CN1188410A - N-环己基苯甲酰胺类化合物治疗肠疾病的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及式Ⅰ化合物和包括这些化合物的外消旋物及它们可药用盐用于制备治疗内脏器官疼痛的药物的用途:其中R₁是直链的、支链的或环化的C₁－C₅烷基;R₂表示氢原子,直链的或支链的C₁－C₅烷基,羟基,C₁－C₅烷氧基或C₁－C₂羟烷基;R₃表示氢原子,或者R₂和R₃一起表示C₁－C₅烷基,这些化合物是2R构型的。

Description

N-环己基苯甲酰胺类化合物治疗肠疾病的用途

本发明涉及N-环己基苯甲酰胺类化合物的新治疗用途。

过敏性肠综合症(IBS)的确认症状为腹部疼痛、无规律排粪(可与疼痛有关或无关)并常见腹胀。

由于这多重症状，有建议根据是否存在便秘或腹泻作用进行病理学分类。

在某些形式的IBS中观察到的便秘可通过刺激肠运动性，更具体地说是结肠运动性的药物进行治疗。

据知EP 0507672描述的N-环己基苯甲酰胺类化合物刺激消化道运动性，因此建议用于恢复其中便秘占主导的IBS患者的结肠运送。

在该类疾病的病理学研究中，据显示，主诉腹部疼痛的患者表现出内脏敏感性阈值降低(医学/科学(1994)，10，1107-15)。

该阈值可通过各种药理活性物质提高，例如κ激动剂或某些5-HT₃拮抗剂，如格拉司琼(W094/01095)。据知后者的化合物还可降低直肠运动性(Aliment.Pharmacol.Ther.(1993)，7，175-80)，并且据知其它5-HT₃拮抗剂，如昂丹司琼减低结肠运送(Dig.Dis.Sci.(1990)，35，477-80)。

EP 0507672中描述的N-环己基苯甲酰胺类化合物与化合物如格拉司琼相比，对5-HT₃受体没有作用。

本申请公司发现EP 0507672中描述的某些化合物具有提高内脏器官疼痛感觉阈值的特性。

本申请公司还发现这些化合物在溃疡性结肠模型中具有抗炎作用。

这些化合物是通式I的化合物

其中R₁是直链的、支链的或环化的C₁-C₅烷基；R₂表示氢原子，直链的或支链的C₁-C₅烷基、羟基、C₁-C₅烷氧基或C₁-C₂羟烷基；R₃表示氢原子，或者R₂和R₃一起表示C₁-C₅烷基。

存在两个非对称中心意味着式I化合物包括四种立体异构体。本发明中使用的化合物具有2R绝对构型，优选的化合物具有1R，2R绝对构型。具有顺式相对构型的外消旋化合物(它是1R，2R和1S，2S对映体的等摩尔混合物)含有活性异构体，因此可用于本发明。另外，具有反式相对构型的外消旋化合物(它是1S，2R和1R，2S对映体的等摩尔混合物)也可用于本发明。

特别优选的混合物是那些相应的式I化合物，其中R₁是甲基或环丙甲基，R₂是甲基并且R₃是氢原子。

式I化合物可采用EP 0507672中描述的合成方法制备，即将相应的通式II的苯甲酸与具有所需立体化学特性的通式III的二胺反应。

具有顺式相对构型的外消旋二胺III可按照EP 0507672描述的合成路线，由(顺)-2-(三氟乙酰氨基)环己烷羧酸制备。

具有1R，2R绝对构型的、其中R₂＝H并且R₃＝CH₃的二胺III在EP 0507672中也有记载。

具有1S，2R绝对构型的、其中R₂＝H并且R₃＝CH₃的二胺III可由氨基酯IV(它可根据四面体通讯(1984)，25，2557-2560描述的方法获得)按照下面的一系列反应制备：

本发明的主题是式I化合物或其可药用盐用于制备治疗内脏器官疼痛，尤其是IBS患者的内脏器官疼痛的药物的用途。

本发明的另一个主题是式I化合物或其可药用盐用于制备治疗炎性结肠炎，例如出血性直肠结肠炎或节段性回肠炎的药物的用途。

经口服给药于人的剂量学是每日约1mg～约200mg。

如下给出的有关试验获得的结果证明了上述药理学性质。

I-有关5-HT₃受体的活性

1)有关受体的亲和性

化合物的5-HT₃受体亲和性按照《生化和药理学》(1990)，40(7)，1541-1550描述的方法，使用NG 108-15细胞的膜制品并用氚标记的BRL43694作为特异性配体进行测定。

式I化合物显示出低5-HT₃受体亲和性，即大于1微摩尔。相比之下，昂丹司琼的Ki是16nM。

2)Bezold-Jarisch反射

按照J.Pharm.& Exp.Therp.(1989)，248，197-201描述的方法，通过测定它们抑制由血清素诱发的心动过缓在体内评价产物的5-HT₃拮抗剂活性。

在达1mg/kg(i.v.)的剂量下，没有一种式I化合物拮抗心动过缓。相比之下，昂丹司琼拮抗心动过缓的IC₅₀约为0.003mg/kg(i.v.)。

II-内脏敏感性

第一种模型在于观察由施加于预先刺激的粘膜的直肠扩张引起的大鼠腹部痉挛。痉挛的次数与所经历的疼痛强度成比例。在Neurogastroenterol.and Mot.(1994)，6，140中记载了一种类似的模型，表明降低人疼痛感觉的物质也减少痉挛的次数(在大鼠中观察)。

方法：

对重180g的雄性Sprague-Dawley大鼠禁食12小时。在氟烷轻微麻醉下，引入直肠内探针(距肛门5cm)并注入1.5ml 1％的稀乙酸。该酸立即经肛门流出。酸的短暂接触可刺激粘膜(直肠结肠炎模型)。刺激后1小时30分钟后，在氟烷轻微麻醉下，将安装在聚亚胺酯导管(内径1cm)上的一个小乳胶球(空时直径2mm，长1cm)引入直肠(距肛门5cm)。该导管用粘性胶布粘附在尾底部并用一玻璃管保护。强行饲喂给予试验化合物，然后放在盖有丝网的结晶盘中。为进行扩张，使玻璃管和导管的游离端都通过丝网。

刺激后2小时30分钟进行扩张。将小乳胶球用1.5ml蒸馏水扩张(结肠内压力平均为60mmHg)。维持扩张10分钟，该期间计数腹部痉挛次数。然后吸出蒸馏水使小球收缩。

结果：

以五只大鼠受扩张期间10分钟观察到的痉挛平均次数表示。*在p＜0.05时与安慰剂有明显差异(Dunett检验)。

III-抗炎活性

通过结肠内滴注三硝基苯磺酸在大鼠诱发溃疡性结肠炎的模型已有记载，例如参见Gut(1992)，33，1498-1503。

对于这类结肠炎发展的有益疗效，一方面可通过动物的全面性健康(例如体重改变)来评价，另一方面可通过在实验结束时的结肠组织学研究进行评价。

方法：

将自前一天开始禁食的雄性Sprague-Dawley大鼠(140-150g)在麻醉下(isoflurane)用1ml 50mg/ml三硝基苯磺酸(TNB)水溶液刺激深部结肠(距肛门7cm)粘膜。在第二天，将大鼠随机分成两个相同的组(n＝7)，然后在早晨和傍晚通过强行饲喂接受治疗(安慰剂或产物)。产物以1mg/kg剂量(口服)给予，每日两次。

结肠接受刺激后，接受10天饲喂治疗。自D5到D10每日早晨称重动物。在D9天使动物禁食并在D10天处死动物。取出结肠并进行肉眼观察，然后进行组织学鉴定。结果：以信息方式给出了使用化合物6获得的结果。体重变化：

用TNB处理后的天数	动物的平均重量
				用安慰剂处理	用化合物6处理
5	130±8	153±15
			6	139±18	177±23*
7	142±20	186±27*
			8	147±23	194±34*
9	158±30	206±39*

*在p＜0.05时与安慰剂有显著差异(Dunett检验)。结肠的肉眼观察分析：

将结肠的肉眼观察定为如下等级标准：程度0：没有刺激痕迹

1：粘膜有轻微血管扩张

2：粘膜血管扩张并有粘连

3：粘膜出血和硬化并有粘连

4：粘膜溃疡和出血并有粘连。

下表汇总了结果，所示为表现为各种程度的动物数。

程度	用安慰剂处理的动物数	用化合物6处理的动物数
			0	0	0
1	0	1
			2	0	4
3	3	2
			4	3	0

采用最小二乘检验法进行统计学计算，将程度1和2类的(使用安慰剂治疗的为0，使用产物治疗的为5)与程度3和4类的(使用安慰剂治疗的为6，使用产物治疗的为2)进行比较。

组织学分析：

使用甲醛将结肠切片固定并包封在石蜡块中。制备5μm切片，用矾紫-署红染色并按照下述等级标准通过光学镜检进行评价：程度0：没有炎症细胞

1：有少量炎症细胞

2：大量炎症细胞

3：随结肠层厚度增加出现更大量的炎症细胞，但不伴有结构变形

4：随结肠层厚度增加出现更大量的炎症细胞并且伴有结构变形(丧失了直肠的结构外观)。

结肠有三层，分粘膜层、粘膜下层和肌肉层，依前述标准将各层划分等级。

将每只动物各层亚结构的等级数之和定义为考虑到炎症细胞的迁入和结构变形的指数。

	动物数量	指数
			安慰剂	312	1276
化合物6	2311	11310

采用最小二乘检验法进行统计学计算，将合并指数0-5的组(使用安慰剂治疗的为0，使用产物治疗的为5)与合并指数6-12的组(使用安慰剂治疗的为6，使用产物治疗的为2)进行比较。使用安慰剂治疗的动物炎症明显严重于使用化合物6治疗的。

在该模型中，使用化合物6治疗与使用安慰剂治疗相比，在体重和结肠的损伤外观上表现出明显的改善，这种改善作用与炎症细胞的迁入减少有关。

下面给出式I化合物的制备实施例。

化合物3：

将4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸(2.92g)和N，N-羰基二咪唑(2.35g)溶于80ml THF。在室温搅拌1小时后，往该反应混合物中加入2-(4-羟基哌啶子基甲基)环己胺(B.p.：160℃/0.5mm Hg)(3.45g)。搅拌20小时后，蒸除溶剂并将残余物溶于水中并酸化到pH5。水相用乙酸乙酯萃取，碱化到pH10，然后再次用乙酸乙酯萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，然后真空蒸发。将所得残余物用盐酸的乙醚溶液处理，将如此得到的盐酸盐用水结晶，然后过滤收集。熔点：145-216℃(分解)；

IR(C＝O)：1635cm^-1(KBr)。

化合物8：

按照上述方法，由4-氨基-5-氯-2-(环戊基氧)苯甲酸和(1R，2R)-2-(4-甲基哌啶子基甲基)环己胺制备化合物8。该碱用硅胶层析纯化(洗脱剂CH₂Cl₂/CH₃CO₂C₂H₅/CH₃OH；80/15/5)，然后用水结晶。熔点：173-175℃；IR(C＝O)：1634cm^-1(CHCl₃)

[α]_D＝-52.6°(c＝1，CH₃OH).T＝20℃。

化合物9：

按照相同的方法，由4-氨基-5-氯-2-(环丙基甲氧基)苯甲酸和(1S，2R)-2-(4-甲基哌啶子基甲基)环己胺制备化合物9。将获得的苯甲酰胺以碱的形式用硅胶层析纯化(洗脱剂CH₂Cl₂/CH₃CO₂C₂H₅/CH₃OH；80/15/5)，然后用乙醚结晶。熔点：145-147℃；IR(C＝O)：1635cm^-1(CHCl₃)

[α]_D＝+68.1°(c＝1，CH₃OH).T＝20℃。

(1S，2S)-2-三氟乙酰氨基-4-环己烯羧酸(V)

将氨基酯IV(6.4g)用三氟乙酸酐(17.6ml)处理5天。真空蒸发该反应混合物并将残余物溶于5％碳酸氢钠水溶液中。水相用乙酸乙酯萃取，酸化，然后用乙酸乙酯再萃取。有机相经硫酸钠干燥，然后真空蒸发溶剂，获得2.4g产物V。[IR(C＝O)＝1705cm^-1(KBr)].

(1S，2S)-1-三氟乙酰氨基-2-(4-甲基哌啶子基)羰基-4-环己烯(VI)

将前述步骤中获得的产物(0.2g)(无需纯化即可使用)和羰基二咪唑(0.137g)溶于THF(5ml)。搅拌2小时30分钟后，加入4-甲基哌啶(0.084g)，将该反应混合物放置24小时。减压蒸发溶剂，将残余物溶于二氯甲烷中。有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸钠干燥并真空蒸发。残余物在石油醚中结晶，获得100mg预期产物。熔点：169-170℃；IR(C＝O)：1721，1623cm^-1(CHCl₃)

[α]_D＝-9.9°(c＝1，CH₃OH).T＝20℃。

(1S，2S)-1-氨基-2-(4-甲基哌啶子基)羰基-4-环己烯(VII)

将前述步骤中获得的产物(1.3g)溶于乙醇(30ml)，然后用氢氧化钠的水溶液(0.33g的10ml水溶液)回流处理7小时。用1N盐酸中和该反应混合物后，真空蒸除溶剂。残余物溶于2N盐酸中，水相用乙酸乙酯萃取，用2N氢氧化钠碱化到pH10，再用乙酸乙酯萃取。有机相经硫酸钠干燥并真空蒸发。获得油状形式的产物(0.63g)，该产物无需纯化即可进一步使用。

(1S，2R)-2-(4-甲基哌啶子基羰基)环己胺(VIII)

在10％Pd/C(50mg)和3N盐酸(0.85ml)存在下，将环己烯VI(0.57g)溶于甲醇(50ml)。将该反应混合物在低氢气压下搅拌20小时。过滤除去催化剂并真空蒸除溶剂。将残余物溶于饱和碳酸钾溶液中，水相用乙酸乙酯萃取。有机相经硫酸钠干燥，然后真空蒸发获得油状形式的还原衍生物VIII(0.46g)。

[α]_D＝+82.9°(c＝1，CH₃OH).T＝20℃

IR(C＝O)：1616cm^-1(CHCl₃).

(1S，2R)-2-(4-甲基哌啶子基甲基)-4-环己胺(IX)

将酰胺衍生物VIII(0.42g)溶于10ml甲苯，然后在-60℃用二异丁基氢化铝(9.4ml的1M甲苯溶液)处理8小时。加入2N盐酸水解该反应混合物。将水相与甲苯分离，用氯仿洗涤，加入2N氢氧化钠使其呈碱性，然后用氯仿萃取。有机相经硫酸钠干燥并真空蒸发，获得二胺(0.25g)。

[α]_D＝-12.1°(c＝1，CH₃OH).T＝20℃.

Claims (4)

1.式I化合物和包括这些化合物的外消旋物及它们可药用盐用于制备治疗内脏器官疼痛的药物的用途：

其中R₁是直链的、支链的或环化的C₁-C₅烷基；R₂表示氢原子，直链的或支链的C₁-C₅烷基，羟基，C₁-C₅烷氧基或C₁-C₂羟烷基；R₃表示氢原子，或者R₂和R₃一起表示C₁-C₅烷基，这些化合物是2R构型的。

2.式I的化合物和包括这些化合物的外消旋物及它们可药用盐用于制备治疗炎性结肠炎的药物的用途：其中R₁是直链的、支链的或环化的C₁-C₅烷基；R₂表示氢原子，直链的或支链的C₁-C₅烷基，羟基，C₁-C₅烷氧基或C₁-C₂羟烷基；R₃表示氢原子，或者R₂和R₃一起表示C₁-C₅烷基，这些化合物是2R构型的。

3.权利要求1或2的用途，其中使用的式I化合物是1R，2R构型的。

4.权利要求1-3任一项的用途，其中使用的式I化合物中，R₁为甲基或环丙甲基，R₂是甲基并且R₃是氢原子。