CN118236375A - 长春西汀在制备促进血管新生药物中的应用 - Google Patents
长春西汀在制备促进血管新生药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118236375A CN118236375A CN202311635079.0A CN202311635079A CN118236375A CN 118236375 A CN118236375 A CN 118236375A CN 202311635079 A CN202311635079 A CN 202311635079A CN 118236375 A CN118236375 A CN 118236375A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- vinpocetine
- cells
- cerebral
- model
- ogd
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- DDNCQMVWWZOMLN-IRLDBZIGSA-N Vinpocetine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN3CCC4)=C5[C@@H]3[C@]4(CC)C=C(C(=O)OCC)N5C2=C1 DDNCQMVWWZOMLN-IRLDBZIGSA-N 0.000 title claims abstract description 49
- 229960000744 vinpocetine Drugs 0.000 title claims abstract description 47
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 abstract description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 15
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 abstract description 15
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 abstract description 14
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 abstract description 14
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 abstract description 13
- 102100032742 Histone-lysine N-methyltransferase SETD2 Human genes 0.000 abstract description 12
- 101000654725 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase SETD2 Proteins 0.000 abstract description 12
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 abstract description 10
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 10
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 abstract description 9
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 9
- 230000005012 migration Effects 0.000 abstract description 8
- 238000013508 migration Methods 0.000 abstract description 8
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 abstract description 7
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 abstract description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 7
- 102100024316 Calcium/calmodulin-dependent 3',5'-cyclic nucleotide phosphodiesterase 1A Human genes 0.000 abstract description 5
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 abstract description 5
- 101001117044 Homo sapiens Calcium/calmodulin-dependent 3',5'-cyclic nucleotide phosphodiesterase 1A Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 5
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004925 microvascular endothelial cell Anatomy 0.000 abstract description 4
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 3
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 abstract description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 abstract 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 70
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 description 20
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 3',5'-cyclic GMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 ZOOGRGPOEVQQDX-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 12
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 10
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 10
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 10
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 6
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 5
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 5
- 210000001168 carotid artery common Anatomy 0.000 description 5
- 210000000269 carotid artery external Anatomy 0.000 description 5
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 206010008092 Cerebral artery thrombosis Diseases 0.000 description 4
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 4
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 4
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 4
- WYTGDNHDOZPMIW-RCBQFDQVSA-N alstonine Chemical compound C1=CC2=C3C=CC=CC3=NC2=C2N1C[C@H]1[C@H](C)OC=C(C(=O)OC)[C@H]1C2 WYTGDNHDOZPMIW-RCBQFDQVSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004004 carotid artery internal Anatomy 0.000 description 4
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 4
- 229930005303 indole alkaloid Natural products 0.000 description 4
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 4
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 4
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 101001046870 Homo sapiens Hypoxia-inducible factor 1-alpha Proteins 0.000 description 3
- 102100022875 Hypoxia-inducible factor 1-alpha Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 230000003188 neurobehavioral effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 3
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 2
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000003727 cerebral blood flow Effects 0.000 description 2
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 2
- 210000002464 muscle smooth vascular Anatomy 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 101000808006 Rattus norvegicus Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000013473 artificial intelligence Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 230000005978 brain dysfunction Effects 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Abstract
本发明公开了长春西汀在制备促进血管新生药物中的应用。本发明的发明人通过一系列的深入研究发现长春西汀作为PDE1A抑制剂可以通过cGMP‑PKG途径协同HIF‑1α‑VEGF途径，在体外促进OGD/R模型人脑微血管内皮细胞的小管形成和迁移，在体内降低MCAO/R模型大鼠脑梗死面积并显著增加缺血半暗带的血管密度和新生血管数，进而促进缺血诱导的血管新生。长春西汀用于治疗缺血性脑卒中将产生一靶双效，“1+1＞2”的叠加作用效果。
Description
技术领域
本发明涉及药学技术领域，尤其是长春西汀在制备促进血管新生药物中的应用。
背景技术
脑血管疾病是脑血管病变导致脑功能障碍的一类疾病的总称。脑卒中(Stroke)为脑血管疾病的主要临床类型，为一组器质性脑损伤导致的脑血管疾病。据中国疾病预防控制中心对我国排名前25位死因及导致死亡的高危因素分析，脑卒中是目前导致人类死亡的第一位原因。
脑卒中包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中，其中最常见的类型是缺血性脑卒中，约占70-80％。脑缺血发生后会产生局部缺血灶，包括中心坏死区和周围缺血半暗带区，中心坏死区神经细胞大量死亡，而缺血半暗带区神经功能虽然受损，但若能在短时间内迅速恢复血供或其他有效治疗，则该区脑组织的损伤是可逆的，神经细胞有可能存活并恢复功能。
长春西汀(Vinpocetine)由匈牙利的Gedeon Richter药物公司研发，并于1978年上市，PDE1A是长春西汀被发现的第一个药物作用靶点，主要调节血管平滑肌细胞内cGMP的水平进而调节血管平滑肌的紧张性，抑制PDE1A可通过激活cGMP-PKG途径舒张血管平滑肌，导致脑血管阻力降低从而增加脑血流量，改善脑血流量和耗氧量，增强葡萄糖和氧气供应以及ATP生成，从而改善大脑代谢[21]。课题组前期偶然发现长春西汀可以促进血管内皮细胞的小管形成，而内皮细胞的小管形成是血管新生过程中的关键步骤之一。
发明内容
本发明的目的是：发现长春西汀在制备促进血管新生药物中的应用。
本发明发现了长春西汀在制备促进血管新生药物中的应用。
1、吲哚生物碱在治疗缺血性脑卒中新作用机制研究方法包括：建立HBMEC细胞OGD/R模型，CCK8、细胞划痕实验、小管形成实验、试剂盒检测细胞中cGMP含量、WesternBlot、ELISA等实验。
细胞的培养条件：
HBMEC细胞传代培养，培养条件为含有青霉素(终浓度为100U/mL)、链霉素(终浓度为100μg/mL)、ECGS(终浓度为40μg/mL)以及10％ FBS的DMEM/F12培养基，当细胞融合至90％时，弃去旧培养基，用2ml PBS洗涤细胞2次，弃去PBS后加入2mL 0.25％胰蛋白酶-0.02％ EDTA混合消化液，置显微镜下观察，约30s，当细胞变圆后迅速加入2ml完全培养基终止消化，轻轻吹打，收集细胞。800rpm，4℃，离心5min，弃去上清，用完全培养基重悬细胞，分瓶培养，隔天换液。
OGD/R细胞模型建立：
选取生长到第7d左右的细胞进行体外OGD/R模型。调节细胞密度，以4x104的细胞密度接种于12孔培养板中。首先将培养基更换为PBS缓冲液，同时将细胞置于含有5％ CO2、95％ N2三气恒温培养箱中培养2h，完成缺氧过程；随后将细胞培养基更换为含2％ B27的Neurobasal培养基，置于含有5％ CO2、20％ O2恒温培养箱中培养24h，完成复氧过程，复氧同时按照实验分组加入不同浓度的长春西汀以及DT-3。
2、根据权利要求一所述吲哚生物碱在治疗缺血性脑卒中新作用机制研究的CCK8实验，其实验方法如下：离心收集取各组细胞，以1×104/孔的密度接种到96孔板中，每组设3个复孔，按分组情况进行相应处理，处理结束后，采用CCK-8进行测定：PBS冲洗3次，每孔添加100μl含血清培养基，同时加入50μl CCK-8工作液，轻轻摇晃均匀，放入细胞培养箱进行孵育。孵育2h后，取出96孔板，使用微量移液枪将测试孔液体轻轻吹打均匀，保证同一条件下，将测试孔中的液体吸取100μl加入到新的96孔板中，通过酶标仪在波长450nm处检测各自的吸光度值，并进行相应的比较分析。
3、根据权利要求一所述吲哚生物碱在治疗缺血性脑卒中新作用机制研究的细胞划痕实验，实验方法如下：1)划痕实验：待细胞增殖至6孔板80％-90％时，弃净培养基，加入丝裂霉素溶液5μg/ml，37℃常规培养箱静置1h，按照实验分组进行相应处理后，吸净孔内液体，加入1ml PBS溶液，以钢尺为标准，10μl枪头垂直于板面以及背侧横线划竖线，弃净孔内液体，PBS轻轻冲洗3次。按照分组分别加入2ml含1％ FBS的完全培养基，置于37℃培养箱中常规培养。2)摄片：于划痕后0h、24h于显微镜下摄片并记录摄片坐标，通过标记背侧面平行线位置，保证每次拍摄部位一致。3)分析：以ImageJ软件分析每组细胞划痕面积，计算24h划痕愈合百分比，重复三次实验。
4、Western Blot实验，细胞核蛋白和细胞浆蛋白提取1)用PBS清洗细胞一遍，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。2)每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。
3)最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长vortex时间。4)冰浴10-15分钟。5)加入细胞浆蛋白抽提试剂B10微升。最高速剧烈Vortex 5s，冰浴1分钟。6)最高速剧烈Vortex 5秒，4℃12000-16000g离心5分钟。7)立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。8)对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。)9)最高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高速剧烈Vortex15-30秒，共30分钟。10)4℃12000-16000g离心10分钟。11)立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。
5、所述吲哚生物碱在治疗缺血性脑卒中新作用机制研究的体内实验实验方法以及选材如下：
材料选取：
SPF级SD大鼠体重200-220g，雄性，8周龄；体重200±20g，由常州卡文斯实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK(苏)2021-0013，饲养于SPF级环境中，室内温度控制在23±2℃，自由饮食和摄水，实验动物使用许可证号：SYXK(黔)2021-0005。
模型及给药方法：
将大鼠腹腔注射10％水合氯醛(350mg/kg)麻醉后，仰卧位固定在实验台上,颈正中切口,手术刀切开皮肤，钝性分离各层组织,按照大鼠颈部血管解剖图，于体视显微镜下分离左颈总动脉(CCA)，置线备用向上分离左颈外动脉(ECA)和颈内动脉，双重结扎，剪断甲状腺上动脉及枕动脉两条颈外动脉分支，在近CCA分叉约5mm-8mm处双重结扎ECA，于ICA及CCA近心端分别用微动脉夹夹闭,在ECA近分叉处留置一打好单结但不收紧的丝线，在ECA近端结扎处与颈总动脉分叉处之间做一直径约0.2mm的V型微切口,将尼龙线头自切口处轻轻插入，轻轻收紧线结,将颈内动脉于两结扎线间剪断,使之与颈内动脉方向一致松开动脉夹，将尼龙线顺ECA经ICA送入颅内，插入深度约18mm～20mm微遇阻力时停止，使尼龙线头端位于MCA起始处，阻断MCA的血流收紧丝线,缝合切口，留置尼龙线尾端于体外。
缺血1.5小时后，用10％水合氯醛再次麻醉大鼠，轻轻拉动尼龙线使其头端回到微切口处(略有阻力感)，使大脑中动脉恢复血供，进行再灌注。假手术组大鼠只进行麻醉和血管分离术，不结扎血管及导入线栓，术后动物保温。再灌注1小时候，大鼠按照分组方式进行给药。
通过采用上述技术方案，本发明的发明人通过一系列的深入研究发现长春西汀作为PDE1A抑制剂可以通过cGMP-PKG途径协同HIF-1α-VEGF途径，在体外促进OGD/R模型人脑微血管内皮细胞的小管形成和迁移，在体内降低MCAO/R模型大鼠脑梗死面积并显著增加缺血半暗带的血管密度和新生血管数，进而促进缺血诱导的血管新生，长春西汀用于治疗缺血性脑卒中将产生一靶双效，“1+1＞2”的叠加作用效果。
附图说明
图1为本发明CCK8实验的结果
图2不同浓度长春西汀对HBMEC细胞小管形成能力的影响。
*p<0.05,**p<0.01,vs.OGD/R组,#p<0.05,##p<0.01,vs.OGD/R+Vinpocetine 50μM组。
图3为不同浓度长春西汀对HBMEC细胞迁移能力的影响。
*p<0.05,**p<0.01,vs.OGD/R组,#p<0.05,##p<0.01,vs.OGD/R+Vinpocetine 50μM组。
图4为不同浓度长春西汀对HBMEC细胞中HIF-1α蛋白表达、cGMP和VEGF含量的影响。Western Blotting检测细胞核(A、B)和细胞质(A、C)中HIF-1α的蛋白表达。ELISA法检测cGMP(D)、VEGF(E)的含量水平。*p<0.05,**p<0.01,vs.OGD/R组,#p<0.05,##p<0.01,vs.OGD/R+Vinpocetine 50μM组。
图5为长春西汀对MCAO/R模型大鼠脑梗死体积、神经行为学评分的影响。TTC染色结果(A)，脑梗死百分比柱状图(B)，神经行为学评分(C)。*p<0.05,**p<0.01。
图6为长春西汀对缺血半暗带血管生成的作用。共聚焦显微镜(bar＝50μm)检测CD31(A)和Ki67(A)的表达，并通过CD31阳性(B)和Ki67阳性(C)细胞的表面定量计算增殖指数。*p<0.05,**p<0.01。
图7为长春西汀对脑缺血半暗带中HIF-1α蛋白表达、cGMP和VEGF含量的影响。Western Blotting检测细胞核(A、B)和细胞质(A、C)中HIF-1α的蛋白表达。ELISA法检测cGMP(D)、VEGF(E)的含量水平。*p<0.05,**p<0.01。
图8长春西汀的结合模式。
具体实施方式
药效学实验一：CCK8实验
一、CCK8实验
离心收集取各组细胞，以1×104/孔的密度接种到96孔板中，每组设3个复孔，按分组情况进行相应处理，处理结束后，采用CCK-8进行测定：PBS冲洗3次，每孔添加100μl含血清培养基，同时加入50μl CCK-8工作液，轻轻摇晃均匀，放入细胞培养箱进行孵育。孵育2h后，取出96孔板，使用微量移液枪将测试孔液体轻轻吹打均匀，保证同一条件下，将测试孔中的液体吸取100μl加入到新的96孔板中，通过酶标仪在波长450nm处检测各自的吸光度值，并进行相应的比较分析。
二、实验结果
如图1嗾使，通过CCK8试验证明长春西汀在250μM时对细胞有显著毒性，故选择2μM、10μM、50μM浓度作为后续试验浓度。
药理学实验二：小管形成和迁移实验
一、材料与方法
1.实验材料
长春西汀(Northeast Pharm,Liaoning,China)、Matrigel Matrix(BDBioscience,USA)；Human VEGF Quantikine ELISA Kit(DVE00)(R&D Systems,Inc.,Minneapolis,USA)；cGMP Direct Immunoassay Kit(ab65356)(Abcam,Cambridge,UK)；Anti-HIF-1αantibody抗体(ab179483)、Goat Anti-Rabbit IgG H&L(HRP)(ab6721)购自Abcam公司(Abcam,Cambridge,UK)。
2.实验仪器
FORMA 700型超低温冰箱，Thermo公司；YC-300L型药品储存柜，中科美菱低温科技有限责任公司；Direct-Q with pump型超纯水仪，Millipore公司；SW-CJ-2FD型超净化工作台：苏州净化设备有限公司；三气培养箱，Thermo公司；3K15型低温高速离心机，Sigma公司；BS224型电子天平：北京塞多利斯仪器系统有限公司；Forma 3111型水套式CO2培养箱：Thermo Electron company；YXQ-LS-50SⅡ型立式压力蒸汽灭菌器：上海博迅实业医疗设备厂；Western blotting系统(型号：CriterionTM电泳槽，转印槽)，Bio-Rad公司；Tanon 6600发光成像工作站，Tanon公司；奥林巴斯倒置相差显微镜，日本奥林巴斯公司；Berthold LB941微孔板式多功能酶标仪，Berthold公司。
3、细胞的培养条件
HBMEC细胞传代培养，培养条件为含有青霉素(终浓度为100U/mL)、链霉素(终浓度为100μg/mL)、ECGS(终浓度为40μg/mL)以及10％ FBS的DMEM/F12培养基，当细胞融合至90％时，弃去旧培养基，用2ml PBS洗涤细胞2次，弃去PBS后加入2mL 0.25％胰蛋白酶-0.02％ EDTA混合消化液，置显微镜下观察，约30s，当细胞变圆后迅速加入2ml完全培养基终止消化，轻轻吹打，收集细胞。800rpm，4℃，离心5min，弃去上清，用完全培养基重悬细胞，分瓶培养，隔天换液。
4、OGD/R细胞模型建立
选取生长到第7d左右的细胞进行体外OGD/R模型。调节细胞密度，以4x104的细胞密度接种于12孔培养板中。首先将培养基更换为PBS缓冲液，同时将细胞置于含有5％ CO2、95％ N2三气恒温培养箱中培养2h，完成缺氧过程；随后将细胞培养基更换为含2％ B27的Neurobasal培养基，置于含有5％ CO2、20％ O2恒温培养箱中培养24h，完成复氧过程，复氧同时按照实验分组加入不同浓度的长春西汀以及DT-3。
3.实验方法
3.1小管形成实验
1)融胶：实验前将Matrigel原液从-20℃冰箱中转移至4℃冰箱中融化过夜，同时枪头放至-20℃冰箱中预冷，实验前30min取出置冰上。
2)铺胶：在96孔板中每孔加入50μL融化好的Matrigel胶，操作过程轻柔，避免气泡的产生，轻晃96孔板待胶铺平，随后将96孔板静置于37℃的孵箱中孵育30-60min使Matrigel胶充分凝固。
3)植入细胞：根据实验分组处理的HBMEC细胞消化离心后收集，用无血清培养基重悬，计数，调整无血清培养基中细胞密度为2×105个/mL；吸取100μL单细胞悬液轻轻沿壁加入96孔板的孔内，切勿触及胶面，每孔设置三个复孔，随后将96孔板置于培养箱中37℃孵育6h。
4)摄片：孵育2h后即开始密切观察小管管腔形成状态，待培养6h管腔完全形成后将96孔板取出，于显微镜下进行摄片。
3.2小管形成实验
1)融胶：实验前将Matrigel原液从-20℃冰箱中转移至4℃冰箱中融化过夜，同时枪头放至-20℃冰箱中预冷，实验前30min取出置冰上。
2)铺胶：在96孔板中每孔加入50μL融化好的Matrigel胶，操作过程轻柔，避免气泡的产生，轻晃96孔板待胶铺平，随后将96孔板静置于37℃的孵箱中孵育30-60min使Matrigel胶充分凝固。
3)植入细胞：根据实验分组处理的HBMEC细胞消化离心后收集，用无血清培养基重悬，计数，调整无血清培养基中细胞密度为2×105个/mL；吸取100μL单细胞悬液轻轻沿壁加入96孔板的孔内，切勿触及胶面，每孔设置三个复孔，随后将96孔板置于培养箱中37℃孵育6h。
4)摄片：孵育2h后即开始密切观察小管管腔形成状态，待培养6h管腔完全形成后将96孔板取出，于显微镜下进行摄片。
二、实验结果
血管新生与血管内皮细胞的小管形成和迁移密切相关。因此，申请人在体外建立人脑微血管内皮细胞(HBMEC)OGD/R模型，通过小管形成实验和细胞划痕实验考察长春西汀的血管新生作用。研究发现，HBMEC细胞经过OGD/R处理后小管形成能力和迁移能力显著下降，和OGD/R组相比，长春西汀各剂量组均能够促进血管内皮细胞的小管形成和迁移，且呈剂量依赖性，长春西汀剂量在50μM时效果最佳，组间差异具有统计学意义(P<0.01)(图2、3)。
药效学实验三：体外机制研究
一、材料与方法
1.实验材料
长春西汀(Northeast Pharm,Liaoning,China)、细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0027)(Beyotime,ShangHai,China)；PVDF膜(0.45μM)(IPVH00010)(Millipore,Schwalbach,Germany)；StarSignal Western Protein Marker(M227-01)(GenStar,Beijing,China)；
2.实验仪器
FORMA 700型超低温冰箱，Thermo公司；YC-300L型药品储存柜，中科美菱低温科技有限责任公司；Direct-Q with pump型超纯水仪，Millipore公司；SW-CJ-2FD型超净化工作台：苏州净化设备有限公司；三气培养箱，Thermo公司；3K15型低温高速离心机，Sigma公司；BS224型电子天平：北京塞多利斯仪器系统有限公司；Forma 3111型水套式CO2培养箱：Thermo Electron company；YXQ-LS-50SⅡ型立式压力蒸汽灭菌器：上海博迅实业医疗设备厂；Western blotting系统(型号：CriterionTM电泳槽，转印槽)，Bio-Rad公司；Tanon 6600发光成像工作站，Tanon公司；奥林巴斯倒置相差显微镜，日本奥林巴斯公司；Berthold LB941微孔板式多功能酶标仪，Berthold公司。
3.实验方法
3.1细胞核蛋白和细胞浆蛋白提取
1)用PBS清洗细胞一遍，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
2)每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。
3)最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长vortex时间。
4)冰浴10-15分钟。
5)加入细胞浆蛋白抽提试剂B10微升。最高速剧烈Vortex 5s，冰浴1分钟。
6)最高速剧烈Vortex 5秒，4℃12000-16000g离心5分钟。
7)立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。
8)对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。)
9)最高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高速剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。
10)4℃12000-16000g离心10分钟。
11)立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻存。
3.2ELISA检测VEGF表达
1)从板框上取下多余的微孔板条，将它们放回含有干燥剂包的铝箔袋中，并重新密封。
2)配置标准品：配制1000pg/ml→15.6pg/ml标准品：准备7只Eppendorf管，每管加500μl样品稀释液，分别标记上1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml，15.6pg/ml。取500μl 2000pg/ml的标准品加入标记1000pg/ml的管中，混匀后同样取出500μl，加入下一只管中。余同此类推，直到最后一只样品管。
3)每孔加入50μL检测稀释剂RD1W；按照实验要求设立标准品孔、对照品孔和空白孔，每孔分别加标准品、对照品或样品200μL。封板，室温孵育2小时。
4)抽吸每口井并清洗，重复此过程两次，共三次清洗。
5)每孔加入200μL Human VEGF Conjugate。封板，室温孵育2小时。
6)抽吸每口井并清洗，重复此过程两次，共三次清洗。
7)每孔加入200μL底物溶液，室温避光孵育20分钟。
8)每孔加终止液50μL。如果变色不均匀，轻拍板，确保搅拌彻底。
9)在30分钟内用450nm的酶标仪测定每个孔的光密度值。
(3)数据统计
所有数据均以means±SD表示，组间统计学差异采用one-way ANOVA和Tukey’s检验，P值小于0.05认为有显著性差异。
二、实验结果
进一步研究长春西汀促进血管新生作用机制，结果发现HBMEC细胞经OGD/R处理后细胞核内以及胞浆中的HIF-1α的蛋白表达(图4中的A、B、C)、cGMP含量(图4中的D)和VEGF含量(图4中的E)受代偿效应影响均显著上升；和OGD/R组相比，长春西汀各剂量组细胞核内以及胞浆中的HIF-1α的蛋白表达、cGMP和VEGF含量均进一步显著上升，且呈剂量依赖性，长春西汀在50μM的时候效果最好。
当HBMEC细胞经过OGD/R处理后，孵育长春西汀(50μM)的同时，给予PKG抑制剂DT-3后，几乎完全消除了长春西汀的作用，细胞核内以及包浆中的HIF-1α的蛋白表达显著下降，VEGF的含量也显著下降，而PKG的上游cGMP的含量则无显著变化(图4)，并且细胞的小管形成能力和迁移能力均显著下降(图2、3)。因此初步得出结论，长春西汀是通过cGMP-PKG途径协同HIF-1α-VEGF途径，在体外促进OGD/R模型人脑微血管内皮细胞的小管形成和迁移。
药理学实验四：脑缺血再灌注模型建立及体内机制研究
一、材料与方法
1.实验材料
长春西汀(Northeast Pharm,Liaoning,China)、ECL发光液(A38555)(ThermoFisher Scientific,Pittsburgh,PA,USA)；大鼠VEGF ELISA试剂盒(ab100787)、cGMPDirect Immunoassay Kit(ab65356)(Abcam,Cambridge,UK)；Goat Anti-Rabbit IgG H&L(HRP)(ab6721)
2.实验仪器
FORMA 700型超低温冰箱，Thermo公司；YC-300L型药品储存柜，中科美菱低温科技有限责任公司；Direct-Q with pump型超纯水仪，Millipore公司；3K15型低温高速离心机，Sigma公司；BS224型电子天平：北京塞多利斯仪器系统有限公司；石蜡包埋机、切片机，德国LEICA公司；Berthold LB941微孔板式多功能酶标仪，Berthold公司；GZX-9140MBE型鼓风干燥箱，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；YXQ-LS-50SⅡ型立式压力蒸汽灭菌器；ZS-MV-IV型小动物麻醉机，北京众实迪创科技发展有限责任公司；Western blotting系统(型号：CriterionTM电泳槽，转印槽)，Bio-Rad公司；Tanon 6600发光成像工作站，Tanon公司；奥林巴斯倒置相差显微镜，日本奥林巴斯公司；Zeiss LSM激光共聚焦显微镜，德国蔡司公司。
3.实验方法
在体内建立大鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)模型，通过TTC染色考察长春西汀对大鼠脑梗死体积的影响；通过免疫荧光标记CD31计数缺血半暗带微血管密度，荧光双标法(CD31/Ki67双标)计数缺血半暗带新生血管数，考察长春西汀的血管新生作用；通过大鼠脑部缺血半暗带细胞核、细胞浆中HIF-1α的蛋白表达、VEGF和cGMP含量水平进一步研究长春西汀促进血管新生的作用机制。
二、实验结果
研究发现，在TTC染色实验中，和sham组相比，MCAO/R组大鼠脑梗死面积和神经行为学评分均显著上升；和MCAO/R组相比，长春西汀组大鼠脑梗死面积和神经行为学评分则均显著下降(图5)。在免疫荧光实验中，和sham组相比，MCAO/R组大鼠脑部缺血半暗带CD31、Ki67阳性细胞面积受代偿效应影响显著上升；和MCAO/R组相比，Vinpocetine组大鼠脑部缺血半暗带CD31、Ki67阳性细胞面积则进一步显著上升(图6)。检测大鼠脑部缺血半暗带HIF-1α的蛋白表达、cGMP和VEGF含量水平发现，和sham组相比，MCAO/R组大鼠脑部缺血半暗带细胞核、细胞浆中HIF-1α的表达(图7A、B、C)、cGMP(图7D)和VEGF(图7E)含量受代偿效应影响均显著上升；和MCAO/R组相比，Vinpocetine组大鼠脑部缺血半暗带细胞核、细胞浆中HIF-1α的表达、VEGF含量和cGMP含量均进一步显著上升(图7)。
综上，研究表明当脑缺血发生后，机体会发生代偿性血管新生来抵御脑缺血，但过程缓慢且作用较弱。而通过给予长春西汀可以有效降低MCAO/R模型大鼠脑梗死面积、显著增加缺血半暗带的血管密度和新生血管数并通过cGMP-PKG途径协同HIF-1α-VEGF途径促进缺血诱导的血管新生，从而建立新的循环通路进而产生治疗作用。
实验五：分子对接
申请人通过两种结构预测方法同源模建SWISS-Model和人工智能AlphaFold获得了PDE1A的蛋白模型SW-Model 1和AF-Model 2。将长春西汀分别与两个蛋白模型进行诱导对接并比对，研究发现长春西汀主要通过A、B环与PHE 420或PHE 388通过π-π堆叠相互作用，就像一个“芳环牢笼”将长春西汀固定其中。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (1)
1.长春西汀在制备促进血管新生药物中的应用。
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118236375A true CN118236375A (zh) | 2024-06-25 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10071050B2 (en) | Cosmetic composition containing exosomes extracted from stem cell for skin whitening, antiwrinkle or regeneration | |
| Chang et al. | The promoting effect of pentadecapeptide BPC 157 on tendon healing involves tendon outgrowth, cell survival, and cell migration | |
| KR101505202B1 (ko) | 인간 배아 줄기 세포 및 그의 유도체를 포함하는 조성물, 그의 사용 방법 및 제조 방법 | |
| JP5340941B2 (ja) | 血液、特に末梢血から成体幹細胞を増殖させるための方法及び医療分野におけるその利用 | |
| US11040072B2 (en) | Composition for inducing beige adipocyte differentiation containing exosome derived from stem cells | |
| AU2017374947B2 (en) | New anti-angiogenic extracellular vesicles | |
| US20180296608A1 (en) | Compositions containing SPHEROID CELL AGGREGATES for enhance ovary function and preparation method of the same | |
| JP2010504083A5 (zh) | ||
| KR20220047888A (ko) | 섬유화 조직으로부터 정상 조직을 재생하기 위한 조성물 | |
| KR102213890B1 (ko) | 엑소좀 기반의 면역세포의 교차분화 방법 | |
| WO2009155777A1 (zh) | 法舒地尔化合物的用途、方法及其药物组合物 | |
| JP2023513394A (ja) | 細胞外小胞及びその皮膚製品における使用 | |
| EP3747440A1 (en) | Method for destroying cellular mechanical homeostasis and promoting regeneration and repair of tissues and organs, and use thereof | |
| McKenna et al. | Pharmacological inhibition of phosphodiesterase 4 triggers ovulation in follicle-stimulating hormone-primed rats | |
| Monsef et al. | Effects of adipose-derived stromal vascular fraction on asherman syndrome model | |
| CN118236375A (zh) | 长春西汀在制备促进血管新生药物中的应用 | |
| CN108159045B (zh) | 红波罗花碱a及其衍生物在制备预防或治疗中枢神经系统疾病药物中的应用 | |
| CN108685906A (zh) | 小分子化合物p7c3的新应用 | |
| CN108653334A (zh) | 负载白藜芦醇的人多能干细胞外泌体在制备逆转器官衰老药物上的用途 | |
| WO2012115298A1 (ko) | 양수 유래 줄기세포를 함유하는 요실금 치료제 | |
| CN112472695A (zh) | 他汀类化合物在制备促进哺乳动物精原干细胞再生功能的药物中的应用 | |
| CN110193020A (zh) | 京尼平苷在制备防治心肌肥厚的药物中的应用 | |
| Lionetti | The Role of Exosomes in Health and Disease | |
| CN114949224B (zh) | Nrp2激动剂在制备复发性流产治疗药物中的应用 | |
| US20200215029A1 (en) | Application of amd3100 in preparation of drug for treating and/or preventing cachexia and pharmaceutical composition thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication |