CN118160926A - 基于母乳低聚糖的组合物及其应用 - Google Patents

基于母乳低聚糖的组合物及其应用 Download PDF

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CN118160926A CN202410243377.3A CN202410243377A CN118160926A CN 118160926 A CN118160926 A CN 118160926A CN 202410243377 A CN202410243377 A CN 202410243377A CN 118160926 A CN118160926 A CN 118160926A
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Abstract

本发明公开了基于母乳低聚糖的组合物及其应用，属于食品技术领域。本发明通过采用母乳低聚糖、骨桥蛋白复合使用，并添加低聚半乳糖和不饱和脂肪酸，对母乳低聚糖的种类进行优选，通过多机制调节肠道菌群、促进肠道平衡，可以提高对病毒以及沙门氏菌等致病菌的抵抗能力，有效降低沙门氏菌定殖，改善婴幼儿腹泻，并提高免疫力。

Description

基于母乳低聚糖的组合物及其应用
技术领域
本发明属于食品技术领域，具体涉及基于母乳低聚糖的组合物及其应用。
背景技术
母乳中含有大量的生物活性成分，为婴幼儿的生长发育提供足够的营养支持，并对其健康状况产生长远影响。母乳低聚糖HMOs是母乳中含量第三的固体成分，HMOs可支持肠道菌群的定殖、抑制病原体感染、促进免疫发育。根据乳糖分子上连接的单体，可将母乳低聚糖分为3大类：岩藻糖基化中性母乳低聚糖(35％-50％)，唾液酸化酸性母乳低聚糖(12％-14％)和非岩藻糖基化母乳低聚糖(42％-55％)等。骨桥蛋白是一种高度糖基化和磷酸化的蛋白质，在母乳中的浓度相对较高(140mg/L)，乳汁中的骨桥蛋白又叫乳桥蛋白，这种蛋白质被认为是介导新生儿认知、肠道和免疫系统发育的物质。
期刊文献(“母乳低聚糖与婴儿肠道菌群相关性研究进展”，袁慧芝等，《食品科学》，2021年13期)认为HMOs在形成和维持健康的婴儿肠道菌群方面发挥着关键作用，婴儿的肠道微生物群组成与所代谢的HMOs有关，由于HMOs对上消化道的低胃液pH值和酶具有抵抗力，在婴儿胃肠道的上部不能被消化，因此大多数HMOs到达结肠，在结肠中它们作为特定微生物的底物(即充当益生元)影响肠道微生物群的组成和活性。
期刊文献(“人乳低聚糖组成和功能的研究进展”，贾宏信等，乳业科学与技术，2015年，第38卷第3期)公开了：母乳低聚糖的生理功能包括：有利于肠道内双歧杆菌的增殖；抑制致病菌的生长，HMOs能抑制肺炎链球菌、致肠病性大肠杆菌、单核细胞增多性李斯特氏菌、空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、绿脓假单胞菌等致病菌的生长，同时对一些病毒和毒素也能起到一定的抑制作用；预防婴幼儿腹泻的作用，HMOs能抑制致病菌或毒素(如空肠弯曲杆菌、杯状病毒和大肠杆菌肠毒素)黏附于宿主细胞，进而降低婴幼儿发生腹泻的概率。
期刊文献(“母乳及配方奶喂养对NICU早产儿的影响”，李永伟等，《中国当代儿科杂志》，2017年，第19卷第5期)认为母乳喂养能够降低早产儿NEC发生率，可能与母乳中含有大量骨桥蛋白，在免疫反应、炎症细胞趋化及抗炎反应中发挥重要作用，以及低聚糖能够粘附并清除肠道致病菌，SIg A促进肠道自身平衡有关。
可见，母乳低聚糖和骨桥蛋白可以促进有益菌的增殖、抑制致病菌的生长，从而调节肠道菌群、促进肠道自身平衡，维护婴幼儿的肠道健康，并降低婴幼儿肠道疾病的发生。
婴幼儿腹泻是婴幼儿时期的常见病症，此疾病的发病率较高，可引起患儿腹泻、发热以及呕吐等症状，随患儿病情进展还可能诱发脱水、少尿、嗜睡、身体消瘦以及水电解质紊乱、休克等并发症，威胁患儿的生命健康。
肠道菌群失调是婴幼儿腹泻发生的主要原因之一，肠道菌群失调表现为肠道里的正常优势菌被抑制、被消灭，而条件致病菌(包括沙门氏菌)等外来细菌却恶行膨胀、数量急剧升高，变成优势菌，菌群的数量和品种发生明显的变化，菌群由正常的生理组合变成病理组合，从而发生肠道微生态失调，出现腹泻、肠炎等肠道病症状。因此，调节肠道菌群并恢复肠道微生物平衡是控制婴幼儿腹泻症状的主要手段。
基于此，有必要提供一种基于母乳低聚糖的组合物，以有效调节肠道菌群、促进肠道平衡，从而改善婴幼儿腹泻，并提高免疫力。
发明内容
本发明针对现有技术存在的问题，提供了基于母乳低聚糖的组合物及其应用。本发明通过采用母乳低聚糖、骨桥蛋白复合使用，并添加低聚半乳糖和不饱和脂肪酸，对母乳低聚糖的种类进行优选，通过多机制调节肠道菌群、促进肠道平衡，可以有效降低沙门氏菌定殖、改善婴幼儿腹泻，并提高免疫力。
为实现上述目的，第一方面，本发明提供了基于母乳低聚糖的组合物，包括：母乳低聚糖和骨桥蛋白。
在一项优选的实施方案中，所述母乳低聚糖包括2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)、3’-唾液酸乳糖(3’-SL)和6’-唾液酸乳糖(6’-SL)中的至少一种。
在一项优选的实施方案中，所述母乳低聚糖为2’-岩藻糖基乳糖和唾液酸乳糖的混合物，所述唾液酸乳糖选自3’-唾液酸乳糖和/或6’-唾液酸乳糖。
在一项优选的实施方案中，母乳低聚糖中，2’-岩藻糖基乳糖重量占比≥25％，更优选大于50％。
在一项优选的实施方案中，母乳低聚糖和骨桥蛋白的质量比为100:1-200，更优选为100:2-30。
在一项优选的实施方案中，所述组合物还包括：低聚半乳糖和不饱和脂肪酸。
在一项优选的实施方案中，所述不饱和脂肪酸选自DHA、ARA中的至少一种。
在一项优选的实施方案中，母乳低聚糖、低聚半乳糖、骨桥蛋白和不饱和脂肪酸的质量比为100:20-400:1-200:1-100，更优选为100:20-200:2-30:1-50。
母乳低聚糖可以粘附并清除肠道致病菌，促进有益菌生长、抑制致病菌生长，骨桥蛋白在免疫反应、炎症细胞趋化及抗炎反应中发挥重要作用，低聚半乳糖可通过恢复肠道菌群失衡，激活黏膜免疫，抑制多种炎症通路，不饱和脂肪酸可以改变肠道菌群，增加肠道菌群多样性，降低有害菌群对肠道的损伤。采用以上原料复合使用，可以通过多种机制共同作用，有效调节肠道菌群、促进肠道平衡，尤其是在降低沙门氏菌定殖方面有显著的效果。
进一步的，不同种类的母乳低聚糖的功能亦有所不同，中性低聚糖，如岩藻糖基乳糖，主要具有调节肠道菌群、预防结肠炎症等功效，而酸性低聚糖则在大脑发育过程中发挥着重要作用，两类低聚糖均可抑制致病菌的生长。
其中，2’-FL可作为菌群的代谢底物，选择性地增殖婴幼儿肠道中特定有益菌株的数量，促进益生菌的生长繁殖，2’-FL的结构与肠道上皮细胞上的糖蛋白、糖链上部分结构相似，可作为诱饵受体与肠道中的致病菌结合，进而阻止致病菌与肠道上皮细胞受体结合，使之不能成功定植于肠道调节免疫系统，2’-FL还可作为免疫因子调节免疫系统。而唾液酸乳糖可促进有益微生物群的生长和新陈代谢，益于婴幼儿肠道健康和免疫功能，还具有抗病毒活性，在新生儿肠道的黏膜中具有抑菌作用，能抑制微生物对宿主细胞的黏附，对细菌、病毒和真菌有直接的细胞毒性作用，并且在调节肠道菌群平衡和保护新生儿炎症性疾病方面也起着重要作用。本发明采用2’-FL与特定的唾液酸乳糖(3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖)复合使用，尤其是进一步与骨桥蛋白、低聚半乳糖和不饱和脂肪酸复合使用，可以有效调节肠道菌群、促进肠道平衡，可以有效降低沙门氏菌定殖、改善婴幼儿腹泻，并提高免疫力。
第二方面，本发明提供了前述基于母乳低聚糖的组合物在制备增强免疫力的产品中的应用。
在一项优选的实施方案中，所述增强免疫力具体为提高胃肠道对病毒或致病菌感染的抵御能力。
在一项优选的实施方案中，所述病毒为轮状病毒、诺沃克病毒、星状病毒中的至少一种；所述致病菌包括沙门氏菌、大肠埃希菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌中的至少一种。
第三方面，本发明提供了前述基于母乳低聚糖的组合物在制备调节肠道菌群的产品中的应用。
在一项优选的实施方案中，所述调节肠道菌群具体为降低沙门氏菌定殖。
第四方面，本发明提供了前述基于母乳低聚糖的组合物在制备预防和/或改善婴幼儿和/或儿童腹泻的产品中的应用。
在一项优选的实施方案中，所述产品为食品或者药物。
在一项优选的实施方案中，所述产品包括营养补充剂、固体饮料、含片、口腔清洁剂或者益生菌微泡片。
第五方面，本发明提供了一种增强免疫力的产品，包括前述基于母乳低聚糖的组合物。
第六方面，本发明提供了一种调节肠道菌群的产品，包括前述基于母乳低聚糖的组合物。
第七方面，本发明提供了一种预防和/或改善婴幼儿和/或儿童腹泻的产品，包括前述基于母乳低聚糖的组合物。
本发明的有益效果是：
1、本发明通过采用母乳低聚糖、骨桥蛋白复合使用，并添加低聚半乳糖和不饱和脂肪酸，并对母乳低聚糖的种类进行优选，通过多机制调节肠道菌群、促进肠道平衡，可以有效降低沙门氏菌定殖、改善婴幼儿腹泻，并提高免疫力。
2、本发明的基于母乳低聚糖的组合物可以显著减少HT-29细胞促炎因子IL-8的分泌，有效调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。
3、本发明的基于母乳低聚糖的组合物能够在生命早期为机体提供良好的肠屏障，可以提高对病毒以及沙门氏菌等致病菌的抵抗能力，抵御病毒和致病菌的感染，降低沙门氏菌定殖量，调节肠道菌群。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
值得说明的是，本发明中使用的原料均为普通市售产品，对其来源不做具体限定。
其中，骨桥蛋白：型号OPN-10，购自Arla Foods Ingredients；
低聚半乳糖：型号GOS，购自荷兰皇家菲仕兰公司；
2’-FL、3’-SL、6’-SL、3’-岩藻糖基乳糖(3’-FL)、唾液酸化-乳糖-N-四糖c(LSTc)、唾液酸化-乳糖-N-四糖b(LSTb)：购自Glycom；
DHA、ARA：市售；
鼠伤寒沙门氏菌(SL-1344)、肠炎沙门氏菌(CMCC50040)、大肠埃希菌(ATCC25922)、空肠弯曲菌(ATCC 29428)、副溶血性弧菌(ATCC 17802)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)，市售；
轮状病毒(编号GDV023)、诺沃克病毒(编号GDV120)、星状病毒(编号GDV039)：高校实验室。
实施例1
使用体外研究，探索不同基于母乳低聚糖的组合物(见表1实验组2-17)对致病菌诱导的肠上皮细胞炎症应答的影响。使用HT-29细胞来作为模型，细胞在完全培养基(GibcoRPMI 1640培养基加入10％胎牛血清、Gibco 1％青-链霉素、Gibco 1％MEM非必需氨基酸溶液)进行传代培养，活化后的细胞以105个/孔的浓度接种在24孔板中于CO2细胞培养箱培养(37℃，5％ CO2，饱和湿度)，每隔2天更换一次培养基，培养21天使得HT-29细胞完全分化，通过显微镜确认细胞融合情况。
致病菌(鼠伤寒沙门氏菌SL-1344)使用BHI琼脂培养基培养并获取单菌落。随后使用挑去单菌落接种至BHI肉汤培养基隔夜培养进行活化，隔夜培养菌液通过离心除去上清液获取菌体，使用PBS清洗菌体三次，随后加入适量的细胞完全培养基重悬浮菌体，菌株菌悬液浓度达到108CFU/mL。细菌(鼠伤寒沙门氏菌SL-1344)与细胞(HT-29细胞)以10：1(个数比)的比例共孵育。干预方案将相应的基于母乳低聚糖的组合物(见表1实验组2-17)以1％的浓度加入细胞培养液(细胞培养液浓度为106个细胞/mL)中进行共孵育。在沙门氏菌感染前，HT-29细胞预先使用基于母乳低聚糖的组合物孵育2h，具体干预方案如表1：
表1干预方案
基于母乳低聚糖的组合物预处理细胞后，加入致病菌沙门氏菌CICC21848进行处理4h，随后收集细胞上清液，4℃离心除去沉淀，样品保存在-20℃直至分析测定。后续根据试剂盒操作手册，测定细胞上清液炎症因子IL-8蛋白，生物学重复三次。结果如表2所示。
表2不同干预组别对HT-29细胞分泌免疫因子IL-8的影响
组别 炎症因子IL-8分泌量pg/mL(mean±SD)
实验组1 1962.3±262.1a
实验组2 1558±132.1b
实验组3 1465±90.7b
实验组4 1117±76.2c
实验组5 1009±42.5c
实验组6 1046±39.7c
实验组7 987±37.3c
实验组8 1202±56.3b
实验组9 586±13.2d
实验组10 566±11.1d
实验组11 512±9.9d
实验组12 605±10.4d
实验组13 1086±59.4c
实验组14 1126±63.4c
实验组15 785±37.2e
实验组16 803±32.4e
实验组17 367±7.8f
*注：同一列数据上标包含相同字母表示差异不显著(p>0.05)，不同字母表示差异显著(p<0.05)。
如表2所示，空白对照组(实验组1)中细胞分泌的促炎因子IL-8分泌量最高，与过去的研究相似，沙门氏菌会促进炎症因子IL-8的分泌。而实验组2-15添加等量的不同的基于母乳低聚糖的组合物进行干预后，可以显著减少促炎因子IL-8的分泌。
其中，实验组2-3仅采用2’-FL或骨桥蛋白进行干预，促炎因子IL-8的分泌较为显著的下降，表明2’-FL和骨桥蛋白均有调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。实验组4采用2’-FL和骨桥蛋白的组合物进行干预时，相比实验组2-3仅采用2’-FL或骨桥蛋白进行干预，可以更为显著的减少促炎因子IL-8的分泌，说明2’-FL和骨桥蛋白复合使用时，可以协同增效，调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用增强。
实验组5加入低聚半乳糖和DHA后，促炎因子IL-8的分泌相比实验组4更低，表明低聚半乳糖和DHA亦具有调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。实施例6采用3’-SL作为母乳低聚糖，促炎因子IL-8的分泌程度与实验组5相当，表明3’-SL亦具有调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。
实验组9采用2’-FL和3’-SL复合作为母乳低聚糖，相比实验组5-6仅采用2’-FL或3’-SL作为母乳低聚糖，促炎因子IL-8的分泌显著下降，实验组10-12亦采用2’-FL和特定的唾液酸乳糖复合作为母乳低聚糖，促炎因子IL-8的分泌与实验组9相当，说明采用2’-FL与特定的唾液酸乳糖(3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖)复合使用，可以进一步提高调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。
实验组7-8相比实验组9，仅采用复合母乳低聚糖或低聚半乳糖，促炎因子IL-8的分泌显著提高，说明实验组9采用复合母乳低聚糖和低聚半乳糖复合使用，可以协同增效，提高调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。
实验组13-14的唾液酸乳糖与实施例9不同，促炎因子IL-8的分泌显著提高，说明唾液酸乳糖的种类对调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用具有较为显著的影响，本发明所限定的唾液酸乳糖(3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖)具有更好的效果。
实验组15-16，仅采用骨桥蛋白或DHA，相比实验组9采用骨桥蛋白和DHA复合使用，促炎因子IL-8的分泌显著提高，说明实验组9采用骨桥蛋白和DHA复合使用，可以协同增效，提高调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。
实验组17采用3’-唾液酸乳糖和6’-唾液酸乳糖复合使用作为唾液酸乳糖，相比实验组9-10促炎因子IL-8的分泌显著提高，说明3’-唾液酸乳糖和6’-唾液酸乳糖复合使用具有协同作用，可进一步改善调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。
综上可以看出，2’-FL和骨桥蛋白复合使用、2’-FL和唾液酸乳糖(3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖)复合使用、母乳低聚糖与低聚半乳糖复合使用、骨桥蛋白与不饱和脂肪酸复合使用，尤其是2’-FL、唾液酸乳糖(3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖)、低聚半乳糖、骨桥蛋白、不饱和脂肪酸复合使用，可以协同增效，显著改善组合物调节致病菌(沙门氏菌)引起的炎症反应的作用。
实施例2
使用动物实验验证不同基于母乳低聚糖的组合物(见表3，实验组2-17)对沙门氏菌体内定殖的影响，实验动物选用野生型小鼠129X1/SvJ，在小鼠10日龄时开始进行营养物干预，当小鼠达到21日龄后，通过鼠伤寒沙门氏菌SL 1344感染来诱导小鼠慢性肠炎模型，108CFU的沙门氏菌菌悬液通过口服灌胃接种，在感染后的7天时检测在小鼠粪便中的沙门氏菌含量，营养物干预持续到实验结束，具体干预方案如表3：
表3干预方案
编号 成分 质量比
实验组1 生理盐水 /
实验组2 2’-FL /
实验组3 骨桥蛋白 /
实验组4 2’-FL+骨桥蛋白 100:8
实验组5 2’-FL+低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA 100:150:8:10
实验组6 3’-SL+低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA 100:150:8:10
实验组7 2’-FL+3’-SL+骨桥蛋白+DHA 200:50:8:10
实验组8 低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA 250:8:10
实验组9 2’-FL+3’-SL+低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA 80:20:150:8:10
实验组10 2’-FL+6’-SL+低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA 80:20:150:8:10
实验组11 2’-FL+3’-SL+低聚半乳糖+骨桥蛋白+ARA 50:50:50:30:5
实验组12 2’-FL+6’-SL+低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA+ARA 95:5:200:5:24:6
实验组13 2’-FL+LSTc+低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA 80:20:150:8:10
实验组14 2’-FL+LSTb+低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA 80:20:150:8:10
实验组15 2’-FL+3’-SL+低聚半乳糖+骨桥蛋白 80:20:150:18
实验组16 2’-FL+3’-SL+低聚半乳糖+DHA 80:20:150:18
实验组17 2’-FL+3’-SL+6’-SL+低聚半乳糖+骨桥蛋白+DHA 80:10:10:150:8:10
对于干预方案，将相应的基于母乳低聚糖的组合物按照1g/kg体重的用量溶于小鼠的饮用水中，并保证每组实验组的实验小鼠大于6只，结果如表4所示。
表4各组别在感染后第7天时粪便中沙门氏菌活菌数
*注：同一行数据上标相同字母表示差异不显著(p>0.05)，不同字母表示差异显著(p<0.05)。
从表4可以看出，实验组2-17添加等量的不同的基于母乳低聚糖的组合物进行干预后，可以显著降低沙门氏菌在体内的定殖量，表明其能够在生命早期为机体提供良好的肠屏障抵御致病菌的感染，降低沙门氏菌定殖量，调整肠道菌群。
具体来说，比较实验组2-4可以看出，采用2’-FL和骨桥蛋白复合使用，相比仅采用2’-FL或骨桥蛋白，可以显著的降低沙门氏菌在体内的定殖量。比较实验组5-9可以看出，2’-FL和唾液酸乳糖(3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖)复合使用、母乳低聚糖与低聚半乳糖复合使用，均可以显著降低沙门氏菌在体内的定殖量。比较实验组9和13-
14，可以看出，本发明所限定的唾液酸乳糖(3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖)具有更好的效果。比较实验组9和实验组15-16，可以看出骨桥蛋白与不饱和脂肪酸复合使用，可以显著降低沙门氏菌在体内的定殖量。比较实验组9-10和实验组17，可以看出，3’-唾液酸乳糖和6’-唾液酸乳糖复合使用，可以进一步降低沙门氏菌在体内的定殖量。
可见，本发明通过采用母乳低聚糖、骨桥蛋白复合使用，并添加低聚半乳糖和不饱和脂肪酸，通过多机制调节肠道菌群、促进肠道平衡，可以有效降低沙门氏菌定殖、改善婴幼儿腹泻，并提高免疫力。而采用特定的唾液酸乳糖(3’-唾液酸乳糖、6’-唾液酸乳糖)，可以进一步提高效果。
实施例3基于母乳低聚糖的组合物抑菌测试
将实施例2中实验组9-10、实验组12和实验组17共4组基于母乳低聚糖的组合物分别分散在水中，配置成20mg/mL的相应的基于母乳低聚糖的组合物的溶液，作为试物，分别按以下方法测试对致病菌的最低抑菌浓度，具体工艺为：
将肠炎沙门氏菌(CMCC50040)、大肠埃希菌(ATCC25922)、空肠弯曲菌(ATCC29428)、副溶血性弧菌(ATCC 17802)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)分别进行复苏，培养24h，并调节每种致病菌的菌液浓度为1.6×108CFU/mL，备用。
采用二倍稀释法测定基于母乳低聚糖的组合物的MIC。每组试验准备10支35mL的无菌试管，编号依次为1-10，在每支试管中加入5mL的LB肉汤液体培养基，在第1支试管中加入5mL试物(基于母乳低聚糖的组合物溶液)，混匀后吸取1号试管中的液体5mL加入2号试管，重复上述操作到第8号试管，吸出5mL弃掉。随后在1-8号试管中加10μL菌悬液，第9号试管为阳性对照，第10号试管为空白对照，设置三组重复试验。37℃、150r/min培养24h，观察结果。以试物最高稀释管中无细菌生长者，该管的浓度为最低抑菌浓度，结果如表5。
表5基于母乳低聚糖的组合物的最低抑菌浓度(mg/mL)
从表5可以看出，本发明的基于母乳低聚糖的组合物(实施例2中实验组10-12和实验组17)对多种致病菌(沙门氏菌、大肠埃希菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌)均具有明显的抑制作用。
实施例4基于母乳低聚糖的组合物抑制病毒体外复制试验
采用轮状病毒(编号GDV023)、诺沃克病毒(编号GDV120)、星状病毒(编号GDV039)进行体外抗病毒实验。将实施例2中实验组9-10、实验组12和实验组17共4组基于母乳低聚糖的组合物分别分散在水中，配置成20mg/mL的相应的基于母乳低聚糖的组合物的溶液，作为试物，分别按以下方法测试对病毒的半数有效浓度，具体工艺为：
在实验孔中分别加入试物(上述4组基于母乳低聚糖的组合物溶液)，由初始浓度为20mg/mL到0.15625mg/mL，共8个稀释度。将Vero E6细胞按1×104个/孔加入96孔板中，每孔分别按100倍半数组织培养感染量(TCID50)，加入病毒。以健康细胞作为空白对照，只接种PEDV细胞作为阳性对照，每个浓度设置8个平行孔，37℃培养48h后，向每孔加入10μL CCK-8溶液，37℃培养4h，利用酶标仪测定OD450nm值。通过公式：抑制率＝(实验孔OD450nm值-阳性对照孔OD450nm值)/(阴性对照孔OD450nm值-阳性对照组OD450nm值)*100％计算半数有效浓度(EC50)，结果见表6。
表6基于母乳低聚糖的组合物的半数有效浓度(EC50，mg/mL)
从表6可以看出，本发明的基于母乳低聚糖的组合物(实施例2中实验组10-12和实验组17)对多种病毒(轮状病毒、诺沃克病毒、星状病毒)的复制均具有明显的抑制作用。
综上，本发明的基于母乳低聚糖的组合物能够在生命早期为机体提供良好的肠屏障，可以提高对病毒以及沙门氏菌等致病菌的抵抗能力，抵御病毒和致病菌的感染，降低沙门氏菌定殖量，调节肠道菌群。
本发明方案不仅限于上述技术手段所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (19)

1.基于母乳低聚糖的组合物，其特征在于，包括：母乳低聚糖和骨桥蛋白。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述母乳低聚糖包括2’-岩藻糖基乳糖、3’-唾液酸乳糖和6’-唾液酸乳糖中的至少一种。
3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述母乳低聚糖为2’-岩藻糖基乳糖和唾液酸乳糖的混合物，所述唾液酸乳糖选自3’-唾液酸乳糖和/或6’-唾液酸乳糖。
4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，母乳低聚糖中，2’-岩藻糖基乳糖重量占比≥25％，更优选大于50％。
5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，母乳低聚糖和骨桥蛋白的质量比为100:1-200，更优选为100:2-30。
6.如权利要求1-5任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括：低聚半乳糖和不饱和脂肪酸。
7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述不饱和脂肪酸选自DHA、ARA中的至少一种。
8.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，母乳低聚糖、低聚半乳糖、骨桥蛋白和不饱和脂肪酸的质量比为100:20-400:1-200:1-100，更优选为100:20-200:2-30:1-50。
9.如权利要求1-8任一项所述的基于母乳低聚糖的组合物在制备增强免疫力的产品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述增强免疫力具体为提高胃肠道对病毒或致病菌感染的抵御能力。
11.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述病毒为轮状病毒、诺沃克病毒、星状病毒中的至少一种；所述致病菌包括沙门氏菌、大肠埃希菌、空肠弯曲菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌中的至少一种。
12.如权利要求1-8任一项所述的基于母乳低聚糖的组合物在制备调节肠道菌群的产品中的应用。
13.如权利要求12所述的应用，其特征在于，所述调节肠道菌群具体为降低沙门氏菌定殖。
14.如权利要求1-8任一项所述的基于母乳低聚糖的组合物在制备预防和/或改善婴幼儿和/或儿童腹泻的产品中的应用。
15.如权利要求9-14任一项所述的应用，其特征在于，所述产品为食品或者药物。
16.如权利要求9-14任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括营养补充剂、固体饮料、含片、口腔清洁剂或者益生菌微泡片。
17.一种增强免疫力的产品，其特征在于，包括权利要求1-8任一项所述的基于母乳低聚糖的组合物。
18.一种调节肠道菌群的产品，其特征在于，包括权利要求1-8任一项所述的基于母乳低聚糖的组合物。
19.一种预防和/或改善婴幼儿和/或儿童腹泻的产品，其特征在于，包括权利要求1-8任一项所述的基于母乳低聚糖的组合物。
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