CN118339163A - 新的晶型 - Google Patents

Abstract

本公开总体上涉及某种化合物的新晶型，其可用作乙型肝炎病毒核心蛋白组装的调节剂。本公开还涉及鉴定具有用于临床开发的有希望的固态特性的合适的固体形式。所公开的固态形式可用于制造可能对乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(Cp)具有变构效应剂特性的药物产品，该蛋白以二聚体、多聚体和HBV核心的蛋白质外壳形式存在。作为一个实例，本文提供了一种稳定的晶型，其可用于治疗病毒感染，例如乙型肝炎。

Description

新的晶型

发明领域

本公开总体上涉及某种化合物的新晶型，其可用作乙型肝炎病毒核心蛋白组装的调节剂。本公开还涉及鉴定具有用于临床开发的有希望的固态特性的合适的固体形式。所公开的固态形式可用于制造可能对乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(Cp)具有变构效应剂特性的药物产品，该蛋白以二聚体、多聚体和HBV核心的蛋白质外壳形式存在。作为一个实例，本文提供了一种稳定的晶型，其可用于治疗病毒感染，例如乙型肝炎。

背景技术

乙型肝炎(HBV)会引起病毒性肝炎，可进一步导致慢性肝病并增加肝硬化和肝癌(肝细胞癌)的风险。全球约有20亿人已感染HBV，约3.6亿人慢性感染，每年HBV感染导致超过50万人死亡。HBV可以通过体液传播：从母亲传给孩子、通过性行为以及通过血液制品传播。HBV阳性母亲所生的孩子也可能被感染，除非出生时接种疫苗。

肝炎病毒颗粒由脂质包膜组成，脂质包膜布满围绕病毒核心的表面蛋白(HBsAg)。核心由120个核心蛋白(Cp)二聚体构成的蛋白质外壳(或衣壳)所组成，所述核心本身含有松环DNA(rcDNA)病毒基因组以及病毒和宿主蛋白。在被感染的细胞中，所述基因组被发现为宿主细胞核中的共价闭环DNA(cccDNA)。所述cccDNA是病毒RNA的模板并因此是病毒蛋白的模板。在细胞质中，Cp聚集在全长病毒RNA的复合物(所谓的前基因组RNA(或pgRNA))和病毒聚合酶(P)周围。组装后，P在该衣壳范围内将所述pgRNA逆转录为rcDNA，从而生成DNA-填充的病毒核心。

目前，慢性HBV主要用核苷(酸)类似物(例如恩替卡韦)治疗，当患者保持治疗时，所述类似物抑制病毒，但无法消除感染，即使是经过许多年的治疗。一旦患者开始服用核苷(酸)类似物，大多数患者必须持续服用或冒着由于病毒复发的致命性免疫响应的可能性的危险。此外，核苷酸疗法可能导致抗病毒药物耐药性的出现。

FDA唯一批准的替代核苷(酸)类似物的是用干扰素α或聚乙二醇化干扰素α的治疗。不幸的是，干扰素α的不良事件发生率和性质可能会导致耐受性差，且许多患者不能完成治疗。此外，仅有一小部分的患者被认为适合干扰素疗法，因为仅有一小部分患者可能对干扰素疗法的疗程具有持续的临床反应。因此，在所有选出进行治疗的确诊患者中，只有一小部分人使用基于干扰素的疗法。

因此，目前HBV治疗的范围从姑息疗法到观察等待(watchful waiting)。核苷酸类似物抑制病毒产生、治疗症状、但保持感染完好无损。干扰素α具有严重的副作用且在患者中耐受性差，并且由于有限的治疗策略仅在一小部分的患者中成功。显然，持续需要针对HBV感染的更有效的治疗。

本公开涉及某种化合物的新晶型。该化合物首次公开于PCT/US2021/028323中，其全部内容通过引用并入本文。

发明概述

本公开的一个实施方案是化合物I的晶型

本公开的一个实施方案是化合物I的晶型，其中所述晶型是化合物I(a)的晶型：

本公开涉及化合物I、合适地化合物I(a)的某些新颖的结晶固体形式，其具有有前途且有利的固态和/或生物制药性质。

本公开还涉及包含晶型或晶型混合物的药物组合物，以及制备此类晶型的方法。本公开进一步涉及该晶型在治疗HBV感染中的用途。

应当理解，固态化学领域的普通技术人员可以使用多种分析方法来分析固体形式。本文使用的术语“分析”是指获得关于固体形式的固态结构的信息。例如，粉末X射线衍射(PXRD)是用于区分无定形固体形式与结晶固体形式以及用于表征和鉴定化合物的特定结晶固体形式的合适技术。

由于仪器、样品和样品制备的差异，PXRD峰值通常用修正量“±0.2°2θ”报告。由于峰值固有的变化，这是固态化学领域的常见做法。峰强度的变化是样品容器中各个晶体相对于外部X射线源的取向(称为“优选取向”)的结果。这种取向效应不提供有关晶体的结构信息。

应当指出的是，除非另有说明，本文公开的X射线粉末衍射图是使用Cu Kα辐射获得的。

还应当理解，PXRD只是可用于表征和/或鉴定结晶固体形式的几种分析技术之一。例如，差示扫描量热法(DSC)也可用于表征和/或鉴定结晶固体形式。与差示扫描量热法起始温度相关的值的典型变化约为±2℃。

应当指出的是，除非另有说明本文提供的热数据(DSC和TGA)是使用10℃/min的加热速率获得的。此外，DSC数据是使用铝制卷边盘获取的，而TGA数据是使用铂制开口盘获取的。

在本发明的一方面，该晶型是1型。1型是无水晶型。在一个实施方案中，1型是化合物I的无水晶型，其中化合物I是化合物I(a)。

一方面，该1型晶型的特征在于图24的XRPD图。一方面，该1型晶型的特征在于XRPD具有表1中的2θ峰中的至少一个：

表1-晶型1的XRPD峰位置。

峰	2θ(度)
		1	7.34
2	12.17
		3	16.43
4	17.4
		5	17.65
6	18.11
		7	19.37
8	19.87

一方面，该1型晶型的特征在于表1中的2θ峰中的至少两个。一方面，该1型晶型的特征在于表1中的2θ峰中的至少三个。一方面，该1型晶型的特征在于表1中的2θ峰中的至少四个。一方面，该1型晶型的特征在于表1中的2θ峰中的至少五个。一方面，该1型晶型的特征在于表1中的2θ峰中的至少六个。一方面，该1型晶型的特征在于表1中的2θ峰中的至少七个。一方面，该1型晶型的特征在于表1中的八个2θ峰。

一方面，该1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰。另一方面，该1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且进一步包含至少一个或两个选自2θ值16.4和17.6°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰的特定峰。

一方面，该1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且进一步包含至少两个、五个、十个、十五个或二十个选自表2中°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)中的峰的另外的峰。

表2-晶型1的XRPD峰位置

一方面，该1型晶型是无水的，并且特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰。一方面，该1型晶型的特征在于使用Cu Kα 辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且其中晶型1包含小于2重量％的水。一方面，该1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且其中晶型1包含小于1.5重量％的水。另一方面，该1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且进一步包含至少一个或两个选自2θ值16.4和17.6°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰的特定峰，并且其中晶型1包含小于2重量％的水。另一方面，该1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且进一步包含至少一个或两个选自2θ值16.4和17.6°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰的特定峰，并且其中晶型1包含小于1.5重量％的水。

一方面，该1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其与图24所示基本相同。

一方面，该1型晶型包含小于2重量％的水，例如小于1.5％或小于1.0％。技术人员会知道可以量化与固体相关的水量的合适的分析技术。例如，水含量可以通过卡尔·费歇尔滴定法测定。热重分析(TGA)还可以量化与固体(表面结合或掺入晶体结构)相关的挥发性物质(即水)的量。

一方面，该1型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含起始温度为210℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。一方面，该1型晶型的特征在于DSC热分析图，其不包含50℃至100℃之间的热事件和包含起始温度为210℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。

一方面，该1型晶型的特征在于DSC热分析图与图2B所示的DSC热分析图基本相同。

一方面，该1型晶型至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％不含其他晶型。一方面，该1型晶型不含其他晶型。

在本发明的一方面，该晶型是2型。2型是水合晶型。在一个实施方案中，2型是化合物I的结晶三水合物形式，其中化合物I是化合物I(a)。一方面，该2型晶型的特征在于图25的XRPD图。一方面，该2型晶型的特征在于XRPD具有表3中的2θ峰中的至少一个：

表3-晶型2的XRPD峰位置

峰	2θ(度)
		1	5.59
2	6.16
		3	8.53
4	14.15
		5	16.14

一方面，该2型晶型的特征在于表3中的2θ峰中的至少两个。一方面，该2型晶型的特征在于表3中的2θ峰中的至少三个。一方面，该2型晶型的特征在于表3中的2θ峰中的至少四个。一方面，该2型晶型的特征在于表3中的五个2θ峰。

一方面，该2型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值5.6和8.5°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰。一方面，该2型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值5.6和8.5°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且进一步包含至少两个、五个、十个、十五个或二十个选自表4中°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)中的峰的另外的峰。

表4-晶型2的XRPD峰位置

峰位置(°2θ)	峰位置(°2θ)
		4.3	21.6
6.2	22.1
		8.1	23.2
9.9	23.5
		11.1	24.3
12.3	24.7
		13.2	25.5
14.2	26.2
		14.9	26.8
16.1	27.2
		16.9	28.1
17.7	29.1
		18.2	30.0
18.6	31.2
		19.6	33.5
20.3	34.7
		21.0	38.3
21.4

一方面，该2型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其与图25所示基本相同。

一方面，该2型晶型包含5至12重量％的水，例如7至11重量％的水。一方面，该2型晶型包含约9重量％的水。

一方面，该2型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含起始温度为212℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。

一方面，该2型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含50℃至120℃之间的热事件和起始温度为212℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。

一方面，该2型晶型的特征在于DSC热分析图与图4B所示的DSC热分析图基本相同。

一方面，该2型晶型至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％不含其他晶型。一方面，该2型晶型不含其他晶型。

在本发明的一方面，该晶型是3型。3型是水合晶型。在一个实施方案中，3型是化合物I的结晶一水合物。在一个实施方案中，3型是化合物I的结晶一水合物，其中化合物I是化合物I(a)。

一方面，该3型晶型的特征在于图26的XRPD图。一方面，该3型晶型的特征在于XRPD具有表5中的2θ峰中的至少一个：

表5-晶型3的XRPD峰位置

峰	2θ(度)
		1	6.38
2	7.12
		3	14.83

一方面，该3型晶型的特征在于表5中的2θ峰中的至少两个。一方面，该3型晶型的特征在于表5中的三个2θ峰。

一方面，该3型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值6.4和7.1°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰。一方面，该3型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值6.4和7.1°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且进一步包含至少一个或两个选自2θ值9.7、14.2和14.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰的特定峰。

一方面，该3型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值6.4和7.1°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且包含至少两个、五个、十个或十五个选自表6中°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)中的峰的另外的峰。

表6-晶型3的XRPD峰位置

峰位置(°2θ)	峰位置(°2θ)
		8.5	20.4
9.3	20.9
		9.7	21.4
10.9	22.0
		13.4	22.9
14.2	25.8
		14.9	28.7
15.8	29.9
		16.3	31.6
18.3	33.7

一方面，该3型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其与图26所示基本相同。

一方面，该3型晶型包含2至4重量％的水。一方面，该3型晶型包含约3重量％的水。

一方面，该3型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含起始温度为192和212℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。

一方面，该3型晶型的特征在于DSC热分析图，其与图7B所示的DSC热分析图基本相同。

一方面，该3型晶型至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％不含其他晶型。一方面，该3型晶型不含其他晶型。

在本发明的一方面，该晶型是4型。4型是水合晶型。在一个实施方案中，4型是化合物I的结晶倍半水合物。在一个实施方案中，4型是化合物I的结晶倍半水合物，其中化合物I是化合物I(a)。

一方面，该4型晶型的特征在于图27的XRPD图。一方面，该4型晶型的特征在于XRPD具有表7中的2θ峰中的至少一个：

表7-晶型4的XRPD峰位置

一方面，该4型晶型的特征在于表7中的2θ峰中的至少两个。一方面，该4型晶型的特征在于表7中的2θ峰中的至少三个。一方面，该4型晶型的特征在于表7中的2θ峰中的至少四个。一方面，该4型晶型的特征在于表7中的五个2θ峰。

一方面，该4型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值5.1和17.6°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰。一方面，该4型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值5.1和17.6°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且进一步包含在2θ值8.3°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰。

一方面，该4型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值5.1和17.6°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且包含至少两个、五个、十个、十五个或二十个选自表8中°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)中的峰的另外的峰。

表8-晶型4的XRPD峰位置

峰位置(°2θ)	峰位置(°2θ)
		6.2	19.3
7.3	19.9
		8.3	20.7
9.4	21.9
		10.0	22.5
11.5	23.4
		12.2	24.3
13.0	25.7
		13.9	26.5
14.5	28.5
		15.0	29.5
15.4	30.6
		16.4	31.0
17.3	32.2
		18.1	34.3
18.7	39.6

一方面，该4型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其与图27所示基本相同。

一方面，该4型晶型包含4至6重量％的水。一方面，该4型晶型包含约4.5重量％的水。

一方面，该4型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含起始温度为210℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。一方面，该4型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含75℃至110℃±2℃(合适地±1℃)之间的吸热事件和起始温度为210℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。

一方面，该4型晶型的特征在于DSC热分析图，其与图8B所示的DSC热分析图基本相同。

一方面，该4型晶型至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％不含其他晶型。一方面，该4型晶型不含其他晶型。

在本发明的一方面，该晶型是5型。在一个实施方案中，5型是溶剂化晶型。在一个实施方案中，5型是化合物I的结晶单二氯甲烷溶剂化物。在一个实施方案中，5型是化合物I的结晶单二氯甲烷溶剂化物，其中化合物I是化合物I(a)。

一方面，该5型晶型的特征在于图28的XRPD图。一方面，该5型晶型的特征在于XRPD具有表9中的2θ峰中的至少一个：

表9-晶型5的XRPD峰位置

峰	2θ(度)
		1	6.6
2	18.9

一方面，该5型晶型的特征在于表9中的两个2θ峰。

一方面，该5型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值6.7°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰。一方面，该5型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值6.7和18.9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰。

一方面，该5型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值6.7 9°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)处的峰，并且包含至少两个、五个、十个、十五个或二十个选自表10中°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)中的峰的另外的峰。

表10-晶型5的XRPD峰位置

一方面，该5型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其与图28所示基本相同。

一方面，该5型晶型包含11至15重量％之间的二氯甲烷。一方面，该5型晶型包含约13重量％的二氯甲烷。

一方面，该5型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含起始温度为210℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。一方面，该5型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含70和110℃±2℃(合适地±1℃)之间的吸热事件、160和200℃±2℃(合适地±1℃)之间的放热事件和起始温度为210℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。

一方面，该5型晶型的特征在于DSC热分析图，其与图9B所示的DSC热分析图基本相同。

一方面，该5型晶型至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％不含其他晶型。一方面，该5型晶型不含其他晶型。

在本发明的一方面，该晶型是8型。8型是无水晶型。在一个实施方案中，8型是化合物I的无水晶型，其中化合物I是化合物I(a)。

令人惊讶的是，8型是在原料药制造活动中产生的。旨在生产不同晶型的制造批次得到了微量的另一种晶型，该晶型后来被表征为一种新的固态形式，即8型。之前在实施例2中描述的大量结晶实验中没有观察到8型。

申请人对8型进行了表征，发现它是迄今为止发现的热力学最稳定的晶型。

一方面，该8型晶型的特征在于图29的使用Cu Kα辐射测量的XRPD图。一方面，该8型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值9.4、15.4和16.7°2θ±0.2°2θ(合适地±0.1°2θ)处的峰。

一方面，该8型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值9.4、15.4和16.7°2θ±0.2°2θ(合适地±0.1°2θ)处的峰，并且包含至少两个、五个、十个、十五个或二十个选自表11中°2θ±0.2°2θ(合适地°2θ±0.1°2θ)中的峰的另外的峰。

表11-晶型8的XRPD峰位置

峰位置(°2θ)	峰位置(°2θ)
		3.1	20.7
3.5	21.4
		4.8	22.1
5.6	23.3
		6.1	23.6
9.7	24.2
		10.7	25.1
10.8	25.6
		11.2	25.9
12.7	26.6
		13.2	27.1
13.6	27.5
		14.2	27.9
14.4	28.4
		15.7	28.6
16.5	29.2
		16.9	29.7
17.6	30.9
		18.3	31.4
18.5	32.1
		19.0	32.5
19.1	32.8
		19.8	33.4
20.3

一方面，该8型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其与图29所示基本相同。

一方面，该8型晶型包含小于2重量％的水，例如小于1.5％或小于1.0％的水。

一方面，该8型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含起始温度为212℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。一方面，该8型晶型的特征在于DSC热分析图，其不包含50℃至100℃之间的热事件和包含起始温度为212℃±2℃(合适地±1℃)的吸热事件。

一方面，该8型晶型的特征在于DSC热分析图，其与图30所示的DSC热分析图基本相同。

一方面，该8型晶型至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％不含其他晶型。一方面，该8型晶型不含其他晶型。

一方面，本发明的晶型是立体化学纯的。一方面，本发明的晶型为立体化学纯的化合物I(a)的晶型：

与化合物I(a)相关的术语“立体化学纯的”是指化合物I(a)的晶型以一种非对映异构体为主，例如存在小于约20重量％的其他非对映异构体(例如化合物I(b)、I(c)和/或I(d))，例如存在小于约15％、小于约10％、小于约5％、小于约2％、小于约1％，或小于约0.5重量％的其他非对映异构体。适当地，化合物I(a)的晶型基本上由单一非对映异构体组成。适当地，化合物I(a)的晶型由单一非对映异构体组成。一方面，本发明的晶型是化合物I(a)。

当本文所述说明书涉及化合物I(a)的晶型时，结晶度适宜地大于约60％，更适宜地大于约80％，还更适宜地大于约90％，优选地大于95％、98％或99重量％。

在一个实施方案中，1型是纯的或基本上纯的。本文所用的术语“基本上纯的”是指固态形式的化合物I(a)含有约20重量％或更少、或约15重量％或更少、或约10重量％或更少、或约5重量％或更少、或约2重量％或更少、或约1重量％或更少、或约0.5重量％或更少的任何杂质或化合物I(a)的其他固体形式，包括替代的晶型、水合物、溶剂化物或无定形形式，例如通过XRPD测量的。因此，本文所述的基本上纯的1型应理解为含有大于约80重量％、大于85重量％、大于90重量％、大于95重量％、大于98重量％、大于99重量％、大于99.5重量％的化合物I(a)的1型结晶。适当地，提供1型，其中当通过固态技术(例如通过X射线粉末衍射)分析1型时，没有检测到其他固体形式(无定形和/或其他晶型)。适当地，提供了基本上由1型组成的化合物I(a)的晶型。适当地，提供了由1型组成的化合物I(a)的晶型。适当地，提供了化合物I(a)的晶型，其中该晶型是1型并且该晶型不包含2型、3型、4型、5型或8型。

在一个实施方案中，8型是纯的或基本上纯的。本文所用的术语“基本上纯的”是指固态形式的化合物I(a)含有约20重量％或更少、或约15重量％或更少、或约10重量％或更少、或约5重量％或更少、或约2重量％或更少、或约1重量％或更少、或约0.5重量％或更少的任何杂质或化合物I(a)的其他固体形式，包括替代的晶型、水合物、溶剂化物或无定形形式，例如通过XRPD测量的。因此，本文所述的基本上纯的8型应理解为含有大于约80重量％、大于85重量％、大于90重量％、大于95重量％、大于98重量％、大于99重量％、大于99.5重量％的化合物I(a)的8型结晶。适当地，提供8型，其中当通过固态技术(例如通过X射线粉末衍射)分析8型时，没有检测到其他固体形式(无定形和/或其他晶型)。适当地，提供了基本上由8型组成的化合物I(a)的晶型。适当地，提供了由8型组成的化合物I(a)的晶型。适当地，提供了化合物I(a)的晶型，其中该晶型是8型并且该晶型不包含1型、2型、3型、4型或5型。

在一个实施方案中，2型、3型或4型是纯的或基本上纯的。本文所用的术语“基本上纯的”是指固态形式的化合物I(a)含有约20重量％或更少、或约15重量％或更少、或约10重量％或更少、或约5重量％或更少、或约2重量％或更少、或约1重量％或更少、或约0.5重量％或更少的任何杂质或化合物I(a)的其他固体形式，包括替代的晶型、水合物、溶剂化物或无定形形式，例如通过XRPD测量的。因此，本文所述的基本上纯的2型、3型或4型应理解为含有大于约80重量％、大于85重量％、大于90重量％、大于95重量％、大于98重量％、大于99重量％、大于99.5重量％的化合物I(a)的2型、3型或4型结晶。适当地，提供2型、3型或4型，其中当通过固态技术(例如通过X射线粉末衍射)分析2型、3型或4型时，没有检测到其他固体形式(无定形和/或其他晶型)。适当地，提供了基本上由2型、3型或4型组成的化合物I(a)的晶型。适当地，提供了由2型、3型或4型组成的化合物I(a)的晶型。

本公开的一个实施方案包括药物组合物，其包含根据本公开的晶型或晶型的混合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。优选地，药物组合物包含根据本公开的单晶形式和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

本公开的一个实施方案包括治疗有此需要的受试者的乙型肝炎(HBV)感染的方法，该方法包括：向该受试者给药治疗有效量的根据本公开的晶型。

本公开的一个实施方案包括治疗有此需要的受试者中的乙型肝炎(HBV)感染的方法，该方法包括：向该受试者给药治疗有效量的本公开的药物组合物。

一个实施方案包括根据本公开的晶型，其用于治疗HBV感染。

一个实施方案包括本公开的药物组合物，其用于治疗HBV感染。

一个实施方案包括根据本公开的晶型或药物组合物用于治疗HBV感染的用途。

一个实施方案包括根据本公开的晶型在制备用于治疗HBV感染的药物中的用途。

一个实施方案包括制备结晶化合物I(合适地化合物I(a))的方法，其中该晶型是1型、2型、3型、4型、5型或8型。

在一个实施方案中，提供了制备化合物I(合适地化合物I(a))的晶型的方法，其中该晶型是8型。

一个实施方案包括可通过本文所述的方法获得的结晶化合物I(合适地为化合物I(a))，其中该晶型是1型、2型、3型、4型、5型或8型。

附图说明

图1是本公开的1型、2型、3型、4型和5型的XRPD叠加图。

图2A示出了1型的表征。XRPD显示1型是结晶。

图2B示出了1型的表征。TGA数据表明直至235℃两步重量损失为1.33％。DSC在210.7℃开始出现急剧吸热。PLM显示不规则形状的双折射颗粒。

图3是1型的GC的图。GC表明0.02％EtOAc和EtOH，提示固体中存在残余溶剂。KF表明含水量为0.83％。

图4A示出了2型的表征。XRPD显示2型是结晶。

图4B示出了2型的表征。TGA数据表明直至200℃的重量损失为11.6％。DSC热分析图显示在78.1、93.6和212.9℃(峰值温度)处吸热。PLM显示不规则形状的双折射颗粒。

图5示出了使用THF:H₂O在5℃对得自浆料的2型的表征。干燥后，TGA显示重量损失为6.8％。类似地，KF表明含水量为7.10％。

图6A示出了使用THF:H₂O在5℃对得自浆料的2型的DVS。通过DVS显示2型在80％RH的含水量为9.2％，这表明该样品是三水合物，并且在30-95％RH之间稳定。

图6B显示了DVS前的2型和DVS后获得的材料的XPRD衍射图。DVS后观察到晶型变化为低级水合物。

图7A示出了3型的表征。3型是通过将2型保持在0％RH3天而制得的。XRPD显示3型是结晶。

图7B示出了3型的表征。TGA显示直至150℃的重量损失为0.75％。DSC热分析图显示在111、192.4和211.5℃(起始温度)处吸热。PLM显示不规则形状的双折射颗粒。KF为3.02％，表明3型是一水合物。KF和TGA重量损失的差异可能是由于在TGA分析之前没有给样品足够的时间在室温平衡。

图8A示出了4型的表征。XRPD显示4型是结晶。

图8B示出了4型的表征。TGA显示直至150℃的重量损失为6.4％。DSC热分析图显示在84.9℃(对应于TGA重量损失)处吸热和在209.8℃(起始温度)的熔化事件。PLM显示不规则形状的双折射颗粒。

图9A示出了5型的表征。XRPD显示5型是结晶。

图9B示出了4型的表征。TGA显示直至150℃两步重量损失为12.1％。DSC热分析图显示在80.6℃(对应于TGA重量损失)处吸热，随后在179.9℃处发生重结晶事件，并在207.5℃(起始温度)处同时熔化。PLM显示不规则形状的双折射颗粒。KF为2.26％，表明5型是单DCM溶剂化物。

图10A、10B和10C示出了得自旋转蒸发的无定形材料的表征。对无定形形式进行基线表征。XRPD显示该材料是无定形的，DSC热分析图显示在46.9℃发生玻璃化转变，随后在124.3℃发生重结晶事件，并在200.7℃开始熔化。TGA显示直至175℃时重量损失了5.8％。

图11示出了由无定形形式进行浆料转化实验的表征。所示为在室温使用无定形材料进行浆料转化实验的XRPD图。

图12A和12B示出了使用无定形材料进行温度循环实验的XRPD图。

图13示出了使用结晶起始材料进行过滤的反溶剂添加实验所得产物的XRPD图。

图14A和14B示出了使用结晶起始材料进行反溶剂添加实验所得产物的XRPD图。

图15A和15B示出了使用结晶起始材料在室温进行浆料实验所得产物的XRPD图。

图16A和16B示出了使用结晶起始材料在60℃进行浆料转化实验所得产物的XRPD图。

图17示出了固体蒸气扩散实验所得产物的XRPD图。

图18示出了由液体蒸气扩散实验所得产物的XRPD图。

图19示出了由过滤的缓慢冷却实验所得产物的XRPD图。

图20A和20B示出了由缓慢冷却实验所得产物的XRPD图。

图21示出了由缓慢蒸发实验所得产物的XRPD图。

图22A和22B示出了由温度循环实验所得产物的XRPD图。

图23A是化合物I，1型的DVS。通过DVS检测，1型在80％RH的含水量为0.67％，这表明该样品具有轻微吸湿性。

图23B显示DVS后没有观察到晶型变化。KF表明含水量为1.02％。

图24是化合物I的1型的XRPD，特征在于在2θ处具有的峰。

图25是化合物I的2型的XRPD，特征在于在2θ处具有的峰。

图26是化合物I的3型的XRPD，特征在于在2θ处具有的峰。

图27是化合物I的4型的XRPD，特征在于在2θ处具有的峰。

图28是化合物I的5型的XRPD，特征在于在2θ处具有的峰。

图29是化合物I的8型的XRPD，特征在于在2θ处具有的峰。

图30显示化合物I的8型的DSC和TGA热分析图。

图31是化合物I的8型的DVS。

图32是化合物I的8型的PLM。

图33描绘了化合物I的绝对结构。

图34是1型、8型和由制备获得的材料的XRPD。

发明详述

现在将更具体地描述本公开的特征和其他细节。在进一步描述本公开之前，在此收集了说明书、实施例和所附权利要求中使用的某些术语。这些定义应当根据本公开的其余部分来阅读并且如本领域技术人员所理解的那样。除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义。

定义

除非另有说明，本说明书和权利要求书中使用的下列术语具有下面列出的含义。

如本文所用的“化合物I”是指N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。

如本文所用的“化合物I(a)”是指N-(3-氯-4-氟苯基)-4-((2s,3aR,5r,6aS)-5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。

如本文所用，“API”是指活性药物成分，例如化合物I。

除非上下文另有要求，否则在整个说明书和权利要求书中，词语“包括”、“包含”等应以开放的、包容性的意义解释；词语“一(a)”、“一(an)”等应被视为表示至少一个而不限于仅一个；并且术语“约”应解释为±10％。本文中未具体定义的术语应当被赋予本领域技术人员根据公开内容和上下文赋予它们的含义。

在某些情况下，所描绘的取代基可能有助于光学或立体异构现象。具有相同分子式但原子键合性质或顺序不同或原子空间排列不同的化合物称为“异构体”。原子空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。彼此不为镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，而彼此为不可重叠镜像的立体异构体被称为“对映异构体”。单一非对映异构体化合物可以形成本公开的一方面。更具体地，单一非对映异构体化合物的固态形式可以形成本公开的一方面。

当化合物具有不对称中心时，例如当它与四个不同的基团键合时，可能有一对对映异构体。对映异构体可以通过其不对称中心的绝对构型来表征，并根据Cahn和Prelog的规则指定为(R)或(S)(Cahn等人,1966,Angew.Chem.78:413-447,Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.5:385-414(勘误表：Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.5:511)；Prelog和Helmchen,1982,Angew.Chem.94:614-631,Angew.Chem.Internat.Ed.Eng.21:567-583；Mata和Lobo,1993,Tetrahedron:Asymmetry 4:657-668)或者可以通过分子旋转偏振光平面的方式来表征，并且指定为右旋或左旋(即，分别为(+)-或(-)-异构体)。手性化合物可以作为单独的对映异构体或其混合物存在。含有等比例对映异构体的混合物称为“外消旋混合物”。

本公开的化合物可以立体异构体的形式存在。本文使用的术语“立体异构体”由所有对映异构体或非对映异构体组成。如所指出的，这些化合物可以用符号“(+)”、“(-)”、“R”或“S”来表示，这取决于立体碳原子周围取代基的构型。本公开涵盖这些化合物的各种立体异构体及其混合物。对映异构体或非对映异构体的混合物可以在命名法中指定为“(±)”，但是技术人员将认识到结构可以隐含地表示手性中心。

本公开的化合物可含有一个或多个双键，因此，由于碳-碳双键周围的取代基的排列而以几何异构体存在。该符号表示键，其可为本文所述的单键、双键或叁键。碳-碳双键周围的取代基被指定为“Z”或“E”构型，其中术语“Z”和“E”按照IUPAC标准使用。除非另有说明，否则描绘双键的结构包括“E”和“Z”异构体。碳-碳双键周围的取代基也可以被称为“顺式”或“反式”，其中“顺式”表示取代基在该双键的同一侧而“反式”表示取代基在该双键的相对侧。本发明的化合物可含有碳环或杂环并因此，由于该环周围的取代基的排列而以几何异构体存在。碳环或杂环周围取代基的排列被指定为“Z”或“E”构型，其中术语“Z”和“E”按照IUPAC标准使用。除非另有说明，否则描绘碳环或杂环的结构包括“Z”和“E”异构体。碳环或杂环周围的取代基也可被称为“顺式”或“反式”，其中术语“顺式”表示取代基在该环平面的同一侧而术语“反式”表示取代基在该环平面的相对侧。其中取代基既在该环平面同一侧也在该环平面相对侧排列的化合物的混合物被指定为“顺式/反式”。

本发明化合物的单一对映异构体和非对映异构体可由含有不对称或手性中心的市售可得的起始原料进行合成性制备或通过制备外消旋混合物然后通过本领域技术人员熟知的拆分方法来制备。这些拆分方法通过以下举例说明：(1)对映异构体混合物与手性助剂的连接、通过重结晶或色谱法对所得非对映异构体混合物的分离以及光学纯的产物从助剂中的释放，(2)采用光学活性拆分剂的盐形成，(3)光学对映异构体混合物在手性液相色谱柱上的直接分离，或(4)使用立体选择性的化学或酶试剂的动力学拆分。外消旋混合物还可通过公知方法(例如手性液相色谱或将所述化合物在手性溶剂中结晶)被拆分成它们的组分对映异构体。立体选择性合成、其中单一反应物在形成新的立体中心的过程中或在预先存在的一个立体异构体的转化过程中形成立体异构体的不等混合物的化学或酶反应，是本领域熟知的。立体选择性合成既包括对映体选择性转换也包括非对映体选择性转换，且可能涉及手性助剂的使用。例如，参见Carreira和Kvaerno，Classics in StereoselectiveSynthesis,Wiley-VCH:Weinheim,2009。

本公开的化合物可以含有一个或多个双键，因此，由于碳-碳双键周围的取代基的排列而以几何异构体存在。符号表示键，其可为本文描述的单键、双键或叁键。碳-碳双键周围的取代基被指定为“Z”或“E”构型，其中术语“Z”和“E”按照IUPAC标准使用。除非另有说明，否则描绘双键的结构包括“E”和“Z”异构体。碳-碳双键周围的取代基可替代地被称为“顺式”或“反式”，其中“顺式”表示取代基在该双键的同一侧而“反式”表示取代基在该双键的相对侧。本公开的化合物可含有碳环或杂环，并因此由于该环周围的取代基的排列而以几何异构体存在。碳环或杂环周围取代基的排列被指定为“Z”或“E”构型，其中术语“Z”和“E”按照IUPAC标准使用。除非另有说明，否则描绘碳环或杂环的结构包括“Z”和“E”异构体。碳环或杂环周围的取代基也可被称为“顺式”或“反式”，其中术语“顺式”表示取代基在该环平面的同一侧而术语“反式”表示取代基在该环平面的相对侧。其中取代基既在该环平面同一侧也在该环平面相对侧排列的化合物的混合物被指定为“顺式/反式”。

术语“个体”、“患者”或“受试者”可互换使用，并包括任何动物包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔子、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类，且最优选是人类。本公开的化合物或药物组合物可以给药于哺乳动物例如人，但是也可以给药于其他哺乳动物，例如需要兽医治疗的动物，例如家畜(例如狗、猫等)，农场动物(例如牛、绵羊、猪、马等)和实验动物(例如大鼠、小鼠、豚鼠、狗、灵长类动物等)。在本公开的方法中治疗的哺乳动物理想地是其中需要治疗HBV感染的哺乳动物。

术语“调节”包括拮抗作用(例如，抑制)、激动作用、部分拮抗作用和/或部分激动作用。

术语“药学上可接受的”包括视需要在给药于动物或人类时不产生不良、过敏或其他不利反应的分子实体和组合物。对于人类给药，制剂应满足如由FDA生物制剂标准办公室(FDA Office of Biologics standards)所要求的无菌性、热原性和一般安全性与纯度标准。

本文所用的术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”是指与药物给药相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、等渗和吸收延迟剂、填充剂等。此类用于药物活性物质的介质和试剂的用途是本领域众所周知的。该组合物也可含有其他活性化合物以提供补充、附加或增强的治疗功能。

本文所用的术语“药物组合物”是指包含至少一种本文所公开的化合物与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂一起配制的组合物。

本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指可存在于组合物中所用化合物中的酸性或碱性基团的盐。本发明组合物中所包含的天然碱性化合物能够与众多种无机和有机酸形成各种盐。可用于制备该碱性化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成无毒酸加成盐(即含有药理学上可接受的阴离子的盐)的那些，该无毒酸加成盐包括但不限于苹果酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乙酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、蔗糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即，1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。本质上为酸性的包含在本发明组合物中的化合物能够与各种药理学上可接受的阳离子形成碱式盐。这种盐的实例包括碱金属或碱土金属盐，特别是钙、镁、钠、锂、锌、钾和铁盐。本发明组合物中包括的包含碱性或酸性部分的化合物也可以与各种氨基酸形成药学上可接受的盐。本公开的化合物可以同时包含酸性和碱性基团；例如，一个氨基和一个羧酸基。在这种情况下，该化合物可以以酸加成盐、两性离子或碱式盐存在。

本文使用的术语“治疗有效量”或“有效量”是指主题化合物的量，其会引起组织、系统或动物(例如哺乳动物或人)的生物学或医学反应，而这正是研究人员、兽医、医生或其它临床医生所寻找的。将本公开的化合物或药物组合物以治疗有效量施用以治疗疾病。或者，治疗有效量的化合物是指达到所需要的治疗和/或预防效果所需的量。“治疗有效量”将根据化合物、疾病及其严重程度以及待治疗的哺乳动物的年龄、体重等而变化。

应当理解，提及“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括：(1)延迟或减少在可能患有该疾病或障碍但尚未经历或表现出该疾病或障碍的临床或亚临床症状的受试者中出现该疾病或障碍的临床症状的可能性，(2)抑制疾病或障碍，即阻止、减少或延迟疾病或障碍的进展或其复发(在维持治疗的情况下)或其至少一种临床或亚临床症状，或(3)缓解或减轻疾病或障碍，即引起疾病、障碍或病症或其至少一种临床或亚临床症状的消退。术语“治疗”包括通过破坏HBV核心蛋白组装而导致疾病改善的任何作用，例如，减轻、减少、调节或消除。“破坏”包括抑制HBV病毒组装和感染。本文所公开的结晶化合物可以与药学上可接受的溶剂例如水等以溶剂化形式以及非溶剂化形式存在，并且本公开旨在涵盖溶剂化形式和非溶剂化形式。在一个实施方案中，该化合物是单一多晶型物。在另一个实施方案中，该化合物是多晶型物的混合物。在另一个实施方案中，该化合物是晶型(crystalline form)。

本发明还包括同位素标记的本发明化合物，其与本文所提及的那些是相同的，除了一个或多个原子被具有与自然界中常见的原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的原子所替代。可掺入本公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别例如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。例如，本发明化合物可具有一个或多个被氘替代的H原子。

一些同位素标记的公开化合物(例如，用³H和¹⁴C标记的那些)被用于化合物和/或底物组织分布测定。氚化的(即，³H)和碳-14(即，¹⁴C)同位素由于它们易于制备和检测，因此是特别优选的。此外，用较重的同位素例如氘(即，²H)取代可由于较大的代谢稳定性(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量需求)而提供一些治疗益处并因此在一些情况下可能是优选的。同位素标记的本公开化合物通常可通过以下与本文实施例所公开的那些类似的步骤进行制备，其用同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂。

术语“前药”是指在体内转化以产生公开的化合物或该化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物的化合物。该转化可以通过各种机制(例如通过酯酶、酰胺酶、磷酸酶、氧化和/或还原代谢)在各种位置(例如在肠腔中或在肠道、血液或肝脏通过时)发生。前药在本领域中是众所周知的(例如，参见Rautio，Kumpulainen等人，Nature Reviews DrugDiscovery 2008，7，255)。

在本公开的某些实施方案中，本文公开的化合物是“立体化学纯的”。立体化学纯的化合物具有本领域技术人员认为“纯”的立体化学纯度水平。当然，这个纯度水平可能低于100％。在某些实施方案中，“立体化学纯的”是指基本上不含(即至少约85％或更多)其他异构体的化合物。在特定的实施方案中，该化合物是至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％或约99.9％不含其他异构体。

本公开化合物可含有一个或多个手性中心，且因此以立体异构体存在。当术语“立体异构体”在本文中使用时，其由所有的对映异构体或非对映异构体组成。这些化合物可用符号“(+)”、“(-)”、“R”或“S”指定，其取决于立体碳原子周围的取代基的构型，但是本领域技术人员将理解，结构可隐含地表示手性中心。本公开涵盖这些化合物的各种立体异构体及其混合物。对映异构体或非对映异构体的混合物在命名法中可指定为“(±)”，但是本领域技术人员将理解结构可隐含地表示手性中心。

在本说明书的不同地方，数值以组或范围的形式公开。特别地，说明书旨在包括此类组和范围的成员的所有单独的子组合以及此类组或范围的各种端点的任何组合。例如，0至40范围内的整数特别地旨在单独地公开0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39和40，并且1至20范围内的整数特别地旨在单独地公开1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19和20。

本文的任何和所有实例、或示例性语言(例如，“如”、“包括”、或“例如”)的使用仅旨在更好地说明本教导内容，并且不对本发明的范围构成限制，除非要求保护。

“晶型”是固体材料，其中固体材料的成分以高度有序的微观结构排列，从而形成沿所有方向延伸的晶格。晶型可包括无水晶型、溶剂化晶型和/或水合晶型。

“多晶型现象”是指固体材料可以以一种以上的晶型存在。

如本文所用，术语“无定形”是指在其分子的位置中不具有长程有序性的固体材料。无定形固体是这样的物质，其中分子以随机方式排列，使得没有明确的排列(例如分子堆积)，并且没有长程有序性。无定形固体通常是各向同性的，即在所有方向上表现出类似的特性并且不具有明确的熔点。例如，无定形材料是在其X射线粉末衍射(XRPD)图谱中不具有尖锐特征结晶峰的固体材料(即根据XRPD测定不是结晶)。相反，在其XRPD图谱中出现一个或多个宽峰(例如，晕)。宽峰是无定形固体的特征。

“水合物”是与水分子一起以固体组合物存在的化合物。该组合物可以包含化学计量的水，例如一水合物或二水合物，或者可以包含随机量的水。本文使用的术语“水合物”是指固体形式，即水溶液中的化合物虽然可以是水合的，但不是本文使用的术语的水合物。水合物可以是结晶的，其中化合物和水均形成晶格的一部分。

“溶剂化物”是与水合物类似的组合物，只是用水以外的溶剂代替了水。例如，甲醇或乙醇可以形成“醇化物”，其也可以是化学计量的或非化学计量的。本文使用的术语“溶剂化物”是指固体形式，即在溶剂中的溶液中的化合物，虽然它可以是溶剂化的，但不是本文使用的术语的溶剂化物。溶剂化物可以是结晶的，其中化合物和溶剂均形成晶格的一部分。

“无水”是指化合物的固体形式不具有掺入其结构中的水。例如，无水晶型不具有形成晶体结构的一部分的水。技术人员将了解可用于量化与固体相关的水量的技术。例如，水含量可以通过卡尔·费歇尔滴定法或热重分析(TGA)测定。合适地，该无水固体形式的化合物包含小于约2重量％例如小于约1.5％、小于约1％例如小于约0.5、约0.4、约0.3、约0.2、约0.1、约0.05或约0.01重量％的水。

“未溶剂化的”或“非溶剂化的”是指化合物的固体形式不具有掺入其结构中的溶剂。例如，未溶剂化的晶型不具有形成晶体结构的一部分的溶剂。技术人员将了解可以量化与固体相关的溶剂的量的技术。例如，溶剂含量可以通过气相色谱法(GC)测定。合适地，该化合物的未溶剂化的或非溶剂化的固体形式包含小于约2重量％例如小于约1.5％、小于约1％例如小于约0.5、约0.4、约0.3、约0.2、约0.1、约0.05或约0.01重量％的溶剂。

本文中，当组合物被称为“基本上由”特定组分组成时，所述组合物适当地包含至少70重量％的所述组分，适当地至少80重量％的所述组分，适当地至少90重量％的所述组分，适当地至少95重量％的所述组分，最合适地至少99重量％的所述组分。适当地，被称为“基本上由”特定组分组成的组合物由除了一种或多种痕量组分之外的所述组分组成。

短语“基本上如图所示”是指X射线粉末衍射图或DSC热分析图，其至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少95％、或至少99％的特征出现在图中。

短语“FIG.”是图的缩写。

化合物

一般而言，本发明的化合物可以通过本领域技术人员显而易见的任何方法来制备、分离或获得。示例性的制备方法通过以下方案和描述进行说明。

PCT/US2021/028323的实施例55(通过引用并入本文)提供了制备化合物I：N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺的一个实施方案：

实施例55,PCT‘323

N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。在0℃，在惰性气氛中，将MeMgBr(3M的DEE溶液,0.59mL,1.78mmol)缓慢加入到搅拌下的2-((5-(5-(5-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)-2-羟基八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基)氧基)乙酸乙酯(0.5g,0.89mmol)在干燥THF(5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌2小时。通过TLC监测反应进程。完成后，将该反应混合物用冰冷的水淬灭并用乙酸乙酯萃取。收集有机层；用盐水洗涤；用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗化合物通过柱色谱法、随后用制备型HPLC纯化，得到N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(0.501g,61％)，为灰白色固体。TLC:5％ MeOH的DCM溶液(R_f:0.4)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.22(s,1H),7.96(dd,J＝6.8Hz,2.4Hz,1H),7.65(s,1H),7.59-7.52(m,1H),7.40(t,J＝9.6Hz,1H),5.52(s,1H),5.23(s,1H),4.53(s,1H),3.75-3.70(m,5H),3.67(s,3H),3.26-3.20(m,1H),2.50-2.44(m,2H),2.20-2.06(m,4H),1.90-1.80(m,4H),1.13(s,6H)ppm.C₂₇H₃₃ClFN₅O₄：MS计算值：545.2；实测值：546.3[M+1]⁺.

实施例55的产物在本文中也可称为化合物I：

N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(化合物I)。遵循其他命名习惯可能会提供不同的化学名称。

如本领域技术人员将理解的，化合物I是非对映异构体的混合物。因此，立体异构占优势的或立体异构纯化的化合物，如上文所用的短语“立体化学纯的”所涵盖的，可以形成本公开的一方面。化合物I的非对映异构体包括：

如本文所述，本公开涉及化合物I以及Ia、Ib、Ic和Id中的每一种的新固态形式。

适当地，本公开涉及化合物I(a)的新固态形式。

药物组合物和试剂盒

另一方面，本公开提供了新颖的药物组合物，其包含化合物I的晶型或化合物I的晶型的混合物，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。优选地，药物组合物包含化合物I的晶型(合适地为化合物I(a)的晶型)和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。具体地，本公开提供了包含与一种或多种药学上可接受的载体一起配制的本文公开的化合物的药物组合物。

适当地，药物组合物包含化合物I(a)的晶型或化合物I(a)的晶型的混合物，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

这些制剂包括那些适用于经口、经直肠、局部、经颊、胃肠外(如，皮下、肌内、皮内或静脉内)、经直肠、经阴道或气雾剂施用的制剂，尽管在任何给定的情况下大部分适合形式的施用将取决于正在治疗的病症的程度和严重性，以及正在使用的具体化合物的性质。例如，可以将公开的组合物配制为单位剂量，和/或可以配制成用于口服或皮下给药。

本公开的示例性药物组合物可以药物制剂的形式使用，例如以固体、半固体或液体形式，所述药物制剂含有与适于外部、肠内或肠胃外施用的有机或无机载体或赋形剂混合的作为活性成分的一种或多种本公开化合物。例如，可以将所述活性成分与通常无毒、药学上可接受的载体混合用于片剂、小丸、胶囊、栓剂、溶液、乳剂、混悬剂、以及适合于使用的任何其它形式。该活性成分以足以对疾病过程或状况产生所需作用的量包含在所述药物组合物中。

为了制备固体组合物(例如片剂)，可以将主要活性成分与药物载体(如，常规压片成分例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸氢钙或树胶)和其它药用稀释剂(如水)混合以形成含有本公开化合物或其无毒的药学上可接受的盐的均匀混合物的固体预配制组合物。当提及这些均匀的预配制组合物时，意指所述活性成分被均匀地分散于整个组合物以使得可以容易地将所述组合物细分成同样有效的单位剂型(例如片剂、丸剂和胶囊)。

在用于经口给药的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖锭剂、粉剂、颗粒剂等)中，将所述主题组合物与一种或多种药学上可接受的载体(例如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下中的任何一种进行混合：(1)填充剂或增量剂(extenders)，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如，如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠；(5)溶液缓凝剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；以及(10)着色剂。在胶囊、片剂及丸剂的情况下，所述组合物还可以包含缓冲剂。在使用赋形剂例如乳糖或奶糖(milk sugars)以及高分子量聚乙二醇等的软填充和硬填充的明胶胶囊中还可以采用类似类型的固体组合物作为填充剂。

可以任选地与一种或多种辅助成分通过压制或模制来制备片剂。可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，淀粉乙醇酸钠或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂来制备压制片。可以通过在适合的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的所述主题组合物的混合物来制备模制片。可以任选地用包衣和壳(例如肠溶包衣和药物配制领域熟知的其它包衣)来刻痕或制备片剂和其它固体剂型(例如糖锭剂、胶囊、丸剂和颗粒剂)。

用于吸入或吹入的组合物包括药学上可接受的含水或有机溶剂或其混合物中的溶液和混悬液，以及粉末。用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、混悬剂、糖浆和酏剂。除主题组合物外，该液体剂型可以含有本领域通常使用的惰性稀释剂，例如如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油类(具体来说，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯、环糊精及其混合物。

除主题组合物之外，混悬剂还可含有助悬剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄芪胶及其混合物。

用于经直肠或经阴道给药的制剂可以作为栓剂存在，其可以通过将主题组合物与一种或多种适合的无刺激性赋形剂或载体(包括例如可可脂、聚乙二醇、栓剂蜡或水杨酸酯)混合来制备，并且所述栓剂在室温是固体，但在体温是液体并因此在体腔中将会熔化并且释放所述活性剂。

用于经皮给药主题组合物的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液、贴剂和吸入剂。可以在无菌条件下将所述活性成分与药学上可接受的载体以及可能必需的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂进行混合。

除主题组合物之外，所述软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂可以包含赋形剂，例如动物和蔬菜脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌或其混合物。

除主题组合物之外，粉剂和喷雾剂可以包含赋形剂如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末、或这些物质的混合物。喷雾剂可以额外地包含常规推进剂，例如氯氟烃和挥发性未取代的烃(例如丁烷和丙烷)。

本发明的组合物和化合物可以替代地通过气溶胶施用。这可以通过制备含有所述化合物的含水气溶胶、脂质体制剂或固体颗粒来完成。可以使用非水性(例如，碳氟化合物推进剂)混悬液。可以使用声波雾化器，这是因为它们最大限度地减少了药剂暴露于剪切力的程度，所述剪切可能导致主题组合物中所含化合物的降解。一般来说，含水气溶胶是通过将主题组合物的水溶液或混悬液与常规药学上可接受的载体和稳定剂配制在一起来制得。载体和稳定剂根据特定主题组合物的需要而变化，但通常包括非离子表面活性剂(吐温类(Tweens)、普朗尼克(Pluronics)或聚乙二醇)、无毒蛋白质例如血清白蛋白、脱水山梨醇酯、油酸、卵磷脂、氨基酸例如甘氨酸、缓冲剂、盐、糖或糖醇。气溶胶通常由等渗溶液制得。

适用于胃肠外给药的本公开药物组合物包括主题组合物与以下的一种或多种的组合：药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、混悬液或乳液、或在使用之前即可被重构成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末，它们可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使所述制剂与预期的接受者的血液等渗的溶质，或助悬剂或增稠剂。

本公开药物组合物中可采用的适合的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其适合的混合物、植物油例如橄榄油以及可注射的有机酯例如油酸乙酯和环糊精。适当的流动性可以例如通过使用包衣材料例如卵磷脂、在分散体的情况下通过维持所需的粒度、以及通过使用表面活性剂来维持。

在另一方面，本发明提供肠内药物制剂，其包括化合物I和肠溶物质；及其药学上可接受的载体或赋形剂。肠溶物质是指基本上不溶于胃的酸性环境，并且在特定pH主要溶于肠液的聚合物。小肠是胃和大肠之间胃肠道(消化道)的一部分，并且所述小肠包括十二指肠、空肠和回肠。

十二指肠的pH值为约5.5，空肠的pH值为约6.5，且回肠末端的pH值为约7.5。因此，肠溶物质是不可溶解的，例如直到pH值为约5.0、约5.2、约5.4、约5.6、约5.8、约6.0、约6.2、约6.4、约6.6、约6.8、约7.0、约7.2、约7.4、约7.6、约7.8、约8.0、约8.2、约8.4、约8.6、约8.8、约9.0、约9.2、约9.4、约9.6、约9.8或约10.0。示例性肠溶物质包括醋酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)、醋酸偏苯三酸纤维素、羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、醋酸琥珀酸纤维素、六氢邻苯二甲酸醋酸纤维素(cellulose acetatehexahydrophthalate)、邻苯二甲酸丙酸纤维素、醋酸马来酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、醋酸丙酸纤维素、甲基甲基丙烯酸和甲基丙烯酸甲酯的共聚物、丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸的共聚物、甲基乙烯基醚和马来酸酐的共聚物(Gantrez ES系列)、甲基丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸甲酯-乙基丙烯酸氯三甲基铵共聚物(chlorotrimethylammonium ethylacrylate copolymer)、天然树脂例如玉蜀黍蛋白、虫胶和柯巴脂(copal collophorium)以及若干可商购的肠溶分散系统(例如，Eudragit L30D55、Eudragit FS30D、Eudragit L100、Eudragit S100、Kollicoat EMM30D、Estacryl 30D、Coateric和Aquateric)。

上述每种物质的溶解度是已知的，或者在体外很容易确定。前述是可能的材料的列表，但受益于本公开的本领域的技术人员应认识到，所述列表并不全面并且还存在满足本公开目的的其它肠溶物质。

有利地，本公开还提供例如供需要HBV感染治疗的消费者使用的试剂盒。这些试剂盒包括例如上文所述那些剂型的合适剂型和描述使用这些剂型来介导、减少或预防HBV感染的方法的说明书。说明书可以指导消费者或医务人员根据本领域技术人员已知的施用模式来施用该剂型。这些试剂盒可以有利地以单个试剂盒单元或多个试剂盒单元进行包装并且出售。这种试剂盒的实例为所谓的泡罩包装。泡罩包装在包装工业中是熟知的并且广泛用于包装药物单位剂型(片剂、胶囊等)。泡罩包装通常由以优选透明塑性材料的箔覆盖的相对硬质材料薄片构成。在包装过程中，在塑料箔中会形成凹槽。凹槽具有待包装的片剂或胶囊的尺寸和形状。接着，将片剂或胶囊放置在所述凹槽中，并且相对硬质材料的薄片在与形成凹槽的方向相反的箔一侧封住所述塑料箔。因此，片剂或胶囊被密封在塑料箔与薄片之间的凹槽中。优选地，薄片的强度使得可以通过以下方式将片剂或胶囊从泡罩包装中去除：手动施加压力于凹槽处，从而在凹槽位置处的薄片中形成开口。然后可以通过所述开口将片剂或胶囊去除。

可能需要在试剂盒上提供记忆辅助，例如以片剂或胶囊旁边的数字的形式，其中数字对应于应摄入如此指定片剂或胶囊的给药方案的天数。这种记忆辅助的另一个实例是印刷在卡片上的日历，例如，如下“第一周、周一、周二,...等...第二周、周一、周二,...”等。记忆辅助的其它变型将变得显而易见。“日剂量”可以是在给定日服用的单个片剂或胶囊或若干丸剂或胶囊。另外，第一化合物的日剂量可以由一个片剂或胶囊组成，而第二化合物的日剂量可以由若干片剂或胶囊组成，反之亦然。记忆辅助应反映这些内容。

治疗方法

另一方面，提供了治疗有此需要的患者的乙型肝炎感染的方法，包括向受试者或患者给药治疗有效量的化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)。在另一个实施方案中，提供了治疗有此需要的患者的乙型肝炎感染的方法，包括向受试者或患者给药治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在一个实施方案中，该晶型为1型、2型、3型、4型、5型或8型。在一个实施方案中，该晶型为1型或8型。优选地，该晶型为8型。

另一方面，提供了用于治疗HBV感染的化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)。在一个实施方案中，该晶型为1型、2型、3型、4型、5型或8型。在一个实施方案中，该晶型为8型。优选地，该晶型为1型或8型。

另一方面，提供了用于治疗HBV感染的药物组合物，所述药物组合物包含化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在一个实施方案中，该晶型为1型、2型、3型、4型、5型或8型。在一个实施方案中，该晶型为8型。优选地，该晶型为1型或8型。

另一方面，提供了化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)或包含化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)的药物组合物用于治疗HBV感染的用途。在一个实施方案中，该晶型为1型、2型、3型、4型、5型或8型。在一个实施方案中，该晶型为8型。优选地，该晶型为1型或8型。

另一方面，提供了化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)或包含化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)的药物组合物在制备用于治疗HBV感染的药物中的用途。在一个实施方案中，该晶型为1型、2型、3型、4型、5型或8型。在一个实施方案中，该晶型为8型。优选地，该晶型为1型或8型。

本发明的药物组合物可以通过口服、舌下/含服、直肠、肠胃外、静脉内、肌内、皮下、心室内、透皮、局部、吸入和/或鼻内施用来给药。在合适的实施方案中，本发明的药物组合物经口服施用。

对于根据该方面的用途，预期合适的剂量取决于例如所采用的化合物I的具体晶型、给药方式、待治疗的感染的性质和严重程度以及待治疗的具体感染而变化，并且在治疗医师的权限范围内。通常，指定的施用剂量可以在约0.01至约20mg/kg体重的范围内。在一些情况下，化合物的施用剂量可以小于10mg/kg体重。在其他情况下，施用剂量可以小于5mg/kg体重。在另一些情况下，施用剂量可以在约0.01至约3mg/kg体重的范围内。

该剂量可以方便地每天一次施用，或者以最多例如每天两次或每天四次的分次剂量施用，或者以缓释形式施用。在合适的实施方案中，每天施用药物组合物，例如每天一次。在一个实施方案中，每天向受试者施用的化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)的治疗有效量为约5至1000mg(例如约25-300mg)。

在一个实施方案中，提供了治疗HBV的方法，其中该方法包括施用本文所述的药物组合物，其中该组合物与膳食(进食)或在两餐之间的任何时间(禁食)口服施用。方便地，将组合物口服给药于禁食状态的受试者。

在合适的实施方案中，药物组合物的单位剂型包含约1mg至约500mg(例如约2mg至约400mg、约5mg至约300mg、约5mg、约10mg或约50mg)化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)。在最合适的实施方案中，药物组合物的单位剂型是片剂，并且该片剂包含约1mg至约500mg(例如约2mg至约400mg、约5mg至约300mg、约5mg、约10mg或约50mg)的化合物I的晶型(合适地化合物I(a)的晶型)。

在一个实施方案中，需要用根据本发明的化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物治疗的受试者是未接受治疗的并且在治疗前为HBeAg(乙型肝炎e抗原)阳性。在一个实施方案中，需要用根据本发明的化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物治疗的受试者在治疗前受到病毒学抑制并且为HBeAg阳性。在一个实施方案中，需要用根据本发明的化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物治疗的受试者在治疗前受到病毒学抑制并且为HBeAg阴性。

在一个实施方案中，需要用根据本发明的化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物治疗的受试者在治疗前被病毒学抑制至少1、2、3、4、5或6个月。在一个实施方案中，需要用根据本发明的化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物治疗的受试者在治疗前被病毒学抑制至少1、2、3、4、5或6个月，并且该受试者之前已经用核苷(酸)抑制剂治疗。在一个实施方案中，需要用化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物治疗的受试者在用本发明的组合物治疗之前已经用核苷(酸)抑制剂治疗至少2个月。

在一个实施方案中，将本发明的化合物I的晶型或包含本发明的化合物I的晶型的药物组合物给药于受试者至少12周(例如至少24周、28周、32周、40周、12个月、18个月、24个月或36个月)的治疗期。在一个替代实施方案中，将本发明的化合物I的晶型或包含本发明的化合物I的晶型的药物组合物给药于受试者直至受试者的HBeAg和/或HBsAg(乙型肝炎表面抗原)降低。在一个实施方案中，在每天给药本发明的化合物I的晶型或包含本发明的化合物I的晶型的药物组合物至少12周后，HBeAg阳性受试者持续损失<0.11PEI单位/mL。在一个实施方案中，在每天给药本发明的化合物I的晶型或包含本发明的化合物I的晶型的药物组合物至少12周后，受试者的HBsAg降低至≤100IU/mL。在一个实施方案中，在每天给药本发明的化合物I的晶型或包含本发明的化合物I的晶型的药物组合物至少12周后，受试者的HBV DNA或HBV RNA减少。

本公开化合物可通过任意常规途径进行给药，具体地：经肠、局部、口服、经鼻，例如以片剂或胶囊的形式，通过栓剂或胃肠外，例如以可注射溶剂或混悬液的形式，用于静脉内、肌内、皮下或腹膜内注射。合适的制剂和药物组合物将包含使用一种或多种生理学可接受的载体或赋形剂以及任意已知和市售可得的和目前临床情况所采用的那些，以常规方式进行配制的那些。因此，所述化合物可被配制用于口服、含服、局部、胃肠外、直肠或经皮给药或被配制成适用于吸入或吹入(经口或经鼻)的形式。

对于口服给药，药物组合物可以采取例如，片剂或胶囊的形式，其通过常规方式，用药学上可接受的赋形剂进行制备，所述赋形剂包括但不限于以下一种或多种：粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羟基丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟乙酸钠)；润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)；pH调节剂(例如己二酸、酒石酸、碳酸氢钠或柠檬酸钾)；络合剂(例如，环糊精、磷酸盐、膦酸盐、聚羧酸盐和沸石)；和沉淀抑制剂(Eudragit、PEG或PEI)。片剂可通过本领域熟知的方法进行包衣。用于口服给药的液体制剂可采用，例如，溶液、糖浆或混悬液的形式，或它们可作为干燥产物的形式呈现，使用前用水或其他合适的媒介物进行重构。这种液体制剂可通过常规方式，用药学上可接受的添加剂例如助悬剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯胶)；非水媒介物(例如杏仁油、油酯、乙醇或分馏植物油)；和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲基酯或对羟基苯甲酸丙基酯或山梨酸)进行制备。视情况而定，制剂也可含有缓冲盐、调味剂、着色剂和甜味剂。

用于口服给药的制剂也可被适当地配制，以在延长的时间内提供控制释放或持续释放活性化合物。对于含服给药，所述组合物可采用以本领域技术人员已知的常规方式配制的片剂或锭剂形式。

在合适的实施方案中，该药物组合物经口服施用。

在合适的实施方案中，该药物组合物的单位剂型是片剂。最合适地，该药物组合物是经口服施用的片剂。

所公开化合物也可被配制用于通过注射(例如推注或连续输注)进行胃肠外给药。用于注射的制剂可以单位剂型(例如安瓿或多剂量容器)存在，其添加有防腐剂。所述组合物可采用如在油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳液的形式且可含有添加剂，例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。或者，所述化合物可为粉末形式，其用于在使用前与合适的媒介物(例如无菌无热原水)进行重构。化合物还可被配制用于作为栓剂或保留灌肠剂进行直肠给药，例如含有常规栓剂基质如可可脂或其他甘油酯的栓剂或保留灌肠剂。

合适地，该化合物(I)的晶型为化合物I(a)的晶型。在一个实施方案中，该化合物I(a)的晶型为1型、2型、3型、4型、5型或8型。在一个实施方案中，该晶型为8型。优选地，该晶型为1型或8型。

组合

本文还考虑了包括第二活性剂或施用第二活性剂的方法和组合物。例如，除了被HBV感染之外，受试者或患者还可以具有与HBV感染相关的合并症，即与HBV感染有关、被其加剧或诱发的疾病和其他不良健康状况。本文考虑了公开的本发明化合物I的晶型或包含本发明化合物I的晶型的药物组合物与至少一种其他药剂的组合，该药剂先前已显示可治疗这些HBV感染相关病症。

在一些情况下，所公开化合物可作为与一种或多种抗病毒药物联合的组合疗法的一部分进行给药。所述抗病毒药物的实例包括核苷类似物、干扰素α和其他组装效应器，例如杂芳基二氢嘧啶(HAP)，例如4-(2-氯-4-氟苯基)-6-甲基-2-(吡啶-2-基)-1,4-二氢嘧啶-5-甲酸甲酯(HAP-1)。例如，本文提供了治疗患有乙型肝炎感染的患者的方法，其包括向患者给药第一量的根据本发明化合物I的晶型和第二量的抗病毒药物或其他抗HBV试剂，例如第二量的选自以下的第二化合物：

i.HBV衣壳组装启动子(例如GLS4、BAY 41-4109、AT-130、DVR-23(例如，如下所描绘)，

NVR 3-778、NVR1221(通过代码示出)；和N890(如下所描绘)：

ii.其他核心蛋白变构调节剂(CpAM)，如在以下引入本文作为参考的专利申请中所公开的那些：WO2014037480、WO2014184328、WO2013006394、WO2014089296、WO2014106019、WO2013102655、WO2014184350、WO2014184365、WO2014161888、WO2014131847、WO2014033176、WO2014033167和WO2014033170；

iii.干扰病毒聚合酶的核苷(酸)类似物，例如恩替卡韦(博路定)、拉米夫定(Epivir-HBV)、替比夫定(Tyzeka，Sebivo)、阿德福韦酯(Hepsera)、替诺福韦(Viread)、替诺福韦艾拉酚胺(Vemlidy)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)、替诺福韦艾拉酚胺富马酸盐(Tenofovir alafenamide fumarate)(TAF)、替诺福韦(tenofavir)的前药(例如AGX-1009)、L-FMAU(克来夫定)、LB80380(Besifovir)：

以及活性位点聚合酶抑制剂核苷酸(ASPIN)，例如WO2016099982中公开的那些；

iv.病毒进入抑制剂，例如Myrcludex B及相关的脂肽衍生物；

v.HBsAg分泌抑制剂，例如REP 9AC’及相关的基于核酸的两亲聚合物，如下所描绘的HBF-0529(PBHBV-001)、PBHBV-2-15：

以及如下所描绘的BM601：

vi.核衣壳形成或完整性的干扰剂，例如NZ-4/W28F：

vii.cccDNA形成抑制剂：例如BSBI-25、CCC-0346、CCC-0975(如下所描绘)：

viii.HBc定向transbodies，例如在Wang Y等人，Transbody againsthepatitis Bvirus core protein inhibits hepatitis B virus replication in vitro,Int.Immunopharmacol(2014)中所述的那些，位于//dx.doi.org/10.1016/j.intimp.2015.01.028；抗病毒核心蛋白突变体(例如Cp183-V124W及相关的突变体，如在WO/2013/010069、WO2014/074906中所述，其各自引入本文作为参考)；

ix.HBx-相互作用抑制剂，例如靶向HBV RNA的RNAi、反义和基于核酸的聚合物，例如，RNAi(例如ALN-HBV、ARC-520、TKM-HBV、ddRNAi)、反义基因(ISIS-HBV)或基于核酸的聚合物：(REP 2139-Ca)；

x.免疫刺激剂，例如干扰素α2a(罗扰素)、Intron A(干扰素α2b)、(聚乙二醇干扰素α2a)、聚乙二醇IFN 2b、IFNλ1a和PEG IFNλ1a、Wellferon、罗扰素、干复津、淋巴毒素β激动剂，例如CBE11和BS1；

xi.非干扰素免疫增强剂，例如胸腺素α-1(日达仙)和白细胞介素-7(CYT107)；

xii.TLR-7/9激动剂如GS-9620、CYT003或瑞喹莫德(Resiquimod)；

xiii.亲环素抑制剂，例如NVP018、OCB-030、SCY-635、阿拉泊韦、NIM811及相关的环孢菌素类似物；

xiv.疫苗，例如GS-4774、TG1050、核心抗原疫苗；

xv.第二种线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂(SMAC)模拟物例如birinapant和其他IAP-拮抗剂；

xvi.表观遗传调节剂(Epigenetic modulator)，例如KMT抑制剂(EZH1/2、G9a、SETD7、Suv39抑制剂)、PRMT抑制剂、HDAC抑制剂、SIRT激动剂、HAT抑制剂、WD拮抗剂(例如OICR-9429)、PARP抑制剂、APE抑制剂、DNMT抑制剂、LSD1抑制剂、JMJD HDM抑制剂和溴结构域拮抗剂；

xvii.激酶抑制剂，例如TKB1拮抗剂、PLK1抑制剂、SRPK抑制剂、CDK2抑制剂、ATM&ATR激酶抑制剂；

xviii.STING激动剂；

xix.选自利巴韦林、N-乙酰基半胱氨酸、NOV-205(BAM205)、硝唑尼特(Alinia)、替唑尼特、SB 9200小分子核酸杂交物(SMNH)、DV-601、阿比朵尔和FXR激动剂(例如GW 4064和Fexaramin)的药剂；

xx.抗体、治疗性蛋白、基因治疗和针对病毒成分或与宿主蛋白相互作用的生物制品。

在一些实施方案中，本公开提供了在有此需要的患者中治疗乙型肝炎感染的方法，其包括给药选自所公开的化合物I的晶型中的任一个的第一化合物，和一种或者多种其它HBV药剂，所述其它HBV药剂各自选自HBV衣壳组装启动子、HBF病毒聚合酶干扰核苷、病毒进入抑制剂、HBsAg分泌抑制剂、核衣壳形成的破坏剂、cccDNA形成抑制剂、抗病毒核心蛋白突变体、HBc定向transbodies、靶向HBV RNA的RNAi、免疫刺激剂、TLR-7/9激动剂、亲环素抑制剂、HBV疫苗、SMAC模拟剂、表观遗传调节剂、激酶抑制剂和STING激动剂。在一些实施方案中，本发明提供了在有此需要的患者中治疗乙型肝炎感染的方法，其包括给药一定量的公开的化合物I的晶型，并给药另一种HBV衣壳组装启动子。合适地，该晶型为1型、2型、3型、4型、5型或8型，更合适地为8型。

在一些实施方案中，所述第一量和第二量一起包含药学上有效量。所述第一量、第二量或这二者可以与作为单一疗法所给药的各化合物的有效量相同、可以比作为单一疗法所给药的各化合物的有效量更多或比作为单一疗法所给药的各化合物的有效量更少。治疗上有效量的所公开化合物和抗病毒药物可共同给药至所述受试者，即以任意给定顺序且通过相同或不同的给药途径，同时或分开地给药至所述受试者。在一些情况下，在开始给药所述抗病毒药物前例如一天或数天或数周开始首次给药所公开化合物可能是有利的。此外，额外的药物可与上述组合疗法联合给药。

在合适的实施方案中，该方法进一步包括向受试者共同给药治疗有效量的核苷(酸)抑制剂。合适地，核苷(酸)抑制剂选自恩替卡韦、替诺福韦、替诺福韦艾拉酚胺和富马酸替诺福韦二吡呋酯。在合适的实施方案中，将核苷(酸)抑制剂经口服给药。在合适的实施方案中，将核苷(酸)抑制剂每天(例如每天一次)给药。

在合适的实施方案中，该方法进一步包括向受试者共同给药治疗有效量的聚乙二醇化干扰素α，例如聚乙二醇化干扰素α-2a。在合适的实施方案中，将聚乙二醇化干扰素α通过皮下注射给药。在合适的实施方案中，将聚乙二醇化干扰素α每周(例如每周一次)给药。在合适的实施方案中，聚乙二醇化干扰素α的治疗有效量为约100至300μg，例如约180μg。

在合适的实施方案中，该方法进一步包括向受试者共同给药治疗有效量的HBV的siRNA抑制剂。在合适的实施方案中，将siRNA抑制剂通过皮下注射给药。在合适的实施方案中，将siRNA抑制剂每4-12周给药一次，例如每8周给药一次。在合适的实施方案中，siRNA抑制剂的治疗有效量为约20至100mg，例如约60mg。

在合适的实施方案中，该方法进一步包括向受试者共同给药治疗有效量的ASPIN。在合适的实施方案中，将ASPIN经口服给药。在合适的实施方案中，将ASPIN每天(例如每天一次)给药。在合适的实施方案中，ASPIN的治疗有效量为约10至100mg，例如约25mg或约50mg。

在一个实施方案中，提供了在有此需要的受试者中治疗乙型肝炎的方法，该方法包括向受试者给药治疗有效量的根据本发明的化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物并向受试者共同给药治疗有效量的核苷(酸)抑制剂(例如恩替卡韦)；以及向受试者共同给药治疗有效量的聚乙二醇化干扰素α(例如聚乙二醇化干扰素α-2a)。

在一个实施方案中，提供了在有此需要的受试者中治疗乙型肝炎的方法，该方法包括向受试者给药治疗有效量的根据本发明的化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物并向受试者共同给药治疗有效量的核苷(酸)抑制剂(例如恩替卡韦)；以及向受试者共同给药治疗有效量的HBV的siRNA抑制剂。

在一个实施方案中，提供了在有此需要的受试者中治疗乙型肝炎的方法，该方法包括向受试者给药治疗有效量的根据本发明的化合物I的晶型或包含根据本发明的化合物I的晶型的药物组合物并向受试者共同给药治疗有效量的核苷(酸)抑制剂(例如恩替卡韦)；以及向受试者共同给药治疗有效量的ASPIN。

合适地，该化合物(I)的晶型为化合物I(a)的晶型。在一个实施方案中，该化合物I(a)的晶型为1型、2型、3型、4型、5型或8型。在一个实施方案中，该晶型为8型。优选地，该晶型为1型或8型。

制备晶型8的方法

在一个实施方案中，提供了制备化合物I(a)的晶型的方法，其中该晶型为8型。

在一个实施方案中，制备8型的方法包括以下步骤：

a)提供化合物I(a)在溶剂系统中的溶液；

b)将步骤a)的溶液冷却至低于20℃的温度；

c)搅拌步骤b)的混合物；

d)任选地，分离步骤c)形成的固体；和

e)任选地，干燥由步骤d)分离的固体。

在一个实施方案中，溶剂系统包含其中化合物I(a)在室温具有至少0.1mg/mL、例如至少1mg/mL或至少2mg/mL的溶解度的溶剂。合适地，溶剂系统包含其中化合物I(a)在室温具有小于200mg/mL、例如小于100mg/mL、小于50mg/mL、小于20mg/mL或小于10mg/mL的溶解度的溶剂。合适地，溶剂系统包含乙酸乙酯、甲醇、乙醇、四氢呋喃、二甲亚砜、乙腈、甲基叔丁基醚和/或水。合适地，溶剂系统包含乙酸乙酯。合适地，溶剂系统基本上由乙酸乙酯组成。合适地，溶剂系统由乙酸乙酯组成。

在一个实施方案中，在步骤b)中冷却至低于20℃的温度，例如低于15℃或10℃。合适地，温度在0℃至15℃之间，例如在5℃至10℃之间。

在一个实施方案中，步骤c)中的搅拌进行至少1小时，例如至少2、5或10小时。合适地，步骤c)中的搅拌进行8至30小时，例如10至24小时。

合适地，步骤d)包括通过过滤分离该固体。

合适地，步骤e)包括在高于室温(例如高于30℃或高于40℃)的温度干燥该固体。合适地，步骤e)包括在约50℃的温度干燥该固体。

下面通过以下非限制性实施例来说明本发明。

实施例

本说明书中使用以下缩写：

ACN: 乙腈

API: 活性药物成分

a_w: 水活度

DCM: 二氯甲烷

DMF: 二甲基甲酰胺

DMSO: 二甲基亚砜

DSC: 差示扫描量热法

eq: 当量

EtOAc: 乙酸乙酯

h: 小时

KF: 卡尔·费歇尔滴定法

IPA: 2-丙醇

MeOH: 甲醇

MIBK: 甲基异丁基酮

MTBE: 叔丁基醚

NMT: 不超过

PLM: 偏光显微镜

PXRD: 粉末X-射线衍射

RT: 室温(～22℃)

TGA: 热重分析

THF: 四氢呋喃

Vol: 体积

XRPD: 粉末X-射线衍射

本文公开的方法可以基于本文包含的教导和本领域已知的合成方法以多种方式进行。在下述合成方法的描述中，应当理解除非另有说明，所有提出的反应条件，包括溶剂、反应气氛、反应温度、实验持续时间和后处理操作的选择，都可以选择作为该反应的条件标准。有机合成领域的技术人员应当理解，分子各部分上存在的官能团应当与所提出的试剂和反应相容。与反应条件不相容的取代基对于本领域技术人员来说是显而易见的，因此指出了替代方法。实施例的起始材料或者是可商购的或者可以通过标准方法由已知材料容易地制备。至少一些被鉴定为中间体(例如作为本文公开的合成方案的一部分)的化合物被认为是本发明的化合物。

如前所述，本公开涉及PCT/US2021/028323(PCT‘323)中公开的化合物的替代和新颖的合成方法，该文献通过引用整体并入本文。

在下面描述的方法中，可能有必要保护反应性官能团(例如羟基、氨基、硫基(thio)或羧基)以避免它们不必要地参与反应。这些基团的掺入以及引入和除去它们所需的方法是本领域技术人员已知的(例如，参见Greene,Wuts,Protective Groups inOrganic Synthesis.4th Ed.(2007))。脱保护步骤可以是合成中的最后步骤，使得除去保护基团以提供所公开方法的化合物。以下方案中使用的起始材料可以购买或通过化学文献中描述的方法或通过其改进、使用本领域技术人员已知的方法来制备。进行步骤的顺序可以根据引入的基团和使用的试剂而变化，但是对于本领域技术人员来说是显而易见的。

所公开方法的某些反应可以在碱存在下进行。此类碱的实例可包括但不限于碳酸盐，例如Li₂CO₃、Na₂CO₃、K₂CO₃、Rb₂CO₃、Cs₂CO₃、MgCO₃、CaCO₃、SrCO₃、BaCO₃及其水合物；和氢氧化物，例如LiOH、NaOH、KOH、Ca(OH)₂、NH₄OH及其水合物；和胺类，例如甲胺、三甲胺、三甲胺、二异丙基乙胺、吗啉和吗啉衍生物。

涉及将氨基部分与羧酸部分偶联以形成酰胺的所公开方法的某些反应可以在活化剂存在下进行。该活化剂的实例可包括但不限于碳二亚胺，例如N,N′-二环己基碳二亚胺(DCC)、N,N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)和羰基二咪唑(CDI)；和三唑，例如1-羟基-苯并三唑(HOBt)和1-羟基-7-氮杂-苯并三唑(HOAt)。其他活化剂可包括但不限于例如HBTU、HATU、HCTU、TBTU和PyBOP。

分析方法

XRPD

XRPD是使用Panalytical X’Pert³ Powder XRPD在Si零背景支架上进行的。2θ位置根据Panalytical Si参考标准盘进行校准。表12列出了用于结晶和无定形材料的参数。

表12-XRPD测试参数

TGA和DSC:

TGA数据是使用TA Instrument的TA Discovery 550TGA收集的。TGA使用镍参考标准进行校准。使用TA Instrument的TA D2500 DSC进行DSC。DSC使用铟参考标准进行校准。使用的详细参数列于表13中。

表13-TGA和DSC测试的参数

参数	TGA	DSC
			方法	渐变(Ramp)	渐变(Ramp)
样品盘	铂,开放的	铝,卷边的
			温度	RT-所需温度	25℃-所需温度
升温速率	10℃/min	10℃/min
			吹扫气体	N2	N2

PLM

偏光显微图片是在室温用Nikon DS-Fi2正置显微镜拍摄的。

KF

卡尔·费歇尔滴定法(KF)在具有DO308烘箱(梅特勒)的C30S库仑KF滴定仪上收集以确定样品中的水含量。使用5.55％烘箱水标准作为标准，用D0308烘箱验证库仑KF滴定仪。

HPLC方法

用于测量样品溶解度和稳定性的HPLC方法条件总结于表14中。

表14-HPLC方法

实施例1:化合物I的合成

PCT/US2021/028323的实施例55(通过引用并入本文)提供了制备外消旋化合物I：N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺的一个实施方案：

实施例55,PCT‘323

烷基化的一般操作，方法A

向搅拌下的Ar-OH(1eq.)和卤代化合物(2eq.)的乙腈/DMF(4mL/mmol)溶液中加入K₂CO₃(2eq.)和KI(0.5eq.)。将该反应混合物于60℃-80℃搅拌1216小时。通过TLC监测反应进程。完成后，将该反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。收集合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗化合物，将其通过硅胶柱色谱法或制备型-HPLC纯化，得到所需化合物。

烷基化的一般操作，方法B

向搅拌下的Ar-OH(1eq.)和卤代化合物(2eq)的DMF/ACN(6mL/mmol)溶液中加入Cs₂CO₃(2.5eq.)。将该反应混合物在RT/60℃搅拌2-4小时。通过TLC监测反应进程。完成后，将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。收集合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗化合物，将其通过硅胶柱色谱法或制备型-HPLC纯化，得到所需化合物。

PCT‘323的中间体20

1-甲基-3-硝基-1H-吡唑.在0℃，将NaOtBu(19.11g,199.1mmol)加入到搅拌下的3-硝基-1H-吡唑(15g,132.7mmol)的DMF(150mL)溶液中，并将该反应搅拌20分钟。然后滴加MeI(9.91mL 159.24mmol)。将所得混合物在室温搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。完成后，将反应混合物用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。收集有机层；用盐水洗涤；用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗化合物通过硅胶柱色谱法纯化，得到1-甲基-3-硝基-1H-吡唑(10g,59％)，为灰白色固体。TLC:20％ EtOAc/己烷(R_f:0.2).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.98(s,1H),7.03(d,J＝2.0Hz,1H),3.97(s,3H)ppm.

PCT‘323的实施例50

N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(1-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。在惰性气氛下，在-78℃，将LDA(2M的THF溶液,60mL,120mmol)滴加到搅拌下的甲基-3-硝基-1H-吡唑(10.16g,80mmol)的干燥THF(100mL)溶液中，并将反应混合物搅拌2小时。在-78℃，向其中添加N-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基-4-(5-氧代八氢并环戊二烯-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(3g,8mmol)的THF溶液。将所得反应混合物在-78℃搅拌1小时。通过TLC和LCMS监测反应进程。完成后，用饱和的NH₄Cl溶液猝灭反应并用乙酸乙酯萃取。收集有机层；用盐水洗涤；用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗化合物通过硅胶柱色谱法纯化，得到单一非对映异构体的N-(3-氯-4-氟苯基)-4-5-羟基-5-(1-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(2g,50％)，为灰白色固体。TLC:5％MeOH/DCM(R_f:0.3).¹H-NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.23(s,1H),7.96(dd,J＝6.8Hz,2.4Hz,1H),7.66(s,1H),7.59-7.55(m,1H),7.40(t,J＝9.2Hz,1H),6.93(s,1H),5.60(s,1H),4.05(s,3H),3.68(s,3H),3.29-3.24(m,1H),2.51-2.49(m,2H),2.30-2.24(m,2H),2.13-2.07(m,2H),1.94-1.85(m,4H)ppm；C₂₃H₂₄ClFN₆O₄：MS计算值：502.2；实测值：503.3[M+1]⁺.

PCT‘323的实施例51

4-(5-(3-氨基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羟基八氢并环戊二烯-2-基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。在氮气气氛下，将10％ Pd/C(0.5g)和NaBH₄(1.06g,27.88mmol)加入到搅拌下的N-(3-氯-4-氟苯基)-4-5-羟基-5-(1-甲基-3-硝基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(2g,3.98mmol)的MeOH(20mL)溶液中。将反应混合物在0℃搅拌30分钟。通过TLC和LCMS监测反应进程。完成后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤并用甲醇洗涤。将滤液减压浓缩。将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。收集有机层；用盐水洗涤；用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗化合物通过硅胶柱色谱法纯化，得到4-5-(3-氨基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羟基八氢并环戊二烯-2-基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(1.5g,80％)，为灰白色固体。TLC:10％ MeOH/DCM(R_f:0.1).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.25(s,1H),7.95(d,J＝4.4Hz,1H),7.76(s,1H),7.58-7.54(m,1H),7.41(t,J＝9.2Hz,1H),6.62-5.57(br s,2H),5.39(s,1H),5.17(s,1H),3.69(s,6H),3.32-3.31(m,1H,融合(merged)),2.50-2.32(m,2H,融合),2.29-2.11(m,4H),1.85-1.83(m,4H)ppm；C₂₃H₂₆ClFN₆O₂：MS计算值：472.2；实测值：471.2[M-1]^-.

PCT‘323的实施例52

4-(5-(3-氨基-4-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羟基八氢并环戊二烯-2-基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。将选择性氟试剂(Selectfluor)(0.149g,0.42mmol)和DIPEA(0.147mL,0.84mmol)加入到搅拌下的4-(5-(3-氨基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羟基八氢并环戊二烯-2-基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(0.2g,0.42mmol)的ACN(5mL)溶液中。将该反应混合物于100℃搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进程。完成后，将该反应混合物减压浓缩。将粗化合物通过硅胶柱色谱法纯化，得到4-(5-(3-氨基-4-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-羟基八氢并环戊二烯-2-基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(0.02g,10％)，为灰白色固体。TLC:10％MeOH的DCM溶液(R_f:0.3).¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.19(s,1H),7.95(dd,J＝6.8,2.4Hz,1H),7.63(s,1H),7.57-7.53(m,1H),7.39(t,J＝9.6Hz,1H),5.21(s,1H),4.47(s,2H),3.66(s,3H),3.60(s,3H),3.30-3.14(m,1H),2.50-2.40(m,2H,融合),2.23-2.16(m,2H),2.07-2.04(m,2H),1.96-1.83(m,4H).C₂₃H₂₅ClF₂N₆O₂：MS计算值：490.2；实测值：473.1[M-H₂O+1]⁺.

PCT‘323的中间体21

3-(5-(5-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)-2-羟基八氢并环戊二烯-2-基)丙炔酸甲酯.在惰性气氛中，在-78℃，将n-BuLi(1.19g,18.6mmol)加入到搅拌下的丙炔酸甲酯(1.56g,18.6mmol)的干燥THF(40mL)溶液中，并将该反应混合物搅拌30分钟。在-78℃，向其中加入N-(3-氯-4-氟苯基)-1-甲基-4-(5-氧代八氢并环戊二烯-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(1g,2.66mmol)的THF溶液。将生成的反应混合物于-78℃搅拌2小时。通过TLC和LCMS监测反应进程。完成后，将该反应混合物用饱和的NH₄Cl溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。收集有机层；用盐水洗涤；用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗化合物通过硅胶柱色谱法纯化，得到单一非对映异构体的3-(5-(5-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)-2-羟基八氢并环戊二烯-2-基)丙炔酸甲酯，为灰白色固体。TLC:5％MeOH/DCM(R_f:0.3)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.23(s,1H),7.95(d,J＝6.4Hz,1H),7.74-7.68(m,1H),7.59-7.55(m,1H),7.40(t,J＝8.8Hz,1H),5.79(s,1H),3.69(s,3H),3.63(s,3H),3.28-3.23(m,1H),2.58-2.54(m,2H),2.09-2.06(m,4H),1.80-1.76(m,4H)ppm.C₂₃H₂₃ClFN₃O₄：MS计算值：459.1；实测值：460.2[M+1]⁺.

PCT‘323的实施例53

N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-羟基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。将TEA(2g,19.82mmol)和3-(5-(5-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)-2-羟基八氢并环戊二烯-2-基)丙炔酸甲酯(1.3g,2.83mmol)加入到搅拌下的硫酸甲基肼(2.85g,19.82mmol)的EtOH(20mL)溶液中。将该反应混合物于50℃搅拌24小时。通过TLC和LCMS监测反应进程。完成后，将该反应混合物减压浓缩。将残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。收集有机层；用盐水洗涤；用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-羟基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(0.65g,49％)，为白色固体。TLC:8％MeOH/DCM(R_f:0.2)；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.18(s,1H),9.27(s,1H),7.95(d,J＝4.4Hz,1H),7.64(s,1H),7.61-7.55(m,1H),7.39(t,J＝8.8Hz,1H),5.28(s,1H),5.13(s,1H),3.66(s,6H),3.38-3.18(m,1H,融合),2.60-2.38(m,2H,融合),2.20-2.01(m,4H),1.91-1.75(m,4H)ppm.C₂₃H₂₅ClFN₅O₃：MS计算值：473.2；实测值：473.9[M+1]⁺.

PCT‘323的实施例54

N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-异丙氧基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。使用方法A，通过N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-羟基-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺的烷基化合成标题化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.21(s,1H),7.99-7.94(m,1H),7.64(s,1H),7.60-7.54(m,1H),7.40(t,J＝9.2Hz,1H),5.47(s,1H),5.20(s,1H),4.61-4.54(m,1H),3.71(s,3H),3.67(s,3H),3.29-3.18(m,1H),2.48-2.39(m,2H),2.20-2.04(m,4H),1.90-1.78(m,4H),1.21(d,J＝6.4Hz,6H)ppm；TLC:10％ MeOH/DCM(R_f:0.3)；C₂₆H₃₁ClFN₅O₃：MS计算值：515.2；实测值：516.1[M+1]⁺.

PCT‘323的实施例55

N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺。在惰性气氛中，在0℃，将MeMgBr(3M的DEE溶液,0.59mL,1.78mmol)缓慢地加入到搅拌下的2-((5-(5-(5-((3-氯-4-氟苯基)氨基甲酰基)-1-甲基-1H-咪唑-4-基)-2-羟基八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基)氧基)乙酸乙酯(0.5g,0.89mmol)的干燥THF(5mL)溶液中。将反应混合物在室温搅拌2小时。通过TLC监测反应进程。完成后，将该反应混合物用冰冷的水淬灭并用乙酸乙酯萃取。收集有机层；用盐水洗涤；用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将粗化合物通过柱色谱法、随后通过制备型HPLC纯化，得到N-(3-氯-4-氟苯基)-4-(5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)八氢并环戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(0.501g,61％)，为灰白色固体。TLC:5％ MeOH的DCM溶液(R_f:0.4)；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ10.22(s,1H),7.96(dd,J＝6.8Hz,2.4Hz,1H),7.65(s,1H),7.59-7.52(m,1H),7.40(t,J＝9.6Hz,1H),5.52(s,1H),5.23(s,1H),4.53(s,1H),3.75-3.70(m,5H),3.67(s,3H),3.26-3.20(m,1H),2.50-2.44(m,2H),2.20-2.06(m,4H),1.90-1.80(m,4H),1.13(s,6H)ppm.C₂₇H₃₃ClFN₅O₄：MS计算值：545.2；实测值：546.3[M+1]⁺.

方案

如前所述，本公开涉及PCT/US2021/028323(PCT‘323)中公开的化合物的替代和新颖的合成方法，其全部内容通过引用并入本文。

获得化合物I的一种途径使用PCT‘323作为模板：

存在替代途径，包括在2021年10月20日提交的共同未决的美国临时申请号63/257,697中公开的途径，并且其全部内容通过引用并入本文。

实施例2:

晶型的生成

本公开的一个实施方案是化合物I的新固态形式。使用不同的技术(在室温和60℃浆化、缓慢蒸发、缓慢冷却、添加反溶剂、浆料热循环、固体蒸气扩散和液体蒸气扩散)在具有结晶起始材料或无定形材料的各种溶剂系统中进行了许多结晶实验。仅鉴定出一种无水晶型(起始API)。该晶型被指定为1型。在THF/水和丙酮/水系统中获得三水合物晶型(2型)。经过解吸和再吸收后，2型转变为3型。3型被确定为一水合物晶型。在MTBE中的浆料研究中鉴定了另一种水合晶型(4型)。DCM溶剂化物晶型(5型)是在DCM中的固体蒸气扩散研究中生成的。

在一个实施方案中，一种或多种晶型通过在RT或60℃浆化生成：将过量的API悬浮在选定的溶剂中3天。如果API在研究结束时完全溶解，则转移样品以缓慢蒸发。

在一个实施方案中，通过缓慢冷却生成一种或多种晶型：在50℃将过量的API悬浮在选定的溶剂中。过滤悬浮液。将滤液在冷藏条件下储存。如果研究结束时没有形成晶体，则转移样品以缓慢蒸发。

在一个实施方案中，通过缓慢蒸发生成一种或多种晶型：在不同溶剂中制备接近饱和的溶液。过滤溶液并将滤液置于周围环境中。

在一个实施方案中，通过添加反溶剂生成一种或多种晶型：将API溶解在选定的溶剂中。过滤溶液并缓慢引入反溶剂。

在一个实施方案中，通过液体-蒸汽扩散生成一种或多种晶型：研究是在两瓶系统(较小的瓶放在较大的瓶内)中进行的。将过滤后的API溶液放入较小的瓶中，而将反溶剂放入较大的瓶中。

在一个实施方案中，通过固体-蒸气扩散生成一种或多种晶型：研究是在两瓶系统(较小的瓶放在较大的瓶内)中进行的。将API放入较小的瓶中，而将溶剂放入较大的瓶中。

在一个实施方案中，通过热循环生成一种或多种晶型：将过量的API悬浮在选定的溶剂中。然后将悬浮液进行5℃至50℃之间的交替热程序。

正如将要指出的，对于浆化实验、热循环和固体蒸汽实验，使用了晶体API(1型)和无定形API。

这些技术是本领域技术人员已知的。

晶型的表征

表15提供了本公开的晶型的表征总结。图1-9示出了如图所示的1型、2型、3型、4型和5型的特征。

表15-晶型的表征总结

表16、表17和表18提供了使用如图10A、图10B、图10C所表征的化合物I的无定形形式进行筛选实验后本公开的晶形的表征总结。图11、图12A和图12B示出了所指示的1型、2型、3型、4型和5型的特征。

表16-以无定形形式开始的室温的浆化

实验编号	溶剂	固体晶型
			6036531-16-A1	H2O	1型
6036531-16-A2	THF	1型
			6036531-16-A3	DMF	1型
6036531-16-A4	EtOAc	1型
			6036531-16-A5	EtOH	1型
6036531-16-A6	三乙胺	1型
			6036531-16-A7	MTBE	4型
6036531-16-A8	二噁烷	1型
			6036531-16-A9	庚烷	无定形
6036531-16-A10	二甲氧基乙烷	1型
			6036531-16-A11	丙酮	1型
6036531-16-A12	THF/H2O(aw＝0.8,0.6/0.4)	2型

表17-从无定形形式开始的固体蒸气扩散

实验编号	溶剂	固体晶型
			6036531-17-A1	THF	1型
6036531-17-A2	MeOH	1型
			6036531-17-A3	DCM	5型
6036531-17-A4	丙酮	1型
			6036531-17-A5	MTBE	1型
6036531-17-A6	二噁烷	1型
			6036531-17-A7	庚烷	无定形
6036531-17-A8	二甲氧基乙烷	1型
			6036531-17-A9	EtOAc	1型

表18-温度循环

下表19至表28各自提供了在使用化合物I的1型结晶进行筛选实验后本公开的晶型的表征总结。图13-22示出了所指示的1型、2型、3型、4型和5型的特征。

表19-过滤的反溶剂添加实验

表20-反溶剂添加

表21-于室温的浆化

表22-60℃的浆化

实验编号	溶剂	固体晶型
			6036531-04-A1	水	1型
6036531-04-A2	ACN	1型
			6036531-04-A3	MIBK	1型
6036531-04-A4	IPAc	1型
			6036531-04-A5	MEK	1型
6036531-04-A6	甲苯	1型
			6036531-04-A7	EtOH	1型
6036531-04-A8	正丙醇	1型
			6036531-04-A9	正庚烷	1型
6036531-04-A10	THF/H2O(1:2)	1型
			6036531-04-A11	DMF/甲苯(1:2)	1型
6036531-04-A12	MEK/正庚烷(1:1)	1型
			6036531-04-A13	1-丁醇/MIBK(1:1)	1型
6036531-04-A14	DMSO/H2O(1:2)	1型

表23-固体蒸气扩散

表24-液体蒸气扩散

表25-过滤的缓慢冷却实验

表26-缓慢蒸发

实验编号	溶剂	固体晶型
			6036531-08-A1	MeOH	1型
6036531-08-A2	丙酮	1型
			6036531-08-A3	2-MeTHF	1型
6036531-08-A4	THF	1型
			6036531-08-A5	MEK	1型
6036531-08-A6	乙醇/ACN(1:1)	1型
			6036531-08-A7	THF/DCM(1:2)	无定形
6036531-08-A8	丙酮/DCM(1:1)	1型

表27-缓慢冷却

表28-温度循环

图24是化合物I的1型的XRPD。1型的XRPD衍射图中存在的特定特征峰以2θ列于表29。针对1型获取的XRPD衍射图中存在的峰位置呈现在表30中。

表29-特征峰-1型

峰	2θ(度)
		1	7.34
2	12.17
		3	16.43
4	17.4
		5	17.65
6	18.11
		7	19.37
8	19.87

表30-1型的XRPD峰位置

图25是化合物I的2型的XRPD。2型的XRPD衍射图中存在的特定特征峰以2θ列于表31中。针对2型获取的XRPD衍射图中存在的峰位置呈现在表32中。

表31-特征峰-2型

峰	2θ(度)
		1	5.59
2	6.16
		3	8.53
4	14.15
		5	16.14

表32-2型的XRPD峰位置

图26是化合物I的3型的XRPD。3型的XRPD衍射图中的特定特征峰以2θ呈现在表33中。针对3型获取的XRPD衍射图中存在的峰位置呈现在表34中。

表33-特征峰-3型

峰	2θ(度)
		1	6.38
2	7.12
		3	14.83

表34-3型的XRPD峰位置

峰位置(°2θ)	峰位置(°2θ)
		6.4	18.3
7.1	20.4
		8.5	20.9
9.3	21.4
		9.7	22.0
10.9	22.9
		13.4	25.8
14.2	28.7
		14.9	29.9
15.8	31.6
		16.3	33.7

图27是化合物I的4型的XRPD。4型的XRPD衍射图中的特定特征峰以2θ呈现在表35中。针对4型获取的XRPD衍射图中存在的峰位置呈现在表36中。

表35-特征峰-4型

表36-4型的XRPD峰位置

峰位置(°2θ)	峰位置(°2θ)
		5.1	18.7
6.2	19.3
		7.3	19.9
8.3	20.7
		9.4	21.9
10.0	22.5
		11.5	23.4
12.2	24.3
		13.0	25.7
13.9	26.5
		14.5	28.5
15.0	29.5
		15.4	30.6
16.4	31.0
		17.3	32.2
17.6	34.3
		18.1	39.6

图28是化合物I的5型的XRPD。5型的XRPD衍射图中的特定特征峰以2θ呈现在表37中。针对5型获取的XRPD衍射图中存在的峰位置呈现在表38中。

表37-特征峰-5型

峰	2θ(度)
		1	6.6
2	18.9

表38-5型的XRPD峰位置

溶解度实验

化合物I，1型(6036531-01-A)的溶解度是在室温在二十种不同溶剂中评估的。将大约2mg固体添加到3mL玻璃瓶中。然后将表39中的溶剂逐步(每步50μL)添加到小瓶中，直至固体溶解或达到2mL的总体积。结果总结于表39中。

表39-化合物I(6036531-01-A)的近似溶解度

实施例3:8型制备和表征

8型是无水晶型，微量的这种晶型是在原料药制备活动中首次令人惊讶地发现的-参见图34由制造商生产的材料获取的XRPD。XRPD显示分离出的材料大部分为1型，1型具有一些属于8型的小峰。

竞争性浆料研究

在25℃和50℃，在THF、EtOH和EtOAc中，对1型和制造过程中生产的材料(1型和8型混合物)进行了竞争性浆料研究。在第3天和第7天通过XRPD检测该固体晶型。结果呈现在表40中。

表40-竞争性浆料研究结果

竞争性浆料研究表明，8型是在25和50℃时热力学更稳定的形式。

8型的表征

使用XRPD、DVS、DSC、TGA和PLM进行8型的固态表征(参见图29-32)。8型被确定为化合物I(a)的无水晶型(参见图29的XRPD衍射图)。XRPD峰位置呈现于表41中。DSC显示急剧熔化吸热，起始温度为212℃(参见图30)，而TGA显示直至216℃时重量损失为0.14％(参见图30)。DVS分析显示，80％相对湿度水分更新率为0.1％(参见图31)，表明8型不吸湿。DVS实验后未观察到晶型变化。PLM显示层状双折射颗粒(图32)。

表41-8型的XRPD峰位置

制备8型的方法

8型可以如下制备：

1.将N-(3-氯-4-氟苯基)-4-((3aS,5S,6aR)-5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-1,3a,4,5,6,6a-六氢戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺(3.9kg)装入反应器中。

2.将THF(146kg)装入反应器中。

3.将在THF(20kg)中的10wt％Pd/C(0.39kg)装入反应器中。

4.将内容物暴露于1atm H₂下。

5.搅拌内容物约25至30小时，直至剩余N-(3-氯-4-氟苯基)-4-((3aS,5S,6aR)-5-羟基-5-(3-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)-1,3a,4,5,6,6a-六氢戊二烯-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-5-甲酰胺不超过2.0％。

6.通过硅藻土过滤内容物(用THF洗涤)。

7.将活性炭加入滤液中，并在50℃搅拌混合物16小时。

8.通过硅藻土和滤筒过滤(用THF洗涤)。

9.在40至50℃和<1.0MPa的条件下，在经大约40小时浓缩至2-5体积。

10.加入乙酸乙酯(8体积)。

11.在40至50℃和<1.0MPa下，在经大约6-8小时浓缩至2-3体积。

12.重复步骤10和11两次。

13.用EtOAc(3体积)稀释混合物。

14.在经大约3小时将工艺温度调整至5-10℃。

15.搅拌内容物14至15小时。

16.通过过滤收集沉淀物(用EtOAc洗涤)。

17.在50℃干燥材料，直至干燥重量损失为NMT 4.0％。

实施例4：化合物I的单晶培养及结构分析

生长化合物(I)的单晶并通过单晶X-射线衍射进行分析以确定其绝对结构。

单晶是指晶体内部颗粒在三维空间中规则并周期性排列，简单来说就是单晶多面体。单晶分析是鉴定化合物绝对结构最直接、最有说服力的方法。因此，在药物研究中，单晶分析常被用来确认甚至直接确定药物分子的绝对结构。

单晶培养的设计实验

室温/50℃温度的近似溶解度测试

在室温(～25℃)，测定起始材料在不同溶剂中的大致溶解度。具体步骤如下：将约5mg化合物I装入干净的玻璃瓶中，然后在室温加入适量溶剂直至溶液中无可见颗粒(添加至多1.5mL溶剂)，最后记录溶剂的量以计算溶解度。

缓慢冷却结晶

在55℃，将约100.0mg化合物I装入干净的玻璃瓶中，添加1.2mL MeOH并获得澄清溶液。将体系冷却至45℃，加入少量晶种，得到悬浮液。将悬浮液通过0.22μm过滤器过滤，将滤液放入干净的玻璃瓶中并密封。将样品静置并缓慢冷却至室温。

使用的方法和仪器

SCXRD设备类型： Bruker APEX-IICCD

衍射辐射类型： Mo K\a

衍射环境温度： 298K

实验结果

近似溶解度

在室温近似溶解度的实验结果见表42：

表42-近似溶解度

缓慢冷却结晶

缓慢冷却结晶的实验结果见表43。

表43-缓慢冷却结晶的结果

溶剂	现象
		MeOH	无色片状晶体

单晶数据分析

合适的片状单晶可以通过缓慢冷却结晶从热的饱和MeOH溶液中生长。样品的单晶结构属于单斜晶系，空间群为P2₁/c。细胞参数a:b:c:α:90°，β:104.549°，γ:90°和V:其绝对结构如图33所示并且其详细参数如表44所示。

表44-单晶参数

通过单晶X射线衍射确定化合物I的结构为化合物I(a)：

本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文用于使用此类引用的教导。

用于本文描述的实验的测试化合物以游离形式或盐的形式使用。

观察到的具体反应可以根据并取决于所选择的具体活性化合物或是否存在载体、以及所采用的制剂类型和施用模式而变化，并且根据本发明的实践预期结果中的此类预期变化或差异。

尽管文中示出并详细描述了本发明的具体实施方案，但是本发明不限于此。上述详细描述是作为本发明的示例而提供的，并且不应被解释为构成对本发明的任何限制。修改对本领域技术人员来说是显而易见的，并且不背离本发明精神的所有修改都旨在包括在所附权利要求的范围内。

除非另有说明，说明书和权利要求书中使用的所有表示成分的量、反应条件等的数字应被理解为在所有情况下都被术语“约”修饰。因此，除非有相反的指示，否则本说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是近似值，其可以根据本公开寻求获得的期望性质而变化。

Claims (35)

1.化合物I的晶型

2.权利要求1的晶型，其中化合物I为化合物I(a)：

3.权利要求1或2的晶型，其中所述晶型为8型。

4.权利要求3的晶型，其中所述8型晶型的特征在于使用Cu Kα 辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值9.4、15.4和16.7°2θ±0.2°2θ处的峰。

5.权利要求4的晶型，其中使用Cu Kα辐射测量的XRPD图进一步包含选自以下峰的至少两个、五个、十个、十五个或二十个另外的峰°2θ±0.2°2θ：

6.权利要求3-5中任一项的晶型，其中8型特征在于使用Cu Kα 辐射测量的XRPD图，其与图29所示基本相同。

7.权利要求3-6中任一项的晶型，其中所述晶型是无水的。

8.权利要求7的晶型，其中所述晶型包含小于2重量％的水。

9.权利要求3-8中任一项的晶型，其中所述8型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含起始温度为212℃±2℃的吸热事件。

10.权利要求9的晶型，其中所述DSC热分析图不包含50℃至100℃之间的热事件和包含起始温度为212℃±2℃的吸热事件。

11.权利要求3-10中任一项的晶型，其中所述8型晶型的特征在于DSC热分析图，其与图30所示的DSC热分析图基本相同。

12.权利要求3-11中任一项的晶型，其中所述晶型是基本上纯的。

13.权利要求1或2的晶型，其中所述晶型为1型。

14.权利要求13的晶型，其特征在于图24的XRPD图。

15.权利要求13或14的晶型，其特征在于XRPD具有下列2θ峰中的至少一个：

16.权利要求15的晶型，其特征在于至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个或至少七个2θ峰。

17.权利要求16的晶型，其特征在于八个2θ峰。

18.权利要求13的晶型，其中所述1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其包含在2θ值12.2、19.4和19.9°2θ±0.2°2θ处的峰。

19.权利要求18的晶型，其中所述XRPD图进一步包含至少一个或两个选自2θ值16.4和17.6°2θ±0.2°2θ处的峰的特定峰。

20.权利要求18的晶型，其中所述XRPD图进一步包含至少两个、五个、十个、十五个或二十个选自下列°2θ±0.2°2θ中的另外的峰：

21.权利要求13-20中任一项的晶型，其中所述1型晶型的特征在于使用Cu Kα辐射测量的XRPD图，其与图24所示基本相同。

22.权利要求13-21中任一项的晶型，其中所述1型晶型是无水的。

23.权利要求13-22中任一项的晶型，其中所述晶型包含小于2重量％的水。

24.权利要求13-23中任一项的晶型，其中所述1型晶型的特征在于DSC热分析图，其包含起始温度为210℃±2℃的吸热事件。

25.权利要求24的晶型，其中所述DSC热分析图不包含50℃至100℃之间的热事件和包含起始温度为210℃±2℃的吸热事件。

26.权利要求13-25中任一项的晶型，其中所述1型晶型的特征在于DSC热分析图与图2B所示的DSC热分析图基本相同。

27.权利要求13-26中任一项的晶型，其中所述1型至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、95.5％、96％、96.5％、97％、97.5％、98％、98.5％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％之一不含其他晶型。

28.权利要求13-27中任一项的晶型，其中所述1型不含其他晶型。

29.权利要求1-28中任一项的晶型，其中所述化合物是立体化学纯的。

30.药物组合物，其包含根据权利要求1至29中任一项所述的晶型和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

31.治疗有此需要的受试者中的乙型肝炎(HBV)感染的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的根据权利要求1-29中任一项所述的晶型。

32.治疗有此需要的受试者中的乙型肝炎(HBV)感染的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的权利要求30的药物组合物。

33.根据权利要求1至29中任一项所述的晶型或根据权利要求30所述的药物组合物，其用于治疗HBV感染。

34.根据权利要求1至29中任一项所述的晶型或根据权利要求30所述的药物组合物用于治疗HBV感染的用途。

35.根据权利要求1至29中任一项所述的晶型在制备用于治疗HBV感染的药物中的用途。