CN118647707A - 抗btla抗体及其在治疗癌症中的用途 - Google Patents
抗btla抗体及其在治疗癌症中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118647707A CN118647707A CN202380018767.4A CN202380018767A CN118647707A CN 118647707 A CN118647707 A CN 118647707A CN 202380018767 A CN202380018767 A CN 202380018767A CN 118647707 A CN118647707 A CN 118647707A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- chain variable
- variable region
- polypeptide sequence
- heavy chain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 77
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 17
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 309
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 276
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 276
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 276
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 263
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 71
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 45
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 642
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 633
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 630
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 101
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 57
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 47
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 31
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 27
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 claims description 23
- 102000053464 human BTLA Human genes 0.000 claims description 23
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 20
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 17
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 17
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 14
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 13
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 12
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 claims description 11
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 claims description 11
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 claims description 10
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 9
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 claims description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 8
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 7
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 claims description 6
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 6
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims description 6
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 6
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 claims description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 6
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims description 6
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 claims description 5
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 4
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 30
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 46
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 31
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 30
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 26
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 26
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 24
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 20
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 14
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 13
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 13
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 12
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 12
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 9
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 7
- -1 e.g. Proteins 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 7
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 6
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 5
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 4
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011816 wild-type C57Bl6 mouse Methods 0.000 description 4
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 3
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical class OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 3
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-m-cresol Chemical compound CC1=CC(O)=CC=C1Cl CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 2
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 2
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000491 EC50 Toxicity 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 2
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 2
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 102100020881 Interleukin-1 alpha Human genes 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 229960004063 propylene glycol Drugs 0.000 description 2
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical compound C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N (S)-chlorphenesin Chemical compound OC[C@H](O)COC1=CC=C(Cl)C=C1 MXOAEAUPQDYUQM-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Substances OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035437 1,3-propanediol Drugs 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGRVJHAUYBGFFP-UHFFFAOYSA-N 2,2'-Methylenebis(4-methyl-6-tert-butylphenol) Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(C)=CC(CC=2C(=C(C=C(C)C=2)C(C)(C)C)O)=C1O KGRVJHAUYBGFFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 2-methylthioethanol Chemical compound CSCCO WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 238000012815 AlphaLISA Methods 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101150025010 Btla gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 1
- 101150075764 CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108091092566 Extrachromosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920003114 HPC-L Polymers 0.000 description 1
- 229920003115 HPC-SL Polymers 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 1
- 101001002634 Homo sapiens Interleukin-1 alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 101000617285 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 230000005353 IP-10 production Effects 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004288 Sodium dehydroacetate Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002463 Sveinsson chorioretinal atrophy Diseases 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 description 1
- 102100033733 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Human genes 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100033019 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Human genes 0.000 description 1
- 101710116241 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Proteins 0.000 description 1
- 102100021657 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 229940124650 anti-cancer therapies Drugs 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N benzenecarboximidamide;hydron;chloride Chemical compound [Cl-].NC(=[NH2+])C1=CC=CC=C1 LZCZIHQBSCVGRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 235000019437 butane-1,3-diol Nutrition 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000018096 chemokine (C-X-C motif) ligand 9 production Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229960002242 chlorocresol Drugs 0.000 description 1
- 229960003993 chlorphenesin Drugs 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N imidurea Chemical compound O=C1NC(=O)N(CO)C1NC(=O)NCNC(=O)NC1C(=O)NC(=O)N1CO ZCTXEAQXZGPWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940113174 imidurea Drugs 0.000 description 1
- 239000012729 immediate-release (IR) formulation Substances 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940126546 immune checkpoint molecule Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000019189 interleukin-1 beta production Effects 0.000 description 1
- 230000005651 interleukin-17A production Effects 0.000 description 1
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019259 sodium dehydroacetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079839 sodium dehydroacetate Drugs 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M sodium;(1e)-1-(6-methyl-2,4-dioxopyran-3-ylidene)ethanolate Chemical compound [Na+].C\C([O-])=C1/C(=O)OC(C)=CC1=O DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000006076 specific stabilizer Substances 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 229920003176 water-insoluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/70521—CD28, CD152
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
提供了抗BTLA抗体和抗原结合片段。还提供了编码所述抗体的核酸、包含所述抗体的组合物、以及产生所述抗体和使用所述抗体在有此需要的受试者中治疗或预防癌症的方法。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2022年1月29日提交的PCT专利申请号PCT/CN2022/075097的优先权，该申请的公开内容通过引用全部并入本文。
发明领域
本发明涉及分离的抗B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)单克隆抗体或其抗原结合片段、编码所述抗体的核酸和表达载体、包含所述载体的重组细胞以及包含所述抗体的组合物。还提供了制备所述抗体的方法以及使用所述抗体治疗包括癌症和/或相关并发症的疾病的方法。
对电子提交的序列表的引用
本申请包含电子提交的序列表。电子序列表(065798.8WO2SequenceListing.xml；大小：148,818字节；且创建日期为2023年1月19日)的内容在此通过引用全文并入本文。
发明背景
B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)属于CD28免疫球蛋白超家族。其是一种共抑制免疫检查点分子，与PD-1和CTLA-4具有结构和功能相似性。BTLA的表达仅限于免疫细胞(T细胞、B细胞、DC、NK细胞等)。当其配体HVEM结合后，BTLA的胞内结构域通过两种磷酸酶SHP1和SHP2信号传导，以抑制T细胞和B细胞中的下游TCR和BCR信号传导。BTLA在T细胞分化过程中与其他抑制检查点相比具有不同的表达谱，这表明同时或顺序阻断多个抑制分子可改善基于T细胞的疗法。因此，BTLA是治疗和潜在治愈BTLA阳性癌症的癌症免疫疗法的理想靶点。
发明内容
在一个总体方面中，本发明涉及特异性结合B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。
提供了分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、153、10、11和12；或
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)，优选人BTLA，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。SEQ ID NO:153由氨基酸序列CAREDGYPYYTLDX1W表示，其中X1是选自C、A、S、T或V的氨基酸。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有以下多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12；或
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)，优选人BTLA，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ IDNO:15或13至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的重链可变区，或具有与SEQ ID NO:16或14至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述分离的抗BTLA单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
(1)具有SEQ ID NO:15的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:16的多肽序列的轻链可变区；或
(2)具有SEQ ID NO:13的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:14的多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是嵌合的或者人的或人源化的。
在某些实施方式中，所述人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、150、10、11和12；
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
(3)分别为SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12；
(4)分别为SEQ ID NO:7、8、149、10、11和12；
(5)分别为SEQ ID NO:7、8、151、10、11和12；或
(6)分别为SEQ ID NO:7、8、152、10、11和12。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ IDNO:141、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、143、145或147至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的重链可变区，或者具有与SEQ ID NO:142、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106,108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、144、146或148至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述分离的人源化抗BTLA单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
(1)具有SEQ ID NO:141的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:142的多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO:17的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:18的多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO:19的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:20的多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO:21的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:22的多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO:23的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:24的多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO:25的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:26的多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO:27的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:28的多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO:29的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:30的多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO:31的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:32的多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO:33的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:34的多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO:35的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:36的多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO:37的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:38的多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO:39的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:40的多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO:41的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:42的多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO:43的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:44的多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO:45的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:46的多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO:47的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:48的多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO:49的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:50的多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO:51的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:52的多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO:53的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:54的多肽序列的轻链可变区；
(21)具有SEQ ID NO:55的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:56的多肽序列的轻链可变区；
(22)具有SEQ ID NO:57的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:58的多肽序列的轻链可变区；
(23)具有SEQ ID NO:59的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:60的多肽序列的轻链可变区；
(24)具有SEQ ID NO:61的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:62的多肽序列的轻链可变区；
(25)具有SEQ ID NO:63的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:64的多肽序列的轻链可变区；
(26)具有SEQ ID NO:65的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:66的多肽序列的轻链可变区；
(27)具有SEQ ID NO:67的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:68的多肽序列的轻链可变区；
(28)具有SEQ ID NO:69的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:70的多肽序列的轻链可变区；
(29)具有SEQ ID NO:71的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:72的多肽序列的轻链可变区；
(30)具有SEQ ID NO:73的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:74的多肽序列的轻链可变区；
(31)具有SEQ ID NO:75的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:76的多肽序列的轻链可变区；
(32)具有SEQ ID NO:77的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:78的多肽序列的轻链可变区；
(33)具有SEQ ID NO:79的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:80的多肽序列的轻链可变区；
(34)具有SEQ ID NO:81的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:82的多肽序列的轻链可变区；
(35)具有SEQ ID NO:83的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:84的多肽序列的轻链可变区；
(36)具有SEQ ID NO:85的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:86的多肽序列的轻链可变区；
(37)具有SEQ ID NO:87的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:88的多肽序列的轻链可变区；
(38)具有SEQ ID NO:89的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:90的多肽序列的轻链可变区；
(39)具有SEQ ID NO:91的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:92的多肽序列的轻链可变区；
(40)具有SEQ ID NO:93的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:94的多肽序列的轻链可变区；
(41)具有SEQ ID NO:95的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:96的多肽序列的轻链可变区；
(42)具有SEQ ID NO:97的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:98的多肽序列的轻链可变区；
(43)具有SEQ ID NO:99的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:100的多肽序列的轻链可变区；
(44)具有SEQ ID NO:101的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:102的多肽序列的轻链可变区；
(45)具有SEQ ID NO:103的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:104的多肽序列的轻链可变区；
(46)具有SEQ ID NO:105的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:106的多肽序列的轻链可变区；
(47)具有SEQ ID NO:107的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:108的多肽序列的轻链可变区；
(48)具有SEQ ID NO:109的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:110的多肽序列的轻链可变区；
(49)具有SEQ ID NO:111的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:112的多肽序列的轻链可变区；
(50)具有SEQ ID NO:113的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:114的多肽序列的轻链可变区；
(51)具有SEQ ID NO:115的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:116的多肽序列的轻链可变区；
(52)具有SEQ ID NO:117的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:118的多肽序列的轻链可变区；
(53)具有SEQ ID NO:119的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:120的多肽序列的轻链可变区；
(54)具有SEQ ID NO:121的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:122的多肽序列的轻链可变区；
(55)具有SEQ ID NO:123的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:124的多肽序列的轻链可变区；
(56)具有SEQ ID NO:125的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:126的多肽序列的轻链可变区；
(57)具有SEQ ID NO:127的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:128的多肽序列的轻链可变区；
(58)具有SEQ ID NO:129的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:130的多肽序列的轻链可变区；
(59)具有SEQ ID NO:131的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:132的多肽序列的轻链可变区；
(60)具有SEQ ID NO:133的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:134的多肽序列的轻链可变区；
(61)具有SEQ ID NO:135的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:136的多肽序列的轻链可变区；
(62)具有SEQ ID NO:137的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:138的多肽序列的轻链可变区；
(63)具有SEQ ID NO:139的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:140的多肽序列的轻链可变区；
(64)具有SEQ ID NO:143的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:144的多肽序列的轻链可变区；
(65)具有SEQ ID NO:145的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:146的多肽序列的轻链可变区；或
(66)具有SEQ ID NO:147的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:148的多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合食蟹猕猴BTLA。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段以小于约25nM、20nM、15nM、5nM、2nM、1nM或0.5nM的KD与人BTLA结合。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人BTLA的激动剂并且在与BTLA结合后激活来自BTLA的下游信号传导。
在某些实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够抑制B细胞增殖和/或T细胞和/或浆细胞激活。T细胞可以例如选自CD4 T细胞、CD8 T细胞、Th1 T细胞、TFH T细胞、αβT细胞和γδT细胞。
在某些实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够阻断或消除BTLA与疱疹病毒进入介质(HVEM)的结合。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段与BTLA结合并且能够增加促炎细胞因子例如干扰素γ(IFNγ)、白细胞介素-2(IL-2)、C-X-C基序趋化因子配体9(CXCL9)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10)、白细胞介素1β(IL1β)和肿瘤坏死因子α(TNFα)产生；介导偶联药物的活性；和/或与具有杀癌作用的另一单克隆抗体或其抗原结合片段形成双特异性抗体。
还提供了包含根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的分离的双特异性抗体或其抗原结合片段。
还提供了编码根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
还提供了载体，其包含编码根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
还提供了包含载体的宿主细胞，所述载体包含编码根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的分离的核酸。
在某些实施方式中，提供了一种药物组合物，其包含根据本发明所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段或者分离的双特异性抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。
还提供了特异性靶向有此需要的受试者中的癌细胞表面上的B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)的方法，其包括向所述受试者施用根据本发明所述的药物组合物。
还提供了在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用根据本发明所述的药物组合物。在某些实施方式中，所述癌症是实体瘤，优选具有浸润性T细胞的实体瘤，更优选具有浸润性T效应细胞的实体瘤，更优选具有表达BTLA的T效应细胞的实体瘤，最优选具有表达在肿瘤微环境中高度表达的BTLA和BTLA配体HVEM的浸润性T效应细胞的实体瘤。所述癌症可以例如是BTLA阳性癌症。所述癌症的实例可以例如选自但不限于黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌和肝癌。
在某些实施方式中，所述药物组合物还包含第二治疗性抗癌剂。所述第二治疗性抗癌剂可以例如是抗PD1抗体或其抗原结合片段。
还提供了产生根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的方法。所述方法包括在产生所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从所述细胞或培养物中回收所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段。
还提供了产生包含根据本发明所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法。所述方法包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合以获得所述药物组合物。
还提供了确定受试者中BTLA水平的方法。所述方法包括(a)从所述受试者获取样品；(b)将所述样品与根据本发明所述的抗BTLA单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和(c)确定所述受试者中BTLA水平。在某些实施方式中，所述样品是组织样品。所述组织样品可以例如是癌症组织样品。在某些实施方式中，所述样品是血液样品。在某些实施方式中，所述样品包含T细胞(例如CD4、CD8、Th1、TFH、αβ、γδ)、B细胞、树突状细胞(DC)和自然杀伤(NK)细胞。
附图说明
结合附图阅读上述概要以及本申请的优选实施方式的以下具体描述将更加容易理解。然而，应当理解，本申请不限于附图中所示的确切实施方式。
图1A-1B显示了证明以下的图：通过HVEM-BTLA阻断报告基因检测鉴定抗BTLA阻断抗体HFB6-2和HFB6-3。
图2A-2B显示了证明以下的图：在FACS结合检测中HFB6-2和HFB6-3抗体能够结合HEK293人BTLA(图2A)和Expi293食蟹猕猴BTLA(图2B)中的人和食蟹猕猴BTLA。
图3A-3B显示了证明以下的图：HFB6-2和HFB6-3抗体是细胞BTLA/可溶性HVEM阻断(图3A)和BTLA-HVEM阻断T细胞报告基因(图3B)检测中的抗BTLA阻断剂。
图4A-4D显示了证明以下的图：HFB6-2和HFB6-3抗体与原代T细胞和B细胞结合。
图5显示了证明以下的图：HFB6-2和HFB6-3抗体逆转HVEM介导的对原代CD4+T细胞增殖的抑制。
图6显示了证明以下的图：HFB6-3增加IFNγ产生并在混合淋巴细胞反应(MLR)检测中与抗PD1协同作用。
图7A-7G显示了证明以下的图：HFB6-3抗体单独或与抗PD1抗体组合在原代分离肿瘤培养物中诱导IFNγ和促炎细胞因子产生。
图8A-8B显示了证明以下的图：野生型C57BL/6小鼠和hBTLA敲入小鼠中HFB6-2和HFB6-3抗体的理想PK谱。
图9显示了证明以下的图：ELISA结合检测和HVEM-BTLA阻断报告基因检测中HFB6-2人源化抗体的功能谱。
图10A-10C显示了证明以下的图：HVEM-BTLA阻断报告基因检测中人源化HFB6-3抗体(包括人源化HFB6-3抗体的HCDR3中的Cys突变体)的结果。
图11A-11B显示了证明以下的图：在FACS结合检测中，人源化HFB6-3抗体变体能够在HEK293T人BTLA表达细胞(图11A)和Expi293食蟹猕猴BTLA表达细胞(图11B)中结合人和食蟹猕猴BTLA。
图12A-12B显示了证明以下的图：在FACS阻断检测(图12A)中和在CHO.TCRa.hHVEM/Jurkat.hBTLA.NFAT-luc阻断报告基因检测(图12B)中，人源化HFB6-3抗体变体能够阻断细胞BTLA和可溶性HVEM相互作用。
图13显示了证明以下的图：具有半胱氨酸突变的人源化HFB6-3抗体变体能够逆转HVEM介导的对原发性CD4+T细胞增殖的抑制。
图14A-14C显示了证明以下的图：具有半胱氨酸突变的人源化HFB6-3抗体变体在原发性分离肿瘤培养物中诱导IFNγ和促炎细胞因子产生。
图15A-15C显示了证明以下的图：具有半胱氨酸突变的人源化HFB6-3抗体变体在原发性分离肿瘤培养物中诱导IFNγ和促炎细胞因子产生。
具体实施方式
在背景和整个说明书中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献中的每一个都以引用的方式全文并入本文中。对本说明书中包括的文献、法案、材料、设备、文章等的讨论是为了提供本发明的背景。这种讨论并不承认这些事项中的任何或全部构成任何公开或要求保护的发明的现有技术的一部分。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。否则，本文使用的某些术语具有说明书中规定的含义。
必须注意，如本文和所附权利要求书中所用，单数形式“一种/一个(a/an)”和“所述(the)”包括复数指代，除非上下文另有明确规定。
除非另有说明，否则任何数值，例如本文所述的浓度或浓度范围，应理解为在所有情况下均由术语“约”修饰。因此，数值通常包括所述值的±10％。例如，1mg/mL的浓度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同样，1％至10％(w/v)的浓度范围包括0.9％(w/v)至11％(w/v)。如本文所用，数值范围的使用明确包括所有可能的子范围、该范围内的所有单个数值，包括此类范围内的整数和值的分数，除非上下文另有明确说明。
除非另有说明，一系列元素之前的术语“至少”应理解为指该系列中的每个元素。本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验就确定本文所述发明的具体实施方式的许多等同物。本发明旨在涵盖此类等效物。
如本文所用，术语“包含/包括(comprises/comprising/includes/including)”、“具有(has/having)”、“含有(contains/containing)”或其任何其他变体应理解为暗示包含所述整数或整数组但不排除任何其他整数或整数组，并且旨在是非排他性的或开放式的。例如，包含元素列表的组合物、混合物、工艺、方法、物品或设备不一定仅限于那些元素，而是可以包括未明确列出或固有于此类组合物、混合物、工艺、方法、物品或设备的其他元素。此外，除非另有明确说明，“或”是指包含性或而非排他性或。例如，条件A或B由以下任一项满足：A为真(或存在)且B为假(或不存在)，A为假(或不存在)且B为真(或存在)，以及A和B均为真(或存在)。
如本文所用，多个所述元素之间的连接词“和/或”应理解为包含单独和组合选项。例如，当两个元素由“和/或”连接时，第一个选项是指第一个元素在没有第二个元素的情况下的适用性。第二个选项是指第二个元素在没有第一个元素的情况下的适用性。第三个选项是指第一和第二个元素一起的适用性。这些选项中的任何一个都应理解为落入该含义中，因此满足本文所用术语“和/或”的要求。多个选项的同时适用性也应理解为落入该含义中，因此满足术语“和/或”的要求。
如本文所用，术语“由……组成(consists of)”或者诸如“consist of”或“consisting of”的变体，如在整个说明书和权利要求书中所用，表示包括任何所列举的整数或整数组，但不能向指定的方法、结构或组合物添加任何额外的整数或整数组。
如本文所用，术语“基本上由……组成(consist essentially of)”或者诸如“consist essentially of”或“consisting essentially of”的变体，如在整个说明书和权利要求书中所用，表示包括任何所列举的整数或整数组，以及可选地包括任何所列举的整数或整数组，这些整数或整数组不会实质性地改变指定的方法、结构或组合物的基本或新颖性质。参见M.P.E.P.§2111.03。
如本文所用，“受试者”是指任何动物，优选哺乳动物，最优选人。如本文所用，术语“哺乳动物”涵盖任何哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于牛、马、羊、猪、猫、狗、小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、猴子、人等，更优选人。
术语“右”、“左”、“下”和“上”表示附图中所参考的方向。
还应理解，当在本文中提及优选发明的组件的尺寸或特性时，所使用的术语“约/大约(about/approximately)”、“通常(generally)”、“基本(substantially)”和类似术语表示所述尺寸/特性不是严格的边界或参数，并且不排除功能上相同或相似的微小变化，如本领域的普通技术人员所理解的那样。至少，包含数值参数的此类参考将包括变化，使用本领域中接受的数学和工业原理(例如，四舍五入、测量或其他系统误差、制造公差等)，不会改变最低有效数字。
在两个或多个核酸或多肽序列(例如，抗BTLA抗体和编码它们的多核苷酸、BTLA多肽和编码它们的BTLA多核苷酸)的上下文中，术语“相同(identical)”或百分比“同一性(identity)”是指两个或多个序列或子序列在进行比较和比对以获得最大对应性时相同或具有指定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸，如使用以下序列比较算法之一或通过目视检查测量。
对于序列比较，通常一个序列充当参照序列，将测试序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，将测试和参照序列输入计算机，如果需要，指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法基于指定的程序参数计算测试序列相对于参照序列的百分比序列同一性。
可以进行用于比较的序列的最佳比对，例如通过Smith&Waterman,Adv.Appl.Math.1981；2:482的局部同源性算法、通过Needleman&Wunsch,J.Mol.Biol.1970；48:443的同源性比对算法、通过Pearson&Lipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 1988；85:2444的相似性搜索方法；通过这些算法的计算机实现(Wisconsin Genetics Software Package中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA,GeneticsComputer Group,575Science Dr.,Madison,WI)，或通过目视检查(通常参见CurrentProtocols in Molecular Biology，F.M.Ausubel等编辑，Current Protocols，GreenePublishing Associates,Inc.和John Wiley&Sons,Inc.之间的合资企业，1995Supplement(Ausubel))。
适用于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的实例是BLAST和BLAST 2.0算法，其分别描述于以下中：Altschul等，J.Mol.Biol.1990；215:403-410和Altschul等，Nucleic Acids Res.1997；25:3389-3402。执行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information)公开获得。该算法首先涉及通过识别查询序列中长度为W的短词来识别高得分序列对(HSP)，这些短词在与数据库序列中相同长度的词比对时匹配或满足某个正值阈值得分T。T称为邻域词得分阈值(Altschul等，上文)。这些初始邻域词命中充当启动搜索的种子，以找到包含它们的更长HSP。然后沿着每个序列在两个方向上延伸词命中，直到累积比对得分可以增加。
对于核苷酸序列，使用参数M(匹配残基对的奖励分数；始终>0)和N(错配残基的惩罚分数；始终<0)来计算累积分数。对于氨基酸序列，使用评分矩阵来计算累积分数。当出现以下情况时，每个方向的字匹配扩展都会停止：累积比对分数从其最大实现值下降数量X；由于累积了一个或多个负评分残基比对，累积分数变为零或以下；或者到达任一序列的末尾。BLAST算法参数W、T和X决定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(对于核苷酸序列)默认使用字长(W)11、期望值(E)10、M＝5、N＝-4和两条链的比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长(W)3、期望值(E)10和BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff&Henikoff,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 1989；89:10915)。
除了计算序列同一性百分比之外，BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行统计分析(参见，例如，Karlin&Altschul，Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 1993；90:5873-5787)。BLAST算法提供的一个相似性度量是最小总和概率(P(N))，它指示两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然匹配的概率。例如，如果测试核酸与参照核酸的比较中最小总概率小于约0.1，更优选小于约0.01，最优选小于约0.001，则认为核酸与参照序列相似。
两个核酸序列或多肽基本相同的另一个迹象是，第一核酸编码的多肽与第二核酸编码的多肽具有免疫交叉反应性，如下所述。因此，多肽通常与第二多肽基本相同，例如，当两个肽仅在保守置换上不同时。两个核酸序列基本相同的另一个迹象是，两个分子在严格条件下相互杂交。
如本文所用，术语“分离的”是指生物组分(例如核酸、肽或蛋白质)已与该组分天然存在的生物体中的其他生物组分(即其他染色体和染色体外的DNA和RNA以及蛋白质)基本分离、分开产生或纯化。因此，已“分离的”核酸、肽和蛋白质包括通过标准纯化方法纯化的核酸和蛋白质。“分离的”核酸、肽和蛋白质可以是组合物的一部分，并且如果该组合物不是核酸、肽或蛋白质的天然环境的一部分，则仍是分离的。该术语还包括通过在宿主细胞中重组表达制备的核酸、肽和蛋白质以及化学合成的核酸。
如本文所用，术语“多核苷酸”与“核酸分子”、“核苷酸”或“核酸”同义，是指任何多核糖核苷酸或多脱氧核糖核苷酸，其可以是未修饰的RNA或DNA或者修饰的RNA或DNA。“多核苷酸”包括但不限于单链和双链DNA、单链和双链区域混合的DNA、单链和双链RNA、单链和双链区域混合的RNA、包含DNA和RNA的杂交分子，其可以是单链的，或者更典型地是双链的，或者是单链和双链区域混合的。此外，“多核苷酸”是指包含RNA或DNA或者RNA和DNA的三链区。术语多核苷酸还包括含有一个或多个修饰碱基的DNA或RNA以及主链因稳定性或其他原因而修饰的DNA或RNA。“修饰”碱基包括例如三苯甲基化碱基和不常见碱基，例如肌苷。可以对DNA和RNA进行各种修饰；因此，“多核苷酸”包括自然界中常见的化学、酶促或代谢修饰形式的多核苷酸，以及病毒和细胞特有的DNA和RNA化学形式。“多核苷酸”还包括相对较短的核酸链，通常称为寡核苷酸。
如本文所用，术语“载体”是复制子，其中可以可操作地插入另一个核酸片段，从而实现该片段的复制或表达。
如本文所用，术语“宿主细胞”是指包含本发明核酸分子的细胞。“宿主细胞”可以是任何类型的细胞，例如原代细胞、培养细胞或来自细胞系的细胞。在一个实施方式中，“宿主细胞”是用本发明的核酸分子转染的细胞。在另一个实施方式中，“宿主细胞”是这种转染细胞的子代或潜在子代。细胞的子代可能与亲本细胞相同或不同，例如由于在后续世代中可能发生的突变或环境影响或核酸分子整合到宿主细胞基因组中。
本文使用的术语“表达”是指基因产物的生物合成。该术语包括基因转录成RNA。该术语还包括RNA翻译成一种或多种多肽，并且还包括所有自然发生的转录后和翻译后修饰。表达的抗体可以在宿主细胞的细胞质内、细胞外环境(例如细胞培养物的生长培养基)中或锚定在细胞膜上。
如本文所用，术语“肽”、“多肽”或“蛋白质”可指由氨基酸组成的分子，并且可被本领域技术人员识别为蛋白质。本文使用氨基酸残基的常规单字母或三字母代码。术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可在本文中互换使用，指任何长度的氨基酸聚合物。聚合物可以是线性的或支链的，其可包含修饰的氨基酸，并且其可被非氨基酸中断。这些术语还包括已自然修饰或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，例如与标记组分结合。定义中还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)的多肽，以及本领域已知的其他修饰。
本文所述的肽序列按照通常的惯例书写，即肽的N端区域在左侧，C端区域在右侧。尽管已知氨基酸的异构形式，但除非另有明确说明，否则将表示氨基酸的L形式。
抗体
本发明一般涉及分离的B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)抗体、编码抗体的核酸和表达载体、包含载体的重组细胞、表达抗体的重组细胞以及包含抗体的组合物。还公开了制造抗体的方法以及使用抗体治疗疾病(例如癌症)的方法。本发明的抗体具有一种或多种所需的功能特性，包括但不限于与BTLA的高亲和力结合、对BTLA的高特异性、阻断疱疹病毒进入介质(HVEM)与BTLA结合的能力、抑制B细胞增殖和/或T细胞和/或浆细胞激活的能力、增加促炎细胞因子产生的能力、以及在单独施用或与其他抗癌疗法联合施用时抑制受试者和动物模型中的肿瘤生长的能力。促炎细胞因子可包括但不限于白细胞介素2(IL-2)、C-X-C基序趋化因子配体9(CXCL9)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10)、白细胞介素1β(IL1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ。T细胞可包括但不限于CD4 T细胞、CD8 T细胞、Th1 T细胞、TFH T细胞、αβT细胞和γδT细胞。
在一般方面，本发明涉及与B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“抗体”具有广义，包括免疫球蛋白或抗体分子，包括人、人源化、复合和嵌合抗体以及单克隆或多克隆的抗体片段。一般而言，抗体是表现出对特定抗原结合特异性的蛋白质或肽链。抗体结构是众所周知的。根据重链恒定结构域氨基酸序列，免疫球蛋白可分为五大类(即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。IgA和IgG进一步细分为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。因此，本发明的抗体可以是五种主要类别或相应子类别中的任何一种。优选地，本发明的抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。脊椎动物物种的抗体轻链可以根据其恒定结构域的氨基酸序列被分配到两种明显不同的类型之一，即κ和λ。因此，本发明的抗体可以包含κ或λ轻链恒定结构域。根据特定实施方式，本发明的抗体包含来自大鼠或人抗体的重链和/或轻链恒定区。除了重链和轻链恒定结构域之外，抗体还包含由轻链可变区和重链可变区组成的抗原结合区，每个可变区包含三个结构域(即互补决定区1-3；CDR1、CDR2和CDR3)。轻链可变区结构域可替代地称为LCDR1、LCDR2和LCDR3，重链可变区结构域可替代地称为HCDR1、HCDR2和HCDR3。
“互补决定区”(CDR)是与抗原结合的抗体区域。可使用各种描述来定义CDR，例如(Wu等，J Exp Med 132:211-50,1970)(Kabat等，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.,1991),Chothia(Chothia等，J Mol Biol 196:901-17,1987),IMGT(Lefranc等，Dev Comp Immunol 27:55-77,2003)以及AbM(Martin和Thornton J BmolBiol 263:800-15,1996)。描述了各种描绘和可变区编号之间的对应关系(参见例如，Lefranc等，Dev Comp Immunol 27:55-77,2003；Honegger和Pluckthun,J Mol Biol 309:657-70,2001；International ImMunoGeneTics(IMGT)数据库；网络资源http://www_imgt_org)。可以使用UCL Business PLC的abYsis等可用程序来描绘CDR。除非本说明书另有明确说明，否则本文使用的术语“CDR”、“HCDR1”、“HCDR2”、“HCDR3”、“LCDR1”、“LCDR2”和“LCDR3”包括通过上述任何方法Kabat、Chothia、IMGT或AbM定义的CDR。编号系统(包括例如Kabat编号和IMGT独特编号系统)之间的对应关系是本领域技术人员所熟知的(参见例如Kabat；Chothia；Martin；Lefranc等)。
表1
| IMGT | Kabat | AbM | Chothia | |
| VH CDR1 | 27-38 | 31-35 | 26-35 | 26-32 |
| VH CDR2 | 56-65 | 50-65 | 50-58 | 53-55 |
| VH CDR3 | 105-117 | 95-102 | 95-102 | 96-101 |
| VL CDR1 | 27-38 | 24-34 | 24-34 | 26-32 |
| VL CDR2 | 56-65 | 50-56 | 50-56 | 50-52 |
| VL CDR3 | 105-117 | 89-97 | 89-97 | 91-96 |
如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，特异性结合BTLA的分离抗体基本上不含不结合BTLA的抗体)。此外，分离抗体基本上不含其他细胞物质和/或化学物质。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群中获得的抗体，即，组成该群的单个抗体除了可能存在的少量自然发生的突变外是相同的。本发明的单克隆抗体可以通过杂交瘤方法、噬菌体展示技术、单淋巴细胞基因克隆技术或重组DNA方法来制备。例如，单克隆抗体可以由杂交瘤产生，该杂交瘤包括从转基因非人动物(例如转基因小鼠或大鼠)获得的B细胞，该转基因非人动物具有包含人重链转基因和轻链转基因的基因组。
如本文所用，术语“抗原结合片段”是指抗体片段，例如双体抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫键稳定的双体抗体(ds双体抗体)、单链抗体分子(scFv)、单结构域抗体(sdab)、scFv二聚体(二价双体抗体)、由包含一个或多个CDR的抗体部分形成的多特异性抗体、骆驼化单结构域抗体、纳米抗体、结构域抗体、二价结构域抗体或任何其他与抗原结合但不包含完整抗体结构的抗体片段。抗原结合片段能够与亲本抗体或亲本抗体片段所结合的相同抗原结合。根据具体实施方式，所述抗原结合片段包含轻链可变区、轻链恒定区和重链的Fd区段。根据其他具体实施方式，所述抗原结合片段包含Fab和F(ab’)。
本文所用的术语“单链抗体”是指本领域常规的单链抗体，其包含由约15至约20个氨基酸的短肽连接的重链可变区和轻链可变区。
本文所用的术语“单结构域抗体”是指本领域常规的单结构域抗体，其包含重链可变区和重链恒定区或仅包含重链可变区。
本文所用的术语“人抗体”是指利用本领域已知的任何技术制备的由人产生的抗体或具有与由人产生的抗体相对应的氨基酸序列的抗体。对人抗体的该定义包括完整或全长抗体、其片段、和/或包含至少一个人重链和/或轻链多肽的抗体。
如本文所用，术语“人源化抗体”和/或“人源化抗原结合域”是指非人抗体，其被修饰以增加与人抗体的序列同源性，使得抗体的抗原结合特性得以保留，但其在人体中的抗原性降低。
如本文所用，术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列源自两个或多个物种的抗体。轻链和重链的可变区通常对应于源自具有所需特异性、亲和力和能力的一种哺乳动物物种(例如小鼠、大鼠、兔等)的抗体的可变区，而恒定区对应于源自另一种哺乳动物物种(例如人类)的抗体的序列，以避免在该物种中引起免疫反应。
如本文所用，术语“多特异性抗体”是指包含多个免疫球蛋白可变结构域序列的抗体，其中多个免疫球蛋白可变结构域序列中的第一免疫球蛋白可变结构域序列具有对第一表位的结合特异性，并且多个免疫球蛋白可变结构域序列中的第二免疫球蛋白可变结构域序列具有对第二表位的结合特异性。在一个实施方式中，第一和第二表位位于相同抗原上，例如，相同蛋白质(或多聚蛋白质的亚基)。在一个实施方式中，第一和第二表位重叠或基本重叠。在一个实施方式中，第一和第二表位不重叠或基本不重叠。在一个实施方式中，第一和第二表位位于不同抗原上，例如，不同蛋白质(或多聚蛋白质的不同亚基)。在一个实施方式中，多特异性抗体包含第三、第四或第五免疫球蛋白可变结构域。在一个实施方式中，多特异性抗体是双特异性抗体分子、三特异性抗体分子或四特异性抗体分子。
如本文所用，术语“双特异性抗体”是指结合不超过两个表位或两个抗原的多特异性抗体。双特异性抗体的特征在于具有对第一表位的结合特异性的第一免疫球蛋白可变结构域序列和具有对第二表位的结合特异性的第二免疫球蛋白可变结构域序列。在一个实施方式中，第一和第二表位位于相同抗原上，例如，相同蛋白质(或多聚蛋白质的亚基)。在一个实施方式中，第一和第二表位重叠或基本重叠。在一个实施方式中，第一和第二表位位于不同抗原上，例如，不同蛋白质(或多聚蛋白质的不同亚基)。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列以及对第二表位具有结合特异性的重链可变结构域序列和轻链可变结构域序列。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的半抗体或其片段和对第二表位具有结合特异性的半抗体或其片段。在一个实施方式中，双特异性抗体包含对第一表位具有结合特异性的scFv或其片段和对第二表位具有结合特异性的scFv或其片段。在一个实施方式中，第一表位位于BTLA上，而第二表位位于PD-1、PD-L1、CTLA-4、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD33、CD3和/或其他肿瘤相关免疫抑制剂或表面抗原上。
如本文所用，“与BTLA特异性结合”的抗体是指与BTLA(优选人BTLA)结合的抗体和/或抗原结合域，其KD为1×10-7M或更低，优选1×10-8M或更低，更优选5×10-9M或更低，1×10-9M或更低，5×10-10M或更低，或者1×10-10M或更低。在某些实施方式中，抗体和/或抗原结合域与食蟹猕猴BTLA结合。术语“KD”是指解离常数，其由Kd与Ka的比率(即Kd/Ka)获得并以摩尔浓度(M)表示。鉴于本公开内容，可以使用本领域的方法确定抗体的KD值。例如，抗体的KD可以通过使用表面等离子体共振来确定，例如通过使用生物传感器系统，例如系统，或通过使用生物层干涉技术，例如Octet RED96系统。
抗体的KD值越小，抗体与靶抗原结合的亲和力越高。在某些实施方式中，分离的单克隆抗体或其抗原结合片段以小于约25nM、20nM、15nM、5nM、2nM、1nM或0.5nM的KD与人BTLA结合。
本文中使用的术语“IC50”是指本发明的单克隆或双特异性抗体或者其抗原结合片段的半数最大抑制浓度。IC50是本发明的单克隆或双特异性抗体或者其抗原结合片段抑制细胞中HVEM结合或抑制BTLA功能的效力的量度。在某些实施方式中，单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的KD小于约10-7M、小于约10-8M、小于约10- 9M、小于约10-10M、小于约10-11M、小于约10-12M或小于约10-13M。
如本文所用，术语“EC50”是指本发明的单克隆或双特异性抗体或者其抗原结合片段的半数最大有效浓度。EC50是指单克隆或双特异性抗体或者其抗原结合片段在特定暴露时间内诱导基线和最大值之间一半的生物反应(即细胞死亡)的浓度。在某些实施方式中，单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段具有小于约1μM、约1000nM至约100nM、约100nM至约10nM、约10nM至约1nM、约1000pM至约500pM、约500pM至约200pM、小于约200pM、约200pM至约150pM、约200pM至约100pM、约100pM至约10pM或约10pM至约1pM的EC50。
根据特定方面，本发明涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段或抗原结合域包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、153、10、11和12；或
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
其中所述抗体或其抗原结合片段或其抗原结合域特异性结合B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)，优选人BTLA，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。SEQID NO:153由氨基酸序列CAREDGYPYYTLDX1W表示，其中X1是选自C、A、S、T或V的氨基酸。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有以下多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12；或
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)，优选人BTLA，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。
根据另一个特定方面，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO:15或13至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，或具有与SEQ ID NO:16或14至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。根据一个优选的实施方式，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO:13至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ IDNO:14至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。根据一个优选的实施方式，本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段分别包含具有与SEQ ID NO:15至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO:16至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。
根据具体实施方式，所述分离的抗BTLA单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
(1)具有SEQ ID NO:15的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:16的多肽序列的轻链可变区；或
(2)具有SEQ ID NO:13的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:14的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一个实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ IDNO:13至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO:14至少85％，优选90％，更优选95％或更多，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:13的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ IDNO:14的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一个实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQID NO:15至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有与SEQ ID NO:16至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有SEQ ID NO:15的多肽序列的重链可变区；和具有SEQ ID NO:16的多肽序列的轻链可变区。
根据另一个特定方面，本发明涉及本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆或双特异性抗体或者其抗原结合片段是嵌合的。
根据另一个特定方面，本发明涉及本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆或双特异性抗体或者其抗原结合片段是人的或人源化的。
根据另一个特定方面，本发明涉及人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、150、10、11和12；
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
(3)分别为SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12；
(4)分别为SEQ ID NO:7、8、149、10、11和12；
(5)分别为SEQ ID NO:7、8、151、10、11和12；或
(6)分别为SEQ ID NO:7、8、152、10、11和12。
根据另一个特定方面，本发明涉及人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO:141、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、143、145或147至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的重链可变区，或者具有与SEQ ID NO:142、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、144、146或148至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的多肽序列的轻链可变区。
根据另一个特定方面，人源化抗BTLA单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
(1)具有SEQ ID NO:141的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:142的多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO:17的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:18的多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO:19的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:20的多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO:21的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:22的多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO:23的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:24的多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO:25的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:26的多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO:27的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:28的多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO:29的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:30的多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO:31的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:32的多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO:33的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:34的多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO:35的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:36的多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO:37的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:38的多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO:39的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:40的多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO:41的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:42的多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO:43的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:44的多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO:45的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:46的多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO:47的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:48的多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO:49的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:50的多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO:51的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:52的多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO:53的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:54的多肽序列的轻链可变区；
(21)具有SEQ ID NO:55的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:56的多肽序列的轻链可变区；
(22)具有SEQ ID NO:57的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:58的多肽序列的轻链可变区；
(23)具有SEQ ID NO:59的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:60的多肽序列的轻链可变区；
(24)具有SEQ ID NO:61的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:62的多肽序列的轻链可变区；
(25)具有SEQ ID NO:63的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:64的多肽序列的轻链可变区；
(26)具有SEQ ID NO:65的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:66的多肽序列的轻链可变区；
(27)具有SEQ ID NO:67的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:68的多肽序列的轻链可变区；
(28)具有SEQ ID NO:69的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:70的多肽序列的轻链可变区；
(29)具有SEQ ID NO:71的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:72的多肽序列的轻链可变区；
(30)具有SEQ ID NO:73的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:74的多肽序列的轻链可变区；
(31)具有SEQ ID NO:75的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:76的多肽序列的轻链可变区；
(32)具有SEQ ID NO:77的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:78的多肽序列的轻链可变区；
(33)具有SEQ ID NO:79的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:80的多肽序列的轻链可变区；
(34)具有SEQ ID NO:81的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:82的多肽序列的轻链可变区；
(35)具有SEQ ID NO:83的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:84的多肽序列的轻链可变区；
(36)具有SEQ ID NO:85的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:86的多肽序列的轻链可变区；
(37)具有SEQ ID NO:87的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:88的多肽序列的轻链可变区；
(38)具有SEQ ID NO:89的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:90的多肽序列的轻链可变区；
(39)具有SEQ ID NO:91的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:92的多肽序列的轻链可变区；
(40)具有SEQ ID NO:93的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:94的多肽序列的轻链可变区；
(41)具有SEQ ID NO:95的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:96的多肽序列的轻链可变区；
(42)具有SEQ ID NO:97的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:98的多肽序列的轻链可变区；
(43)具有SEQ ID NO:99的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:100的多肽序列的轻链可变区；
(44)具有SEQ ID NO:101的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:102的多肽序列的轻链可变区；
(45)具有SEQ ID NO:103的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:104的多肽序列的轻链可变区；
(46)具有SEQ ID NO:105的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:106的多肽序列的轻链可变区；
(47)具有SEQ ID NO:107的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:108的多肽序列的轻链可变区；
(48)具有SEQ ID NO:109的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:110的多肽序列的轻链可变区；
(49)具有SEQ ID NO:111的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:112的多肽序列的轻链可变区；
(50)具有SEQ ID NO:113的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:114的多肽序列的轻链可变区；
(51)具有SEQ ID NO:115的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:116的多肽序列的轻链可变区；
(52)具有SEQ ID NO:117的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:118的多肽序列的轻链可变区；
(53)具有SEQ ID NO:119的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:120的多肽序列的轻链可变区；
(54)具有SEQ ID NO:121的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:122的多肽序列的轻链可变区；
(55)具有SEQ ID NO:123的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:124的多肽序列的轻链可变区；
(56)具有SEQ ID NO:125的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:126的多肽序列的轻链可变区；
(57)具有SEQ ID NO:127的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:128的多肽序列的轻链可变区；
(58)具有SEQ ID NO:129的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:130的多肽序列的轻链可变区；
(59)具有SEQ ID NO:131的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:132的多肽序列的轻链可变区；
(60)具有SEQ ID NO:133的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:134的多肽序列的轻链可变区；
(61)具有SEQ ID NO:135的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:136的多肽序列的轻链可变区；
(62)具有SEQ ID NO:137的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:138的多肽序列的轻链可变区；
(63)具有SEQ ID NO:139的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:140的多肽序列的轻链可变区；
(64)具有SEQ ID NO:143的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:144的多肽序列的轻链可变区；
(65)具有SEQ ID NO:145的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:146的多肽序列的轻链可变区；或
(66)具有SEQ ID NO:147的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:148的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一个实施方式中，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有分别与SEQ ID NO:17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55或57至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有分别与SEQ ID NO:18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56或58至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55或57的多肽序列的重链可变区；和分别具有SEQ ID NO:18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56或58的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一个实施方式中，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有分别与SEQ ID NO:59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97或99至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有分别与SEQ ID NO:60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98或100至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、或99的多肽序列的重链可变区；和分别具有SEQ ID NO:60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98或100的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO:7、8、149、10、11和12的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一个实施方式中，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有分别与SEQ ID NO:101、109、117、125、127、129、131、133或135至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有分别与SEQ ID NO:102、110、118、126、128、130、132、134或136至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:101、109、117、125、127、129、131、133或135的多肽序列的重链可变区；和分别具有SEQ ID NO:102、110、118、126、128、130、132、134或136的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO:7、8、150、10、11和12的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有分别与SEQ ID NO:103、111、119、137、139、141、143、145或147至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有分别与SEQ ID NO:104、112、120、138、140、142、144、146或148至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:103、111、119、137、139、141、143、145或147的多肽序列的重链可变区；和分别具有SEQ ID NO:104、112、120、138、140、142、144、146或148的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO:7、8、151、10、11和12的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有分别与SEQ ID NO:105、113或121至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有分别与SEQ ID NO:106、114或122至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:105、113或121的多肽序列的重链可变区；和分别具有SEQ ID NO:106、114或122的多肽序列的轻链可变区。
在一个实施方式中，本发明涉及分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含分别具有SEQ ID NO:7、8、152、10、11和12的多肽序列的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3。在另一实施方式中，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有分别与SEQ ID NO:107、115或123至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，和具有分别与SEQ ID NO:108、116或124至少85％，优选90％，更优选95％或更高，例如95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。优选地，所述分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段包含分别具有SEQ ID NO:107、115或123的多肽序列的重链可变区；和分别具有SEQ ID NO:108、116或124的多肽序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段是人BTLA的激动剂并且在与BTLA结合后激活来自BTLA的下游信号传导。
在某些实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够抑制B细胞增殖和/或T细胞和/或浆细胞激活。所述T细胞可以例如选自CD4 T细胞、CD8 T细胞、Th1 T细胞、TFH T细胞、αβT细胞和γδT细胞。
在某些实施方式中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够阻断或消除BTLA与疱疹病毒进入介质(HVEM)的结合。
在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段与BTLA结合并且能够增加促炎细胞因子例如干扰素γ(IFNγ)、白细胞介素-2(IL-2)、C-X-C基序趋化因子配体9(CXCL9)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10)、白细胞介素1β(IL1β)和/或肿瘤坏死因子α(TNFα)产生。在某些实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段能够比对照抗BTLA抗体或其抗原结合片段更多地增加干扰素γ(IFNγ)、白细胞介素-2(IL-2)、C-X-C基序趋化因子配体9(CXCL9)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10)、白细胞介素1β(IL1β)和/或肿瘤坏死因子α(TNFα)产生。如本文所用，对照抗BTLA抗体可以是能够结合BTLA并阻断BTLA与HVEM结合的抗体。本文所用的对照抗体的实例可以包括但不限于JS004抗BTLA抗体。
在另一个一般方面，本发明涉及编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体或其抗原结合片段的分离核酸。本领域技术人员将理解，可以改变(例如，替换、删除、插入等)蛋白质的编码序列，而不改变蛋白质的氨基酸序列。因此，本领域技术人员将理解，可以改变编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸序列，而不改变蛋白质的氨基酸序列。
在另一个一般方面，本发明涉及一种载体，其包含编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体或其抗原结合片段的分离核酸。可以使用本领域技术人员根据本公开内容已知的任何载体，例如质粒、粘粒、噬菌体载体或病毒载体。在一些实施方式中，载体是重组表达载体，例如质粒。载体可以包含任何元件以建立表达载体的常规功能，例如启动子、核糖体结合元件、终止子、增强子、选择标记和复制起点。启动子可以是组成型、诱导型或抑制型启动子。本领域已知许多能够将核酸递送至细胞的表达载体，并且可用于本文中以在细胞中产生抗体或其抗原结合片段。可以使用常规克隆技术或人工基因合成来生成根据本发明的实施方式的重组表达载体。
在另一个一般方面，本发明涉及一种宿主细胞，其包含编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体或其抗原结合片段的分离核酸。本领域技术人员根据本公开内容已知的任何宿主细胞均可用于重组表达本发明的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，宿主细胞是大肠杆菌TG1或BL21细胞(用于表达例如scFv或Fab抗体)、CHO-DG44或CHO-K1细胞或HEK293细胞(用于表达例如全长IgG抗体)。根据特定实施方式，重组表达载体通过常规方法(例如化学转染、热休克或电穿孔)转化到宿主细胞中，其中它稳定地整合到宿主细胞基因组中，使得重组核酸有效表达。
在另一个一般方面，本发明涉及产生本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在产生本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从细胞或细胞培养物(例如，从上清液)回收单克隆和/或双特异性抗体或其抗原结合片段。表达的单克隆和/或双特异性抗体或其抗原结合片段可以从细胞收获并根据本领域已知和本文所述的常规技术进行纯化。
药物组合物
在另一个一般方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段、双特异性抗体或其抗原结合片段、分离的多核苷酸和/或分离的多肽以及药学上可接受的载体。
本文使用的术语“药物组合物”是指包含本发明的分离的多核苷酸、本发明的分离的多肽、本发明的抗BTLA单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体以及药学上可接受的载体的产品。本发明的多核苷酸、多肽、抗BTLA单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体以及包含它们的组合物也可用于制造用于本文提到的治疗应用的药物。
本文所用的术语“载体”是指任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂、油、脂质、含脂质囊泡、微球、脂质体包封或本领域公知的用于药物制剂的其他材料。应理解，载体、赋形剂或稀释剂的特性将取决于特定应用的施用途径。本文所用的术语“药学上可接受的载体”是指不干扰本发明组合物的有效性或本发明组合物的生物活性的无毒材料。根据特定实施方式，鉴于本公开内容，任何适用于抗体药物组合物的药学上可接受的载体均可用于本发明。
药物活性成分与药学上可接受的载体的配制是本领域已知的，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy(例如第21版(2005)和任何更新版本)。附加成分的非限制性实例包括缓冲剂、稀释剂、溶剂、张力调节剂、防腐剂、稳定剂和螯合剂。在配制本发明的药物组合物时，可以使用一种或多种药学上可接受的载体。
在本发明的一个实施方式中，药物组合物是液体制剂。液体制剂的优选实例是水性制剂，即包含水的制剂。液体制剂可以包括溶液、悬浮液、乳液、微乳液、凝胶等。水性制剂通常包含至少50％w/w的水，或至少60％、70％、75％、80％、85％、90％或至少95％w/w的水。
在一个实施方式中，药物组合物可以配制成注射剂，其可以例如通过注射装置(例如注射器或输液泵)注射。例如，注射可以皮下、肌肉内、腹膜内、玻璃体内或静脉内递送。
在另一个实施方式中，药物组合物是固体制剂，例如冷冻干燥或喷雾干燥组合物，其可以按原样使用，或者医生或患者在使用前向其中添加溶剂和/或稀释剂。固体剂型可以包括片剂，例如压制片剂和/或包衣片剂，以及胶囊(例如硬明胶胶囊或软明胶胶囊)。药物组合物还可以是小袋、糖衣丸、粉末、颗粒、锭剂或用于重构的粉末的形式。
剂型可以是立即释放的，在这种情况下它们可以包含水溶性或可分散的载体，或者它们可以是延迟释放、持续释放或改良释放的，在这种情况下它们可以包含调节剂型在胃肠道或皮下溶解速率的水不溶性聚合物。
在其他实施方式中，药物组合物可以鼻内、颊内或舌下递送。
水性制剂中的pH可以在pH 3和pH 10之间。在本发明的一个实施方式中，制剂的pH为约7.0至约9.5。在本发明的另一个实施方式中，制剂的pH为约3.0至约7.0。
在本发明的另一个实施方式中，药物组合物包含缓冲剂。缓冲剂的非限制性实例包括：精氨酸、天冬氨酸、二甘氨酸、柠檬酸盐、磷酸氢二钠、富马酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、马来酸、苹果酸、乙酸钠、碳酸钠、磷酸二氢钠、磷酸钠、琥珀酸盐、酒石酸、三甘氨酸和三(羟甲基)-氨基甲烷及其混合物。缓冲剂可以单独存在或以聚集体形式存在，浓度为约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml。
包含这些特定缓冲剂中的每一种的药物组合物构成了本发明的替代实施方式。
在本发明的另一个实施方式中，药物组合物包含防腐剂。防腐剂的非限制性实例包括：苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇、溴硝醇、4-羟基苯甲酸丁酯、氯丁醇、氯甲酚、氯己定、氯苯甘醚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、4-羟基苯甲酸乙酯、咪脲、4-羟基苯甲酸甲酯、苯酚、2-苯氧乙醇、2-苯基乙醇、4-羟基苯甲酸丙酯、脱氢乙酸钠、硫柳汞及其混合物。防腐剂可以单独存在或以聚集体形式存在，浓度为约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml。包含这些特定防腐剂的药物组合物构成了本发明的替代实施方式。
在本发明的另一个实施方式中，药物组合物包含等渗剂。等渗剂的非限制性实例包括盐(例如氯化钠)、氨基酸(例如甘氨酸、组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸和苏氨酸)、糖醇(例如甘油、1,2-丙二醇丙二醇)、1,3-丙二醇和1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)及其混合物。等渗剂的另一个实例包括糖。糖的非限制性实例可以是单糖、二糖或多糖，或水溶性葡聚糖，包括例如果糖，葡萄糖，甘露糖，山梨糖，木糖，麦芽糖，乳糖，蔗糖，海藻糖，葡聚糖，普鲁兰多糖，糊精，环糊精，α-和β-HPCD，可溶性淀粉，羟乙基淀粉和羧甲基纤维素钠。等渗剂的另一个实例是糖醇，其中术语“糖醇”定义为具有至少一个-OH基团的C(4-8)烃。糖醇的非限制性实例包括甘露醇、山梨糖醇、肌醇、半乳糖醇、半乳糖醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。等渗剂可以单独存在或以聚集体形式存在，浓度为约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml。包含这些特定等渗剂中的每一种的药物组合物构成了本发明的替代实施方式。
在本发明的另一个实施方式中，药物组合物包含螯合剂。螯合剂的非限制性实例包括柠檬酸、天冬氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)的盐及其混合物。螯合剂可以单独存在或以聚集体形式存在，浓度为约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml。包含这些特定螯合剂中的每一种的药物组合物构成了本发明的替代实施方式。
在本发明的另一个实施方式中，所述药物组合物包含稳定剂。稳定剂的非限制性实例包括一种或多种聚集抑制剂、一种或多种氧化抑制剂、一种或多种表面活性剂和/或一种或多种蛋白酶抑制剂。
在本发明的另一个实施方式中，所述药物组合物包含稳定剂，其中所述稳定剂为羧基/羟基纤维素及其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)，环糊精，2-甲硫乙醇，聚乙二醇(例如PEG 3350)，聚乙烯醇(PVA)，聚乙烯吡咯烷酮，盐(例如氯化钠)，含硫物质(例如单硫代甘油)或巯基乙酸。稳定剂可以单独存在或以聚集体形式存在，浓度为约0.01mg/ml至约50mg/ml，例如约0.1mg/ml至约20mg/ml。包含这些特定稳定剂中的每一种的药物组合物构成了本发明的替代实施方式。
在本发明的进一步实施方式中，药物组合物包含一种或多种表面活性剂，优选表面活性剂、至少一种表面活性剂或两种不同的表面活性剂。术语“表面活性剂”是指由水溶性(亲水)部分和脂溶性(亲脂性)部分组成的任何分子或离子。表面活性剂可以例如选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和/或两性离子表面活性剂。表面活性剂可以单独存在或以聚集体形式存在，浓度为约0.1mg/ml至约20mg/ml。包含这些特定表面活性剂中的每一种的药物组合物构成了本发明的替代实施方式。
在本发明的另一个实施方式中，药物组合物包含一种或多种蛋白酶抑制剂，例如EDTA和/或苯甲脒盐酸(HCl)。蛋白酶抑制剂可以单独存在或以聚集体形式存在，浓度为约0.1mg/ml至约20mg/ml。包含这些特定蛋白酶抑制剂中的每一种的药物组合物构成了本发明的替代实施方式。
在另一个一般方面，本发明涉及一种生产包含本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，其包括将单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合以获得药物组合物。
使用方法
在另一个一般方面，本发明涉及一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用包含本发明的抗BTLA单克隆和/或双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物。在某些实施方式中，癌症是实体瘤，优选具有浸润性T细胞的实体瘤，更优选具有浸润性T效应细胞的实体瘤，更优选具有表达BTLA的T效应细胞的实体瘤，最优选具有表达在肿瘤微环境中高度表达的BTLA和BTLA配体HVEM的浸润性T效应细胞。癌症可以例如选自但不限于黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌和肝癌。
在另一个一般方面，本发明涉及一种靶向受试者中的癌细胞表面上的BTLA以实现细胞杀伤的方法，所述方法包括向受试者施用特异性结合BTLA的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体或其抗原结合片段，或施用包含本发明的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物。抗BTLA单克隆或双特异性抗体或抗原结合片段与BTLA的结合可以阻断疱疹病毒进入介质(HVEM)与BTLA的结合；在与BTLA结合后激活来自BTLA的下游信号传导；可以抑制B细胞增殖和/或T细胞和/或浆细胞激活；增加促炎细胞因子例如IL-2、CXCL9、CXCL10、IL1β和TNFα产生。单克隆或双特异性抗体或其抗原结合片段可以例如用于募集偶联药物，和/或可以与另一单克隆抗体形成双特异性抗体以介导靶向的癌细胞的死亡。
抗BTLA单克隆或双特异性抗体或抗原结合片段与BTLA的结合可以比对照抗BTLA单克隆或双特异性抗体或其抗原结合片段更多地增加促炎细胞因子例如IL-2、CXCL9、CXCL10、IL1β和TNFα产生。如本文所用，对照抗BTLA抗体可以是能够结合BTLA并阻断BTLA与HVEM结合的抗体。本文所用的对照抗体的实例可以包括但不限于JS004抗BTLA抗体。
可通过本领域已知和本文所述方法表征结合BTLA的抗体及其抗原结合片段的功能活性。表征结合BTLA的抗体及其抗原结合片段的方法包括但不限于亲和力和特异性检测，包括Biacore、ELISA和OctetRed分析，以及通过FACS检测细胞(用BTLA转染的细胞或自然表达BTLA的细胞)上抗体和抗原结合片段与BTLA的结合。根据特定实施方式，表征结合BTLA的抗体及其抗原结合片段的方法包括下文所述方法。
在另一个一般方面，本发明涉及一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者施用分离的单克隆抗体或其抗原结合片段和/或特异性结合BTLA的双特异性抗体或其抗原结合片段或本发明的药物组合物。例如，癌症可以选自黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌和肝癌。
如本文中关于抗BTLA抗体或其抗原结合片段所用，治疗有效量是指调节有需要的受试者的免疫反应的抗BTLA抗体或其抗原结合片段的量。此外，如本文中关于抗BTLA抗体或其抗原结合片段所用，治疗有效量是指导致治疗疾病、病症或状况；预防或减缓疾病、病症或状况进展的抗BTLA抗体或其抗原结合片段的量；或减轻或完全缓解与疾病、病症或病况相关的症状。
根据具体实施方式，待治疗的疾病、病症或病况是癌症。癌症可以是例如黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌和肝癌。
根据具体实施方式，治疗有效量是指足以实现下列效果中的一种、两种、三种、四种或更多种的治疗量：(i)减轻或改善待治疗的疾病、病症或病况或与其相关的症状的严重程度；(ii)减少待治疗的疾病、病症或病况或与其相关的症状的持续时间；(iii)预防待治疗的疾病、病症或病况或与其相关的症状的进展；(iv)引起待治疗的疾病、病症或病况或与其相关的症状的消退；(v)预防所治疗的疾病、病症或状况，或与之相关的症状的发展或发作；(vi)预防所治疗的疾病、病症或状况，或与之相关的症状的复发；(vii)减少患有所治疗的疾病、病症或状况，或与之相关的症状的受试者的住院时间；(viii)减少患有所治疗的疾病、病症或状况，或与之相关的症状的受试者的住院时间；(ix)增加患有所治疗的疾病、病症或状况，或与之相关的症状的受试者的存活率；(xi)抑制或减轻受试者的所治疗的疾病、病症或状况，或与之相关的症状；和/或(xii)增强或改善另一种疗法的预防或治疗效果。
治疗有效量或剂量可根据各种因素而变化，例如待治疗的疾病、病症或状况，施用方式，靶位，受试者的生理状态(包括例如年龄、体重、健康状况)，受试者是人还是动物，所施用的其他药物以及治疗是预防性的还是治疗性的。治疗剂量经过最佳滴定以优化安全性和有效性。
根据特定实施方式，本文所述的组合物被配制成适合于向受试者施用的预期途径。例如，本文所述的组合物可以被配制成适合于静脉内、皮下或肌肉内施用。
如本文所用，术语“治疗(treat/treating/treatment)”均旨在指与癌症相关的至少一个可测量的物理参数的改善或逆转，该参数不一定在受试者中是可辨别的，但可以在受试者中是可辨别的。术语“治疗(treat/treating/treatment)”还可以指导致疾病、病症或状况的消退、阻止进展或至少减缓其进展。在特定实施方式中，“治疗(treat/treating/treatment)”指缓解、阻止与疾病、病症或状况(例如肿瘤或更优选癌症)相关的一种或多种症状的发展或发作或缩短其持续时间。在特定实施方式中，“治疗(treat/treating/treatment)”是指预防疾病、病症或病况的复发。在特定实施方式中，“治疗(treat/treating/treatment)”是指增加患有疾病、病症或病况的受试者的存活率。在特定实施方式中，“治疗(treat/treating/treatment)”是指消除受试者的疾病、病症或病况。
根据特定实施方式，提供了用于治疗癌症的组合物。对于癌症治疗，所提供的组合物可以与另一种治疗方法组合使用，包括但不限于化疗、抗CD20 mAb、抗EGFR mAb、抗HER-2mAb、抗CD19 mAb、抗CD33mAb、抗CD47 mAb、抗CD73 mAb、抗PD-1mAb、抗PD-L1 mAb、抗CTLAmAb、抗TNFR2 mAb、抗OX40 mAb、其他免疫肿瘤药物、抗血管生成剂、放射疗法、抗体-药物偶联物(ADC)、靶向疗法、其他抗癌药物和/或针对免疫调节靶点的治疗，包括但不限于PD1和PD-L1。针对BTLA的抗体可用于与针对PD-1、PD-L1、CTLA-4、CTLA、TNFR2、OX40、EGFR、HER-2、CD19、CD20、CD33、CD73、CD47和/或CD3的配对mAb一起构建双特异性抗体。识别BTLA上两个不同表位的两种抗体也可用于构建双特异性抗体以治疗表达BTLA的癌症/肿瘤。
如本文所用，在向受试者施用两种或多种疗法的背景下，术语“组合(incombination)”是指使用一种以上的疗法。术语“组合”的使用并不限制向受试者施用疗法的顺序。例如，第一疗法(例如，本文所述的组合物)可以在向受试者施用第二疗法之前(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)，与向受试者施用第二疗法同时或之后(例如，5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、16小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)施用。
在另一个一般方面，本发明涉及一种确定受试者中BTLA水平的方法。所述方法包括(a)从受试者获得样品；(b)将样品与本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和(c)确定受试者中BTLA水平。
如本文所用，“样品”是指从受试者分离的生物样品，可以包括但不限于全血、血清、血浆、血细胞、内皮细胞、组织活检(例如，癌症组织)、淋巴液、腹水、间质液、骨髓、脑脊液、唾液、粘液、痰、汗液、尿液或任何其他分泌物、排泄物或其他体液。“血液样品”是指全血或其任何部分，包括血细胞、血清和血浆。例如，样品可以包含Treg细胞。
在某些实施方式中，可以利用选自但不限于蛋白质印迹分析、免疫组织化学(IHC)和ELISA的分析来确定受试者中BTLA水平。可以利用蛋白质印迹分析和IHC来确定相对蛋白质水平，并且可以利用ELISA来确定绝对蛋白质水平。当确定BTLA的相对水平时，可以在至少两个样品之间确定BTLA水平，例如，在不同时间点来自同一受试者的样品之间、来自同一受试者的不同组织的样品之间和/或来自不同受试者的样品之间。或者，当确定BTLA的绝对水平时，例如通过ELISA，可以通过创建ELISA标准在测试样品之前确定样品中BTLA的绝对水平。本领域技术人员将理解利用本发明的抗体或其抗原结合片段，利用哪些分析技术来确定受试者样品中的BTLA水平。
利用确定受试者样品中BTLA水平的方法可以诊断疾病中异常(升高、降低或不足)的BTLA水平并做出适当的治疗决定。这种疾病可以是癌症。此外，通过监测受试者的BTLA水平，可以根据对特定疾病中和/或特定疾病进展过程中BTLA水平的了解来确定如上所述的患病风险。
实施方式
本发明还提供以下非限制性实施方式。
实施方式1是一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、153、10、11和12；或
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合BTLA，优选特异性结合人BTLA，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。
实施方式2是一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12；或
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合BTLA，优选特异性结合人BTLA，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。
实施方式3是根据实施方式1或实施方式2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有与SEQ ID NO:15或13至少95％相同的多肽序列的重链可变区，或者具有与SEQ ID NO:16或14至少95％相同的多肽序列的轻链可变区。
实施方式4是根据实施方式1-3中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)具有SEQ ID NO:15的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:16的多肽序列的轻链可变区；或
(2)具有SEQ ID NO:13的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ IDNO:14的多肽序列的轻链可变区。
实施方式5是根据实施方式1-4中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的和/或人的或人源化的。
实施方式6是根据实施方式5所述的分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、150、10、11和12；
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
(3)分别为SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12；
(4)分别为SEQ ID NO:7、8、149、10、11和12；
(5)分别为SEQ ID NO:7、8、151、10、11和12；或
(6)分别为SEQ ID NO:7、8、152、10、11和12。
实施方式7是根据实施方式6所述的分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO:141、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、143、145或147至少95％相同的多肽序列的重链可变区，或具有与SEQ ID NO:142、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、144、146或148至少95％相同的多肽序列的轻链可变区。
实施方式8是根据实施方式7所述的分离的人源化单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
(1)具有SEQ ID NO:141的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:142的多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO:17的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:18的多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO:19的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:20的多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO:21的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:22的多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO:23的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:24的多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO:25的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:26的多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO:27的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:28的多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO:29的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:30的多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO:31的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:32的多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO:33的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:34的多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO:35的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:36的多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO:37的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:38的多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO:39的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:40的多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO:41的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:42的多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO:43的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:44的多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO:45的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:46的多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO:47的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:48的多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO:49的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:50的多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO:51的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:52的多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO:53的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:54的多肽序列的轻链可变区；
(21)具有SEQ ID NO:55的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:56的多肽序列的轻链可变区；
(22)具有SEQ ID NO:57的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:58的多肽序列的轻链可变区；
(23)具有SEQ ID NO:59的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:60的多肽序列的轻链可变区；
(24)具有SEQ ID NO:61的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:62的多肽序列的轻链可变区；
(25)具有SEQ ID NO:63的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:64的多肽序列的轻链可变区；
(26)具有SEQ ID NO:65的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:66的多肽序列的轻链可变区；
(27)具有SEQ ID NO:67的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:68的多肽序列的轻链可变区；
(28)具有SEQ ID NO:69的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:70的多肽序列的轻链可变区；
(29)具有SEQ ID NO:71的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:72的多肽序列的轻链可变区；
(30)具有SEQ ID NO:73的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:74的多肽序列的轻链可变区；
(31)具有SEQ ID NO:75的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:76的多肽序列的轻链可变区；
(32)具有SEQ ID NO:77的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:78的多肽序列的轻链可变区；
(33)具有SEQ ID NO:79的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:80的多肽序列的轻链可变区；
(34)具有SEQ ID NO:81的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:82的多肽序列的轻链可变区；
(35)具有SEQ ID NO:83的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:84的多肽序列的轻链可变区；
(36)具有SEQ ID NO:85的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:86的多肽序列的轻链可变区；
(37)具有SEQ ID NO:87的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:88的多肽序列的轻链可变区；
(38)具有SEQ ID NO:89的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:90的多肽序列的轻链可变区；
(39)具有SEQ ID NO:91的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:92的多肽序列的轻链可变区；
(40)具有SEQ ID NO:93的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:94的多肽序列的轻链可变区；
(41)具有SEQ ID NO:95的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:96的多肽序列的轻链可变区；
(42)具有SEQ ID NO:97的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:98的多肽序列的轻链可变区；
(43)具有SEQ ID NO:99的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:100的多肽序列的轻链可变区；
(44)具有SEQ ID NO:101的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:102的多肽序列的轻链可变区；
(45)具有SEQ ID NO:103的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:104的多肽序列的轻链可变区；
(46)具有SEQ ID NO:105的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:106的多肽序列的轻链可变区；
(47)具有SEQ ID NO:107的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:108的多肽序列的轻链可变区；
(48)具有SEQ ID NO:109的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:110的多肽序列的轻链可变区；
(49)具有SEQ ID NO:111的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:112的多肽序列的轻链可变区；
(50)具有SEQ ID NO:113的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:114的多肽序列的轻链可变区；
(51)具有SEQ ID NO:115的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:116的多肽序列的轻链可变区；
(52)具有SEQ ID NO:117的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:118的多肽序列的轻链可变区；
(53)具有SEQ ID NO:119的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:120的多肽序列的轻链可变区；
(54)具有SEQ ID NO:121的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:122的多肽序列的轻链可变区；
(55)具有SEQ ID NO:123的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:124的多肽序列的轻链可变区；
(56)具有SEQ ID NO:125的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:126的多肽序列的轻链可变区；
(57)具有SEQ ID NO:127的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:128的多肽序列的轻链可变区；
(58)具有SEQ ID NO:129的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:130的多肽序列的轻链可变区；
(59)具有SEQ ID NO:131的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:132的多肽序列的轻链可变区；
(60)具有SEQ ID NO:133的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:134的多肽序列的轻链可变区；
(61)具有SEQ ID NO:135的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:136的多肽序列的轻链可变区；
(62)具有SEQ ID NO:137的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:138的多肽序列的轻链可变区；
(63)具有SEQ ID NO:139的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:140的多肽序列的轻链可变区；
(64)具有SEQ ID NO:143的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:144的多肽序列的轻链可变区；
(65)具有SEQ ID NO:145的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:146的多肽序列的轻链可变区；或
(66)具有SEQ ID NO:147的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:148的多肽序列的轻链可变区。
实施方式9是根据实施方式1-8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段以小于约25nM、20nM、15nM、5nM、2nM、1nM或0.5nM的KD与人BTLA结合。
实施方式10是根据实施方式1-8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段是人BTLA的激动剂并且在与BTLA结合后激活来自BTLA的下游信号传导。
实施方式11是根据实施方式1-8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够抑制B细胞增殖和/或T细胞和/或浆细胞激活。
实施方式12是根据实施方式11所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述T细胞选自CD4 T细胞、CD8 T细胞、Th1 T细胞、TFH T细胞、αβT细胞和γδT细胞。
实施方式13是根据实施方式1-8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够阻断或消除BTLA与疱疹病毒进入介质(HVEM)的结合。
实施方式14是根据实施方式1-8中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够增加促炎细胞因子产生；和/或介导偶联药物的募集；和/或与具有杀癌作用的另一mAb或其抗原结合片段形成双特异性抗体。
实施方式15是根据实施方式14所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述促炎细胞因子选自干扰素γ(IFNγ)、白细胞介素-2(IL-2)、C-X-C基序趋化因子配体9(CXCL9)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10)、白细胞介素1β(IL1β)和/或肿瘤坏死因子α(TNFα)。
实施方式16是根据实施方式1-15中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合食蟹猕猴BTLA。
实施方式17是一种双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含根据实施方式1-16中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
实施方式18是一种分离的核酸，其编码根据实施方式1-16中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段。
实施方式19是一种分离的核酸，其编码根据实施方式17所述的双特异性抗体或其抗原结合片段。
实施方式20是一种载体，其包含根据实施方式18或实施方式19所述的分离的核酸。
实施方式21是一种宿主细胞，其包含根据实施方式20所述的载体。
实施方式22是一种药物组合物，其包含根据实施方式1-16中任一项所述的分离的单克隆抗体或抗原结合片段或者根据实施方式17所述的双特异性抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。
实施方式23是一种靶向癌细胞表面上的BTLA和/或在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述有此需要的受试者施用根据实施方式22所述的药物组合物。
实施方式24是根据实施方式23所述的方法，其中所述癌症是实体瘤，优选具有浸润性T细胞的实体瘤，更优选具有浸润性T效应细胞的实体瘤，更优选具有表达BTLA的T效应细胞的实体瘤，最优选具有表达在肿瘤微环境中高表达的BTLA和BTLA配体HVEM的浸润性T效应细胞的实体瘤。
实施方式25是根据实施方式23或实施方式24所述的方法，其中所述癌症选自黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌和肝癌。
实施方式26是根据权利要求23-25中任一项所述的方法，其中所述受试者包含表达BTLA的T细胞、B细胞、树突状细胞(DC)或自然杀伤(NK)细胞。
实施方式27是根据实施方式23-26中任一项所述的方法，其中所述药物组合物还包含第二抗癌剂。
实施方式28是根据实施方式27所述的方法，其中所述第二抗癌剂是抗PD-1抗体或其抗原结合片段。
实施方式29是一种产生根据实施方式1-16中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段或根据实施方式17所述的双特异性抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在产生所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从所述细胞或培养物回收所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段。
实施方式30是一种产生包含根据实施方式1-16中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或根据实施方式17所述的双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，其包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合以获得所述药物组合物。
实施方式31是一种确定受试者中BTLA水平的方法，所述方法包括：
a.从所述受试者获得样品；
b.将所述样品与根据实施方式1-16中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和
c.确定所述受试者中BTLA水平。
实施方式32是根据实施方式31所述的方法，其中所述样品是组织样品或血液样品，任选地，其中所述组织样品是癌症组织样品。
实施方式33是根据实施方式31所述的方法，其中所述样品包含T细胞、B细胞、树突状细胞(DC)或自然杀伤(NK)细胞。
实施例
实施例1：与食蟹猕猴BTLA交叉反应的抗人BTLA阻断抗体的鉴定。
本实施例描述了两种小鼠先导抗体候选物—HFB6-2和HFB6-3(序列在下表2-5中描述)的鉴定，所述鉴定基于它们逆转HVEM介导的T细胞抑制的能力，所述能力的程度与基准抗BTLA阻断抗体(在本文中称为JS004)相似。
表2：通过IMGT方法确定的抗BTLA mAb重链的CDR区1-3。
表3：通过IMGT方法确定的抗BTLA mAb轻链的CDR区1-3。
表4：抗BTLA mAb的重链可变区的序列。
表5：抗BTLA mAb的轻链可变区的序列。
在HVEM-BTLA阻断报告基因检测中，将工程化以表达TCR激活剂(TCRa)和HVEM(BTLA的配体)的CHO细胞系与表达BTLA的Jurkat报告基因细胞系和由NFAT结合启动子驱动的荧光素酶报告基因共培养。基于其缓解HVEM-BTLA相互作用和恢复荧光素酶报告基因信号的能力，筛选了一组抗BTLA抗体候选物(图1A-1B)。HFB6-2和HFB6-3能够在此报告基因检测中将TCR激活恢复至与基准JS004相似的程度。
在图2A-2B中，将过度表达人BTLA的HEK293细胞和过度表达食蟹猕猴BTLA的Expi293细胞与不同浓度的抗BTLA亲本抗体一起温育。通过FACS用AF647偶联的抗人IgG Fc第二抗体定量抗BTLA抗体与靶细胞的结合。结果表明HFB6-2和HFB6-3以个位数nM和亚nM的EC50与人BTLA和食蟹猕猴BTLA结合(表6)。
表6：HFB-2和HFB-6与人和食蟹猕猴BTLA的结合
| 抗体 | hBTLA结合EC50(nM) | CynoBTLA结合EC50(nM) |
| HFB6-2 | 2.342 | 0.6135 |
| HFB6-3 | 1.446 | 0.8231 |
| JS004 | 0.8045 | 0.5611 |
实施例2：HFB6-2和HFB6-3是抗BTLA阻断剂。
本实施例表明HFB6-2和HFB6-3阻断重组HVEM可溶性蛋白与细胞BTLA之间的相互作用并减轻T细胞中HVEM介导的TCR抑制。
在图3A中，重组HVEM可溶性蛋白与DyLight 650(DL650)荧光团偶联。将过度表达hBTLA的HEK293细胞(HEK293.BTLA)与浓度增加的HFB6-2和HFB6-3在4℃下预孵育30分钟，然后与DL650偶联的HVEM再孵育30分钟。洗涤后，通过FACS测量HEK293.BTLA细胞上与BTLA保持结合的可溶性HVEM。HFB6-2和HFB6-3阻断了可溶性HVEM和细胞BTLA相互作用，IC50为个位数nM。
在图3B中，在HVEM-BTLA阻断报告基因检测中评估了HFB6-2和HFB6-3的功能阻断剂活性。在该检测中，将工程化以表达TCR激活剂(TCRa)和HVEM(BTLA的配体)的CHO细胞系与表达BTLA的Jurkat报告基因细胞系和由NFAT结合启动子驱动的荧光素酶报告基因共培养。使用HFB6-2和HFB6-3以与基准JS004类似的剂量依赖性方式恢复了荧光素酶报告基因信号。
表7：HFB6-2和HFB6-3阻断能力
实施例3：HFB6-2和HFB6-3与原代T细胞和B细胞结合。
本实施例表明HFB6-2和HFB6-3分别以个位数nM和亚nM的EC50与原代T细胞和B细胞结合。
在图4A-4D中，使用EasySepTM人T细胞分离试剂盒和B细胞分离试剂盒(STEMCELLTechnologies；Vancouver,Canada)从人PBMC中分离原代T细胞和B细胞。将分离的T细胞或B细胞与不同浓度的抗BTLA亲本抗体一起温育。通过FACS用AF647偶联的抗人IgG Fc第二抗体定量抗BTLA抗体与靶细胞的结合。
实施例4：HFB6-2和HFB6-3逆转HVEM介导的对原代CD4+T细胞增殖的抑制。
在图5A-5B中，将抗CD3抗体与重组HVEM-Fc融合蛋白或对照Fc蛋白(ctl-Fc)一起在4℃下包被细胞培养板过夜。使用EasySepTM人CD4+T细胞分离试剂盒(STEMCELLTechnologies)从人PBMC中分离原代CD4+T细胞并用CFSE标记。将CD4+T细胞添加到抗CD3和HVEM-Fc包被板上并与抗CD28和抗BTLA阻断抗体以及同种型匹配的对照抗体(MGO53)一起温育。4天后，通过与未刺激的CD4+T细胞相关的CFSE稀释度(％CFSElo)来量化CD4+T细胞增殖。HFB6-2和HFB6-3逆转了HVEM介导的对原代CD4+T细胞增殖的抑制。
实施例5：HFB6-3增加IFNγ产生并与抗PD1在混合淋巴细胞反应(MLR)检测中协同作用。
在图6的MLR检测中，使用EasySepTM人单核细胞分离试剂盒从一个PBMC供体分离CD14+单核细胞，用GM-CSF和IL-4分化成未成熟树突状细胞5天，然后用LPS分化成成熟树突状细胞(moDC)2天。之后，在抗BTLA抗体和/或抗PD1抗体存在下，将moDC与来自第二供体的原代T细胞以1:10的比例混合。5天后，用AlphaLISA测量上清液中的IFNγ。在测试的两个moDC：T细胞对中，与同种型对照(MGO53)相比，单独的HFB6-3增强了IFNγ的产生。HFB6-3与抗PD1结合进一步增强了IFNγ的产生。
实施例6：HFB6-3单独或与抗PD1组合在原发性分离肿瘤培养物中诱导IFNγ和促炎细胞因子产生。
使用人肿瘤分离试剂盒(Miltenyi Biotec；Bergisch Gladbach,Germany)将肺癌和黑色素瘤癌症患者的原发性肿瘤组织分离成单细胞悬浮液。通过FACS测量肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)上的BTLA和PD1表达。在抗CD3(10ng/ml)存在下，将1x105个分离的肿瘤细胞与HFB6-3和/或抗PD1一起培养。在治疗后第3天收获上清液，并用人细胞因子/趋化因子48-Plex Discovery (HD48)(Eve Technologies；Calgary,Canada)进行分析。还在治疗后第7天收获上清液并用IFNγELISA(R&D systems；Minneapolis,MN)进行分析。HFB6-3在以下方面显示出单一试剂作用以及与抗PD1的协同作用：在多种原发性肺和黑色素瘤肿瘤培养物中上调多种促炎细胞因子。
在图7A-7G中，从肺癌患者分离的肿瘤组织TIL 320具有比TIL619更高的BTLA+CD4+T细胞百分比。在TIL320中，单独使用HFB6-3治疗可增加IL-2、CXCL9、IL1β和IFNγ的产生。与单一试剂治疗相比，HFB6-3和抗PD1的组合进一步增强了IL-2、CXCL10、TNFα和IFNγ的产生(图7B、7D、7E和7G)。在TIL619中，HFB6-3没有表现出单一试剂效应。然而，与单独的抗PD1治疗相比，HFB6-3与抗PD1组合使用进一步增强了IL-2、CXCL9、CXCL10、TNFa和IFNγ的产生(图7B、7C、7D、7E和7G)。
实施例7：野生型C57BL/6小鼠和hBTLA敲入小鼠中HFB6-2和HFB6-3的理想PK曲线。
在本实验中(图8A和8B)，将单剂量(10mg/kg)的HFB6-2、HFB6-3和基准JS004注射到野生型C57BL/6小鼠(静脉注射途径，图8A)和hBTLA敲入小鼠(腹腔注射途径，hBTLA KI，图8B)中。在1小时、24小时和72小时时，对野生型C57BL/6小鼠抽血。在0.5小时、6小时、24小时、48小时、72小时、96小时和168小时时，对hBTLA KI小鼠抽血。通过ELISA测量所选抗体的血浆浓度。
向野生型C57BL/6或hBTLA KI小鼠单次静脉注射或腹腔注射施用HFB6-2或HFB6-3(10mg/kg)导致血浆浓度>40μg/ml至少持续72小时(图8A和8B)；支持q3d或更低频率的施用以进行功效评估。
实施例8：HFB6-2和HFB6-3人源化抗体的功能分析
根据标准人源化方案生成21种HFB6-2人源化变体(例如，HFB6-2hz1至-hz21)，并对所得的人源化变体进行测试以鉴定保持亲本HFB6-2阻断活性的高亲和力结合剂。
在图9中，在ELISA结合测验中评估了人源化HFB6-2变体与重组人BTLA的结合。所有测试的HFB6-2人源化变体在ELISA测验中均保持亲本HFB6-2抗体结合亲和力。其中，HFB6-2hz16、HFB6-2hz18和HFB6-2hz20在HVEM-BTLA阻断报告基因检测中表现出与亲本HFB6-2最接近的功能阻断活性(图9和表8)。
表8：人源化HFB6-2变体在ELISA和报告基因检测中的EC50
| 抗体 | ELISA EC50(nM) | 报告基因EC50(nM) |
| JS004-hG4P | 2.428 | 13.12 |
| HFB6-2-hG4P | 2.345 | 11.47 |
| HFB6-2hz8-hG4P | 3.96 | 66.85 |
| HFB6-2hz9-hG4P | 3.292 | 36.67 |
| HFB6-2hz0-hG4P | 3.214 | 46.99 |
| HFB6-2hz11-hG4P | 3.664 | 19.41 |
| HFB6-2hz12-hG4P | 5.053 | 43.21 |
| HFB6-2hz15-hG4P | 2.744 | 19.57 |
| HFB6-2hz16-hG4P | 2.392 | 10.84 |
| HFB6-2hz17-hG4P | 2.404 | 18.22 |
| HFB6-2hz18-hG4P | 2.242 | 10.82 |
| HFB6-2hz19-hG4P | 2.549 | 22.11 |
| HFB6-2hz20-hG4P | 2.507 | 9.774 |
根据标准人源化方案生成了45种HFB6-3人源化变体，包括HCDR3上的Cys突变体(例如，HFB6-3hz1-hG4P至HFB6-3hz21-hG4P、HFB6-3hz20-hG4P-C109A/S/T/V)。由于HFB6-3的HCDR3上有一个未配对的Cys，因此几种人源化变体上的C109突变为A/S/T/V。在HVEM-BTLA阻断报告基因检测中(图10A-10C)，多种人源化HFB6-3变体(包括但不限于HFB6-3hz6-hG4P、HFB6-3hz13-hG4P、HFB6-3hz20-hG4P、HFB6-3hz20-hG4P-C109A、HFB6-3hz24-hG4P-C109A、HFB6-3hz25-hG4P-C109A、HFB6-3hz24-hG4P-C109S、HFB6-3hz25-hG4P-C109S)将TCR激活恢复至接近亲本HFB6-3的水平。
人源化抗体序列在下表9-12中提供:
表9：HFB6-2和HFB6-3 mAb的人源化重链可变区的序列。
表10：HFB6-2和HFB6-3 mAb的人源化轻链可变区的序列。
表11：通过IMGT方法确定的人源化抗BTLA mAb的人源化重链的CDR区1-3。
表12：通过IMGT方法确定的人源化抗BTLA mAb的人源化轻链的CDR区1-3。
实施例9：具有半胱氨酸突变的HFB6-3人源化变体的结合和交叉反应性。
在图11A和11B中，过度表达人BTLA的HEK293(图11A)和过度表达食蟹猕猴BTLA的Expi293细胞(图11B)与不同浓度的选定的具有半胱氨酸突变的HFB6-3人源化变体一起温育。通过FACS使用AF647偶联的抗人IgG Fc第二抗体对与靶细胞结合的抗BTLA抗体进行定量。HFB6-3hz24-hG4P-C109A、HFB6-3hz25-hG4P-C109A、HFB6-3hz24-hG4P-C109S和HFB6-3hz25-hG4P-C109S与人BTLA和食蟹猕猴BTLA结合，EC50为个位数nM和亚nM，与亲本HFB6-3相似(图11A和11B以及表13)。
表13：HFB6-3人源化抗体能够结合人和食蟹猕猴BTLA。
实施例10：阻断具有半胱氨酸突变的HFB6-3人源化变体的活性。
本实施例表明，与亲本HFB6-3抗体相比，选定的具有半胱氨酸突变的HFB6-3人源化变体阻断了重组HVEM可溶性蛋白与细胞BTLA之间的相互作用，并减轻了T细胞中HVEM介导的TCR抑制。
在图12A中，重组HVEM可溶性蛋白与DyLight 650(DL650)荧光团偶联。将过度表达hBTLA(HEK293.BTLA)的HEK293细胞与浓度增加的选定的HFB6-3人源化变体(具有半胱氨酸突变体或亲本HFB6-3)在4℃下预温育30分钟，然后与DL650偶联的HVEM再温育30分钟。洗涤后，用FACS测量HEK293.BTLA细胞上与BTLA保持结合的可溶性HVEM。HFB6-3hz24-hG4P-C109A、HFB6-3hz25-hG4P-C109A、HFB6-3hz24-hG4P-C109S和HFB6-3hz25-hG4P-C109S阻断了可溶性HVEM和细胞BTLA相互作用，IC50为个位数nM，与亲本HFB6-3相当(图12A和表14)。
表14：HFB6-3人源化抗体阻断了可溶性HVEM和细胞BTLA相互作用。
在图12B中，在HVEM-BTLA阻断报告基因检测中评估了所选的具有半胱氨酸突变的HFB6-3人源化变体的功能阻断活性。在该检测中，将工程化以表达TCR激活剂(TCRa)和HVEM(BTLA的配体)的CHO细胞系与表达BTLA的Jurkat报告基因细胞系和由NFAT结合启动子驱动的荧光素酶报告基因共培养。使用HFB6-3hz24-hG4P-C109A、HFB6-3hz25-hG4P-C109A、HFB6-3hz24-hG4P-C109S和HFB6-3hz25-hG4P-C109S以与亲本HFB6-3类似的剂量依赖性方式恢复了荧光素酶报告基因信号(图12B和表15)。
表15:HFB6-3人源化抗体阻断HVEM/BTLA相互作用。
实施例11：具有半胱氨酸突变的HFB6-3人源化变体反向介导对原发性CD4+T细胞增殖的抑制。
在图13中，在与实施例4相同的检测中评估了选定的具有半胱氨酸突变的HFB6-3人源化变体。HFB6-3hz24-hG4P-C109A、HFB6-3hz25-hG4P-C109A、HFB6-3hz24-hG4P-C109S和HFB6-3hz25-hG4P-C109S逆转了HVEM介导的对原发性CD4+T细胞增殖的抑制，类似于亲本HFB6-3抗体。
实施例12：具有半胱氨酸突变的HFB6-3人源化变体在原发性分离肿瘤培养物中诱导IFNγ和促炎细胞因子产生。
在图14A-14C和图15A-15C中，其检测与实施例6中相同。TIL F和TIL O是来自肺癌患者的分离肿瘤样品。在图14A-14C中，与TIL F中仅单一试剂治疗相比，HFB6-3hz24-hG4P-C109S与抗PD1的组合治疗增强了CXCL9、IL2、IL1β、TNFα、IFNγ、GM-CSF和IL-17A产生。在图15A-15C中，仅HFB6-3hz24-hG4P-C109S治疗增强了IL1β、TNFα和IFNγ产生，其程度比抗PD1或基准JS004在TIL O中更强。
本领域技术人员将理解，可以对上述实施方式进行改变，而不会背离其广泛的发明概念。因此，应理解，本发明不限于所公开的特定实施方式，而是旨在涵盖本说明书所限定的本发明范围内的修改。
Claims (32)
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、153、10、11和12；或
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)，优选人BTLA，任选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段不是天然存在的。
2.根据权利要求1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含具有与SEQ IDNO:15或13至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的重链可变区，或者具有与SEQ ID NO:16或14至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的多肽序列的轻链可变区。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)具有SEQ ID NO:15的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:16的多肽序列的轻链可变区；或者
(2)具有SEQ ID NO:13的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:14的多肽序列的轻链可变区。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合的和/或人的或人源化的。
5.根据权利要求4所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有以下多肽序列的重链互补决定区1(HCDR1)、HCDR2、HCDR3、轻链互补决定区1(LCDR1)、LCDR2和LCDR3：
(1)分别为SEQ ID NO:7、8、150、10、11和12；
(2)分别为SEQ ID NO:1、2、3、4、5和6；
(3)分别为SEQ ID NO:7、8、9、10、11和12；
(4)分别为SEQ ID NO:7、8、149、10、11和12；
(5)分别为SEQ ID NO:7、8、151、10、11和12；或
(6)分别为SEQ ID NO:7、8、152、10、11和12。
6.根据权利要求5所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含具有与SEQ ID NO:141、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、143、145或147至少95％相同的多肽序列的重链可变区，或者具有与SEQ ID NO:142、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、144、146或148至少95％相同的多肽序列的轻链可变区。
7.根据权利要求6所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述分离的单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
(1)具有SEQ ID NO:141的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:142的多肽序列的轻链可变区；
(2)具有SEQ ID NO:17的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:18的多肽序列的轻链可变区；
(3)具有SEQ ID NO:19的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:20的多肽序列的轻链可变区；
(4)具有SEQ ID NO:21的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:22的多肽序列的轻链可变区；
(5)具有SEQ ID NO:23的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:24的多肽序列的轻链可变区；
(6)具有SEQ ID NO:25的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:26的多肽序列的轻链可变区；
(7)具有SEQ ID NO:27的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:28的多肽序列的轻链可变区；
(8)具有SEQ ID NO:29的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:30的多肽序列的轻链可变区；
(9)具有SEQ ID NO:31的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:32的多肽序列的轻链可变区；
(10)具有SEQ ID NO:33的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:34的多肽序列的轻链可变区；
(11)具有SEQ ID NO:35的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:36的多肽序列的轻链可变区；
(12)具有SEQ ID NO:37的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:38的多肽序列的轻链可变区；
(13)具有SEQ ID NO:39的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:40的多肽序列的轻链可变区；
(14)具有SEQ ID NO:41的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:42的多肽序列的轻链可变区；
(15)具有SEQ ID NO:43的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:44的多肽序列的轻链可变区；
(16)具有SEQ ID NO:45的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:46的多肽序列的轻链可变区；
(17)具有SEQ ID NO:47的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:48的多肽序列的轻链可变区；
(18)具有SEQ ID NO:49的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:50的多肽序列的轻链可变区；
(19)具有SEQ ID NO:51的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:52的多肽序列的轻链可变区；
(20)具有SEQ ID NO:53的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:54的多肽序列的轻链可变区；
(21)具有SEQ ID NO:55的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:56的多肽序列的轻链可变区；
(22)具有SEQ ID NO:57的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:58的多肽序列的轻链可变区；
(23)具有SEQ ID NO:59的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:60的多肽序列的轻链可变区；
(24)具有SEQ ID NO:61的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:62的多肽序列的轻链可变区；
(25)具有SEQ ID NO:63的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:64的多肽序列的轻链可变区；
(26)具有SEQ ID NO:65的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:66的多肽序列的轻链可变区；
(27)具有SEQ ID NO:67的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:68的多肽序列的轻链可变区；
(28)具有SEQ ID NO:69的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:70的多肽序列的轻链可变区；
(29)具有SEQ ID NO:71的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:72的多肽序列的轻链可变区；
(30)具有SEQ ID NO:73的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:74的多肽序列的轻链可变区；
(31)具有SEQ ID NO:75的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:76的多肽序列的轻链可变区；
(32)具有SEQ ID NO:77的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:78的多肽序列的轻链可变区；
(33)具有SEQ ID NO:79的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:80的多肽序列的轻链可变区；
(34)具有SEQ ID NO:81的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:82的多肽序列的轻链可变区；
(35)具有SEQ ID NO:83的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:84的多肽序列的轻链可变区；
(36)具有SEQ ID NO:85的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:86的多肽序列的轻链可变区；
(37)具有SEQ ID NO:87的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:88的多肽序列的轻链可变区；
(38)具有SEQ ID NO:89的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:90的多肽序列的轻链可变区；
(39)具有SEQ ID NO:91的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:92的多肽序列的轻链可变区；
(40)具有SEQ ID NO:93的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:94的多肽序列的轻链可变区；
(41)具有SEQ ID NO:95的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:96的多肽序列的轻链可变区；
(42)具有SEQ ID NO:97的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:98的多肽序列的轻链可变区；
(43)具有SEQ ID NO:99的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:100的多肽序列的轻链可变区；
(44)具有SEQ ID NO:101的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:102的多肽序列的轻链可变区；
(45)具有SEQ ID NO:103的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:104的多肽序列的轻链可变区；
(46)具有SEQ ID NO:105的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:106的多肽序列的轻链可变区；
(47)具有SEQ ID NO:107的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:108的多肽序列的轻链可变区；
(48)具有SEQ ID NO:109的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:110的多肽序列的轻链可变区；
(49)具有SEQ ID NO:111的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:112的多肽序列的轻链可变区；
(50)具有SEQ ID NO:113的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:114的多肽序列的轻链可变区；
(51)具有SEQ ID NO:115的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:116的多肽序列的轻链可变区；
(52)具有SEQ ID NO:117的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:118的多肽序列的轻链可变区；
(53)具有SEQ ID NO:119的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:120的多肽序列的轻链可变区；
(54)具有SEQ ID NO:121的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:122的多肽序列的轻链可变区；
(55)具有SEQ ID NO:123的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:124的多肽序列的轻链可变区；
(56)具有SEQ ID NO:125的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:126的多肽序列的轻链可变区；
(57)具有SEQ ID NO:127的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:128的多肽序列的轻链可变区；
(58)具有SEQ ID NO:129的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:130的多肽序列的轻链可变区；
(59)具有SEQ ID NO:131的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:132的多肽序列的轻链可变区；
(60)具有SEQ ID NO:133的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:134的多肽序列的轻链可变区；
(61)具有SEQ ID NO:135的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:136的多肽序列的轻链可变区；
(62)具有SEQ ID NO:137的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:138的多肽序列的轻链可变区；
(63)具有SEQ ID NO:139的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:140的多肽序列的轻链可变区；
(64)具有SEQ ID NO:143的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:144的多肽序列的轻链可变区；
(65)具有SEQ ID NO:145的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:146的多肽序列的轻链可变区；或
(66)具有SEQ ID NO:147的多肽序列的重链可变区，和具有SEQ ID NO:148的多肽序列的轻链可变区。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段以小于约25nM、20nM、15nM、5nM、2nM、1nM或0.5nM的KD与人BTLA结合。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段是人BTLA的激动剂并且在与BTLA结合后激活来自BTLA的下游信号传导。
10.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够抑制B细胞增殖和/或T细胞和/或浆细胞激活。
11.根据权利要求10所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述T细胞选自CD4 T细胞、CD8 T细胞、Th1 T细胞、TFH T细胞、αβT细胞和γδT细胞。
12.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够阻断或消除BTLA与疱疹病毒进入介质(HVEM)的结合。
13.根据权利要求1-7中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够增加促炎细胞因子产生；介导偶联药物的募集；和/或与具有杀癌作用的另一mAb或其抗原结合片段形成双特异性抗体。
14.根据权利要求13中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述促炎细胞因子选自干扰素γ(IFNγ)、白细胞介素-2(IL-2)、C-X-C基序趋化因子配体9(CXCL9)、C-X-C基序趋化因子配体10(CXCL10)、白细胞介素1β(IL1β)和/或肿瘤坏死因子α(TNFα)。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述单克隆抗体或其抗原结合片段特异性结合食蟹猕猴BTLA。
16.一种双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含根据权利要求1-15中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
17.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1-15中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
18.一种分离的核酸，其编码根据权利要求16所述的双特异性抗体或其抗原结合片段。
19.一种载体，其包含根据权利要求17或权利要求18所述的分离的核酸。
20.一种宿主细胞，其包含根据权利要求19所述的载体。
21.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-15中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段或者根据权利要求16所述的双特异性抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。
22.一种靶向癌细胞表面上的BTLA和/或在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向所述受试者施用根据权利要求21所述的药物组合物。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述癌症是实体瘤，优选具有浸润性T细胞的实体瘤，更优选具有浸润性T效应细胞的实体瘤，更优选具有表达BTLA的T效应细胞的实体瘤，最优选具有表达在肿瘤微环境中高度表达的BTLA和BTLA配体HVEM的浸润性T效应细胞的实体瘤。
24.根据权利要求22或权利要求23所述的方法，其中所述癌症选自黑色素瘤、肺癌、肾细胞癌和肝癌。
25.根据权利要求22-24中任一项所述的方法，其中所述受试者包含表达BTLA的T细胞、B细胞、树突状细胞(DC)或自然杀伤(NK)细胞。
26.根据权利要求22-25中任一项所述的方法，其中所述药物组合物还包含第二抗癌剂。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述第二抗癌剂是抗PD1抗体或其抗原结合片段。
28.一种产生根据权利要求1-15中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者根据权利要求16所述的双特异性抗体或其抗原结合片段的方法，其包括在产生所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的条件下培养包含编码所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段的核酸的细胞，并从所述细胞或培养物中回收所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段。
29.一种产生包含根据权利要求1-15中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段或者根据权利要求16所述的双特异性抗体或其抗原结合片段的药物组合物的方法，其包括将所述单克隆抗体或其抗原结合片段或者双特异性抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体组合以获得所述药物组合物。
30.一种确定受试者中BTLA水平的方法，所述方法包括：
a.从所述受试者获得样品；
b.将所述样品与根据权利要求1-15中任一项所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段接触；和
c.确定所述受试者中BTLA水平。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述样品是组织样品或血液样品，任选地其中所述组织样品是癌症组织样品。
32.根据权利要求30所述的方法，其中所述样品包含T细胞、B细胞、树突状细胞(DC)或自然杀伤(NK)细胞。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2022075097 | 2022-01-29 | ||
| CNPCT/CN2022/075097 | 2022-01-29 | ||
| PCT/CN2023/073700 WO2023143565A1 (en) | 2022-01-29 | 2023-01-29 | Anti-btla antibodies and uses thereof in treating cancer |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118647707A true CN118647707A (zh) | 2024-09-13 |
Family
ID=87470702
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202380018767.4A Pending CN118647707A (zh) | 2022-01-29 | 2023-01-29 | 抗btla抗体及其在治疗癌症中的用途 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20240137079A (zh) |
| CN (1) | CN118647707A (zh) |
| AR (1) | AR128389A1 (zh) |
| AU (1) | AU2023213914A1 (zh) |
| IL (1) | IL314373A (zh) |
| MX (1) | MX2024009326A (zh) |
| WO (1) | WO2023143565A1 (zh) |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20120090037A (ko) * | 2009-07-31 | 2012-08-16 | 메다렉스, 인코포레이티드 | Ｂｔｌａ에 대한 완전 인간 항체 |
| KR20180100122A (ko) * | 2015-12-02 | 2018-09-07 | 주식회사 에스티사이언스 | 당화된 btla(b- 및 t-림프구 약화인자)에 특이적인 항체 |
| JOP20190261A1 (ar) * | 2017-05-19 | 2019-11-05 | Lilly Co Eli | أجسام مضادة لعامل مساعد لـ btla واستخداماتها |
| CN110790837A (zh) * | 2018-08-02 | 2020-02-14 | 上海君实生物医药科技股份有限公司 | 抗btla抗体 |
| GB201820554D0 (en) * | 2018-12-17 | 2019-01-30 | Univ Oxford Innovation Ltd | BTLA antibodies |
| JP2022528005A (ja) * | 2019-04-01 | 2022-06-07 | レイクファーマ・インコーポレイテッド | 免疫応答を調節するためおよび疾患を処置するためのｂｔｌａ結合（ｃｄ２７２）抗体 |
-
2023
- 2023-01-29 AU AU2023213914A patent/AU2023213914A1/en active Pending
- 2023-01-29 CN CN202380018767.4A patent/CN118647707A/zh active Pending
- 2023-01-29 IL IL314373A patent/IL314373A/en unknown
- 2023-01-29 WO PCT/CN2023/073700 patent/WO2023143565A1/en active Application Filing
- 2023-01-29 KR KR1020247028540A patent/KR20240137079A/ko unknown
- 2023-01-29 MX MX2024009326A patent/MX2024009326A/es unknown
- 2023-01-30 AR ARP230100218A patent/AR128389A1/es unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL314373A (en) | 2024-09-01 |
| KR20240137079A (ko) | 2024-09-19 |
| AU2023213914A1 (en) | 2024-08-15 |
| WO2023143565A1 (en) | 2023-08-03 |
| MX2024009326A (es) | 2024-08-06 |
| AR128389A1 (es) | 2024-04-24 |
| TW202340254A (zh) | 2023-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20200399389A1 (en) | Anti-cd73 antibodies and uses thereof | |
| AU2018312222A1 (en) | Anti-CD47 antibodies and uses thereof | |
| US11214615B2 (en) | Anti-TIM-3 antibodies and uses thereof | |
| US12037391B2 (en) | Anti-DLL3 antibodies and uses thereof | |
| US11390679B2 (en) | Anti-LAG-3 antibodies and uses thereof | |
| CN115925952A (zh) | 抗叶酸受体1抗体及其用途 | |
| US20220372161A1 (en) | Antibodies against the poliovirus receptor (pvr) and uses thereof | |
| CN118176210A (zh) | 抗ccr8抗体及其用途 | |
| KR20220130687A (ko) | Ltbr 및 edb 결합 도메인을 포함하는 다중특이성 결합 분자 및 이의 용도 | |
| US11306151B2 (en) | Anti-TIP-1 antibodies and uses thereof | |
| WO2023143565A1 (en) | Anti-btla antibodies and uses thereof in treating cancer | |
| TWI857471B (zh) | 抗btla抗體及其於治療癌症之用途 | |
| EA046808B1 (ru) | Антитела против dll3 и их применения |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication |