有 (R) 构型。第三个立体异构源中心在BMT-648592中具有 (R) 构型，并且在BMT-648599中具有 (S) 构型。BMS-986458-01原料药的物理和化学特性提供于表3.1-1中。

表B3-3.1-1：物理和化学特性

3.2 药学特性和配制品

3.2.1 剂型的描述

20 mg和80 mg BMS-986458-01膜包被片剂。在临床研究中使用BMS-986458-01膜包被片剂。20 mg和80 mg膜包被片剂描述于表3.2.1-1中。

20 mg和80 mg规格片剂含有BMS-986458-01喷雾干燥分散体（SDD）和以下非活性成分：无水乳糖、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、二氧化硅、硬脂酰富马酸钠和Opadry膜包衣。BMS-986458-01 SDD含有35% w/w的BMS-986458-01原料药，通过使原料药和EudragitL100-55在二氯甲烷和甲醇中的溶液喷雾干燥来制备。片剂供应在具有干燥剂和防儿童封闭件的紧密密闭的高密度聚乙烯（HDPE）瓶中。

表B3.2.1-1：BMS-986458-01膜包被片剂的描述

3.2.2 药物产品制备

20 mg和80 mg BMS-986458-01膜包被片剂。对于BMS-986458-01膜包被片剂，无需制备。

3.2.3 推荐的储存和使用条件

20 mg和80 mg BMS-986458-01膜包被片剂。BMS-986458-01膜包被片剂应在2ºC至8ºC（36°F至46°F）下在紧密封闭的HDPE容器中避光储存。

4 非临床研究。用BMS-986458进行一系列非临床主要和次要药理学、安全性药理学、PK和毒理学研究。这些研究的汇总提供于以下章节中。

4.1 非临床药理学

4.1.1 主要药效学

4.1.1.1 体外药理学

OCI-LY-1模型中的内源性降解动力学。BMS-986458是一种针对致癌靶标BCL6的强效且高选择性的CRBN依赖性LDD。使用MSD-ECL测定来测量BCL6蛋白水平，在不同体外模型中长达4 h暴露之后，半最大降解浓度（DC50）确定为0.12 nM ± 0.0018（图1；图2A和图2B）。在单独非立体异构体BMT-648592和BMT-648599中独立地评估了DC50。在2 h孵育后，BCL6降解特征相似，其中BMT-648599相比于BMT-648592显示出20倍的效力差异（分别为DC50 = 1.6 ± 1.1 nM相比于0.08 ± 0.06 nM）（图2C所示的来自代表性实验的剂量反应）。评估了两种异构体的抗增殖反应，并且证明了尽管在2 h时降解效力发生了变化，但是在异构体与非对映异构体混合物之间在5天时间段内对增殖的影响没有显著差异，这很可能是在实验条件下差向异构化至当量比的结果（图2D）。

在由于THL分类而表达高水平BCL6蛋白的OCI-LY-1模型中，单个10 nM剂量的BMS-986458在小于0.5 h内降解大于90%的BCL6蛋白，并且将蛋白维持在最大降低的水平持续至少5天，如通过蛋白质印迹评估的（图2F和图2G）。

BMS-986458暴露的抗增殖效应被确认为CRBN依赖性的，因为相对于媒介物，在OCI-LY-1^CRBN-/-中没有观察到来自5天LDD处理的增殖能力的损失，如通过CellTiter-Glo®发光细胞活力测定（CTG）确定的（图2H）。

在4 h和24 h暴露之后在OCI-LY-1模型中的蛋白质组学评价。使用质谱全蛋白质组分析在OCI-LY-1细胞中评估BMS-986458的选择性。在使用100 nM BMS-986458的4 h暴露之后，BCL6是唯一显著降解的底物。在高于统计学阈值，未检测到受CRBN介导的降解剂影响的历史新底物。在24 h在相同条件下对BMS-986458的评估证明了已知受BCL6直接调节的许多蛋白质的丰度发生显著变化，诸如去抑制细胞周期检查点抑制剂p27/CDKN1B和调节性磷酸酶SHP-1/PTPN1^12,13（图3）。

BMS-986458 DLBCL细胞系模型中的抗增殖和促细胞凋亡反应。在暴露于跨0.015-100 nM的BMS-986458剂量范围之后，评价了二十个DLBCL细胞系模型的抗增殖反应，并且使用CTG进行评估，之后使用曲线下面积（AUC）来定量反应深度。此评价最初在与BMS-986458一起的120 h孵育后进行。在这些条件下，20个细胞系中的3个（15%）显示增殖能力丧失超过两倍（AUC < 5 μM • h），并且被分类为急性敏感。在另外15%的细胞系模型中观察到较轻度的反应（AUC < 7 μM • h）。此评估也在延长的LDD暴露之后进行，所述LDD暴露涵盖与10 nMBMS-986458的5天预孵育时间段，先前证明维持100% BCL6损失持续120 h（图4）。测量初始5天反应的影响，并且将其涵盖到T120/T0 DMSO CTG信号校正因子中。在总共240 h暴露后，另外十个系展现出AUC < 7 μM • h，并被分类为迟发性反应的。在10天内对BMS-986458的总反应率为65%，涵盖急性敏感反应和迟发性反应两者。通过膜联蛋白V+DRAQ+染色进一步评估十个反应系（急性和迟发性）的细胞凋亡反应。在5天BMS-986458处理之后，观察到只有急性反应系诱导细胞凋亡（图5），表明迟发性反应主要是细胞抑制性的。

评价基线BCL6底物表达对BMS-986458反应深度的影响。在一大组细胞系模型上进行蛋白质印迹蛋白质分析，并且将BCL6表达定量。当与BMS-986458 10天反应AUC相比时，发现这是相关的，相当于R²皮尔逊相关系数为0.416。值得注意的是，鉴于相对低的BCL6基线表达，几种细胞系模型显示出比预期显著更高的敏感性（图6）。

在工程化多柔比星耐药模型中对BMS-986458的体外反应。在三个成对的DLBCL工程化细胞系模型中评价对BMS-986458的细胞凋亡反应，所述模型展示了获得性多柔比星耐药性，所述获得性多柔比星耐药性是在与亚致死剂量一起孵育几个月之后获得的¹⁴。在5天测定之后，多柔比星的增殖IC50如所预期的为大约1 µM。然而，对BMS-986458的反应显著改变（图7）。在SUDHL-4和U2932中，AUC降低了至少30%，表明这些模型显示出对BCL6降解的增加的敏感性。在所有多柔比星耐药性（DoxR）模型（包括WSU-DLCL-2-DoxR，其中对BMS-986458的增殖反应与亲本相比更具耐药性）中，存在细胞凋亡诱导的大于两倍的增加，如通过AUC评估的。这指示在这些模型中，对BCL6及其降解后激活的途径的显著改变的依赖性。使用短暴露时间过程的蛋白质印迹蛋白分析来确认靶标降解并评价关键的BCL6下游生物标志物（图7）。对基线MDR1表达的分析证明了这种膜转运蛋白是多柔比星耐药性的主要驱动因素，也导致BCL6降解受损。尽管存在这种减弱的降解反应，几种典范BCL6下游生物标志物在DoxR系中仍然受到调节，包括p27/CDKN1B和SHP-1/PTPN6。然而，在基线表达和增殖信号传导激活（包括组成型活性）中观察到主要变化。

然后在BMS-986458处理之后，SUDHL-4^DoxR中的AKT^ser473（由于PTEN表达丧失而存在）下调。所有DoxR模型中的共同观察结果是涉及抗细胞凋亡蛋白Bcl-2的畸变，由基线表达丧失或BMS-986458依赖性诱导减弱而得出。总之，这部分地解释了在DoxR相比于亲本细胞系模型中BMS-986458处理之后向细胞凋亡反应的普遍转变。

4.1.1.2 体内药理学。体内药理学研究的目的是确定BMS-986458在细胞系来源的DLBCL异种移植模型中的BCL6降解活性和随后的单一药剂抗肿瘤活性的程度。这些研究包括在OCI-LY-1和WSU-DLCL-2皮下异种移植模型中的PK和PD研究以确定与血浆和肿瘤BMS-986458浓度相关的BCL6的肿瘤内降解动力学，以及单一药剂抗肿瘤活性。

BMS-986458在OCI-LY-1异种移植模型中的药代动力学、药效学和抗肿瘤活性。为了评价BMS-986458在体内的药效学影响，在OCI-LY-1异种移植模型中，在一天一次（QD）或BID给药的情况下在短期3天或5天PK/PD研究中，使用蛋白质印迹确定并定量BCL6的肿瘤内水平。建立血浆和肿瘤中BMS-986458暴露量与BCL6降解（PD标志物）的PK/PD关系。在30和60mg/kg下研究PK/PD关系。在OCI-LY-1肿瘤中观察到BMS-986458的剂量和时间依赖性暴露以及伴随的BCL6降解。对于相同剂量，观察到PK的一些变异性，但是PK和PD彼此相关。

设计多项PK/PD研究，以评价BMS-986458以30 mg/kg BID给药持续连续5天（研究AP9506）¹⁵或连续3天（研究AP9721）¹⁵或者以60 mg/kg QD给药持续连续3天（研究06E26-0023）¹⁵的PK和PD参数。评价血浆和肿瘤BMS-986458浓度连同BCL6的降解动力学。在以30mg/kg每日两次给药连续五天之后，观察到肿瘤内BCL6的显著降解（90%至99%）（图8）。在此时间期间，血浆BMS-986458浓度范围在0.00773与5.25 μM之间。肿瘤BMS-986458浓度范围在0.0354与0.873 μM之间（表4.1.1.2-1）。类似地，在每日两次给药连续三天之后当血浆BMS-986458浓度范围在2.39与0.809 μM之间时，肿瘤内BCL6存在显著降解（97%至98%）（图8和表4.1.1.2-1）。肿瘤BMS-986458浓度范围在1.26与0.202 μM之间（表4.1.1.2-1）。在QD给药的情况下，观察到24 h内肿瘤内BCL6的显著且持续的降解（91%至98%），其中血浆BMS-986458浓度范围在11.360与0.223 μM之间。肿瘤BMS-986458浓度范围在3.243与0.043 μM之间。30 mg/kg BID（AP9721）¹⁵和相应的QD 60 mg/kg（06E26-0023）¹⁵剂量两者导致相似的BCL6降解水平。

表B3-4.1.1.2-1：在BID × 5、BID × 3或QD × 3给药之后OCI-LY-1异种移植物中BMS-986458的血浆/肿瘤暴露量和BCL6降解百分比

缩写：NA，不适用；BCL6，B细胞淋巴瘤6；h，小时；BIDx5，每日两次给药持续连续5天；BIDx3，每日两次给药持续连续3天；QDx3，每日一次持续连续3天；SD，标准差。

^a与平均媒介物肿瘤BCL6水平相比，确定BMS-986458治疗的肿瘤中的平均BCL6降解。

总之，来自OCI-LY-1肿瘤模型中PK/PD研究的数据表明，血浆和肿瘤BMS-986458暴露量在研究之间是可变的，并且这可能是由于批次间的变化和化合物的形式。考虑到变化，在BID给药的情况下在给药后10 h时血浆BMS-986458浓度 > 2.4 μM将导致连续肿瘤BMS-986458浓度 > 0.04 μM。这些暴露导致OCI-LY-1肿瘤中 > 90%的BCL6降解。当血浆和肿瘤浓度分别维持 > 0.8 μM和 > 0.2 μM时，可以实现超过97%的肿瘤BCL6降解。

还在药代动力学和药效学研究中测试了单独异构体。单独非对映异构体在进行的所有体外药理学测试中显示出等效的活性³。在体内OCI-LY-1异种移植模型中，对于相同剂量水平的BMS-986458及其单个非对映异构体观察到相似的肿瘤BCL6降解程度（OG00457）¹⁵。暴露结果的另外手性分析还表明，小鼠体内发生显著的差向异构化，其中与BMT-648592相比，BMT-648599在小鼠中稍微更易发生差向异构化。

在OCI-LY-1异种移植物模型中用15、30和60 mg/kg BID给药测试BMS-986458的单一药剂抗肿瘤活性（AP9553）¹⁵。在此模型中，使用单周期CHOP疗法（以下的组合：环磷酰胺 -第1天单剂量；多柔比星 - 第1天单剂量；长春新碱 - 第1天单剂量；和泼尼松 - 第1天至第5天QD给药持续5个剂量 [QD × 5]）作为阳性对照。观察到BMS-986458具有显著的（p <0.0001）剂量依赖性抗肿瘤活性，其中在15、30和60 mg/kg BID下，肿瘤体积减小分别为53%、62%和76%。在此反应研究中测试的所有剂量的BMS-986458的情况下，在最后剂量后2 h和10 h时间点时，在反应研究结束时收集的血浆和肿瘤样品显示出深度（95%至99%）且统计学上显著的（p < 0.0001）BCL6降解。来自这些样品的药代动力学数据表明，在OCI-LY-1异种移植模型中，BCL6的持续降解 ≥ 97%（其可以在一天两次给药后10 h时 > 0.24 μM血浆和 > 0.15 μM肿瘤BMS-986458浓度的情况下实现）赋予超过62% TVR的功效。

表B3-4.1.1.2-2：在每日两次给药持续连续19天之后OCI-LY-1异种移植物中的肿瘤体积减小百分比、BMS-986458的血浆/肿瘤暴露量以及BCL6降解百分比（AP9553）

在另一项研究（AP9742）中¹⁵，在OCI-LY-1异种移植模型中以30和60 mg/kg BID给药评价BMS-986458及其异构体BMT-648592和BMT-648599的抗肿瘤活性。当与媒介物对照相比时，BMS-986458和两种异构体显示出显著的抗肿瘤活性，其中分别在30和60 mg/kg下，BMS-986458的TVR为60%和64%，BMT-648592的TVR为48%和83%，并且BMT-648599的TVR为54%和66%（OG00457）¹⁵。与BMS-986458相比，在30 mg/kg剂量下未观察到BMT-648599的抗肿瘤活性的显著差异。在较高剂量（60 mg/kg）下的BMT-648592的抗肿瘤活性显著（p < 0.01）优于在相应剂量水平下的BMS-986458。还从用BMS-986458和异构体（BMT-964592和BMT-964599）给药的组收集的样品中评估了BCL6降解程度。与BMT-986458相似，在OCI-LY-1肿瘤中在用异构体BMT-648592和BMT-648599的情况下观察到BCL6的深度降解。对于所有三种化合物，在6、10和14 h时间点观察到相似的降解深度（94%至100%）。暴露结果的另外手性分析也表明在小鼠体内发生显著的差向异构化。总体而言，此OCI-LY-1研究中的血浆和肿瘤BMS-986458浓度和抗肿瘤活性与其他OCI-LY-1异种移植物研究相比似乎存在中等程度的差异。在当前研究中用测试化合物或阳性对照（CHOP疗法）的抗肿瘤反应低于在相应剂量水平下的其他研究（OG00457）¹⁵。

在随后的剂量反应研究（AP9776）中¹⁵，在OCI-LY-1异种移植模型中在15、45和60mg/kg BID下测试BMS-986458。在15 mg/kg和45 mg/kg下观察到显著的（p < 0.0001）单一药剂剂量依赖性抗肿瘤活性，其中肿瘤体积减小分别67%和84%。用以45和60 mg/kg BID给药的BMS-986458观察到相似的抗肿瘤活性（84% TVR）（图9和表4.1.1.2-3）。此研究中的最小有效剂量（如通过肿瘤体积减小大约65%定义）为15 mg/kg BID剂量水平。

与来自AP9553和AP9742的发现结果一致¹⁵，在研究结束时收集的OCI-LY-1肿瘤中观察到深度且统计学上显著的BCL6降解。在6 h时间点，用15、45和60 mg/kg BID剂量的BMS-986458分别实现了98%、99%和99% BCL6降解。此外，用15、45和60 mg/kg BID剂量在10h时间点分别观察到98%、100%和99%的BCL6降解（图10）。在14 h时间点，用15、45和60 mg/kgBID剂量的BMS-986458分别观察到95%、100%和100%的BCL6降解（表4.1.1.2-3）。此药效学数据连同血浆和肿瘤BMS-986458浓度分析表明，在此研究中使用的所有三个剂量水平的BMS-986458都导致接近完全的BCL6降解（95%至100%）。对于15、45和60 mg/kg BID，每个BMS-986458剂量组的计算血浆AUC_(0-24 _h)值分别为26.1、137.2和256 μM∙h/mL（表4.1.1.2-3）。在血浆和肿瘤连续浓度分别为 > 0.07和 > 0.04 μM BMS-986458的情况下持续降解 >95%是赋予> 65%反应所必需的。BMS-986458在治疗期间是良好耐受的，并且在测试的剂量水平下没有显著的体重减轻。

在此研究中，将BMS-986458的抗肿瘤活性与用15、45和60 mg/kg BID给药的单独异构体BMT-648592进行比较。在用15、45和60 mg/kg的BMT-648592的情况下，肿瘤体积减小分别为66%、81%和81%。未观察到BMS-986458和单独异构体BMT-648592的抗肿瘤活性的显著差异（表4.1.1.2-3）。与BMT-986458相似，在研究终止时收集的OCI-LY-1肿瘤中用单独异构体BMT-648592观察到BCL6的深度降解。对于两种化合物，在6、10和14 h时间点观察到相似的降解深度（94%至100%）（表4.1.1.2-3；OG00457¹⁵）。

总之，来自使用OCI-LY-1异种移植模型的研究的数据与从研究结束时收集的样品中获得的PK和PD数据相结合？表明给定剂量的血浆和肿瘤BMS-986458暴露量和抗肿瘤活性在研究之间是可变的，并且这可能是由于批次间的变化和化合物的形式。考虑到变化，肿瘤BCL6降解 > 95%的持续降解似乎是显示出大约65% TVR的反应所必需的（其中包括阳性对照的所有研究组中的TVR均较低的研究AP9742除外）。可以在用重复BID给药15-30 mg/kg的情况下在给药后10 h，在血浆和肿瘤BMS-986458浓度分别 > 0.24和 > 0.15 μM的情况下实现这种程度的肿瘤BCL6降解和相应的抗肿瘤反应。在用15 mg/kg BID的情况下，从研究AP9776得出的计算BMS-986458有效血浆AUC(0-24) h为26.1 μM•h/mL（表4.1.1.2-3）。

表B3-4.1.1.2-3：在每日两次给药持续连续21天之后OCI-LY-1异种移植物中的血浆暴露量和BCL6降解百分比（AP9776）

用每日两次给药，BMS-986458在WSU-DLCL-2异种移植模型中的抗肿瘤活性（AP9664）。在WSU-DLCL-2异种移植模型中用30和60 mg/kg BID给药测试BMS-986458的单一药剂抗肿瘤活性。在此模型中，使用单周期CHOP疗法（以下的组合：环磷酰胺 - 第1天单剂量；多柔比星 - 第1天单剂量；长春新碱 - 第1天单剂量；和泼尼松 - 第1天至第5天QD给药持续5个剂量 [QD x 5]）作为阳性对照。BMS-986458显著抑制WSU-DLCL-2异种移植瘤的生长，其中在30和60 mg/kg BID下分别具有69%和74% TVR（表4.1.1.2-4）。在30 mg/kgBMS-986458治疗的组中未观察到显著（p > 0.05）的体重减轻。在第29天（p < 0.01）、第33天（p < 0.05）、第36天（p < 0.05）和第39天（p < 0.01），在用60 mg/kg BMS-986458治疗的动物中观察到小幅（3.6%-5.1%）但统计学上显著的体重减轻。

与来自OCI-LY-1异种移植模型中的研究（研究AP9553、AP9742和AP9776）的在研究终止时收集的样品中的数据相似，与媒介物组相比，在来自用BMS-986458治疗的组的WSU-DLCL-2肿瘤裂解物中观察到深度且统计学上显著的BCL6降解。在30 mg/kg下，在6、10和14h时，存在98%、97%和86%的BCL6降解。在60 mg/kg下，在6、10和14 h时，BCL6降解为99%、99%和98%（表4.1.1.2-4）。此药效学数据以及血浆和肿瘤BMS-986458浓度分析表明，30和60mg/kg BID给药导致几乎完全BCL6降解（97%至99%，除了在30 mg/kg下14 h，其显示出86%降解）。连续血浆和肿瘤BMS-986458浓度分别为 > 0.1和 > 0.07 μM是赋予 > 65%抗肿瘤反应所必需的。

表B3-4.1.1.2-4：在每日两次给药持续连续14天之后WSU-DLCL-2异种移植物中BMS-986458的血浆/肿瘤暴露量和BCL6降解百分比（AP9664）

总之，来自使用WSU-DLCL-2异种移植模型的研究的数据与从研究结束时收集的样品获得的PK和PD数据结合表明，在血浆和肿瘤BMS-986458浓度分别为 > 0.7和 > 0.5 μM的情况下可以实现 > 95%的肿瘤BCL6降解，并且达到 > 65% TVR的最小有效剂量为30 mg/kg，BID。

4.1.2 次要药效学。在与BCL6功能依赖性或通常观察到的治疗敏感性相关的正常免疫群体中评价了BMS-986458治疗对BCL6降解的影响。

4.1.2.1 BMS-986458对滤泡性辅助性T细胞的影响。在体外在T-滤泡辅助性细胞中评估BMS-986458的影响。这些群体通常不存在于生发中心之外；因此，评价需要从分离自健康供体PBMC的幼稚T细胞分化。在这些研究的条件下，在使用抗CD3/CD28珠、激活素A和IL-12刺激后4天时观察到来自分选的CD4+细胞的CXCR5+PD1+ICOS+BTLA+的最大诱导，其中分化率始终在20%至30%之间。在第4天分化的Tfh细胞的进一步表征显示出对典范Tfh细胞因子IL-21的强诱导和BCL6的诱导表达（图11C）。当包括10 nM BMS-986458与刺激时，尽管BCL6完全降解但是相对于媒介物，CXCR5+PD1+ICOS+BTLA+IL-21分泌细胞的第4天分化率未受影响，并且这在供体之间是一致的。然而，IL-10分泌显著增加（图11F）。当在第8天和第12天分析细胞表型时，在供体间存在CXCR5+PD1+ iTfh细胞的BMS-985458剂量依赖性损失并且伴随有IL-21分泌损失，而活力没有显著损失。正在进行BMS-986458处理之后这些细胞的表型鉴定。

4.1.2.2 BMS-986458对嗜中性粒细胞成熟的影响。在BMS-986458暴露下，CD34+来源的细胞的细胞活力和增殖未受影响。在超过临床相关浓度的剂量下，观察到嗜中性粒细胞的轻微减少，反映了成熟阶段II。这种轻度效应是可逆的，因为在化合物洗脱后观察到完全恢复。

4.2 非临床药代动力学和代谢。进行体外和体内研究，以表征BMS-986458的吸收、PK、分布、代谢和药物相互作用潜力。开发了用于确定BMS-986458浓度的稳健且可重复的生物分析方法，并且将其用于PK和毒代动力学（TK）研究。在小鼠（仅IV PK）、大鼠、狗和猴中评价BMS-986458的药代动力学和口服生物利用度。进行体外研究以评估BMS-986458代谢、渗透性、血浆蛋白结合、血液-血浆分布、细胞色素P450（CYP）酶的抑制和诱导潜力、肠外排转运蛋白底物和抑制潜力、肝和肾转运蛋白抑制潜力以及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1（UGT1A1）抑制潜力。另外，评价来自大鼠和狗中的多剂量探索性毒性研究的血浆样品的循环代谢物。表4.2-1列出了迄今为止用BMS-986458进行的分析方法验证、吸收、分布、代谢、PK和药物相互作用研究。

表B3-4.2-1：非临床药代动力学研究

4.2.1 生物分析方法。开发了用于确定BMS-986458血浆浓度的稳健且可重复的生物分析方法，并且将其用于PK和TK研究。在非临床符合GLP的毒理学研究中，根据卫生机构指南（Health Authority Guidance），对用于定量BMT-648592和BMT 648599（BMS-986458的非对映异构体）的液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）生物分析测定进行充分验证^33,34。经验证的方法的细节汇总于表4.2.1-1中。其他PK和药物代谢研究使用适合目的的生物分析方法以定量BMS-986458。

表B3-4.2.1-1：BMS-986458血浆浓度测量的生物分析方法验证

4.2.2 吸收和药代动力学。在静脉内（IV）输注和口服施用之后，在雄性CD-1小鼠（仅IV）、雄性Sprague Dawley大鼠、雄性比格犬和雄性食蟹猴中评价BMS-986458的PK。IV和口服施用的平均PK参数汇总于表4.2.2-1中。

在单次IV输注之后，BMS-986458全身性血浆清除率（CLTp）在小鼠和狗中低（≤ 肝血流量的11%），并且在大鼠和猴中中等（≤肝血流量的44%） ³⁵ ,36。稳态分布容积（Vss）的范围为0.217至2.45 L/kg，并且在小鼠和狗中低（全身总水量的0.4至0.7倍），在大鼠中低至中等（全身总水量的0.4至3.0倍）并且在猴中中等（全身总水量的2.4-3.5倍），表明BMS-986458具有一些血管外分布。BMS-986458的表观终末半衰期（T-HALF）在测试的所有非临床物种中都是中等的并且范围为0.9至5.5小时。 ²⁰ ,21,22,23

在单个口服剂量之后，BMS-986458被吸收，其中在大鼠、狗和猴中平均Tmax值范围为2.67至4.0小时。在测试的所有3种非临床物种中，BMS-986458具有中等口服生物利用度（22%至37%）。 ²⁰ ,21,22,23

此外，在单次IV输注或口服剂量的BMS-986458的单独非对映异构体（BMT-648592或BMT-648599）之后，在大鼠、狗和猴中观察到非对映异构体之间的显著相互转化（基于AUC高达41%）。 ²⁰

在毒理学研究中检查多个口服剂量之后BMS-986458的毒代动力学 ⁴⁵ ^, ⁴⁷ 。通常，在大鼠和狗两者中都观察到暴露量存在大的个体间变异性。在BMS-986458重复给药后，考虑到大的个体间变异性，大鼠的平均BMS-986458全身暴露量（AUC[0-24h]）在50至500 mg/kgBID的剂量范围内通常呈低于剂量比例性增加，并且没有显著的性别差异。在大鼠中，在第28天的平均AUC(0-24h)值略低（0.4至0.8×）于第1天的值。在狗中，重复给药后的平均AUC(0-24h)值通常从5至15 mg/kg BID呈大于剂量比例性增加以及从15至50 mg/kg BID呈近似剂量比例性增加，并且考虑到大的个体间变异性，注意到没有显著的性别差异并且没有暴露量的累积或损失。

总体而言，在小鼠（无生物利用度数据可用）、大鼠、狗和猴中，BMS-98458展现出临床前物种的中低至中等的全身清除率、与低至中等的稳态分布容积、以及可接受的口服生物利用度。在大鼠、狗和猴中在IV输注或PO施用单独非对映异构体之后，观察到非对映异构体之间的显著相互转化（基于AUC，高达41%）。

4.2.3 分布。在CD-1小鼠、Sprague-Dawley大鼠、新西兰白兔（雌性）、比格犬、食蟹猴和人（合并雄性和雌性）血浆中评价BMS-986458的体外血浆蛋白结合。使用超速离心方法评估各物种的血浆中0.1、1和10 µg/mL下的血浆蛋白结合。此外，在小鼠、大鼠、兔、狗、猴和人全血中1 µg/mL下评价BMS-986458的体外血液-血浆分配。

在小鼠、大鼠、兔、狗、猴和人血浆中，BMS-986458与血浆蛋白的结合分别高达99.95%、99.84%、99.78%、99.99%、99.68%和99.06%，其中相应的未结合分数（fu）< 1%。此结果与从改良快速平衡透析（血浆稀释10倍）结合探索性生物分析方法获得的较早期探索性结果一致。在所有物种中测试的浓度范围内，未观察到血浆蛋白结合的显著差异，表明在所有物种中与血浆蛋白的结合均未饱和。考虑到血浆蛋白结合测量的不确定性（即，多个无蛋白上清液样品中的不可测量浓度），进行正交测定（即，通量透析方法），并且确认在所测试的所有物种中BMS-986458的血浆fu < 1%。此外，在人与狗之间观察到fu的物种差异（5.3×），而在人相比于大鼠或兔之间未观察到实质性差异（≤ 2×）。 ²⁰ ,25

在小鼠、大鼠、兔、狗、猴和人中，BMS-986458的血液-血浆浓度比率分别为0.68、0.68、0.87、0.62、0.74和0.76，表明BMS-986458到血细胞中的分配有限。 ²⁵

在大鼠中在范围为10至300 mg/kg的单个口服剂量之后，确定BMS-986458在脑中的分布。在向Sprague-Dawley大鼠10至300 mg/kg单个口服剂量之后，脑BMS-986458浓度在雌性大鼠中在给药后24小时为 ≤ 0.22 µM（脑/血浆比率在以 ≥ 100 mg/kg时 ≤ 0.10，并且在 ≤ 30 mg/kg下由于低或不可测量 [即，< LLOQ 0.0029 µM] 浓度而无法适当评估），并且在雄性大鼠中在给药后48小时不可测量，表明跨越血脑屏障的穿透最小。此外，BMS-986458还分布在肝、脾、淋巴结、回肠、心脏和肺中，其中组织/血浆比率范围为0.6至42（细节参见章节4.3.1.1 非临床毒理学）。 ²⁶

尚未评价BMS-986458在其他组织中的分布和BMS-986458跨越胎盘屏障的转运。

4.2.4 代谢

4.2.4.1 代谢稳定性。用人、大鼠、小鼠（仅微粒体）、狗和猴的NADPH强化的肝微粒体和肝细胞评价BMS-986458的代谢稳定性 ²⁰ ^, ²⁴ 。将BMS-986458（0.5 µM）与NADPH强化的肝微粒体（1 mg/mL）在37ºC下孵育长达45分钟，以确定体外半衰期和CYP介导的代谢的速率。在孵育时间段后，将混合物用乙腈沉淀，并且离心。通过LC-MS/MS分析上清液以得到反应混合物中剩余的BMS-986458的相对量。此外，将BMS-986458（1.0 µM）与大鼠、狗、猴和人的合并的冷冻保存的肝细胞悬浮液（1×10⁶个细胞/mL）在37ºC下孵育长达120分钟，以确定体外半衰期。通过添加含有内标（即，特非那定）的乙腈使反应停止，并且将其离心。通过LC-UV [紫外线]/MS分析上清液，并且针对标准曲线定量反应混合物中BMS-986458的剩余量。

用肝微粒体孵育观察到BMS-986458的CYP介导的代谢的可变速率（0.0070至0.0189 nmol/min•mg蛋白）。在猴和大鼠中观察到最高的代谢速率，随后是人和小鼠，并且在狗中观察到最低的代谢速率。BMS-986458在肝细胞中的体外半衰期的范围为53至114分钟，在人肝细胞中观察到的最长半衰期。

4.2.4.2 代谢物谱分析。在口服施用之后，在小鼠、大鼠、狗、猴和人肝细胞中以及在来自大鼠和狗的血浆样品中评价BMS-986458的代谢。将BMS-986458（2 µM）与来自动物（合并雄性）和人（单独雄性）的冷冻保存的肝细胞在37ºC下孵育长达4小时。在孵育时间段后，将混合物用乙腈沉淀，并且离心。通过具有在线UV的LC-MS/MS来分析上清液，用于代谢物鉴定。

在人肝细胞中，BMS-986458主要通过以下方式代谢：去甲基化与水解和氧化，随后是作用较小的葡萄糖醛酸化。人肝细胞中另外的次要代谢途径包括单氧化、脱氢以及哌啶与吲唑部分之间的接头的切割。人肝细胞中最显著的代谢物（可通过UV检测）是M11（去甲基化）；M6和M8（水解）；M9、M10、M13、M13a和M13b（单氧化）；M21（氧化，随后是葡萄糖醛酸化）；M20（哌啶与吲唑部分之间的接头的切割）、M12a和M12b（脱氢）。在这些代谢物中，除了M9、M13和M13b仅在狗肝细胞中通过MS检测到，M13b在猴肝细胞中也是如此之外，所有代谢物均在小鼠、大鼠、狗和猴的肝细胞中通过UV检测到。尽管各物种之间代谢物的形成存在定量差异，但是定性地，在人肝细胞中形成的所有代谢物也在来自大鼠和/或狗（用于临床前安全性测试的两种物种）的肝细胞中形成，表明不存在独特的人代谢物。 ³⁷

在来自大鼠和狗多次口服施用后的血浆中，BMS-986458是主要的（76%至90%）药物相关循环种类，并且观察到的代谢物与肝细胞中观察到的代谢物相似，表明良好的体外与体内相关性。在大鼠血浆中通过UV检测到的代谢物是M9、M9a、M10、M11、M13a和M20；并且在狗血浆中，M6、M9、M9a、M10、M11、M12、M12a、M12b、M13、M13a、M13b、M16和M20可通过UV检测到。 ²⁸ ^, ²⁹

4.2.4.2 反应表型分型。人CYP亚型和人肝微粒体与同工酶特异性抑制剂的反应表型分型研究表明，BMS-986458主要由CYP3A4/5代谢，并且CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9和CYP2C19参与较少。 ²⁷

4.2.5 排泄。尚未进行研究BMS-986458的排泄的研究。尚未评价BMS-986458或其相关组分向母乳中的排泄。

4.2.6 药代动力学药物相互作用

4.2.6.1 基于代谢的药物相互作用的评价。进行体外研究，以评价由于BMS-986458抑制CYP同工酶导致的药物-药物相互作用（DDI）的可能性。在用于检查直接抑制的实验条件下，BMS-986458对CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4无抑制性效应（IC50 > 20 µM）。在体外，当分别使用咪达唑仑或睾酮作为底物时，BMS-986458展现出对CYP3A4的时间依赖性抑制，IC50偏移 > 16.3倍或 > 18.1倍（不与BMS-986458一起预孵育相比于与BMS-986458一起预孵育）。使用咪达唑仑作为底物，确定酶失活速率（kinact）和抑制常数（KI）分别为0.054/min和28 μM。此外，还观察到BMS-986458对CYP1A2的弱的时间依赖性抑制，IC50偏移 > 2.5倍。基于预期的临床剂量和暴露量并且根据FDA和EMA指导文件解释体外CYP抑制数据 ³⁸ ,39，如果将BMS-986458与强CYP3A4抑制剂或诱导剂、敏感CYP3A底物或具有窄治疗窗口的CYP3A底物共同施用，则可能存在潜在的临床相关全身性DDI。将在BMS-986458的整个开发过程中评价DDI的潜力。另外，BMS-986458显示出对尿苷二磷酸（UDP）-葡萄糖醛酸基转移酶（UGT）1A1的抑制，IC50为0.15 µM。 ²⁴

进行一项体外研究，以确定BMS-986458在冷冻保存的人肝细胞培养物中诱导CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4 mRNA表达的潜力。相对于媒介物对照，用BMS-986458（0.1至20 μM）处理培养的人肝细胞导致CYP1A2 mRNA增加 ≤ 4倍。mRNA增加 ≤ 阳性对照诱导剂的9.86%。这些结果表明，BMS-986458可能是弱CYP1A2诱导剂。相比之下，相对于媒介物对照，BMS-986458（0.1至20 μM）处理导致CYP2B6和CYP3A4 mRNA增加 < 2倍，并且mRNA增加 ≤阳性对照诱导剂的4.94%，表明BMS-986458不是CYP3A4或CYP2B6的诱导剂。 ³⁰

4.2.6.2 基于转运蛋白的药物相互作用的评价。为了评估被动渗透性，在Madin-Darby犬肾细胞株II（MDCK II）中测试BMS-986458，其中内源性犬多药耐药性1基因（cMDR1）被敲除。在含有0.5%牛血清白蛋白的测定缓冲液中浓度为3 µM时，BMS-986458 A至B渗透性为大约151 nm/sec。然而，由于注意到回收率差（64%），A至B渗透性很可能被低估。在MDCKII-mdr1-敲除细胞测定中观察到的被动渗透性值与BMS-986458的中等口服生物利用度一致。²⁴

在Caco-2（有或没有外排转运蛋白抑制剂）和表达MDR1的MDCKII细胞中测试了3 µM的BMS-986458，以评估肠外排转运蛋白底物的潜力。在Caco-2细胞中，BMS-986458回收率为60%，并且外排比率 > 4.4。此外，在Caco-2细胞中将3 µM的BMS-986458与乳腺癌耐药蛋白（BCRP）抑制剂（1 µM的KO143）或P-糖蛋白（P-gp）抑制剂（5 µM的唑喹达）一起孵育。在添加BCRP和P-gp抑制剂的情况下外排比率仅略有降低，并且分别保持 > 3.1或 > 2.5。此测定的BMS-986458回收率相对低（54%至63%），表明渗透性很可能被低估。在表达MDR1的MDCK细胞中，外排比率为111，并且BMS-986458回收率范围为58%至110% ²⁴ 。总之，体外测定显示BMS-986458是P-gp的底物并且很可能是BCRP的底物。

在Caco-2中进行体外测定，以评估BMS-986458抑制肠外排转运蛋白的潜力。BMS-986458被确定为P-gp和BCRP的抑制剂，其中半最大抑制浓度（IC50）值分别为3.3和1.6 µM。这些数据表明，BMS-986458有潜力在肠道中引起P-gp和/或BCRP的抑制，并且在存在P-gp抑制剂的情况下BMS-986458的吸收可能增加。 ²⁴

在表达摄取转运蛋白的HEK293细胞和来自表达人胆盐输出泵（BSEP）或人多药耐药相关蛋白（MRP）2的杆状病毒感染的昆虫细胞的外翻质膜（囊泡）中评估BMS-986458（高达50 µM）抑制一组肝胆和肾转运蛋白的潜力。BMS-986458显示出对以下多种转运蛋白的抑制：有机阴离子转运多肽（OATP）1B1、OATP1B3、MRP2、有机阳离子转运蛋白（OCT）1、OCT2、BSEP、多药和毒素外排蛋白（MATE）1和MATE2K，其中IC50值范围为0.29至9.5 µM。总体而言，基于预期的开始临床暴露量（在预计有效剂量范围内），与药物转运蛋白发生全身性相互作用的潜力似乎低。然而，由于临床暴露量是可获得的，将持续评价DDI的潜力。

4.2.7 其他药代动力学研究。基于非临床物种的PK特性，并且使用针对小鼠、大鼠、狗和猴中的未结合总清除率校正的异速生长标度，预测人体清除率低（3.6 mL/min/kg）。使用Øie-Tozer模型 ⁴⁰ 用来自大鼠、狗和猴的稳态分布容积（Vss）和血浆蛋白结合数据来预测人Vss。预测BMS-986458在人体中具有2.08 L/kg的中等Vss。预测的人T-HALF为大约10.6小时。因为BMS-986458在所测试的所有物种中均高度结合（血浆中未结合分数 [fu,p]< 1%），因此人CL和Vss估计值的准确性可能受蛋白结合测量结果的影响。预测人吸收速率常数（ka）和口服生物利用度（F）分别为0.32 h^-1和26%；两者都是源自大鼠、狗和猴的几何平均值。 ³²

在多个递增剂量研究中在40 mg BID的预期临床起始剂量下并且假设是70 kg人，这些PK参数导致预计稳态Cmax为85 ng/mL，并且AUC(0-12h)为754 ng•h/mL。在640 mg BID的最高提出剂量下，这些PK参数导致在稳态下，Cmax为1354 ng/mL，并且AUC(0-12h)为12,064 ng•h/mL。³²

4.2 非临床毒理学。已经完成了一系列非临床研究，包括单剂量毒性、重复剂量毒性、基因毒性、安全性药理学和光毒性，以评估BMS-986458的潜在毒理学特征。选择大鼠和狗用于毒性研究，因为BMS-986458在这两个物种中具有药理学活性。如表4.3-1中概述的BMS-986458的毒理学评价范围支持了其提出的在人体中的1期研究中的临床测试。在经济合作与发展组织（OECD）数据互认计划（Organization for Economic Cooperation andDevelopment (OECD) Mutual Acceptance of Data program）的成员国中并且根据OECD测试指南和GLP原则或美国食品药品监督管理局（United States Food and DrugAdministration，FDA）联邦法规（CFR）第21篇第58部分（21CFR58）的GLP法规进行关键研究。

表B3-4.3-1：毒理学研究

4.3.1 单剂量毒性

4.3.1.1 大鼠中的单剂量研究。在大鼠中的单剂量毒代动力学和耐受性研究中²⁶，将BMS-986458以0（媒介物）、10、30、100或300 mg/kg的单剂量通过口服管饲施用于6只大鼠（3M/3F）的组。所有剂量均在媒介物/载体中以10 mL/kg施用，所述媒介物/载体由在25 mM柠檬酸盐缓冲液（pH = 3）中的10% Captisol组成。评价标准包括药代动力学、生物分布、BCL6表达、生存期、体重、临床观察结果、临床病理学和细胞因子评价。在研究给药过程中在指定时间进行这些评价。BMS-986458的毒代动力学汇总呈现于下表中。

表B3-4.3.1.1-1：毒代动力学汇总 - 雄性和雌性大鼠中的BMS-986458平均值

在给药后24或48小时，收集组织用于生物分析，以测量血浆和组织中BMS-986458的量并且确定相应的组织/血浆比率。在给药后24小时从雌性大鼠收集血浆和组织并且在给药后48小时从雄性大鼠收集血浆和组织，用于生物分析。在雌性大鼠中，在所有剂量下在回肠中发现最高的药物浓度和组织/血浆比率。在雄性大鼠中，在10 mg/kg剂量之后在肝中以及在 ≥ 30 mg/kg剂量之后在回肠中发现最高的药物浓度和组织/血浆比率。组织生物分析数据汇总于下表中。

表B3-4.3.1.1-2：在给药后24小时在雌性大鼠的血浆和组织中的BMS-986458浓度

在给药后24小时从雌性中以及在48小时从雄性中收集脾、肝和心脏的样品，并且使用蛋白质印迹评价BCL6表达，并且针对β-肌动蛋白表达进行归一化。在治疗后24小时或48小时，大鼠在脾和肺中显示出降低的BCL6蛋白。在心脏中不存在BCL6蛋白的显著降低。

BMS-986458在所有剂量下都是良好耐受的，并且对体重或临床体征无不良效应、血清化学或血液学无显著变化、尸检时无宏观检查的发现结果。血清细胞因子分析显示出BMS-986458相关的CX3CL1、IL-12（p70）和IL-5降低，所述CX3CL1、IL-12（p70）和IL-5涉及T细胞和B细胞分化和/或细胞粘附/迁移活性并且可能与BCL6药理学相关。IL-12（p70）、CXCL10、瘦素和VEGF-A的另外的化合物相关的变化可能指示血管生成活性的稳态变化。

总之，在大鼠中以高达300 mg/kg的单剂量施用的BMS-986458是良好耐受的。在给药后24小时和48小时，在脾和肺中检测到BCL6蛋白水平的统计学上显著降低的证据，指示这些组织中的药理活性。

4.3.1.2 施用单个口服剂量的狗的最大耐受剂量和毒代动力学评估。在单剂量最大耐受剂量研究中 ⁴¹ ，将BMS-986458以0（媒介物）、15、45或90 mg/kg的剂量通过口服管饲施用于2只狗（1只雄性和1只雌性/组）的组。评价标准包括药代动力学、蛋白质组学、生存期、体重、临床观察结果、食物消耗和临床病理学评价。在第1天至第3天评价食物消耗。在测试前以及第3天和第6天进行临床病理学评价。在给药后0.5、1、4、5、7、24和48小时评价药代动力学。

在15 mg/kg至90 mg/kg剂量之间未观察到剂量比例性。BMS-986458单独非对映异构体（BMT-648592和BMT-648599）的血浆浓度具有2 : 1比率的偏向BMT-648592的显著趋势。在用45 mg/kg或90 mg/kg给药的2只狗之间存在大的个体变异性。BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599的个体毒代动力学数据汇总如下。

表B3-4.3.1.2-1：毒代动力学汇总 - 施用单个口服剂量的狗的最大耐受剂量和毒代动力学评估

从外周血收集的白细胞的蛋白质组学评价显示，在给药后4小时在所有剂量组中存在85%至90% BCL6降解。在所有剂量下，BCL6水平在给药后24小时存在部分反弹，其中在90 mg/kg下持续70%至80%降解。与媒介物相比，在所有剂量组中，在给药后4小时BCL6被BMS-986458选择性降解。在此比较中，没有另外的蛋白质展现出统计学上显著的调节，包括典范CELMoD底物（例如，IKZF1、IKZF3、GSPT1、CK1α）。在给药后24小时无其他蛋白质被显著调节，表明BCL6降解的持续时间可能不足以看到其降解在白细胞中的继发性效应。

在BMS-986458施用前和施用后长达6天观察时，所有剂量组中的狗均看起来正常（警觉且活跃的）。不存在临床体征、对体重或食物消耗的效应。与测试前相比，在所有剂量下，观察到WBC和嗜中性粒细胞的增加。在90 mg/kg下的雌性狗中，注意到与测试前相比丙氨酸转氨酶（ALT）水平升高，并且持续直到给药后第10天（在第10天高达2.02倍）。

总之，分别地，以15、45或90 mg/kg的单个口服剂量施用的BMS-986458未达到成剂量比例性的暴露量，其中2种非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的血浆浓度比率为2 :1。在给药后4小时，BCL6降解为85%至90%，而到24小时，存在剂量相关的BCL6反弹，仅90 mg/kg剂量维持至少70%的BCL6降解。BMS-986458剂量施用在BCL6降解方面显示出良好的选择性，并且没有值得注意的脱靶活性。BMS-986458是良好耐受的，其中仅高剂量雌性（4201）呈现出给药后升高的ALT水平持续至少10天（AUC[INF] = 1512 µg•h/mL）。

4.3.2 重复剂量毒性

4.3.2.1 大鼠中的5天非GLP研究。在探索性5天毒性研究中 ⁴² ，将BMS-986458以0（对照制品）、50、150或500 mg/kg（总日剂量为0、100、300和1000 mg/kg/天）的剂量通过口服管饲BID（间隔8 ± 0.5小时）施用于6只雄性大鼠的组（除了第5天，这天大鼠仅在早晨接受单剂量）。在媒介物中以10 mL/kg BID施用所有剂量，所述媒介物由在水中的0.25%Methocel E4M组成。终点包括生存期、毒代动力学、代谢物谱分析、临床观察结果、体重、食物消耗、临床病理学（血液学、凝血、临床化学和尿分析）评价、药效学（BCL6表达）评价、器官重量以及大体和显微镜病理学分析。在5天给药时间段结束时进行安排的尸检（6只/组）。

在第4天重复给药后，BMS-986458及其非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的平均全身暴露量（AUC[0-24h]）从50至150 mg/kg BID通常呈剂量比例性增加并且从150至500 mg/kg BID呈低于剂量比例性增加。BMS-986458以及非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的毒代动力学汇总呈现于下表中。

表B3-4.3.2.1-1：毒代动力学汇总 - 平均值 - 雄性大鼠中五天口服探索性毒性研究

^a BMS-986458是BMT-648592和BMT-648599的混合物。根据血浆BMS-986458浓度特征曲线估计毒代动力学参数，所述特征曲线通过在每个时间点将单独BMT-648592和BMT-648599浓度相加而构成。

来源：研究DN22115⁴²

大鼠血浆样品的代谢物谱表明，在500 mg/kg BID的多个日剂量后，BMS-986458作为循环中的主要药物种类没有变化，所述主要药物种类占大鼠血浆中总循环种类的约76%。大鼠血浆中最丰富的代谢物是经由母体的单氧化（M9和M10）形成的，占总循环种类的10.9%和6.9%。还检测到低水平的氧化和N-脱烷基化代谢物（≤ 2.5%）。在150 mg/kg BID剂量组中也发现相似的代谢物谱。

在第4天给药后4小时，相对于媒介物组平均值，在50、150和500 mg/kg BID BMS-986458下，组的WBC中BCL6水平的平均百分比分别为102.6%、90.8%和91.3%，表明以在 ≤500 mg/kg BID下BCL6未显著降低。在给药BMS-986458的大鼠中，循环WBC中的基础BCL6表达低，并且可能干扰了检测降低的能力。

不存在BMS-986458相关的濒死或死亡或者对临床观察结果、体重、食物消耗、器官重量、大体病理学或组织病理学的影响。

在 ≥ 50 mg/kg BID下，BMS-986458相关的发现结果包括：

•在剂量 ≥ 150 mg/kg BID下，成熟红细胞总量参数（RBC、血细胞比容 [HCT]、血红蛋白 [HGB]）的极小降低与网织红细胞计数的极小至轻度剂量相关的降低相关，无显微镜下相关异常

•总WBC淋巴细胞、单核细胞（在 ≥ 150 mg/kg BID下）、嗜碱性粒细胞和/或大的未染色细胞计数的极小通常剂量相关的增加，无组织学相关异常甘油三酯的最少降低、总胆汁酸浓度的极小至轻度降低、和胆固醇浓度的极小剂量相关的增加

o鉴于描述BCL6在脂质代谢中的新出现的作用的报告（敲除小鼠研究）^65,66和/或也潜在地由于胆汁酸合成减少⁶⁷，甘油三酯和胆固醇的发现结果被认为是潜在地药理学介导的

在500 mg/kg BID的高剂量下，观察到凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）的BMS-986458相关的轻度延长，无临床观察相关异常。

总之，在 ≤ 500 mg/kg BID的口服剂量下，在5天内雄性大鼠对BMS-986458是临床上良好耐受的。基于不存在剂量限制性毒性，MTD被认为是500 mg/kg BID（BMS-986458平均AUC[0-24h]为149 µg•h/mL）。

4.3.3.2 在每日两次口服施用BMS-986458（CC-2021676）持续连续10天的雌性大鼠中的探索性毒代动力学和耐受性研究。在探索性毒代动力学和耐受性研究中 ⁴³ ，向雌性大鼠（每个治疗组6只）以0、50、150和300 mg/kg BID（间隔6小时给药）的剂量施用BMS-986458持续10天。评价标准包括毒代动力学、BCL6蛋白测量、生存期、体重、食物消耗、临床观察结果、临床病理学、组织病理学和肝脏CYP转录谱。

对于BMS-986458总药物浓度或各单独非对映异构体浓度，观察到低于剂量比例性的暴露量。在血浆中检测到60 : 40比率的单独异构体（BMT-648592 : BMT-648599），偏向于BMT-648592。毒代动力学数据汇总如下。

表B3-4.3.2.2-1：毒代动力学汇总 - 平均值 - 在口服施用BMS-986458（CC-2021676）每日两次持续连续10天的雌性大鼠中的探索性毒代动力学和耐受性研究

在最终剂量后约18小时，测量脾、回肠和肝中的BCL6蛋白。在高剂量下，脾、回肠和肝中存在BCL6蛋白表达的潜在反弹，其范围为约1.3至1.7×（p ≤ 0.06）。

在所有剂量下，BMS-986458是良好耐受的，其中体重、临床观察结果或血清化学无变化。分别在50、150和300 mg/kg BID下，存在WBC的剂量相关增加，其中变化倍数为1.54、1.85和2.95。在所有剂量组中，肝、脾、肠系膜淋巴结和回肠中均不存在不良组织病理学发现结果。

与媒介物对照相比，在150和300 mg/kg BID下，绝对肝重量的组平均值增加不是统计学上显著的（至13%），无组织病理学相关异常。

与对照相比，在300 mg/kg BID下，淋巴细胞增加3倍，并且单核细胞增加3.7倍。同样在此剂量水平下，所有动物在脾中显示出极小的髓系增生和/或边缘区耗竭，这被认为是药理学相关的。

测量肝样品中CYP2B2、CYP3A23和CYP4A2的转录表达以及编码过氧化物酶体β-氧化途径中重要的双功能酶的Ehhadh（烯酰基-辅酶A、水合酶/3-羟酰基辅酶A脱氢酶）。分别在50、150和300 mg/kg BID下，CYP2B2转录表达存在统计学上显著的降低（约0.5×、0.2×和0.25×），并且CYP3A23转录表达存在统计学上显著的增加（约3.5×、7×和14×）。

基于此研究中的发现结果，BMS-986458的MTD大于或等于300 mg/kg BID。

4.3.2.3 雌性大鼠中的两周口服BID探索性研究。在探索性两周毒性研究中⁴⁴，将BMS-986458通过口服管饲BID（间隔6 ± 0.5小时）施用于6只雌性大鼠的组中持续13天，总日剂量为0、100、300或600 mg/kg/天（0、50、150或300 mg/kg BID）。在第14天，在尸检前施用0、50、150或300 mg/kg的单剂量，用于定时收集遗传毒理学样品。所有BMS-986458剂量均以在媒介物中10 mL/kg（每日总共20 mL/kg）BID施用，或在最后一天以10 mL/kg施用一次，所述媒介物由10% Captisol（磺丁基醚β-环糊精钠）和90% 25 mM柠檬酸盐缓冲液pH 3 ±0.1组成。对于基因毒性评价，在第11天和第12天向6只雌性大鼠的阳性对照组通过口服管饲施用10 mg/kg/天的环磷酰胺（CP），并且在第14天施用200 mg/kg/天的甲磺酸乙酯（EMS），两者均以10 mL/kg施用。终点包括生存期、毒代动力学、临床观察结果、体重、临床病理学（血液学、凝血和血清化学评价）、免疫学（浆细胞表型分型和外周血淋巴细胞表型分型）评价、器官重量、大体和显微镜病理学分析、脾和回肠中的BCL6蛋白评价、微核评估和彗星测定评价。在BID给药2周之后进行安排的尸检。

BMS-986458及其非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的评价证明，在第1天BMT-648592、BMT-648599以及因此BMS-986458的给药后4小时浓度呈剂量比例性增加。在第13天，在给药后4小时的BMT-648592和BMT-648599浓度是第1天的4分之一至2分之一。在重复给药后，BMT-648592和BMT-648599以及因此BMS-986458的暴露量（AUC[0-24h]和Cmax）是小于剂量比例性。BMT-648592和BMT-648599的第13天暴露量（AUC）和第1天给药后4小时浓度大约为2 : 1的比率，偏向BMT-648592。

BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599的毒代动力学汇总呈现于下表4.3.2.3-1中。

表B3-4.3.2.3-1：毒代动力学汇总 - 平均值 - 雌性大鼠中的两周口服BID探索性毒性研究

在所有剂量下，BMS-986458是良好耐受的，并且对生存期、临床观察结果、体重、凝血、微核评估和彗星测定无影响。

在 ≥ 50 mg/kg BID下，在脾中展现出减少的BCL6蛋白（27%至44% BCL6蛋白降解）的药效学变化。

BMS-986458相关的发现结果通常是剂量相关的，并且包括：

在 ≥ 50 mg/kg BID下：

•网织红细胞计数的极小增加和红细胞分布宽度值的相应增加表明对成熟RBC参数（RBC、HGB和HCT）的极小非剂量相关降低有适当的骨髓反应

•总WBC和组成型淋巴细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞计数和/或大的未染色细胞计数的极小至轻度增加

•外周血浆细胞的增加（与对照组相比，增加4×）

•总胆红素浓度极小至轻度的非剂量相关增加，无组织学相关异常

•磷浓度的极小至轻度的非剂量相关增加

•胆固醇的极小至轻度增加

•肝（绝对和/或相对于体重）重量的增加与以下相关：在300和600 mg/kg/天下各1只大鼠中增加的肝大小、在300 mg/kg/天下在1只大鼠中肝细胞有丝分裂的极小增加以及在所有剂量水平下极小的肝细胞肥大。

在 ≥ 150 mg/kg BID下：

•血小板计数的极小增加

•球蛋白浓度极小增加，其连同在 ≥ 100 mg/kg/天下看到的白细胞计数的增加表明可能存在免疫/炎症反应，无组织学相关异常

•与对照相比，T细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞、B细胞和NK细胞增加（高达2×）

在300 mg/kg BID下：

•葡萄糖浓度的极小增加，其与在剂量 ≥ 100 mg/kg/天下胆固醇的极小增加的结合表明对代谢参数的轻微效应

总之，当通过口服管饲以总日剂量 ≤ 150 mg/kg BID（尸检当天150 mg/kg的单剂量）施用时，在13天内雌性大鼠对BMS-986458是临床上良好耐受的。在剂量 ≥ 50 mg/kgBID（第13天平均AUC ≥ 216 μg•h /mL）下的主要靶器官是肝（极小的肝细胞肥大和增加的有丝分裂）。基于发现结果的极小严重程度，MTD被确定为 ≥ 300 mg/kg BID（第13天平均AUC ≤ 335 μg•h/mL）。

4.3.2.4 在大鼠中的具有2周恢复时间段的一个月口服毒性研究。在关键的一个月毒性研究中 ⁴⁵ ，将BMS-986458以0（参考项目）、50、150或500 mg/kg BID（间隔8 ± 0.5小时；总日剂量为0、100、300或1000 mg/kg/天）的剂量施用于15只大鼠/性别的组。向对照组施用浓度（149.04 mg/mL）与BMS-986458高剂量（第4组）配制品中的HPMC-AS-HF浓度等效的高级别细粒羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯（HPMC-AS-HF）。在媒介物/载体中以10 mL/kg施用所有剂量，所述媒介物/载体由在超纯水中的0.25% w/w Methocel E4M组成。

评价标准包括生存期；TK参数；临床观察结果；体格检查；体重；食物消耗；眼科检查；临床病理学评价（血液学、凝血、临床化学和尿分析）；细胞因子评价；通过LC-MS分析的循环WBC中的BCL6蛋白水平、外周血免疫表型分型（总T淋巴细胞、辅助性T淋巴细胞和细胞毒性T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞）；T细胞依赖性抗体反应（TDAR）分析；器官重量；以及大体和显微镜病理学。在给药1个月后（10只/性别/组，所有组）并且在2周恢复时间段之后（5只/性别/组，所有组）进行安排的尸检。

在第28天重复给药后，考虑到大的个体间变异性，BMS-986458及其非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的平均全身暴露量（AUC[0-24h]）通常在50至500 mg/kg BID（100至1000 mg/kg/天）的剂量范围内呈小于剂量比例性增加，并且没有显著的性别差异。对于所有分析物，第28天的平均AUC(0-24h)值略低（0.4至0.8×）于第1天的值。在第1天和第28天，BMT-648592的平均全身暴露量（AUC[0-24h]）是另一种非对映异构体BMT-648599的大约2.5至3.3×。所有剂量的非对映异构体比率通常是相似的，并且在重复给药后无实质性变化。

BMS-986458及其非对映异构体的毒代动力学汇总呈现于下表中。

表B3-4.3.2.4.-1：毒代动力学汇总 - 平均性别合并值 - 在大鼠中的具有2周恢复时间段的一个月口服毒性研究

在所有测试的白细胞样品中定量BCL6蛋白。相对于对照，在任何剂量水平下，循环WBC中的BCL6水平均未被显著调节。在给药BMS-986458的大鼠中，循环WBC中的基础BCL6表达低，并且可能干扰了检测降低的能力。BCL6是免疫功能调节剂，并且以下章节中所述的免疫发现结果（包括免疫细胞计数、细胞因子水平和对KLH的抗体反应的变化）与BCL6降解下游的药理学活性一致。¹⁰’¹¹

BMS-986458在所有剂量下是临床上良好耐受的，并且没有BMS-986458相关的死亡或对体重、食物消耗、临床观察结果、体格检查、眼科学、尿分析或免疫表型分型终点的效应。在任何剂量水平下均未注意到BMS-986458相关的不良发现结果。尽管是BMS-986458相关的，但是以下变化被认为不是不良的，因为它们具有极小的严重程度和/或缺乏毒理学显著性。

在剂量 ≥ 50 mg/kg BID下，BMS-986458相关的发现结果包括：

•球蛋白的轻度增加，并且在 ≥ 150 mg/kg BID下，白蛋白与球蛋白比率（A/G）轻度降低

•在 ≥ 150 mg/kg BID下，雄性和单独雌性中的平均尿素氮的非剂量依赖性轻度增加，并且无显微镜相关异常

•在雌性中并且在500 mg/kg BID下在雄性中的总胆汁酸的轻度降低，并且在 ≥150 mg/kg下在仅雌性中的胆固醇极小增加。鉴于描述BCL6在脂质代谢中的新出现的作用的报告和/或由于胆汁酸合成减少，这些变化是潜在地药理学介导的^65,66,67

•平均单核细胞、淋巴细胞（≥ 150 mg/kg BID）、WBC（≥ 150 mg/kg BID）、大的未染色细胞（雄性，在500 mg/kg BID下）和血小板计数（≥ 150 mg/kg BID）轻度增加

•在雄性中和在 ≥ 150 mg/kg下在雌性中脾髓外造血的轻度或中度增加，与以下相关：在 ≥ 150 mg/kg BID下脾重量的增加（平均绝对值和相对值 [相对于身体和脑]；高达31%）、仅在50 mg/kg BID下的红细胞分布宽度和网织红细胞计数的极小至轻度增加以及在 ≥ 150 mg/kg BID下平均红细胞参数（RBC、HGB和/或HCT）的极小降低

•在雄性和在 ≥ 150 mg/kg BID下在雌性中肝重量的增加（平均绝对值和相对值[相对于身体和脑]；高达31%），与在500 mg/kg BID下肝中的小叶中心肝细胞的极小肥大相关

•甲状腺滤泡上皮的极小肥大，与甲状腺重量的增加相关（平均绝对值和相对值[相对于身体和脑]；高达30%），并且被认为继发于肝中的发现结果

•脾边缘区淋巴样细胞的轻度或中度降低

•在第28天在雌性中和在150 mg/kg BID下在雄性中血清TNFα（至0.2×）、IL-6（至0.1×）、IFNγ（至0.1×）和IL-2（至0.3×）水平的降低，并且第28天在500 mg/kg BID下在雄性中血清IL-1β（至0.6×）的降低

在 ≥ 150 mg/kg BID下，BMS-986458相关的发现结果包括：

•在雌性中和在500 mg/kg BID下在雄性中PT的极小降低（缩短）

•在雌性中和在500 mg/kg BID下在雄性中肾上腺重量的增加（平均绝对值和相对值 [相对于身体和脑]；高达38%），在雌性中仅在500 mg/kg BID下与肾上腺皮层的束状带的极小肥大相关

在500 mg/kg BID下，另外的BMS-986458相关的发现结果包括：

•在雌性中磷的极小增加

•在雄性中钾的极小增加

•仅在雌性中在KLH免疫后抗KLH IgM（第8天）和抗KLH IgG（第15天和第29天）水平降低（在所有时间点和Ig同种型中均降至0.4×）

截止2周恢复时间段结束时，所有BMS-986458相关的发现结果均是完全可逆的，除了在 ≥ 50 mg/kg BID下在雌性中和在 ≥ 150 mg/kg BID下在雄性中的尿素氮的轻度非剂量相关增加。

总之，在1个月内在 ≤ 500 mg/kg BID的BID口服剂量下大鼠对BMS-986458良好耐受。在任何剂量下都不存在BMS-986458相关的不良发现结果。在给药结束时，BMS-986458相关的非不良发现结果包括血清化学参数（钾、磷、BUN）变化；RBC参数降低与再生反应；血小板降低；免疫参数（细胞计数、细胞因子、针对KLH的抗体反应）变化；以及肾上腺、甲状腺、肝和脾的显微镜发现结果。除尿素氮的轻度、非剂量相关的增加之外，所有BMS-986458相关的变化均是完全可逆的。未观察到不良效应的水平（NOAEL）被认为是 ≥ 500 mg/kg BID（BMS-986458的平均性别合并第28天AUC[0-24h] = 229 µg•h/mL）。未观察到重度毒性，并且因此，STD10被认为是 > 500 mg/kg BID，测试的最高剂量。

4.3.2.5 在每日两次给药持续连续5天的狗中的耐受性和毒代动力学研究。在五天毒代动力学和耐受性研究中 ⁴⁶ ，将BMS-986458以0（媒介物）、7.5、15或30 mg/kg BID的剂量（间隔6小时；总计15、30或60 mg/kg/天）通过口服管饲施用于3只狗的组（混合性别/组）。所有剂量均在媒介物/载体中以3 mL/kg施用，所述媒介物/载体由在25 mM柠檬酸盐缓冲液（pH 3）中的10% Captisol组成。评价标准包括毒代动力学、通过蛋白质组学进行的白细胞中的BCL6蛋白评估、通过蛋白质组学进行的白细胞中的脱靶蛋白水平的潜在变化、生存期、体重、食物消耗、临床观察结果、FOB评价和临床病理学（血清化学和血液学）评价。

对于单独非对映异构体浓度，在第5天在7.5 mg/kg BID至30 mg/kg BID的剂量组之间观察到剂量比例性，以及对于第1天在15 mg/kg BID与30 mg/kg BID之间观察到剂量比例性。BMS-986458的单独异构体（BMT-648592和BMT-648599）的血浆浓度具有2 : 1比率的偏向BMT-648592的趋势。BMS-986458和2种异构体的毒代动力学汇总呈现于下表中。

表B3-4.3.2.5-1：毒代动力学汇总 - 平均值 - 在每日两次给药持续连续5天的狗中的耐受性和毒代动力学研究

在第1天和第4天早晨给药后大约4小时和24小时注意到外周血白细胞中非剂量依赖性BMS-986458相关的BCL6降解，表明在整个给药时间段期间持续的BCL6降解（与对照相比 > 80%降低）。典范CELMoD分子胶底物（例如，IKZF1/3、GSPT1、CK1α、HBS1L）未受影响。在早期收集点BCL6被选择性下调。在第4天给药后收集的后续样品中观察到白细胞蛋白质组的适度变化。

在任何剂量水平下均未注意到BMS-986458相关的体重或临床化学变化。

在剂量 ≥ 7.5 mg/kg BID下，BMS-986458在第1天开始引起散发性粪便变化（包括未成形或液体粪便或无粪便排出），并且到第5天变得最普遍，其中一些狗在给药后时间段内出现粪便变化直到第8天。在第4天和/或第5天，用BMS-986458治疗的所有狗的粪便样品均呈便血阳性。从第3天开始观察到食物消耗的降低（多达50%降低）。此外，用BMS-986458治疗的所有狗到第5天呈现WBC和嗜中性粒细胞升高，并且持续至第15天。

总之，在整个研究过程中，将BMS-986458以7.5、15和30 mg/kg BID口服施用于狗持续5天实现以呈剂量比例性的暴露以及白细胞中持续的BCL6降解 > 80%。在所有剂量下，BMS-986458引起粪便变化，包括便血，并且在给药后时间段期间具有恢复的证据。

4.3.2.6 在雌性狗中的五天口服探索性研究。在2只雌性狗的组中的5天探索性毒性研究中 ²⁸ ，将对照制品以5 mL/kg BID（间隔8 ± 0.5小时）的剂量体积口服施用5天（仅在第5天施用1次），作为评估对照制品的耐受性的导入时间段。在9天不给药时间段（第6至14天）之后，将BMS-986458以5、15或50 mg/kg BID的剂量（间隔8 ± 0.5小时；总日剂量为10、30或100 mg/kg/天）每日口服施用于狗持续5天（第15-19天），除第19天（这时狗仅接受1个剂量）之外。在媒介物/载体中以5 mL/kg BID施用所有剂量，所述媒介物/载体由在水中的0.25% Methocel E4M组成。终点包括生存期、毒代动力学、代谢物谱分析、临床观察结果、体重、食物消耗、临床病理学和探索性FOB测试评价、白细胞中靶向蛋白（BCL6）表达、器官重量以及大体和显微镜病理学分析。在5天给药时间段结束时在给药后进行安排的尸检。

在5天对照制品导入时间段期间，未注意到对照制品相关的发现结果。

在重复给药后，BMS-986458及其非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的平均全身暴露量（AUC[0-24h]）通常从5至15 mg/kg BID呈大于剂量比例性增加并且从15至50 mg/kg BID呈近似剂量比例性增加。BMS-986458、BMT-648599和BMT-648592的毒代动力学汇总呈现于下表中。

表B3-4.3.2.6-1：毒代动力学汇总 - 平均值 - 在雌性狗中的五天口服探索性研究

狗血浆样品的代谢物谱表明，在15或50 mg/kg BID的剂量后，BMS-986458作为循环中的主要药物种类没有变化，所述主要药物种类占狗血浆中总循环种类的约90%。狗血浆中最丰富的代谢物是经由亲本的去甲基化（M11）和氧化（M9）形成的，占总循环种类的1.6%和3.3%。还检测到低水平的氧化、脱氢、脱烷基化和水解代谢物（< 0.4%）。

在BMS-986458第四个给药日第一剂量后4小时，6只狗中有5只的白细胞样品中的BCL6浓度低于定量限（LOQ），例外是在5 mg/kg BID的低剂量下略高于LOQ。这一发现结果表明在所有剂量水平下BCL6降解，因为在另一项研究中来自未治疗的狗的样品都高于LOQ。⁴⁷

不存在BMS-986458相关的濒死/死亡或者对摄食行为、器官重量或大体病理学的效应。

在 ≥ 15 mg/kg BID下，BMS-986458相关的发现结果包括：

•与给药时间段开始相比，体重的极小降低（与给药时间段开始相比-0.15 kg）

•在剂量 ≥ 15 mg/kg BID下，4只狗中有4只的FOB结果为阳性，无临床观察结果或显微镜相关异常；FOB+预测试发生率为1/5（1个样品未提交）

在50 mg/kg BID的高剂量下，BMS-986458相关的发现结果包括：

•第3天开始给药时的液体粪便以及第4天给药时1只狗出现稀便的临床观察结果

•单核细胞计数和纤维蛋白原浓度的极小增加，指示炎症反应，并且无组织病理学相关异常

•胆固醇浓度的极小增加

•在1只雌性狗中，在胸腺、下颌淋巴结以及胃和结肠的GALT中的淋巴样细胞量的极小至中度降低

总之，在口服剂量 ≤ 50 mg/kg BID下，在5天内雌性狗对BMS-986458是临床上良好耐受的。基于不存在剂量限制性毒性，MTD被认为是50 mg/kg BID（BMS-986458的平均AUC[0-24h]为2,120 µg•h/mL）。

4.3.2.7 在狗中的具有2周恢复时间段的一个月口服毒性研究。在关键的一个月毒性研究中⁴⁷，将BMS-986458以0（媒介物）、5、15或50 mg/kg BID（间隔8 ± 0.5小时；总日剂量为0、10、30或100 mg/kg/天）的剂量通过BID口服管饲施用于第1、3和4组中的5只狗/性别的组；和第2组中的3只狗/性别的组。在媒介物/载体中以5 mL/kg施用所有剂量，所述媒介物/载体由在超纯水中的0.25% w/w Methocel E4M组成。向对照组施用浓度（29.81 mg/mL）与BMS-986458高剂量（第4组）配制品中的HPMC-AS-HF浓度等效的HPMC-AS-HF。终点包括生存期、毒代动力学、临床观察结果、体重、食物消耗、身体（包括呼吸系统和神经系统）和眼科检查、心电图、临床病理学评价（血液学、凝血、临床化学、尿分析和FOB）、细胞因子评价、使用LC-MS得到的循环WBC中的BCL6蛋白表达和通过免疫组织化学得到的淋巴样组织中的BCL6蛋白表达、免疫表型分型（总T细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞和B细胞）、TDAR分析、器官重量以及大体和显微镜病理学分析。在给药28天后（3只/性别/组）并且在2周恢复时间段之后（2只/性别/组，第1、3和4组中）进行安排的尸检。

在重复给药后，BMS-986458以及非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的平均全身暴露量（AUC[0-24h]）通常从5至15 mg/kg BID呈大于剂量比例性增加以及从15至50 mg/kg BID呈近似剂量比例性增加，并且考虑到大的个体间变异性，注意到没有显著的性别差异并且没有暴露量的累积或损失。在第1天和第28天，BMT-648592的平均全身暴露量（AUC[0-24h]）是另一种非对映异构体BMT-648599的大约2.7至3.7×。所有剂量的非对映异构体比率通常是相似的，并且在重复给药后无实质性变化。

表B3-4.3.2.7-1：毒代动力学汇总 - 平均性别合并值 - 在狗中的具有2周恢复时间段的一个月口服（管饲）毒性研究（来源：研究DN22136⁴⁷）

通过淋巴结的免疫组织化学和循环白细胞的LC-MS分析来评估BCL6的降解。来自对照狗的淋巴结的免疫组织化学分析显示出生发中心中对BCL6的稳健染色。在所有剂量组中，BCL6染色均为阴性，并且生发中心减少或不存在。在2周恢复时间段后，在15 mg/kg BID下的BCL6染色恢复，但是在50 mg/kg BID下的4只狗中有2只对BCL6仍呈阴性。与免疫组织化学发现结果一致，在所有剂量水平下，在第1天和第28天，与对照相比，在循环白细胞中测量到显著更低的BCL6水平。

在50 mg/kg BID下注意到BMS-986458相关的死亡。从第1天开始，在50 mg/kg BID下注意到食物消耗的显著减少，导致临床病症恶化（体重减轻、活动减少、消瘦状况和/或局部震颤）。向所有50 mg/kg BID狗提供营养强化，并且所述营养强化改善了除3只狗以外的所有狗的状况，将这些狗在第7天或第8天实施安乐死。在1只早期死者中，观察到心脏的心房室瓣膜和右心房的极小嗜中性粒细胞炎症，但是不认为它是与测试项目直接相关的效应，尽管它可能继发于淋巴样变化。从宏观检查或显微镜检查不能确定需要对这3只狗实施安乐死的临床体征的原因，但是认为死亡是BMS-986458相关的。

在任何剂量下，对眼科、心电图、神经系统终点、呼吸频率、尿分析或细胞因子终点不存在BMS-986458相关效应。以下BMS-986458相关的变化被认为不是不良的，因为它们具有极小的严重程度和/或缺乏毒理学显著性。

在 ≥ 5 mg/kg BID下，BMS-986458相关的发现结果包括：

平均WBC计数、嗜中性粒细胞计数和淋巴细胞计数的剂量依赖性极小至轻度增加

2+或3+条带嗜中性粒细胞和1+细胞质空泡化的存在，指示炎症反应；与总T细胞、辅助性T细胞和B细胞的绝对计数增加相关的总淋巴细胞计数增加

平均RBC计数、HGB和HCT的极小至轻度降低，这与以下相关：平均网织红细胞计数的轻度降低、在50 mg/kg BID下红细胞分布宽度增加、以及在15和50 mg/kg BID下对于雌性而言以及在15 mg/kg BID下仅对于雄性而言骨髓红系细胞量降低的显微镜观察结果

胆固醇的极小至轻度增加

在 ≥ 15 mg/kg BID下在雄性中平均肝脏重量增加（平均绝对值和相对值 [相对于身体和脑]；高达47%），与显微镜肝细胞肥大和肝细胞稀疏相关

在第15、22和29天，与媒介物相比，KLH特异性IgG反应降低

在 ≥ 15 mg/kg BID下，BMS-986458相关的发现结果包括：

•与第-1天其相应的测试前值相比，在整个给药时间段期间注意到的较低平均体重/体重减轻（在15 mg/kg BID下雄性为-4.7%，并且在50 mg/kg/剂量BID下雄性和雌性分别为-11%和-8%）

•在第1周期间在 ≥ 15 mg/kg/剂量BID下对于雄性和在50 mg/kg/剂量BID下对于雌性注意到的较低平均食物消耗，通过从第7/6天开始直到给药结束向50 mg/kg BID组提供呈罐头食品形式的额外膳食补充，这一情况得到缓解

•总胆红素的极小至轻度增加和葡萄糖的极小增加

在50 mg/kg BID的高剂量下，BMS-986458相关的发现结果包括：

•在大多数存活雄性和雌性中注意到的活动减少、脊柱突出和/或消瘦状况的临床观察结果，这与平均体重减轻相关

•纤维蛋白原的极小至轻度增加

•平均甘油三酯的极小增加

•雄性中平均白蛋白降低以及A/G比率相关降低

•平均肾脏重量增加（平均绝对值和相对值 [相对于身体和脑]；高达18%），无显微镜相关异常

•1只雄性和1只雌性的胸腺小，与淋巴细胞细胞量的极小至中度（雌性）和中度或重度（雄性）降低相关

•在1只雌性和所有3只早期死者中观察到腿胫关节的极小混合细胞炎症

截止1个月恢复时间段结束时，所有BMS-986458相关的发现结果都是完全可逆的，除以下情况之外：

•RBC计数、HGB和HCT的极小降低；然而，观察到由以下组成的再生反应：在 ≥ 15mg/kg BID下红细胞分布宽度和网织红细胞计数的极小至轻度增加，连同在 ≥ 15 mg/kgBID下骨髓细胞量增加和脾的髓外造血的反弹效应

•在 ≥ 15 mg/kg BID下在雌性中GALT的淋巴细胞的细胞量降低

总之，BMS-986458的施用导致50 mg/kg BID组中2只雄性（第8天）和1只雌性（第7天）因与体重减轻和食物消耗降低相关的临床体征而提前安乐死。从宏观检查或显微镜检查无法确定需要对这3只狗实施安乐死的临床体征的原因，但是认为与BMS-986458相关。由于在15 mg/kg BID下未观察到不良发现结果或发病，因此NOAEL和HNSTD被认为是15 mg/kgBID（在第28天，平均性别合并BMS-986458 AUC[0-24h] = 400 µg•h/mL）。

4.3.3 基因毒性

4.3.3.1 体外。在探索性细菌回复突变测定中在鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）（TA98、TA100和TA1537）中，BMS-986458及其单独非对映异构体BMT-648592和BMT-648599^48,49,50在没有代谢激活的情况下分别在 ≤ 400、481和481 μg/板下或者在有S9代谢激活的情况下分别在 ≤ 800、1050和1050 µg/板下没有致突变性。类似地，在明确的符合GLP的细菌回复突变测定中在鼠伤寒沙门氏菌（TA98、TA100、TA1535、 TA1537）和大肠杆菌（E. coli）（WP2 uvrA）中⁵¹，BMS-986458在高达313 μg/板下分别在没有代谢激活或有代谢激活（激活的肝S9）的情况下没有致突变性。

在探索性微核测定中^68,69,70,71，BMS-986458和单独非对映异构体BMT-648592和BMT-648599在没有S9代谢激活的情况下分别在 ≥ 1.7、9和1.5 μg/mL下并且在有S9激活的情况下分别在 ≥ 1.7、59和4.5 μg/mL下在CHO和/或TK6细胞中的微核形成呈阳性。在TK6细胞中的多流测定中⁷¹，在 ≥ 3.87 ug/mL下观察到H2AX和p53蛋白的BMS-986458相关增加，并且在 ≥ 88 ug/mL下观察到多倍体的增加。这些发现结果表明，体外BMS-986458在低浓度下具有致染色体断裂性，并且在高浓度下具有诱导非整倍体性。

4.3.3.2 体内

大鼠中体内微核和彗星非GLP研究。作为探索性毒性研究的一部分⁴⁴，将BMS-986458通过口服管饲BID（间隔6 ± 0.5小时）施用于6只雌性大鼠的组中持续13天，总日剂量为0、100、300或600 mg/kg/天（0、50、150或300 mg/kg BID）。在第14天，在尸检前施用0、50、150或300 mg/kg的单剂量，用于定时收集遗传毒理学样品。在第11天和第12天向6只雌性大鼠的阳性对照组通过口服管饲施用10 mg/kg/天的CP，并且在第14天施用200 mg/kg/天的EMS。评价标准包括外周微核评估以及在肝脏和十二指肠中的彗星测定。在所有剂量下，BMS-986458是良好耐受的，并且对微核评估和彗星测定无效应（300 mg/kg BID AUC[0-24h] = 335 μg•h/mL并且Cmax = 32 µg/mL）。

大鼠中体内微核和彗星GLP研究。将BMS-986458以0（阴性对照）、50、150或500 mg/kg BID（100、300或1000 mg/kg/天）的剂量通过口服管饲每日两次（BID，间隔3小时）施用于雄性大鼠（6只/组）持续4天 ⁵³ 。在媒介物中以10 mL/kg施用所有剂量，所述媒介物由在超纯水中的0.25% w/w Methocel E4M组成。评价标准包括生存期、毒代动力学、临床观察结果、体重、外周血中网织红细胞的百分比和微核网织红细胞的频率、以及在肝脏和十二指肠中的彗星尾强度（尾DNA %）。在第4天在最后剂量后2小时（± 30分钟）进行安排的尸检。

在重复给药之后，如在第3天第一日剂量后测量的，BMS-986458及其非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的平均全身暴露量（AUC[0-21h]）在50至500 mg/kg BID的剂量范围内通常呈小于剂量比例性增加。这些毒代动力学结果汇总于下表中。

表B3-4.3.3.2-1：BMS-986458在雄性大鼠中的毒代动力学总结 - 第3天

当给药4天时，BMS-986458直到500 mg/kg BID都是良好耐受的，并且对临床观察结果、体重和网织红细胞百分比无效应（指示缺乏造血系统细胞毒性）。在任何剂量水平下，未观察到微核网织红细胞百分比或肝和十二指肠中彗尾强度百分比的与阴性对照相比的统计学上显著的增加。阳性对照环磷酰胺和甲磺酸乙酯能够如所预期进行，证明所述研究能够检测基因毒性物质。

总之，当以高达500 mg/kg BID（BMS-986458的平均第3天AUC(0-21h) = 254 µg•h/mL）的剂量（最大可行剂量）经由口服管饲每日两次施用于雄性Sprague Dawley大鼠连续四天时，BMS-986458未诱导染色体或有丝分裂纺锤体损伤（如微核测试中评估的）并且在体内彗星测定中未显示肝或十二指肠中DNA损伤的证据。

4.3.4 致癌性。尚未用BMS-986458进行致癌性研究。

4.3.5 生殖和发育毒性。尚未用BMS-986458进行生殖或发育毒性研究。

4.3.6 局部耐受性。尚未用BMS-986458进行局部耐受性研究。

4.3.7 其他毒性研究

4.3.7.1 Balb/C 373小鼠成纤维细胞中的光毒性测定（DN22066）。因为BMS-986458吸收290与700 nm之间的光，因此在Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞中在中性红摄取测定中进行BMS-986458的体外测试 ⁵⁴ 。当在1%二甲基亚砜/杜氏磷酸盐缓冲盐水中高达其溶解度极限17.8 µg/mL进行测试时，BMS-986458展现出光毒性潜力。

4.4 安全性药理学。评价BMS-986458及其单独非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的针对一组广泛的受体、离子通道、转运蛋白和酶的潜在脱靶药理学（结合活性和/或功能活性），包括hERG（钾）、心脏钙和心脏钠离子通道功能的评估。在hiPSC-CM中进行BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599的另外的体外评估。BMS-986458的体内安全性药理学评估包括在清醒的大鼠和狗以及麻醉的兔中的探索性心血管遥测研究，以及在大鼠和狗中的作为关键的1个月口服毒性研究的一部分评估的心血管、呼吸系统和/或神经系统终点。

4.4.1 体外脱靶相互作用评估。在最大浓度 ≤ 62.8 μg/mL下在体外测试BMS-986458和/或BMT-648592和BMT-648599对广谱的药理学受体、转运蛋白、离子通道、核激素和酶的活性^55,56,57。BMT-648592和BMT-648599以大致可比较的浓度抑制磷酸二酯酶（PDE）3和PDE4，其中PDE3的IC50分别为3.7和1.9 µg/mL，并且PDE4的IC50分别为1.8和2.7 µg/mL。当BMS-986458作为混合物测试时，未观察到对PDE3或PDE4的抑制。当针对一组肝胆转运蛋白和酶进行筛选时，BMS-986458抑制BSEP、MRP2和UGT1A1，并且各自的IC50值为2.4、4.6和0.094 µg/mL。

4.4.2 心血管评估

4.4.2.1 体外心脏离子通道测定。在膜片钳测定中^58,59,60，BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599在体外以大致可比较的浓度抑制心脏离子通道，其中hERG IC50分别为0.44、0.52和0.16 µg/mL。在0.628 µg/mL的最高测试浓度下，BMT-648592和BMT-648599分别将心脏L型钙通道抑制9.4%和7.4%。

4.4.2.3 遥测大鼠中的心血管研究。在遥测大鼠中的单日心血管研究中⁶²，在口服给药后评价BMS-986458以研究诱导动脉血压和心率的变化的潜力。将BMS-986458以0、50、150或300 mg/kg BID（两个剂量之间6小时；总日剂量为0、100、300或600 mg/kg/天）通过口服管饲施用于每组5至6只雄性大鼠；每只大鼠都装有遥测植入物。媒介物对照组动物（0mg/kg）接受相同体积的测试制品载体（在25 mM柠檬酸盐缓冲液pH 3中的10% Captisol）。评价参数为收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均动脉血压（MAP）、心率（HR）、核心体温（CBT）和自主活动，所述评价参数在给药前24小时和给药后24小时连续监测。未植入仪器的雄性卫星大鼠（n = 3）接受0、50、150或300 mg/kg BID BMS-986458，以研究BMS-986458及其非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的血浆浓度。

50 mg/kg BID至300 mg/kg BID的暴露量呈低于剂量比例性。BMT-648592和BMT-648599的暴露量具有估计的1 : 1比率，其中血浆浓度呈偏向BMT-648592的轻微非显著趋势。毒代动力学数据汇总于表4.4.2.3-1中。

表B3-4.4.2.3-1：毒代动力学汇总 - 平均值 - 在遥测雄性大鼠中的口服单日BID剂量研究性心血管研究

在高达300 mg/kg BID下，血压（MAP、SBP、DBP）、心率或核心体温不存在BMS-986458相关的变化。在150和300 mg/kg BID剂量下，在动物最活跃的时间段中BMS-986458使自主活动降低。

4.4.2.4 在麻醉的兔中的电生理学研究。在麻醉的兔的电生理学研究中 ⁶³ ，将BMS-986458以0.33、2或12 mg/kg（12 mg/mL）的增量剂量经30分钟静脉内给予3只麻醉的雄性兔中。向另外3只麻醉的雄性兔给予作为对照的媒介物的输注。在递增给药之前、期间和之后连续记录心内His束电图和表面心电图（ECG）。在每次输注结束时以及在最高剂量输注完成后10、20和30分钟收集的血浆中确定BMS-986458浓度。

在分别以0.33、2和12 mg/kg的剂量静脉内输注后，BMS-986458的血浆浓度呈剂量依赖性增加，平均为1.6、12.2、45.8 µg/mL（2.6、19.5和72.9 µM）。

在12 mg/kg的高剂量下，BMS-986458导致心率校正QT间期增加51.2 ms（QTcF）和24.4 ms（QTcV）。在2和12 mg/kg下，BMS-986458导致血压降低-11.6%和-34.4%，以及心率增加10.8%和34.1%，这干扰了QT间期发现结果的解释。在任何测试剂量下，化合物对PR、QRS、AH或HV间期均无显著效应。

总之，将BMS-986458以12 mg/kg的高剂量（血浆浓度为45.8 µg/mL）静脉内施用于麻醉的兔导致QTc的增加。在2和12 mg/kg的剂量下观察到血压的降低和心率的增加，并且干扰了QT间期的解释。

4.4.2.5 在狗中的单日（BID）口服探索性心血管遥测研究。在遥测狗中的探索性心血管研究中⁶⁴，将BMS-986458以30 mg/kg（60 mg/kg/天）的BID口服剂量以6 mL/kg的剂量体积施用于6只装有遥测装置的雌性比格犬。在BMS-986458施用前一天向充当其自身对照的狗施用媒介物（10% Captisol/90% 25 mM柠檬酸盐缓冲液pH 3 ± 0）。对评价标准（包括心率、全身动脉血压（收缩压、舒张压和平均值）、左心室压力（收缩压和末期舒张压）、左心室压力来源的参数（+dP/dt、-dP/dt）、ECG参数（P波持续时间、PR、RR、QRS和QT间期）、体能活动和核心体温）进行遥测监测并且在用媒介物或BMS-986458治疗前1小时时间段和治疗后大约21小时内进行评价。还评价了临床观察结果和心率校正的QT间期（QTcA，相对于80次/分钟的心率归一化的QT间期）。在给药后大约4小时和10小时分析ECG波形的心率、节律或形态的值得关注的变化，并且在给药后6小时和24小时采集血浆样品进行BMS-986458的2种非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的分析。

从BMS-986458施用后6小时和24小时采集的样品确定的BMT-648592和BMT-648599的血浆浓度在动物之间大致相似，并且在单独动物中的范围为1.26至24.5 µg/mL。平均BMT-648592和BMT-648599血浆浓度结果汇总于下表中。

表B3-4.4.2.5-1：平均BMT-648592和BMT-648599血浆水平 - 在狗中的单日（BID）口服探索性心血管遥测研究

在治疗之后观察到的药物或媒介物相关的临床毒性体征包括BMS-986458施用后的未成形粪便，其在48小时内消退。

在第二BID剂量后6至12小时，观察到收缩压的短暂极小降低（约11%）。在第二BID剂量后大约10至12小时，注意到左心室收缩压的短暂极小降低（约7%）。在第二BID剂量之后，左心室负性dP/dt降低（约10%）过夜。在BMS-986458施用之后，心率、其他血流动力学终点、ECG终点、体能活动或核心体温不存在值得关注的变化。在ECG波形形态方面不存在BMS-986458相关的变化。

总之，在狗中在30 mg/kg的第二口服BID剂量（60 mg/kg/天）之后过夜，BMS-986458导致动脉收缩压和左心室收缩压以及负性dP/dt的短暂极小降低，这导致平均BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599血浆浓度在第一剂量后6小时分别为16.21、11.46和4.75µg/mL并且在第一剂量后24小时分别为58.4、39.5和18.9 µg/mL。

4.4.2.6 在狗中的1个月GLP毒性研究中的心血管评估。在狗中的1个月GLP毒性研究中⁴⁷，在第4周期间在第一日剂量后大约2小时进行ECG记录。在任何剂量水平（≤ 50 mg/kg BID；Cmax = 86.6 µg/mL）下均未观察到BMS-986458相关的ECG发现结果。

4.4.2.7 在狗中的1个月毒性研究中的呼吸系统和神经系统评估。在狗中的1个月毒性研究中⁴⁷，在第4周期间，在第一日剂量后2小时进行呼吸系统和神经系统评估。在任何剂量水平（≤ 50 mg/kg BID；Cmax = 86.6 µg/mL）下，对于任何参数，注意到没有与BMS-986458相关的发现结果。

7. 数据汇总

7.1 安全性汇总。由于没有用BMS-986458的临床经验，因此初始临床试验的注意事项和安全性监测计划是基于非临床毒理学研究的发现结果（章节4.3和4.4）。这些发现结果的汇总、其潜在的临床安全性意义以及由器官系统监测安全性的要求概述如下。根据在40 mg BID起始临床剂量下的预测暴露量（AUC和Cmax）计算此章节中以下所示的暴露倍数。使用通量方法使用蛋白质结合的预测物种差异并且通过对于体外测定而言假设99%的蛋白质结合，已经针对游离分数校正了Cmax倍数。

由于BMS-986458是一种实验性药剂，可以发生不可预见、未知或意外的不良事件是可能的。研究者应审查IB中的所有相关信息以及考虑的特定方案（包括入选/排除标准），以确定受试者入组的适宜性，并且在随机化到研究后对受试者进行适当评价。

7.1.1 免疫调节。在大鼠和狗的重复剂量毒性研究中，观察到了与免疫抑制和促炎一致的免疫发现结果。对于潜在的免疫抑制，在1个月毒性研究中，在大鼠中在剂量 ≥500 mg/kg BID下（AUC[0-24h] = 229 µg•h/mL；152×）和在狗中在 ≥ 5 mg/kg BID下（AUC[0-24h] = 47.5 µg•h/mL；31×）观察到对KLH的IgG和/或IgM抗体反应的降低。在 ≥5 mg/kg BID下在狗中还注意到胸腺、GALT和淋巴结中淋巴样细胞量的极小至重度降低，其特征在于生发中心的大小和数量降低。对IgM和IgG产生以及淋巴结生发中心病理学的效应与已公开的BCL6作为生发中心中抗体亲和力成熟的主要调节因子的作用一致 ¹⁰ ^, ¹¹ 。仅在1个月大鼠毒性研究中 ⁴⁵ ，其他发现结果包括脾边缘区淋巴样细胞的轻度至中度降低以及在第28天在 ≥ 50 mg/kg BID下（AUC[0-24h] = 129 µg•h/mL；86×）细胞因子IL-2、IL-6、TNFα和IFNγ的降低以及在500 mg/kg BID下IL-1β的降低。

在大鼠和狗中注意到促炎发现结果。在1个月大鼠毒性研究中 ⁴⁵ ，在剂量 ≥ 50mg/kg BID下注意到单核细胞和球蛋白的轻度增加，并且在剂量 ≥ 150 mg/kg BID下（AUC[0-24h] = 179 µg•h/mL；119×）观察到总WBC计数、大的未染色细胞和淋巴细胞的增加。在2周非GLP大鼠毒性研究中 ⁴⁴ ，在 ≥ 150 mg/kg BID下（AUC[0-24h] = 282 µg•h/mL；187×）注意到总T细胞、细胞毒性T细胞、B细胞和NK细胞的极小增加，但是在相似的暴露量下在符合GLP的1个月大鼠研究中不存在类似的变化。类似地，在1个月狗毒性研究中 ⁴⁷ ，在 ≥ 5mg/kg BID下观察到WBC计数、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、总T细胞、辅助性T细胞和B细胞的极小至轻度增加。在50 mg/kg BID下（AUC[0-24h] = 1,290 µg•h/mL；855×），在4只狗中注意到腿胫关节的BMS-986458相关的极小至中度混合细胞炎症，以及在1只狗的心房室瓣膜中的极小嗜中性粒细胞炎症。

基于临床前发现结果，在临床方案中包括对适当的血液学参数（WBC计数与分类、免疫表型分型）、抗体水平（IgA、IgG和IgM）、细胞因子和体格检查的监测，以及包括潜在不良事件管理指南。

7.1.2 血液学 - 红细胞和血小板。在大鼠和狗中在重复剂量毒性研究中注意到RBC参数（RBC计数、HGB、HCT）的BMS-986458相关降低。在1个月大鼠和狗GLP毒性研究中 ⁴⁵ ^, ⁴⁷ ，在剂量 ≥ 150 mg/kg BID（AUC[0-24h] = 179 µg•h/mL；119×）和 ≥ 5 mg/kg BID（AUC[0-24h] = 47.5 µg•h/mL；31×）下分别观察到降低的RBC参数。在这两个物种中，RBC参数的降低与网织红细胞的再生性增加、增加的红细胞分布宽度、髓外造血和/或骨髓中细胞量的反弹相关，其中在2周恢复时间段期间RBC参数部分至完全恢复。

在1个月大鼠毒性研究中，在剂量 ≥ 150 mg/kg BID下观察到血小板的极小BMS-986458相关增加。在大鼠中在非GLP重复剂量毒性研究中注意到血小板计数的极小增加和/或凝血时间的变化，其中在各研究中凝血时间没有一致的变化（观察到延长和缩短两者） ⁴⁴ 。在狗重复剂量毒性研究中未注意到血小板计数或凝血时间的变化。

基于临床前发现结果，在临床方案中包括对血液学参数（红细胞计数与指数、血红蛋白、血细胞比容和血小板计数）和凝血参数（PT、APTT和纤维蛋白原）的适当监测以及潜在血液学不良事件管理指南。

7.1.3 致心律失常潜力。BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599在可比较的浓度下在体外抑制心脏离子通道，其中BMS-986458 hERG IC50为0.44 µg/mL，等效于相对于临床起始剂量40 mg BID的518×的游离Cmax倍数 ⁵⁸ 。在hiPSC-CM的体外研究中 ⁶¹ ，在浓度 ≥0.19 µg/mL（224×）下注意到BMS-986458增加了FPDc、心律失常信号并且降低了传导速度，并且在1.9 µg/mL（2240×）下注意到增加的搏动频率。

BMS-98458在麻醉的兔中显示出致心律失常潜力，但是当在可比较的暴露量下测试时，在清醒的狗中没有显示出致心律失常潜力。在探索性兔电生理学研究中 ⁶³ ，在通过IV输注施用12 mg/kg下（血浆浓度 = 45.8 µg/mL；539×）注意到QTc间期的BMS-986458相关增加（QTcF = 51.2 ms；QTcV = 24.4 ms），但是心率的增加（34%）和平均血压的降低（-34%）干扰了解释。在30 mg/kg BID下在非GLP遥测研究中或在1个月GLP毒性研究（Cmax ≤ 86.6µg/mL；192×）中，在狗中未注意到ECG发现结果。

基于临床前数据，预期在首次人体（FIH）试验中测试的剂量下不会发生QT延长。然而，为了鉴定任何致心律失常效应，将在FIH试验中实施ECG监测。

7.1.4 胃肠道毒性。在可比较的暴露量下在5天狗探索性毒性研究中而不是在1个月符合GLP的毒性研究中^28,46,47，在剂量 ≥ 7.5 mg/kg BID下（AUC[0-24h] = 366 µg•h/mL；243×）注意到粪便组成的BMS-986458相关变化（未成形粪便或液体粪便），并且这与FOB测试阳性相关。未注意到胃肠道中的宏观检查或显微镜病理学相关异常，并且在停止给药后发现结果恢复。由于在测试前和对照中干扰性高阳性率，无法解释1个月研究中的FOB测试。在高达500 mg/kg BID的高剂量的任何剂量下在1个月大鼠毒性研究中未观察到粪便发现结果或胃肠道病理学发现结果。

基于临床前数据，在临床方案中包括胃肠道毒性的适当监测和管理。

7.1.5 生殖风险评估。BMS-986458不降解选定的经典CELMoD新底物，诸如Aiolos、CK1α、Ikaros、GSPT1和SALL4。因此，预期BMS-986458毒性特征将与CELMoD存在差异，包括潜在的生殖毒性。然而，CELMoD介导的生殖毒性的分子基础尚未完全阐明。由于迄今为止尚未进行生殖毒性评估，并且BMS-986458的机制是小脑蛋白依赖性的，将BMS-986458作为推定的选择性发育有毒物质进行处理。在大鼠和狗中在1个月GLP毒性研究中，在任何剂量下在雄性或雌性生殖组织中均未观察到病理学发现结果。

基于此，必须针对临床试验制定适当的妊娠预防计划，所述妊娠预防计划包括咨询、妊娠试验和妊娠预防措施。

7.1.6 肝风险评估。BMS-986458被确定为BSEP、MRP2和UGT1A1的抑制剂，并且相应的IC50为2.4、4.6和0.094 µg/mL。然而，在FIH临床剂量范围内的抑制风险低，并且对于40mg BID起始剂量，游离Cmax相对于这些IC50的裕度（margin）大于100×。在1个月狗毒性研究中，在剂量 ≥ 15 mg/kg BID下（Cmax = 25.1 µg/mL；56×）注意到总胆红素的极小至轻度增加，并且其他肝酶无变化。增加的胆红素可能继发于UGT1A1的抑制，因为在15 mg/kgBID下的游离Cmax（0.251 µg/mL，假设1%未结合）高于体外UGT1A1 IC50。与BSEP、MRP2和UGT1A1抑制的潜在效应相反，在 ≥ 50 mg/kg BID下（Cmax = 11 µg/mL；129×）在1个月大鼠研究中注意到循环胆汁酸的降低。

在1个月大鼠和狗毒性研究中 ⁴⁵ ^, ⁴⁷ ，肝发现结果仅限于与极小至轻度肝细胞肥大相关的肝重量增加，这是与作为CYP诱导剂的BMS-986458一致的发现结果。认为继发于肝变化并且不太可能是人相关的，仅在剂量 ≥ 50 mg/kg BID下（AUC[0-24h] = 129 µg•h/mL；86×）在大鼠中注意到甲状腺滤泡上皮的BMS-986458相关的极小肥大。

在符合GLP的1个月大鼠和狗毒性研究中，分别在剂量 ≥ 150 mg/kg BID（AUC[0-24h] = 179 µg•h/mL；119×）和5 mg/kg BID（AUC[0-24h] = 47.5 µg•h/mL；31×）下注意到胆固醇的极小至轻度的BMS-986458相关增加。这些发现结果对应于越来越多的文献，所述文献证明BCL6在肝脂质代谢的调节中的作用。 ⁶⁵ ^, ⁶⁶

基于临床前数据，预期在FIH临床剂量范围内的剂量下不会出现药物诱导的肝损伤。将以适当的频率对FIH研究中的所有参与者进行适当的肝功能监测，包括转氨酶、胆红素和碱性磷酸酶的评估。尽管认为继发性甲状腺发现结果不太可能是人相关的，但是如果TSH异常，将进行临床安全性实验室评估，来监测TSH和游离T4。基于临床前脂质谱变化，将进行临床安全性实验室评估，以监测总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白。

7.1.7 光毒性。BMS-986308吸收在290与700 nm之间的光。在Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞中的符合GLP的中性红摄取光毒性测定中 ⁵⁴ ，确定BMS-986458的光毒性潜力呈阳性。体内研究中光毒性潜力的随访确认尚未完成。

基于当前的临床前数据，应向患者提供咨询以最少暴露于紫外光，当外出在阳光下时穿戴防护服和太阳镜，并且使用广谱紫外线（UV）A/UVB防晒剂。

7.2 人体给药范围和安全性裕度。基于来自大鼠和狗的1个月毒性研究以及OCI-LY1异种移植小鼠模型中的PD研究的发现结果选择临床起始剂量。在大鼠中在关键的28天毒性研究中，不存在不良发现结果，并且NOAEL ≥ 500 mg/kg BID。因此，认为STD10 > 500mg/kg BID。在关键的28天狗毒性研究中，在50 mg/kg BID的高剂量下注意到食物消耗的减少，导致体重下降和临床状况不佳，从而导致随后在第7天早期对3只狗实施的人道安乐死，并且临床状态衰退原因不明。在15 mg/kg BID的中间剂量下不存在不良效应，并且此剂量被认为是NOAEL和HNSTD。将狗作为最敏感的物种，在应用6×安全性系数后，使用ICH S9中所述的方法（体表面积 [BSA] 转换和异速生长标度）计算83 mg BID的最大推荐起始剂量（MRSD）。

在OCI-LY1异种移植小鼠模型中的药代动力学/药效学和功效研究表明，需要完全BCL6抑制持续24小时来实现最大肿瘤生长抑制。在人体中，预测BMS-986458具有低清除率（3.6 mL/min/kg）和中等Vss（2.08 L/kg），并且相应的终末半衰期为大约10.6小时。基于人体中的预测终末半衰期，预计BID给药可实现完全BCL6抑制持续24小时。在此异种移植模型中，基于肿瘤生长抑制，当前预计的有效剂量范围为10至80 mg BID。

选择CA1231000中的起始剂量为40 mg BID。由于此剂量处于预计有效剂量范围的中间并且小于83 mg BID的MRSD，预期它既有效又安全。将基于人体耐受性确定最高临床剂量。在提出的最高临床剂量640 mg BID下的预测AUC和Cmax分别至少9.5×和3.5×低于在关键的1个月大鼠和狗研究中的在NOAEL下的预测AUC和Cmax。

使用全身暴露量（Cmax和AUC）和BSA的比较计算呈现于表7.2-1中的暴露倍数。

7.3.1 妊娠。BMS-986458不降解经典CELMoD新底物，诸如Aiolos、CK1α、Ikaros、GSPT1和SALL4。因此，预期BMS-986458毒性特征将相异于CELMoD和IMID药物（包括沙利度胺），包括潜在的生殖毒性。然而，由于迄今为止尚未进行生殖毒性评估，并且BMS-986458的机制是小脑蛋白依赖性的，将BMS-986458作为推定的选择性发育有毒物质进行处理。因此，在临床程序中必须遵循妊娠预防程序。

没有关于在妊娠女性或动物中施用BMS-986458的数据，并且因此不应将其施用于妊娠受试者。在相应的临床方案中，对雄性和雌性参与者全面详述了避孕和妊娠筛选的要求。

7.3.2 药物-药物相互作用潜力。尚未在BMS-986458的临床研究中研究药物-药物相互作用（DDI）。

人细胞色素P450（CYP）亚型和人肝微粒体的反应表型分型研究表明，BMS-986458主要由CYP3A4/5代谢，并且CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9和CYP2C19的参与较少。此外，BMS-986458是CYP3A4的抑制剂。这些数据表明，如果BMS-986458与CYP3A4的强抑制剂或诱导剂、敏感CYP3A底物或具有窄治疗窗口的CYP3A底物共同施用，则存在潜在的DDI。如果使用强CYP抑制剂或诱导剂是必需的，则在与研究干预伴随使用其前，应与申办者的医学监查员（Sponsor’s Medical Monitor）讨论其风险和益处。

强CYP3A抑制剂或诱导剂的例子包括（但不限于）：

•CYP3A抑制剂：克拉霉素、茚地那韦、伊曲康唑、酮康唑、奈法唑酮、奈非那韦、利托那韦、沙奎那韦、泰利霉素、葡萄柚和葡萄柚汁

•CYP3A诱导剂：卡马西平、苯妥英、利福平和圣约翰草（St. John’s Wart）

•强CYP3A抑制剂或诱导剂、敏感CYP3A底物或具有窄治疗窗口的CYP3A底物的详细列表可在FDA网站上获得。

基于体外数据，BMS-986458可能导致肠道中P-糖蛋白（P-gp）和乳腺癌耐药蛋白（BCRP）的抑制，从而增强P-gp和BCRP的底物的口服吸收和血浆暴露量。在较高剂量下，BMS-986458还可能有潜力抑制肝摄取转运蛋白（OATP1B1和OATP1B3）和II期药物代谢酶（UGT1A1）。鉴于这种相互作用的潜力，应密切监测接受P-gp底物（例如，达比加群、地高辛）、BCRP底物（例如，瑞舒伐他汀、柳氮磺胺吡啶）、P-gp或BCRP抑制剂（例如，红霉素、环孢霉素A）或OATP1B1和OATP1B3底物（例如，他汀类）或UGT1A1底物（例如，丙戊酸、左旋甲状腺素或苯妥英）的受试者的毒性体征。

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¹⁶Evaluation of BMS-986458 BCL6 Ligand Directed Degrader in NormalImmune Cell Populations (OG0468). Bristol-Myers Squibb, 2023. DCN 930205282.

¹⁷Effect of CC2021676 and its Single Isomers on In Vitro NeutrophilMaturation (OG00449). Bristol-Myers Squibb, 2023. DCN 930205189.

¹⁸Method Validation Report LCMSD 1206.2 Project RYHP2. Quantitation ofBMT-648592 and BMT-648599 in Rat Plasma via HPLC with MS/MS Detection. PPDRichmond, VA, 26 May 2023. Bristol-Myers Squibb Document Control No.930203824.

¹⁹Method Validation Report LCMSF 1206.3 Project RYJC2. Quantitation ofBMT-648592 and BMT-648599 in Dog Plasma via HPLC with MS/MS Detection. PPDRichmond, VA, 21 April 2023. Bristol-Myers Squibb Document Control No.930203826.

²⁰Nonclinical evaluation of the pharmacokinetics and distribution ofBMS-986458 (NCPK781). Bristol-Myers Squibb Company, 2022. Document ControlNo. 930206028.

²¹Pharmacokinetic evaluation of BMS-986458 after a single intravenousor oral dose to male rats (NCPK778). Bristol-Myers Squibb Company, 2023.Document Control No. 930204665.

²²Pharmacokinetic evaluation of BMS-986458 after a single intravenousor oral dose to male dogs (NCPK782). Bristol-Myers Squibb Company, 2022.Document Control No. 930204591.

²³Pharmacokinetic evaluation of BMS-986458 after a single intravenousor oral dose to male monkeys (NCPK783). Bristol-Myers Squibb Company, 2022.Document Control No. 930204518.

²⁴In vitro characterization of ADME and DDI properties of BMS-986458(NCPK785). Bristol-Myers Squibb Company, 2023. Document Control No.930201163.

²⁵In vitro plasma protein binding and blood-to-plasma partitioningevaluation of BMS-986458 (NCPK832). Bristol-Myers Squibb Company, 2022.Document Control No. 930206106.

²⁶BMS-986458: Exploratory single dose 48 hour pharmacokinetics,pharmacodynamics and tolerability study in rats (DT21042). Bristol-MyersSquibb Company; 2022. Document Control No 930188328.

²⁷Nonclinical evaluation of the metabolism and drug-drug interactionpotential of BMS-986458 (NCPK780). Bristol-Myers Squibb Company, 2021.Document Control No. 930103172.

²⁸BMS-986458: Five-day oral exploratory toxicity study in female dogs(DN22114). Bristol-Myers Squibb Company; 2022. Document Control No 930199213.

²⁹BMS-986458: Five-day oral exploratory toxicity study in female rats(DN22115). Bristol-Myers Squibb Company; 2022. Document Control No 930205113.

³⁰In vitro assessment of CYP induction potential of BMS-986458 inprimary human hepatocytes (NCPK802). Bristol-Myers Squibb Company, 2022.Document Control No. 930203855.

³¹In vitro Evaluation of six selected test article as substrates ofthe human MDR1 Efflux (ABC) transporter (SOLVO Study Number BMS-31/NCPK863).SOLVO Biotechnology a Charles River Company, 2023. Document Control No.930202386.

³²Prediction of human pharmacokinetics of BMS-986458 (NCPK864).Bristol-Myers Squibb Company, 2023. Document Control No. 930206283.

³³Guidance for Industry, Bioanalytical Method Validation. U.S.Department of Health and Human Services (USHHS), Food and Drug Administration(FDA), Center for Drug Evaluation and Research (CDER) and Center forVeterinary Medicine (CVM). 2018.

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³⁷Identification of metabolites of BMS-986458 in hepatocytes acrossspecies (NCPK826). Bristol-Myers Squibb Company, 2023. Document Control No.930205962.

³⁸Guidance for Industry, Clinical Drug Interaction Studies -Cytochrome P450 Enzyme- and Transporter-Mediated Drug Interactions. U.S.Department of Health and Human Services (USHHS), Food and Drug Administration(FDA), Center for Drug Evaluation and Research (CDER). 2020.

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⁴⁰Oie, S., & Tozer, T. N. Effect of altered plasma protein binding onapparent volume of distribution. J Pharm Sci 1979; 68(9): 1203-1205.

⁴¹BMS-986458: Maximum tolerated dose and toxicokinetic assessment ofdogs administered a single oral dose of BMS-986458 (CEL-009463, CC2021676)(Study DT21066); Report and Amendment 1. Bristol-Myers Squibb Company; 2022.Document Control No. 930187418.

⁴²BMS-986458: Five-day oral exploratory toxicity study in male rats(Study DN22115). Bristol-Myers Squibb Company; 2023. Document Control No.930205113.

⁴³Exploratory toxicokinetic and tolerability study in female ratsorally administered BMS-986458 (CC2021676) twice daily for 10 consecutivedays (Study DT22011); Report and Amendment 1. Bristol-Myers Squibb Company;2023. Document Control No. 930199752.

⁴⁴CC2021676: Two-week oral BID exploratory toxicity study in femalerats (Study DN21129); Report and Amendment 1. Bristol-Myers Squibb Company;2023. Document Control No. 930203162.

⁴⁵BMS-986458: A one-month oral toxicity study in rats with a 2-weekrecovery period (Study DN22135). Bristol-Myers Squibb Company; 2023. DocumentControl No. 930204855.

⁴⁶BMS-986458 (CC2021676): Tolerability and toxicokinetic study in dogsdosed twice daily for 5 consecutive days (Study DT21078); Report, Amendment1, and Amendment 2. Bristol-Myers Squibb Company; 2023. Document Control No.930186855.

⁴⁷BMS-986458: A 1-month oral (gavage) toxicity study in dogs with a 2-week recovery (Study DN22136). Bristol-Myers Squibb Company; 2023. DocumentControl No. 930204949.

⁴⁸CEL-009463: Exploratory Ames reverse-mutation study in Salmonellatyphimurium (Study DN21064); Report and Amendment 01. Bristol-Myers SquibbCompany; 2021. Document Control No. 930175635.

⁴⁹BMT-648592: Exploratory Ames reverse-mutation study in Salmonellatyphimurium (Study DN21135). Bristol-Myers Squibb Company; 2022. DocumentControl No. 930183007.

⁵⁰BMT-648599: Exploratory Ames reverse-mutation study in Salmonellatyphimurium (Study DN21133). Bristol-Myers Squibb Company; 2022. DocumentControl No. 930183026.

⁵¹BMS-986458: Ames reverse-mutation study in Salmonella typhimuriumand Escherichia coli (Study DN22069). Bristol-Myers Squibb Company; 2023.Document Control No. 930204435.

⁵²CEL-009463: Exploratory genotoxic mode of action using the multiflowassay in TK6 Cells (Study DN21111). Bristol-Myers Squibb Company; study on-going.

⁵³BMS-986458: Four-day oral micronucleus study with comet evaluationin male rats (Study DN22070). Bristol-Myers Squibb Company; 2023. DocumentControl No. 930204851.

⁵⁴BMS-986458: Neutral red uptake phototoxicity assay in Balb/c 3T3mouse fibroblasts (Study DN22066). Bristol-Myers Squibb Company; 2023.Document Control No. 930201045.

⁵⁵BMS-986458/CEL-009463: In vitro assessment of receptors, ionchannels, monoamine transporters, and enzymes (Study LDO00020). Bristol-MyersSquibb Company; 2023. Document Control No.930201989.

⁵⁶BMS-986458 isomer BMT-648592: In vitro assessment of interactionswith receptors, ion channels, and enzymes (Study LDO00021). Bristol-MyersSquibb Company; 2023. Document Control No. 930201984.

⁵⁷BMS-986458 isomer BMT-648599: In Vitro assessment of interactionswith receptors, ion channels, and enzymes (Study LDO00022). Bristol-MyersSquibb Company; 2023. Document Control No. 930201983.

⁵⁸BMS-986458: Effects on cardiac hERG channels (Study DT23033).Bristol-Myers Squibb Company; 2023. Document Control No. 930202916.

⁵⁹BMT-648592: Effects on cardiac hERG channels (Study DT23035).Bristol-Myers Squibb Company; 2023. Document Control No. 930202931.

⁶⁰BMT-648599: Effects on cardiac ion channels (Study DT23034).Bristol-Myers Squibb Company; 2023. Document Control No. 930202919.

⁶¹BMS-986458 (CEL-009463), BMT-648592 and BMT-648599: Exploratory invitro multi-electrode array (MEA) study in human induced pluripotent stemcell-derived cardiomyocytes (Study DT23044); Report and Amendment 1. Bristol-Myers Squibb Company; 2023. Document Control No. 930204098.

⁶²BMS-986458 (CC2021676): Oral single day BID-dose investigativecardiovascular study in telemeterized male rats (Study DT21068); Report andAmendment 1. Bristol-Myers Squibb Company; 2022. Document Control No.930186261.

⁶³BMS-986458: Electrophysiological effects in anesthethized rabbits(Study DT21051). Bristol-Myers Squibb Company; 2022. Document Control No.930183352.

⁶⁴BMS-986458: Single day (BID) oral exploratory cardiovasculartelemetry study in dogs (Study DT21079); Report and Amendment 1. Bristol-Myers Squibb Company; 2021. Document Control No. 930179833.

⁶⁵LaPensee CR, Lin G, Dent AL, et al. Deficiency of thetranscriptional repressor B cell lymphoma 6 (Bcl6) is accompanied bydysregulated lipid metabolism. PLos One 2014; Jun 3;9(6):e97090.

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⁶⁸CEL-009463: Exploratory in vitro micronucleus study in Chinesehamster ovary cells (Study DN21094). Bristol-Myers Squibb Company; study on-going.

⁶⁹BMT-648592: Exploratory in vitro micronucleus study in TK6 cells(Study DN21136). Bristol-Myers Squibb Company; study on-going.

⁷⁰BMT-648599: Exploratory in vitro micronucleus study in TK6 cells(Study DN21134). Bristol-Myers Squibb Company; study on-going.

⁷¹BMT-648592, BMT-648599: Exploratory in vitro micronucleus study inTK6 cells (Study DN22072). Bristol-Myers Squibb Company; 2023. DocumentControl No. 930205597.

实施例B4.临床方案CA 1231000

此实施例提供了实施例B2中所述的I期研究的另外细节，并且将临床方案CA1231000（方案修订版01；日期：2023年6月15日；修订日期：2023年8月23日）的披露内容通过引用以其整体并入本文。

实施例B4中对章节、表格、参考文献和/或附录的引用是指实施例B4中的其他章节、表格、参考文献和/或附录。

1 方案汇总

缩写：AE，不良事件；BOIN，贝叶斯最优区间；CAR，嵌合抗原

受体；D，天；DLBCL，弥漫性大B细胞淋巴瘤；DLT，剂量限制性毒性；ECOG，东部肿瘤协作组；FDG，氟脱氧葡萄糖；FL，滤泡性淋巴瘤；MTD，最大耐受剂量；NHL，非霍奇金淋巴瘤；OBD，最佳生物剂量；ORR，总反应率；PK，药代动力学；R/R，复发性/难治性；RP2D，推荐的2期给药；SAE，严重不良事件；SCT，干细胞移植。

^a将在统计分析计划（在适用的情况下）中定义主要被估量（estimand）和补充被估量的敏感性估计量。

2 活动时间表

如果在单个时间点需要多个程序，相对于标称时间点，可以提前最多15分钟获得ECG，可以提前或推迟最多10分钟获得生命体征，并且可以提前最多5分钟获得临床实验室样品，确保可按时收集PK样品。

3 介绍

3.1 研究原理。BMS-986458是一种小分子双功能小脑蛋白依赖性配体定向降解剂（LDD），其将被研究用于治疗患有复发性和/或难治性（R/R）非霍奇金淋巴瘤（NHL）的患者。这项BMS-986458的1期、首次人体（FIH）临床研究将探索BMS-986458作为单一药剂和其与抗淋巴瘤药剂的组合在R/R NHL背景下的安全性、耐受性、PK、药效学以及初步生物学和临床活性。

3.2 背景

3.2.1.疾病背景。NHL（全球最常见的血液恶性肿瘤）是B细胞和T细胞淋巴瘤的异质性组，总共占美国所有癌症的大约4%。虽然存在超过40种主要亚型，但是最常见的亚型包括惰性滤泡性淋巴瘤（FL）和侵袭性DLBCL。

3.2.1.1 弥漫性大B细胞淋巴瘤。DLBCL是NHL的最常见的亚型，占所有确诊的NHL赘生物病例的26%，并且在2020年在美国估计发生29,105例新病例¹。目前用于这些患者的标准护理（SOC）是CHOP（环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松）与利妥昔单抗的组合（R-CHOP）；然而，大约10%至15%的患者患有原发性难治性疾病，并且20%至25%将在达到完全缓解（CR）后最终复发，典型地在前2年内复发²。这些患者的结局仍然差，尤其是如果难治性疾病的中值总生存期（OS）为大约6个月的话。³

多年来，用于二线R/R DLBCL的SOC是高剂量化学疗法，随后是自体干细胞移植（SCT）。在过去几年中，CAR-T细胞疗法已显示出治愈大部分患有R/R DLBCL的患者（CR率范围在40%至58%之间），并且已被批准用于一线化学免疫疗法12个月内的难治性疾病或复发^4,5,6。在已经接受过2种或更多种疗法线（包括SCT或CAR-T细胞疗法）或者由于高龄或体能状态差而未成为候选人或无法获得潜在治愈性疗法的复发性或难治性患者中，DLBCL仍然是一种不可治愈的疾病，对此指示进行临床试验。

3.2.1.2 滤泡性淋巴瘤。滤泡性淋巴瘤（FL）是起源于生发中心B细胞的最常见惰性淋巴瘤。

当指示疗法时，抗CD20免疫疗法与或不与化学疗法的组合是晚期FL的标准一线或后续线选择。大约20%的患者出现早期复发和24个月内疾病进展（POD24），并且这些患者具有差的结局⁷。预先鉴定这些患者是不可能的，并且需要对这些患者进行更有效治疗。

对于R/R FL不存在标准治疗或治疗顺序；多种方法包括细胞毒性剂、抗CD20抗体、放射疗法、放射免疫疗法以及自体和同种异体移植。不同于一线疗法的化学免疫疗法方案（苯达莫司汀和利妥昔单抗 [BR]；R-CHOP；或利妥昔单抗加环磷酰胺、长春新碱和泼尼松[R-CVP]）是复发背景下的选择。用于多次复发患者的另外药剂包括来那度胺、PBK抑制剂、他泽司他（tazemetostat）、双特异性T细胞接合物（莫妥珠单抗）和CAR-T细胞疗法。除了商业批准的用于FL的靶向疗法之外，还存在多种新出现的靶向FL生物学的药剂，包括抗体-mug缀合物（ADC）、单克隆或双特异性抗体、基于检查点的疗法和新型组合策略。

存在开发用于对标准疗法没有反应且疾病缓解的治疗选择已经穷尽的FL患者的新型治疗的高度未满足的医学需求。

3.2.2. BMS-986458。BMS-986458是一种非对映异构体BMT-648592和BMT-648599双功能小脑蛋白依赖性LDD的小分子混合物。LDD通过募集小脑蛋白（CRBN）E3泛素连接酶、泛素化和随后通过26S蛋白酶体的蛋白水解加工来诱导靶蛋白降解。降解的下游效应包括肿瘤B细胞的细胞周期停滞和细胞凋亡以及T细胞的免疫调节。

肿瘤B细胞对LDD的体外敏感性与表达水平密切相关。使用治疗后转录组学反应和基线基因组学来定义敏感性特征，所述敏感性特征合并了表达与LDD诱导的翻译后调节剂和机械驱动因子。通过淋巴瘤基因组计划（Lymphoma Genome Project）鉴定的高风险患者分割聚类显示LDD敏感性特征的显著富集。

在几种体外NHL模型中评价BMS-986458，并且显示出快速且强效的抗增殖和促细胞凋亡肿瘤细胞杀伤。

BMS-986458展现出了强效且选择性的降解、在多种细胞系来源的异种移植物（CDX）模型中的体外/体内功效、在非临床安全性评估中的有利的PK/药效学和毒理学特征，以能够实现在人体中的试验。BMS-986458的化学、药理学、功效和安全性的详细描述提供于研究者手册中。18

3.2.2.1 非临床药理学。BMS-986458体内药理学。在2个DLBCL CDX模型中评价作为单一药剂的BMS986458，其中在以最高剂量下口服施用之后，治疗展示出74%与84%之间的肿瘤体积减小。在所有研究中，这种抗肿瘤效应是在肿瘤组织内大于98%降解之后实现的，所述降解在整个给药时间段期间得以维持。

3.2.2.非临床药代动力学。已经进行了体外和体内研究，以表征BMS-986458的吸收、药代动力学、分布、代谢和药物相互作用潜力。

在口服施用之后，在人肝细胞、以及来自临床前物种的肝细胞中以及在来自大鼠和狗的血浆样品中评价了BMS-986458的代谢。BMS-986458在测试的物种中的主要代谢途径包括去甲基化、氧化，随后是葡萄糖醛酸化和水解。

3.2.2.3 非临床毒理学。在一系列全面的非临床毒性研究中评价了BMS-986458（非对映异构体BMT-648592和BMT-648599的混合物）的非临床毒理学，所述非临床毒性研究包括在大鼠和狗中每日两次给药（BID）长达28天持续时间的单剂量和重复剂量毒性研究、体外和体内遗传毒性研究、体外光毒性研究以及体外和体内心血管安全性药理学研究。根据起始临床剂量下的预测暴露量（AUC和Cmax）计算以下所示的暴露倍数。使用通量方法使用蛋白质结合的预测物种差异并且通过对于体外测定而言假设99%的蛋白质结合，已经针对游离分数校正了Cmax倍数。

已经在体外和体内表征了BMS-986458影响心血管系统的潜力。BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599在体外在大致相当的浓度下抑制心脏离子通道，其中hERG IC50分别为0.44、0.52和0.16 µg/mL（0.7、0.83和0.25 µM）（对于BMS-986458为518×）。在0.628 μg/mL（1 μM）的最高测试浓度下，BMT-648592和BMT-648599分别将心脏L型钙通道抑制9.4%和7.4%。在人诱导多能干细胞来源的心肌细胞（hiPSC-CM）中的多电极测定中，BMS-986458在≥ 0.19 μg/mL的浓度（0.3 μM；224×）下使场电位持续时间（FPDc）、心律失常搏动增加并且使传导速度降低，并且在1.9 μg/mL（3 μM；2240×）下观察到搏动频率的增加。在探索性兔电生理学研究中，通过静脉内（IV）输注施用12 mg/kg BMS-986458（游离血浆浓度 =1.16 µg/mL，0.729 µM；1365×）时，注意到QTc间期增加（Fridericia校正的QT [QTcF] =51.2 ms；Van de Water校正的QT [QTcV] = 24.4 ms），但是心率的增加（34%）和平均血压的降低（-34%）干扰了解释。在遥测大鼠和狗的非GLP研究中以及在1个月GLP大鼠和狗研究中，在高达500 mg/kg/BID的剂量下在大鼠（游离Cmax = 0.194 µg/mL；228×）中和在高达50 mg/kg BID的剂量下在狗（游离Cmax = 0.866 µg/mL；192×）中都未注意到BMS-986458相关的心脏、神经系统和/或呼吸系统发现结果。

在体外，BMS-986458、BMT-648592和BMT-648599在Ames测定中致突变性呈阴性，但是在CHO和/或TK6细胞中的探索性体外测定中在存在或不存在S9组分的情况下致碎裂性和致非整倍体性呈阳性。分别在非GLP的2周大鼠毒性研究中和在独立的符合GLP的体内遗传毒性研究中，在高达500 mg/kg BID的日剂量下，未注意到对外周微核或彗星（十二指肠和肝）测定的BMS-986458相关效应，表明BMS-986458在体内无遗传毒性。

在大鼠和狗中进行持续时间长达1个月的重复给药毒性研究。在大鼠中进行的关键1个月口服毒性研究（剂量为50、150和500 mg/kg BID）中，在高达500 mg/kg BID（总共1000 mg/kg/天）的高剂量下不存在不良发现结果。因此，500 mg/kg BID被认为是未观察到不良效应的水平（NOAEL）。在狗中的关键1个月口服毒性研究中，以0、5、15和50 mg/kg BID的剂量口服施用BMS-986458。在50 mg/kg BID的剂量下，在第1天注意到食物消耗降低，导致体重减轻和临床病症下降，需要在第7天对3只狗进行早期安乐死，并且没有临床状态衰退的明确原因。在50 mg/kg BID下的所有其他狗均存活至安排的尸检，而没有显著的临床体征。不存在其他不良发现结果，并且BMS-986458在剂量 ≤ 15 mg/kg BID下是良好耐受的。因此，NOAEL和最高非重度毒性剂量（HNSTD）被认为是15 mg/kg BID。

在重复剂量毒性研究中，在大鼠和狗中观察到几种剂量反应性非不良发现结果。在大鼠和狗中观察到免疫抑制和促炎变化，包括循环白细胞（WBC）、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、T细胞、B细胞和/或自然杀伤（NK）细胞的增加；抗钥孔虫戚血蓝蛋白（KLH）IgM和/或IgG抗体产生的降低；仅在大鼠中细胞因子（白细胞介素 [IL]-1β、IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子[TNF]α、干扰素 [IFN]γ）的降低；胸腺、肠相关淋巴样组织（GALT）和淋巴结（狗）或脾边缘区（大鼠）中的淋巴样细胞量的降低；4只狗的股胫关节的混合细胞炎症以及1只狗的心房室瓣膜的极小嗜中性粒细胞炎症（两种结果均仅在高剂量下）。在两个物种中都观察到具有再生反应的红细胞（RBC）参数降低。在大鼠中，观察到血小板增加，其中在各研究中凝血参数没有一致的变化。在狗中注意到胆红素的增加，其中无显微镜下相关异常或转氨酶增加，并且潜在地是由UGT1A1抑制介导的。在两个物种中均观察到肝肥大和体重增加，其中在大鼠中观察到的发现结果与酶诱导和继发性甲状腺上皮肥大相关。在狗中，观察到粪便组成的不一致变化和阳性粪便隐血（FOB）测试，而没有相关的胃肠道病理学。在两个物种中均注意到较少肾脏效应且无病理相关异常，其中狗的肾脏重量增加并且大鼠的血尿素氮（BUN）轻度增加。最后，在大鼠中观察到束状带的极小肥大。

总体而言，非临床毒理学评估支持BMS-986458向1期临床试验的进展。

3.2.3.利妥昔单抗。利妥昔单抗是一种针对CD20抗原（一种位于正常前B淋巴细胞和成熟B淋巴细胞上的疏水性跨膜蛋白）的重组嵌合鼠/人抗体。在结合之后，利妥昔单抗触发针对CD20阳性细胞的细胞毒性免疫反应。

利妥昔单抗被指示用于多种肿瘤治疗和非肿瘤治疗。在美国和欧盟（EU）批准的淋巴瘤适应证如下：

•美国：利妥昔单抗被指示用于：

−与CHOP（环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙）或其他基于蒽环类的化学疗法方案组合治疗患有先前未治疗的弥漫性大B细胞CD20阳性NHL的患者

−与CVP（环磷酰胺、长春新碱、泼尼松龙）化学疗法组合治疗患有先前未治疗的滤泡性CD20阳性B细胞NHL的患者

−作为单一药剂治疗患有复发性或难治性低级别或滤泡性CD20阳性B细胞NHL的患者

•欧盟：美罗华（MabThera）被指示用于：

−与CHOP（环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松龙）化学疗法组合治疗患有CD20阳性弥漫性大B细胞非霍奇金淋巴瘤的患者

−与化学疗法组合治疗先前未治疗的患有III-IV期FL的患者

−作为单一疗法治疗化学疗法耐药的或在化学疗法后第二次或随后复发的III-IV期FL

−作为维持疗法治疗对诱导疗法有反应的患有FL的成年患者

虽然利妥昔单抗未被FDA批准用于治疗除FL之外的R/R淋巴瘤，但是利妥昔单抗是大多数挽救性化学免疫疗法方案（例如，R-ICE、R-DHAP、R-ESHAP、R-吉西他滨/奥沙利铂）的组分，在NCCN和欧洲肿瘤内科学会指南中被列为用于B细胞淋巴瘤的二线（和后续）治疗的治疗选择，并且在此背景下常规地用于标准实践。此外，在美国和欧盟，利妥昔单抗被批准用于与来那度胺组合用于治疗患有R/R FL的患者。

3.3 益处/风险评估

3.3.1 风险评估

表B4-3.3.1-1：风险评估

缩写：BMA，骨髓抽吸物；BMB，骨髓活检；CRBN，小脑蛋白；CT，计算机断层成像；DLBCL，弥漫性大B细胞淋巴瘤；EU，欧盟；IRR，输注相关反应；MUGA，多门控采集；GI，胃肠道；MoA，作用机制；NHL，非霍奇金淋巴瘤；PML，进行性多灶性白质脑病；PPP，预防计划妊娠；SmPC，产品特征汇总；TFR，燃瘤反应；TLS，肿瘤溶解综合征；TE，血栓栓塞；USPI，美国药品说明书；VTE，静脉血栓栓塞。

包括标准资格标准，以确保可接受的基线器官功能（包括造血功能）和缺乏临床上显著的合并疾病。

由于这是FIH研究，当前没有用BMS-986458的人体经验。因此，潜在风险的分析基于非临床毒理学研究和对具有类似作用机制的可用化合物的安全性概况的审查。

BMS-986458降解是小脑蛋白依赖性的，但是不会导致经典CELMoD新底物（诸如Aiolos、CK1α、Ikaros、GSPT1和SALL4）的脱靶降解。因此，预期BMS-986458毒性特征将与CELMoD存在差异，包括潜在的生殖毒性。然而，由于迄今为止尚未进行生殖毒性研究并且BMS-986458的机制是小脑蛋白依赖性的，BMS-986458将被看作为推定的选择性发育有毒物质，并且参与者将被要求遵循BMS-986458妊娠预防计划（Pregnancy Prevention Plan）（PPP）以进行BMS临床试验。

BMS-986458将在A2部分和B2部分与利妥昔单抗组合施用。在患有NHL的患者中观察到的最常见的不良反应（> 25%）是输注反应、发热、淋巴细胞减少症、寒战、感染和虚弱。已经报告了致命性输注反应、肿瘤溶解综合征（TLS）、重度粘膜皮肤反应和PML。还将根据利妥昔单抗处方信息监测参与者的感染和感染再激活（包括乙型肝炎再激活）、神经功能（PML）、心律失常和其他AE。

输注生物产品可能会导致重度且危及生命的输注反应。利妥昔单抗输注24小时内发生致命性输注反应；大约80%的致命性反应发生在第一次输注时（参考USPI和EU SmPC）。包括预用药要求和参与者监测。

潜在的BMS-986458和利妥昔单抗重叠毒性包括血细胞减少症、感染和TLS。在整个研究过程中，如通过此研究方案中所述的体格检查、AE收集、标准和专门实验室测试来监测参与者。此方案中包括剂量调整指南、参与者监测和AE管理指南。

全球2019冠状病毒病（COVID-19）大流行已被鉴定为通常对临床试验参与者具有潜在风险。BMS-986458施用是否会增加染上重度急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV-2）感染的风险或增加症状的严重程度或持续时间目前尚未可知。当使参与者入组时必须考虑此未知风险。

由于SARS-CoV-2大流行，将不需要另外的安全性监测或常规筛选测试。患有近期或急性感染的参与者将被排除或延迟开始研究干预。如果参与者在进行研究干预时患上确诊的SARS-CoV-2感染，则需要延迟给药或中断研究干预。

所述研究被设计为有研究访视，其允许在整个临床试验期间密切监测参与者的安全性，并且如果在研究访视之间出现间发疾患，则鼓励参与者联系研究者。在研究期间，提供关于临床护理决定的信息的COVID-19测试应遵循当地标准实践。

非活COVID-19疫苗接种被认为是研究中的简单伴随药物。

3.3.2 益处评估。患有R/R NHL的参与者具有不良预后和较少治愈性选择。CA1231000是在此患者群体中评价BMS-986458的FIH研究。因此，尽管可以基于作用机制和/或非临床观察结果假设益处，但是尚未确定患有晚期癌症的参与者的实际临床益处。此研究期间收集的信息可能有助于申办者获得关于BMS-986458的信息，这些信息可能使患有R/R NHL的患者受益。

3.3.3 总体益处/风险结论。申办者将持续评价研究的益处/风险概况。此评价将基于所有可用的数据，其中特别关注 (i) 此研究或BMS-986458的任何其他临床研究中的AE或其他安全性趋势，其特征、严重程度和/或频率表明参与者将暴露于不合理且显著的疾患或损伤风险；(ii) 新的非临床数据，其指示不合理且显著的疾患或损伤风险。

如果此类评价表明研究的益处/风险概况对参与者是不利的，则申办者将暂停入组和/或治疗，直到对数据进行进一步评价，并且就潜在的措施，可以与一个或多个适当的卫生机构进行沟通。此类措施可能包括（但不限于）研究继续、实质性修订、或研究终止。

4 目标和终点

表B4-4-1：目标和终点 [被估量]

缩写：AE，不良事件；AUC(0-T)，血浆浓度-时间曲线下面积；Cmax，最大浓度；CRBN，小脑蛋白；DLT，剂量限制性毒性；DOR，反应持续时间；lgG，免疫球蛋白G；NHL，非霍奇金淋巴瘤；ORR，总反应率；OS，总生存期；PFS，无进展生存期；PK，药代动力学；RP2D，推荐的2期剂量；R/R，复发性/难治性；SAE，严重不良事件；Tmax，达到最大浓度的时间；TTR，反应时间。

^a将在统计分析计划（在适用的情况下）中定义主要被估量和补充被估量的敏感性估计量。

5 研究设计

5.1 总体设计。这是一项FIH、1期、多中心、开放标签、剂量发现研究，以确定BMS-986458在患有R/R NHL的参与者中的安全性、耐受性、PK、药效学和初步功效。这项研究将分2部分进行。剂量递增（A部分）将评价递增口服剂量的BMS-986458，以评价安全性、耐受性，并且指导确定BMS-986458作为单一药剂或其与抗淋巴瘤药剂的组合在患有DLBCL和FL的参与者中的MTD和/或最佳生物剂量（OBD）。剂量扩展（B部分）将进一步评价以MTD/OBD施用的BMS-986458在以随机化方式分配的一个或多个扩展队列中的安全性和初步功效，以确定RP2D。

所有参与者将完成长达3个研究时间段：筛选（长达28天 [+ 3天]）、治疗（长达104周 [大约2年]）（从研究干预的第一剂量起，无论是否有治疗延迟）以及随访。随访时间段包括安全性随访（研究干预的最后剂量后28天 [± 3天]）、生存期随访（从研究干预的第一剂量起长达156周 [大约3年]）和功效随访（长达52周 [大约1年]）。研究参与的最长持续时间将为大约160周（大约3年）（长达4周的筛选、长达104周的治疗和长达52周的随访）。

5.1.1.筛选期。筛选期在研究干预的第一剂量前28天（+ 3天弹性窗口，最多31天）开始。必须在任何研究特定程序前获得知情同意书，并且在源文件和电子病例报告表（electronic Case Report Form）（eCRF）中记录其完成情况。所有筛选测试和程序必须在研究治疗开始前28天（+ 3天）内完成。

将基于入选标准和排除标准评价被筛选的所有参与者，并且将使用交互式响应技术（Interactive Response Technology）（IRT）系统进行入组。除非另有说明，否则所有筛选测试和程序必须在研究干预的第一剂量前28天（+ 3天）内完成，并且接收结果并且评估。可以重新筛选参与者。

如果参与者由于研究相关程序（例如，安排肿瘤活检或等待研究相关的实验室值）而超过筛选时间段，则参与者必须重新同意，但是不需要新的参与者鉴定号。在这种情况下，应重复初始筛选时间段的最少数量的程序，以使参与者合格，同时保持参与者的安全性和资格。应重复超出窗口的筛选实验室测试。

5.1.2 治疗期。在确认资格后，参与者将入组并且在研究和剂量队列的适当部分开始研究干预。

BMS-986458的治疗时间段将从研究干预的第一剂量起持续长达104周（大约2年）。BMS-986458的口服施用的细节可见于下文。

对于接受利妥昔单抗与BMS-986458的组合的参与者，将在计划给药日以375 mg/m²的固定剂量施用利妥昔单抗（根据药品说明书和机构标准实践）持续最多6次输注。将在第1至6周期的第1天给予利妥昔单抗。关于利妥昔单抗输注的细节可见于下文。

除非另外说明，否则应在访视日在给药前进行任何取样或评估。

5.1.2.1 剂量递增（A部分）。将在A部分评价递增剂量的BMS-986458。BMS-986458剂量递增的临时给药队列汇总于本文中。

如果起始剂量的BMS-986458不耐受，则可以探索较低的剂量水平（即，队列-1）。临时剂量增量将遵循从80 mg及以上起的改良斐波纳契设计，其中连续剂量队列中的剂量可以按先前队列中的剂量的100%、62.5%、53.8%、33%等进行增加。在考虑所有可用的临床数据时，安全审查委员会（SRC）可以推荐剂量递增的较小增量。SRC可基于新出现的安全性、PK和药效学数据开放探索性队列；起始剂量将不会超过已经显示为耐受的总日剂量。SRC可以提出替代剂量、时间表和频率。在所有情况下，用于下一个队列的推荐剂量将不超过相对于先前总日剂量的大约100%的增加。

将由SRC基于来自A1部分和B1部分的新出现的安全性、PK和药效学数据来确定A2部分中BMS-986458的起始剂量和时间表，并且将比B1部分中探索的最大BMS-986458单一疗法剂量低至少一个剂量水平。将利用单一疗法中以OBD治疗的最少25名参与者的数据来确定A2部分中BMS-986458的起始剂量。

剂量递增决定。在A1部分中将采用2阶段设计来找到MTD和/或OBD。在第1阶段中，将通过贝叶斯最优区间（BOIN）设计来指导BMS-986458作为单一药剂的剂量递增/递减决定。将在第2阶段中使用TITE-BOIN12设计来找到OBD。将在A2部分中利用BOIN设计来指导BMS-986458与利妥昔单抗的剂量递增/递减决定。

对于A1部分（单一药剂剂量递增），每个剂量水平最少3名至最多9名参与者可入组队列，以评估第1阶段的安全性。在目标DLT率为30%的情况下，基于此设计原则，观察到的DLT率在（23.6%，35.9%）内的剂量将被认为是可接受的。此阶段的剂量递增/递减将基于标准BOIN设计方法，使用上述毒性边界并且将每个剂量水平下的最大参与者数量设置为9名。当第1阶段下的递增/递减达到可接受毒性限度内的最高剂量水平或确定MTD时，第1阶段将进入第2阶段。在第2阶段，将通过TITE-BOIN12设计指导剂量递增/递减以评估每个剂量水平的初步功效以及更全面的耐受性，以通过以在第1阶段中确定的可耐受剂量水平下入组更多参与者来确定最佳生物剂量（OBD）。

对于A2部分（利妥昔单抗组合剂量递增），将从A1部分中选择2个连续单一疗法OBD。将最多16名参与者（包括回补参与者）将以选定的OBD进行治疗，总共多达32名可评价反应的参与者。组合剂量递增将基于与A1部分中第1阶段相同的BOIN标准进行。

SRC将根据对安全性和可用的PK、药效学和功效数据的综合评估来做出剂量递增/递减、评价剂量队列内的另外参与者、更高的剂量水平、使用更小的剂量增量、中间剂量水平、替代给药时间表或频率、或宣布MTD和/或OBD的最终建议。SRC会议上提出的所有推荐将被正式记录（经由会议纪要和备忘录）并分发给研究的研究者。

将在C1D1开始一种或多种IMP的施用；在剂量递增期间在任何剂量水平/队列中施用第一剂量后，在定义的DLT评估时间段内观察每个队列中的参与者，然后可以开始下一个更高的剂量水平。

在剂量递增的剂量队列中进行治疗的前3名的可评价DLT的参与者完成DLT评估时间段之后，将如通过BOIN设计所指导的那样确定施用剂量的耐受性，并且由SRC确认。将基于观察到的DLT数量来确定下一批入组参与者的剂量水平，这描述了在第1阶段中通过目标DLT率为30%（23.6%，35.9%）的BOIN设计以及在第2阶段中用相同的目标DLT率和用于发现OBD的效用矩阵的TITE-BOIN12设计的最佳剂量递增决定。

对于选择用于剂量扩展的剂量水平，将在剂量水平确定为可耐受的剂量递增中评价至少6名可评价DLT的参与者的DLT。将由SRC确认基于对另外的安全性和任何可用PK、药效学和功效数据的审查宣布可耐受剂量水平的决定。

在研究期间，将监测所有参与者的AE。将根据美国国家癌症研究所（NationalCancer Institute，NCI）不良事件通用术语标准（Common Terminology Criteria forAdverse Events，CTCAE）5.0版中概述的指南按严重程度对不良事件进行分级，除选定的AE（例如，TLS和TFR）之外。剂量递增期间的DLT将基于C1D1至C1D28的DLT评估时间段期间发生的AE。在申办者与研究者之间达成协议后做出剂量水平决定和/或剂量水平调整以及限定一个或多个OBD时，将考虑超过DLT评估时间段发生的任何毒性。

A部分的交错给药。在剂量递增期期间（A部分），将使用交错给药方法。将观察入组多于1名参与者的每个剂量水平中入组的第一名参与者至少1天，然后可以以该剂量水平治疗另外的参与者。

5.1.2.2 剂量扩展（B部分）。在完成剂量递增之后，在以随机化方式分配的多个队列中，可以按BMS-986458 OBD和/或替代的可耐受给药时间表进行扩展。SRC将为扩展队列选择剂量、时间表和治疗方案。以既定剂量水平和时间表进行剂量扩展的决定将基于（但不限于）总体安全性概况、初步阳性功效信号和可用的PK/药效学数据。

按每个剂量水平/时间表且具有充分随访的大约20名参与者将入组B1部分和B2部分，以进一步评价按OBD和/或更低剂量水平和/或替代时间表施用的单独的BMS-986458或其与利妥昔单抗的组合的安全性和功效。将针对每种适应证（B1部分）或每种组合（B2部分）评估两种剂量时间表。在剂量扩展中按OBD和/或更低剂量水平和/或替代时间表治疗的参与者的数据可以与在剂量递增中以相同剂量水平、时间表和治疗臂治疗的参与者的数据（如果来自相同群体）组合。将使用贝叶斯连续监测在单一疗法和组合扩展队列中监测毒性。SRC将继续监测总体安全性/耐受性数据。建立了多层方法，以保证在整个研究中充分监测参与者的安全性。

5.1.2.3 停止标准的定义。在A部分期间，当研究者和申办者/医学监查员基于DLT评估时间段期间经历DLT事件的参与者人数以及对可用安全性、耐受性、PK、PD和初步功效数据的累积审查宣布MTD或OBD时，将停止剂量递增。

在B部分期间，将利用贝叶斯方法监测被定义为在治疗期间任何时间发生AE的过量毒性，所述过量毒性将符合剂量递增中规定的DLT标准（除由于不符合DLT标准的AE而导致的剂量减少之外；章节10.3）。此安全性监测规则和操作特征描述于章节10.2中。当达到停止边界时，将暂时停止该扩展剂量水平下的进一步入组。

中期计算的推荐和全部数据将由SRC审查。基于SRC的审查，当前剂量水平可能会永久中止，并且将在剩余的研究部分评价更低的剂量水平。类似的持续安全性监测将应用于正在评价的新剂量水平。

在A部分和B部分，如果任何参与者经历以下任何严重不良事件（SAE），将召开另外的临时SRC会议进行此审查：

•无法管理的危及生命（4级）事件（即，在研究干预中断和医学管理的情况下未消退至3级或更低），除非与疾病或外部原因明确相关。

•5级事件（死亡），除非与疾病或外部原因明确相关。

这些SAE的审查以及暂停入组或终止研究的任何决定将由SRC来确定。

5.1.3 随访时间段。将根据表B4-2-2继续对中止治疗的所有参与者进行随访。

5.1.3.1 安全性随访。在研究干预的最后剂量后，将对所有参与者随访28天（± 3天），以了解AE报告和伴随药物信息以及新的抗癌疗法，以及此后任何时间研究者已知的SAE（参见章节9.2.1），直到恢复（返回至基线）、恢复伴后遗症、或死亡（由于SAE所致）。安全性随访联系可以通过电话进行。对于WOCBP参与者，将需要一个或多个妊娠试验（参见章节9.4.7）。

所有安全性随访时间段持续研究干预的最后剂量后28天（参见章节9.2.5）。

5.1.3.2 生存期随访。在研究干预的最后剂量后，将通过电话联系或诊所对参与者进行随访。将在最后剂量的BMS-986458后28天进行生存期随访连同安全性随访访视，并且然后从第一剂量的BMS-986458起每12周（± 14天）持续长达156周（大约3年）或直到死亡、失访、撤回同意或研究结束，以先发生者为准。此外，将收集关于研究干预中止后的抗癌疗法的信息。

可以通过记录审查（包括公共记录）和/或与参与者、家庭或参与者的治疗医师的电话联系来进行生存期随访。

5.1.3.3 功效随访。出于除临床上显著的疾病进展之外的原因而中止研究干预的参与者应从最后剂量的BMS-986458起每26周（± 14天）继续进行反应评估并且长达52周（大约1年），直到疾病进展、死亡、开始新的抗癌疗法、失访、从研究撤回同意、或研究结束，以先发生者为准。

5.1.4.1 安全性审查委员会。将由SRC提出安全性考虑，包括开放新剂量水平队列的推荐。SRC将包括研究者（和/或指定代表）、申办者的临床试验医师、安全性医师、SMT主席、研究统计学家和临床科学家，连同可能包括研究药代动力学科学家、转化科学家和全球试验经理在内的临时参会者。如有必要，SRC可咨询其他内部专家和外部专家。

SRC将负责审查包括DLT在内的安全性数据，并且评估剂量水平或时间表是可耐受的还是不可耐受的，以及关于递增/递减至后续剂量水平；替代剂量/时间表/频率；中间剂量；使用较小剂量增量进行剂量递增；继续、延迟或终止给药；重复队列；在队列中入组另外的参与者提出推荐。SRC将针对扩展队列选择剂量、时间表和治疗方案，并且将继续监测总体安全性/耐受性数据。SRC做出的所有决定都将正式记录并且以书面形式分发给所有研究中心（site）。直到向所有参与研究中心发送相应SRC决定的书面通知并且在适用时实施方案修订才将开始剂量递增、递减、改变给药时间表、或扩展现有剂量队列。将由SRC确定MTD和/或一个或多个OBD的最终确定。将由SRC基于临床和实验室安全性数据、功效和PK/药效学/生物标志物数据（如可用）的综合审查来确定一个或多个推荐的2期剂量（一个或多个RP2D）。在宣布一个或多个RP2D前并且咨询研究者，申办者可以选择扩展先前确定为可耐受（在DLT评价期间）的任何剂量水平，以便获得另外的经验。

5.2 参与者数量。参与者的近似总人数将为273名，如下所示：

•剂量递增A部分：可以治疗大约73名参与者，包括：

o单一疗法队列（A1部分）：大约41名参与者

o利妥昔单抗组合队列（A2部分）：大约32名参与者。

•剂量扩展B部分：可以治疗大约200名可评价功效的参与者，包括：

o一个或多个单一疗法队列（B1部分）：大约80名参与者

o一个或多个组合队列（B2部分）：大约80名参与者

o一个或多个患者选择队列（B3部分）：大约40名参与者。

5.3 研究结束定义。研究的开始被定义为第一名参与者的第一次访视。

主要完成日被定义为针对研究的主要终点收集最后数据点时所处的日期。如果研究具有多个主要终点，则主要完成日期是针对最后主要终点收集最后数据点时所处的日期。

研究结束被定义为最后参与者的最后访视。

如果参与者已经完成了研究的所有时间段，包括活动时间表中所示的最后的程序，则认为他们已经完成了研究。

5.4 研究设计的科学原理。对于用于评价BMS-986458（一种新的试验用产品（IP））作为针对患有R/R NHL的参与者的治疗，存在强的生物学原理。这项BMS-986458的1期、FIH临床研究将探索BMS-986458作为单一药剂或其与抗淋巴瘤药剂的组合在复发性或难治性疾病的背景下的安全性、耐受性、PK以及初步生物学和临床活性。

5.5 剂量的正当性。基于来自大鼠和狗的关键28天毒性研究以及在OCI-LY1异种移植小鼠模型中的功效研究的结果选择剂量。在大鼠中的关键28天毒性研究中，在高达高剂量的剂量下，所有大鼠均存活到其安排的尸检，并且未注意到不良效应。在关键的28天狗毒性研究中，在高剂量下注意到食物消耗的BMS-986458相关降低。在第1天开始，导致体重下降，活动减少、虚弱、消瘦、脱水和部分闭眼的临床观察结果，并且随后在第7天对3只狗进行早期安乐死。在对3只早期死者进行尸检时，不存在指示临床状态衰退的原因的病理学发现结果。在中等剂量下未注意到发病或不良效应，并且此剂量被认为是NOAEL和最高非重度毒性剂量（HNSTD）。以下人体当量剂量（HED）的计算基于体表面积和物种间异速生长标度。在应用10x安全性系数后，关键28天大鼠研究中的STD10支持最大推荐起始剂量（MRSD）。在应用6x安全性系数后，关键28天狗研究中的HNSTD支持MRSD。

在OCI-LY1异种移植小鼠模型中的PK/药效学和功效研究表明，需要完全抑制来实现最大肿瘤生长抑制。基于在人体中的预测终末半衰期，在此研究中选择给药进行评价。选择CA1231000中的起始剂量。由于此剂量处于预计有效剂量范围的中间并且小于的MRSD，预期它既有效又安全。使用预测PK参数和口服生物利用度%的假设，估计在向70 kg人口服给药之后的预计稳态最大血浆浓度（Cmax）和浓度曲线下面积。

将基于耐受性确定最高临床剂量。在提出最高临床剂量下，最小预测AUC和Cmax安全性裕度分别为15.2x和5.6x，低于大鼠或狗关键1个月GLP毒性研究中的NoAEL。

5.6 探索性生物标志物研究的原理。在评价BMS-986458的1期研究中，将收集一系列药效学、预测性和探索性生物标志物以促进剂量/时间表选择，并且潜在地鉴定生物标志物以预测反应并且告知潜在组合。

将使用更先进的图像分析技术，使用包括CT/MRI扫描在内的数字成像样品进行与治疗功效相关的研究。

遗传变异可能会影响参与者对研究干预的反应、疾病的易感性以及疾病的严重程度和进展。对研究干预的可变反应可能是由于影响干预吸收、分布、代谢和排泄的遗传决定因素；干预的作用机制；疾病病因；和/或所治疗疾病的分子亚型。

将使用DNA样品进行与一个或多个研究干预和/或研究中的疾病/病症以及相关病症相关的研究。还可使用样品来开发测试/测定，其包括与一个或多个研究干预和/或研究中的疾病/病症和相关病症相关的诊断测试。遗传研究可以由以下组成：1个或多个候选基因的分析或整个基因组中的遗传标志物的分析或整个基因组的分析。

参与此研究的所有受试者将同意生物标志物取样程序，如经由ICF所述的。

5.7 任选的未来研究的原理。可以使用最初仅从同意的参与者中收集用于此研究中要求的另一项测试的剩余样品进行未来研究。未来研究旨在允许针对方案其他地方未解决的突发或未来问题进行研究，并且可能包括与一个或多个研究干预和/或研究中疾病不相关的研究。研究可能涉及使用脱氧核糖核酸（DNA）或核糖核酸（RNA）的遗传测试；这可以由以下组成：1个或多个候选基因的分析、整个基因组中的遗传标志物的分析或整个基因组的分析。用于未来研究的样品的分析也可能涉及使用作为此研究的一部分收集的其他临床数据。这种未来研究也可能导致开发新的诊断测试。参与者同意此任选未来研究的决定将不会影响他/她参与主要研究的能力。如果需要，可以在以后的访视中收集针对任选未来研究的同意。在一些国家，根据当地法规，其可能需要来自当地卫生当局的批准。

6 研究群体。不允许对募集和入组标准的方案偏离的事前批准（也称为方案豁免或免除）。

6.1 入选标准。仅如果当所有以下标准都适用时，参与者才有资格被纳入研究中：

1)签署的书面知情同意书

a)参与者必须根据监管、当地和机构指南签署伦理审查委员会（InstitutionalReview Board）（IRB）/独立伦理委员会（Independent Ethics Committee）（IEC）批准的书面知情同意表格（ICF）并注明日期。在进行不作为正常患者护理的一部分的任何方案相关程序前，必须获得此ICF。

2)参与者年龄

a)参与者在签署ICF时必须年满18岁或根据当地法规规定的法定成年年龄（包含端值）。

3)参与者类型和目标疾病特征

a)根据以下要求（如适用于每种适应证）之一，患有复发性或难治性疾病的具有NHL（包括DLBCL [即，DLBCL NOS和弥漫性大B细胞淋巴瘤/具有DLBCL形态的高级别B细胞淋巴瘤伴MYC和BCL2重排] 和FL）病史的参与者。此外，在入组前，在参与者的最佳利益方面，治疗医师应讨论参与者可用和可及的所有潜在有效的疗法作为选项：

i)对于R/R DLBCL（从头）和FL 3b：在至少2个先前疗法线（例如，已经接受过含有利妥昔单抗、蒽环类、烷基化剂和类固醇的一线组合化学疗法方案，并且已经接受至少一种另外的 [二线/挽救] 治疗）之后。

ii)对于R/R DLBCL（转化型淋巴瘤）：在至少2个先前疗法线（其必须在转化后施用；因此，必须已经接受过至少2种针对DLBCL的标准治疗方案）之后。

iii)对于R/R FL（除FL 3b之外）：在至少2个先前疗法线之后并且在入组时基于研究者的评估（例如，根据但不限于滤泡性淋巴瘤研究组 [GELF] 标准）符合治疗标准。²¹

iv)参与者必须患有可测量疾病，其通过以下来定义：对于氟脱氧葡萄糖（FDG）亲性疾病，具有至少一个FDG亲性病灶，并且通过计算机断层成像（CT）或磁共振成像（MRI）进行横断面成像，具有一个二维可测量疾病并且至少一个病灶横径 > 1.5 cm，如通过NHL的卢加诺分类所定义的²⁰。可测量疾病先前不能被辐照。

v)对于A部分，参与者必须同意并且必须具有在筛选期间肿瘤活检和FNA可及的并且在第1周期中FNA可及的肿瘤。

vi)对于B部分，参与者必须同意并且具有在筛选和第1周期期间配对肿瘤活检可及的肿瘤。

4)物理和实验室发现结果

a)必须具有以下实验室值（应在研究干预的第一剂量前确认资格）：

i)绝对嗜中性粒细胞计数 ≥ 1 x 109/L，且无生长因子支持持续7天（如果是培非格司亭，则14天）

ii)天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）≤ 3.0 x 正常值上限（ULN）或≤ 5.0 x ULN（如果肝受累）

iii)总胆红素 ≤ 1.5 x ULN

iv)钾、镁和钙（校正的Ca或游离 [离子化的] Ca）浓度在正常范围内，或可用补充剂校正。

v)血小板计数 ≥ 75 x 109/L

vi)血红蛋白 ≥ 9 g/dL

vii)使用肾病饮食改良（MDRD）方法得出的估计血清肌酐清除率 ≥ 50 mL/min

5)生殖状态

•研究者应关于妊娠预防的重要性、意外妊娠的影响以及由于精液中存在的研究干预传播给发育中的胎儿而发生胎儿毒性的潜力方面向有生育潜力的女性（WOCBP）参与者（如在PPP中关于BMS-986458所定义）和与WOCBP具有性活动的男性参与者提供咨询，即使参与者已成功进行输精管结扎术或伴侣妊娠。

•研究者应与研究干预的第一剂量相关地评价避孕方法的有效性。

•当地法律和法规可能要求使用替代和/或另外的避孕方法。

•参与者必须坚持遵守妊娠预防计划。

a)女性参与者：

i)没有生育潜力的女性参与者必须有记录的证据。注释：书面文件可从研究中心人员对参与者的医疗记录的审查或病史访谈的医学检查中获得。

(1)无生育潜力的女性（如在PPP中针对BMS-986458所定义）免除避孕要求。

ii)WOCBP必须在BMS-986458开始前24小时内具有阴性高灵敏度血清妊娠试验（最低灵敏度为25 mIU/L或等效单位的人绒毛膜促性腺激素）。

(1)在研究干预之前、期间和之后妊娠试验的另外要求在章节2：活动时间表中。

(2)研究者负责审查病史、月经史和最近的性活动，以潜在地降低包括具有不可检测的妊娠的女性的风险。

iii)WOCBP和与WOCBP具有性活动的男性参与者必须同意遵循如下文所述并且包含在ICF中的一种或多种避孕方法的说明。

(1)WOCBP不允许使用单独的激素避孕方法作为高效方法（如在PPP中针对BMS-986458所述的）。

iv)如果女性没有妊娠或哺乳并且符合以下条件中的至少1项，则她有参加资格：

(1)不是WOCBP或

(2)是WOCBP，并且在开始BMS-986458前至少28天内、在干预时间段期间以及在最后剂量的BMS-986458后至少28天内同时使用2种可靠的避孕方式（一种高效的（每年失败率< 1%）且用户独立的方法以及一种另外的有效的（屏障）方法，如在PPP中针对BMS-986458所述的），并且同意在相同时间段内或在最后剂量的利妥昔单抗后长达1年内不出于生殖目的捐献卵子（卵细胞、卵母细胞）。

b)男性参与者：

−与WOCBP具有性活动的男性必须同意遵循如下文所述并且包含在ICF中的一种或多种避孕方法的说明。

i)无精子症男性不能免除避孕要求并且将被要求在与WOCBP的任何性活动（例如，阴道、肛门、口交）期间始终使用乳胶或其他合成避孕套，即使参与者已经经历成功的输精管结扎术或伴侣妊娠。

ii)在干预时间段期间以及在最后剂量的BMS-986458后至少28天内，要求男性参与者使用避孕套。

iii)应建议男性参与者的女性伴侣在研究干预时间段期间以及在男性参与者的最后剂量的BMS-986458后至少28天内使用高效避孕方法。

iv)具有妊娠或哺乳伴侣的男性参与者必须同意在干预时间段期间以及在最后剂量的BMS-986458后至少28天内保持禁止性活动或在任何性活动（例如，阴道、肛门、口交）期间使用男用避孕套。

v)在干预时间段期间以及在最后剂量的BMS-986458后至少28天内，男性参与者必须避免捐献精子。

vi)应建议男性参与者的母乳喂养伴侣在男性参与者被要求使用避孕套的时间内咨询其医疗保健提供者关于使用适当的高效避孕措施。

6.2 排除标准。如果以下任何标准都适用，则将参与者排除在研究入组之外：

1)医学状况

a)东部肿瘤协作组（ECOG）²²体能状态 ≥ 3的参与者。

b)具有与先前或当前抗癌疗法相关的非血液学毒性（其未消退、恢复至基线或 ≤2级、或被认为不可逆）的参与者。

i)在咨询申办者医学监查员后，如果符合所有其他入选/排除标准，则这些参与者是潜在合格的。

c)具有已知的吞咽困难、短肠综合征、胃轻瘫或限制口服施用的药物的消化或胃肠道吸收的其他病症/手术的参与者。

d)在筛选时或在C1D1前1个月内具有未被控制的高血压（收缩压 [BP] > 180 mmHg或舒张BP > 100 mm Hg）或低血压（收缩BP < 90 mm Hg或舒张BP < 60 mm Hg）的参与者。

e)临床上显著的心血管或脑血管疾病，包括以下中的任一种：

i)筛选时完全左束支或双束支阻滞或其他临床上显著的异常ECG发现结果。

ii)先天性长QT综合征病史。

iii)筛选时持续性或临床上有意义的室性心律失常。

iv)筛选ECG时使用Fridericia公式针对心率校正的QT间期（QTcF）≥ 470毫秒。

v)在开始研究干预前 ≤ 6个月的不稳定型心绞痛、心肌梗死或卒中或者临床上显著的心律失常（诸如室性心动过速、心室颤动或尖端扭转）病史。

vi)筛选时纽约心脏协会心血管功能受损状态 ≥ 3级²³。3级被定义为导致体能活动明显受限的心脏病，并且参与者在休息时舒适，但是少于正常的体能活动会导致疲劳、心悸、呼吸困难或心绞痛。

vii)筛选时LVEF < 45%，如通过超声心动图（ECHO）或多门控采集（MUGA）扫描确定的。

f)患有干扰解释来自研究的数据的能力的任何病症的参与者。

g)如果参与此研究则将参与者置于不可接受的风险中的任何状况（包括显著的急性或慢性医学疾患、活动性或未被控制的感染、或存在实验室异常）的参与者。

h)在第1周期第1天前，在10天内具有轻度或无症状感染或在20天内具有重度/危重疾患的患有已知SARS-CoV-2感染的参与者。急性症状必须已经消退，并且基于研究者的评估在咨询申办者医学监查员后，不存在使参与者处于接受研究干预的高风险中的后遗症。

i)不能进行静脉穿刺和/或不能耐受静脉通路。

j)如由研究者确定的任何其他合理的医学、精神和/或社会原因。

k)需要现行的持续全身性治疗的并存的第二癌症的病史。

l)具有已知或疑似中枢神经系统（CNS）受累或原发性CNS淋巴瘤的病史的参与者（包括处于缓解的那些）。只有在筛选期间具有疑似大脑受累的参与者才需要进行大脑/脊柱扫描（CT或MRI）。

2)生殖状态

a)妊娠或哺乳的女性。

3)先前/伴随疗法

a)无法遵守如章节7.7：伴随疗法中列出的限制、注意事项和禁止的治疗。

b)在开始干预前 ≤ 4周的先前活病毒疫苗。

c)在开始干预前7天内的先前COVID-19疫苗。对于需要多于1个剂量的疫苗，当可行时并且当开始研究干预的延迟不会使研究参与者处于风险中时，则应在开始研究干预前至少7天完成全系列（例如，2剂量系列的两个剂量）。

d)参与者在 ≤ 5个半衰期内或在开始研究干预前4周（以较短者为准）已经接受过先前全身性抗癌治疗（已批准的或试验用的）

e)参与者在开始研究干预前 ≤ 4周内已经接受过先前CAR-T或其他T细胞靶向治疗（已批准的或试验用的）。

f)参与者在开始研究干预前 ≤ 4周内已经接受过用CRBN调节药物的先前疗法（例如，来那度胺、阿伐度胺、泊马度胺、CC-99282）。

g)参与者正在接受长期全身性免疫抑制疗法或皮质类固醇（例如，在过去14天内超过10 mg/天的泼尼松或等效物）或患有临床上显著的移植物抗宿主病（GVHD）的参与者。

i)允许稳定使用吸入性皮质类固醇。

ii)对于正在进行的皮肤或眼部GVHD，允许使用局部类固醇。

h)参与者在开始研究干预前 ≤ 3个月内接受过先前自体SCT。如果参与者在开始研究干预前 > 3个月内接受过先前自体SCT，则任何治疗相关毒性未消退（> 2级）。

i)参与者在开始研究干预前

≤ 6个月内接受过标准或降低强度预处理的先前同种异体SCT。如果参与者在开始研究干预前

> 6个月内接受过先前同种异体SCT，则任何治疗相关毒性未消退（> 2级）。

j)参与者在开始研究干预前 ≤ 2周内接受过大手术。参与者必须已经从近期手术的任何临床上显著的效应中恢复。

k)在开始研究干预前 ≤ 4周内先前放射疗法。

4)物理和实验室测试发现结果

a)根据研究者的判断，有证据表明存在器官功能障碍或在体格检查、生命体征、ECG或临床实验室确定中存在任何临床上显著的偏离正常值（其超出与目标群体一致的范围）。

b)具有已知HIV血清阳性或活动性感染、或乙型肝炎病毒（HBV）或丙型肝炎病毒活动性感染（通过丙型肝炎抗体；乙型肝炎表面抗原和抗乙型肝炎表面抗体、或HIV-1和HIV-2抗体的血液筛选阳性证明）的参与者。

5)过敏和药物不良反应

a)对利妥昔单抗或任何赋形剂的过敏史。

6)其他排除标准

a)囚犯或被非自愿监禁的参与者。（注释：在某些特定情况下并且仅在当地法规允许的国家，被囚禁的人可以被纳入或被允许继续作为参与者。严格的条件适用，并且需要申办者批准。）

b)参与到与此研究同时进行的另一项临床试验中。

c)在开始研究干预前4周内（仅对于血浆，在2周内）向血库献血或在临床研究中（除筛选访视时之外）献血。

6.4 筛选失败。筛选失败被定义为同意参与临床研究但随后未入组研究/纳入分析群体的参与者。

需要极少的一组筛选失败信息，以确保筛选失败参与者的透明报告，满足试验报告统一标准（Consolidated Standards of Reporting Trials，CONSORT）发布要求（如适用），并且回应监管机构的询问。极少的信息包括同意日期、人口统计学、筛选失败细节、资格标准和同意之后发生的任何严重不良事件（SAE）。

6.4.1 筛选期间的重新测试。此研究允许因筛选失败而中止研究的参与者（即，参与者尚未被随机分配/尚未接受治疗）的重新入组。如果重新入组，则参与者必须重新同意。

（除了需要确认值的任何参数之外）还将允许在任何单次筛选中重新测试实验室参数和/或其他评估。

在研究干预的第一剂量前的最新结果是这样的值，通过所述值将评估研究纳入，因为它代表了参与者的最新临床状态。

可以重复筛选程序概述（Screening Procedural Outline）中包括的实验室参数和/或评估，以努力找到所有可能的完全合格的参与者。可能需要咨询医学监查员，以鉴定任何特定参数的重复测试是否是临床相关的。

7 一种或多种研究干预和伴随疗法。研究干预被定义为根据研究方案旨在向研究参与者施用的任何一种或多种试验性干预、一种或多种上市产品、安慰剂、一种或多种程序、或医疗装置。

研究干预包括试验用 [药物] 产品（IP/IMP）和非试验用/辅助 [药物] 产品（非IP/非IMP/AxMP）。

试验用产品（IP）（在一些地区也称为试验用药品（IMP））被定义为在临床研究中测试或用作参考的活性物质或安慰剂的药物形式，包括已经获得上市授权但使用或配装（配制或包装）与授权形式不同的产品、用于未授权的适应证的产品、或当用于获得关于授权形式的进一步信息时的产品。

出于预防、诊断或治疗原因用作支持药物或补救药物（escape medication）的作为给定诊断的标准护理的组分的其他药物可被视为非IMP/AxMP。

7.1 施用的研究干预。治疗周期持续时间为28天。将如活动时间表的表中详述的进行研究访视。将根据规定的时间表施用BMS-986458从C1D1起持续长达104周（大约2年）（不论给药延迟如何）或直到进展、不可接受的毒性或参与者或医师决定退出。将在第1周期至第6周期的第1天IV施用利妥昔单抗。

分别参见关于剂量调整、治疗中止和安全性管理的信息。

表B4-7.1-1：研究干预

缩写：IMP，试验用药品；SmPC，产品特征汇总。

^a 如果当地法规允许，在某些国家这些产品可以由研究中心作为当地商业产品获得。在这些情况下，产品的包装尺寸/效力可能与表中列出的不同。这些产品应根据药品说明书或SmPC制备/储存/施用。

7.1.1.BMS-986458给药。将从第1周期第1天（C1D1）起连续口服施用BMS-986458。在引入任何其他替代时间表前，将对方案进行修订。

在将收集PK样品的研究日，将在诊所施用BMS-986458。

将要求参与者记录每次自我施用研究干预的日期和时间。要求所有组中的参与者在施用BMS-968458之前大约2小时直到之后1小时禁食（不吃或除水之外不喝任何东西）。在某些情况下，在与医学监查员讨论后可以允许参与者在施用BMS-968458之前2小时和之后1小时避免食物和饮料（除水之外）的限制。

如果参与者在BMS-986458摄入的30分钟内呕吐，则可以再次摄入BMS-986458片剂。如果在BMS-986458的30分钟后发生呕吐，则参与者不得摄入另外的BMS-986458片剂，除非在呕吐物中可见完整的药物。

可以服用BMS-986458持续长达104周（大约2年）或直到临床上显著的疾病进展、不可接受的毒性或撤回同意书。

由研究者决定并且在与医学监查员讨论后，如果符合以下所有标准，则可以考虑用BMS-968458进行再治疗：

•参与者出于除AE、进展、或开始新抗淋巴瘤疗法以外的原因而中止治疗

•基于恶性淋巴瘤国际工作组标准（The International Workshop Criteria forMalignant Lymphoma），参与者用BMS-986458实现经证明的反应

•基于恶性淋巴瘤国际工作组标准，参与者在生存期随访时间段期间具有疾病复发的证据

•继续符合资格

接受再治疗的参与者将遵循从第1周期第1天开始的活动时间表，但是可以以其最近的剂量水平以及本研究中至少一个参与者队列显示出充分耐受的时间表或剂量水平继续。在研究期间参与者只能进行一次再治疗。

对于BMS-986458的储存、制备和施用的进一步详细信息，请参考当前的研究者手册和/或药学手册。

7.1.2 利妥昔单抗给药。利妥昔单抗将在第1周期至第6周期的第1天以375 mg/m²的剂量以IV输注施用。不允许减少利妥昔单抗的剂量。

利妥昔单抗可以与早晨剂量的BMS-986458一起施用或在早晨剂量的BMS-986458之后最多2小时内施用。建议的体表面积估计方法包括Mosteller²⁴和DuBois²⁵。

•BSA = √ ((身高 (cm) x 体重 (kg))/3600)

•BSA = 0.20247 x 身高 (m) 0.725 x 体重 (kg) 0.425

应根据当地批准的利妥昔单抗处方信息或当地机构实践（利妥昔单抗PI）进行制备、输注速率和妊娠预防指导。BSA计算方法和时间设定将按照机构指南进行，在每次利妥昔单抗输注前，应施用由对乙酰氨基酚和抗组胺药组成的前驱给药（参考当前当地利妥昔单抗处方信息）。根据机构实践，也可以在开始利妥昔单抗输注前施用类固醇。应如制造商和当前指南所推荐的那样应用在利妥昔单抗的输注期间和输注后的监测措施。

允许不需要剂量中断的参与者进入下一个治疗周期（例如，血液学毒性必须消退至 ≤ 2级）。如果由于研究干预相关的毒性而中断利妥昔单抗剂量，则一旦毒性消退至 ≤2级，可以重新开始利妥昔单抗。在第1周期中，将不会重新安排因毒性而跳过的剂量。在 ≥2的周期中，利妥昔单抗的遗漏剂量可以在2周内（即，周期的第1天至第14天）进行弥补。如果在周期的第15天至第28天期间毒性消退至 ≤ 2级，则将在下一周期的第1天重新开始利妥昔单抗剂量。

将在整个输注期间以及在持续输注后至少1小时内密切监测参与者，并且获得一系列生命体征并且进行脉搏血氧饱和度监测。完备的紧急复苏设施应是即刻可得的，并且参与者应始终在研究者或经过适当培训的工作人员的密切监督下。

在具有需要永久利妥昔单抗中止的4级输注反应或复发性3级输注反应的参与者中，可在症状发作的15至60分钟内获得另外的血液测试，以评价重度过敏反应。实验室测试可以包括免疫球蛋白E（IgE）、总类胰蛋白酶和血浆组胺。

应在事件的24小时内通知医学监查员任何4级或复发性3级输注反应。

对于给药和储存信息的另外细节，参考当地批准的利妥昔单抗标签或药房手册。

7.2 分配到研究干预。所有参与者将集中使用IRT。在研究开始前，每个用户将收到登录信息和如何访问IRT的指引。如果需要，研究中心将在适用的电子病例报告表（eCRF）上记录治疗分配。在筛选访视期间，研究中心将利用IRT分配5位数的参与者编号，所述编号在所有研究中心都是唯一的。入组的参与者（包括未给药的那些）将被分配连续的参与者编号。符合入选标准和排除标准的入组参与者将有资格接受给药。每个参与研究中心的顺序编号可能会重新开始，因为不同的患者识别号最终将包括研究中心编号和参与者编号。在完成所有筛选程序后，研究中心将利用IRT筛选失败或获得治疗分配信息，包括为扩展队列的随机分配（如适用）。随后的访视将被登记到IRT系统中用于药物供应。如果IRT系统不可用，则参与者将被手动入组。

将在活动时间表中列出的研究访视时分配研究干预。

7.3 设盲。这是一项开放标签研究（对申办者和研究中心/参与者开放；不以申办者盲法治疗）。已经确定不需要设盲来满足研究目标。设盲程序不适用，并且任何Bristol-Myers Squibb公司（BMS）团队、研究中心或参与者对治疗分配信息的访问不受限制。将使用IRT分配参与者接受的特定治疗。研究中心将在每名参与者的研究干预施用开始前联系交互式响应系统（Interactive Response System）。如果需要，研究中心将在适用的电子病例报告表（eCRF）上记录治疗分配。

7.4 剂量调整

7.4.1 剂量调整。针对研究干预相关的AE，BMS-986458的剂量调整指南呈现于表7.4.1-1和表7.4.1-2中。在进行给药改变前，应与医学监查员讨论这些病例。在需要中止前，只允许2次剂量减少，或者如果是在起始剂量下，则只允许1次剂量减少。如果BMS-986458是永久性研究干预相关的AE。在进行给药改变前，应与医学监查员讨论这些病例。在需要中止前，只允许2次剂量减少，或者如果是在起始剂量下，则只允许1次剂量减少。如果BMS-986458在任何组合队列中永久中止，则组合抗淋巴瘤药剂也应中止。

对于利妥昔单抗相关毒性，推荐遵循药品说明书和当地实践。不允许减少利妥昔单抗的剂量。

对于表7.4.1-1和表7.4.1-2中未概述的AE，与医学监查员讨论。

表B4-7.4.1-1：血液学毒性的剂量调整指南

缩写：ANC，绝对嗜中性粒细胞计数；CBC，全血细胞计数；DLT，剂量限制性毒性；G-CSF，粒细胞集落刺激因子；GM-CSF，粒细胞-巨噬细胞刺激因子。

表B4-7.4.1-2：非血液学毒性的剂量调整指南

缩写：AE，不良事件；ALT，丙氨酸转氨酶；AST，天冬氨酸转氨酶；ANC，绝对嗜中性粒细胞计数；DLT，剂量限制性毒性；ECG，心电图；IV，静脉内；NCI CTCAE，美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准（National Cancer Institute Common Terminology Criteriafor Adverse Events）；NSAID，非甾体抗炎药物；QTc，校正QT；QTcF，由Fredericia校正的QT间期。

7.4.2 选定不良事件的管理

7.4.2.1 感染。应根据机构标准医学实践来实践对感染的体征和症状的警惕并且进行管理。不推荐进行常规感染性疾病预防；然而，在研究期间，可以由研究者和/或SRC判断实施抗生素、抗病毒、抗肺孢子虫、抗真菌或其他预防措施。对于剂量调整的指南，参考表7.4.1-2。

7.4.2.2 SARS-CoV-2感染。确诊SARS-CoV-2感染的参与者应中断一个或多个研究干预，并且当不存在活动性疾病体征并且通过研究者评估确认时，可以恢复所述研究干预。允许治疗活动性SARS-CoV-2感染或高风险暴露，包括使用试验用疗法并考虑DDI的风险（例如，帕罗韦德（Paxlovid）），并且应与医学监查员讨论。

7.4.2.3 肿瘤溶解综合征（TLS）的管理。被认为有TLS风险（例如，具有高肿瘤负荷或高循环淋巴细胞计数 [> 25 x 10⁹/L]）的参与者必须在BMS-986458开始前12至24小时开始接受足够的用抗尿酸药（例如，别嘌呤醇）的肿瘤溶解预防和水合作用。对于TLS的治疗，校正电解质异常，监测肾功能和液体平衡，并且施用支持性护理，包括透析，如所指示的。研究者将对更频繁的血清化学监测是否适当进行临床判断。

对于TLS定义，参考基于TLS风险的肿瘤溶解综合征（TLS）预防推荐²⁶、实验室TLS的Cairo-Bishop定义和TLS的Cairo-Bishop分级系统²⁷。

7.4.2.4 燃瘤反应（TFR）。应监测此研究中的参与者的燃瘤。燃瘤反应（TFR）被定义为包括淋巴结、脾和/或肝在内的荷病部位的尺寸的突然和压痛性增加，通常伴有低级别发热、非瘙痒性弥漫性皮疹以及在一些情况下外周血淋巴细胞计数的增加。燃瘤通常在治疗的第一个周期内发生。燃瘤反应可以模拟疾病的进展；然而，TFR通常会随着时间的推移消退。因此，在BMS-986458的初始周期中因疾病进展而中止参与者前，仔细监测和评价是非常重要的。

当前不存在区分TFR与疾病进展的实验室或放射学测试。应在治疗启动之前和之后根据临床依据结合观察结果进行区分，所述观察结果诸如相关身体发现结果、实验室发现结果和疾病进展速度。燃瘤将被记录为AE，并且使用NCI CTCAE 3.0标准进行分级。

TFR的治疗由研究者根据严重程度和临床情况进行判断。在轻度至中度病例（1至2级）中，建议继续使用BMS-986458连同对症治疗，诸如NSAID和/或麻醉剂。可以根据研究者决定施用皮质类固醇。在更重度的病例（3至4级）中，应中断BMS-986458并且应开始用皮质类固醇的疗法。也可以研究者决定使用NSAID和/或麻醉剂。当症状消退至 ≤ 1级时，可以以相同剂量水平重新开始BMS-986458。对于可能的TFR的实例，鼓励研究者与申办者医学监查员讨论。

7.4.2.6 输注相关反应。利妥昔单抗的施用可能导致严重的（包括致命的）输注相关反应。在利妥昔单抗输注24小时内发生致命性输注反应；所发生的大约80%的致命性输注反应与第一次输注相关。症状可能包括发热、寒战/寒颤、恶心、瘙痒、血管性水肿、低血压、头痛、支气管痉挛、荨麻疹、皮疹、呕吐、肌痛、头晕或高血压。输注相关反应典型地在第一次输注利妥昔单抗开始的30至120分钟内发生，并且通过减慢或中断输注以及支持性护理（苯海拉明、对乙酰氨基酚、和静脉内用盐水）消退（参考US PI和/或SmPC）。

包括预用药要求和受试者监测。如果发生重度且危及生命的输注反应，完备的紧急复苏设施应是即刻可得的，并且在输注期间受试者应在研究者或经适当培训的工作人员的密切监督下。应根据标准医学实践使用糖皮质激素、肾上腺素、氧气、静脉内输液和其他药物（根据医学指征）启用输注反应的医学管理。

7.4.2.7 进行性多灶性白质脑病。在用利妥昔单抗治疗的参与者中观察到导致进行性多灶性白质脑病（PML）的约翰坎宁安（John Cunningham，JC）病毒感染，这可能是致命的。应评价具有新发神经系统表现或预先存在的神经系统表现有变化的参与者的PML。

PML的症状是非特异性的，并且可能根据脑的受影响区域而改变。运动症状伴皮质脊髓束发现结果（例如，肌无力、瘫痪和感觉障碍）、感觉异常、小脑症状和视野缺陷是常见的。可能会出现一些被视为“皮质”的体征/症状（例如，失语症或视觉空间定向障碍）。PML的评价包括但不限于咨询神经科医师、脑MRI和腰椎穿刺（针对约翰坎宁安病毒DNA的脑脊液测试）。在患上PML的参与者中应中止利妥昔单抗和BMS-986458。应将参与者转介给神经科医师进行PML的评价和治疗。

7.4.3 BMS-986458和利妥昔单抗的剂量中断标准。除非在表7.4.1-1和表7.4.1-2中另外说明，否则经历以下的参与者应中断研究干预。

•符合DLT定义的任何研究干预相关AE都将需要中断给药。如果AE未改善至 ≤ 2级或基线，则这可能需要随后的剂量减少。应与申办者医学监查员讨论此类病例，以确定给药延迟或减少的最佳持续时间。

•研究干预相关的 ≥ 3级毒性、慢性2级毒性或由于耐受性导致的显著遗漏剂量可能需要BMS-986458的剂量减少。在进行给药改变前，应与医学监查员讨论此类病例。

•确诊SARS-CoV-2感染（参考章节7.4.2.2）。

用一个或多个研究干预的治疗可以中断长达4周，直到毒性达到 ≤ 2级或基线水平。在极少数情况下，参与者在中断长于4周后，可能会从恢复BMS-986458中受益。关于在 >4周中断后是否恢复给药的所有决定必须与医学监查员讨论。BMS-986458可以以相同剂量或减少的剂量重新开始，如章节7.4.3.1中所述。

在第1周期期间的A部分中，出于除DLT之外的原因的研究干预中断 > 7天将使参与者的DLT不可评价，并且需要在给药队列中替换该参与者。任何此类中断必须与申办者医学监查员讨论。

即使给药被延迟，也要继续按照方案进行评估。

7.4.3.1 恢复治疗的标准。除非表7.4.1-1和表7.4.1-2中另外说明，否则一旦研究干预相关的非DLT AE消退至 ≤ 1级或基线，经历不符合永久中止标准的AE的参与者可恢复用一个或多个研究干预的治疗。在给药中断持续 > 4周的参与者中重新开始研究干预前，必须咨询医学监查员/指定人员。

7.4.3.2 剂量减少的标准。在咨询申办者医学监查员后，在任何周期（包括第1周期）中允许BMS-986458的剂量减少。由于在剂量递增期间第1周期中发生的AE导致的BMS-986458剂量减少将构成DLT（参考章节7.4.1），但是将允许参与者以减少的剂量继续接受BMS-986458。

当指示BMS-986458的剂量减少时，将选择被认为安全且可耐受的下一个更低剂量水平。如果参与者正在进行剂量时间表，则参与者可以将剂量减少至时间表中施用的下一个更低剂量水平的总日剂量当量。对于B部分，这意味着参与者可以将剂量减少至A部分中被认为安全且可耐受的下一个较低剂量水平的总日剂量当量，其以与参与者被分配的相同时间表施用。一旦剂量减少，当毒性达到 ≤ 1级时，剂量可以递增。如果在更高剂量下毒性复发，则将第二次减少剂量，但是然后不允许再次递增。允许两次剂量减少（一次是对于起始剂量的）。如果任何参与者在2次剂量减少（一次减少是对于起始剂量的）后继续经历不可接受的毒性，将永久中止BMS-986458。

慢性2级毒性可能需要研究干预的剂量减少。在进行改变前，应与医学监查员讨论此类病例。

对于利妥昔单抗，不允许剂量减少。

7.4.3.3 剂量增加的标准。在第1周期期间，不允许参与者内剂量递增超过初始分配给参与者的剂量。在SRC批准之后由研究者决定从第2周期开始继续服用BMS-986458的A部分中的参与者可以具有增加的剂量水平，条件是替代剂量水平已经显示被此研究中至少1个队列的其他参与者良好耐受。为了考虑参与者内剂量递增，参与者必须显示出充分耐受其当前剂量水平（例如，在其指定剂量水平下未经历BMS-986458相关 ≥ 3级毒性）。在B部分中，不允许剂量递增超过MTD。

7.4.4 剂量限制性毒性的定义。毒性严重程度将根据NCI CTCAE 5.0版进行分级，除TLS和TFR之外，所述TLS和TFR将分别根据Cairo-Bishop TLS分级系统²⁶和NCI CTCAE 3.0版进行分级。

DLT评估时间段被定义为第1周期第1天至第1周期第28天，包括用于第2周期第1天规定的给药前分配。任何以下事件将被视为DLT，除非研究者可将所述事件归因于明确可鉴定的原因，诸如基础疾患或疾病进展、其他并发疾患或伴随药物。

剂量限制性毒性描述如下：

•血液学毒性如下：

o任何持续时间的发热性嗜中性粒细胞减少症

o持续 > 7天的4级嗜中性粒细胞减少症

o持续 > 24小时的4级血小板减少症或 ≥ 3级血小板减少症伴临床上显著的出血

o持续 > 24小时的4级贫血

•任何 ≥ 3级的非血液学毒性，除以下情况之外：

o3级恶心、呕吐、脱水或腹泻，其在72小时内消退（用最佳医学管理）并且不需要饲管、全肠胃外营养或延长住院治疗。

o通过研究干预中断和医学管理控制的3级IRR，其在48小时内消退至 ≤ 1级。

o3级疲劳，其在研究干预中断的7天内消退至 ≤ 2级并且在以相同剂量（采用最佳医学管理）恢复研究干预后在相同水平下未复发。

o3级TLS，如果其没有临床并发症并且在7天内用常规医学管理消退，并且没有终末器官损害。

o3级电解质异常（即，发生的没有临床后果的电解质异常），其在72小时内在用疗法或不用干预的情况下消退至 ≤ 2级水平。

o3级AST或ALT升高，其在72小时内消退至 ≤ 2级并且不符合海氏法则（Hy´slaw）的标准。

o3级痤疮样、脓疱型或斑丘疹型皮疹，其在研究干预中断的7天内消退至 ≤ 2级（用最佳医学管理）。对于症状控制，允许局部类固醇治疗。

•任何确认的海氏法则病例。注：海氏法则病例是这样的病例，其中肝转氨酶水平≥ 3 × ULN伴随总胆红素升高至 > 2 × ULN，但是没有胆汁淤积（例如，升高的血清ALP）的初始发现结果，无法找到其他原因来解释增加的转氨酶和总胆红素的组合。

•任何AE，除非明确确定与一个或多个研究干预不相关，并且需要第1周期期间的剂量水平减少。

•第1周期期间的任何死亡。

•无相关临床体征或症状和/或ECG变化（例如，低镁血症、高镁血症、低白蛋白血症、低磷血症、淋巴细胞计数增加或减少）的孤立实验室变化可能不包括在此定义中。将由SRC讨论并审查这些发现结果。

在做出最终剂量水平决定时，将考虑在DLT时间段之外发生的任何毒性。

关于DLT或其他AE，针对BMS-986458和利妥昔单抗采取的措施，参见剂量调整指南（参见表7.4.1-1和表7.4.1-2）。

7.4.5 可评价DLT的参与者的定义。接受至少1个剂量的BMS-986458的所有参与者将可评价安全性。在剂量递增期间在任何参与者队列中施用第一剂量后，将观察每个队列中的参与者持续28天（DLT评估时间段），然后可以开始下一个更高的、方案指定的剂量时间表队列。

•可评价DLT的参与者被定义为这样的参与者，其接受总计划第1周期剂量强度的一种或多种IMP的至少75%并且在DLT评估时间段期间未经历DLT。

或

•在接受至少一个剂量或其一部分的一种或多种IMP后在DLT评估时间段期间经历DLT的参与者。

不可评价DLT的参与者可能会被替代。任何耐受剂量队列中的另外参与者可以由研究者决定并且在与申办者医学监查员达成协议后入组。

7.4.6 MTD、一个或多个OBD和一个或多个RP2D的确定。MTD被定义为这样的剂量水平，其给予可以使得估计的DLT概率最接近大约30%。MTD的初步估计将基于对第1阶段和第2阶段中所有治疗的可评价安全性的参与者在各剂量下的DLT发生率的估计，并且将基于TITE-BOIN12（第2阶段）算法来估计OBD。MTD和OBD的最终确定将由SRC决定。

基于来自A部分中治疗的参与者的累积安全性、PK/药效学（如可用）和功效数据，可以选择1个或多个剂量水平用于B部分中的进一步评价。将在审查来自研究的A部分和B部分的数据后由SRC推荐一个或多个RP2D。

7.5 制备/处理/储存/核查登记（accountability）。根据当地法规，IP/IMP/非IMP/AxMP必须储存在安全区域。研究者或允许的指定人员的责任是确保IP/IMP/非IMP/AxMP仅分配给研究参与者。根据当地法规，IP/IMP/非IMP/AxMP必须仅由授权人员从官方研究中心分配。

产品储存管理者应确保根据如申办者确定的环境条件（温度、光照和湿度）储存研究干预。如果出现关于研究干预的质量或外观的问题，则不应分配研究干预，并且应立即联系申办者。

未由申办者供应的研究干预将根据药品说明书储存。

IP/IMP/非IMP/AxMP书面文件（无论是否由申办者供应）必须维持，并且必须包括确保药物准确施用所需的所有过程。这包括药物储存、施用以及（如适用）储存温度、重构和所需方法（例如，所需的稀释剂、施用装置）的使用的书面文件。

•研究者或指定人员必须确认，在运输期间所接受的所有研究干预均维持适当的温度条件，并且在使用研究干预前报告并解决了任何差异。

•只有入组研究的参与者可以接受研究干预，并且只有授权的研究中心工作人员可以供应、制备或施用研究干预。

•根据标记的储存条件，所有研究干预必须储存在安全、环境控制和监测（手动或自动）的区域，其仅限于研究者和授权的研究中心工作人员接触。

•研究者、机构、医疗机构负责人（如适用）或授权的研究中心工作人员负责研究干预核查登记、核对和记录维护（即，记录的接收、核对和最终处置）。

•未使用的研究干预的最终处置的进一步指导和信息提供于药学手册中。

对于不是由申办者提供而是由研究中心可商购获得的研究干预，应根据产品标签进行储存。

7.6 研究干预依从性。将要求参与者在给药日记中记录他们在家的每日BMS-986458自我施用。将通过药物核查登记（审查给药日记）定期监测研究干预依从性。在每次访视时应由研究中心工作人员审查药物可衡算性，以确认治疗依从性。研究中心工作人员应在每次治疗中研究访视时与参与者讨论差异。在研究中心访视期间，将通过直接询问和计数反回的片剂来评估依从性，并且将其记录在源文件和相关表格中。与处方给药方案的一个或多个偏离应记录在eCRF中。

将在eCRF中记录研究干预的开始和停止日期，包括干预延迟和/或剂量减少的日期。必须保持分配给每名参与者并且由每名参与者服用的BMS-986458片剂的数量的记录，并且将其与研究干预和依从性记录进行核对。

7.7 伴随疗法

7.7.1 禁止和/或限制的治疗。所述研究中研究干预施用前服用的禁止的和/或限制的药物如下所述：

•先前暴露于BMS-986458

•在研究干预开始4周内以及在研究期间暴露于任何试验用药物或安慰剂

•研究期间除研究干预之外的抗癌疗法（化学疗法、生物或试验用疗法、和手术）。在与申办者医学监查员讨论后，由研究者决定在研究治疗期间可以允许用于治疗癌症治疗相关的症状的局灶性姑息放射疗法。医学监查员将有机会关于放射疗法前的药物洗脱向研究中心研究者提供建议，并且基于可能的放射毒性允许是否恢复治疗。在具有乳腺癌或前列腺癌病史的受试者中允许维持性激素治疗。

•补充药物（例如，草药补充剂或传统中药）应谨慎使用。不允许使用圣约翰草（St.John's woli），参见以下禁止的CYP3A诱导剂和抑制剂的列表。

•在研究期间且直到研究干预的最后剂量后28天，任何活/减毒疫苗（例如，水痘疫苗；带状疱疹疫苗；黄热病疫苗；轮状病毒疫苗；口服脊髓灰质炎疫苗以及麻疹、腮腺炎、风疹 [MMR] 疫苗）。

o允许杀毒疫苗或灭活疫苗或组分疫苗，诸如可注射年度流感疫苗。

o在研究期间（包括治疗期间）以及在研究干预的最后剂量之后28天随访时间段内，不应向参与者施用活COVID-19疫苗。此外，在研究干预开启前长达28天内，禁止施用活COVID-19疫苗。

•研究期间的其他试验用疗法，除了被允许并且应与医学监查员讨论的用于治疗活动性SARS-CoV-2感染或高风险暴露的疗法。不允许施用试验用SARS-CoV-2疫苗。

•强CYP3A4抑制剂和诱导剂、敏感CYP3A底物或具有窄治疗窗口的CYP3A底物。

强CYP3A抑制剂、诱导剂和底物的例子包括（但不限于）：

o阿扎那韦、塞维利亚橙

o阿芬太尼、阿伐地尔、丁螺环酮、考尼伐坦、达非那新、达芦那韦（darnnavir）、依巴斯汀、依维莫司、依布替尼（ibrntinib）、洛美他派（lornitapide）、洛伐他汀、咪达唑仑、纳洛昔醇（naloxegol）、尼索地平、沙奎那韦、辛伐他汀、西罗莫司、他克莫司、替拉那韦、三唑仑、伐地那非、布地奈德、达沙替尼、决奈达隆、依来曲普坦（eletriptan）、依普利酮、非洛地平、茚地那韦、鲁拉西酮、马拉韦罗、喹硫平、西地那非、替格瑞洛、托伐普坦

•体外溶解度数据表明BMS-986458的溶解度随着pH的增加而降低。禁止伴随使用质子泵抑制剂和H2拮抗剂，直到可获得进一步数据。如果在进行研究时，它变成医学上有必要（例如，消化性溃疡病、胃食管反流病、糜烂性食管炎），它们可在与医学监查员讨论后谨慎给予。可以服用短效抗酸剂，诸如Maalox®或TUMS®，但是推荐不要在BMS-986458给药前2小时或给药后2小时服用这些。

•参与者应从研究干预开始前5天直到最终剂量的BMS-968458后24小时食用塞维利亚橙、葡萄柚或葡萄柚汁、柚子、外来柑橘类水果、葡萄柚杂交品或果汁。

在研究干预施用前4周内和在研究干预的最后剂量后长达28天服用的药物必须记录在eCRF上。

7.7.2 允许的疗法。允许参与者在接受研究干预时使用以下治疗：

•由研究者决定，用于治疗目的的粒细胞集落刺激因子（G-CSF）或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）

•肠胃外流感疫苗接种

•由研究者决定，任何抗生素、抗病毒、抗肺孢子虫、抗真菌或其他预防措施

•预防和治疗IRR的药物，包括抗组胺药、解热药、皮质类固醇、支气管扩张剂和其他药物（根据医学指征）

•预防和治疗TLS的药物，包括降尿酸剂（例如，别嘌呤醇、拉布立酶）、利尿剂以及磷酸结合剂和钾结合剂。拉布立酶在具有基线G6PD缺乏的参与者中是禁忌的（对于关于拉布立酶的进一步的信息，参考药品说明书或SmPC）

•由研究者决定授权或批准的非活SARS-CoV-2疫苗

•允许治疗活动性SARS-CoV-2感染或高风险暴露，包括使用试验用疗法并考虑DDI的风险（例如，帕罗韦德），并且应与医学监查员讨论。

•由研究者决定允许使用抗凝或抗血小板药剂的预防性措施。推荐研究者仔细评估个体参与者的血栓栓塞和出血的潜在风险。

•允许使用任何补充药物，诸如维生素和矿物质补充剂。

受制于章节7.7.1中所述的注意事项，应使用任何被认为参与者的护理所必需的伴随药物或疗法的使用。如果对疑似影响药物吸收或代谢的伴随药物进行改变，则可以进行重复的PK评价。

7.7.3 其他限制和注意事项。尚未完全评估研究干预诱导光敏性的能力。必须向接受研究干预的参与者提供咨询，以最少暴露于紫外光，当外出在阳光下时穿戴防护服和太阳镜，并且在它们暴露的皮肤上使用防晒系数为至少25的广谱紫外线(UV)A/UVB防晒剂，直到永久中止研究干预后至少2天。

如果使用已知延长QT间期的抗心律失常药物和/或已知延长QT间期的其他药物是必需的，则在与研究干预伴随使用其前，应与申办者的医学监查员讨论风险和益处。

7.7.3.1 成像限制和注意事项。当地成像机构负责基于参与者属性（例如，过敏史、糖尿病史、肾脏状态）来确定每个成像研究的适当成像方式和造影方案。此评估中应考虑成像禁忌证和造影风险。将评估患有肾功能不全的参与者是否应接受造影剂，并且如果应接受，哪种造影剂和剂量是适当的。具体针对磁共振成像（MRI），患有重度肾功能不全（即，估计肾小球滤过率 [eGFR] < 30 mL/min/1.73 m2）的参与者处于增加的肾源性系统性纤维化的风险中；因此，MRI造影剂是禁忌的。此外，如果参与者有纹身、金属植入物、起搏器等，则它们可能会被排除于MRI。这些限制将在成像手册中概述。

IV造影剂之前和之后的温和水合作用应遵循当地标准护理。对入组此研究的个体参与者进行MRI的最终决定取决于研究中心放射科医生、研究者和由当地伦理委员会制定的标准。

7.8 在研究结束后继续获得研究干预。在研究结束时，如果研究干预在当地国家不可用作批准的治疗，则继续展现出临床益处的参与者将有资格接受申办者供应的研究干预持续如章节7.1中规定的最长治疗持续时间。如果研究干预不可用作批准且可用的治疗，则将经由研究的延长、要求由主管卫生机构和伦理委员会批准的滚动研究、或通过由申办者决定的另一种机制来提供研究干预。

如果出现任何以下情况，申办者保留终止获得申办者供应的研究干预的权利：a)因安全性问题而使研究终止；b) 出于其他原因（包括但不限于缺乏功效和/或未达到研究目标）而使BMS-986458的开发终止；或c) 参与者可以从政府申办或其他健康项目获得药物。在所有情况下，申办者将遵循当地法规。

8 中止标准。详述了在特定研究中心的研究或整个研究的中止。

8.1 研究干预的中止。出于任何以下原因，参与者必须中止IP/IMP（以及由研究者决定的非IMP/AxMP）：

•参与者要求停止研究干预。要求中止研究干预的参与者将保留在研究中，并且应继续关于方案规定的随访程序进行随访。对此唯一的例外是当参与者明确撤回与他/她或参与者先前授权提供此信息的人进行任何进一步联系的同意。

•研究者认为表明继续参与研究不符合参与者的最佳利益的任何临床AE、实验室测试结果异常、或间发疾患。

•申办者终止研究。

•因被囚禁或出于治疗精神或身体疾患（例如，感染性疾病）被非自愿监禁而丧失自由提供同意的能力。（注释：在特定情况下并且仅在当地法规允许的国家，被囚禁的参与者可以被允许继续作为参与者。严格的条件适用，并且需要申办者批准。）

•如章节7.4.1中所述，导致给药延迟持续 > 4周的任何事件。

o在极少数情况下，参与者在中断长于4周后，可能会从恢复BMS-986458中受益。关于在 > 4周中断后是否恢复给药的所有决定必须与医学监查员讨论。

•基于研究者的判断，临床上显著的疾病进展的证据。

•妊娠（参考章节9.2.5）。

•显著不符合方案（例如，程序、评估、药物等）。研究者应与医学监查员讨论此类问题。

对于治疗中止和随访时收集的数据以及可以完成的任何进一步评价，参考章节2：活动时间表。

中止研究干预的所有参与者应遵守如章节2：活动时间表中概述的方案规定的随访程序。对此要求的唯一例外是当参与者撤回对所有研究程序（包括治疗后研究随访）的同意，或失去自由同意的能力（例如，被囚禁或出于治疗精神或身体疾患而被非自愿监禁）。

如果在参与者完成研究前中止研究干预，则必须根据每个地区/国家的当地监管要求将中止的原因记录在参与者的医疗记录中，并且在相应的eCRF页面上输入。

8.1.1 研究干预后研究随访。中止研究干预的参与者可以继续被随访。BMS可以要求在方案定义的窗口之外收集关于所有治疗的参与者的生存数据。在此请求时，将联系每名参与者以确定其生存状态，除非参与者已经撤回对所有联系的同意或失访。

8.2 中止研究

•参与者应通知研究者从未来的随访中撤回同意的决定。

•应由研究者在医疗记录中详细解释撤回同意以说明仅退出用研究干预的进一步治疗还是退出研究程序和/或治疗后研究随访，并且在适当的eCRF页面上输入。

•如果正在测量生命状态（无论参与者是活着还是死亡），应仅如根据当地法律的适当指引使用公开可用的信息来确定生命状态。

•如果参与者撤回披露未来信息的同意，则申办者可以保留并且继续使用在此撤回同意前收集的任何数据。

8.2.1 个体中止标准

•参与者可以根据他/她自己的要求在任何时间完全退出研究，也可以出于安全性、行为、依从性或管理原因由研究者决定在任何时间退出。预期这并不常见。停止研究干预不被视为退出研究。

•在中止研究时，如果可能，应进行提前终止访视，如章节2：活动时间表所示。对于研究中止和随访时收集的数据以及需要完成的任何进一步评价，参见活动时间表。

•在那时，参与者将永久中止研究干预和研究两者。

8.3 失访。如果参与者未能返回诊所进行所需的研究访视，则必须采取以下措施：

•必须做出所有合理努力来定位参与者，以确定并报告他们的持续状态。这包括对参与者授权的人进行随访。

•失访被定义为在最少3次记录的电话、传真或电子邮件后无法联系到参与者，以及参与者对1封挂号邮寄信缺乏答复。所有尝试都应记录在参与者的医疗记录中。

•如果研究者使用第三方代表以在研究的随访部分中进行协助已被包含在参与者的知情同意中，则研究者可以使用申办者保留的第三方代表来协助研究中心工作人员获得完成研究的随访部分所需的参与者联系信息或其他公共生命状态数据，诸如公共卫生登记库和数据库。

•研究中心工作人员和代表将咨询公开可用的来源，诸如公共卫生登记库和数据库，以获得更新的联系信息。

•如果在所有尝试后参与者仍然失访，则应报告如由研究者确定的最后已知存活日期并且记录在参与者的医疗记录中。

•如果确定参与者已经死亡，则研究中心将使用当地允许的方法获得死亡日期和原因。

9 研究评估和程序

•研究程序和时间设定汇总于章节2：活动时间表中。

•不允许方案豁免或免除。

•在发生或意识到所有直接安全性问题时必须立即与申办者讨论，以确定参与者是否应继续治疗还是中止治疗。

•坚持遵守研究设计要求（包括活动时间表中规定的要求）对于研究实施至关重要并且是研究实施所必需的。

•在入组前，必须完成并审查所有筛选评价，以确认潜在参与者符合所有资格标准。研究者将保持筛选日志，以记录所筛选的所有参与者的详细信息，并且确认资格或记录筛选失败的原因（如适用）。

•出于筛选或基线目的，可以利用作为参与者的常规临床管理的一部分进行的程序（例如，全血细胞计数）以及在签署知情同意书前获得的程序，条件是所述程序符合方案定义的标准并且已经在活动时间表中定义的时间框架内进行。

•在研究持续时间内从每名参与者收集的最大血液量（包括可能需要的任何额外评估）将不超过920 mL。

•出于安全性原因或样品的技术问题，可能会采集重复或未安排的样品。根据临床指征或遵守当地法规，进行另外的测量，包括非研究要求的实验室测试。

•此章节中提及的一些评估可能不会作为数据采集在eCRF中。它们旨在由治疗医师用作安全性监测。根据临床需要或者在机构或当地法规要求的情况下，可以进行另外的测试或评估。

9.1 功效评估

9.1.1 研究的功效评估。将由研究者确定BMS-986458的抗肿瘤活性的评估。将使用恶性淋巴瘤国际工作组标准²⁰和氟脱氧葡萄糖-正电子发射断层成像（FDG-PET）扫描解释的多维尔标准（Deauville Criteria for fluorodeoxyglucose-positron emissiontomography (FDG-PET) scan interpretation）^29,30进行功效评估（“卢加诺标准”）。

功效评估包括以下：

•临床发现结果（例如，体格检查、全身症状）

•在适当的情况下造影剂增强计算机断层成像（CT）扫描和FDG-PET或FDG-PET-CT

•在适当的情况下骨髓检查（骨髓活检 [BMB] 和骨髓抽吸 [BMA]）

•在适当的情况下磁共振成像（MRI）

筛选肿瘤评估将包括以下：

•胸部、腹部和骨盆的CT：用造影剂CT扫描是推荐的成像方式。腹部和骨盆的造影剂增强MRI也是允许的。在第1周期第1天前长达56天内进行的标准护理CT扫描或MRI用于筛选可以是可接受的，即使是在签署ICF前进行的。

•除患有已知FDG-PET阴性肿瘤的那些之外，将对所有参与者进行基线FDG-PET或FDG-PET/CT扫描。

•仅对具有已知/疑似骨髓受累的参与者进行骨髓抽吸和活检。

•仅对具有疑似大脑受累的参与者（如果有临床指征）进行脑/脊柱扫描（造影剂增强MRI是优选的，而如果MRI是禁忌的，则可以进行CT）。

将如下进行治疗中肿瘤评估：

•使用与筛选时相同的扫描方式，将如活动时间表（章节2）中所注明的那样进行放射学评估，直到研究者评估的进展、撤回同意、死亡、或最长研究持续时间。如果先前扫描是在28天内，则不需要获得EOT扫描。如果出于除疾病进展之外的其他原因而中止研究干预，应从最后剂量起每26周继续进行成像持续长达52周或直到疾病进展、死亡、开始新的抗癌疗法、失访、从研究撤回同意、或研究结束，以先发生者为准。

•对于筛选时骨髓受累的参与者，将进行用流式免疫表型分型的骨髓评价，以确认完全反应（CR）。出于除疾病进展或复发、开始新的抗癌疗法或从整个研究中撤回同意之外的原因而中止治疗的所有参与者将每6个月（± 14天）进行随访直到进展、开始包括SCT在内的新的全身性抗癌疗法、或退出，持续到治疗结束后长达1年。在进展后，根据方案不再需要CT扫描；然而，可以根据当地临床实践继续进行评估。

•将通过基于研究者的修订的恶性淋巴瘤反应标准确定每次筛选后评估时的肿瘤反应。治疗决定将基于研究者的评估。²⁰

将在疾病进展之后大约每12周确定生存状态，持续长达1年。将在疾病进展后收集包括全身性治疗、细胞疗法、SCT、手术和放射在内的抗癌疗法。

9.1.2 研究的成像评估。用于肿瘤评估的图像将提交给中心成像供应商以收集在研究中心储库中，并且可以在研究期间和/或之后的任何时间经历盲法独立中心审查（BICR）。在扫描第一名参与者前，研究中心应是合格的并且了解如由中心成像供应商提供的成像手册中概述的图像采集指南和提交过程。必须收集用于通过卢加诺标准²⁰进行反应评估的可展现出肿瘤反应或进展的任何另外成像（包括在未安排的时间点和/或在外部机构进行的扫描），并且将其提交给中心成像供应商。关于进一步细节，参考章节2。如果适用，可以向成像供应商提供临床数据。

应使用5 mm或更小的切片厚度并且在无中间间隙（连续）的情况下采集图像。对于所有成像时间点，应尽一切努力在同一扫描仪上使用相同的采集方案对每名参与者进行成像。在任何可能的情况下，对于每次评估，应由同一研究者或放射科医师进行肿瘤测量。

在存在造影剂或MRI的禁忌证（例如，不相容的起搏器）的情况下，强烈推荐使用以下指南：

•如果参与者具有针对CT静脉内造影剂的禁忌证，则应获得胸部的无造影剂CT以及腹部、骨盆和其他已知/疑似疾病部位的造影剂增强MRI。

•如果参与者具有MRI和CT静脉内造影剂两者的禁忌证，则应获得胸部的无造影剂CT以及腹部、骨盆和其他已知/疑似疾病部位的无造影剂MRI。

•如果参与者除了CT静脉内造影剂的禁忌证之外还有针对MRI的禁忌证，则胸部、腹部、骨盆和其他已知/疑似疾病部位的无造影剂CT是可接受的。

组合PET-CT的低剂量或衰减校正CT部分在功效评估中的使用有限，并且因此建议它们不应替代专用诊断性增强剂增强CT扫描用于卢加诺测量。然而，如果研究中心能够有记录表明作为PET-CT的一部分进行的CT与诊断性CT（具有IV和口服造影剂）具有相同的诊断质量，则可以使用PET-CT的CT部分进行卢加诺测量。

9.2 不良事件。AE或SAE的定义可见于附录3。

将由参与者（或适当时由照护者或代理人）报告AE。

研究者和任何合格的指定人员负责检测、记录和报告符合AE或SAE的定义的事件，并且继续负责随访严重的、被认为与研究干预或研究相关的、或导致参与者在完成研究前中止研究的AE。关于SAE报告，参考附录3。

将使用CTCAE v5.0定义和分级进行eCRF上所有AE和SAE的安全性报告，除燃瘤反应（NCI CTCAE v3.0）和肿瘤溶解综合征之外。²⁶

9.2.1 收集AE和SAE信息的时间段和频率。必须从签署知情同意表格起（包括被认为与方案规定的程序相关的那些）收集所有AE和SAE，并且直到中止给药或如活动时间表（章节2）中注明的最后的安排的访视之后28天。

研究者必须报告在这些时间段后发生的并且被认为与研究干预或方案规定的程序（例如，随访皮肤活检）相关的任何SAE。

•所有SAE将被记录并且及时且在得知事件后不超过24小时报告给申办者或指定人员，如附录3所指示的。

•研究者将在可获得更新信息的24小时内向申办者或指定人员提交任何更新的SAE数据。

研究者没有义务主动寻找前的研究参与者的AE或SAE。然而，如果研究者在参与者退出研究后的任何时间获悉任何SAE（包括死亡）并且他/她认为所述事件与研究干预或研究参与合理相关，则研究者必须及时通知申办者。

评价和评估AE和SAE的因果关系的方法以及完成并报告/传送SAE报告的程序提供于附录3中。

9.2.2 检测AE和SAE的方法。AE可以自发报告或在对参与者进行开放式询问、检查或评价期间引发。在收集AE和/或SAE时，注意不应引入偏见。在适于项目或方案时，应在已知AE的情况下通过临床判断进行指导关于特定AE的询问。

9.2.3 AE和SAE的随访

•将对所有SAE进行随访，直到消退、直到病情稳定、直到事件以其他方式得到解释或直到参与者失访（如章节8.3：失访中所定义的）。

•非严重AE应随访至消退或稳定，或如果变得严重，则报告为SAE（参见附录3）。

•对于导致研究干预中断或中止的非严重AE以及在研究干预结束时出现的那些，也需要进行随访（视情况而定）。

•所有鉴定的非严重AE必须在CRF的非严重AE页（纸质或电子版）上记录并描述。对于在研究期间报告/鉴定的AE和/或实验室测试结果异常，可能需要完成补充CRF。

关于随访程序的进一步的信息在附录3中给出。

9.2.5 妊娠。如果在研究干预开始之后发现参与者在研究干预暴露时（包括研究干预施用后至少28天）妊娠或可能已经妊娠，则研究者必须立即将此事件通知申办者医学监查员/指定人员，并且在得知事件的24小时内完成妊娠监测表格并转发给申办者指定人员。根据附录3中所述的报告程序，妊娠报告必须遵循与针对SAE所用的那些相同的向BMS报告的传输时间设定和过程。

在所有情况下，将以适当的方式（例如，如果是参与者的安全性所必需的，则是剂量逐渐减量）中止研究干预。

关于妊娠过程的随访信息（包括围产期和新生儿结局以及（如适用）后代信息）必须在妊娠监测表格上报告。必须进行用于研究中止和随访的方案要求的程序。

在研究干预暴露（包括研究干预施用后至少28天）时在男性参与者的女性伴侣发生的任何妊娠应向申办者或指定人员报告。对于申办者或指定人员从女性伴侣收集任何妊娠监测信息，女性伴侣必须签署披露此信息的ICF。将收集关于此妊娠的信息并且将其记录在妊娠监测表格上。

根据附录3中所述的报告程序，任何妊娠个体（例如，照护者、药剂师、研究协调员、监查员）暴露于BMS-986458必须遵循与用于SAE的那些相同的向BMS报告的传输时间设定和过程。

如果在研究干预施用期间和在施用后至少28天内男性参与者与一名或多名妊娠伴侣之间在不使用避孕套的情况下发生了涉及阴茎性交（例如，阴道、肛门、口交）的任何性活动，则应向申办者或指定人员报告所述信息，即使男性参与者已经经历了成功的输精管结扎术。

9.2.6 实验室测试结果异常。以下实验室测试结果异常应采集在不良事件 - 非严重事件和严重事件eCRF（Adverse Events - Non-serious and Serious Events eCRF）页面上。纸质表格仅旨在当电子系统不起作用时作为备用选项。

•临床上显著的或符合SAE的定义的任何实验室测试结果

•需要参与者中止或中断研究干预的任何实验室测试结果异常

•需要参与者接受特定矫正疗法的任何实验室测试结果异常

预期在任何可能的情况下，报告研究者将使用临床术语而不是实验室术语（例如，贫血而不是低血红蛋白值）。

9.2.7 潜在的药物诱导的肝损伤。尚未鉴定此方案的用于鉴定潜在的药物诱导的肝损伤（DILI）的具体标准。应遵循鉴定和监测肝问题的标准医学实践。

9.2.8 其他安全性考虑。在中期或最终体格检查、ECG、放射影像学成像、或方案要求或不要求的任何其他潜在安全性评估期间注意到的病症的任何显著恶化也应记录为非严重AE或SAE（如适用），并且相应地进行报告。

9.3 过量给药。过量给药被定义为意外或故意施用任何剂量的产品，所述剂量既被认为是过量的也被认为是医学上重要的。符合SAE的监管定义的过量给药将报告为SAE（参见附录3）。

如果发生过量给药，则研究者/治疗医师应当：

•立即联系医学监查员。

•密切监测参与者的AE/SAE和实验室测试结果异常，

•在eCRF中记录过量剂量的量以及过量给药的持续时间。

9.4 安全性。所有安全性评估的计划时间点列于章节2：活动时间表中。从第6周期后开始，在不存在与研究干预相关的任何 ≥ 2级毒性的情况下，由研究者决定可以以较低频率的时间表进行在第1天的临床访视和评估。

9.4.1 体格检查和ECOG体能状态。将进行体格检查，包括身高（仅筛选和EoT）、体重、BMI和BSA（当适用时）以及ECOG体能状态。如果筛选PE在第1天给药前24小时内进行，则单个检查可计作筛选和给药前评价两者。PE期间的任何发现结果都将作为病史记录在参与者的医疗记录中和适当的eCRF上。

9.4.2 生命体征。生命体征包括体温、血压、心率、和脉搏血氧饱和度监测。应在参与者安静休息至少5分钟后测量血压和心率。根据研究者的评估，应根据临床指征获得另外的生命体征。记录的测量结果将采集在参与者的医疗记录中和适当的eCRF上。

9.4.3 心电图。分别对于A部分和B部分，一式三份地重复ECG收集时间点。在参与者已经处于仰卧或半卧位至少10分钟后，将进行12导联ECG（在25 mm/sec下的12导联，报告心律、心率/心室率、PR间期、QRS波群、QT间期和使用Fridericia公式校正的QT间期[QTcF]）。应在每个时间点使用申办者提供的机器收集一式三份12导联ECG（以2 ± 1分钟间隔收集3次记录），并且将其送至中心ECG实验室以进行第三方评价。在每次访视结束时，将一式三份ECG输出上传至中心ECG实验室，以进行确定性分析和解释。研究者将基于其对安全性ECG结果的解释立即做出临床决定。

在治疗时间段期间，将在时间匹配的PK样品前大约15分钟内收集特定的一式三份ECG。

此后，如果在第4周期后有临床指征，将进行单次ECG。如果是在第4周期后，则EOT访视仅需要一次ECG。在第5周期开始的ECG将是单次ECG，并且将不会被送至中心ECG实验室。这些ECG的临床上显著的变化将记录在eCRF的AE章节中。

9.4.4 ECHO或MUGA扫描。将在筛选和EOT时通过多门控采集扫描或超声心动图确定LVEF。应根据临床指征进行随访评估。随访评估应使用与筛选评估时使用的相同程序。临床上显著的降低被定义为相对于基线LVEF的 ≥ 20%绝对降低或降至低于45%。

9.4.5 临床安全性实验室评估。研究者必须记录他们对每份实验室安全性报告的审查。临床安全性实验室测试将在当地实验室进行，当地实验室将为这些测试提供参考范围。在筛选期间以及在给药访视时进行的安全性临床实验室测试的结果必须是可用的，并且在给药前进行审查。

表B4-9.4.5-1：临床实验室评估

缩写：ALT（SGPT）丙氨酸转氨酶（血清谷氨酸丙酮酸转氨酶）；aPTT，活化部分凝血活酶时间；AST（SGOT）、天冬氨酸转氨酶（血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶）；BUN，血尿素氮；CBC，全血细胞计数；HIV，人类免疫缺陷病毒；Ig，免疫球蛋白；INR，国际标准化比值；LDH，乳酸脱氢酶；PT，凝血酶原时间；WOCBP，有生育潜力的女性。

9.4.6 其他安全性评估。与方案目标不直接相关的潜在临床相关性的任何偶然性发现结果应由研究的研究者根据标准医学/临床判断进行评价和处理。

9.4.7 妊娠试验。具有生育潜力的女性（WOCBP）被定义为性成熟女性，其具有：

•未经历子宫切除术或双侧卵巢切除术或双侧输卵管切除术。

•未达到自然绝经后（抗癌疗法之后闭经不排除生育潜力）至少连续12个月（例如，在之前连续12个月中的任何时间具有过月经）。

研究者将根据此定义将女性参与者归类为WOCBP。WNOCBP参与者不需要妊娠试验，但是必须在eCRF和源文件中记录理由。对于WOCBP，必须进行最低灵敏度为25 mIU/mL的医学监督妊娠试验。妊娠试验将由当地实验室进行。

•对于WOCBP，将在以下列出的访视时进行妊娠试验，并且详述在PPP中。在筛选时（第1周期第1天前10至14天内）要获得血清妊娠试验，并且必须在研究治疗的第1周期第1天前24小时内进行另一次妊娠试验（血清或尿液）。参与者不得接受BMS-986458，直到研究者验证2次筛选妊娠试验为阴性。

•应在每个后续周期的第1天前24小时内以及在治疗结束（EOT）访视时进行血清或尿液妊娠试验。参与者不得接受BMS-986458，直到研究者验证妊娠试验为阴性。

•具有规律月经周期或无月经周期的WOCBP必须同意在参与研究的前28天内每周进行妊娠试验，并且然后在服用BMS-986458时每28天进行妊娠试验、在研究中止时进行妊娠试验、以及在最后剂量的BMS-986458后至少28天内每月进行妊娠试验。

•具有不规律月经周期的WOCBP必须同意在研究参与的前28天内每周进行妊娠试验，并且然后在服用BMS-986458时每14天进行妊娠试验、在研究中止时进行妊娠试验、在最后剂量的BMS-986458后至少28天内每14天进行妊娠试验。

•WOCBP或其伴侣为WOCBP的男性参与者必须在最后剂量的BMS-986458后至少28天内避免可能导致妊娠的活动。

妊娠试验结果将记录在源文件和eCRF中。

9.5 药代动力学。在如数据允许的情况下，BMS-986458及其非对映异构体的药代动力学将从单一疗法和组合期间的血浆浓度与时间数据得出，如下所示。

如果数据允许，待评估的PK参数（如适用）包括但不限于以下：

将通过经验证的PK分析程序通过非房室方法得出单独参与者PK参数值。将使用实际时间进行分析。

此研究的PK数据可以与来自其他研究的PK数据组合，以使用群体PK分析表征PK。将单独报告此分析的结果（关于另外的细节，参见章节10.4：统计学分析）。

9.5.1 药代动力学取样说明和收集窗口。将在选定的访视时从所有参与者收集血液样品。

预期将尽一切努力在PK取样时间表中指示的时间收集PK样品。应始终准确记录确切的取样日期和时间。以下提供PK样品收集的说明：

•将在口服剂量前几分钟内采集给药前样品。所有治疗中时间点均旨在与施用研究干预的日期一致。如果已知剂量将被延迟，则应就在延迟剂量前收集给药前样品。但是，如果收集了给药前样品但是剂量被延迟，则不应收集另外的给药前样品。

9.5.2 药代动力学样品分析。使用经验证的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）方法将使用血浆来确定BMS-986458非对映异构体（BMT-648592和BMT-648599）的浓度。血浆BMS-986458浓度将源自BMT-648592和BMT-648599浓度。可以使用探索性LC-MS/MS方法（如适用），利用为PK评价而收集的血液样品，进行血浆中BMS-986458代谢物的探索性分析。

治疗分配将发布给生物分析实验室，以使PK研究样品的不必要分析和/或再分析最少。

如果需要，来自相同收集时间点的指定用于评估（例如，PK、生物标志物）的生物分析样品可以互换地用于分析。

另外，残余生物分析样品将被存档持续研究结束后长达20年或适用法律允许的最长时间段，并可用于潜在的探索性生物分析（包括但不限于代谢物分析等）和/或用于另外的方法目的（包括但不限于交叉验证、PK选择性、临界点等）。

9.7 生物标志物

9.7.1 种系遗传学。除非当地法律/法规禁止或如果未被IRB/IEC批准，否则将从所有参与者收集血液样品用于DNA分离。在这些情况下，可以向参与者说明DNA收集为任选收集。关于生物标志物取样时间表，参考章节2中的表2-5：活动时间表。

这些样品的收集和运输信息在实验室/程序手册中。申办者将DNA样品储存在安全的储存空间中，具有充分的措施以保护机密性。除非当地法律/法规或IRB/IEC禁止，否则样品可以保留超过研究结束后长达20年，以了解反应的遗传机制和/或研究中的疾病/病症和相关病症。

9.7.3 肿瘤活检。对于A部分和B部分中的所有参与者，肿瘤活检都是强制性的，除非当肿瘤不可及（或在可能使参与者处于风险的位置）时，研究者将与医学监查员讨论省略治疗中活检的可能性。

在以下时间点通过肿瘤切除或芯针（推荐4次穿刺）收集活检：

•筛选活检

o仅在已经通过所有其他标准确定资格后进行：

•在不早于中止先前抗癌疗法后2周从一个或多个部位切除或进行芯针新鲜活检。

o只有在与申办者医学监查员讨论后，才仍然可以将研究者认为没有可以经皮或通过其他微创技术进行安全活检的疾病部位的参与者入组：

-如果符合以下标准，可以提交诊断存档FFPE（肿瘤块或切片/封片标本）代替筛选新鲜活检：

•如果它是在入组前不超过1年已经获得、在最后一次介入疗法后并且仅在与申办者医学监查员讨论后收集的。

•如果有足够的材料可用于药效学评估。关于详细信息，参考实验室手册。

•治疗中活检

o对于仅B部分中的参与者，在第1周期在第13、14或15天进行一次强制性治疗中肿瘤活检。

o治疗中（任选的）。如果在A部分或B部分中在临床护理期间收集治疗中的活检，则可从治疗中活检中收集任选的样品与配对的血液样品用于研究目的。

•治疗结束活检（任选的）

最佳地，肿瘤组织样品将从相同的肿瘤部位获得。

活检应如实验室手册中详述的进行处理。细针抽吸物不足以作为肿瘤活检材料的来源。解剖病理学报告应与活检材料一起发送。

9.7.4 细针抽吸物（仅A部分）。A部分中的所有参与者都将需要收集FNA样品用于药效学生物标志物研究。将在筛选时（仅如果提交存档样品替代筛选肿瘤活检的话）以及在第1周期第13、14或15天收集此样品。如果在筛选时收集新鲜肿瘤活检，将提交部分样品用于通过流式细胞术代替FNA进行药效学评估。

如果肿瘤不可及（或在将使参与者处于风险中的位置），研究者将与医学监查员讨论省略FNA或用芯针活检（core biopsy）替代治疗中FNA的可能性。

9.8 任选的未来研究。此方案将包括剩余样品储存，用于任选的未来研究。保留用于未来研究的样品将在申办者指定的储存设施中储存。这些样品的管理者将确保它们在其整个使用寿命期间得到正确使用，并且将在安排的储存时间段（不超过研究结束后的20年或适用法律允许的最长时间段）结束时销毁样品。样品将以编码方式储存，并且研究人员都无法获得钥匙。钥匙将由临床研究中心的研究者安全地持有，因此研究人员没有将样品与特定个体相关联的直接能力。

10 统计学考虑

10.1 统计学假设。预期作为单一药剂或与抗淋巴瘤药剂的组合施用的BMS-986458将展现出充分的安全性和耐受性，以及有利的益处/风险概况，以支持进一步的临床测试。没有对前瞻性假设进行正式评价。

10.2 样本量确定。样本量考虑如下：

•对于A1部分中的单一疗法剂量递增，将不进行确定样本量的正式统计功效计算。实际数量取决于观察到的DLT的数量、有效反应的数量、以及确定一个或多个OBD（最佳生物剂量）所需的剂量水平的数量，以基于2阶段I期设计（第1阶段：BOIN，第2阶段：TITE-BOIN12）选择RP2D。我们采用这种2阶段设计来充分评价毒性，还评估早期功效，并且不会在我们的剂量递增/递减期间延迟参与者入组和治疗。如果我们在第一剂量水平下遇到出乎意料的高毒性，我们将递减至剂量水平-1；否则，将考虑剂量水平2至5的剂量递增。第1阶段和第2阶段中可评价毒性和初步功效的参与者的预期数量为每个剂量水平3与16名之间；来自A1部分的第1阶段和第2阶段两者的大约41名参与者（附录8和附录9；图13A和图13B）。BOIN设计仅基于毒性指导第1阶段的递增/递减决定。如果BOIN指导的剂量递增i) 达到并确认可接受毒性内的最高剂量水平或ii) 基于预先指定的毒性范围找到MTD，则第1阶段（BOIN）将进入第2阶段（TITE-BOIN12）。然后将基于TITE-BOIN12设计在章节10.4.2.1中定义的允许剂量中分配第2阶段的另外参与者。将在每个剂量水平下治疗多达16名参与者（与来自第1阶段的参与者一起），以选择第2阶段中的OBD。

•对于A2部分中与利妥昔单抗的组合，将由SRC基于来自A1部分和B1部分的新出现的安全性、PK和药效学数据（如章节5.1.2.1中定义）来确定BMS-986458的起始剂量。将根据每个剂量水平治疗多达16名参与者，具有总共多达32名可评价反应的参与者。基于与A1部分中第1阶段相同的BOIN标准，将从较低组合剂量到较高组合剂量进行剂量递增。

在B1部分和B2部分中，每个适应证将研究2个OBD，以进一步确认单一药剂（A1部分）和组合（A2部分）的选定OBD的耐受性和早期功效。对于单一疗法和组合，每个适应证和剂量水平将入组大约20名可评价反应的参与者的样本量，以在B1部分和B2部分中进一步评价安全性并估计初步功效。在DLBCL中，55%的观察CRR或20名参与者中11名参与者有CRR将具有双侧95%克洛珀-皮尔逊置信区间（CI；31.5%，76.9%），其下限将高于如RE-MIND2研究中报告的CRR 28%³¹。在FL中，85%的观察CRR或20名参与者中17名有CR将具有双侧95%克洛珀-皮尔逊置信区间（CI；62.1%，96.8%），其下限将高于如Bartlett等人 (2022) 中报告的CRR60% ³²。这些扩展队列还将允许在OBD下进一步观察初步功效信号，这将指导RP2D的选择。

对于这些扩展队列和在剂量递增中在相同剂量水平下治疗的参与者，我们将使用贝叶斯连续监测来确定早期停止规则 - 在A1部分和A2部分中在剂量递增研究期间，暂停或中止在可能无法完全观察到的潜在毒性剂量水平下的治疗。来自直到第4周期结束收集的在这些剂量水平下治疗的所有受试者（包括剂量递增队列和剂量扩展队列两者）的安全性信息将包括在连续毒性监测中。对于将符合DLT标准的参与者（除由于不符合DLT标准的AE导致的剂量减少之外），将监测过量毒性率（基于DLT定义）。我们将使用基于后验概率小于60%的超过毒性上限机率的统计标准：后验概率（基于DLT的过量毒性 > 0.3|数据，a，b）>= 0.6作为提前停止规则，其中a和b是针对DLT率假设的β(a,b)先验分布的参数：对于目标毒性率0.30，a = 0.3，b = 0.7（关于其操作特征和连续毒性监测边界，参见附录10）；考虑到在选定的剂量水平下观察到的DLT的数量，将更新先验以得出后验（例如，如果在某个剂量水平下在6名参与者中观察到0例DLT，则更新的后验将为β[0.3, 6.7]）。

10.3 分析集。出于分析目的，定义以下群体：

10.4 统计分析

10.4.1 一般考虑。统计分析计划（SAP）将在数据库锁定前制定并最终确定，并且将描述待纳入分析的参与者的选择以及考虑缺失、未使用和虚假数据的程序。以下是主要终点和次要终点的计划统计分析的汇总。

10.4.2 一个或多个主要终点

表B4-10.4.2-1：主要终点

缩写：AE，不良事件；CTC，通用术语标准；DLT，剂量限制性毒性；PT，首选术语；SAE，严重不良事件。

表B4-10.4.2.-2：主要终点的主要被估量的属性的汇总

缩写：AE，不良事件；DLT，剂量限制性毒性；NHL，非霍奇金淋巴瘤；R/R，复发性/难治性；SAE，严重不良事件

10.4.2.1 剂量递增/递减规则。在A1部分中将采用2阶段剂量递增设计。第一阶段基于贝叶斯最优区间（BOIN）设计^33,34来找到MTD。在第1阶段，实施BOIN设计（参见附录8）。目标毒性率为q > = 0.30。参与者将入组到大小为3的队列并在其中进行治疗。DLT定义在章节7.4.4中，并且将仅使用在第一周期内发生的那些DLT用于剂量发现。

如果BOIN指导的剂量递增i) 达到并确认可接受毒性内的最高剂量水平或ii) 基于预先指定的毒性范围找到MTD，则第1阶段（BOIN）将进入第2阶段（TITE-BOIN12）。在第2阶段，剂量递增/递减将遵循TITE-BOIN12试验设计^35•36，其中目标耐受毒性率（DLT率）为30%，DLBCL和FL的最低基线可接受功效率（ORR）为30%，并且效用得分反映了毒性和功效结局的临床合意度（即，风险-益处权衡）。TITE-BOIN12是BOIN12的延伸，以减轻迟发毒性和功效数据。仅利用TITE特征来基于功效后验分布对少于50%的功效数据进行插补，同时完全（100%）需要毒性数据可用性，这与用于毒性评价的BOIN12相同。当研究从第1阶段（BOIN）进入第2阶段（TITE-BOIN12）时，预期至少50%或更高比例的参与者功效数据将很可能可用，因此研究可以继续进行而不会有太多延迟。然而，如果在第1阶段结束时尚未收集到针对某个剂量水平的至少50%的功效数据，则预期适度暂停研究以在TITE-BOIN12设计下定义用于OBD发现的下一个剂量水平。表10.4.2.1-1示出了归咎于每种可能的功效毒性结局的效用。为了保护参与者免受毒性剂量和/或无效剂量，使用两剂量可接受性标准。如果基于TITE-BOIN12指南，剂量满足以下安全性和功效标准，则所述剂量被认为是可采纳的并且有资格用于治疗参与者。

（安全性）Pr（DLT率 > 0.3 I 数据）< 0.8，（功效）Pr（ORR < 0.30 I 数据）< 0.75

不采纳的剂量将从试验中消除。如果剂量因毒性而被消除，则高于该剂量的所有剂量也将被消除。

表B4-10.4.2.1-1：用于TITE-BOIN12设计的效用得分的效用表

10.4.3 一个或多个次要终点。次要终点的计划的统计分析汇总描述于表10.4.3-1中。

表B4-10.4.3-1：次要终点

缩写：AUC，浓度-时间曲线下面积；Cmax，最大浓度；DOR，反应持续时间；KM，卡普兰-迈耶；ORR，总反应率；OS，总生存期；PFS，无进展生存期；PK，药代动力学；RR，反应率；Tmax，达到最大观察浓度的时间；TTR，到反应的时间。

表10.4.3-2：关键次要目标的主要被估量的属性的汇总

缩写：AE，不良事件；BICR，盲法独立中心审查；BOR，最佳总体反应；CI，置信区间；CR，完全反应；DLT，剂量限制性毒性；ORR，总反应率；PR，部分反应；RECIST，实体瘤的反应评价标准；SAE，严重不良事件。

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²⁹ Itti E, Meignan M, Berriolo-Riedinger A, Biggi A, Cashen AF, VéraP, Tilly H, Siegel BA, Gallamini A, Casasnovas RO, Haioun C. An internationalconfirmatory study of the prognostic value of early PET/CT in diffuse largeB-cell lymphoma: comparison between Deauville criteria and ΔSUVmax. Eur JNucl Med Mol Imaging. 2013 Sep;40(9):1312-20. doi: 10.1007/s00259-013-2435-6.Epub 2013 May 7. PMID: 23649463.

³⁰ Meignan M, Barrington S, Itti E, Gallamini A, Haioun C, Polliack A.Report on the 4th International Workshop on Positron Emission Tomography inLymphoma held in Menton, France, 3-5 October 2012. Leuk Lymphoma. 2014 Jan;55(1):31-7. doi: 10.3109/10428194.2013.802784. Epub 2013 Jun 14. PMID:23763460.

³¹ Grzegorz S Nowakowski, Dok Hyun Yoon, Anthea Peters, PatriziaMondello, Erel Joffe, Isabelle Fleury, et. al. (2022) Improved Efficacy ofTafasitamab plus Lenalidomide versus Systemic Therapies for Relapsed/Refractory DLBCL: RE-MIND2, an Observational Retrospective Matched CohortStudy. Clin Cancer Res 28(18):4003-4017.

³² Nancy L. Bartlett, Sarit Assouline, Pratyush Giri, et. al.Mosunetuzumab monotherapy is active and tolerable in patients with relapsed/refractory diffuse large B-cell lymphoma Clinical Trials & Observations.American Society of Hematology (ASH) Annual Meeting 2022.

³³ Liu S. and Yuan, Y. (2015). Bayesian optimal interval designs forphase I clinical trials. Journal of the Royal Statistical Society: Series C,64, 507-523.

³⁴ Yuan Y., Hess K.R., Hilsenbeck S.G. and Gilbert M.R. (2016)Bayesian optimal interval design: a simple and well-performing design forphase I oncology trials, Clinical Cancer Research, 22(17), 4291-4301.

³⁵ Lin R, Zhou Y, Yan F, et al. BOIN12: Bayesian Optimal IntervalPhase I/II Trial Design for Utility-Based Dose Finding in Immunotherapy andTargeted Therapies. JCO Precision Oncology 2020; 4; 1393-1402.

³⁶ Zhou Y, Lin R, Lee J, et al. TITE-BOIN12: A Bayesian Phase I/IITrial Design to Find the Optimal Biological Dose with Late-onset Toxicity andEfficacy. Stat. Med. 2022; 41; 1918- 1931.

附录B4-1：缩写

附录B4-3：不良事件和严重不良事件：记录、评价、随访和报告的定义和程序

不良事件

SAE的定义。如果事件不是根据上述定义的AE，则即使符合严重条件，它也不能是SAE。

严重不良事件

妊娠和DILI必须遵循与针对SAE所用的那些相同的向申办者的传输时间设定和过程。（对于报告妊娠，参见方案中的章节9.2.5：妊娠。）

评价AE和SAE

向申办者或指定人员报告SAE

•必须及时并且不超过得知事件后24小时将SAE（无论是否与研究干预相关）和妊娠报告给申办者（或指定人员）。

•SAE必须记录在SAE报告表格上。

•所要求的用于SAE数据报告的方法是通过电子病例报告表格（eCRF）进行的。

o纸质SAE报告表格仅旨在作为当电子数据采集系统不可用/无法将eCRF传输给申办者（或指定人员）时的备用选项。

▪在这种情况下，将纸质表格经由电子邮件或经确认的传真传输来传输。

▪当使用纸质表格时，原始纸质表格应保留在现场。

•妊娠必须记录在纸质妊娠监测表格上，并且将其经由电子邮件或经确认的传真传输来传输。

附录B4-8：在A1部分和A2部分中第1阶段中的BOIN设计的流程和操作特征

出于过量给药控制的目的，如果Pr（pj > 0.30 | 数据）> 0.95并且至少3名可评价参与者接受在剂量水平j下的治疗，则将从进一步检查中消除剂量j和更高水平，其中pj是剂量水平j（j = 1、…、5）的真实DLT率。此后验概率基于以下β-二项式模型进行评价：yjI pj ~ 二项分布(pj)，其中pj ~ 均匀分布 (0,1)，其中yj是在剂量水平j下经历DLT的参与者的数量。当消除最低剂量时，出于安全性停止试验。选择概率临界值0.95与通常实践一致，即当目标DLT率 ≤ 1/3时，消除2/3参与者经历DLT的剂量。用5000个模拟试验进行模拟研究，队列大小为3个并且最多10个队列。目标毒性设定为0.3，并且如果分配给每个剂量的患者的数量达到9名，则停止试验。此剂量递增/递减规则的操作特征呈现于上表中。

附录B4-9：在A1部分中第2阶段中的TITE-BOIN12设计的流程和操作特征

与A1部分中的第2阶段设计一样，此设计将从第1阶段中选择最多的剂量开始。

计划的TITE-BOIN12设计将利用贝叶斯插补来增补缺失或未观察到的缺失功效数据（如果缺失小于50%）。贝叶斯插补是处理迟发功效数据的最严格统计方法之一。因此，将如下基于其后验分布对缺失的功效数据进行贝叶斯数据增补。假设联合结局Y遵循狄利克雷-多项式模型（Dirichlet-multinomial model），当观察到YT并且YE缺失时，我们从其条件后验中抽取YE的缺失值。将针对 (YT, YE) = (01, 00, 11, 10) 使用预先指定的先验设定（a01 = 4/8，a00 = 1/8，a11 = 2/8，a10 = 1/8），所述先验设定将先验地偏好更高剂量（类似于基于MTD的传统RP2D发现），但是一旦 > 50%（n >= 2）的功效数据可用，其影响将迅速减弱。在插补后，可以直接应用BOIN12算法以指导剂量转换和OBD的鉴定。用5000个模拟试验进行模拟研究，队列大小为3个并且最多10个队列。目标毒性设定为0.3，并且如果分配给每个剂量的患者的数量达到10名，则停止试验。DLT评估窗口为1个月，功效评估窗口为2个月，累积率为3名患者/月，如果50%或更多的功效数据待决，我们将暂停累积，并且安全性和功效标准以及效用表如章节10.4.2.1所述设置。将模拟中的第2阶段中的起始剂量设置为阶段1中选择最多的剂量，特别是场景1-5的剂量2、3、5、5、1。上表中提供了TITE-BOIN12设计的操作特征。

附录B4-10：扩展队列中的连续毒性监测计划

将对剂量扩展和剂量递增阶段中用为剂量扩展队列所选的剂量治疗的受试者进行连续毒性监测。在剂量扩展期间（B部分），将使用非结合性贝叶斯安全性监测方法来持续监测过量毒性，所述过量毒性被定义为符合剂量递增中定义的DLT标准的AE的发生。将构建弱信息先验，例如β（0.3，0.7），用于估计停止边界。在最少6名受试者入组并且完成至少一个周期的研究治疗后，将基于过度毒性的后验分布，计算以下非约束性贝叶斯停止标准来暂停试验。

概率（过量毒性> 0.3|数据，a = 0.3，b = 0.7）>= 0.60，

其中a = 0.3，b = 0.7是β先验分布的参数。

此标准意味着当毒性率超过0.3的概率大于0.60时，研究可以暂停。确定0.3的过量毒性率与剂量递增中指定的目标毒性率一致。基于在Trialdesign.org的贝叶斯毒性监测分析工具，在下表中详述了拟定贝叶斯安全性监测计划（B部分）在指定期中处的操作特征。

尽管出于清楚理解的目的，已经通过说明和例子的方式详细地描述了本发明，但是描述和例子不应被解释为限制本发明的范围。将本文引用的所有专利和科学文献的披露内容明确地通过引用以其整体并入本文。

Claims

1.一种治疗有需要的受试者的癌症或自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的抗CD20抗体和式 (IA) 的化合物：

(IA)

或其药学上可接受的盐，其中：

X¹和X²各自独立地是N或CH，条件是X¹和X²中的至少一个是N；

R^1a和R^1b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

或者R^2a和R^2b一起形成氧代基；

或者R^1a和R^2a一起形成桥接C₂-C₃亚烷基；

R^3a和R^3b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R^4a和R^4b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基，

R^5a和R^5b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

w是0或1；

R⁶是H或C₁-C₆烷基；

R⁷是H或C₁-C₆烷基；

x和y各自独立地是0或1，条件是x和y不都是1；

R⁸是Cl或-CN；

R⁹是F；

X³是N或CH；

z是0或1；

R^10a和R^10b各自独立地是H或卤代基；

其中所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子；

R¹²是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R¹³是H或卤代基；

R¹⁴是H或C₁-C₆烷基；

X⁴是N或CR¹⁵；

R¹⁵是H或C₁-C₆烷基；

X⁵和X⁶各自独立地是N或CH；并且

是单键或双键；

其中所述化合物中的一个或多个氢原子任选地被氘替代。

2.一种治疗有需要的受试者的癌症或自身免疫病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的式 (IA) 的化合物：

(IA)

或其药学上可接受的盐，其中：

X¹和X²各自独立地是N或CH，条件是X¹和X²中的至少一个是N；

R^1a和R^1b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

或者R^2a和R^2b一起形成氧代基；

或者R^1a和R^2a一起形成桥接C₂-C₃亚烷基；

R^3a和R^3b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R^4a和R^4b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基，

R^5a和R^5b各自独立地是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

w是0或1；

R⁶是H或C₁-C₆烷基；

R⁷是H或C₁-C₆烷基；

x和y各自独立地是0或1，条件是x和y不都是1；

R⁸是Cl或-CN；

R⁹是F；

X³是N或CH；

z是0或1；

R^10a和R^10b各自独立地是H或卤代基；

其中所述杂环基含有1-3个选自N、O和S的杂原子；

R¹²是H、卤代基或C₁-C₆烷基；

R¹³是H或卤代基；

R¹⁴是H或C₁-C₆烷基；

X⁴是N或CR¹⁵；

R¹⁵是H或C₁-C₆烷基；

X⁵和X⁶各自独立地是N或CH；并且

是单键或双键；

其中所述化合物中的一个或多个氢原子任选地被氘替代，

其中如下施用所述式 (IA) 的化合物或其药学上可接受的盐：(i) 在28天周期的每一天，每日施用；或 (ii) 在28天周期的第1-14天施用，并且在所述28天周期的第15-28天不施用：或 (iii) 在28天周期的第1-21天施用，并且在所述28天周期的第22-28天不施用；或者

其中将所述式 (IA) 的化合物或其药学上可接受的盐以约20 mg/天、约40 mg/天、约80 mg/天、约160 mg/天、约260 mg/天、约400 mg/天或约640 mg/天的剂量每日一次或每日两次施用于所述受试者。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中将所述式 (IA) 的化合物或其药学上可接受的盐以约20 mg/天、约40 mg/天、约80 mg/天、约160 mg/天、约260 mg/天、约400 mg/天或约640 mg/天的剂量每日一次或每日两次施用于所述受试者。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中如下施用所述式 (IA) 的化合物或其药学上可接受的盐：(i) 在28天周期的每一天，每日施用；或 (ii) 在28天周期的第1-14天施用，并且在所述28天周期的第15-28天不施用：或 (iii) 在28天周期的第1-21天施用，并且在28天周期的第22-28天不施用。

5.根据权利要求2-4中任一项所述的方法，所述方法进一步包括向所述受试者施用抗CD20抗体。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其中所述抗CD20抗体是利妥昔单抗。

7.根据权利要求6所述的方法，其中静脉内施用利妥昔单抗。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其中每28天一次施用约375 mg/m²利妥昔单抗。

9.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中在28天治疗周期的第1天施用利妥昔单抗并且如下施用所述式 (IA) 的化合物或其药学上可接受的盐：(i) 在所述28天治疗周期的每一天，每日施用；或 (ii) 在所述28天治疗周期的第1-14天施用，并且在所述28天治疗周期的第15-28天不施用：或 (iii) 在所述28天治疗周期的第1-21天施用，并且在所述28天治疗周期的第22-28天不施用。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述方法是治疗癌症的方法。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述淋巴瘤是B细胞淋巴瘤。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤。

14.根据权利要求11-13中任一项所述的方法，其中所述淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤或淋巴浆细胞性淋巴瘤。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述淋巴瘤是弥漫性大B细胞淋巴瘤或滤泡性淋巴瘤。

16.根据权利要求10-15中任一项所述的方法，其中所述癌症是复发性或难治性的。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述化合物具有下式：

(70)，

或其异构体，或前述物质的药学上可接受的盐。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述化合物具有下式：

(70)，

或其药学上可接受的盐。

19.一种药物组合物，所述药物组合物包含下式的化合物：

(70)，

20.一种单位剂量配制品，所述单位剂量配制品包含根据权利要求19所述的药物组合物，其中所述化合物 (70) 或其异构体或前述物质的药学上可接受的盐以约10 mg至约100mg的量存在于所述单位剂型中。