CN118416108A - 嗜黏蛋白阿克曼氏菌在改善和治疗更年期综合征中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及嗜黏蛋白阿克曼氏菌在改善和治疗更年期综合征中的应用，属于生物医药技术领域，用于解决现有技术中对于改善更年期综合征患者焦虑抑郁等情感障碍治疗效果不佳的技术问题。本发明通过动物实验证明了Akk菌参与了大豆苷元‑雌马酚转化过程，因此，Akk菌可以直接或者被制成药品等形式应用于治疗更年期综合征患者焦虑抑郁等情感障碍，发现了Akk菌在改善和治疗更年期综合征中的新用途。

Description

嗜黏蛋白阿克曼氏菌在改善和治疗更年期综合征中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及嗜黏蛋白阿克曼氏菌在改善和治疗更年期综合征中的应用。

背景技术

更年期综合征又叫绝经综合征，也叫围绝经期综合征，它是指女性绝经前后，因卵巢功能逐渐衰退或丧失，以致雌激素水平出现波动或减少。焦虑抑郁与绝经密切相关，与绝经前女性相比，绝经后女性焦虑抑郁发生风险升高，导致一系列躯体及精神心理症状。

卵巢激素是由机体合成分泌的一种类固醇化合物，包括雌激素以及孕酮等，与女性身心健康密切相关。雌激素具有抗炎和抗氧化效应，可有效抑制活性氧自由基的过量生成，减少细胞凋亡的发生；雌激素还可通过提高海马、额叶皮质和基底前脑中神经营养因子及其受体的表达水平从而发挥神经保护作用。

激素替代疗法(menopausal hormone therapy,MHT)，即补充雌激素或孕激素，长期以来是卵巢激素分泌不足和更年期综合征女性的常规治疗方法，然而，激素替代疗法存在一系列副作用，如增加心血管疾病和癌症发生率，因此亟需寻找其他有效的替代方法。

雌马酚因与雌激素结构相似而具有类雌激素样活性。大豆苷元摄入人体后，经肠道菌群代谢生成雌马酚。

嗜黏蛋白-阿克曼菌是一种革兰氏阴性椭圆形专性厌氧菌。CN116474002A公开了嗜黏蛋白阿克曼氏菌在缓解和治疗精神类疾病中的用途，给出了具体保藏号的嗜黏蛋白阿克曼氏菌，其涉及的精神类疾病是基于小鼠于28d内接受连续刺激建立的抑郁小鼠模型而进行的。众所周知，嗜黏蛋白-阿克曼菌属于阿克曼氏菌菌属，其来源广泛，可从人类及小鼠粪便中分离培养，目前通过测序鉴定出有1659株嗜黏蛋白-阿克曼菌。不同来源的嗜黏蛋白-阿克曼菌的性质存在差异，且该菌属种类繁多，尚不清楚其他来源的嗜黏蛋白-阿克曼菌在缓解和治疗上述精神类疾病中的效果。

目前也没有嗜黏蛋白-阿克曼菌在改善和治疗更年期综合征中的应用的相关报道。

发明内容

鉴于上述的分析，本发明的目的是提供嗜黏蛋白阿克曼氏菌在改善和治疗更年期综合征中的新用途，用于解决现有技术中对于改善更年期综合征患者焦虑抑郁等情感障碍治疗效果不佳的技术问题。

本发明的目的主要是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了嗜黏蛋白阿克曼氏菌在制备改善和治疗更年期综合征制品中的应用。

进一步地，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌为活菌。

进一步地，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌参与大豆苷元生成雌马酚的转化过程。

进一步地，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌通过灌胃给药。

进一步地，所述灌胃给药的剂量为10⁹-10¹⁰CFU。

进一步地，所述制品为药物、食品或保健品。

进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

进一步地，所述食品还包括食品学上可接受的辅料。

进一步地，所述保健品还包括食品学上可接受的辅料。

进一步地，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌在所述药物中的剂量为10⁹-10¹⁰CFU。

与现有技术相比，本发明至少可实现如下有益效果之一：

1、本发明提供的嗜黏蛋白-阿克曼氏菌为嗜黏蛋白-阿克曼菌14P22参与了大豆苷元-雌马酚转化过程，因此，Akk菌14P22可以直接或者被制成药品等形式应用于治疗更年期综合征患者焦虑抑郁等情感障碍，发现了Akk菌14P22在改善和治疗更年期综合征中的新用途。

2、Akk菌14P22属于食用安全的有益菌，使用安全，可以作为针对性治疗更年期综合征的潜在安全药物，因其成分单一，故便于操作，应用前景广泛。

3、Akk菌14P22可以用于防治或治疗更年期综合征的药物、食品或保健品中，为治疗更年期综合征提供了新的安全有效的生物治疗手段。

本发明中，上述各技术方案之间还可以相互组合，以实现更多的优选组合方案。本发明的其他特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分优点可从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过说明书以及附图中所特别指出的内容中来实现和获得。

附图说明

附图仅用于示出具体实施例的目的，而并不认为是对本发明的限制，在整个附图中，相同的参考符号表示相同的部件。

图1为本发明旷场实验大鼠总运动距离数据图；

图2为本发明旷场实验大鼠运动速度数据图；

图3为本发明旷场实验大鼠进入中心区域时间百分比数据图；

图4为本发明旷场实验大鼠进入中心区域距离百分比数据图；

图5为本发明旷场实验大鼠进入中心区域次数数据图；

图6为本发明高架十字迷宫实验大鼠总运动距离数据图；

图7为本发明高架十字迷宫实验大鼠进入开放臂的总次数数据图；

图8为本发明高架十字迷宫实验大鼠进入开放臂的总时间数据图；

图9为本发明高架十字迷宫实验大鼠进入开放臂的时间百分比数据图；

图10为本发明高架十字迷宫实验大鼠进入开放臂的次数百分比数据图；

图11为本发明高架十字迷宫实验大鼠在开放臂的停留时间数据图；

图12为本发明溶媒灌胃组和Akk灌胃组大鼠血清中雌马酚含量示意图；

图13为本发明溶媒灌胃组和Akk灌胃组大鼠血清中大豆苷元含量示意图。

具体实施方式

下面结合附图来具体描述本发明的优选实施例，其中，附图构成本申请一部分，并与本发明的实施例一起用于阐释本发明的原理，并非用于限定本发明的范围。

除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。

除有特别说明，本发明中用到的各种试剂、原料均为可以从市场上购买的商品或者可以通过公知的方法制得的产品。

实施例1Akk菌的获取和培养

本发明所用嗜黏蛋白-阿克曼氏菌为嗜黏蛋白-阿克曼菌14P22菌株由中国科学院微生物研究所提供，分离自类风湿关节炎患者。

保藏单位：中国科学院微生物研究所

保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

保藏编号：CGMCC号1.57141

菌株分离自小鼠粪便，通过改良的GAM培养基经过稀释涂板法，挑取单克隆得到；使用GAM培养基在厌氧环境中对菌株进行传代培养。

所述GAM培养基配方(每1L)：胨10.0g，大豆胨3.0g，酵母浸粉5.0g，牛肉粉2.2g，消化血清粉13.5g，葡萄糖4.0g，磷酸二氢钾2.5g，氯化钠3.0g，可溶性淀粉5.0g，L-半胱氨酸0.8g，硫乙醇酸钠0.3g，纤维二糖1.0g，果糖1.0g，甘露糖1.0g，半乳糖0.5g，帕拉金糖0.5g，海藻糖0.5g，鼠李糖0.5g，菊粉0.5g，精氨酸0.5g，色氨酸0.3g，刃天青1ml，馏胃液5％，碳酸氢钠2.0g，乙酸钠2.46g，氯高铁血红素5ml。

实施例2Akk菌用于治疗更年期综合征测试

1.实验设计与方法

(1)实验动物：使用无菌级雌性SD大鼠(平均11周龄，体重约280-310g)，来自北京大学医学部实验动物中心。无菌级雌性SD大鼠的繁育与饲养均在无菌隔离器中进行，单笼饲养，控制温度23±2℃，湿度为55±5％，光照条件为12h昼夜循环，动物可自由饮食和进食。无菌级大鼠隔离器、鼠笼、水瓶等用品均经过2％过氧乙酸溶液灭菌。实验过程中，动物饲料及饮水经过高温高压灭菌再表面过氧乙酸灭菌后传入。饲料经⁶⁰Co放射线照射灭菌后传入，饲料含豆粕，经检测含有高浓度的底物大豆苷元。

(2)去卵巢手术：所有大鼠进入无菌隔离器适应一周后进行去卵巢(OVX)手术。手术器械、铺单和纱布等经过高温高压灭菌再表面过氧乙酸灭菌后传入，使用三溴乙醇按照25mL/1kg体重的剂量对大鼠进行腹腔麻醉，待大鼠完全麻醉后，进行手术切口定位，切口位于脊柱旁与肋弓下缘交界的凹陷中；备皮时先用动物剃毛刀剃去多余毛发，然后用碘伏从中心向外周擦拭一次，再用75％酒精从中心向外周擦拭一次；用皮剪剪开皮肤后，钝性分离筋膜和肌肉组织，即可看到白色脂肪组织，轻轻拉出后可见脂肪包裹的淡红色桑葚样卵巢；用一次性电刀分离大鼠的卵巢和子宫、脂肪；术后逐一缝合肌肉、筋膜和皮肤。术后恢复一周，随机将大鼠分为3组：溶媒灌胃组(OVX组)，Akk灌胃组(OVX+AKK组)和巴氏灭活AKK灌胃组(OVX+pAKK组)，每组11只。

Akk灌胃组(OVX+AKK组)：隔天灌胃，每次灌胃2*10⁹/CFU的Akk菌液，灌胃28天；其中Akk菌液为Akk菌溶解于1mL的甘油-PBS溶液中，甘油体积分数为20％；

巴氏灭活AKK灌胃组(OVX+pAKK组)：隔天灌胃，每次灌胃2*10⁹/CFU的Akk菌液，灌胃28天；其中Akk菌液为Akk菌溶解于1mL的甘油-PBS溶液中，甘油体积分数为20％；

溶媒灌胃组(OVX组)：隔天灌胃，每次灌胃1mL的甘油-PBS溶液中，甘油体积分数为20％，灌胃28天。

(3)旷场实验：可用于检测大鼠的焦虑样行为。实验装置为一顶部开放的敞箱，大小为100cm×100cm×40cm(长×宽×高)。敞箱底部为黑色，并均匀分为16块区域，最中央的4块设为中心区域，周围12块设为周围区域，敞箱四个侧壁为白色。敞箱顶部约70cm处放置一个摄像头用来记录大鼠的运动情况，其视野可覆盖整个旷场内部，摄像头连接电脑进行视频录制。在实验开始前，将光照强度调整到100Lux左右，保持周围环境安静，使大鼠适应环境约1个小时。实验开始时，将大鼠头部朝向同一个方向由敞箱最中央放入，用摄像头记录大鼠在旷场内10分钟的运动情况。下一只大鼠进行实验前需将旷场擦洗干净，并用75％乙醇擦拭以排除上一只大鼠气味对下一只大鼠行为的影响。待乙醇完全挥发后下一只大鼠方可进行旷场实验；循环该过程，对每一只大鼠进行旷场实验。

实验结束后，保存录制的视频，用Smart软件进行分析，分析指标包括大鼠总运动距离、大鼠运动速度、大鼠进入中心区域时间百分比，大鼠进入中心区域距离百分比，大鼠进入中心区域次数；

如图1和图2所示，从大鼠总运动距离和大鼠运动速度可以看出，溶媒灌胃组(OVX组)，Akk灌胃组(OVX+AKK组)和巴氏灭活AKK灌胃组(OVX+pAKK组)的大鼠均具有良好的自主运动能力；如图3-图5所示，从大鼠进入中心区域时间百分比，大鼠进入中心区域距离百分比和大鼠进入中心区域次数的数据可以看出，溶媒灌胃组(OVX组)，Akk灌胃组(OVX+AKK组)和巴氏灭活AKK灌胃组(OVX+pAKK组)的数据具有较大的差异，大鼠进入中心区域时间百分比，大鼠进入中心区域距离百分比和大鼠进入中心区域次数越小，说明大鼠焦虑行为越重，AKK灌胃组(OVX+AKK组)可以缓解无菌大鼠OVX诱导的焦虑样行为。

(4)高架十字迷宫：可用于检测大鼠的焦虑样行为。实验装置由两个闭合臂(50cm×10cm×45cm，长×宽×高)和两个开放臂(50cm×10cm，长×宽)组成，中间由一个十字形平台连接(10cm×10cm，长×宽)。在实验开始前，将光照强度调整到100Lux左右，保持周围环境安静，使大鼠适应环境约1小时。实验开始时将大鼠朝向开放臂放置于中央平台上，用摄像头记录大鼠在高架十字迷宫中自由运动5分钟的情况。在下一只大鼠进行实验前需将高架十字迷宫擦洗干净，并用75％乙醇擦拭以排除上一只大鼠气味对下一只大鼠行为的影响。待乙醇完全挥发后下一只大鼠方可进行高架十字迷宫实验。循环该过程，对每一只大鼠进行高架十字迷宫实验。

实验结束后保存录制的视频用于离线分析；分析指标包括大鼠总运动距离、大鼠进入开放臂的总次数、大鼠进入开放臂的总时间、大鼠进入开放臂的时间百分比、大鼠进入开放臂的次数百分比和大鼠在开放臂的停留时间；

如图6-图8所示，从大鼠总运动距离、大鼠进入开放臂的总次数、大鼠进入开放臂的总时间可以看出，溶媒灌胃组(OVX组)，Akk灌胃组(OVX+AKK组)和巴氏灭活AKK灌胃组(OVX+pAKK组)的大鼠均具有良好的自主运动能力；如图9-图11所示，从大鼠进入开放臂的时间百分比、大鼠进入开放臂的次数百分比和大鼠在开放臂的停留时间的数据可以看出，溶媒灌胃组(OVX组)，Akk灌胃组(OVX+AKK组)和巴氏灭活AKK灌胃组(OVX+pAKK组)的数据具有较大的差异，大鼠进入开放臂的时间百分比、大鼠进入开放臂的次数百分比和大鼠在开放臂的停留时间越小，说明大鼠焦虑行为越重，AKK灌胃组(OVX+AKK组)可以缓解无菌大鼠OVX诱导的焦虑样行为。

2.实验结果

(1)实验第29天，对各组大鼠进行高架十字迷宫及旷场行为学检测。结果显示AKK灌胃组(OVX+AKK组)可以缓解无菌大鼠OVX诱导的焦虑样行为，而巴氏灭活AKK菌不能缓解OVX诱导的焦虑样行为。实验结果如图1-图11所示。

(2)高架十字迷宫及旷场行为学检测结束后，在AKK灌胃组(OVX+AKK组)大鼠和溶媒灌胃组(OVX组)大鼠心尖取血，测试血清中大豆苷元和雌马酚的浓度，采用超高效液相色谱质谱联用技术(LC/MS)进行检测；如前所述，根据如1-11已知，巴氏灭活AKK菌不能缓解OVX诱导的焦虑样行为，说明其并未产生能缓解环境OVX诱导的焦虑样行为的产物，因此本发明未取该组大鼠心尖血测试其血清中大豆苷元和雌马酚的浓度。

如图12-13所示，大鼠血清中均可检测出底物大豆苷元，但溶媒灌胃组(OVX组)大鼠血清中未能检测到雌马酚，Akk灌胃组(OVX+AKK组)大鼠血清中雌马酚浓度为0.126ng/mL；雌马酚为大豆苷元经肠道菌群代谢后的产物，无菌动物本身不能产生雌马酚，Akk灌胃(OVX+AKK组)组在大鼠血清中检测到雌马酚存在，证明Akk单菌14P22参与了大豆苷元-雌马酚转化过程；实验结果如表1所示。

表1Akk菌对大鼠血清中雌马酚浓度的影响

组别	28d大鼠血清中雌马酚浓度(ng/mL)
		Akk灌胃组	0.126ng/mL
溶媒灌胃组	0

本发明通过动物实验证明了Akk菌14P22参与了大豆苷元-雌马酚转化过程，因此，Akk菌14P22可以直接或者被制成药品等形式应用于治疗更年期综合征患者焦虑抑郁等情感障碍，发现了Akk菌14P22在改善和治疗更年期综合征中的新用途。Akk菌14P22属于食用安全的有益菌，使用安全，可以作为针对性治疗更年期综合征的潜在安全药物，因其成分单一，故便于操作，应用前景广泛。Akk菌14P22可以用于防治或治疗更年期综合征的药物、食品或保健品中，为治疗更年期综合征提供了新的安全有效的生物治疗手段。

Akk菌14P22通过灌胃给药直接应用于临床时，其给药剂量为10⁹-10¹⁰CFU。

Akk菌14P22可以用于防治或治疗更年期综合征的药物、食品或保健品。

所述药物还包括药学上可接受的辅料。优选地，所述辅料为载体、赋形剂、稀释剂、润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮液稳定剂、防腐剂、甜味剂以及香料中的一种或多种；

所述食品还包括食品学上可接受的辅料。优选地，所述辅料为载体、赋形剂、稀释剂、润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮液稳定剂、防腐剂、甜味剂以及香料中的一种或多种；

所述保健品还包括食品学上可接受的辅料。优选地，所述辅料为载体、赋形剂、稀释剂、润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮液稳定剂、防腐剂、甜味剂以及香料中的一种或多种；

所述药物、食品或保健品呈固态时，包含10⁹-10¹⁰CFU Akk菌；所述药物、食品或保健品呈液态时，包含10⁹-10¹⁰CFU Akk菌；

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.嗜黏蛋白阿克曼氏菌在制备改善和治疗更年期综合征制品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌为活菌。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌参与大豆苷元生成雌马酚的转化过程。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌通过灌胃给药。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述灌胃给药的剂量为10⁹-10¹⁰CFU。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制品为药物、食品或保健品。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述食品还包括食品学上可接受的辅料。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述保健品还包括食品学上可接受的辅料。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述嗜黏蛋白阿克曼氏菌在所述药物中的剂量为10⁹-10¹⁰CFU。