CN118239928A - 成纤维细胞活化蛋白亲和化合物及其放射性标记物 - Google Patents

成纤维细胞活化蛋白亲和化合物及其放射性标记物 Download PDF

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CN118239928A CN202211659697.4A CN202211659697A CN118239928A CN 118239928 A CN118239928 A CN 118239928A CN 202211659697 A CN202211659697 A CN 202211659697A CN 118239928 A CN118239928 A CN 118239928A
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Inventor
梅岩
倪春峰
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Nanjing Sino New Drug Research And Development Co ltd
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Nanjing Sino New Drug Research And Development Co ltd
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Abstract

本发明提供了一种成纤维细胞活化蛋白亲和化合物及其放射性标记物、组合物，所述亲和化合物及其放射性标记物为本发明所述的式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐。

Description

成纤维细胞活化蛋白亲和化合物及其放射性标记物
技术领域
本发明涉及化学、医药领域，具体地，涉及到一种成纤维细胞活化蛋白亲和化合物及其放射性标记物以及组合物。
背景技术
癌症相关成纤维细胞(CAF)是构成恶性肿瘤基质的重要非恶性细胞，在肿瘤的进展和转移中有重要作用。成纤维细胞活化蛋白(FAP)是CAF的重要标志物，在超过90％的上皮癌的基质中显著上调，而在健康成年组织中几乎不表达。FAP还在几种组织重塑状态中上调，例如愈合伤口、瘢痕疙瘩、硬皮病、肺纤维化、肝硬化、关节炎、心肌梗塞后的疤痕组织、晚期动脉粥样硬化病变等，因此结合于FAP的放射性核素标记的靶向化合物可以用于肿瘤的发现和治疗，以及肝纤维化、血粥状动脉硬化等疾病的影像评价。
放射性核素I-131标记的FAP靶向抗体Sibrotuzumab在早期被用于FAP阳性肿瘤显像和治疗，结果表明其在肿瘤中有特异性浓集，但是血清除速度较慢，从肝脏、脾脏和其他正常器官缓慢消除，这对显像和治疗产生了不利影像。近年来靶向FAP的小分子抑制剂陆续被发现，其构效关系也得到了深入研究。Talabostat(PT-100)是一种基于硼酸的FAP高亲和抑制剂，其缺点是同DPP4也有较高的亲和性，导致对FAP的选择性较差。经进一步结构优化发现的含喹啉结构的化合物UAMC-1110同FAP有高亲和性，以及良好的FAP/PREP和FAP/DPP-IV选择性。
德国海德堡大学Haberkorn小组开发了含有UAMC-1110核心结构的系列FAP靶向小分子放射性示踪剂，通过将含喹啉结构的抑制剂与螯合剂偶联，然后用放射性同位素Ga-68标记，获得了可用于PET成像的显像剂，其中68Ga-FAPI-02、68Ga-FAPI-04和68Ga-FAPI-46等化合物已经在国内外进行了大量临床应用研究。该系列化合物在肿瘤中的摄取高、在正常组织中积聚低、从循环中快速清除，注射示踪剂10分钟后，即可获得高对比度PET图像。68Ga-FAPI-02、68Ga-FAPI-04和68Ga-FAPI-46的人体吸收辐射剂量估计范围为1.4至1.8mSv/100MBq，与其他基于68Ga的示踪剂相当(如68Ga-DOTATOC/DOTATATE或68Ga-PSMA-11)。
不同种类肿瘤患者显像研究表明，68Ga-FAPI-02和68Ga-FAPI-04在肉瘤、食管癌、乳腺癌、胆管癌和肺癌中发现了高摄取；在肝细胞癌、结直肠癌、头颈癌、卵巢癌、胰腺癌和前列腺癌中观察到中等程度摄取；在嗜铬细胞瘤、肾细胞癌、分化型甲状腺癌、腺样囊性癌和胃癌中观察到最低摄取，在所有肿瘤实体之间和内部观察到摄取的高度变化。
FAPI类显像剂在许多非肿瘤疾病中，包括炎症性病变、纤维化疾病、创伤、关节炎、退行性骨病、免疫球蛋白4相关疾病、结缔组织病和动脉粥样硬化，都表现为摄取增加，该类显像剂可能在以上疾病的诊疗中有独特的应用价值，例如，FAP靶向PET成像可用于区分IgG-4相关疾病中的炎症和纤维化情况、评估动脉粥样硬化斑块的进展、评估肺部和肝部疾病中的纤维情况。
放射性核素F-18的半衰期(109.8分钟)比Ga-68(67.7分钟)长，更利于大规模生产和配送，因此F-18标记的FAPI类型显像剂陆续被开发出来。化合物FAPI-74中采用NOTA螯合基团，可以通过氟-铝法进行F-18标记或用Ga-68标记，前瞻性临床应用研究表明，F-18标记的FAPI-74在肿瘤中有特异性高摄取，辐射剂量测定显示18F-FAPI-74的有效剂量为1.4±0.2mSv/100MBq，低于使用18F-FDG和其他18F示踪剂获得的剂量。唐刚华等人也在喹啉结构FAPI的基础上，引入亲水性PEG链和NOTA螯合基团开发了采用氟-铝法标记的[18F]AlF-P-FAPI。汤姆斯等人开发了18F标记的糖基化18F-FGlc-FAPI，与68Ga-FAPI-04相比，糖缀合物FGlc-FAPI在体外显示出较低的亲和力、较高的血浆蛋白结合和显着的肝胆排泄。
鉴于FAPI类显像剂在各类肿瘤显像表现出的高靶向-本底比值以及在正常组织内的低滞留，该类化合物可能能够通过标记治疗用放射性核素，如131I、90Y、177Lu和225Ac，成为肿瘤治疗药物。文献报道的研究表明，131I-FAPI-04能够抑制U87MG胶质瘤异种移植模型上的肿瘤生长。225Ac标记的FAPI-04能够抑制胰腺癌异种移植模型动物中的肿瘤生长。
但是在研究中发现，这些公开的化合物都存在从靶向组织中冲出速度过快、滞留时间较短，而导致核素治疗效果减弱的问题。
发明内容
本发明提供了一种成纤维细胞活化蛋白(FAP)亲和化合物及其放射性标记物及其组合物以及组合物，所述亲和化合物及其放射性标记物为本发明第一方面所述的式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐。其克服了在肿瘤中的滞留时间短的问题，提高了靶向亲和性，优化了化合物的肝-肾组织分布，降低了肝摄取和肝胆代谢，血液清除速度慢，肿瘤摄取量多，提高了血液中的稳定性。
在本发明第一方面，提供了一种式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，
其中，
Z为或者/>
Q为螯合基团或所述螯合基团与金属阳离子或其卤化物形成的络合物；
X为键或C1-C3烷基；
Y为键或C1-C3烷基；
A为
R1为氢或卤素，R2为氢或卤素，且R1、R2不同时为氢；
R3为氢或卤素，R4为氢或卤素，且R3、R4不同时为氢；
U、G各自独立地为-O-、-NRa-或-CO-NH-；Ra为氢、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基；
V、E各自独立地为-C1-C3烷基-5-6元杂芳基-C1-C3烷基-；
W、D各自独立地为-NRb-、-5-6元杂环烷基-5-6元杂芳基-、-5-6元杂环烷基-；
Rb为氢或C1-C6烷基；所述C1-C6烷基任选地被选自下列的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、5-6元环烷基、5-6元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基。
在本发明一优选实施方式中，所述螯合基团为有机螯合基团，其中配位原子为N和/或O；较佳地，所述螯合基团包括二啮、三啮、四啮、五啮、六啮螯合基团。
在本发明一优选实施方式中，为/>
在本发明一优选实施方式中，为/>
在本发明一优选实施方式中，为/>
在本发明一优选实施方式中，为/>
在本发明一优选实施方式中，X为键，Y为-(CH2)2-；或Y为键，X为-(CH2)2-。
在本发明一优选实施方式中，U为-O-、-NH-、-N(CH3)-或-CO-NH-；V为-C1-C3烷基-5元杂芳环-C1-C3烷基-。
在本发明一优选实施方式中，V为-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-、-(CH2)2-5元杂芳环-(CH2)3-、-(CH2)2-5元杂芳环-(CH2)2-或-CH2-5元杂芳环-(CH2)2-；
较佳地，-U-V-为-O-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-、-O-(CH2)3-5元杂芳环-(CH2)2-或-N(CH3)-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-；
较佳地，所述5元杂芳环为5元含氮杂芳环；
更佳地，所述5元含氮杂环为1,2,3-三氮唑
在本发明一优选实施方式中，G为-O-、-NH-或-N(CH3)-或-CO-NH-；
在本发明一优选实施方式中，E为-C1-C3烷基-5元杂芳环-C1-C3烷基-；
较佳地，E为-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-、-(CH2)2-5元杂芳环-(CH2)3-、-(CH2)2-5元杂芳环-(CH2)2-或-CH2-5元杂芳环-(CH2)2-；
较佳地，-G-E-为-O-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-、-O-(CH2)3-5元杂芳环-(CH2)2-或-N(CH3)-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-；
较佳地，所述5元杂芳环为5元含氮杂芳环；
更佳地，所述5元含氮杂环为1,2,3-三氮唑
在本发明一优选实施方式中，W、D各自独立地为-NRb-、-5-6元杂环烷基-5-6元杂芳基-、-5-6元杂环烷基-；
Rb为氢、C1-C3烷基、5-6元杂环烷基取代的C1-C3烷基；
较佳地，所述5-6元杂环烷基为5或6元含N杂环烷基；
较佳地，所述5-6元杂芳基为5或6元含N杂芳基。
在本发明一优选实施方式中，W、D各自独立地为-NH-、
在本发明一优选实施方式中，所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，具有式II所示结构
在本发明一优选实施方式中，所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，具有式IIa或IIb所示结构
在本发明一优选实施方式中，-W-V-U-、-D-E-G-各自独立地选自：
在本发明一优选实施方式中，为/>
在本发明一优选实施方式中，所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，具有式III所示结构
较佳地，-U-V-NH-为较佳地，-G-E-NH-为/>在本发明一优选实施方式中，-U-V-W-与-G-E-D-相同。
在本发明一优选实施方式中，所述螯合基团选自：
在本发明一优选实施方式中，所述螯合基团为
在本发明一优选实施方式中，所述络合物中金属阳离子或其卤化物具有放射性。
在本发明一优选实施方式中，所述金属阳离子为67Ga、68Ga、111In、99mTc、186Re、188Re、139La、140La、175Yb、153Sm、166Ho、88Y、90Y、149Pm、165Dy、169Er、177Lu、47Sc、142Pr、159Gd、212Bi、213Bi、72As、72Se、97Ru、109Pd、105Rh、101mRh、119Sb、128Ba、197Hg、211At、151Eu、153Eu、169Eu、201Tl、203Pb、212Pb、64Cu、67Cu、188Re、186Re、198Au、225Ac、227Th或199Ag。
在本发明一优选实施方式中，所述卤化物为选自下列金属的氟化物或碘化物：Mg、Al、Ca、Ga、Ga、In、Tc、Re、Re、La、La、Yb、Sm、Ho、Y、Pm、Dy、Er、Lu、Sc、Pr、Gd、Bi、Bi、As、Se、Ru、Pd、Rh、Rh、Sb、Ba、Hg、At、Eu、Eu、Eu、Tl、Pb、Pb、Cu、Cu、Re、Re、Au、Ac、Th、Ag的；其中所述氟为18F，所述碘为129I、131I、123I、124I或125I。
在本发明一优选实施方式中，所述金属阳离子为二价或三价。
在本发明一优选实施方式中，所述金属阳离子为67Ga。
在本发明一优选实施方式中，所述卤化物为Al的氟化物，所述氟为18F。
在本发明一优选实施方式中，所述络合物为
在本发明一优选实施方式中，所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，选自：
在本发明第二方面，提供了一种药物组合物，包含如第一方面任一所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐；和药学上可接受的载体和/或辅料。
在本发明第三方面，提供了如第一方面任一所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，或如第二方面所述药物组合物的用途，包括选自下列的一种或多种用途：
i)在制备治疗、诊断与成纤维细胞激活蛋白过表达相关疾病的药物中的用途；
ii)与成纤维细胞激活蛋白结合；
iii)抑制成纤维细胞激活蛋白过表达；
iv)制备用于抑制成纤维细胞激活蛋白过表达的药物、药物组合物或制剂；
v)制备用于预防、治疗成纤维细胞激活蛋白过表达相关的疾病的药物、药物组合物或制剂；
vi)作为造影剂或显像剂，或者用于制备造影剂或显像剂；
较佳地，所述造影剂或显像剂为与成纤维细胞激活蛋白结合的造影剂或显像剂；
较佳地，所述成纤维细胞激活蛋白(FAP)过度表达的疾病选自：癌症、慢性炎症、动脉粥样硬化、纤维化、组织重塑和瘢痕病，优选地，其中癌症选自乳腺癌、胰腺癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、头颈癌、卵巢癌、肝细胞癌、食道癌、下咽癌、鼻咽癌、喉癌、骨髓瘤细胞、膀胱癌、胆管细胞癌、透明细胞肾癌、神经内分泌肿瘤、致癌性骨软化症、肉瘤、原发性未知癌(CUP)、胸腺癌、胶质瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、子宫颈癌和前列腺癌。
附图说明
图1为68Ga-TH001的放射性HPLC图；
图2为68Ga-TH001在U87gm肿瘤裸鼠模型中的组织分布图；
图3为68Ga-TH002的放射性HPLC图；
图4为68Ga-TH002在U87gm肿瘤裸鼠模型中的组织分布图；
图5为18F-AlF-TH002的放射性HPLC图；
图6为18F-AlF-TH002在U87gm肿瘤的裸鼠模型中的组织分布图；
图7为68Ga-TH003的放射性HPLC图；
图8为68Ga-TH003在U87gm肿瘤裸鼠模型中的组织分布图；
图9为68Ga-TH004的放射性HPLC图；
图10为68Ga-TH004在U87gm肿瘤裸鼠模型中的组织分布图；
图11为68Ga-TH005的放射性HPLC图；
图12为68Ga-TH005在U87gm肿瘤裸鼠模型中的组织分布图；
其中，白色箭头处为肿瘤组织。
术语
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。
应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本发明主题作任何限制。在本申请中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。必须注意，除非文中另有清楚的说明，否则在本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括所指事物的复数形式。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。
可在参考文献(包括Carey and Sundberg"ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY4THED."Vols.A(2000)and B(2001),Plenum Press,New York)中找到对标准化学术语的定义。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、IR和UV/VIS光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。
当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，CH2O等同于OCH2。如本文所用，表示基团的连接位点。如本文所用，“R1”、“R1”和“R1”的含义相同，可相互替换。对于R2等其它其他符号，类似定义的含义相同。
本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本申请中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。
除前述以外，当用于本申请的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。
本申请说明书和权利要求书记载的数值范围，当该数值范围被理解为“整数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数。例如，“1～6的整数”应当理解为记载了0、1、2、3、4、5和6的每一个整数。
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷基”意指仅由碳原子和氢原子组成、不含不饱和键、具有例如1至6个碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的烃链基团。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基，叔丁基，戊基，异戊基，新戊基和己基。烷基可以是未取代的或被一个或多个合适的取代基取代。烷基也可以是富含碳和/或氢的同位素(即氘或氚)的天然丰度烷基的同位素异构体。如本文所用，术语“烯基”表示无支链或支链的单价烃链，其含有一个或多个碳-碳双键。如本文所用，术语“炔基”是指无支链或支链的一价烃链，其含有一个或多个碳-碳三键。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“C1-C6烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C1-C3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“杂环”、“杂环烷基”或“杂环基”是指其中一个或多个(在一些实施方案中为1至3个)碳原子被杂原子取代的环烷基，所述杂原子例如但不限于N、O、S和P。术语“m-n元杂环烷基”或者“Cm-Cn杂环烷基”应理解为表示具有m至n个原子的饱和、不饱和或部分饱和的环，其中杂环原子选自N、O、S、P，优选地选自N、O或S。例如，术语“4-8元杂环烷基”或者“C4-C8杂环烷基”应理解为表示具有4至8个原子的饱和、不饱和或部分饱和的环，其中1、2、3、或4个环原子选自N、O、S、P，优选地选自N、O或S。“4-10元杂环烷基”则是表示具有4至10个原子的饱和、不饱和或部分饱和的环。在一些实施方案中，杂环烷基可以是与芳环基或杂芳环基稠合的杂环烷基。当诸如3-8元或4-10元的前缀用于表示杂环烷基时，碳的数目也意味着包括杂原子。包括单环、二环、三环、螺环或桥环。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“杂芳基”或“杂芳环基”是指单环或多环芳环系统，在某些实施方案中，环系统中1至3个原子是杂原子，即除碳以外的元素，包括但不限于N，O、S或P。例如呋喃基，咪唑基，二氢吲哚基，吡咯烷基，嘧啶基，四唑基，噻吩基，吡啶基，吡咯基，N-甲基吡咯基，喹啉基和异喹啉基。
在本申请中，“任选的”或“任选地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选地被取代的芳环基”表示芳环基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳环基与未被取代的芳环基。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。
依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀D和L或(+)和(–)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(–)或L表示化合物是左旋的。前缀为(+)或D的化合物是右旋的。
当将本发明式中与手性碳的键描写直成线时，应当理解为，手性碳的(R)和(S)两种构型和由此产生的其对映体纯的化合物和混合物两者包括在该通式范围内。本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
在本申请中，“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药学上可接受的载体。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
在本申请中，“药学上可接受的载体”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
术语“螯合基团”是指具有两个或多于两个可提供给金属离子的未共享电子对的分子，通常是有机分子，通常是路易斯碱。金属离子通常通过两个或多于两个电子对与螯合基团配位。术语“二齿螯合基团”、“三齿螯合基团”和“四齿螯合基团”是指分别具有两个、三个和四个电子对的螯合基团，它们容易同时提供给通过该螯合基团配位的金属离子。通常，螯合基团的电子对与单个金属离子形成配位键。然而，在某些实例中，螯合基团可与一个以上的金属离子形成配位键，并且多种结合方式是可能的。
术语“造影剂”是指在医学成像中增加结构或流体的对比度的化合物。通过吸收电磁辐射或改变电磁场来实现增强。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘(2H)，氚(3H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
术语“放射性”是指元素从不稳定的原子核自发地放出射线，(如α射线、β射线、γ射线等)而衰变形成稳定的元素而停止放射(衰变产物)。一般原子序数在83(铋)或以上的元素都具有放射性，但某些原子序数小于83的元素(如锝)也具有放射性，示例性的放射性元素包括但不限于：18F、129I、131I、123I、124I、125I、67Ga、68Ga、111In、99mTc、186Re、188Re、139La、140La、175Yb、153Sm、166Ho、88Y、90Y、149Pm、165Dy、169Er、177Lu、47Sc、142Pr、159Gd、212Bi、213Bi、72As、72Se、97Ru、109Pd、105Rh、101mRh、119Sb、128Ba、197Hg、211At、151Eu、153Eu、169Eu、201Tl、203Pb、212Pb、64Cu、67Cu、188Re、186Re、198Au、225Ac、227Th或199Ag。
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括以下含义：
(i)预防疾病或病症在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病或病症，但尚未被诊断为已患有该疾病或病症时；
(ii)抑制疾病或病症，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或病症，即，使该疾病或病症的状态消退；或者
(iv)减轻该疾病或病症所造成的症状。
各步骤的反应，反应温度可因溶剂、起始原料、试剂等适宜选择，反应时间也可因反应温度、溶剂、起始原料、试剂等适宜选择。各步骤反应结束后，目标化合物可按常用方法自反应体系中进行分离、提纯等步骤，如过滤、萃取、重结晶、洗涤、硅胶柱层析等方法。在不影响下一步反应的情况下，目标化合物也可不经过分离、纯化直接进入下一步反应。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明提供了一种成纤维细胞活化蛋白(FAP)亲和化合物及其放射性标记物，及其组合物；解决了现有技术公开的亲和化合物存在的从靶向组织中冲出速度过快、滞留时间较短而导致核素治疗效果减弱的问题，提高了靶向亲和性，提高了在肿瘤中的滞留时间，优化了化合物的肝-肾组织分布，降低了肝摄取和肝胆代谢，血液清除速度慢，肿瘤摄取量多，提高了血液中的稳定性。
具体实施方式
以下结合具体实施例，进一步说明本发明。需理解，以下的描述仅为本发明的最优选实施方式，而不应当被认为是对于本发明保护范围的限制。在充分理解本发明的基础上，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，本领域技术人员可以对本发明的技术方案作出非本质的改动，这样的改动应当被视为包括于本发明的保护范围之中的。
在本发明实施例中，具有以下定义：
HATU：2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
Boc：叔丁氧羰基
DOTA：1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯
实施例1化合物TH001的制备
第一步：(S)-2-(2-氨甲酰-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯的制备
将8ml的N,N-二甲基甲酰胺中依次加入Boc-甘氨酸(2.1g，12mmol)，HATU(4.56g，12mmol)，N,N-二异丙基乙胺(2.58g，20mmol)，室温搅拌10分钟后加入4,4-二氟-L-脯氨酰胺盐酸盐(1.86g，10mmol)，N,N-二异丙基乙胺(2.58g，10mmol)的12ml二氯甲烷溶液。继续搅拌5小时，糊状物中加入10ml二氯甲烷，过滤，滤饼用二氯甲烷和水洗涤，干燥得到化合物(S)-2-(2-氨甲酰-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯(粗品2.2g)。
LC-MS,M/Z(ESI):330.1(M+23)。
第二步：(S)-2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯的制备
将(S)-2-(2-氨甲酰-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯(1.5g，5mmol)溶解于25ml无水四氢呋喃，冰水浴降温至5℃左右。滴加三氟乙酸酐(1g，5mmol)的5ml四氢呋喃溶液。滴完升至室温反应，TLC监控反应终点。乙酸乙酯萃取洗涤，柱层析纯化得1.22g产物(S)-2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(300M，CDCl3)：δ1.46(s，9H)，2.72-2.8(m，2H)，3.81-4.02(m，4H)，4.96-4.99(t，1H)，5.33(br，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):312.1(M+23)。
第三步：(S)-1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷对甲苯磺酸盐的制备
将(S)-2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基氨基甲酸叔丁酯(318mg，1.1mmol)，对甲苯磺酸(340mg，2mmol)依次加入30ml乙腈中，反应过夜。减压浓缩干，粗品直接下步使用。
LC-MS,M/Z(ESI):190.1(M+1)。
第四步：(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-羟基喹啉-4-甲酰胺的制备
将6-羟基喹啉-4-甲酸(189mg，1mmol)，N,N-二异丙基乙胺(258mg，4mmol)，(S)-1-(2-氨基乙酰基)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷对甲苯磺酸盐(1.1mmol)依次加入2.5ml N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌溶清后，加入HATU(380mg，1mmol)，反应过夜。乙酸乙酯萃取洗涤，柱层析纯化得化合物(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-羟基喹啉-4-甲酰胺(289mg)。
1H NMR(300M，CDCl3)：δ2.76-2.99(m，2H)，4.1-4.26(m，2H)，4.23-4.36(q，2H)，5.14-5.17(dd，1H)，7.38-7.41(dd，1H)，7.56-7.60(dd，2H)，7.93-7.95(d，1H)，8.69-8.70(d，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):361.1(M+1)。
第五步：(S)-N-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-(丙-2-炔氧基)喹啉-4-甲酰胺的制备
将(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-羟基喹啉-4-甲酰胺(0.33mmol,120mg)溶于2ml的N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾138mg(1mmol)，搅拌10分钟。加入溴丙炔119mg(1mmol)，反应6小时。过滤，滤液浓缩柱层析，得化合物(S)-N-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-(丙-2-炔氧基)喹啉-4-甲酰胺(77mg)。
1H NMR(300M，CDCl3)：δ2.57-2.59(t，1H)，2.77-2.86(m，2H)，3.96-4.15(m，2H)，4.19-4.44(m，2H)，4.85-4.85(d，2H)，4.98-5.01(t，1H)，7.05(br，1H)，7.44-7.47(dd，1H)，7.49-7.50(d，1H)，7.75-7.76(d，1H)，8.05-8.07(d，1H)，8.80-8.82(d，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):399.1(M+1)。
第六步：3-叠氮丙基氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-溴丙基氨基甲酸叔丁酯2.38g(10mmol)溶于25ml四氢呋喃，加入叠氮基三甲基硅烷1.27g(11mmol)，搅拌下滴加1M的四丁基氟化铵10ml(10mmol)，滴完反应过夜。浓缩干，残留物加水50ml，乙酸乙酯石油醚(1：1)50ml萃取2次，合并，水洗5次，干燥浓缩得化合物3-叠氮丙基氨基甲酸叔丁酯(1.96g)。
1H NMR(300M，CDCl3)：δ1.44(s，9H)，1.74-1.80(m，2H)，3.19-3.23(q，2H)，3.34-3.37(t，2H)，4.64(br，1H)，7.44-7.47(dd，1H)，7.49-7.50(d，1H)，7.75-7.76(d，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):201.1(M+1)。
第七步：3-叠氮基丙胺对甲苯磺酸盐的制备
将3-叠氮丙基氨基甲酸叔丁酯100mg(0.5mmol)溶于2ml乙腈，加入对甲苯磺酸190mg(1mmol)，反应过夜。浓缩干，粗品直接下步使用。
LC-MS,M/Z(ESI):101.1(M+1)。
第八步：2,2',2”-(10-(2-((3-叠氮丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸三叔丁酯的制备
将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯286mg(0.5mmol)，HATU190mg(0.5mmol)溶于5ml的N,N-二甲基甲酰胺中，加入N,N-二异丙基乙胺260mg(2mmol)，搅拌15分钟。加入上步粗品，继续反应2小时。萃取洗涤，柱层析得化合物2,2',2”-(10-(2-((3-叠氮丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸三叔丁酯(211mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):655.4(M+1)，328.2(M/2+1)
第九步：(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)-三乙酸三叔丁酯的制备
2,2',2”-(10-(2-((3-叠氮丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸三叔丁酯131mg(0.2mmol)，(S)-N-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-(丙-2-炔氧基)喹啉-4-甲酰胺80mg(0.2mmol)，N,N-二异丙基乙胺26mg(0.2mmol)，无水硫酸铜5mg(0.03mmol)，(R)-2-((S)-1,2-二羟基乙基)-4-羟基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-醇钠5mg(0.025mmol)依次加入2ml四氢呋喃1ml水的混合溶液，搅拌反应过夜。萃取洗涤，粗品柱层析，得化合物(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)-三乙酸三叔丁酯(166mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):527.3(M/2+1)
第十步：(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)-三乙酸(化合物TH001)的制备
将(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)-三乙酸三叔丁酯166mg(0.16mmol)溶于0.4ml二氯甲烷，加入0.1ml三异丙基硅烷，三氟乙酸1.6ml。反应6小时后浓缩干，制备分离得产物(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)-三乙酸(化合物TH001，55mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ2.08-2.11(m，2H)，2.75-3.28(m，13H)，3.33-4.08(m，14.5H)，4.08-4.18(m，1.5H)，4.22-4.27(m，1H)，4.28-4.42(m，2H)，4.45-4.48(m，2H)，5.13-5.16(dd，1H)，5.43-5.51(q，2H)，7.62-7.65(m，1H)，7.78-7.80(d，1H)，8.07-8.09(m，1H)，8.19-8.22(m，2H)，8.90-8.91(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):885.3(M+1)，907.3(M+23)，443(M/2+1)。
实施例2化合物TH002的制备
参考实施例1的制备方法，将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯替换为2-(4,7-双(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1-基)乙酸，得到产物(S)-2,2'-(7-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)-二乙酸(化合物TH002,15mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ2.09-2.12(m，2H)，2.75-3.28(m，11H)，3.34-4.12(m，12H)，4.22-4.48(m，5H)，5.13-5.16(m，1H)，5.43-5.51(q，2H)，7.62-7.65(m，1H)，7.78-7.80(d，1H)，8.07-8.09(m，1H)，8.19-8.22(m，2H)，8.90-8.91(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):784.3(M+1)，806.3(M+23)，392.7(M/2+1)。
实施例3化合物TH003的制备
第一步：(S)-(3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将3-叠氮丙基氨基甲酸叔丁酯40mg(0.2mmol)，(S)-N-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-(丙-2-炔氧基)喹啉-4-甲酰胺80mg(0.2mmol)，N,N-二异丙基乙胺26mg(0.2mmol)，无水硫酸铜5mg(0.03mmol)，(R)-2-((S)-1,2-二羟基乙基)-4-羟基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-醇钠5mg(0.025mmol)依次加入2ml四氢呋喃和1ml水的混合溶液，搅拌反应过夜。萃取洗涤，粗品柱层析，得产物(S)-(3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(90mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):599.3(M+1)。
第二步：(S)-6-((1-(3-氨基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)喹啉-4-甲酰胺对甲苯磺酸盐的制备
将(S)-叔丁基(3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基甲酸酯60mg(0.1mmol)，对甲苯磺酸34.4mg(0.2mmol)，依次加入乙腈中，室温反应过夜。浓缩得粗品，直接用于下一步反应。
LC-MS,M/Z(ESI):499.3(M+1)。
第三步：(R)-(1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将BOC-D-谷氨酸12.3mg(0.05mmol)，N,N-二异丙基乙胺26mg(0.2mmol)，HATU42mg(0.11mmol)依次加入1ml无水N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌10分钟。
另将(S)-6-((1-(3-氨基丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)喹啉-4-甲酰胺对甲苯磺酸盐78mg(0.1mmol)，N,N-二异丙基乙胺26mg(0.2mmol)加入1ml无水N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌10分钟。
将两个反应液合并反应1小时。处理得粗品，柱层析纯化后得产物(R)-(1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)))喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(13mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):604.7(M/2+1)。
第四步：(R)-2,2'-(7-(2-((1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸叔丁酯的制备
将(R)-(1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯13mg(0.01mmol)溶于2ml乙腈，加入对甲苯磺酸9mg(0.05mmol)，反应2小时。浓缩干，加入N,N-二异丙基乙胺13mg(0.1mmol)，无水N,N-二甲基甲酰胺1ml，搅拌10分钟。
另将2-(4,7-双(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1-基)乙酸(盐酸盐)4.25mg(0.01mmol)，N,N-二异丙基乙胺6.5mg(0.05mmol)，HATU 3.8mg(0.01mmol)依次加入1ml无水N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌10分钟。
将两个反应液合并反应1小时。处理得粗品，柱层析得产物(R)-2,2'-(7-(2-((1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸叔丁酯(12mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):753.4(M/2+1)，502.6(M/3+1)
第五步：(R)-2,2'-(7-(2-((1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸(化合物TH003)的制备
12mg的(R)-2,2'-(7-(2-((1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸叔丁酯溶于0.4ml二氯甲烷，加入0.1ml三异丙基硅烷，三氟乙酸1.6ml。反应6小时后浓缩干，制备分离得产物(R)-2,2'-(7-(2-((1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸(化合物TH003，6mg)。
1H NMR(300M，D2O)：δ1.81-1.93(m，2H)，2.01-2.06(m，4H)，2.12-2.25(m，2H)，2.80-2.94(m，8H)，3.03-3.112(m，8H)，3.23(s，4H)，3.44-3.57(q，2H)，3.70(s，4H)，4.01-4.12(m，3H)，4.17-4.24(m，2H)，4.25-4.39(m，8H)，5.05-5.08(m，2H)，5.25(s，4H)，7.49-7.51(m，2H)，7.68(m，2H)，7.78-7.80(m，2H)，7.88-7.90(m，2H)，8.05(s，2H)，8.76-8.77(m，2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):697.3(M/2+1)，465.3(M/3+1)
实施例4化合物TH004的制备
第一步：3-叠氮基-1-丙醇的制备
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将3-溴-1-丙醇1.39g(10mmol)，溶于25ml四氢呋喃，加入叠氮基三甲基硅烷1.27g(11mmol)，搅拌下滴加1M的四丁基氟化铵10ml(10mmol)，滴完反应过夜。浓缩干，残留物直接柱层析得3-叠氮基-1-丙醇(0.96g)。
LC-MS,M/Z(ESI):102.1(M+1)
第二步：3-叠氮基-1-丙醇对甲苯磺酸酯的制备
将3-叠氮基-1-丙醇0.9g(9mmol)，溶于二氯甲烷20ml。加入三乙胺1.8g(18mmol)，对甲苯磺酸酰氯1.92g(10mmol)，反应过夜。粗品纯化得3-叠氮基-1-丙醇对甲苯磺酸酯(1.33g)。
第三步：(S)-6-(3-叠氮基丙氧基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)喹啉-4-甲酰胺的制备
将(S)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)-6-羟基喹啉-4-甲酰胺120mg(0.33mmol)溶于2mlN,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾138mg(1mmol)，搅拌10分钟。加入3-叠氮基-1-丙醇对甲苯磺酸酯280mg(1.1mmol)，反应6小时。过滤，滤液浓缩柱层析，得产物(S)-6-(3-叠氮基丙氧基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)喹啉-4-甲酰胺(99mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):444.1(M+1)
第四步：(S)-6-(3-(4-(2-氨基乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙氧基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)喹啉-4-甲酰胺的制备
将(S)-6-(3-叠氮基丙氧基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)喹啉-4-甲酰胺44.3mg(0.1mmol)，1-氨基-3-丁炔盐酸盐105.5mg(1mmol)，N,N-二异丙基乙胺52mg(0.4mmol)，无水硫酸铜5mg(0.03mmol)，(R)-2-((S)-1,2-二羟基乙基)-4-羟基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-醇钠5mg(0.025mmol)依次加入2ml四氢呋喃1ml水的混合溶液，搅拌反应过夜。萃取洗涤，粗品柱层析，得产物(S)-6-(3-(4-(2-氨基乙基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙氧基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)喹啉-4-甲酰胺(45mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):513.2(M+1)
第五步：(S)-2,2'-(7-(2-((2-(1-(3-((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸(化合物TH004)的制备
参考实施例1的制备方法，将1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯替换为2-(4,7-双(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1-基)乙酸，得到产物S)-2,2'-(7-(2-((2-(1-(3-((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸(化合物TH004，5mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ2.02-2.05(m，2H)，2.75-3.28(m，13H)，3.34-4.12(m，14H)，4.22-4.48(m，5H)，5.13-5.16(m，1H)，7.63-7.66(m，1H)，7.78-7.80(d，1H)，8.06-8.08(m，1H)，8.18-8.21(m，2H)，8.88-8.89(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):798.3(M+1),399.7(M/2+1)。
实施例5化合物TH005的制备
/>
第一步：(R)-(1,5-双(丁-3-炔-1-基氨基)-1,5-二氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
将(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)戊二酸263mg(1mmol)溶于5mlN,N-二甲基甲酰胺中，加入1-氨基-3-丁炔盐酸盐211mg(2mmol)，N,N-二异丙基乙胺420mg(4mmol)，搅拌5分钟。加入HATU760mg(2mmol)，搅拌反应过夜。乙酸乙酯萃取洗涤，柱层析纯化得产物(R)-(1,5-双(丁-3-炔-1-基氨基)-1,5-二氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(355mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):350.2(M+1)。
第二步：(R)-(1,5-双((2-(1-(3-((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)已基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
(R)-(1,5-双(丁-3-炔-1-基氨基)-1,5-二氧代戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯22mg(0.063mmol)，(S)-6-(3-叠氮基丙氧基)-N-(2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)喹啉-4-甲酰胺55.8mg(0.126mmol)，无水硫酸铜2mg(0.012mmol)，(R)-2-((S)-1,2-二羟基乙基)-4-羟基-5-氧代-2,5-二氢呋喃-3-醇钠2mg(0.01mmol)依次加入2ml四氢呋喃1ml水的混合溶液，搅拌反应过夜。萃取洗涤，粗品柱层析，得产物(R)-(1,5-双((2-(1-(3-((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)已基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):618.7(M/2+1)。
第三步：(R)-2,2'-(7-(2-((1,5-双((2-(1-(3-((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸(化合物TH005)的制备
参考实施例3的制备方法，将(R)-(1,5-双((3-(4-(((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯替换为(R)-(1,5-双((2-(1-(3-((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1–基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)已基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到产物(R)-2,2'-(7-(2-((1,5-双((2-(1-(3-((4-((2-((S)-2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)丙基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)氨基)-1,5-二氧戊烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)-1,4,7-三唑烷-1,4-二基)二乙酸(化合物TH005，20mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ1.81-1.92(m，2H)，2.01-2.06(m，4H)，2.11-2.25(m，2H)，2.81-2.93(m，7H)，3.03-3.112(m，9H)，3.23(s，4H)，3.45-3.58(q，2H)，3.70(s，4H)，4.01-4.12(m，3H)，4.18-4.25(m，2H)，4.27-4.44(m，12H)，5.05-5.08(m，2H)，5.25(s，4H)，7.48-7.51(m，2H)，7.69-7.70(m，2H)，7.78-8.80(m，2H)，7.88-7.90(m，2H)，8.05(s，2H)，8.77-8.78(m，2H)。LC-MS,M/Z(ESI):711.0(M/2+1)，474.5(M/3+1)。
实施例6化合物TH006的制备
参考实施例1的制备方法，将4,4-二氟-L-脯氨酰胺盐酸盐替换为L-脯氨酰胺盐酸盐，制备得到目标产物(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)-三乙酸(TH006，22mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ1.92-2.02(m，5H)，2.33-2.36(m，1H)，2.73-3.25(m，12H)，3.33-4.00(m，14H)，4.07-4.17(m，1H)，4.21-4.26(m，1H)，4.28-4.42(m，2H)，4.44-4.47(m，2H)，5.12-5.15(m，1H)，5.43-5.51(q，2H)，7.62-7.65(m，1H)，7.78-7.80(d，1H)，8.07-8.09(m，1H)，8.19-8.22(m，2H)，8.89-8.90(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):849.4(M+1)，425.2(M/2+1)。
实施例7化合物TH007的制备
第一步：4-(((3-叠氮丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制备
3-叠氮基丙胺对甲苯磺酸盐(1mmol)，1-Boc-4-溴甲基哌啶222mg(0.8mmol)，三乙胺300mg(3mmol)，依次加入乙腈中，室温搅拌过夜。浓缩掉大部分乙腈，加乙酸乙酯，水，萃取洗涤，柱层析得到产物4-(((3-叠氮丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(201mg)。
LC-MS,M/Z(ESI):298.2(M+1)
参考实施例1的制备方法，将3-叠氮基丙胺对甲苯磺酸盐替换为4-(((3-叠氮丙基)氨基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯，制备得到目标产物(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)-(哌啶-4-基甲基)-氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)-三乙酸(化合物TH007，19mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ1.39-1.75(m，4H)，2.10-2.14(m，3H)，2.75-3.26(m，19H)，3.35-4.10(m，14H)，4.12-4.49(m，7H)，5.13-5.16(dd，1H)，5.43-5.51(q，2H)，7.56-7.59(m，1H)，7.68-7.72(m，1H)，8.05-8.31(m，3H)，8.84-8.87(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):982.5(M+1)，491.8(M/2+1)。
实施例8化合物TH008的制备
第一步：4-(3-溴丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的制备
Boc-哌嗪186g(1mmol)，二溴丙烷1g(5mmol)加入乙腈中，加三乙胺300mg(3mmol)，搅拌反应过夜。浓缩出去大部分乙腈，加入乙酸乙酯和水，萃取洗涤，柱层析得产物211mg。
LC-MS,M/Z(ESI):307.1(M+1)。
参考实施例1的制备方法，将-溴丙基氨基甲酸叔丁酯替换为4-(3-溴丙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，制备得到目标产物(S)-2,2',2”-(10-(2-(4-(3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸(化合物TH008，16mg)
1H NMR(300M，CD3OD)：δ2.06-2.10(m，2H)，2.55-3.28(m，19H)，3.34-4.18(m，18H)，4.22-4.49(m，5H)，5.13-5.16(m，1H)，5.43-5.51(m，2H)，7.62-7.65(m，1H)，7.78-7.80(d，1H)，8.07-8.09(m，1H)，8.19-8.22(m，2H)，8.90-8.91(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):954.4(M+1)，477.7(M/2+1)。
实施例9化合物TH009的制备
第一步：2-(4-(3-叠氮丙基)哌嗪-1-基)-4-氯-1,3,5-三嗪的制备
1-(3-叠氮丙基)哌嗪对甲苯磺酸盐(1mmol)，2,4-二氯-1,3,5-三嗪300mg(2mmol)，三乙胺200mg(2mmol)，依次加入5ml N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌反应2小时。加入水和乙酸乙酯，萃取洗涤，粗品纯化得129mg。
LC-MS,M/Z(ESI):283.1(M+1)。
第二步：2,2',2'-(10-(2-((4-(4-(3-叠氮丙基))哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪环-2-基)氧)-2-氧乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸叔丁酯的制备
2-(4-(3-叠氮丙基)哌嗪-1-基)-4-氯-1,3,5-三嗪71mg(0.25mmol)，1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯143mg(0.25mmol)，三乙胺50mg(0.5mmol)加入5ml丙酮，室温反应6小时，减压浓缩，剩余物乙酸乙酯萃取，纯化得产物2,2',2'-(10-(2-((4-(4-(3-叠氮丙基))哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪环-2-基)氧)-2-氧乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸叔丁酯93mg。
LC-MS,M/Z(ESI):410.2(M/2+1)。
参考实施例1的制备方法，将2,2',2”-(10-(2-((3-叠氮丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸三叔丁酯替换为2,2',2'-(10-(2-((4-(4-(3-叠氮丙基))哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪环-2-基)氧)-2-氧乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸叔丁酯，制备得到目标产物(S)-2,2',2”-(10-(2-((4-(4-(3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)氧)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸(化合物TH009，3.6mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ2.06-2.10(m，2H)，2.58-3.30(m，17H)，3.36-4.20(m，21H)，4.22-4.49(m，4H)，5.13-5.16(m，1H)，5.43-5.51(m，2H)，7.62-7.65(m，1H)，7.78-7.80(d，1H)，8.07-8.09(m，1H)，8.19-8.22(m，2H)，8.69(s，1H)，8.90-8.91(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):517.2(M/2+1)。
实施例10化合物TH010的制备
参考实施例1的方法制备得到目标产物(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-8-基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)-三乙酸(化合物TH010，31.1mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ2.08-2.11(m，2H)，2.72-3.25(m，12H)，3.33-4.03(m，14H)，4.08-4.18(m，2H)，4.22-4.41(m，3H)，4.45-4.48(m，2H)，5.13-5.16(dd，1H)，5.44-5.52(q，2H)，7.63-7.66(m，1H)，7.78-8.12(m，3H)，8.15-8.17(m，1H)，8.91-8.92(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):885.3(M+1)，907.3(M+23)，443(M/2+1)。
实施例11化合物TH011的制备
参考实施例1的制备方法，将6-羟基喹啉-4-甲酸替换为6-氨基喹啉-4-甲酸，制备得到目标产物(S)-2,2',2”-(10-(2-((3-(4-(((4-((2-(2-氰基-4,4-二氟吡咯烷-1-基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)喹啉-6-基)(甲基)氨基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)-2-氧代乙基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三基)三乙酸(化合物TH011，13.2mg)。
1H NMR(300M，CD3OD)：δ2.08-2.11(m，2H)，2.74-3.28(m，13H)，3.33-4.18(m，19H)，4.23-4.41(m，3H)，4.44-4.46(m，2H)，5.12-5.18(m，2H)，7.58-7.61(m，1H)，7.78-7.80(m，1H)，8.17-8.29(m，3H)，8.96-8.98(m，1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):898.4(M+1)，920.4(M+23)，449.7(M/2+1)。
在本发明的测试例中，对照化合物FAPI-04、68Ga-FAPI-04的制备参考专利CN111699181A得到，其结构如下：
/>
放射化学标记和动物显像评价部分
实施例12 68Ga-TH001的标记和动物评价
68Ga标记化合物TH001：用浓度为0.1M的盐酸溶液淋洗Ge-Ga发生器，制得含有放射性核素68Ga3+的淋洗液；向淋洗液中加入浓度为1M的乙酸钠溶液调节淋洗液pH值为4.0；向淋洗液中加入20μg化合物TH001，加热至95℃反应10min，将反应液冷却至室温，制得放射性核素Ga-68标记的68Ga-TH001。
用带有放射性检测器的高效液相色谱分析，条件为：Phenomenex Luna C18(2)色谱柱(5μ，150×4.60mm)；流速1mL/min；梯度洗脱，0至3分钟乙腈为10％、三氟乙酸溶液(0.1％)为90％，3至10分钟乙腈由10％到70％、三氟乙酸溶液由90％到30％，10至12分钟乙腈由70％至10％、三氟乙酸溶液由30％到90％，12至15分钟乙腈保持10％、三氟乙酸溶液保持90％。结果表明，TH001放射化学产率为96％，产品放射化学纯度为97％，产品放射性HPLC分析结果如下图1所示，68Ga-TH001保留时间为7.78分钟。
68Ga-TH001的标记和动物评价：将200μC经放射化学标记的68Ga-TH001通过尾静脉注射到荷U87gm肿瘤的裸鼠模型中，于注射60分钟后采集PET影像数据10分钟，结果如图2所示，表明化合物68Ga-TH001在U87mg肿瘤组织中有明显摄取和滞留。
实施例13 68Ga-TH002的标记和动物评价
68Ga-TH002的标记条件和产物分析方法参考68Ga-TH001标记方法，不同之处是反应温度为65℃。结果表明，68Ga-TH002放射化学产率为97％，产品放射化学纯度为99％，产品放射性HPLC分析结果如图3所示，68Ga-TH002保留时间为7.85分钟。
68Ga-TH002在U87gm肿瘤的裸鼠模型中的组织分布如图4所示，肿瘤组织中可见有明显摄取和滞留。
实施例14 18F-AlF-TH002的标记和动物评价。
将60μg化合物TH002溶解于100μL浓度为0.5M、pH 4.0的NaOAc-HOAC缓冲溶液，加入6μL浓度为10mM的AlCl3溶液和300μL乙腈，混匀静置平衡5min，然后加入300μL含有18F-的NaOAc-HOAC缓冲溶液，密封并于100℃下加热15min。反应完成后将反应液冷却至室温，加入5mL水稀释，再用C18 Light固相萃取柱纯化，产品用1mL浓度为50％(v/v)的乙醇-水溶液洗脱，将洗脱液用放射性HPLC分析，结果如图5所示。18F-AlF-TH002放射化学产率为32％，产品放射化学纯度大于99％，18F-AlF-TH002保留时间为7.16分钟。
对照化合物采用68Ga-FAPI-04，标记条件和产物分析方法参考68Ga-TH001。68Ga-FAPI-04放射化学产率为98％，产品放射化学纯度为98％，产品在放射性HPLC分析色谱图中的保留时间为7.59分钟。
取15只U87gm肿瘤裸鼠模型，随机分为5组，每组3只。将40μCi 18F-AlF-TH002通过尾静脉注射到荷瘤鼠体内，然后在注射后5、15、30、60、120分钟将裸鼠处死，分离器官，称重并测量各器官中的放射性计数，计算单位质量组织中的放射性摄取值。另取3只荷U87gm肿瘤裸鼠模型，通过尾静脉注射约40μCi 68Ga-FAPI-04，于注射后60分钟处死、分离器官、称重并测量放射性计数，计算单位质量组织中的放射性摄取值。18F-AlF-TH002在荷瘤鼠体内的分布结果如图6所示，表明18F-AlF-TH002在肿瘤中有较高摄取和滞留，在肝脏和肾脏中有较高初始摄取，但清除速度较快。18F-AlF-TH002在U87gm肿瘤模型中的部分代谢性质优于文献报道的临床上广泛使用的68Ga-FAPI-04，18F-AlF-TH002和对照化合物68Ga-FAPI-04注射60分钟后在血液和各器官组织中的滞留数据如表1所示。
表1测试化合物在血液和各器官组织中的滞留数据
结果表明，相比于对照化合物68Ga-FAPI-04，本发明所述化合物18F-AlF-TH002提高了血液稳定性，提高了在肿瘤中的摄取；并降低了在非肿瘤组织中的滞留，提高了代谢性。
实施例15.68Ga-TH003的标记和动物评价。
68Ga-TH003的放射性标记条件参考68Ga-TH002，放射化学产率为92％，产品放射化学纯度为96％，标记反应产品放射性HPLC分析如图7所示，68Ga-TH003保留时间为7.82分钟。
68Ga-TH003在U87gm肿瘤裸鼠模型中的分布如图8所示，可见高肿瘤摄取和低肝、肾摄取。
实施例16.68Ga-TH004的标记和动物评价。
68Ga-TH004的放射性标记条件参考68Ga-TH002，放射化学产率为96％，产品放射化学纯度为大于99％，标记反应产品放射性HPLC分析如图9所示，68Ga-TH004保留时间为8.26分钟。
68Ga-TH004在U87gm肿瘤裸鼠模型中的分布如图10所示，可见高肿瘤摄取。
实施例17.68Ga-TH005的标记和动物评价。
68Ga-TH005的放射性标记条件参考68Ga-TH002，放射化学产率为96％，产品放射化学纯度为大于99％，标记反应产品放射性HPLC分析如图11所示，68Ga-TH005保留时间为8.43分钟。68Ga-TH005在U87gm肿瘤裸鼠模型中的动物分布如图12所示，标记化合物在肿瘤组织中有明显浓集。
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实施例18.化合物对FAP细胞的亲和活性测定
化合物靶向竞争结合实验采用高表达人类FAP的HT1080细胞和放射性配基[68Ga]Ga-FAPI-04测定，步骤为：在96孔板中接种HT1080-hFAP细胞(10万细胞/孔)并孵育24小时，然后用培养基洗涤一次。在孔板中加入浓度为1nM到5mM的测试化合物培养基溶液，然后在37摄氏度下孵育1小时，完成后向孔板内加入[68Ga]Ga-FAPI-04培养基溶液，加入量为0.2MBq/孔，然后在37摄氏度下孵育1小时。将平板置于冰上，用低温磷酸盐缓冲盐水清洗细胞，然后用浓度为1M NaOH裂解细胞，收集蛋白并用gamma计数仪测定各孔中的放射性计数，根据结果计算半最大抑菌浓度(IC50)，结果如表2所示。
表2测试化合物对FAP细胞的亲和活性测定结果
测试化合物 IC50(nM)
FAPI-04 32
TH001 18
TH002 6
TH003 20
TH004 19
TH005 13
TH006 15
TH007 12
TH008 9
TH009 10
TH010 19
TH011 13
结果表明，相比于对照化合物FAPI-04，本发明所述化合物对FAP细胞具有更好的亲和性。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (13)

1.一种式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，
其中，
Z为或者/>
Q为螯合基团或所述螯合基团与金属阳离子或其卤化物形成的络合物；
X为键或C1-C3烷基；
Y为键或C1-C3烷基；
A为
R1为氢或卤素，R2为氢或卤素，且R1、R2不同时为氢；
R3为氢或卤素，R4为氢或卤素，且R3、R4不同时为氢；
U、G各自独立地为-O-、-NRa-或-CO-NH-；Ra为氢、C1-C3烷基、C1-C3卤代烷基；
V、E各自独立地为-C1-C3烷基-5-6元杂芳基-C1-C3烷基-；
W、D各自独立地为-NRb-、-5-6元杂环烷基-5-6元杂芳基-、-5-6元杂环烷基-；
Rb为氢或C1-C6烷基；所述C1-C6烷基任选地被选自下列的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、5-6元环烷基、5-6元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基。
2.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，U为-O-、-NH-、-N(CH3)-或-CO-NH-；
V为-C1-C3烷基-5元杂芳环-C1-C3烷基-；
较佳地，V为-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-、-(CH2)2-5元杂芳环-(CH2)3-、-(CH2)2-5元杂芳环-(CH2)2-或-CH2-5元杂芳环-(CH2)2-；
较佳地，-U-V-为-O-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-、-O-(CH2)3-5元杂芳环-(CH2)2-或-N(CH3)-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-；
较佳地，所述5元杂芳环为5元含氮杂芳环；
更佳地，所述5元含氮杂环为1,2,3-三氮唑。
3.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，G为-O-、-NH-或-N(CH3)-或-CO-NH-；
E为-C1-C3烷基-5元杂芳环-C1-C3烷基-；
较佳地，E为-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-、-(CH2)2-5元杂芳环-(CH2)3-、-(CH2)2-5元杂芳环-(CH2)2-或-CH2-5元杂芳环-(CH2)2-；
较佳地，-G-E-为-O-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-、-O-(CH2)3-5元杂芳环-(CH2)2-或-N(CH3)-CH2-5元杂芳环-(CH2)3-；
较佳地，所述5元杂芳环为5元含氮杂芳环；
更佳地，所述5元含氮杂环为1,2,3-三氮唑。
4.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，W、D各自独立地为-NRb-、-5-6元杂环烷基-5-6元杂芳基-、-5-6元杂环烷基-；
Rb为氢、C1-C3烷基、5-6元杂环烷基取代的C1-C3烷基；
较佳地，所述5-6元杂环烷基为5或6元含N杂环烷基；
较佳地，所述5-6元杂芳基为5或6元含N杂芳基；
更佳地，W、D各自独立地为-NH-、
5.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，具有式II所示结构
较佳地，具有式IIa或IIb所示结构
6.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，-W-V-U-、-D-E-G-各自独立地选自：
7.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，具有式III所示结构
较佳地，-U-V-NH-为
较佳地，-G-E-NH-为
8.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，所述螯合基团选自：
较佳地，所述螯合基团为
9.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，所述络合物中金属阳离子或其卤化物具有放射性；
较佳地，所述金属阳离子为67Ga、68Ga、111In、99mTc、186Re、188Re、139La、140La、175Yb、153Sm、166Ho、88Y、90Y、149Pm、165Dy、169Er、177Lu、47Sc、142Pr、159Gd、212Bi、213Bi、72As、72Se、97Ru、109Pd、105Rh、101mRh、119Sb、128Ba、197Hg、211At、151Eu、153Eu、169Eu、201Tl、203Pb、212Pb、64Cu、67Cu、188Re、186Re、198Au、225Ac、227Th或199Ag；
较佳地，所述卤化物为选自下列金属的氟化物或碘化物：Mg、Al、Ca、Ga、Ga、In、Tc、Re、Re、La、La、Yb、Sm、Ho、Y、Pm、Dy、Er、Lu、Sc、Pr、Gd、Bi、Bi、As、Se、Ru、Pd、Rh、Rh、Sb、Ba、Hg、At、Eu、Eu、Eu、Tl、Pb、Pb、Cu、Cu、Re、Re、Au、Ac、Th、Ag的；其中所述氟为18F，所述碘为129I、131I、123I、124I或125I；
较佳地，所述金属阳离子为二价或三价；
更佳地，所述金属阳离子为67Ga；
更佳地，所述卤化物为Al的氟化物，所述氟为18F。
10.如权利要求1或9所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，所述络合物为
11.如权利要求1所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，其特征在于，选自：
12.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1-11任一所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐；和药学上可接受的载体和/或辅料。
13.如权利要求1-11任一所述式I所示化合物、其互变异构体、立体异构体或其盐，或如权利要求12所述药物组合物的用途，其特征在于，包括选自下列的一种或多种用途：
i)在制备治疗、诊断与成纤维细胞激活蛋白过表达相关疾病的药物中的用途；
ii)与成纤维细胞激活蛋白结合；
iii)抑制成纤维细胞激活蛋白过表达；
iv)制备用于抑制成纤维细胞激活蛋白过表达的药物、药物组合物或制剂；
v)制备用于预防、治疗成纤维细胞激活蛋白过表达相关的疾病的药物、药物组合物或制剂；
vi)作为造影剂或显像剂，或者用于制备造影剂或显像剂；
较佳地，所述造影剂或显像剂为与成纤维细胞激活蛋白结合的造影剂或显像剂；较佳地，所述成纤维细胞激活蛋白(FAP)过度表达的疾病选自：癌症、慢性炎症、动脉粥样硬化、纤维化、组织重塑和瘢痕病，优选地，其中癌症选自乳腺癌、胰腺癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、头颈癌、卵巢癌、肝细胞癌、食道癌、下咽癌、鼻咽癌、喉癌、骨髓瘤细胞、膀胱癌、胆管细胞癌、透明细胞肾癌、神经内分泌肿瘤、致癌性骨软化症、肉瘤、原发性未知癌(CUP)、胸腺癌、胶质瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、子宫颈癌和前列腺癌。
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