CN118159561A - 多肽 - Google Patents
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Abstract
特别提供了与LPAR1结合的多肽，诸如抗体或其片段。
Description
技术领域
本发明涉及与溶血磷脂酸受体1(“LPAR1”)结合的多肽以及包含这些多肽的构建体和组合物。本发明还涉及编码此类多肽的核酸、用于制备此类多肽的方法、包含编码此类多肽的核酸的载体、表达或能够表达此类多肽的宿主细胞以及此类多肽、组合物或构建体的用途。
背景技术
LPAR1涉及在疾病如炎性和/或纤维化疾病中重要的几个生物轴。先前领先于LPAR1(BMS-986020)的小分子药物由于药物选择性差而在II期临床试验中失败。因此，需要新的LPAR1抑制剂。
发明内容
根据本发明的第一方面，提供了一种与溶血磷脂酸受体1(LPAR1或LPA1)结合的多肽。合适地，多肽是抗体或其片段，并且更合适地，多肽与活细胞的表面上的功能活性LPAR1结合。
这是本领域的显著进步。据作者所知，本领域中没有公开与活细胞的表面上的功能活性LPAR1结合的多肽，特别是与活细胞的表面上的功能活性LPAR1结合的抑制剂多肽。令人惊奇的是，本发明人已经能够产生此类多肽。
还提供了一种与LPAR1结合的多肽(诸如抗体或其片段)，其中该多肽包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1、7或107具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:2、8至11、100或108具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:3、12至15、101或109具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ ID NO:4、16至18、103或110具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:5、19、98或111具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6、20至22或112具有至少80％同一性的序列或由其组成
还提供了一种与LPAR1结合的多肽(诸如抗体或其片段)，该多肽包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:3具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的序列或由其组成。
还提供了一种与LPAR1结合的多肽(诸如抗体或其片段)，该多肽包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:15具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的序列或由其组成。
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还提供了一种与LPAR1结合的多肽(诸如抗体或其片段)，该多肽包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:100具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:101具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ IDNO:103具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:98具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的序列或由其组成。
还提供了一种与LPAR1结合的多肽(诸如抗体或其片段)，该多肽包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:36、37或SEQ ID NO:102具有至少80％同一性的序列或由该序列组成，该VL区包含与SEQ ID NO:38、99或104具有至少80％同一性的序列或由该序列组成。
还提供了一种与LPAR1结合的多肽(诸如抗体)，该多肽包含重链和轻链或由其组成，该重链包含SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60或SEQ ID NO:1220或由其组成，该轻链包含SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:1219或SEQ ID NO:1221或由该序列组成。
还提供了包含本发明的多肽的构建体。
还提供了包含本发明的多肽或构建体的组合物。
还提供了包含本发明的多肽或构建体以及药学上可接受的稀释剂或载剂的药物组合物。
还提供了用作药物的本发明的多肽、构建体或组合物。
还提供了用于治疗炎性疾病和/或纤维化疾病的本发明的多肽、构建体或组合物。
还提供了用于治疗选自由慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化、皮肤纤维化、全身性硬化症和骨关节炎组成的列表的疾病的本发明的多肽、构建体或组合物。
还提供了编码本发明的多肽或构建体的多核苷酸。
还提供了包含本发明的多核苷酸序列的表达载体。
还提供了包含本发明的多核苷酸序列或表达载体的细胞。
在某些实施方案中，预期本发明的多肽可受益于优于现有技术的一个或多个以下优点：
(a)功能性LPAR1在活细胞的表面上的结合
(b)LPAR1的变构抑制
(c)LPAR1的反向激动
(d)通过LPAR1减少Gi/o和/或G13和/或Gq信号传导
(e)减少或预防LPA诱导的或组成型cAMP信号转导
(f)减少或预防LPA诱导的钙动员
(g)与新表位的结合
(h)毒性降低
(i)效力增加
(j)结合亲和力增加
(k)半衰期延长
(l)给药减少
(m)与LPAR1的胞外区的结合
附图说明
图1-与阿达木单抗(Adalimumab)生物相似药相比的抗体12表达水平、与huLPAR1-HA细胞结合的能力、增加cAMP信号传导的能力、抑制钙信号传导的能力和降低细胞增殖的能力。
图2-与阿达木单抗生物相似药相比的抗体13表达水平、增加cAMP信号传导的能力、抑制钙信号传导的能力和降低细胞增殖的能力
图3-抗体7b的表位预测图4-抗体7b的互补位预测
图5-体外表位分析
图6-LPAR1上的表位描绘
图7-与帕利珠单抗(Palivizumab)生物相似药相比的抗体15表达水平、增加cAMP信号传导的能力、降低细胞增殖的能力和与huLPAR1-HA细胞结合的能力
图8-与帕利珠单抗生物相似药相比的抗体16表达水平、增加cAMP信号传导的能力和降低细胞增殖的能力
图9-与帕利珠单抗生物相似药相比的抗体17表达水平、增加cAMP信号传导的能力、降低细胞增殖的能力和与huLPAR1-HA细胞结合的能力
图10-与帕利珠单抗生物相似药相比的抗体18表达水平、增加cAMP信号传导的能力、降低细胞增殖的能力和与huLPAR1-HA细胞结合的能力
图11-本发明和现有技术的抗体(活细胞浓度为5μg/ml)的CIFAT测定显微成像结果
图12-本发明和现有技术的抗体(活细胞浓度为20μg/ml)的CIFAT测定显微成像结果
图13-与现有术技的小分子抑制剂相比，抗体12的BRET研究
图14-抗体12、15、17和18与人、豚鼠、兔和小鼠LPAR1结合的能力
图15-抗体12、15、17和18与人LPAR1、LPAR2和LPAR3结合的能力
图16-抗体12、15、17和18在大鼠中的药代动力学
图17-抗体12、13、15、16、17和18的SEC-MALS
图18-使用抗体13和抗体17在豚鼠中进行单侧输尿管梗阻功效分析
具体实施方式
定义
除非另有定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。如本文所用，以下术语具有以下所赋予它们的含义。
多肽是由在链中结合在一起的多个氨基酸残基组成的有机聚合物。如本文所用，“多肽”可与“蛋白质”和“肽”互换使用。
术语“抗体”包括包含至少一个抗体可变结构域的任何抗体蛋白质构建体，该抗体可变结构域包含至少一个抗原结合位点(ABS)。抗体包括但不限于IgA、IgG、IgE、IgD、IgM型(以及它们的亚型)的免疫球蛋白。由两个相同的重(H)链和两个相同的轻(L)链多肽组装而成的免疫球蛋白G(IgG)抗体的整体结构在哺乳动物中已得到充分确立且高度保守(Padlan1994)。
“特异性”是指特定抗体或其片段可结合的不同类型的抗原或抗原决定簇的数量。抗体的特异性是抗体将特定抗原识别为独特分子实体并将其与另一种抗原区分开的能力。与抗原或表位“特异性结合”的抗体是本领域熟知的术语。如果分子与特定靶抗原或表位的反应比其与替代靶标的反应更频繁、更快速、持续时间更长和/或亲和力更大，则称该分子表现出“特异性结合”。如果抗体与靶抗原或表位的结合比其与其他物质的结合的亲和力、亲合力更大、更容易和/或持续时间更长，则其与靶抗原或表位“特异性结合”。如果结合与非相关结合剂相比是统计学上显著的，则可以认为抗体(或其片段)与靶标特异性结合。抗体或其片段与抗原或抗原决定簇的特异性结合可以以任何合适的已知方式确定，包括例如斯卡查德分析(Scatchard analysis)和/或竞争性结合测定，诸如放射免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹心竞争测定、平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA或光谱法(例如使用荧光测定)以及本领域已知的它们的不同变体。
由抗原与抗原结合多肽的解离平衡常数(KD)表示的“亲和力”是抗原决定簇和抗体(或其片段)上的抗原结合位点之间的结合强度的量度：KD值越小，抗原决定簇和抗原结合多肽之间的结合强度越强。另选地，亲和力也可以表示为亲和力常数(KA)，其为1/KD。亲和力可以通过已知方法确定，这取决于感兴趣的特定抗原。例如，KD可以通过根据方法1.14的实施例部分中所述的方法来确定。任何小于10-6的KD值被认为指示结合。合适地，本发明的多肽将以10-6M或更小，更合适地10-7M或更小，更合适地10-8M或更小以及更合适地10-9M或更小的解离常数结合。
“亲合力”是多肽、抗体或其片段与相关抗原之间结合强度的量度。亲合力与抗原决定簇和其在抗体上的抗原结合位点之间的亲和力以及抗体上存在的相关结合位点的数目有关。
合适地，本发明的多肽是分离的。“分离的”多肽是从其原始环境中取出的多肽。例如，如果本发明的天然存在的多肽与天然系统中共存的物质中的一些或全部分离，则该多肽是分离的。术语“分离的”还可用于指这样的制剂，其中分离的多肽在配制为药物组合物的活性成分时足够纯以供治疗施用，或至少70％-80％(w/w)纯，更优选至少80％-90％(w/w)纯，甚至更优选90％-95％纯；以及最优选至少95％、96％、97％、98％、99％或100％(w/w)纯。
合适地，在本发明中使用的多核苷酸是分离的。“分离的”多核苷酸是从其原始环境中取出的多核苷酸。例如，如果天然存在的多核苷酸与天然系统中的共存物质中的一些或全部分离，则该多核苷酸与是分离的。例如，如果将多核苷酸克隆到不是其天然环境的一部分的载体中，或者如果其包含在cDNA中，则认为该多核苷酸是分离的。
出于比较两个密切相关的多肽序列的目的，可以使用NCBI BLAST v2.0，使用多肽序列的标准设置(BLASTP)来计算第一多肽序列和第二多肽序列之间的“序列同一性％”。出于比较两个密切相关的多核苷酸序列的目的，可以使用NCBI BLAST v2.0，使用核苷酸序列的标准设置(BLASTN)来计算第一核苷酸序列和第二核苷酸序列之间的“序列同一性％”。
如果多肽或多核苷酸序列在其整个长度上共享100％的序列同一性，则称它们与其他多肽或多核苷酸序列相同或“一致”。序列中的残基从左到右编号，即对于多肽从N端至C端编号；对于多核苷酸从5'端至3'端编号。
多肽序列之间的“差异”是指与第一序列相比，在第二序列的位置中单个氨基酸残基的插入、缺失或取代。两个多肽序列可以含有一个、两个或更多个此类氨基酸差异。在其他方面与第一序列相同(100％序列同一性)的第二序列中的插入、缺失或取代导致序列同一性％降低。例如，如果相同序列长9个氨基酸残基，则第二序列中的一个取代导致88.9％的序列同一性。如果第一多肽序列和第二多肽序列长9个氨基酸残基并且共享6个相同的残基，则第一多肽序列和第二多肽序列共享大于66％的同一性(第一多肽序列和第二多肽序列共享66.7％的同一性)。
另选地，出于比较第一参考多肽序列与第二比较多肽序列的目的，可以确定为了产生第二序列对第一序列进行的添加、取代和/或缺失的数目。“添加”是将一个氨基酸残基添加到第一多肽的序列中(包括在第一多肽的任一端处的添加)。“取代”是用一个不同的氨基酸残基取代第一多肽的序列中的一个氨基酸残基。所述取代可以是保守的或非保守的。“缺失”是从第一多肽的序列中缺失一个氨基酸残基(包括在第一多肽的任一端处的缺失)。
使用三个字母和一个字母代码，天然存在的氨基酸可以表示如下：甘氨酸(G或Gly)、丙氨酸(A或Ala)、缬氨酸(V或Val)、亮氨酸(L或Leu)、异亮氨酸(I或Ile)、脯氨酸(P或Pro)、苯丙氨酸(F或Phe)、酪氨酸(Y或Tyr)、色氨酸(W或Trp)、赖氨酸(K或Lys)、精氨酸(R或Arg)、组氨酸(H或His)、天冬氨酸(D或Asp)、谷氨酸(E或Glu)、天冬酰胺(N或Asn)、谷氨酰胺(Q或Gln)、半胱氨酸(C或Cys)、甲硫氨酸(M或Met)、丝氨酸(S或Ser)和苏氨酸(T或Thr)。在残基可以是天冬氨酸或天冬酰胺的情况下，可以使用符号Asx或B。在残基可以是谷氨酸或谷氨酰胺的情况下，可以使用符号Glx或Z。除非上下文另有说明，否则提及天冬氨酸包括天冬氨酸盐，并且谷氨酸包括谷氨酸盐。
“保守”氨基酸取代是这样一种氨基酸取代，其中氨基酸残基被具有相似化学结构的另一个氨基酸残基取代，并且预期对多肽的功能、活性或其他生物学特性具有很小影响。此类保守取代合适地是如下取代，其中如下组中的一个氨基酸被来自相同组中的另一个氨基酸残基取代，如下表1所示。
表1：氨基酸
合适地，疏水性氨基酸残基是非极性氨基酸。更合适地，疏水性氨基酸残基选自V、I、L、M、F、W或C。在一些实施方案中，疏水性氨基酸残基选自甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸。合适地，序列中不对应于参考序列中提供的残基的任何残基相对于参考序列的残基是保守取代。
如本文所用，除非另有说明，否则多肽序列的编号以及CDR和FR(即HCDR1、HCDR2、HCDR3、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LCDR1、LCDR2、LCDR3、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4)的定义根据Kabat系统(Kabat等人,1991，全文以引用方式并入本文)所定义。在有限数量的本文所公开的具体实施方案(来源于实施例7中进行的残基取代工作)中，将非Kabat编号系统应用于CDR定义，并且这在使用时进行指定。第一多肽序列和第二多肽序列之间的“对应”氨基酸残基是第一序列中根据Kabat系统与第二序列中的氨基酸残基共享相同位置的氨基酸残基，而第二序列中的氨基酸残基可在同一性方面不同于第一序列。根据Kabat定义，如果框架和CDR长度相同，则合适的对应残基将共享相同的数字(和字母)。比对可以手动实现，或通过使用例如用于序列比对的已知计算机算法(诸如NCBI BLAST v2.0(BLASTP或BLASTN))使用标准设置来实现。
本文提及的“表位”是指被多肽、抗体或其片段结合的靶标部分。表位也可称为“抗原决定簇”。当一种抗体和另一抗体识别相同或空间上重叠的表位时，该抗体与另一抗体结合“基本上相同的表位”。确定两种抗体是否与相同或重叠表位结合的常用方法是竞争测定，该竞争测定可以以多种不同形式(例如使用放射性或酶标记的孔板，或在表达抗原的细胞上的流式细胞术)使用标记的抗原或标记的抗体进行配置。当抗体和另一种抗体都识别相同表位(即抗原和抗体之间的所有接触点都相同)时，该抗体与另一种抗体结合“相同表位”。例如，当抗原的特定区域中的所有接触点借助于表征方法(诸如抗体/抗原交联偶联MS、HDX、X射线晶体学、低温EM或诱变)被鉴定为相同时，抗体可与另一抗体结合相同表位。
此外，借助于此类表征方法，还可以通过识别一些但不是所有相同的接触点来表征结合基本上相同表位的抗体。具体地，此类抗体可以在指定的抗原区中共享足够数目的相同接触点以递送大致等同的技术效果和/或等同的抗原相互作用选择性。另外，在抗体识别基本上相同的表位并赋予大致等同的技术效果和/或相互作用选择性的一些情况下，通过包括最N末端抗原接触点到最C末端抗原接触点的全部抗原接触来界定表位结合足迹也可以是有用的。
在蛋白质靶标上发现的表位可以定义为“线性表位”或“构象表位”。线性表位由蛋白质抗原中连续的氨基酸序列形成。构象表位由在蛋白质序列中不连续，但在蛋白质折叠成其三维结构时聚集在一起的氨基酸形成。
如本文所用，术语“载体”是指能够转运与其连接的另一种核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其是指额外的DNA片段可以接合到其中的环状双链DNA环。另一种类型的载体是病毒载体，其中额外的DNA片段可以接合到病毒基因组中。某些载体能够在它们所引入的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物和酵母载体)。其他载体(例如非附加型哺乳动物载体)可以在引入宿主细胞中时整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导与其可操作地连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。一般来讲，用于重组DNA技术中的表达载体通常是质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明旨在包括提供等效功能的其他形式的表达载体，诸如病毒载体(例如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，以及噬菌体和噬菌粒体系。如本文所用，术语“重组宿主细胞”(或简称“宿主细胞”)旨在指其中已引入重组表达载体的细胞。此类术语不仅意指特定的受试细胞，还指这种细胞的后代，例如，当所述后代用于制备细胞系或细胞库，然后任选地储存、提供、销售、转移或用于制备本文所述的多肽、抗体或其片段时。
提及“受试者”、“患者”或“个体”是指待治疗的受试者，特别是哺乳动物受试者。哺乳动物受试者包括人、非人灵长类动物、农场动物(诸如牛)、运动动物或宠物动物，诸如狗、猫、豚鼠、兔、大鼠或小鼠。在一些实施方案中，受试者是人或小鼠。最合适的对象是人。
术语“足够量”意指足以产生所需效果的量。术语“治疗有效量”是有效改善疾病或病症的症状的量。治疗有效量可以是“预防有效量”，因为预防可以被认为是治疗。
如果疾病或病症的体征或症状的严重程度、受试者经历这种体征或症状的频率或两者降低，则疾病或病症“得到改善”。
如本文所用，“治疗疾病或病症”意指降低受试者所经历的疾病或病症的至少一种体征或症状的频率和/或严重程度。
“炎症”是指免疫系统的慢性或急性触发，从而导致细胞、细胞类型、组织或器官发炎。
“纤维化”是指病理性创伤愈合，其中结缔组织取代正常组织，导致组织重塑和瘢痕组织的形成。
如本文所用，术语“约”包括比指定的值大至多且包括10％和比指定的值低至多且包括10％，合适地比指定的值大至多且包括5％和比指定的值低至多且包括5％，尤其是指定的值。术语“之间”包括指定边界的值。
“效力”是以产生给定强度的效果所需的量表示的治疗剂的活性的量度。与在低浓度下引起较小反应的较低效力的药剂相比，高度有效的药剂在低浓度下引起较大反应。效力是亲和力和功效的函数。功效是指治疗剂在与靶标结合时产生生物应答的能力以及这种应答的定量量值。术语半数最大有效浓度(EC50)是指在指定的暴露时间后引起基线和最大值之间的一半响应的治疗剂的浓度。治疗剂可引起抑制或刺激。它是常用的，并且在本文中用作效力的量度。
与LPAR1结合的多肽
当多肽含有一段或多段形成抗原结合位点的氨基酸残基、能够以亲和力(合适地表示为KD值、Ka值、kon速率和/或koff速率，如本文进一步描述的)与靶抗原上的表位结合时，多肽被称为结合多肽。“结合多肽”和“抗原结合多肽”在本文中同义使用，术语“与LPAR1结合”和“抗LPAR1”也是如此。结合多肽在施用于受试者时能够合适地发挥有益的药理学作用。合适地，多肽激动、反向激动、拮抗或中和LPAR1。在一些实施方案中，多肽可以反向激动LPAR1。在一些实施方案中，多肽可以结合LPAR1的外表面，即LPAR1的胞外区。
LPAR1结合多肽可包括抗体(其下文进一步描述)、经修饰以包含额外结合区的抗体、抗体模拟物和抗原结合抗体片段(其下文进一步描述)。其他结合多肽可包括例如DARPins(Binz等人.2003)、AffimersTM、FynomersTM、Centyrins、和环肽。
抗体及其片段
多肽优选是抗体或其片段。
常规抗体或免疫球蛋白(Ig)是包含四条多肽链的蛋白质：两条重(H或HC)链和两条轻(L或LC)链。每条链被分为恒定区和可变区。重(H)链可变区在本文中缩写为VH区，并且轻(L)链可变区在本文中缩写为VL区。这些结构域、与其相关的结构域和由其衍生的结构域在本文中称为可变结构域。VH和VL区(或“结构域”)可进一步细分为高变区，称为“互补决定区”(“CDR”)，其间穿插有更保守的区域，称为“框架区”(“FR”)。框架和互补决定区已经被精确地定义(Kabat等人1991，全文以引用方式并入本文)。在常规抗体中，每个VH和VL区由自氨基端至羧基端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。VH区CDR和FR表示为HCDR1、HCDR2、HCDR3、HFR1、HFR2、HFR3和HFR4。VL区CDR和FR表示为LCDR1、LCDR2、LCDR3、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4。两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链的常规抗体四聚体由通过例如二硫键相互连接的免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链形成，并且重链类似地连接。重链恒定区包括三个结构域，CH1、CH2和CH3。轻链恒定区包含一个结构域，CL。重链的可变结构域和轻链的可变结构域是与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q))的结合。
如本文所用，抗体的片段(其也可称为“抗体片段”、“免疫球蛋白片段”、“抗原结合片段”或“抗原结合多肽”)是指与靶标(例如其中一条或多条免疫球蛋白链不是全长的，但其与靶标特异性结合的分子)特异性结合的抗体的一部分。术语抗体片段中包括的结合片段的示例包括：
(i)Fab片段(由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段)；
(ii)F(ab')2片段(由在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段组成的二价片段)；
(iii)Fd片段(由VH和CH1结构域组成)；
(iv)Fv片段(由抗体的单臂的VL和VH结构域组成)；
(v)单链可变片段，scFv(由使用重组方法通过合成接头接合的VL和VH结构域组成，该合成接头使得它们能够制成其中VL和VH区配对形成单价分子的单一蛋白质链)；
(vi)VH(由VH结构域组成的可变结构域)；
(vii)VL(由VL结构域组成的可变结构域)；
(viii)结构域抗体(dAb，由VH或VL结构域组成)；
(ix)微抗体(由经由CH3结构域连接的一对scFv片段组成)；以及
(x)双价抗体(由scFv片段的非共价二聚体组成，该scFv片段由来自另一种抗体的VL结构域通过小肽接头连接的来自一种抗体的VH结构域组成)。
“人抗体”是指具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。施用所述人抗体的人受试者对所述抗体内所含的一级氨基酸不产生跨物种抗体应答(例如称为HAMA应答-人抗小鼠抗体)。所述人抗体可包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过随机或位点特异性诱变或通过体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中，特别是在CDR3中。然而，该术语并不旨在包括其中来源于另一哺乳动物物种(诸如小鼠)的种系的CDR序列已被移植到人框架序列上的抗体。通过重组手段制备、表达、产生或分离的人抗体，诸如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体、从重组组合人抗体文库分离的抗体、从针对人免疫球蛋白基因为转基因的动物(例如，小鼠)分离的抗体，或通过涉及人免疫球蛋白基因序列与其他DNA的剪接的任何其他方式制备、表达、产生或分离的抗体，也可称为“重组人抗体”。
将非人免疫球蛋白可变结构域的框架区中的至少一个氨基酸残基替换为来自人可变结构域的相应残基被称为“人源化”。可变结构域的人源化可降低人的免疫原性。
在一个实施方案中，抗体或其片段是scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、可变结构域(例如VH或VL)、双价抗体、微抗体或全长抗体。在一个具体的实施方案中，抗体或其片段是scFv或全长抗体。
本发明的抗体可以是任何种类，例如IgG、IgA、IgM、IgE、IgD或其亚类，并且可以包含κ或λ轻链。在一个实施方案中，抗体是IgG抗体，例如，亚类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中的至少一者。在一个实施方案中，抗体是IgG1。在另外的实施方案中，抗体可以是这样的格式，诸如IgG格式，其已经被修饰以赋予期望的特性，诸如使Fc突变以降低效应子功能、延长半衰期、改变ADCC或提高铰链稳定性。此类修饰在本领域中是公知的，并且本文描述了示例性实施方案。例如，本发明的抗体或其片段可包含IgG1重链恒定区，其包含根据SEQ ID NO:56的氨基酸序列或由其组成。合适地，重链恒定区包含体内延长抗体半衰期的突变，如Booth等人2018、Borrok等人2017、Dall'Acqua等人2006、Dall'Acqua等人2002、Datta-Mannan等人2012、Hinton等人2004、Igawa等人2013、Ko等人2021、Lee CH等人2019、Lie等人2020、Mackness等人2019、Petkova等人2006、Robbie等人2013、Saunders 2019、Shields等人2001、Vaccaro等人2006、Vaccaro等人2005、Zalevsky等人2010、US2014/056879A1、US8088376B2、WO2006053301、WO2009086320和WO2018035107中所述(出于其中所公开的Fc突变的目的，全部以引用方式并入本文)。合适地，重链恒定区包含如WO2004029207、WO2004099249和WO2006019447(出于其中所公开的Fc突变的目的，全部以引用方式并入本文)中所述的Fc效应子增强突变。
合适地，重链恒定区包含以下残基中的一者或多者：
在位置250处的残基是Q，在位置252处的残基是Y，在位置252处的残基是F，在位置252处的残基是W，在位置252处的残基是T，在位置253处的残基是A，在位置254处的残基是T，在位置256处的残基是E，在位置256处的残基是S，在位置256处的残基是R，在位置256处的残基是Q，在位置256处的残基是D，在位置259处的残基是I，在位置285处的残基是D，在位置285处的残基是N，在位置286处的残基是D，在位置294处的残基是deleted，在位置307处的残基是A，在位置307处的残基是Q，在位置307处的残基是P，在位置307处的残基是R，在位置307处的残基是W，在位置308处的残基是P，在位置308处的残基是F，在位置309处的残基是P，在位置309处的残基是D，在位置309处的残基是N，在位置310处的残基是A，在位置311处的残基是S，在位置311处的残基是I，在位置311处的残基是V，在位置311处的残基是H，在位置315处的残基是D，在位置378处的残基是V，在位置380处的残基是A，在位置385处的残基是R，在位置385处的残基是D，在位置385处的残基是S，在位置385处的残基是T，在位置385处的残基是H，在位置385处的残基是K，在位置385处的残基是A，在位置385处的残基是G，在位置386处的残基是T，在位置386处的残基是P，在位置386处的残基是D，在位置386处的残基是S，在位置386处的残基是K，在位置386处的残基是R，在位置386处的残基是I，在位置386处的残基是M，在位置387处的残基是R，在位置387处的残基是P，在位置387处的残基是H，在位置387处的残基是S，在位置387处的残基是T，在位置387处的残基是A，在位置389处的残基是P，在位置389处的残基是S，在位置389处的残基是N，在位置428处的残基是L，在位置433处的残基是K，在位置433处的残基是R，在位置433处的残基是S，在位置433处的残基是I，在位置433处的残基是P，在位置433处的残基是Q，在位置434处的残基是F，在位置434处的残基是H，在位置434处的残基是Y，在位置434处的残基是A，在位置434处的残基是S，在位置435处的残基是A，在位置436处的残基是H，在位置436处的残基是I或者在位置436处的残基是V。
更合适地，重链恒定区包含在以下位置处的突变：252、254和256；428和434；433、434和436；428、434和436；252、254、256和322；以及309、311和434；或其功能变体。更合适地，重链恒定区包含在以下位置处的突变：252、254和256；428和434；433、434和436；428、434和436；252、254、256和322；以及309、311和434。最合适地，重链恒定区包含突变M252Y、S254T和T256E或突变M428L和N434S。另选地，抗体可被聚乙二醇化以延长半衰期。
另选地或除此之外，重链恒定区可包含Fc沉默突变。合适地，重链恒定区包含突变L234A和L235A。更合适地，重链恒定区包含突变L234A、L235A和P331S(LALAPS)。另选地，重链恒定区包含突变L234A、L235A和P239G(LALA PG)。另选地，重链恒定区包含突变L235A和G237A(LAGA)。
因此，在某些实施方案中，抗体可以在表2中所示的抗体组合1至680中包含以下组合的重链恒定、重链可变(VH)、轻链恒定和轻链可变(VL)多肽序列。合适地，抗体包含两条重链和两条轻链，其中每条重链包含表2的一种抗体组合的重链恒定和重链可变(VH)序列(例如由其组成)，并且每条轻链包含表2的所述抗体组合的轻链恒定和轻链可变(VL)序列(例如由其组成)。
表2：包含重链和轻链可变区和恒定区的抗体组合1至680
在另外的实施方案中，抗体可在如上表2中所示的组合1至25中包含组合的重链恒定、重链可变(VH)、轻链恒定和轻链可变(VL)多肽序列，但其中重链恒定区包含以下残基中的一者或多者：
在位置250处的残基是Q，在位置252处的残基是Y，在位置252处的残基是F，在位置252处的残基是W，在位置252处的残基是T，在位置253处的残基是A，在位置254处的残基是T，在位置256处的残基是E，在位置256处的残基是S，在位置256处的残基是R，在位置256处的残基是Q，在位置256处的残基是D，在位置259处的残基是I，在位置285处的残基是D，在位置285处的残基是N，在位置286处的残基是D，在位置294处的残基是deleted，在位置307处的残基是A，在位置307处的残基是Q，在位置307处的残基是P，在位置307处的残基是R，在位置307处的残基是W，在位置308处的残基是P，在位置308处的残基是F，在位置309处的残基是P，在位置309处的残基是D，在位置309处的残基是N，在位置310处的残基是A，在位置311处的残基是S，在位置311处的残基是I，在位置311处的残基是V，在位置311处的残基是H，在位置315处的残基是D，在位置378处的残基是V，在位置380处的残基是A，在位置385处的残基是R，在位置385处的残基是D，在位置385处的残基是S，在位置385处的残基是T，在位置385处的残基是H，在位置385处的残基是K，在位置385处的残基是A，在位置385处的残基是G，在位置386处的残基是T，在位置386处的残基是P，在位置386处的残基是D，在位置386处的残基是S，在位置386处的残基是K，在位置386处的残基是R，在位置386处的残基是I，在位置386处的残基是M，在位置387处的残基是R，在位置387处的残基是P，在位置387处的残基是H，在位置387处的残基是S，在位置387处的残基是T，在位置387处的残基是A，在位置389处的残基是P，在位置389处的残基是S，在位置389处的残基是N，在位置428处的残基是L，在位置433处的残基是K，在位置433处的残基是R，在位置433处的残基是S，在位置433处的残基是I，在位置433处的残基是P，在位置433处的残基是Q，在位置434处的残基是F，在位置434处的残基是H，在位置434处的残基是Y，在位置434处的残基是A，在位置434处的残基是S，在位置435处的残基是A，在位置436处的残基是H，在位置436处的残基是I或者在位置436处的残基是V。
在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:37的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1239，以及SEQ ID NO:38的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:36的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1239，以及SEQ ID NO:38的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:102的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1239，以及SEQ ID NO:99的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:102的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1239，以及SEQ ID NO:104的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:36的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1239，以及SEQ ID NO:99的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。
在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:37的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1264，以及SEQ ID NO:38的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:36的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1264，以及SEQ ID NO:38的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:102的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1264，以及SEQ ID NO:99的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:102的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1264，以及SEQ ID NO:104的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。在一个实施方案中，抗体或其片段包含SEQ ID NO:36的N端至C端的重链多肽序列，随后是SEQ ID NO:1264，以及SEQ ID NO:99的N端至C端的轻链多肽序列，随后是SEQ IDNO:57。
在一些实施方案中，本文所述的抗LPAR1抗体可包含变体人Fc恒定区，该变体人Fc恒定区以比变体人Fc恒定区所来源的天然人Fc恒定区更大的亲和力与人新生儿Fc受体(FcRn)结合。例如，相对于变体人Fc恒定区所来源的天然人Fc恒定区，Fc恒定区可包含一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个或更多个)氨基酸取代。取代可以增加含有变体Fc恒定区的IgG抗体在pH 6.0处对FcRn的结合亲和力，同时维持相互作用的pH依赖性。参见例如Hinton等人(2004)J Biol Chem 279:6213-6216和Datta-Mannan等人(2007)Drug Metab Dispos 35:1-9。用于测试抗体的Fc恒定区中的一个或多个取代是否增加Fc恒定区在pH 6.0处对FcRn的亲和力(同时维持相互作用的pH依赖性)的方法是本领域已知的并且在工作实施例中举例说明。参见例如Datta-Mannan等人(2007)J Biol Chem282(3):1709-1717；国际公布WO 98/23289；国际公布WO 97/34631；以及美国专利6,277,375，这些参考文献中的每一者的公开内容全文以引用方式并入本文中。
增强抗体Fc恒定区对FcRn的结合亲和力的取代是本领域已知的，并且包括例如(1)Dall'Acqua等人(2006)J Biol Chem 281:23514-23524描述的M252Y/S254T/T256E三取代；(2)Hinton等人(2004)J Biol Chem 279:6213-6216和Hinton等人(2006)J Immunol176:346-356中描述的M428L或T250Q/M428L取代；以及(3)Petkova等人(2006)Int Immunol18(12):1759-69中描述的N434A或T307/E380A/N434A取代。另外的取代配对：P257I/Q311I、P257I/N434H和D376V/N434H描述于例如Datta-Mannan等人(2007)J Biol Chem 282(3):1709-1717中，该文献的公开内容全文以引用方式并入本文中。
在一些实施方案中，变体恒定区在EU氨基酸残基255处具有缬氨酸的取代。在一些实施方案中，变体恒定区在EU氨基酸残基309处具有天冬酰胺的取代。在一些实施方案中，变体恒定区在EU氨基酸残基312处具有异亮氨酸的取代。在一些实施方案中，变体恒定区在EU氨基酸残基386处具有取代。
在一些实施方案中，变体Fc恒定区相对于其所来源的天然恒定区包含不超过30个(例如，不超过29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个)氨基酸取代、插入或缺失。在一些实施方案中，变体Fc恒定区包含选自由以下组成的组的一个或多个氨基酸取代：M252Y、S254T、T256E、N434S、M428L、V259I、T250I和V308F。在一些实施方案中，变体人Fc恒定区包含在位置428处的甲硫氨酸和在位置434处的天冬酰胺，各自以EU编号。在一些实施方案中，变体Fc恒定区包含如例如美国专利8,088,376中所述的428L/434S双取代。
在一些实施方案中，相对于天然人Fc恒定区，变体恒定区包含在氨基酸位置237、238、239、248、250、252、254、255、256、257、258、265、270、286、289、297、298、303、305、307、308、309、311、312、314、315、317、325、332、334、360、376、380、382、384、385、386、387、389、424、428、433、434或436(EU编号)处的取代。在一些实施方案中，取代选自由以下组成的组：在位置237处甲硫氨酸取代甘氨酸；在位置238处丙氨酸取代脯氨酸；在位置239处赖氨酸取代丝氨酸；在位置248处异亮氨酸取代赖氨酸；在位置250处丙氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代苏氨酸；在位置252处苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸取代甲硫氨酸；在位置254处苏氨酸取代丝氨酸；在位置255处谷氨酸取代精氨酸；在位置256处天冬氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺取代苏氨酸；在位置257处丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代脯氨酸；在位置258处组氨酸取代谷氨酸；在位置265处丙氨酸取代天冬氨酸；在位置270处苯丙氨酸取代天冬氨酸；在位置286处丙氨酸或谷氨酸取代天冬酰胺；在位置289处组氨酸取代苏氨酸；在位置297处丙氨酸取代天冬酰胺；在位置298处甘氨酸取代丝氨酸；在位置303处丙氨酸取代缬氨酸；在位置305处丙氨酸取代缬氨酸；在位置307处丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代苏氨酸；在位置308处丙氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺或苏氨酸取代缬氨酸；在位置309处丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸或精氨酸取代亮氨酸或缬氨酸；在位置311处丙氨酸、组氨酸或异亮氨酸取代谷氨酰胺；在位置312处丙氨酸或组氨酸取代天冬氨酸；在位置314处赖氨酸或精氨酸取代亮氨酸；在位置315处丙氨酸或组氨酸取代天冬酰胺；在位置317处丙氨酸取代赖氨酸；在位置325处甘氨酸取代天冬酰胺；在位置332处缬氨酸取代异亮氨酸；在位置334处亮氨酸取代赖氨酸；在位置360处组氨酸取代赖氨酸；在位置376处丙氨酸取代天冬氨酸；在位置380处丙氨酸取代谷氨酸；在位置382处丙氨酸取代谷氨酸；在位置384处丙氨酸取代天冬酰胺或丝氨酸；在位置385处天冬氨酸或组氨酸取代甘氨酸；在位置386处脯氨酸取代谷氨酰胺；在位置387处谷氨酸取代脯氨酸；在位置389处丙氨酸或丝氨酸取代天冬酰胺；在位置424处丙氨酸取代丝氨酸；在位置428处丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代甲硫氨酸；在位置433处赖氨酸取代组氨酸；在位置434处丙氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸取代天冬酰胺；以及在位置436处组氨酸取代酪氨酸或苯丙氨酸，全部以EU编号。
在一个实施方案中，抗体或其片段是人抗体或其片段。因此，抗体或其片段可来源于人免疫球蛋白(Ig)序列。抗体(或其片段)的CDR、框架和/或恒定区可来源于人Ig序列，特别是人IgG序列。CDR、框架和/或恒定区对于人Ig序列，特别是人IgG序列可以是基本上相同的。使用人抗体的优点是它们在人类中具有低免疫原性或无免疫原性。
抗体或其片段也可以是嵌合的，例如小鼠-人抗体嵌合体。
另选地，抗体或其片段来源于非人物种，诸如小鼠。此类非人抗体可经修饰以增加其与在人类中天然产生的抗体变体的相似性，因此抗体或其片段可部分或完全人源化。因此，在一个实施方案中，抗体或其片段是人源化的。合适地，抗体或其片段是人抗体或其片段。
在一个实施方案中，抗体或其片段可以是“功能活性变体”，其还包括天然存在的等位基因变体以及突变体或任何其他非天然存在的变体。如本领域已知的，等位基因变体是(多)肽的替代形式，其特征在于具有一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加，这些取代、缺失或添加基本上不改变多肽的生物学功能。作为非限制性示例，当含有CDR的框架被修饰时，当CDR本身被修饰时，当所述CDR被嫁接到替代框架时，或者当N末端或C末端延伸被掺入时，所述功能活性变体仍可发挥作用。此外，含有CDR的结合结构域可以与不同的配偶链，例如与另一抗体共享的那些配偶链配对。在与所谓的“共同”轻链或“共同”重链共享时，所述结合结构域仍可发挥功能。此外，所述结合结构域可在多聚化时发挥作用。
靶向表位的多肽
本文提供了与LPAR1的表位结合的多肽。在某些实施方案中，LPAR1上的表位的结合可对LPAR1活性具有影响，诸如阻止或降低G蛋白与LPAR1相互作用的速率，并由此影响细胞的炎症、纤维化、增殖和迁移。多肽可通过阻止另一抗体或分子(例如LPA)的结合或相互作用或通过使阻止下游信号传导的LPAR1的结构稳定而具有阻断作用(即阻断作用可不必通过阻止另一分子的相互作用进行)。合适地，本发明的多肽对LPAR1具有特异性，并且不与其他抗原显著结合。
当使用编号UniProt Q92633(SEQ ID NO:65-68，实施例6)时，本发明提供可与全长LPAR1的区域30-44、106-120、190-204和280-294中的一者或多者结合的多肽。
在一个实施方案中，多肽可与所述区域内的一个或多个，诸如两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个氨基酸残基结合。
多肽不需要与限定范围内的所有氨基酸结合。例如，与包含SEQ ID NO:62(UniProt Q92633)的氨基酸区域30-44内的氨基酸残基的表位结合的抗体可仅与所述范围内的一个或多个氨基酸残基结合，例如在该范围的每个末端的氨基酸残基(即氨基酸30和44)，任选地包括该范围内的氨基酸(即氨基酸32、34、36、38和40)。
合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸30-44中的至少一者，诸如包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸35和36和/或包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸37和38和/或包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸32、39、40和41。合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸30-44中的至少两个，诸如至少三个，诸如至少四个，诸如至少五个，诸如至少十个，诸如所有的氨基酸。
合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸106-120中的至少一者，诸如包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸114。合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸106-120中的至少两个，诸如至少三个，诸如至少四个，诸如至少五个，诸如至少十个，诸如所有的氨基酸。
合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸190-204中的至少一者，诸如包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸193和/或包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸191、192、194和197和/或包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸190。合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸190-204中的至少两个，诸如至少三个，诸如至少四个，诸如至少五个，诸如至少十个，诸如所有的氨基酸。
合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸280-294中的至少一者，诸如包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸286和/或包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸285。合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸280-294中的至少两个，诸如至少三个，诸如至少四个，诸如至少五个，诸如至少十个，诸如所有的氨基酸。
更合适地，多肽与LPAR1的表位结合，该表位包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸30-44、106-120、190-204和280-294或由其组成。
合适地，多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基36的LPAR1的表位结合。合适地，多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基193的LPAR1的表位结合。合适地，多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基35的LPAR1的表位结合。合适地，多肽与包含LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基286的LPAR1的表位结合。合适地，多肽与包含全长LPAR1(SEQ IDNO:62)的残基36、35、193或286中的一者或多者的LPAR1的表位结合。
合适地，多肽与人LPAR1的构象表位结合，该构象表位包含位于N末端加帽螺旋内的一个或多个残基和位于细胞外结构域2内的一个或多个残基。更合适地，多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基36和193的LPAR1的表位结合。
在一个实施方案中，提供了一种多肽，其中多肽与如本文所定义的多肽结合至相同或基本上相同的表位。
在另外的实施方案中，提供了一种多肽，其中多肽与本文所定义的多肽竞争结合至LPAR1。
多肽序列
本发明的多肽可参考其CDR序列来描述。
本发明提供的特定多肽及其CDR包括以下：
表3：特定HCDR
表4：特定LCDR
多肽可包含三个重链CDR(HCDR1-3)。多肽可包含三个轻链CDR(LCDR1-3)。优选地，多肽包含三个重链CDR(HCDR1-3)和三个轻链CDR(LCDR1-3)。
多肽可包含含有与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7具有至少40％，诸如至少60％，诸如至少80％同一性的序列的HCDR1。多肽可包含由与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7具有至少40％，诸如至少60％，诸如至少80％同一性的序列组成的HCDR1。合适地，多肽包含含有SEQID NO:1或SEQ ID NO:7的HCDR1。更合适地，多肽包含由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7组成的HCDR1。更合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:1或更合适地由SEQ ID NO:1组成的HCDR1。
多肽可包含含有与SEQ ID NO:2、8至11或100中任一者具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％同一性的序列的HCDR2。多肽可包含由与SEQ ID NO:2、8至11或100中任一者具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％同一性的序列组成的HCDR2。合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:2、8至11或100中任一者的HCDR2。更合适地，多肽包含由SEQ IDNO:2、8至11或100中任一者组成的HCDR2，诸如包含SEQ ID NO:2或更合适地由SEQ ID NO:2组成的HCDR2。
多肽可包含含有与SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列的HCDR3。多肽可包含由与SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列组成的HCDR3。合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者的HCDR3。更合适地，多肽包含由SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者组成的HCDR3。更合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:3的HCDR3，诸如由SEQ ID NO:3组成的HCDR3。另选地，多肽包含含有SEQID NO:15，诸如由SEQ ID NO:15组成的HCDR3。另选地，多肽包含含有SEQ ID NO:101，诸如由SEQ ID NO:101组成的HCDR3。
多肽可包含含有与SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列的LCDR1。多肽可包含由与SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列组成的LCDR1。合适地多肽包含含有SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者的LCDR1。更合适地，多肽包含由SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者组成的LCDR1。更合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:4或更合适地由SEQ ID NO:4组成的LCDR1。更合适地，多肽包含含有SEQ IDNO:103或更合适地由SEQ ID NO:103组成的LCDR1。
多肽可包含含有与SEQ ID NO:5、19或98具有至少50％同一性，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列的LCDR2。多肽可包含由与SEQ ID NO:5、19或98具有至少50％同一性，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列组成的LCDR2。合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:5、19或98的LCDR2。更合适地，多肽包含由SEQ IDNO:5、19或98组成的LCDR2。更合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:5，更合适地由SEQ ID NO:5组成的LCDR2。
多肽可包含含有与SEQ ID NO:6或20至22中任一者具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列的LCDR3。多肽可包含由与SEQ ID NO:6或20至22中任一者具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列组成的LCDR3。更合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:6或20至22中任一者的LCDR3。更合适地，多肽包含由SEQ ID NO:6或20至22中任一者组成的LCDR3，更合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:6，更合适地由SEQ ID NO:6组成的LCDR3。
另选地，多肽可包含含有与SEQ ID NO:107具有至少40％，诸如至少60％，诸如至少80％，诸如100％同一性的序列，诸如由其组成的HCDR1。合适地，多肽包含含有与SEQ IDNO:108具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％，诸如100％同一性的序列，诸如由其组成的HCDR2。合适地，多肽包含含有与SEQ IDNO:109具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如100％同一性的序列，诸如由其组成的HCDR3。合适地，多肽包含含有与SEQ ID NO:110具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如100％同一性的序列，诸如由其组成的LCDR1。合适地，多肽包含含有与SEQ ID NO:111具有至少50％同一性，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性，诸如100％同一性的序列，诸如由其组成的LCDR2。合适地，多肽包含含有与SEQ ID NO:112具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如100％同一性的序列，诸如由其组成的LCDR3。
在一个实施方案中，多肽包含
(a)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:5的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(b)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:20的LCDR3；
(c)包含SEQ ID NO:7的HCDR1、包含SEQ ID NO:9的HCDR2、包含SEQ ID NO:13的HCDR3、包含SEQ ID NO:17的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:21的LCDR3；
(d)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:10的HCDR2、包含SEQ ID NO:14的HCDR3、包含SEQ ID NO:18的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(e)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:22的LCDR3；
(f)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(g)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:11的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:20的LCDR3；
(h)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:11的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(i)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(j)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(k)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:15的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(l)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:15的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:5的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(m)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(n)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:100的HCDR2、包含SEQ ID NO:101的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3，或
(o)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:100的HCDR2、包含SEQ ID NO:101的HCDR3、包含SEQ ID NO:103的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3。
更合适地，多肽包含
(a)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:3组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:5组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(b)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:20组成的LCDR3；
(c)由SEQ ID NO:7组成的HCDR1、由SEQ ID NO:9组成的HCDR2、由SEQ ID NO:13组成的HCDR3、由SEQ ID NO:17组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:21组成的LCDR3；
(d)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:10组成的HCDR2、由SEQ ID NO:14组成的HCDR3、由SEQ ID NO:18组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(e)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:22组成的LCDR3；
(f)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(g)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:11组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:20组成的LCDR3；
(h)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:11组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(i)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(j)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:3组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(k)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:15组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(l)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:15组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:5组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(m)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:3组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(n)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:100组成的HCDR2、由SEQ ID NO:101组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ IDNO:6组成的LCDR3，或
(o)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:100组成的HCDR2、由SEQ ID NO:101组成的HCDR3、由SEQ ID NO:103组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ IDNO:6组成的LCDR3。
多肽可包含四个重链框架区(HFR1-HFR4)。
多肽可包含含有与SEQ ID NO:40具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR1；含有与SEQ ID NO:41具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR2；含有与SEQ ID NO:42具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR3；和/或含有与SEQ IDNO:43具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR4。合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:40的HFR1、含有SEQ ID NO:41的HFR2、含有SEQ ID NO:42的HFR3和/或含有SEQ ID NO:43的HFR4。更合适地，多肽包含由SEQ ID NO:40组成的HFR1、由SEQ ID NO:41组成的HFR2、由SEQ ID NO:42组成的HFR3和/或由SEQ ID NO:43组成的HFR4。
另选地，多肽可包含含有与SEQ ID NO:48具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR1；含有与SEQ IDNO:49具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR2；含有与SEQ ID NO:50具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR3；和/或含有与SEQID NO:51具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR4。合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:48的HFR1、含有SEQ IDNO:49的HFR2、含有SEQ ID NO:50的HFR3和/或含有SEQ ID NO:51的HFR4。更合适地，多肽包含由SEQ ID NO:48组成的HFR1、由SEQ ID NO:49组成的HFR2、由SEQ ID NO:50组成的HFR3和/或由SEQ ID NO:51组成的HFR4。
多肽可包含四个轻链框架区(LFR1-LFR4)。
多肽可包含含有与SEQ ID NO:44具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR1；含有与SEQ ID NO:45具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR2；含有与SEQ ID NO:46具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR3；和/或含有与SEQ IDNO:47具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR4。合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:44的LFR1、含有SEQ ID NO:45的LFR2、含有SEQ ID NO:46的LFR3和/或含有SEQ ID NO:47的LFR4。更合适地，多肽包含由SEQ ID NO:44组成的LFR1、由SEQ ID NO:45组成的LFR2、由SEQ ID NO:46组成的LFR3和/或由SEQ ID NO:47组成的LFR4。
另选地，多肽可包含含有与SEQ ID NO:52具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR1；含有与SEQ IDNO:53具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR2；含有与SEQ ID NO:54具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR3；和/或含有与SEQID NO:55具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR4。合适地，多肽包含含有SEQ ID NO:52的LFR1、含有SEQ IDNO:53的LFR2、含有SEQ ID NO:54的LFR3和/或含有SEQ ID NO:55的LFR4。更合适地，多肽包含由SEQ ID NO:52组成的LFR1、由SEQ ID NO:53组成的LFR2、由SEQ ID NO:54组成的LFR3和/或由SEQ ID NO:55组成的LFR4。
本发明的多肽可参考其VH和VL区序列来描述。多肽可包含VH区和/或VL区，最合适地VH区和VL区。
本发明提供的特定多肽及其VH和VL区序列包括以下：
表6：VH和VL区的特定组合
VH区可包含与SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96或102中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列。合适地，VH区由与SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96或102中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列组成。
合适地，VH区包含SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96或102的氨基酸序列，更合适地，VH区包含SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37的氨基酸序列。另选地，VH区包含SEQ IDNO:102的氨基酸序列。合适地，VH区由SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96或102的氨基酸序列组成，更合适地，VH区由SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:37的氨基酸序列组成。另选地，VH区由SEQ ID NO:102的氨基酸序列组成。
VL区可包含与SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、39、97、99或104中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列。合适地，VL区由与SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、39、97、99或104中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列组成。
合适地，VL区包含SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、39、97、99或104的氨基酸序列。更合适地，VL区包含SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39的氨基酸序列。另选地，VL区包含SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:104的氨基酸序列。
合适地，VL区由SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、39、97、99或104的氨基酸序列组成。更合适地，VL区由SEQ ID NO:38或SEQ ID NO:39的氨基酸序列组成。另选地，VL区由SEQ ID NO:99或SEQ ID NO:104的氨基酸序列组成。
在一个实施方案中，多肽包含
(a)包含SEQ ID NO:23的VH区和包含SEQ ID NO:24的VL区；
(b)包含SEQ ID NO:25的VH区和包含SEQ ID NO:26的VL区；
(c)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:28的VL区；
(d)包含SEQ ID NO:29的VH区和包含SEQ ID NO:30的VL区；
(e)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:31的VL区；
(f)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:32的VL区；
(g)包含SEQ ID NO:33的VH区和包含SEQ ID NO:34的VL区；
(h)包含SEQ ID NO:33的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(i)包含SEQ ID NO:35的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(j)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(k)包含SEQ ID NO:37的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(l)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:38的VL区；
(m)包含SEQ ID NO:37的VH区和包含SEQ ID NO:38的VL区；
(n)包含SEQ ID NO:96的VH区和包含SEQ ID NO:97的VL区；
(o)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:99的VL区；
(p)包含SEQ ID NO:102的VH区和包含SEQ ID NO:99的VL区，或
(q)包含SEQ ID NO:102的VH区和包含SEQ ID NO:104的VL区。
更合适地，多肽包含
(a)由SEQ ID NO:23组成的VH区和由SEQ ID NO:24组成的VL区；
(b)由SEQ ID NO:25组成的VH区和由SEQ ID NO:26组成的VL区；
(c)由SEQ ID NO:27组成的VH区和由SEQ ID NO:28组成的VL区；
(d)由SEQ ID NO:29组成的VH区和由SEQ ID NO:30组成的VL区；
(e)由SEQ ID NO:27组成的VH区和由SEQ ID NO:31组成的VL区；
(f)由SEQ ID NO:27组成的VH区和由SEQ ID NO:32组成的VL区；
(g)由SEQ ID NO:33组成的VH区和由SEQ ID NO:34组成的VL区；
(h)由SEQ ID NO:33组成的VH区和由SEQ ID NO:39组成的VL区；
(i)由SEQ ID NO:35组成的VH区和由SEQ ID NO:39组成的VL区；
(j)由SEQ ID NO:36组成的VH区和由SEQ ID NO:39组成的VL区；
(k)由SEQ ID NO:37组成的VH区和由SEQ ID NO:39组成的VL区；
(l)由SEQ ID NO:36组成的VH区和由SEQ ID NO:38组成的VL区；
(m)由SEQ ID NO:37组成的VH区和由SEQ ID NO:38组成的VL区；
(n)由SEQ ID NO:96组成的VH区和由SEQ ID NO:97组成的VL区；
(o)由SEQ ID NO:36组成的VH区和由SEQ ID NO:99组成的VL区；
(p)由SEQ ID NO:102组成的VH区和由SEQ ID NO:99组成的VL区，或
(q)由SEQ ID NO:102组成的VH区和由SEQ ID NO:104组成的VL区。
本发明人已鉴定了本发明的多肽中的多个残基，这些残基可被取代而不显著丧失功能、不丧失功能或提供功能增强(参见例如实施例7和表10)。
因此，在一个实施方案中，多肽包含三个重链CDR(HCDR1-HCDR3)和三个轻链CDR(LCDR1-LCDR3)(其中CDR在该实施方案中由非Kabat编号系统定义)，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:72)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16-X17X18FX19G(SEQ ID NO:76)(例如由其组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29-DY(SEQ ID NO:80)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38-X39X40(SEQ ID NO:84)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:88)(例如由其组成)并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:92)(例如由其组成)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T、G、R、E、K、D和N组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M、Y、I、E、H、N、D和P组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G、V、A、L、N、Q、E、M、P、W和I组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L、T、N、Q、I、V、A、K、M、H和Y组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L、Q和D组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A、G、F、S、T和W组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X12的氨基酸选自由G、R、S、Y、A、T、D、E和W组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D、E、Y、G、M、P、W、H、L、I、S、T和A组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N、V、G、H、L、M、W、K、R、F、D、Y和E组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W、R、M、P、S和N组成的组；
X19的氨基酸选自由T、K、Q、E、R和M组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K、I、A、L、V、W、Y、M、P、Q、G和S组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X22的氨基酸选自由K、R、A、H、S、Q、T、P、M、W、Y、G、L、F、V、E和N组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F、W、S、T、M、E、V和D组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S、G、V、R、I、H、K、P、L、M和F组成的组；
X26的氨基酸选自由R和S组成的组；
X27的氨基酸选自由Y、H、Q和A组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T、S、D和E组成的组；
X29的氨基酸选自由M和L组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A、S和T组成的组；
X32的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y、S、A、N、H、W、D、E、F、T和I组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H、N、T、Y和D组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R、K、S、G和A组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V、W、K、N、R、D和P组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q、S、Y、F和W组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A、G和D组成的组；
X41的氨基酸选自由Y、H、R、T、A、D、K、L、N、Q、M、W、E、F和S组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G、E、D、T、A、F、I、N、W、H和L组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K、R、Q、T、Y、A、S、D和E组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L、K和A组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W、H、L、T、P、D、F、G和E组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M、V、W、Y和N组成的组；
X47的氨基酸选自由Q、S和L组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S、T、A、Q和V组成的组；
X49的氨基酸选自由H、A、D和F组成的组；
X50的氨基酸选自由Y和L组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K、V、D、N、R、H、T、A、G、Q、I、M、F、W、Y和L组成的组；
X52的氨基酸选自由S、A、T、G、V、W和Y组成的组；并且
X53的氨基酸选自由T和Y组成的组。
因此，在另外的实施方案中，多肽包含三个重链CDR(HCDR1-HCDR3)和三个轻链CDR(LCDR1-LCDR3)(其中CDR在该实施方案中由非Kabat编号系统定义)，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:73)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16X17X18FX19G(SEQ ID NO:77)(例如由其组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ IDNO:81)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO:85)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:89)(例如由其组成)并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:93)(例如由其组成)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T、G、R、E和K组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M、Y、I、E、H和N组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G、V、A、L、N、Q、E、M、P和W组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L、T、N、Q、I、V、A、K和M组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L和Q组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A、G、F、S和T组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X12的氨基酸选自由G、R、S、Y、A、T、D、E和W组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D、E、Y、G、M、P、W、H和L组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N、V、G、H、L、M、W、K、R、F、D、Y和E组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W、R、M、P和S组成的组；
X19的氨基酸选自由T、K、Q、E、R和M组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K、I、A、L、V、W、Y和M组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X22的氨基酸选自由K、R、A、H、S、Q、T、P、M、W、Y、G、L、F和V组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F、W、S、T、M、E、V和D组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S、G、V、R和I组成的组；
X26的氨基酸选自由R和S组成的组；
X27的氨基酸选自由Y组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T、S和D组成的组；
X29的氨基酸选自由M和L组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A、S和T组成的组；
X32的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y、S、A、N、H、W、D和E组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H、N、T和Y组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R、K、S和G组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V、W、K、N和R组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q和S组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A、G和D组成的组；
X41的氨基酸选自由Y、H、R、T、A、D、K、L、N和Q组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G、E、D、T、A、F、I、N、W和H组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K、R、Q、T、Y、A、S、D和E组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L和K组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W、H、L、T、P、D、F和G组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M、V、W、Y和N组成的组；
X47的氨基酸选自由Q、S和L组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S、T、A和Q组成的组；
X49的氨基酸选自由H组成的组；
X50的氨基酸选自由Y和L组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K、V、D、N、R、H、T、A、G、Q、I、M、F、W和Y组成的组；
X52的氨基酸选自由S、A、T和G组成的组；并且
X53的氨基酸选自由T和Y组成的组。
因此，在另外的实施方案中，多肽包含三个重链CDR(HCDR1-HCDR3)和三个轻链CDR(LCDR1-LCDR3)(其中CDR在该实施方案中由非Kabat编号系统定义)，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:74)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16X17X18FX19G(SEQ ID NO:78)(例如由其组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ IDNO:82)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO:86)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:90)(例如由其组成)并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:94)(例如由其组成)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T、G和R组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M、Y、I和E组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G、V、A、L、N和Q组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L、T、N、Q、I、V和A组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L和Q组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A、G、F和S组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S和T组成的组；
X12的氨基酸选自由G、R、S、Y、A和T组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D、E、Y、G、M和P组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N、V、G、H、L、M、W、K、R和F组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W、R、M、P和S组成的组；
X19的氨基酸选自由T、K、Q、E、R和M组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K、I、A、L、V、W和Y组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X22的氨基酸选自由K、R、A、H、S、Q、T、P、M、W、G和Y组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F、W、S、T、M、E和V组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S、G和V组成的组；
X26的氨基酸选自由R组成的组；
X27的氨基酸选自由Y组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T、S和D组成的组；
X29的氨基酸选自由M组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A、S和T组成的组；
X32的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y、S、A、N、H和W组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H、N、T和Y组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R、K和S组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V、W、K、N和R组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q和S组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A、G和D组成的组；
X41的氨基酸选自由Y、H、R和T组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G、E、D、T、A、F、I、N和W组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K、R、Q、T、Y、A和S组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L和K组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W、H、L、T、P、D和F组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M、V、W、Y和N组成的组；
X47的氨基酸选自由Q和S组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S、T、A和Q组成的组；
X49的氨基酸选自由H组成的组；
X50的氨基酸选自由Y组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K、V、D、N、R、H、T、A和G组成的组；
X52的氨基酸选自由S和A组成的组；并且
X53的氨基酸选自由T和Y组成的组。
因此，在另外的实施方案中，多肽包含三个重链CDR(HCDR1-HCDR3)和三个轻链CDR(LCDR1-LCDR3)(其中CDR在该实施方案中由非Kabat编号系统定义)，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:75)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16X17X18FX19G(SEQ ID NO:79)(例如由其组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ IDNO:83)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO:87)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:91)(例如由其组成)并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:95)(例如由其组成)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T和G组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M和Y组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G和V组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L和T组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L和Q组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A和G组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S和T组成的组；
X12的氨基酸选自由G和R组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D和E组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N和V组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W和R组成的组；
X19的氨基酸选自由T和K组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K和I组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X22的氨基酸选自由K、G和R组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F和W组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S和G组成的组；
X26的氨基酸选自由R组成的组；
X27的氨基酸选自由Y组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T和S组成的组；
X29的氨基酸选自由M组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A和S组成的组；
X32的氨基酸选自由S和T组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y和S组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H和N组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V和W组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q和S组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A和G组成的组；
X41的氨基酸选自由Y和H组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G和E组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K和R组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L和K组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W和H组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M和V组成的组；
X47的氨基酸选自由Q组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S和T组成的组；
X49的氨基酸选自由H组成的组；
X50的氨基酸选自由Y组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K和V组成的组；
X52的氨基酸选自由S和A组成的组；并且
X53的氨基酸选自由T组成的组。
在一个实施方案中，多肽包含三个重链CDR(HCDR1-HCDR3)和三个轻链CDR(LCDR1-LCDR3)(其中CDR在该实施方案中由非Kabat编号系统定义)，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:72)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16X17X18FX19G(SEQ IDNO:76)(例如由其组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ ID NO:80)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO:84)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:88)(例如由其组成)并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:92)，其中氨基酸X1至X53对应于表10的“CDR编号”列中所述的X1至X53，并且各自选自表10的“测试的残基”列中的相应行中所述的氨基酸。更合适地，氨基酸X1至X53各自选自表10的“最佳残基的20％-40％功能”、“最佳残基的40％-60％功能”、“最佳残基的60％-80％功能”和“最佳残基”列中的相应行中所述的氨基酸。更合适地，氨基酸X1至X53各自选自表10的“最佳残基的40％-60％功能”、“最佳残基的60％-80％功能”和“最佳残基”列中的相应行中所述的氨基酸。更合适地，氨基酸X1至X53各自选自表10的“最佳残基的60％-80％功能”和“最佳残基”列中的相应行中所述的氨基酸。最合适地，氨基酸X1至X53各自选自表10的“最佳残基”列中的相应行中所述的氨基酸。
在一个实施方案中，多肽包含VH区和VL区，其中VH区包含多肽序列
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFX1X2X3X4X5X6WVRQAPGQGLEWX7GX8I
X9X10X11X12X13X14X15X16YX17X18X19FX20GRFX21X22SADKSX23STAYLQISSLKAEDTAVYX24CARDX25X26X27X28X29X30X31X32DYWX33QGTTVTVSS(SEQ ID NO:70)(例如由其组成)
并且VL区包含多肽序列
X34IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCX35X36X37X38X39X40X41X42X43X44X45WYQQKPGKAPKLLIYX46AX47X48X49X50X51GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYX52CX53X54X55 X56X57X58PLX59FGGGTKLEIK(SEQ ID NO:71)(例如由其组成)
其中氨基酸X1至X59对应于表10的“全长编号”列中所述的X1至X59，并且各自选自表10的“测试的残基”列中的相应行中所述的氨基酸(其中在该实施方案中，CDR由非Kabat编号系统所定义)。更合适地，氨基酸X1至X59各自选自表10的“最佳残基的20％-40％功能”、“最佳残基的40％-60％功能”、“最佳残基的60％-80％功能”和“最佳残基”列中的相应行中所述的氨基酸。更合适地，氨基酸X1至X59各自选自表10的“最佳残基的40％-60％功能”、“最佳残基的60％-80％功能”和“最佳残基”列中的相应行中所述的氨基酸。更合适地，氨基酸X1至X59各自选自表10的“最佳残基的60％-80％功能”和“最佳残基”列中的相应行中所述的氨基酸。最合适地，氨基酸X1至X59各自选自表10的“最佳残基”列中的相应行中所述的氨基酸。
在某些实施方案中，对应于SEQ ID NO:2的残基编号5的HCDR2的残基是精氨酸并且/或者对应于SEQ ID NO:3的残基编号6的HCDR3的残基是精氨酸并且/或者对应于SEQ IDNO:3的残基编号7的HCDR3的残基是酪氨酸并且/或者对应于SEQ ID NO:5的残基编号1的LCDR2的残基是酪氨酸并且/或者对应于SEQ ID NO:6的残基编号3的LCDR3的残基是组氨酸。
在某些实施方案中，根据Kabat编号，残基H53是精氨酸并且/或者残基H100是精氨酸并且/或者残基H100A是酪氨酸并且/或者残基L50是酪氨酸并且/或者残基L91是组氨酸。
在某些实施方案中，对应于SEQ ID NO:70的位置74的残基可以选自赖氨酸或苏氨酸。
在某些实施方案中，多肽包含在图4中被选择为极有可能的互补位残基。合适地，对应于SEQ ID NO:418的位置47的残基是色氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置103的残基是甘氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置105的残基是酪氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置31的残基是酪氨酸，并且对应于SEQ ID NO:39的位置92的残基是酪氨酸。
在另外的实施方案中，多肽还包含在图4中被选择为很有可能的互补位残基。合适地，对应于SEQ ID NO:418的位置52的残基是亮氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置54的残基是精氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置104的残基是精氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置26的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置27的残基是谷氨酰胺，对应于SEQ IDNO:39的位置49的残基是酪氨酸，并且对应于SEQ ID NO:39的位置91的残基是组氨酸。
在另外的实施方案中，多肽还包含在图4中可能选择的互补位残基。合适地，对应于SEQ ID NO:418的位置55的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置58的残基是苏氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置59的残基是天冬酰胺，对应于SEQ ID NO:418的位置62的残基是谷氨酰胺，对应于SEQ ID NO:418的位置100的残基是苯丙氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置1的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置29的残基是缬氨酸，对应于SEQ IDNO:39的位置90的残基是组氨酸，并且对应于SEQ ID NO:39的位置93的残基是丝氨酸。
在另外的实施方案中，多肽还包含在图4中尽可能选择的互补位残基。合适地，对应于SEQ ID NO:418的位置31位的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置60的残基是酪氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置61的残基是天冬酰胺，对应于SEQ ID NO:418的位置65的残基是苏氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置99的残基是天冬氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置101的残基是精氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置102的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置25的残基是丙氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置30的残基是精氨酸、对应于SEQ ID NO:39的位置67的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置89的残基是谷氨酰胺，并且对应于SEQ ID NO:39的位置94的残基是丝氨酸。
在一个实施方案中，VH区包含与SEQ ID NO:113具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％，诸如100％序列同一性的氨基酸序列，诸如由其组成。合适地，VL区包含与SEQ ID NO:114具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％，诸如100％序列同一性的氨基酸序列，诸如由其组成。
本发明的多肽可参考其重链恒定区序列或轻链恒定区序列来描述。本发明的多肽也可参考其重链或轻链序列来描述。多肽可包含重链恒定区和/或轻链恒定区，最合适地重链恒定区和轻链恒定区。
本发明提供的特定恒定区包括以下：
表7：重链、轻链和恒定区的特定组合
合适地，重链包含与SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:1220或SEQ ID NO:1236具有至少50％，诸如至少70％，诸如至少90％同一性的多肽序列。更合适地，重链包含SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:1220或SEQ ID NO:1236。更合适地，重链由SEQID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:1220或SEQ ID NO:1236组成。
合适地，重链包含与SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:60具有至少50％，诸如至少70％，诸如至少90％同一性的多肽序列。更合适地，重链包含SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:60。更合适地，重链由SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:60组成。
合适地，轻链包含与SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:1219或SEQ ID NO:1221具有至少50％，诸如至少70％，诸如至少90％同一性的多肽序列。更合适地，轻链包含SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:1219或SEQ ID NO:1221。更合适地，轻链由SEQID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:1219或SEQ ID NO:1221组成。
合适地，轻链包含与SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:61具有至少50％，诸如至少70％，诸如至少90％同一性的多肽序列。更合适地，轻链包含SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:61。更合适地，轻链由SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:61组成。
本发明的多肽可参考多个组合的多肽序列来描述。
合适地，多肽(诸如抗体或其片段)包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:3具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的序列或由其组成。
合适地，多肽(诸如抗体或其片段)包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:15具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的序列或由其组成。
合适地，多肽(诸如抗体或其片段)包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:3具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:98具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的序列或由其组成。
合适地，多肽(诸如抗体或其片段)包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:100具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:101具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:98具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的序列或由其组成。
合适地，多肽(诸如抗体或其片段)包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中HCDR1包含与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR2包含与SEQ ID NO:100具有至少80％同一性的序列或由其组成，HCDR3包含与SEQ ID NO:101具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR1包含与SEQ ID NO:103具有至少80％同一性的序列或由其组成，LCDR2包含与SEQ ID NO:98具有至少80％同一性的序列或由其组成，并且LCDR3包含与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的序列或由其组成。
合适地，多肽(诸如抗体或其片段)包含VH区和VL区，该VH区包含与SEQ ID NO:36或SEQ ID NO:102具有至少80％同一性的序列或由该序列组成，该VL区包含与SEQ ID NO:99或104具有至少80％同一性的序列或由该序列组成。
合适地，多肽(诸如抗体或其片段)还包含重链和轻链恒定区。
合适地，多肽(诸如抗体)包含重链和轻链或由其组成，该重链包含SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:61或由其组成，该轻链包含SEQ ID NO:59或SEQ ID NO:60或由其组成。
在一个实施方案中，提供了本文所公开的任一序列的多肽。在一个实施方案中，提供了编码本文所公开的任一多肽序列的多核苷酸。
本文中提及“至少80％”或“80％或更大”的实施方案应理解为包括等于或大于80％的所有值，诸如85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
除了序列同一性百分比，还可以用一个或多个氨基酸变化，例如一个或多个添加、取代和/或缺失来定义等效实施方案。在一个实施方案中，序列可包含多达五个氨基酸变化，诸如多达三个氨基酸变化，特别是多达两个氨基酸变化。例如，序列可包含多达五个氨基酸取代，例如多达三个氨基酸取代，特别是多达一个或两个氨基酸取代。例如，本发明的多肽的CDR3可包含与SEQ ID NO:3中任一者相比具有不超过2个，更合适地不超过1个取代的序列或更合适地由其组成。
对于包含VH和VL区两者的片段，它们可以共价结合(例如经由二硫键或接头)或非共价结合。本文所述的抗体片段可包含scFv，即包含通过接头接合的VH区和VL区的片段。在一个实施方案中，VH区和VL区通过(例如合成的)多肽接头接合。多肽接头可包含(Gly4Ser)n接头，其中n＝1至8，例如2、3、4、5、6或7。在另外的实施方案中，接头包含SEQ ID NO:69。在另外的实施方案中，接头由SEQ ID NO:69组成。
在一个实施方案中，提供了包含所附序列表中提供的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3、VH或VL序列中的一者或多者的多肽，或与其具有至少90％，诸如至少95％，诸如至少99％同一性的多肽。最合适地，多肽是抗体或其片段。
抗体序列修饰
可以使用已知方法修饰抗体及其片段。本领域技术人员可以容易地并入对本文所述的抗体分子的序列修饰。以下实施例是非限制性的。
在抗体发现和从噬菌体文库中回收序列期间，可以通过亚克隆将所需抗体的可变结构域重新格式化为全长IgG。为了加速该过程，通常使用限制酶转移可变结构域。这些限制位点可以引入额外的/替代的氨基酸并远离典型序列(此类典型序列可以在例如国际ImMunoGeneTics[IMGT]信息系统中找到，参见http://www.imgt.org)。这些可作为κ或λ轻链序列修饰引入。
结合
本发明的多肽可以以小于3.0×10-7M(即300nM)、小于2.5×10-7M(即250nM)、小于2.0×10-7M(即200nM)或小于1.5×10-7M(即150nM)的结合亲和力(KD)与LPAR1结合。在另外的实施方案中，KD为1.3×10-7M(即130nM)或更小，诸如1.0×10-7M(即100nM)或更小。在另外的实施方案中，KD小于6.0×10-8M(即60nM)，诸如小于5.0×10-8M(即50nM)、小于4.0×10-8M(即40nM)、小于3.0×10-8M(即30nM)或小于2.0×10-8M(即20nM)。在另外的实施方案中，KD可以为1.5处10-8M(即15nM)或更小，诸如1.0×10-8M(即10nM)或更小、9.0×10-9M(即9nM)或更小、8.0×10-9M(即8nM)或更小、7.0×10-9M(即7nM)或更小、6.0×10-9M(即6nM)或更小、5.0×10-9M(即5nM)或更小、4.0×10-9M(即4nM)或更小、3.0×10-9M(即3nM)或更小、2.0×10-9M(即2nM)或更小，或1.5×10-9M(即1.5nM)或更小或1.0×10-9M(即1nM)或更小。例如，根据一个方面，提供了以小于1.5×10-7M(即150nM)的结合亲和力(KD)与LPAR1结合的抗LPAR1抗体。
合适地，本发明的多肽的K-D是使用动力学排阻测定(KinExA；一种生物测定类型，其中将含有受体、配体和受体-配体复合物的溶液暴露于固定在固相上的额外配体)确定的。合适地，KinExA使用表达LPAR1的细胞作为滴定的结合配偶体。合适地，KD由单价抗体(诸如Fab)测量。在一个实施方案中，本发明的多肽的KD可通过根据下文实施例部分详述的方法1.14来确定。
功能性表征
本文描述了可用于表征本发明的多肽的功能的测定。例如，可通过测量钙动员或cAMP产生来评估本文所述的多肽。LPAR1主要经由Gi/o发出信号以抑制cAMP产生，并经由Gq/11发出信号以促进钙动员。LPAR1还通过G13发出信号以促进Rho信号传导。
还可通过测量细胞增殖和迁移来评定本文所述的多肽。例如，DNA合成，细胞增殖的标记，可在例如通过BrdU掺入将多肽应用于细胞后测量。可通过将多肽应用于细胞，然后使用荧光显微镜计数已经迁移的细胞的比例来评定细胞迁移。
在功能测定中，可通过计算半数最大浓度(也称为“EC50”或“50％的有效浓度”)来测量输出。术语“IC50”是指抑制浓度。EC50和IC50都可以使用本领域已知的方法测量，诸如流式细胞术方法。为了避免疑问，使用IgG1格式化抗体来提供本申请中的EC50值。此类值可以基于抗体形式的分子量容易地转换为如下的等效值：
(μg/ml)/(以kDa为单位的MW)＝μM
毫升在本文中可表示为“ml”或“mL”并且可互换使用。
在多肽结合时下调的EC50可以小于0.5μg/ml，诸如小于0.4μg/ml、0.3μg/ml、0.2μg/ml、0.15μg/ml、0.1μg/ml或0.05μg/ml。特别地，所述EC50值是当以IgG1形式测量抗体时的值。例如，可以使用流式细胞术测量EC50值。
在一个实施方案中，本发明的多肽调节LPAR1的功能。更合适地，与LPAR1结合的多肽是LPAR1的抑制剂，诸如LPAR1的反向激动剂。在一个实施方案中，本发明的多肽是LPAR1的变构抑制剂。
合适地，与LPAR1的结合减少了LPAR1的Gi/o信号传导。
合适地，与LPAR1的结合减少或防止LPA诱导的或组成型的cAMP产量减少(例如在下文详述(并且用于实施例1.7中)的测定中增加cAMP产量)。在一个实施方案中，cAMP产量增加至少10％，诸如至少50％，诸如至少70％，诸如至少100％，诸如至少150％，诸如至少200％，诸如至少250％，诸如至少300％。
合适地，与LPAR1的结合减少或阻止LPA诱导的钙动员(例如在实施例1.8中详述的测定中降低钙动员)。
在一个实施方案中，多肽在与LPAR1结合时使LPAR1的活性降低至少10％，诸如至少20％，诸如至少30％，诸如至少40％，诸如至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％，诸如至少100％。更合适地，LPAR1的活性通过实施例1.1至1.16中详述的测定，诸如实施例1.7或1.11中详述的测定来指示。最合适地，LPAR1的活性通过下文概述的HTRF cAMP测定来指示。
HTRF cAMP测定
将CHO-K1 EDG2 Gi/Gq细胞以3000个细胞/25μL全生长培养基接种于多孔板中，并在37℃处温育24小时。细胞在37℃处进行血清饥饿4小时。血清饥饿后，弃去培养基，并用5μL细胞测定缓冲液(HBSS+0.1％(w/v)BSA+20mM HEPES)替换。用不同浓度的人抗体或含人抗体的上清液刺激细胞，并在37℃处温育15分钟。预温育后，用LPA(0.5μM)和毛喉素(5μM)刺激细胞，并在37℃处温育1小时。在裂解和检测缓冲液中制备cAMP-穴状化合物和抗cAMP-d2工作溶液，并将其添加到板的所有孔中。在室温处在暗处温育1小时后，在板读取器上取该板。通过将620/665nm荧光比率应用于已知cAMP浓度的标准曲线来确定cAMP浓度。
使用以下概述的瞬时转染CIFAT测定适当地指示本发明的抗体与活细胞表面上的LPAR1的结合。
瞬时转染CIFAT
将CHO-K1细胞以20,000个细胞/200μL全生长培养基接种于多孔板中，并在37℃处温育24小时。在无菌管中，将0.0309uL/孔PEI稀释到10uL/孔转染培养基(补充有2mM L-谷氨酰胺和青霉素-链霉素的DMEM)中。将稀释的PEI添加到100ng/孔DNA中，然后立即混合并将混合物在室温处温育10分钟。将200μL/孔全生长培养基添加到PEI-DNA混合物中，然后取出孔中的培养基并将200uL全生长培养基/PEI/DNA混合物添加到贴壁细胞板的孔中。将该板在37℃处温育24小时。弃去培养基并用200μL全生长培养基替换。将该板在37℃处温育24小时。从孔中取出培养基，并将细胞与不同浓度的一抗在37℃处温育75分钟。在洗涤并用4％ PFA固定细胞后，使用山羊抗人检测抗体来检测抗体的结合，在室温处温育1小时。测量488nm处的荧光。
多特异性抗体
本发明的抗体可以是单特异性的，或者它们可以结合另外的靶标，因此是双特异性或多特异性的。多特异性抗体可以对一种靶多肽的不同表位具有特异性，或者可以对多于一种靶多肽具有特异性。因此，在一个实施方案中，本发明的多肽包含在构建体中，该构建体包含对LPAR1的第一结合特异性和对第二靶表位的第二结合特异性。
第二结合特异性可靶向与LPAR1相同的细胞上或相同组织类型或不同组织类型的不同细胞上的抗原。在某些实施方案中，靶表位可以在不同的细胞上，包括不同的T细胞、B细胞、肿瘤细胞、自身免疫组织细胞或病毒感染的细胞。另选地，靶表位可以在同一细胞上。
在一个实施方案中，构建体包含与除LPAR1以外的靶标结合的多肽。
免疫缀合物
本发明的多肽(诸如抗体或其片段)可与治疗部分(诸如细胞毒素或化疗剂)缀合。最优选地，多肽与抗纤维化的治疗部分缀合。此类缀合物可称为免疫缀合物。如本文所用，术语“免疫缀合物”是指与另一部分化学或生物学连接的抗体或其片段，该另一部分诸如细胞毒素、放射性试剂、细胞因子、干扰素、靶标或报道部分、酶、毒素、肽或蛋白质或治疗剂。最优选地，治疗剂是抗纤维化的。抗体或其片段可在沿着分子的任何位置处与细胞毒素、放射性试剂、细胞因子、干扰素、靶标或报道部分、酶、毒素、肽或治疗剂连接，只要它能够结合其靶标即可。免疫缀合物的示例包括抗体-药物缀合物和抗体-毒素融合蛋白。在一个实施方案中，药剂可以是针对LPAR1的第二种不同抗体。在某些实施方案中，抗体可以与对肿瘤细胞或病毒感染细胞具有特异性的药剂缀合。可与抗LPAR1抗体缀合的治疗部分的类型将考虑待治疗的病状和待实现的期望治疗效果。
多核苷酸和表达载体
在本发明的一个方面，提供了编码本发明的多肽的多核苷酸。
在本发明的一个方面，提供了一种多核苷酸，该多核苷酸包含与编码SEQ ID NO:1至22、40至55、72至95、98、100、101、103和107至112中的部分中的任一者的多核苷酸具有至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少99％序列同一性的序列或由该序列组成，该多核苷酸编码经编码的免疫球蛋白链可变结构域的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3或LFR4。
在本发明的一个方面，多核苷酸包含SEQ ID NO:1368至1374中的任一者。
为了表达多肽，可将本文所述的多核苷酸插入表达载体中，使得基因可操作地连接至转录和翻译控制序列(如本领域所熟知的，其可称为“表达盒”)。因此，在本发明的一个方面，提供了包含本文所定义的本发明的多核苷酸序列的表达载体。
本发明还提供了编码本文所公开的所有多肽序列(包括本文所公开的任选包含一个或多个氨基酸取代的任何变体多肽序列)的多核苷酸序列和表达载体和质粒。
可对编码多肽的DNA或cDNA进行突变，该突变对于多肽的氨基酸序列是沉默的，但其提供用于在特定宿主中翻译的优选密码子。用于在例如大肠杆菌(E.coli)和酿酒酵母(S.cerevisiae)以及哺乳动物，特别是人中翻译核酸的优选密码子是已知的。
可通过例如对编码多肽的核酸进行取代、添加或缺失来实现多肽的突变。可通过许多方法引入对编码多肽的核酸的取代、添加或缺失，这些方法包括例如易错PCR、改组、寡核苷酸定向诱变、装配PCR、PCR诱变、体内诱变、盒式诱变、递归整体诱变、指数整体诱变、位点特异性诱变、基因重装配、人工基因合成、基因位点饱和诱变(GSSM)、合成接合重装配(SLR)或这些方法的组合。还可通过包括重组、递归序列重组、硫代磷酸酯修饰的DNA诱变、含尿嘧啶的模板诱变、缺口双链体诱变、点错配修复诱变、修复缺陷型宿主菌株诱变、化学诱变、放射性诱变、缺失诱变、限制选择诱变、限制纯化诱变、整体诱变、嵌合核酸多聚体产生或它们的组合的方法来引入对核酸的修饰、添加或缺失。
特别地，可使用人工基因合成。编码本发明的多肽的基因可通过例如固相DNA合成来合成产生。整个基因可以从头合成，而不需要前体模板DNA。为了获得所需寡核苷酸，将结构单元以产物序列所需的顺序依次偶联至生长的寡核苷酸链。链装配完成时，将产物从固相释放到溶液中，脱保护并收集。产物可通过高效液相色谱法(HPLC)分离以获得高纯度的所需寡核苷酸。
表达载体包括例如质粒、逆转录病毒、粘粒、酵母人工染色体(YAC)和EB病毒(EBV)衍生的附加体。将多核苷酸连接到载体中，使得载体内的转录和翻译控制序列发挥其调节多核苷酸转录和翻译的预期功能。表达和/或控制序列可包括启动子、增强子、转录终止子、编码序列的起始密码子(即ATG)5'、内含子的剪接信号和终止密码子。对表达载体和表达控制序列进行选择以与所用表达宿主细胞相容。因此，本发明进一步提供了编码本发明的多肽的核苷酸序列，该多肽包含通过合成接头接合的VH区和VL区(编码SEQ ID NO:69)。应当理解，本发明的多核苷酸或表达载体可包含VH区、VL区或两者(任选地包括接头)。因此，可以将编码VH和VL区的多核苷酸插入到单独的载体中，或者将编码两个区的序列插入到相同的表达载体中。通过常规方法(例如，连接多核苷酸和载体上的互补限制性位点，或者如果不存在限制性位点，则进行平端连接)将多核苷酸插入到表达载体中。
方便的载体是编码功能完整的CH和/或CL免疫球蛋白序列的载体，其具有工程化的适当限制性位点，使得任何VH或VL序列可以容易地插入和表达，如本文所述。表达载体还可编码促进多肽从宿主细胞中分泌的信号肽。可以将多核苷酸克隆到载体中，使得信号肽以读码框一致的方式连接到多肽的氨基端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白蛋白质的信号肽)。
在本发明的一个方面，提供了包含如本文所定义的多核苷酸或表达载体的细胞(例如宿主细胞)。应当理解，该细胞可以包含编码多肽的轻链的第一载体和编码多肽的重链的第二载体。另选地，重链和轻链都可在引入细胞的同一表达载体上编码。
在一个实施方案中，多核苷酸或表达载体编码与多肽融合的膜锚或跨膜结构域，其中多肽被呈递在细胞的细胞外表面上。
转化可通过将多核苷酸引入到宿主细胞中的任何已知方法进行。将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞中的方法是本领域熟知的，并且包括葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、转导、将多核苷酸包封在脂质体中、基因枪注射(biolistic injection)和将DNA直接微注射到细胞核中。此外，核酸分子可通过病毒载体引入到哺乳动物细胞中。
可用作表达宿主的哺乳动物细胞系是本领域公知的，包括许多可购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)的永生化细胞系。这些细胞特别包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如Hep G2)、A549细胞、3T3细胞和许多其他细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。通过确定哪些细胞系具有高表达水平来选择特别优选的细胞系。可使用的其他细胞系是昆虫细胞系，诸如Sf9细胞、两栖动物细胞、细菌细胞、植物细胞和真菌细胞。可以使用本领域已知的方法在大肠杆菌中分离并表达抗体的抗原结合片段，诸如scFv和Fv片段。
通过培养宿主细胞一段时间来产生多肽，该时间足以允许多肽在宿主细胞中表达，或者更优选地，允许多肽分泌到宿主细胞所生长的培养基中。可以使用常规的蛋白质纯化方法从培养基中回收多肽。
本发明的多肽可以使用例如Green和Sambrook,Molecular Cloning:ALaboratory Manual(2012)第4版Cold Spring Harbour Laboratory Press中所公开的技术获得并操作。
单克隆抗体可使用杂交瘤技术通过将产生特异性抗体的B细胞与骨髓瘤(B细胞癌)细胞融合而产生，该骨髓瘤细胞因其在组织培养物中生长的能力和抗体链合成的缺失而被选择。
针对所确定的抗原的单克隆抗体可以例如通过以下方法获得：
a)将从预先用所确定的抗原免疫的动物的外周血中获得的淋巴细胞，用永生细胞，优选用骨髓瘤细胞永生化，以形成杂交瘤，
b)培养所形成的永生化细胞(杂交瘤)并回收产生具有所需特异性的抗体的细胞。
另选地，不需要使用杂交瘤细胞。通过常规实践，例如使用噬菌体展示、酵母展示、核糖体展示或本领域已知的哺乳动物展示技术，可以从合适的抗体文库中分离如本文所述的能够与靶抗原结合的抗体。因此，单克隆抗体可例如通过包括以下步骤的方法获得：
a)将从动物的淋巴细胞(特别是外周血淋巴细胞)获得的DNA或cDNA序列(适当地预先用所确定的抗原免疫)克隆到载体中，特别是噬菌体中，更特别是丝状噬菌体中，
b)在允许抗体产生的条件下用上述载体转化原核细胞，
c)通过对抗体进行抗原亲和力选择来选择抗体，
d)回收具有所需特异性的抗体。
任选地，还可以容易地制造编码如本文所述的多肽并且与LPAR1结合的分离的多核苷酸，以制备足够的量以用作改善疾病的体征或症状的药物。当以这种方式用作药物时，通常首先将感兴趣的多核苷酸可操作地连接到设计用于在受试者或患者中表达所述抗体或其片段的表达载体或表达盒。此类表达盒和递送多核苷酸或有时称为“基于核酸的”药物的方法是本领域公知的。最近的综述见Hollevoet和Declerck(2017)。
还提供了用于生产多肽、抗LPAR1抗体或其片段或变体的方法，该方法包括在细胞培养基中在表达细胞内部的质粒或载体的编码核酸序列的条件下培养本发明的宿主细胞。该方法还可包括从细胞培养物上清液中获得多肽、抗LPAR1抗体或其片段或变体。然后可以将获得的抗原结合分子配制成药物组合物。此外，提供了产生表达多肽、抗LPAR1抗体或其片段或变体的细胞的方法，该方法包括用本发明的质粒或载体转染所述细胞。然后可以培养所述细胞以产生多肽、抗LPAR1抗体或其片段或变体。
溶血磷脂酸受体1(LPAR1)
溶血磷脂酸(1-酰基-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸酯；LPA)属于通过与G蛋白偶联受体(GPCR)的LPA家族相互作用而发挥其作用的内源性脂质分子家族，其中目前有6种已鉴定的受体亚型。LPAR1-3受体属于内皮分化基因(EDG)家族GPCR，并且LPAR4-6受体与嘌呤性家族GPCR密切相关。LPAR1受体主要经由Gi/o发出信号以抑制cAMP产生，并经由Gq/11发出信号以促进钙动员，但也通过G12/13发出信号以激活Rho GTP酶核苷酸交换因子(GEF)。
LPAR1也可称为LPA-1、LPA受体1、溶血磷脂酸受体1或溶血磷脂酸受体Edg-2。
LPAR1的晶体结构在2015年得到解决(Chrencik等人2015)。它表现出GPCR家族A的许多典型特征，具有7个跨膜螺旋，并且总共364个氨基酸中的94个面向细胞外溶剂。这包括50个氨基酸长的N末端区域。然而，不寻常的是，N端在细胞外侧形成螺旋帽，其折叠在7-螺旋束上，几乎完全封闭配体结合位点并掩埋配体。人LPAR1与其在食蟹猴、恒河猴、小鼠和大鼠中的直系同源物分别共享99％、99％、97％和97％氨基酸同一性。
LPAR1的胞外区包含胞外结构域0至3(ECD0至ECD3)。在ECD0(N末端区域)中，SEQID NO:62的残基25-50形成不寻常的加帽螺旋，通过ECD0和ECD2之间的二硫键保持在适当位置。参考SEQ ID NO:62，整个N端是残基1-50，N末端加帽螺旋是残基25-50，整个ECD1是残基106-121，整个ECD2是残基185-204，并且整个ECD3是残基280-294。
在一个实施方案中，LPAR1是人LPAR1。在一个实施方案中，LPAR1不是人LPAR1。LPAR1可以是天然LPAR1和/或全长LPAR1。另选地，LPAR1是LPAR1的片段，诸如包含LPAR1的一个或多个胞外区的片段。在某些实施方案中，LPAR1的片段为至少50个氨基酸长，诸如至少100个氨基酸长，诸如至少150个氨基酸长，诸如至少200个氨基酸长，诸如至少250个氨基酸长，诸如至少300个氨基酸长，诸如至少350个氨基酸长。
合适地，LPAR1包含与SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少99％同一性的序列或由其组成。更合适地，LPAR1包含SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64或由其组成。
在一个实施方案中，LPAR1是功能活性LPAR1。“功能活性”是指LPAR1能够经由下游信号传导路径(例如cAMP、Ca动员)进行信号传导。LPA与功能活性LPAR1的结合导致下游信号传导的转导，并且/或者功能活性LPAR1维持下游信号传导的组成型水平。非功能活性LPAR1不能发起信号传导。
在另外的实施方案中，LPAR1位于细胞外表面上。在另外的实施方案中，LPAR1存在于活细胞的表面上。在另外的实施方案中，多肽是LPAR1的拮抗剂。在另外的实施方案中，多肽是LPA介导的信号传导的拮抗剂。
组合物
根据本发明的另一方面，提供了包含本文所定义的多肽或构建体的组合物。在此类实施方案中，组合物可包含多肽或构建体，任选地与其他赋形剂组合。还包括包含一种或多种另外的活性剂(例如适用于治疗本文所述疾病的活性剂)的组合物。
根据本发明的另一方面，提供了包含如本文所定义的多肽或构建体以及药学上可接受的稀释剂或载剂的药物组合物。可以将本发明的多肽或构建体掺入到适合施用于受试者的药物组合物中。通常，药物组合物包含本发明的多肽或构建体以及药学上可接受的载剂。如本文所用，“药学上可接受的载剂”包括生理学相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载剂的示例包括水、盐水、盐、磷酸盐缓冲盐水、葡聚糖、甘油、乙醇等中的一者或多者，以及它们的组合。在许多情况下，优选的是，在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇或氯化钠。可以包括药学上可接受的物质，诸如润湿剂或少量的辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，它们增强多肽的保存期限或有效性。
本发明的组合物可以呈各种形式。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，诸如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)、分散液或混悬剂、片剂、丸剂、粉剂、脂质体和栓剂。优选的形式取决于预期的施用方式和治疗应用。典型的优选组合物呈可注射或可输注溶液的形式。
优选的施用方式是肠胃外(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在一个优选的实施方案中，施用是通过静脉内输注或注射进行的。在另一个优选的实施方案中，施用是通过肌内或皮下注射进行的。
治疗组合物通常必须是无菌的并且在制造和储存条件下是稳定的。该组合物可以被配制成溶液、微乳液、分散液、脂质体或适用于高药物浓度的其他有序结构。
在用于治疗如本文所述的疾病的治疗方法中使用本发明的药物组合物作为通常用于治疗此类疾病的其他已建立的疗法的辅助剂或与其结合在本发明的范围内。
在本发明的另一方面中，多肽、组合物或药物组合物与至少一种活性剂相继、同时或分开施用。
治疗
慢性肾病/糖尿病性肾病(CKD/DKD)
慢性肾病(CKD)可由许多因素引起，包括糖尿病，全世界所有透析患者中有25％-55％患有糖尿病性肾病。CKD的特征在于肾功能的进行性丧失。临床上，这通过<60毫升/分钟的估计肾小球滤过率(eGRF)来初步诊断(健康成人eGFR>90毫升/分钟)。尿中蛋白质(蛋白尿)的存在是肾损伤的指标和eGFR恶化的预后指标。
LPAR1抑制剂尚未在人肾脏疾病中进行测试。三项已发表的研究在三个独立的模型中检验了LPAR1(或LPAR1和LPAR3)抑制对肾功能的影响(Zhang等人(2017)，Li等人(2017)和Lee JH等人(2019))。所有三项研究都发现蛋白尿减少，以及肾纤维化和炎症反应减轻。已经发现LPAR1信号传导路径的各种组分在不同形式的肾病中被上调。
当CKD与糖尿病相关并由糖尿病引起时，其被称为糖尿病性肾病(DKD)。
LPAR1抑制剂先前没有在DKD的治疗中进行试验，但有大量证据表明LPAR1生物学与临床疾病存在联系。虽然LPAR1在一系列生物路径和疾病(包括神经性疼痛、骨生长和癌症)中发挥作用，但其在作为肾脏疾病核心的三个生物轴中具有特别的重要性；纤维化、炎症和代谢综合征。这三个轴对血液和尿液中发现的多种生物化学物质的水平产生了特定且可测量的变化。这些与II期研究(Palmer等人2018)和各种动物研究中发现的LPAR1抑制调节的分子相吻合。
LPAR1基因敲除或药理学抑制在许多小鼠肾纤维化模型中具有保护性(Zhang等人，2017；Pradère等人，2007；Swaney等人2011)。针对特发性肺纤维化的II期功效试验(Palmer等人2018)显示LPAR1的小分子抑制剂在研究期间有效维持用力肺活量。
LPAR1在炎症诱导中发挥作用。将LPA添加到全血中触发组胺通过LPAR1释放(Swaney等人2010)。在小鼠血管炎分子中，中性粒细胞向血管壁募集炎症依赖于中性粒细胞上的LPAR1表达(Miyabe等人2019)。
通过LPA/LPAR1轴增加的信号传导已与代谢综合征和心血管健康相关联。Li等人2017发现，在暴露于高葡萄糖浓度后，LPAR1在小鼠肾间充质细胞系上选择性地上调。Rancoule等人2013发现，用LPAR1/3抑制剂治疗三周的小鼠对腹膜内注射葡萄糖的耐受性得到改善。Guo等人(2013)发现，向db/db小鼠施用外源性脂连蛋白显著减少了蛋白尿和肾纤维化的组织学证据。
已经发表了检验LPAR1(或LPAR1和LPAR3)抑制对肾功能的影响的三项研究(Zhang等人2017、Li等人2017、Lee JH等人2019)，这些研究总结在表8中。
表8：LPAR1抑制对糖尿病性肾病的小鼠模型的影响
所有三项研究都发现蛋白尿、肾纤维化和炎症的减轻。
相反地，已经发现LPAR1信号传导路径的组分在不同形式的肾病中的上调。Zhang等人2017观察到糖尿病患者的肾脏中自分泌运动因子和LPAR1的水平增加。Sasagawa等人1998观察到，与对照相比，肾衰竭患者的血浆中溶血磷脂酸水平增加了2.6倍。
腹膜纤维化
Sakai等人2013显示，LPAR1的药理学抑制的基因缺失保护小鼠免于CG腹膜损伤引起的纤维化。
肝纤维化
在NASH的小鼠模型中，用LPAR1拮抗剂的治疗显示纤维化和炎性基因表达的显著降低(Nishikawa等人2016)。在响应慢性肝损伤的体内小鼠研究中显示了肝纤维化程度和血浆LPA水平之间的相关性(Watanabe等人2007)
特发性肺纤维化(IPF)
如前所述，IPF的II期临床试验显示，LPAR1的小分子抑制剂在治疗肺纤维化中是有效的(Palmer等人2018)。此外，使用LPAR1缺陷小鼠的体内小鼠研究发现，LPAR1缺陷保护小鼠免于肺损伤后的纤维化和死亡(Tager等人2007)
皮肤纤维化
使用博来霉素诱导的皮肤纤维化的小鼠模型，发现LPAR1敲除小鼠对博来霉素诱导的皮肤厚度和胶原的增加具有抗性(Castelino等人2011)。
全身性硬化症
全身性硬化症患者的血清的质谱分析发现2-花生四烯酰-LPA水平升高(Tokumura等人2009)。
骨关节炎
用LPAR1拮抗剂的治疗导致小鼠的滑膜炎症、软骨损伤和骨侵蚀减少(Orosa等人2014)。
根据本发明的另一方面，提供了用作药物的如本文所定义的多肽、构建体或组合物。
在一个实施方案中，多肽、构建体或组合物用于治疗，特别是用于治疗炎性和/或纤维化疾病或癌症。合适地，多肽、构建体或组合物用于治疗炎性和/或纤维化疾病。合适地，多肽、构建体或组合物用于治疗慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症或骨关节炎。合适地，多肽用于治疗慢性肾病，诸如糖尿病性肾病。另选地，多肽、构建体或组合物用于治疗慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症、骨关节炎、NASH、类风湿性关节炎、神经性疼痛或癌症。
在另一实施方案中，提供了用于治疗有需要的受试者的疾病的方法，该方法包括施用如本文所定义的多肽、构建体或组合物。在另一实施方案中，提供了用于治疗有需要的受试者的炎性疾病和/或纤维化疾病的方法，该方法包括施用如本文所定义的多肽、构建体或组合物。在另一实施方案中，提供了用于治疗慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症或骨关节炎的方法，该方法包括施用如本文所定义的多肽、构建体或组合物。在另一实施方案中，提供了治疗慢性肾病(诸如糖尿病性肾病)的方法，该方法包括施用如本文所定义的多肽、构建体或组合物。另选地，提供了治疗慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症、骨关节炎、NASH、类风湿性关节炎、神经性疼痛或癌症的方法，该方法包括施用如本文所定义的多肽、构建体或组合物。
根据本发明的其他方面，提供了如本文所定义的多肽、构建体或组合物在制备用于治疗疾病的药物中的用途。根据本发明的其他方面，提供了如本文所定义的多肽、构建体或组合物在制备用于治疗炎性疾病和/或纤维化疾病的药物中的用途。在另一实施方案中，提供了如本文所定义的多肽、构建体或组合物在制备用于治疗慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症或骨关节炎的药物中的用途。在另一实施方案中，提供了如本文所定义的多肽、构建体或组合物在制备用于治疗慢性肾病如糖尿病性肾病的药物中的用途。另选地，提供如本文所定义的多肽、构建体或组合物在制备用于治疗慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症、骨关节炎、NASH、类风湿性关节炎、神经性疼痛或癌症的药物中的用途。
在一个实施方案中，以治疗有效量施用多肽、构建体或组合物。
现在将通过以下非限制性实施例来进一步描述本发明。
实施例
实施例1：方法
1.1免疫方案
用LPAR1使小鼠免疫。免疫后，将脾解剖到DMEM中并进行匀浆，如Forbes等人(2011)中所述。在红细胞裂解且脾细胞沉淀后，将脾细胞重悬于1.5mL FBS中并冷藏10分钟，然后添加1.5mL含20％ DMSO的FBS。然后将悬浮的细胞等分到冷冻管中并以-1℃/分钟的速率冷冻。
1.2杂交瘤分离
将来自免疫小鼠的低温冷冻脾细胞解冻，并使用聚乙二醇与sp2/0骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤。然后将杂交瘤铺板于甲基纤维素培养基凝胶中，并使用HAT(次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸苷)试剂选择产生性杂交瘤。5天后，使用CloneDetect试剂(Molecular Devices)鉴定产生IgG的杂交瘤集落，然后挑取并接种到单克隆培养物中。通过在FACS测定中筛选培养上清液与表达LPAR1的细胞的差异性结合来鉴定LPAR1反应性杂交瘤。简言之，将CHO细胞用质粒瞬时转染以表达LPAR1或无关的GPCR，并且在CHO细胞转染后两天，将杂交瘤上清液与两个CHO细胞群混合。用抗小鼠IgG二抗检测抗体与细胞的结合。结合CHO-LPAR1细胞但不结合与CHO无关的GPCR细胞的杂交瘤上清液被定义为LPAR1结合剂。
1.3从杂交瘤中分离Ig基因
对106个LPAR1特异性杂交瘤细胞进行总RNA提取和逆转录以产生完整的cDNA文库。在Illumina HiSeq测序仪上进行整个cDNA文库的下一代测序。组装重叠群，并挖掘编码抗体VH或VL序列的DNA序列。
1.4重组载体的生成
使用突出端克隆方法将VH或VL区的DNA片段克隆到人IgG1重链或人κ轻链表达载体中。针对智人优化可变区序列，并经由5'BspEI和3'Bsal或经由5'BssHII和3'Apal克隆到载体中。将微量DNA样品在细胞培养级水中复原至100ng/μL。将质粒储存在-20℃处直至需要转染。
1.5抗体表达
对于抗体表达，将HEK293细胞在37℃和8％ CO2处培养并以2×106个细胞的密度接种。将重链和轻链质粒瞬时共转染到HEK293细胞中。转染后18小时-22小时添加增强子。转染后5天收获上清液。通过以1000g离心10分钟使细胞沉淀，并将上清液等分到适合的无菌塑料器皿中。
1.6抗体纯化
使用蛋白-A、5mL重力流柱从细胞培养物上清液中纯化重组表达的人抗体。在上样之前，用蛋白A IgG结合缓冲液(pH 8.0)平衡柱。使用0.45μM过滤器澄清细胞培养物上清液，并与1:1蛋白A IgG结合缓冲液(pH 8.0)混合。在使样品通过柱时，收集流通液并随后使其通过柱5次。用PBS和0.5M L-精氨酸缓冲液(pH 7)洗涤柱。使用IgG洗脱缓冲液(pH2.8)将抗体从柱洗脱到1M Tris-HCl(pH 8.0)中。使用离心过滤装置将洗脱的样品缓冲液交换到PBS中，并使用0.2μM离心管过滤器进行无菌过滤。将纯化的抗体在4℃处储存在PBS中。
1.7 HTRF cAMP测定
将cAMP HunterTM CHO-K1 EDG2 Gi/Gq细胞(DiscoverX)以3000个细胞/25μL全生长培养基接种于384孔白色板中，并在37处温育24小时。第二天，细胞在37℃处进行血清饥饿4小时。血清饥饿后，弃去培养基，并用5μL细胞测定缓冲液(HBSS+0.1％(w/v)BSA+20mMHEPES)替换。用不同浓度的人抗体或含人抗体的上清液刺激细胞，并在37℃处温育15分钟。预温育后，用LPA(0.5μM)和毛喉素(5μM)刺激细胞，并在37℃处温育1小时。按照制造商的方案，在裂解和检测缓冲液中制备cAMP-穴状化合物和抗cAMP-d2工作溶液，并添加到板的所有孔中。在室温处在暗处温育1小时后，在板读取器上读取该板。使用Prism 5(GraphPadSoftware,CA,USA)通过将620/665nm荧光比率应用于已知cAMP浓度的标准曲线来确定cAMP浓度。
1.8钙动员测定
将人肺成纤维细胞以8000个细胞/孔接种到50μL全生长培养基中的384孔板中，并在37℃处温育24小时。第二天，将培养基换成无血清培养基，并在37℃处温育24小时。血清饥饿后，用在缓冲液(补充有20mM HEPES、2.5mM丙磺舒、0.1％(w/v)BSA的HBSS，pH7.4)中稀释的Fluo-4免洗染料(Molecular Devices)替换培养基，并在37℃处平衡45分钟。将板转移到FLIPR用于进行钙动员测定。将人抗体或含人抗体的上清液以不同浓度分配到板上，同时记录，历经120秒，并在37℃处温育20分钟。预温育后，在线分配EC80浓度的配体(100nMLPA)，同时记录，历经120秒。在ScreenWorks版本3.2(Molecular Devices)中收集资料，并在Prism 5(GraphPad Software,CA,USA)中使用非线性回归分析将相对荧光单位(RFU)对化合物浓度的对数作图。
1.9 HPF BrdU掺入测定
将人肺成纤维细胞以1500个细胞/孔接种到35μL测定培养基(RPMI 1640+2mM L-谷氨酰胺+0.1％(w/v)HSA+青霉素-链霉素)中的384孔黑视板中。将细胞在37℃处温育24小时。第二天，用不同浓度的人抗体刺激细胞，并在37℃处温育30分钟。预温育后，用LPA(10μM)刺激细胞，并在37℃处温育8小时。对于以下步骤，使用来自Perkin Elmer DELFIA细胞增殖试剂盒的试剂。用10μM BrdU标记溶液处理细胞，并在37℃处温育16小时。BrdU掺入16小时后，去除培养基并固定细胞。洗涤后，将抗BrdU-EU工作溶液添加到板中，并在室温处再温育2小时。进一步洗涤后，将DELFIA诱导剂溶液添加到板的所有孔中，随后在室温处振荡温育20分钟。使用BMG LABTECH ClarioStar板读取器测量时间分辨荧光。从每个孔中检测到的原始RFU值中减去RFU的背景水平，并在Prism 5(GraphPad Software,CA,USA)中使用四参数对数方程拟合浓度-反应曲线。
1.10 HPF/HKF迁移测定
将人肺成纤维细胞或人肾成纤维细胞在细胞培养瓶中的全生长培养基中生长至80％汇合。实验前，用无血清培养基替换培养基，并将细胞在37℃处温育24小时。96孔transwell小室(5μM)的下侧膜包被有6.6μg/mL纤连蛋白(在补充有20mM HEPES的水中稀释)，并在无菌条件下风干过夜。第二天，如上所述用6.6μg/mL纤连蛋白包被趋化膜的另一侧。将含有化学引诱剂(LPA)的测定缓冲液添加到板的下室，然后一旦干燥，将具有5μM孔径的纤连蛋白包被的膜放置在顶部。将生长停滞的成纤维细胞解离，洗涤并重悬于RPMI 1640+0.1％(w/v)BSA中，然后将1×105个细胞/孔装入上室中。将人抗体在测定缓冲液(RPMI1640+0.1％(w/v)BSA)中稀释并添加到上室中的细胞悬浮液中。在37℃处温育24小时后，使用末端逐渐变细的棉签除去膜顶侧上的成纤维细胞，使得仅保留已迁移通过膜的细胞。将膜用100％甲醇固定10分钟，用DAPI染色10分钟并用蒸馏水冲洗。将膜室安装到透明塑料器皿上，并使用荧光显微镜以10倍的放大倍数对下侧上的细胞进行计数，并拍摄图像。
1.11瞬时转染CIFAT
将CHO-K1细胞以20,000个细胞/200μL全生长培养基接种于透明96孔板中，并在37℃处温育24小时。第二天，在无菌管中，将0.0309uL/孔PEI(Generon,MW 160,000)稀释到10uL/孔转染培养基(补充有2mM L-谷氨酰胺和青霉素-链霉素的DMEM)中。将稀释的PEI添加到100ng/孔编码靶蛋白(人LPAR1(SEQ ID NO:62)，除非另有说明)的DNA中，然后立即涡旋并将混合物在室温处温育10分钟。将200μL/孔全生长培养基添加到PEI-DNA混合物中，然后取出孔中的培养基并将200μl全生长培养基/PEI/DNA混合物添加到贴壁细胞板的孔中。将该板在37℃处温育24小时。第二天，弃去培养基并用200μL全生长培养基替换。将该板在37℃处温育24小时。第二天，从孔中取出培养基，并将细胞与不同浓度的一抗在37℃处温育75分钟。在洗涤并用4％ PFA固定细胞后，使用山羊抗人Alexa Fluor488检测抗体(Invitrogen)检测抗体的结合，在室温处温育1小时。使用BMG LABTECH ClarioStar板读取器测量488nm处的荧光，并以10倍放大倍数拍摄显微图像。
1.12稳定细胞CIFAT
将CHO-LPAR1和CHO-CXCR2细胞以2:23的比率以总共50,000个细胞/200μL全生长培养基接种于黑色96孔板中。将细胞在37℃处温育24小时。第二天，从孔中取出培养基，并将细胞与不同浓度的一抗在37℃处温育75分钟。在洗涤并用4％ PFA固定细胞后，使用山羊抗人Alexa Fluor 488检测抗体(Invitrogen)检测抗体的结合，在室温处温育1小时。使用BMG LABTECH ClarioStar板读取器测量488nm处的荧光，并以10倍放大倍数拍摄显微图像。
1.13竞争CIFAT
将CHO-LPAR1(GenScript)细胞以50,000个细胞/200μL全生长培养基接种于黑色96孔板中，并在37℃处温育24小时。第二天，从孔中取出培养基，并将细胞与100μg/mL一抗在37℃处一起温育20分钟。与抗体一起预温育后，添加10μg/mL生物素化的竞争性抗体，然后在37℃处温育20分钟。在洗涤并用4％ PFA固定后，使用Alexa Fluor 488链霉亲和素蛋白检测抗体(Molecular Probes)检测抗体的结合，在4℃处温育45分钟。使用BMG LABTECHClarioStar板读取器测量488nm处的荧光，并以10倍放大倍数拍摄显微图像。
1.14 KD测量
使用来源于抗体的单体Fab，使用KinExA方法来确定抗体与LPAR1相互作用的单体亲和力常数KD。在该方法中，针对一定范围的抗原浓度测量未结合抗体的浓度。因为KD＝([游离抗原][游离抗体])/[抗原-抗体复合物]，所以可以从这些测量结果中推导出KD的值。在恒定结合配偶体(CBP，例如待测试的Fab)的背景中用滴定法测量CHO-LPAR1细胞(抗原来源)。轻轻摇动样品，直至达到平衡。温育后，离心细胞并在不干扰细胞沉淀的情况下去除游离的CBP。包被有抗物种的珠粒用于捕获游离CBP的一部分。使用KinExA，用荧光标记的抗CBP检测捕获的CBP。将荧光信号转化为电压信号，该电压信号与平衡样品中的游离CBP的浓度成正比。
使用Fab格式化抗体提供本申请中的KD值。
1.15 BRET测定
以3:1的比率使用聚乙烯亚胺(PEI)转染剂，将HEK293细胞在悬浮液中与hLPAR1和以下生物传感器中的一者共转染：G蛋白激活传感器(Gαi2、Gα13和Gαq)和β抑制蛋白2-PM募集生物传感器(+GRK2)。在转染后立即将细胞以35,000个细胞/孔的密度直接接种于96孔板中。转染后48小时，以激动剂和变构/拮抗剂两种模式进行BRET实验。使用板洗涤机，抽取培养基并用30μl汉克氏平衡盐溶液缓冲液(HBSS)替换。将板在室温处平衡60分钟。对于激动剂测试，在PBS中进行抗体的连续稀释，然后将其添加到每个孔中。以技术性重复测定12种浓度的抗体。将小分子添加到每个相关孔中。用每个生物传感器测定22种浓度的小分子。然后将细胞与抗体或小分子一起在室温处分别温育60分钟或10分钟。然后将10μl的10μM e-腔肠素(Coelenterazine)Prolume Purple(Nanolight)添加到每个孔中。将细胞在室温处再温育10分钟。然后在板读取器上以0.4秒积分时间收集BRET读数(过滤器：400nm/70nm、515nm/20nm)。对于变构测试(在激动剂测试之后)，将内源性配体(油酰剂-LPA)的EC75添加到已含有抗体或小分子的每个孔中。将细胞在室温处再温育10分钟。然后在板读取器上以0.4秒积分时间收集BRET读数(过滤器：400nm/70nm、515nm/20nm)。通过计算由GFP受体发射的光(515nm)与由萤光素酶供体发射的光(400nm)的比率来确定BRET信号。将所有BRET比率用预先建立的阳性对照和阴性对照的BRET值进行归一化。归一化的BRET比率被称为通用BRET(uBRET)。在GraphPad Prism 9中使用三参数或四参数对数非线性回归模型拟合所得的剂量反应曲线。
1.16大鼠药代动力学
在雄性史泊格多利大鼠(275g-325g)中进行大鼠药代动力学研究。大鼠接受IV缓慢推注(3mg/kg)的测试抗体。在以下时间点采集血液样品：给药前、给药后2分钟、1小时、3小时、6小时、24小时、48小时、96小时、7天、14天和21天。对于每只动物和每次采血，在K2EDTA小瓶中在异氟醚麻醉下从舌下静脉中获得200μL静脉血。将血液样品轻轻混合，立即置于碎冰上，并在取样后30min内以约1500×G在约4℃处离心约10min。对于每份血液样品，将所得血浆分成2个30μL的等分试样，并使用一次性塑料材料转移到具有锥形底部的聚丙烯管中，并在-80℃处储存直至通过捕获ELISA进行分析。用1μg/mL捕获IgG将板包被过夜，然后在第二天早晨用3％(w/v)牛奶洗涤并封闭2小时。将血浆稀释液在室温处在板上温育2小时。将板用PBS+0.05％tween 20(PBST)洗涤，然后与抗人Fc HRP缀合的第二检测抗体(1:5000于PBST中)在室温处一起温育1小时。洗涤后，将孔与TMB底物在室温处一起温育15分钟，然后添加1M硫酸。在板读取器上在450nm处测量吸光度。使用在Prism 5(GraphPadSoftware,CA,USA)中为每个单独的测试IgG构建的标准曲线的插值来计算抗体浓度。使用Phoenix 8.1版(Certara USA,Inc.,Princetn,NJ)分析插值以提取相关PK参数。
实施例2：抗LPAR1抗体的鉴定、种系序列的测定和克隆相关杂交瘤的鉴定
如实施例1.1中所述使小鼠免疫。如实施例1.2中所述分离产生对LPAR1具有特异性的抗体的杂交瘤。使用实施例1.3的方法对由杂交瘤产生的针对LPAR1的抗体(抗体1)进行测序。对抗体1的可变结构域进行测序。序列显示在SEQ ID NO:23(VH)和24(VL)中。
对抗体1的序列进行分析以推导该抗体所源自的鼠种系序列(SEQ ID NO:25(VH)和26(VL)，抗体2)。产生并表达抗体2，然后测试LPAR1结合亲和力。抗体2对LPAR1具有极低的结合亲和力。
然后设计抗体3，其中可变区由抗体1的CDR区和抗体2的框架区组成，如SEQ IDNO:27(VH)和28(VL)中所示。
鉴定了与抗体1相关的杂交瘤，其也来源于抗体2的鼠种系序列。一种这样的杂交瘤是抗体4(SEQ ID NO:29(VH)和30(VL))，该抗体在LCDR3中包含抗体1中不存在的突变(Q90H)。
然后改变抗体3的VL结构域以包括Q90H突变(抗体5，SEQ ID NO：SEQ ID NO:27(VH)和31(VL))。与原始抗体1克隆相比，该抗体具有改善的亲和力和表达。
还分离了产生对LPAR1具有特异性的抗体的另一杂交瘤。使用实施例1.3的方法对另一抗体(63D8)进行测序。抗体的VH和VL序列显示在SEQ ID NO:113(63D8 VH)和114(63D8VL)中。
本文提及的所有抗体包含人κ轻链恒定区和IgG1重链恒定区(除非另有说明)。对于一些抗体，将沉默突变引入Fc区中并且/或者产生IgG2或IgG4亚型。
实施例3：人源化和亲和力成熟
产生了抗体1的多种人源化变体，其中抗体7(SEQ ID NO:33(VH)和34(VL))在表达、稳定性和功能方面是最好的。还提供了替代变体抗体14的序列(SEQ ID NO:96(14VH)和97(14VL))。
产生了抗体5的突变形式，其中已被推断为体细胞超突变产物的CDR的每个残基被回复为相应的鼠种系残基。在大多数情况下，发现这些残基的回复对抗体5的高亲和力结合特性是有害的。例外的是LCDR3内的突变，其中回复为丝氨酸(N93S)导致大的亲和力增益(抗体6，SEQ ID NO:27(VH)和32(VL))。
产生了抗体7的一个版本，其包含两个轻链突变Q90H和N93S(抗体8，SEQ ID NO:33(VH)和39(VL))。
抗体8的HCDR2内的残基E61多样化为除半胱氨酸以外的所有氨基酸。发现突变E61Q显著增强了功能(抗体9，SEQ ID NO:35(VH)和39(VL))。
平行地，进行抗体3的噬菌体展示以随机化HCDR3。发现了两个HCDR3序列(抗体10，SEQ ID NO:36(VH)和39(VL)以及抗体11SEQ ID NO:37(VH)和39(VL))。注意到，与抗体3相比，抗体10和11中重链的总电荷增加了2。为了消除由这种高正电荷驱动的非特异性相互作用的风险，在LCDR2(T56D)中产生突变(抗体12SEQ ID NO:36(VH)和38(VL)以及抗体13SEQID NO:37(VH)和38(VL))。抗体12和13降低了非特异性相互作用的倾向，对亲和力的影响最小。
实施例4：抗体12的研究
对抗体12进行进一步的实验。
通过以下方法1.5表达抗体12。将表达水平与阿达木单抗生物相似药进行比较(图1A)。使用瞬时转染CIFAT测定(方法1.11)评估抗体12与huLPAR1-HA细胞结合的能力。结果显示于图1B中。使用方法1.7、1.8和1.9测试抗体12增加cAMP信号传导、抑制钙信号传导和降低细胞增殖的能力。结果示于图1C-E中。使用方法1.14测量抗体12的KD。发现抗体12的KD为1.28nM。
实施例5：抗体13的研究
也对抗体13进行实施例4中所述的实验。结果显示在图2A(与阿达木单抗生物相似药相比的表达水平)、图2B(增加cAMP信号传导的能力)、图2C(抑制钙信号传导的能力)和图2D(减少细胞增殖的能力)中。测量抗体13的KD。发现抗体13的KD为993pM。
实施例6：表位分析
计算机模拟(In silico)
使用SEQ ID NO:64作为LPAR1的序列，经由计算机模拟阐明了抗体7的变体(抗体7b，SEQ ID NO:418(VH)和39(VL))的表位。SEQ ID NO:64是LPAR1的修饰的截短形式(4Z35LPAR1晶体结构)。预测的表位残基使用基于SEQ ID NO:64的编号显示在图3A(在序列上)和图3B(在3D结构上)中。预测的表位相互作用区域1至4(SEQ ID NO:65至68)显示在图3A和图3C中。
还预测了抗体7b的互补位的残基(图4)。在图4中使用Chothia定义对CDR加下划线。
还通过竞争CIFAT(实施例1.13)确定了抗体1和63D8竞争相同的表位(数据未显示)。
体外
基于图3和图4中所示的表位分析，设计构建体以测试计算机模拟预测的重要残基/相互作用区域。使用含有人LPAR1序列(来源于UniProt)的质粒，该序列具有对丙氨酸的选定的单个或多个残基取代。用这些质粒瞬时转染CHO-K1细胞，并使用方案1.11评定抗LPAR1 mAb与这些受体变体中的每一者的结合。抗LPAR1 mAb具有SEQ ID NO:369的VH和SEQID NO:39的VL。LPAR1的编号基于UniProt Q92633 LPAR1(SEQ ID NO:62)。
图5显示了所涉及的表位残基、计算机模拟预测和用抗HA(表达对照)、抗LPAR1mAb和阴性对照mAb染色的细胞的荧光图像。表9显示了表位残基、胞外结构域位置以及是否发现该残基对于表位结合是重要的概述。
表9：表位分析
| 测试的位置 | 人LPAR1中的残基 | 位置 | 表位残基 |
| 35 | N | N端 | 非决定性的 |
| 36 | R | N端 | + |
| 43 | T | N端 | - |
| 44 | E | N端 | - |
| 114 | R | ECD1 | - |
| 115 | R | ECD1 | - |
| 193 | E | ECD2 | + |
| 194 | N | ECD2 | - |
| 286 | Q | ECD3 | 非决定性的 |
| 289 | V | ECD3 | - |
图6示出了图3B的更新版本，其包括所鉴定的参与表位结合的关键残基的标记。该工作显示残基36R和193E参与抗体与LPAR1的结合，残基35N和286Q可能参与。
实施例7：残基取代
在分析对LPAR1功能的影响之前，单独或组合取代上文讨论的抗体1衍生的LPAR1结合抗体(在细胞上清液中产生或作为纯化的IgG产生)中的关键残基。选择被取代的残基在以下序列中被描述为Xn，其中每个CDR(其中该实施例中的CDR由非Kabat编号系统定义)被加下划线：
VH：
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFX1X2X3X4X5X6 WVRQAPGQGLEWX7GX8I
X9X10X11X12X13X14X15X16YX17X18X19FX20GRFX21X22SADKSX23STAYLQISSLKAEDTAVYX24CARDX25X26X27X28X29X30X31X32DYWX33QGTTVTVSS(SEQ ID NO：70)
VL：
X34IQMTQSPSSLSASVGDRVTITCX35X36X37X38X39X40X41X42X43X44X45 WYQQKPGKAPKLLIYX46 AX47X48X49X50X51 GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYX52CX53X54X5 5 X56X57X58PLX59 FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：71)
在CDR中选择被取代的残基在以下序列中被描述为Xn(其中该实施例中的CDR由非Kabat编号系统定义)，其中残基X21和X23可以存在或可以不存在。如果存在，则X21和/或X23选自K和R。这些残基在这些实验中不存在。
HCDR1：X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO：72)
HCDR2：X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16X17X18FX19G(SEQ ID NO：76)
HCDR3：DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ ID NO：80)
LCDR1：X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO：84)
LCDR2：X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO：88)
LCDR3：X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO：92)
每个取代的结果描述于下表10中，其中“全长编号”Xn对应于SEQ ID NO：70或71的等效Xn。“CDR编号”Xn(如果存在的话)对应于SEQ ID NO：72、76、80、84、88和92的等效Xn。使用cAMP测定(方法1.7)测试取代，但用*表示的残基除外。*表示使用稳定细胞CIFAT测定(方法1.12)测试这些取代。在该工作期间，发现对于最大亲和力，残基X20、X21或X22中的一者优选是R或K。
此外，发现SEQ ID NO：70的位置74处的赖氨酸残基可以被苏氨酸取代，同时在稳定细胞CIFAT测定(方法1.12)中仍然保持功能。根据表10中给出的功能类别，将功能保持到SEQ ID NO：70的位置74处的赖氨酸和苏氨酸都被认为是“最佳残基”的这样的程度。
在该工作中产生的其他抗体的VH和VL序列提供在所附序列表中。
实施例8：抗体取代和抗体15至18的研究
产生了进一步优化的抗体，其包括来自表10的“最佳残基”取代。这些抗体包括抗体15(SEQ ID NO:36(VH)和99(VL))、抗体16、抗体17(SEQ ID NO:102(VH)和99(VL))和抗体18(SEQ ID NO:102(V)和104(V))。
为了消除由高正电荷驱动的非特异性相互作用的风险，将LCDR2中的突变(T56E)引入抗体15中。该突变还消除了先前鉴定的突变T56D所发生的异构化的风险。抗体16包含与抗体15(SEQ ID NO:36和99)相同的VH和VL序列。抗体16的重链恒定区包含与抗体15的重链恒定区不同的沉默突变。
抗体15、16、17和18各自通过以下方法1.5表达。将表达水平与帕利珠单抗生物相似药进行比较。图7A中提供了抗体15的表达水平，图8A中提供了抗体16的表达水平，图9A中提供了抗体17的表达水平并且图10A中提供了抗体18的表达水平。
使用方法1.7测试这些抗体增加cAMP信号传导的能力。抗体15的结果显示在图7B中。抗体16的结果显示在图8B中。抗体17的结果显示在图9B中。抗体18的结果显示在图10B中。
使用方法1.9测试这些抗体降低细胞增殖的能力。抗体15的结果显示在图7C中。抗体16的结果显示在图8C中。抗体17的结果显示在图9C中。抗体18的结果显示在图10C中。
使用瞬时转染CIFAT测定(方法1.11)评定这些抗体与huLPAR1-HA细胞结合的能力。抗体15的结果显示在图7D中。抗体17的结果显示在图9D中。抗体18的结果显示在图10D中。
确定了这些抗体的KD。抗体15的KD为824pM。抗体16的KD也为824pM。抗体17的KD为1nM，并且抗体18的KD为1.39nM。
实施例9：使用CIFAT测定进行与可商购获得的抗LPAR1抗体的比较
在用于活细胞的瞬时转染CIFAT测定(方法1.11)中和在用于固定细胞的瞬时转染CIFAT测定(方法1.11)中，将本发明的抗LPAR1抗体与可商购获得的抗LPAR1抗体一起进行测试。所测试的抗体列于表11中。
表11：所测试的抗体：
63D8包含SEQ ID NO:113(VH)和114(VL)。
结果显示于图11和图12中，其中比例尺表示100μm。图11示出了以5μg/mL测试针对固定/透化细胞的抗体以及以5μg/mL测试针对活细胞的抗体的实验结果。图12示出了以5μg/mL测试针对固定/透化细胞的抗体和以20μg/mL测试针对活细胞的抗体的实验结果。这些数据说明现有技术的抗体不结合活细胞表面上的LPAR1，而已经产生了一组结合活细胞表面上的LPAR1的根据本发明的抗体。
实施例10：变构抑制
通过生物发光共振能量转移(BRET，方法1.15)研究抗体12的抑制特性，并与现有技术的小分子LPAR1抑制剂(BMS-986020)进行比较，参见图13。上线(upper lines)是在存在LPA的情况下记录的值，而下线(lower lines)是在不存在LPA的情况下记录的值。在存在LPA的情况下(上线，图13A)，即使在高浓度下(在测量G蛋白G13与GPCR的相互作用的该测定中)，抗体也不会对其中不存在LPA的系统产生等效的抑制。这仅可在配体(LPA)也同时与受体相互作用以实现一些信号转导时发生。当上线在高浓度下变平时，可以假定系统已经达到最大受体占有率，因此即使当抗体处于最大占有率时，配体也与受体相互作用。因此，抗体必须以变构方式起作用。一个相反的示例是现有技术的BMS-986020分子，它是竞争性抑制剂并且即使在存在LPA的情况下也递送100％的抑制(在该测定中)(上线，图13B)。
实施例11：物种交叉反应性
使用瞬时转染CIFAT(方法1.11)研究抗体12、15、17和18的物种交叉反应性。根据表12，用编码人LPAR1、小鼠LPAR1、豚鼠LPAR1或兔LPAR1的DNA转染细胞。结果显示在图14A(抗体12)、图14B(抗体15)、图14C(抗体17)和图14D(抗体18)中。
表12：所测试的LPAR1分子
| 物种 | 多肽SEQ ID NO: | cDNA SEQ ID NO: | UniProt |
| 人 | 62 | 1229 | Q92633-1 |
| 小鼠 | 1222 | 1232 | P61793-1 |
| 豚鼠 | 1223 | 1233 | A0A286XEY5 |
| 兔 | 1224 | 1234 | G1U0W0 |
实施例12：LPAR同工型特异性
使用瞬时转染CIFAT(方法1.11)研究了抗体12、15、17和18对人LPAR同工型的特异性。根据表13，用编码人LPAR1、人LPAR2或人LPAR3的DNA转染细胞。结果显示在图15A(抗体12)、图15B(抗体15)、图15C(抗体17)和图15D(抗体18)中。
表13：所测试的LPAR同工型
实施例13：大鼠药代动力学
使用方法1.16研究了抗体12、15、17和18在大鼠体内的药代动力学。使用帕利珠单抗生物相似药(SEQ ID NO:1227(VH)和1228(VL))作为对照同种型抗体。结果显示于图16中。
在目测检查时，所有5种抗体在以3mg/kg单次静脉内施用后具有相同的血浆浓度-时间曲线。对于所有抗体，在0.3小时(即施用后第一次采血时间)观察到中值tmax。静脉内施用后观察到的抗体17和抗体12的平均Cmax分别为143.8μg/mL至217.5μg/mL。对于所有抗体，血浆浓度以类似的方式降低，即对于所有抗体和所有动物，第一快速阶段和第二较慢阶段直到施用后504小时具有可定量的血浆浓度。
实施例14：SEC-MALS
使用多角光散射对抗体12、13、15、16、17和18进行尺寸排阻色谱法。结果显示在图17A(抗体12)、图17B(抗体13)、图17C(抗体15)、图17D(抗体16)，图17E(抗体17)和图17F(抗体18)中。
实施例15：食蟹猴的肝组织病理学
小分子拮抗剂BMS-986020在患有特发性肺纤维化(IPF)的患者中显示功效，但显示脱靶肝胆毒性。证实了所观察到的毒性是化合物特异性的，这是由于与许多肝胆汁酸流出转运蛋白(例如，BSEP、MRP3和MRP4)的脱靶结合并且不是经由LPAR1的拮抗作用介导的。
进行了一项剂量范围发现研究以确定当通过静脉内(输注)途径给予食蟹猴时抗体17的潜在毒性。在第1天(第1组)或第1、8和15天(第2组至第4组)经由静脉内输注(30分钟)将测试项目抗体17施用于8只动物。按性别将动物分成4组，并以10mg/kg/天、33mg/kg/天或100mg/kg/天给药于抗体17。
表14：实验设计
在第三次给药后两天，对给予3次剂量的抗体17的六只动物(第2组至第4组)进行完整的大体病理检查、器官重量记录和显微镜评估。在该研究过程中未发生计划外死亡。
抗体17施用被认为在注射部位具有良好耐受性。在整个研究中未观察到不良作用，并且在组织病理学方面未发现不良结果。
实施例16：豚鼠的单侧输尿管梗阻(UUO)功效模型
单侧输尿管梗阻(UUO)是肾纤维化的充分表征的疾病模型。UUO模型包括慢性肾病的关键病理生理学特征；在相对短的时间内的肾小管坏死和炎性细胞浸润。
方法
在六周龄雌性Hartley豚鼠中进行两项单侧输尿管梗阻(UUO)模型功效研究。在第0天，进行UUO手术。在第-1天至第9天，以30mg/kg的剂量水平以5mL/kg的体积每天两次口服施用BMS-986020。在第-1天、第0天、第3天和第6天，以6mg/kg(低)或20mg/kg(高)的剂量水平以10mL/kg的体积腹膜内施用同种型对照和抗LPAR1抗体。每天监测生存力、临床体征、行为和个体体重。
在第10天处死动物。处死时测量结扎的左肾和右肾重量。
羟脯氨酸是一种氨基酸，占胶原蛋白的约14％，并且作为纤维化严重程度的重要指标。为了定量肾羟脯氨酸含量，通过碱酸水解法处理左肾样品的冷冻右后部分。向样品中添加AC缓冲液(2.2M乙酸/0.48M柠檬酸)，然后离心收集上清液。从16μg/mL开始，用反式-4-羟基-L-脯氨酸(Sigma-Aldrich,USA)的系列稀释液构建羟脯氨酸的标准曲线。将制备的样品和标准品与氯胺T溶液(Nacalai Tesque Inc.,Japan)混合并在室温处温育25分钟。然后将样品与欧利希氏溶液(Ehrlich’s solution)混合，并在65℃处加热20分钟以显色。将样品在冰上冷却并离心以去除沉淀后，在560nm处测量每种上清液的光密度。根据羟脯氨酸标准曲线计算羟脯氨酸的浓度。使用BCA蛋白质测定试剂盒(Thermo Fisher Scientific,USA)确定肾样品的蛋白质浓度并用于归一化所计算的羟脯氨酸值。肾羟脯氨酸含量表示为μg/mg蛋白质。
将左肾固定在布安氏溶液(Bouin’s solution)中并包埋在石蜡中。对于PAS染色，从石蜡块上切下切片，并根据制造商的说明用席夫试剂(Schiff’s reagent)(FUJIFILMWako pure chemical corporation,Japan)染色。为了观察胶原沉积，使用天狼猩红溶液(picro-Sirius red solution)(FUJIFILM Wako pure chemical corporation)对肾切片进行染色。为了定量间质和髓质纤维化区域，使用数码相机(DFC295)以200倍放大倍数捕获皮质髓质区域中的亮视野图像，并使用ImageJ软件(National Institute of Health,USA)测量5个视野/切片中的阳性区域。
结果
研究1(图18A)使用20mg/kg剂量的抗体13作为抗LPAR1抗体。每组包括8只动物。组织学天狼猩红染色显示在UUO手术后皮质中纤维化面积增加(图25A中的媒介物)。与媒介物相比，用BMS-986020治疗减少了皮质纤维化。用抗LPAR1抗体治疗产生了与用BMS-986020治疗类似的皮质纤维化减少。各组间没有发现可观察到的羟脯氨酸差异。
研究2(图18B)使用抗体17作为抗LPAR1抗体。每批包括20只动物。与媒介物相比，用BMS-986020治疗显示出羟脯氨酸减少的趋势。与同种型抗体相比，用20mg/kg(高)抗LPAR1治疗显示羟脯氨酸的显著减少。各组间组织学天狼猩红染色没有显示出可观察到的差异。
在两个接受抗LPAR1 mAb的研究的组中观察到纤维化标志物；组织学天狼猩红染色或羟脯氨酸测量结果的减少。
条款
定义本发明及其优选方面的一组条款如下：
1.一种多肽，所述多肽与LPAR1结合。
2.根据条款1所述的多肽，其中所述多肽包含三个重链CDR(HCDR1-3)。
3.根据条款1或2中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7具有至少40％，诸如至少60％，诸如至少80％同一性的序列的HCDR1。
4.根据条款3所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7具有至少40％，诸如至少60％，诸如至少80％同一性的序列组成的HCDR1。
5.根据条款3所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:1的HCDR1。
6.根据条款5所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:1组成的HCDR1。
7.根据条款3所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:7的HCDR1。
8.根据条款7所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:7组成的HCDR1。
9.根据条款1至8中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:2、8至11或100中任一者具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％同一性的序列的HCDR2。
10.根据条款9所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:2、8至11或100中任一者具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％同一性的序列组成的HCDR2。
11.根据条款9所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:2、8至11或100中任一者的HCDR2。
12.根据条款10所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:2、8至11或100中任一者组成的HCDR2。
13.根据条款11所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:100的HCDR2。
14.根据条款12所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:100组成的HCDR2。
15.根据条款1至14中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％同一性的序列的HCDR3。
16.根据条款15所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％同一性的序列组成的HCDR3。
17.根据条款15所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者的HCDR3。
18.根据条款16所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者组成的HCDR3。
19.根据条款17所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:101的HCDR3。
20.根据条款18所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:101组成的HCDR3。
21.根据条款1至20中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含三个轻链CDR(LCDR1-3)。
22.根据条款21所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列的LCDR1。
23.根据条款22所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列组成的LCDR1。
24.根据条款22所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者的LCDR1。
25.根据条款23所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者组成的LCDR1。
26.根据条款24所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:103的LCDR1。
27.根据条款25所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:103组成的LCDR1。
28.根据条款1至27中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:5、19或98具有至少50％同一性，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列的LCDR2。
29.根据条款28所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:5、19或98具有至少50％同一性，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列组成的LCDR2。
30.根据条款28所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:5、19或98的LCDR2。
31.根据条款29所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:5、19或98组成的LCDR2。
32.根据条款30所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:98的LCDR2。
33.根据条款31所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:98组成的LCDR2。
34.根据条款1至33中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:6或20至22中任一者具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列的LCDR3。
35.根据条款34所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:6或20至22中任一者具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列组成的LCDR3。
36.根据条款34所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:6或20至22中任一者的LCDR3。
37.根据条款35所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:6或20至22中任一者组成的LCDR3。
38.根据条款36所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:6的LCDR3。
39.根据条款37所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:6组成的LCDR3。
40.根据条款1至39中任一项所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:2的残基编号5的HCDR2的残基是精氨酸。
41.根据条款1至40中任一项所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:3的残基编号6的HCDR3的残基是精氨酸。
42.根据条款1至41中任一项所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:3的残基编号7的HCDR3的残基是酪氨酸。
43.根据条款1至42中任一项所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:5的残基编号1的LCDR2的残基是酪氨酸。
44.根据条款1至43中任一项所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:6的残基编号3的LCDR3的残基是组氨酸。
45.根据条款1所述的多肽，其中所述多肽包含
(a)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:5的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(b)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:20的LCDR3；
(c)包含SEQ ID NO:7的HCDR1、包含SEQ ID NO:9的HCDR2、包含SEQ ID NO:13的HCDR3、包含SEQ ID NO:17的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:21的LCDR3；
(d)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:10的HCDR2、包含SEQ ID NO:14的HCDR3、包含SEQ ID NO:18的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(e)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:22的LCDR3；
(f)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(g)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:11的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:20的LCDR3；
(h)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:11的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(i)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(j)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(k)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:15的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(l)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:15的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:5的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(m)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(n)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:100的HCDR2、包含SEQ ID NO:101的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3，或
(o)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:100的HCDR2、包含SEQ ID NO:101的HCDR3、包含SEQ ID NO:103的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3。
46.根据条款45所述的多肽，其中所述多肽包含
(a)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:3组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:5组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(b)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:20组成的LCDR3；
(c)由SEQ ID NO:7组成的HCDR1、由SEQ ID NO:9组成的HCDR2、由SEQ ID NO:13组成的HCDR3、由SEQ ID NO:17组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:21组成的LCDR3；
(d)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:10组成的HCDR2、由SEQ ID NO:14组成的HCDR3、由SEQ ID NO:18组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(e)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:22组成的LCDR3；
(f)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(g)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:11组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:20组成的LCDR3；
(h)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:11组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(i)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(j)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:3组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(k)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:15组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(l)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:15组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:5组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(m)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:3组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(n)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:100组成的HCDR2、由SEQ ID NO:101组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ IDNO:6组成的LCDR3，或
(o)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:100组成的HCDR2、由SEQ ID NO:101组成的HCDR3、由SEQ ID NO:103组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ IDNO:6组成的LCDR3。
47.根据条款1至46中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含三个重链CDR(HCDR1-HCDR3)和三个轻链CDR(LCDR1-LCDR3)(其中所述CDR在该条款中由非Kabat编号系统定义)，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:72)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16-X17X18FX19G(SEQ ID NO:76)(例如由其组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29-DY(SEQ ID NO:80)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38-X39X40(SEQ ID NO:84)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:88)(例如由其组成)并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:92)(例如由其组成)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T、G、R、E、K、D和N组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M、Y、I、E、H、N、D和P组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G、V、A、L、N、Q、E、M、P、W和I组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L、T、N、Q、I、V、A、K、M、H和Y组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L、Q和D组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A、G、F、S、T和W组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X12的氨基酸选自由G、R、S、Y、A、T、D、E和W组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D、E、Y、G、M、P、W、H、L、I、S、T和A组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N、V、G、H、L、M、W、K、R、F、D、Y和E组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W、R、M、P、S和N组成的组；
X19的氨基酸选自由T、K、Q、E、R和M组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K、I、A、L、V、W、Y、M、P、Q、G和S组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组；
X22的氨基酸选自由K、R、A、H、S、Q、T、P、M、W、Y、G、L、F、V、E和N组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组；
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F、W、S、T、M、E、V和D组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S、G、V、R、I、H、K、P、L、M和F组成的组；
X26的氨基酸选自由R和S组成的组；
X27的氨基酸选自由Y、H、Q和A组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T、S、D和E组成的组；
X29的氨基酸选自由M和L组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A、S和T组成的组；
X32的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y、S、A、N、H、W、D、E、F、T和I组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H、N、T、Y和D组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R、K、S、G和A组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V、W、K、N、R、D和P组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q、S、Y、F和W组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A、G和D组成的组；
X41的氨基酸选自由Y、H、R、T、A、D、K、L、N、Q、M、W、E、F和S组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G、E、D、T、A、F、I、N、W、H和L组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K、R、Q、T、Y、A、S、D和E组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L、K和A组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W、H、L、T、P、D、F、G和E组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M、V、W、Y和N组成的组；
X47的氨基酸选自由Q、S和L组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S、T、A、Q和V组成的组；
X49的氨基酸选自由H、A、D和F组成的组；
X50的氨基酸选自由Y和L组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K、V、D、N、R、H、T、A、G、Q、I、M、F、W、Y和L组成的组；
X52的氨基酸选自由S、A、T、G、V、W和Y组成的组；并且
X53的氨基酸选自由T和Y组成的组。
48.根据条款47所述的多肽，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:73)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16-X17X18FX19G(SEQ ID NO:77)(例如由X组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ ID NO:81)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38-X39X40(SEQ ID NO:85)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:89)(例如由其组成)，并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:93)(例如由其组成)(其中所述CDR在该条款中由非Kabat编号系统定义)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T、G、R、E和K组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M、Y、I、E、H和N组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G、V、A、L、N、Q、E、M、P和W组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L、T、N、Q、I、V、A、K和M组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L和Q组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A、G、F、S和T组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X12的氨基酸选自由G、R、S、Y、A、T、D、E和W组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D、E、Y、G、M、P、W、H和L组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N、V、G、H、L、M、W、K、R、F、D、Y和E组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W、R、M、P和S组成的组；
X19的氨基酸选自由T、K、Q、E、R和M组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K、I、A、L、V、W、Y和M组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组；
X22的氨基酸选自由K、R、A、H、S、Q、T、P、M、W、Y、G、L、F和V组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组；
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F、W、S、T、M、E、V和D组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S、G、V、R和I组成的组；
X26的氨基酸选自由R和S组成的组；
X27的氨基酸选自由Y组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T、S和D组成的组；
X29的氨基酸选自由M和L组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A、S和T组成的组；
X32的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y、S、A、N、H、W、D和E组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H、N、T和Y组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R、K、S和G组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V、W、K、N和R组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q和S组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A、G和D组成的组；
X41的氨基酸选自由Y、H、R、T、A、D、K、L、N和Q组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G、E、D、T、A、F、I、N、W和H组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K、R、Q、T、Y、A、S、D和E组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L和K组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W、H、L、T、P、D、F和G组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M、V、W、Y和N组成的组；
X47的氨基酸选自由Q、S和L组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S、T、A和Q组成的组；
X49的氨基酸选自由H组成的组；
X50的氨基酸选自由Y和L组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K、V、D、N、R、H、T、A、G、Q、I、M、F、W和Y组成的组；
X52的氨基酸选自由S、A、T和G组成的组；并且
X53的氨基酸选自由T和Y组成的组。
49.根据条款48所述的多肽，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:74)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16-X17X18FX19G(SEQ ID NO:78)(例如由X组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ ID NO:82)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO:86)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:90)(例如由其组成)，并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:94)(例如由其组成)(其中所述CDR在该条款中由非Kabat编号系统定义)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T、G和R组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M、Y、I和E组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G、V、A、L、N和Q组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L、T、N、Q、I、V和A组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L和Q组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A、G、F和S组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S和T组成的组；
X12的氨基酸选自由G、R、S、Y、A和T组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D、E、Y、G、M和P组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N、V、G、H、L、M、W、K、R和F组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W、R、M、P和S组成的组；
X19的氨基酸选自由T、K、Q、E、R和M组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K、I、A、L、V、W和Y组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X22的氨基酸选自由K、R、A、H、S、Q、T、P、M、W、G和Y组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F、W、S、T、M、E和V组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S、G和V组成的组；
X26的氨基酸选自由R组成的组；
X27的氨基酸选自由Y组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T、S和D组成的组；
X29的氨基酸选自由M组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A、S和T组成的组；
X32的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y、S、A、N、H和W组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H、N、T和Y组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R、K和S组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V、W、K、N和R组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q和S组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A、G和D组成的组；
X41的氨基酸选自由Y、H、R和T组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G、E、D、T、A、F、I、N和W组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K、R、Q、T、Y、A和S组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L和K组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W、H、L、T、P、D和F组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M、V、W、Y和N组成的组；
X47的氨基酸选自由Q和S组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S、T、A和Q组成的组；
X49的氨基酸选自由H组成的组；
X50的氨基酸选自由Y组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K、V、D、N、R、H、T、A和G组成的组；
X52的氨基酸选自由S和A组成的组；并且
X53的氨基酸选自由T和Y组成的组。
50.根据条款49所述的多肽，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:75)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16-X17X18FX19G(SEQ ID NO:79)(例如由X组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ ID NO:83)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO:87)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:91)(例如由其组成)，并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:95)(例如由其组成)(其中所述CDR在该条款中由非Kabat编号系统定义)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T和G组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M和Y组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G和V组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L和T组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L和Q组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A和G组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S和T组成的组；
X12的氨基酸选自由G和R组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D和E组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N和V组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W和R组成的组；
X19的氨基酸选自由T和K组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K和I组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组；
X22的氨基酸选自由K、G和R组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组；
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F和W组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S和G组成的组；
X26的氨基酸选自由R组成的组；
X27的氨基酸选自由Y组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T和S组成的组；
X29的氨基酸选自由M组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A和S组成的组；
X32的氨基酸选自由S和T组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y和S组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H和N组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V和W组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q和S组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A和G组成的组；
X41的氨基酸选自由Y和H组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G和E组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K和R组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L和K组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W和H组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M和V组成的组；
X47的氨基酸选自由Q组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S和T组成的组；
X49的氨基酸选自由H组成的组；
X50的氨基酸选自由Y组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K和V组成的组；
X52的氨基酸选自由S和A组成的组；并且X53的氨基酸选自由T组成的组。
51.根据条款47至50中任一项所述的多肽，其中X21和/或X23不存在。
52.根据条款47至51中任一项所述的多肽，其中X20、X21、X22、X23、X24和X25中的至少一者是赖氨酸或精氨酸，诸如X20、X21和X22中的至少一者。
53.根据条款52所述的多肽，其中X20、X21和X22中不超过一者是赖氨酸或精氨酸，诸如X20、X21、X22、X23、X24和X25中不超过一者。
54.根据条款1至53中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含四个重链框架区(HFR1-HFR4)。
55.根据条款54所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:40具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR1；含有与SEQ ID NO:41具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR2；含有与SEQ ID NO:42具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR3；和/或含有与SEQ ID NO:43具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的HFR4。
56.根据条款55所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:41的残基13的残基选自I和M，对应于SEQ ID NO:42的残基3的残基选自V和S，对应于SEQ ID NO:42的残基4的残基选自L和F，对应于SEQ ID NO:42的残基10的残基选自S、A和V，对应于SEQ ID NO:42的残基29的残基选自F和Y，并且/或者对应于SEQ ID NO:43的残基2的残基选自G和S。
57.根据条款55或56中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:40的HFR1、含有SEQ ID NO:41的HFR2、含有SEQ ID NO:42的HFR3和/或含有SEQ ID NO:43的HFR4。
58.根据条款57所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:40组成的HFR1、由SEQ ID NO:41组成的HFR2、由SEQ ID NO:42组成的HFR3和/或由SEQ ID NO:43组成的HFR4。
59.根据条款1至58中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含四个轻链框架区(LFR1-LFR4)。
60.根据条款59所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:44具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR1；含有与SEQ ID NO:45具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR2；含有与SEQ ID NO:46具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR3；和/或含有与SEQ ID NO:47具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列或由该序列组成的LFR4。
61.根据条款60所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:44的残基1的残基选自S、D、Q、E、N和A，并且/或者对应于SEQ ID NO:46的残基31的残基选自F和Y。
62.根据条款60或61中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:44的LFR1、含有SEQ ID NO:45的LFR2、含有SEQ ID NO:46的LFR3和/或含有SEQ ID NO:47的LFR4。
63.根据条款62所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:44组成的LFR1、由SEQ ID NO:45组成的LFR2、由SEQ ID NO:46组成的LFR3和/或由SEQ ID NO:47组成的LFR4。
64.根据条款1至63中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含VH区。
65.根据条款64所述的多肽，其中所述VH区包含与SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96或102中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列。
66.根据条款65所述的多肽，其中所述VH区由与SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96或102中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列组成。
67.根据条款65所述的多肽，其中所述VH区包含SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96或102的氨基酸序列。
68.根据条款67所述的多肽，其中所述VH区包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。
69.根据条款67所述的多肽，其中所述VH区包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。
70.根据条款67所述的多肽，其中所述VH区包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列。
71.根据条款66所述的多肽，其中所述VH区由SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96或102的氨基酸序列组成。
72.根据条款71所述的多肽，其中所述VH区由SEQ ID NO:36的氨基酸序列组成。
73.根据条款71所述的多肽，其中所述VH区由SEQ ID NO:37的氨基酸序列组成。
74.根据条款71所述的多肽，其中所述VH区由SEQ ID NO:102的氨基酸序列组成。
75.根据条款1至74中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含VL区。
76.根据条款75所述的多肽，其中所述VL区包含与SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、39、97、99或104中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列。
77.根据任一条款76所述的多肽，其中所述VL区由与SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、39、97、99或104中任一者具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列组成。
78.根据条款76所述的多肽，其中所述VL区包含SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、39、97、99或104的氨基酸序列。
79.根据条款78所述的多肽，其中所述VL区包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。
80.根据条款78所述的多肽，其中所述VL区包含SEQ ID NO:99的氨基酸序列。
81.根据条款78所述的多肽，其中所述VL区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。
82.根据条款77所述的多肽，其中所述VL区由SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、39、97、99或104的氨基酸序列组成。
83.根据条款82所述的多肽，其中所述VL区由SEQ ID NO:38的氨基酸序列组成。
84.根据条款82所述的多肽，其中所述VL区由SEQ ID NO:99的氨基酸序列组成。
85.根据条款82所述的多肽，其中所述VL区由SEQ ID NO:104的氨基酸序列组成。
86.根据条款1至85中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含
(a)包含SEQ ID NO:23的VH区和包含SEQ ID NO:24的VL区；
(b)包含SEQ ID NO:25的VH区和包含SEQ ID NO:26的VL区；
(c)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:28的VL区；
(d)包含SEQ ID NO:29的VH区和包含SEQ ID NO:30的VL区；
(e)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:31的VL区；
(f)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:32的VL区；
(g)包含SEQ ID NO:33的VH区和包含SEQ ID NO:34的VL区；
(h)包含SEQ ID NO:33的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(i)包含SEQ ID NO:35的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(j)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(k)包含SEQ ID NO:37的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(l)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:38的VL区；
(m)包含SEQ ID NO:37的VH区和包含SEQ ID NO:38的VL区；
(n)包含SEQ ID NO:96的VH区和包含SEQ ID NO:97的VL区；
(o)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:99的VL区；
(p)包含SEQ ID NO:102的VH区和包含SEQ ID NO:99的VL区，或
(q)包含SEQ ID NO:102的VH区和包含SEQ ID NO:104的VL区。
87.根据条款86所述的多肽，其中所述多肽包含
(a)由SEQ ID NO:23组成的VH区和由SEQ ID NO:24组成的VL区；
(b)由SEQ ID NO:25组成的VH区和由SEQ ID NO:26组成的VL区；
(c)由SEQ ID NO:27组成的VH区和由SEQ ID NO:28组成的VL区；
(d)由SEQ ID NO:29组成的VH区和由SEQ ID NO:30组成的VL区；
(e)由SEQ ID NO:27组成的VH区和由SEQ ID NO:31组成的VL区；
(f)由SEQ ID NO:27组成的VH区和由SEQ ID NO:32组成的VL区；
(g)由SEQ ID NO:33组成的VH区和由SEQ ID NO:34组成的VL区；
(h)由SEQ ID NO:33组成的VH区和由SEQ ID NO:39组成的VL区；
(i)由SEQ ID NO:35组成的VH区和由SEQ ID NO:39组成的VL区；
(j)由SEQ ID NO:36组成的VH区和由SEQ ID NO:39组成的VL区；
(k)由SEQ ID NO:37组成的VH区和由SEQ ID NO:39组成的VL区；
(l)由SEQ ID NO:36组成的VH区和由SEQ ID NO:38组成的VL区；
(m)由SEQ ID NO:37组成的VH区和由SEQ ID NO:38组成的VL区；
(n)由SEQ ID NO:96组成的VH区和由SEQ ID NO:97组成的VL区；
(o)由SEQ ID NO:36组成的VH区和由SEQ ID NO:99组成的VL区；
(p)由SEQ ID NO:102组成的VH区和由SEQ ID NO:99组成的VL区，或
(q)由SEQ ID NO:102组成的VH区和由SEQ ID NO:104组成的VL区。
88.根据条款1至87中任一项所述的多肽，其中残基H53是精氨酸。
89.根据条款1至88中任一项所述的多肽，其中残基H100是精氨酸。
90.根据条款1至89中任一项所述的多肽，其中残基H100A是酪氨酸。
91.根据条款1至90中任一项所述的多肽，其中残基L50是酪氨酸。
92.根据条款1至91中任一项所述的多肽，其中残基L91是组氨酸。
93.根据条款1至92中任一项所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:70的位置74的残基是赖氨酸或苏氨酸。
94.根据条款1至93中任一项所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:418的位置47的残基是色氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置103的残基是甘氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置105的残基是酪氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置31的残基是酪氨酸，并且对应于SEQID NO:39的位置92的残基是酪氨酸。
95.根据条款94所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:418的位置52的残基是亮氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置54的残基是精氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置104的残基是精氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置26的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置27的残基是谷氨酰胺，对应于SEQ ID NO:39的位置49的残基是酪氨酸，并且对应于SEQ IDNO:39的位置91的残基是组氨酸。
96.根据条款95所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:418的位置55的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置58的残基是苏氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置59的残基是天冬酰胺，对应于SEQ ID NO:418的位置62的残基是谷氨酰胺，对应于SEQ ID NO:418的位置100的残基是苯丙氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置1的残基是丝氨酸，对应于SEQID NO:39的位置29的残基是缬氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置90的残基是组氨酸，并且对应于SEQ ID NO:39的位置93的残基是丝氨酸。
97.根据条款96所述的多肽，其中对应于SEQ ID NO:418的位置31位的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置60的残基是酪氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置61的残基是天冬酰胺，对应于SEQ ID NO:418的位置65的残基是苏氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置99的残基是天冬氨酸，对应于SEQ ID NO:418的位置101的残基是精氨酸，对应于SEQID NO:418的位置102的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置25的残基是丙氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置30的残基是精氨酸、对应于SEQ ID NO:39的位置67的残基是丝氨酸，对应于SEQ ID NO:39的位置89的残基是谷氨酰胺，并且对应于SEQ ID NO:39的位置94的残基是丝氨酸。
98.根据条款1所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:107具有至少40％，诸如至少60％，诸如至少80％同一性的序列的HCDR1。
99.根据条款98所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:107具有至少40％，诸如至少60％，诸如至少80％同一性的序列组成的HCDR1。
100.根据条款99所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:107的HCDR1。
101.根据条款100中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:107组成的HCDR1。
102.根据条款1或98至101中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ IDNO:108具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％同一性的序列的HCDR2。
103.根据条款102所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:108具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少85％，诸如至少90％同一性的序列组成的HCDR2。
104.根据条款103所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:108的HCDR2。
105.根据条款104所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:108组成的HCDR2。
106.根据条款1或98至105中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ IDNO:109具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列的HCDR3。
107.根据条款106所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:109具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列组成的HCDR3。
108.根据条款107所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:109的HCDR3。
109.根据条款108所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:109组成的HCDR3。
110.根据条款1或98至109中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ IDNO:110具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列的LCDR1。
111.根据条款110所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:110具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％同一性的序列组成的LCDR1。
112.根据条款111所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:110的LCDR1。
113.根据条款112所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:110组成的LCDR1。
114.根据条款1或98至113中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ IDNO:111具有至少50％同一性，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列的LCDR2。
115.根据条款114所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:111具有至少50％同一性，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列组成的LCDR2。
116.根据条款115所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:111的LCDR2。
117.根据条款116所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:111组成的LCDR2。
118.根据条款1或98至117中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ IDNO:112具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列的LCDR3。
119.根据条款118所述的多肽，其中所述多肽包含由与SEQ ID NO:112具有至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％同一性的序列组成的LCDR3。
120.根据条款119所述的多肽，其中所述多肽包含含有SEQ ID NO:112的LCDR3。
121.根据条款120所述的多肽，其中所述多肽包含由SEQ ID NO:112组成的LCDR3。
122.根据条款1所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQ ID NO:113具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列的VH区。
123.根据条款122所述的多肽，其中所述VH区由与SEQ ID NO:113具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列组成。
124.根据条款123所述的多肽，其中所述VH区包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列。
125.根据条款124所述的多肽，其中所述VH区由SEQ ID NO:113的氨基酸序列组成。
126.根据条款1或122至125中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含含有与SEQID NO:114具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列的VL区。
127.根据任一条款126所述的多肽，其中所述VL区由与SEQ ID NO:114具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％序列同一性的氨基酸序列组成。
128.根据条款127所述的多肽，其中所述VL区包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。
129.根据条款128所述的多肽，其中所述VL区由SEQ ID NO:114的氨基酸序列组成。
130.根据条款1至129中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含重链恒定区。
131.根据条款130所述的多肽，其中所述重链恒定区包含与SEQ ID NO:1375具有至少50％，诸如至少70％，诸如至少90％同一性的多肽序列。
132.根据条款131所述的多肽，其中所述重链恒定区包含SEQ ID NO:1375。
133.根据条款132所述的多肽，其中所述重链恒定区由SEQ ID NO:1375组成。
134.根据条款130至133中任一项所述的多肽，其中所述重链区包含与SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60或SEQ ID NO:1220具有至少50％，诸如至少70％，诸如至少90％同一性的多肽序列。
135.根据条款134所述的多肽，其中所述重链区包含SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60或SEQ ID NO:1220。
136.根据条款135所述的多肽，其中所述重链区由SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60或SEQ ID NO:1220组成。
137.根据条款130至136中任一项所述的多肽，其中所述重链恒定区包含IgG1重链恒定区或由其组成，诸如人IgG1。
138.根据条款1至137中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含轻链恒定区。
139.根据条款138所述的多肽，其中所述轻链恒定区包含与SEQ ID NO:57具有至少50％，诸如至少70％，诸如至少90％同一性的多肽序列。
140.根据条款139所述的多肽，其中所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:57。
141.根据条款140所述的多肽，其中所述轻链恒定区由SEQ ID NO:57组成。
142.根据条款138至141中任一项所述的多肽，其中所述轻链区包含与SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:1219或SEQ ID NO:1221具有至少50％，诸如至少70％，诸如至少90％同一性的多肽序列。
143.根据条款142所述的多肽，其中所述轻链区包含SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:1219或SEQ ID NO:1221。
144.根据条款143所述的多肽，其中所述轻链区由SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:1219或SEQ ID NO:1221组成。
145.根据条款138至144中任一项所述的多肽，其中所述轻链恒定区包含κ轻链恒定区或由其组成，诸如人κ轻链。
146.根据条款1至145中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含VH和VL区，并且所述VH和VL区通过接头诸如多肽接头接合。
147.根据条款146所述的多肽，其中所述接头包含(Gly4Ser)n形式(SEQ ID NO:69)，其中n＝1至8。
148.根据条款1至147中任一项所述的多肽，其中所述LPAR1是人LPAR1。
149.根据条款1至148中任一项所述的多肽，其中所述LPAR1是天然LPAR1。
150.根据条款1至149中任一项所述的多肽，其中所述LPAR1是全长LPAR1。
151.根据条款1至148中任一项所述的多肽，其中所述LPAR1是LPAR1的片段。
152.根据条款151所述的多肽，其中LPAR1的所述片段包含LPAR1的胞外区。
153.根据条款151或152中任一项所述的多肽，其中LPAR1的所述片段为至少50个氨基酸长，诸如至少100个氨基酸长，诸如至少150个氨基酸长，诸如至少200个氨基酸长，诸如至少250个氨基酸长，诸如至少300个氨基酸长，诸如至少350个氨基酸长。
154.根据条款1至153中任一项所述的多肽，其中所述LPAR1包含与SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少99％同一性的序列。
155.根据条款154所述的多肽，其中所述LPAR1由与SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64具有至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少99％同一性的序列组成。
156.根据条款155所述的多肽，其中所述LPAR1包含SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64。
157.根据条款156所述的多肽，其中所述LPAR1由SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63或SEQ ID NO:64组成。
158.根据条款1至157中任一项所述的多肽，其中所述多肽与功能活性LPAR1结合。
159.根据条款1至158中任一项所述的多肽，其中所述LPAR1在细胞的表面上。
160.根据条款159所述的多肽，其中所述细胞是活细胞。
161.根据条款1至160中任一项所述的多肽，其中所述多肽调节LPAR1的功能。
162.根据条款161所述的多肽，其中所述多肽是LPAR1的抑制剂。
163.根据条款162所述的多肽，其中所述多肽是LPAR1的变构抑制剂。
164.根据条款161至163中任一项所述的多肽，其中所述多肽是LPAR1的反向激动剂。
165.根据条款1至164中任一项所述的多肽，其中与LPAR1的结合减少所述LPAR1的Gi/o信号传导。
166.根据条款1至165中任一项所述的多肽，其中与LPAR1的结合减少或防止LPA诱导的或组成型的cAMP产生减少。
167.根据条款166所述的多肽，其中与LPAR1的结合增加HTRF cAMP测定中的cAMP产生。
168.根据条款1至167中任一项所述的多肽，其中与LPAR1的结合减少或防止LPA诱导的钙动员。
169.根据条款168所述的多肽，其中与LPAR1的结合减少实施例1.8中详述的测定中的钙动员。
170.根据条款1至169中任一项所述的多肽，其中所述多肽在与LPAR1结合时使LPAR1的活性降低至少10％，诸如至少20％，诸如至少30％，诸如至少40％，诸如至少50％，诸如至少60％，诸如至少70％，诸如至少80％，诸如至少90％，诸如至少95％，诸如至少98％，诸如至少99％，诸如至少100％。
171.根据条款170所述的多肽，其中LPAR1的活性通过所述HTRF cAMP测定来指示。
172.根据条款1至171中任一项所述的多肽，其中所述多肽以小于150nM，诸如小于30nM，诸如小于15nM，特别是小于1.5nM的KD与LPAR1结合。
173.根据条款172所述的多肽，其中KD是使用动力学排阻测定测量的。
174.根据条款1至173中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQID NO:62)的氨基酸30-44中的至少一者的人LPAR1的表位结合。
175.根据条款174所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸35和36的人LPAR1的表位结合。
176.根据条款174或175中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸37和38的人LPAR1的表位结合。
177.根据条款174至176中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸32、39、40和41的人LPAR1的表位结合。
178.根据条款174至177中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸30-44中的至少五者的人LPAR1的表位结合。
179.根据条款178所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸30-44中的至少十者的人LPAR1的表位结合。
180.根据条款179所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸30-44的人LPAR1的表位结合。
181.根据条款1至180中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQID NO:62)的氨基酸106-120中的至少一者的人LPAR1的表位结合。
182.根据条款181所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸114的人LPAR1的表位结合。
183.根据条款181或182中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸106-120中的至少五者的人LPAR1的表位结合。
184.根据条款183所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸106-120中的至少十者的人LPAR1的表位结合。
185.根据条款184所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸106-120的人LPAR1的表位结合。
186.根据条款1至185中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQID NO:62)的氨基酸190-204中的至少一者的人LPAR1的表位结合。
187.根据条款186所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸193的人LPAR1的表位结合。
188.根据条款186或187中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸191、192、194和197的人LPAR1的表位结合。
189.根据条款186至188中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸190的人LPAR1的表位结合。
190.根据条款186至189中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸190-204中的至少五者的人LPAR1的表位结合。
191.根据条款190所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸190-204中的至少十者的人LPAR1的表位结合。
192.根据条款191所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸190-204的人LPAR1的表位结合。
193.根据条款1至192中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQID NO:62)的氨基酸280-294中的至少一者的人LPAR1的表位结合。
194.根据条款193所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸286的人LPAR1的表位结合。
195.根据条款193或194中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸285的人LPAR1的表位结合。
196.根据条款193至195中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸280-294中的至少五者的人LPAR1的表位结合。
197.根据条款196所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸280-294中的至少十者的人LPAR1的表位结合。
198.根据条款197所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸280-294的人LPAR1的表位结合。
199.根据条款1至198中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQID NO:62)的氨基酸30-44、106-120、190-204和280-294的人LPAR1的表位结合。
200.根据条款199所述的多肽，其中所述多肽与由全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的氨基酸30-44、106-120、190-204和280-294组成的人LPAR1的表位结合。
201.根据条款1至173中任一项所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQID NO:62)的残基35、36、193或286中的一者或多者的LPAR1的表位结合。
202.根据条款201所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基35的LPAR1的表位结合。
203.根据条款201所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基36的LPAR1的表位结合。
204.根据条款201所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基193的LPAR1的表位结合。
205.根据条款201所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基286的LPAR1的表位结合。
206.根据条款1至205中任一项所述的多肽，其中所述多肽与人LPAR1的构象表位结合，所述构象表位包含位于N末端加帽螺旋内的一个或多个残基和位于细胞外结构域2内的一个或多个残基。
207.根据条款206所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基36和193的LPAR1的表位结合。
208.一种多肽，其中所述多肽与根据条款1至207中任一项所述的多肽结合至相同或基本上相同的表位。
209.一种多肽，其中所述多肽与根据条款1至208中任一项所述的多肽竞争结合至LPAR1。
210.根据条款1至209中任一项所述的多肽，其中所述多肽是抗体或其片段。
211.根据条款210所述的多肽，其中所述抗体或其片段选自由scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、可变结构域(例如VH或VL)、双价抗体、微抗体或全长抗体组成的列表。
212.根据条款211所述的多肽，其中所述抗体或其片段选自由scFv、Fab或全长抗体组成的列表。
213.根据条款212所述的多肽，其中所述抗体或其片段是全长抗体或Fab。
214.根据条款213所述的多肽，其中所述全长抗体是IgG1抗体。
215.根据条款210至214中任一项所述的多肽，其中所述抗体的重链恒定区包含一个或多个突变以降低效应子功能、延长半衰期、改变ADCC或改善铰链稳定性。
216.根据条款215所述的多肽，其中所述重链恒定区包含SEQ ID NO:56、1235、1376和1377中的任一者。
217.根据条款210至214或216中任一项所述的多肽，其中所述抗体的所述重链恒定区包含以下残基中的一者或多者：
在位置250处的残基是Q，在位置252处的残基是Y，在位置252处的残基是F，在位置252处的残基是W，在位置252处的残基是T，在位置253处的残基是A，在位置254处的残基是T，在位置256处的残基是E，在位置256处的残基是S，在位置256处的残基是R，在位置256处的残基是Q，在位置256处的残基是D，在位置259处的残基是I，在位置285处的残基是D，在位置285处的残基是N，在位置286处的残基是D，在位置294处的残基是deleted，在位置307处的残基是A，在位置307处的残基是Q，在位置307处的残基是P，在位置307处的残基是R，在位置307处的残基是W，在位置308处的残基是P，在位置308处的残基是F，在位置309处的残基是P，在位置309处的残基是D，在位置309处的残基是N，在位置310处的残基是A，在位置311处的残基是S，在位置311处的残基是I，在位置311处的残基是V，在位置311处的残基是H，在位置315处的残基是D，在位置378处的残基是V，在位置380处的残基是A，在位置385处的残基是R，在位置385处的残基是D，在位置385处的残基是S，在位置385处的残基是T，在位置385处的残基是H，在位置385处的残基是K，在位置385处的残基是A，在位置385处的残基是G，在位置386处的残基是T，在位置386处的残基是P，在位置386处的残基是D，在位置386处的残基是S，在位置386处的残基是K，在位置386处的残基是R，在位置386处的残基是I，在位置386处的残基是M，在位置387处的残基是R，在位置387处的残基是P，在位置387处的残基是H，在位置387处的残基是S，在位置387处的残基是T，在位置387处的残基是A，在位置389处的残基是P，在位置389处的残基是S，在位置389处的残基是N，在位置428处的残基是L，在位置433处的残基是K，在位置433处的残基是R，在位置433处的残基是S，在位置433处的残基是I，在位置433处的残基是P，在位置433处的残基是Q，在位置434处的残基是F，在位置434处的残基是H，在位置434处的残基是Y，在位置434处的残基是A，在位置434处的残基是S，在位置435处的残基是A，在位置436处的残基是H，在位置436处的残基是I或者在位置436处的残基是V。
218.根据条款215所述的多肽，其中所述突变选自表2中列出的突变。
219.根据条款218所述的多肽，其中所述重链恒定区包含突变M252Y、S254T和T256E或M428L和N434S。
220.根据条款217至219中任一项所述的多肽，其中所述重链恒定区包含SEQ IDNO:1237至1367中的任一者。
221.根据条款220所述的多肽，其中所述重链恒定区由SEQ ID NO:1237至1367中的任一者组成。
222.根据条款210至221中任一项所述的多肽，其中所述抗体或其片段是人抗体或其片段。
223.一种构建体，所述构建体包含根据条款1至222中任一项所述的多肽。
224.根据条款223所述的构建体，其中所述构建体包含与除LPAR1以外的靶标结合的多肽。
225.一种组合物，所述组合物包含根据条款1至224中任一项所述的多肽或构建体。
226.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据条款1至225中任一项所述的多肽或构建体以及药学上可接受的稀释剂或载剂。
227.根据条款1至226中任一项所述的多肽、构建体或组合物，所述多肽、所述构建体或所述组合物用作药物。
228.根据条款1至227中任一项所述的多肽、构建体或组合物，所述多肽、所述构建体或所述组合物用于治疗炎性疾病和/或纤维化疾病。
229.根据条款228所述的多肽、构建体或组合物，所述多肽、所述构建体或所述组合物用于治疗选自由慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化、皮肤纤维化、全身性硬化症和骨关节炎组成的列表的疾病。
230.根据条款227所述的多肽、构建体或组合物，所述多肽、所述构建体或所述组合物用于治疗选自由慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症、骨关节炎、NASH、类风湿性关节炎、神经性疼痛或癌症组成的列表的疾病。
231.一种治疗有需要的受试者的炎性疾病和/或纤维化疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据条款1至226中任一项所述的多肽、构建体或组合物。
232.一种治疗有需要的受试者的选自由慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化、皮肤纤维化、全身性硬化症和骨关节炎组成的列表的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据条款1至226中任一项所述的多肽、构建体或组合物。
233.一种治疗有需要的受试者的选自由慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症、骨关节炎、NASH、类风湿性关节炎、神经性疼痛或癌症组成的列表的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据条款1至226中任一项所述的多肽、构建体或组合物。
234.根据条款1至226中任一项所述的多肽、构建体或组合物在制备用于治疗炎性疾病和/或纤维化疾病的药物中的用途。
235.根据条款1至226中任一项所述的多肽、构建体或组合物在制备用于治疗选自由慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化、皮肤纤维化、全身性硬化症和骨关节炎组成的列表的疾病的药物中的用途。
236.根据条款1至226中任一项所述的多肽、构建体或组合物在制备用于治疗选自由慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症、骨关节炎、NASH、类风湿性关节炎、神经性疼痛或癌症组成的列表的疾病的药物中的用途。
237.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码根据条款1至224中任一项所述的多肽或构建体。
238.根据条款237所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含SEQ ID NO:1368至1374中的任一者。
239.根据条款238所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸由SEQ ID NO:1368至1374中的任一者组成。
240.一种表达载体，所述包含根据条款237至239中任一项所述的多核苷酸序列。
241.一种细胞，所述细胞包含根据条款237至239中任一项所述的多核苷酸序列或根据条款240所述的表达载体。
其他
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参考文献
Binz HK,Stumpp MT,Forrer P,Amstutz P,Plückthun A.Designing repeatproteins:well-expressed,soluble and stable proteins from combinatoriallibraries of consensus ankyrin repeat proteins.Journal of molecularbiology.2003；332(2):489-503。
Booth BJ,Ramakrishnan B,Narayan K,Wollacott AM,Babcock GJ,Shriver Z,Viswanathan K.Extending human IgG half-life using structure-guideddesign.InMAbs 2018年10月3日(第10卷，第7期，第1098-1110页)。Taylor&Francis.
Borrok MJ,Mody N,Lu X,Kuhn ML,Wu H,Dall'Acqua WF,Tsui P.An“Fc-silenced”IgG1 format with extended half-life designed for improvedstability.Journal of Pharmaceutical Sciences.2017年4月1日；106(4):1008-17。
Castelino FV,Seiders J,Bain G,Brooks SF,King CD,Swaney JS,Lorrain DS,Chun J,Luster AD,Tager AM.Amelioration of dermal fibrosis by genetic deletionor pharmacologic antagonism of lysophosphatidic acid receptor 1 in a mousemodel of scleroderma.Arthritis Rheum.2011；63:1405–15。
Chrencik JE,Roth CB,Terakado M,Kurata H,Omi R,Kihara Y,Warshaviak D,Nakade S,Asmar-Rovira G,Mileni M,Mizuno H,Griffith MT,Rodgers C,Han GW,Velasquez J,Chun J,Stevens RC,Hanson MA(2015)Crystal Structure of AntagonistBound Human Lysophosphatidic Acid Receptor 1.Cell.2015 161(7):1633-43
Dall’Acqua WF,Woods RM,Ward ES,Palaszynski SR,Patel NK,Brewah YA,WuH,Kiener PA,Langermann S.Increasing the affinity of a human IgG1 for theneonatal Fc receptor:biological consequences.The Journal of Immunology.2002年11月1日；169(9):5171-80。
Dall'Acqua WF,Kiener PA,Wu H.Properties of human IgG1s engineered forenhanced binding to the neonatal Fc receptor(FcRn).Journal of BiologicalChemistry.2006年8月18日；281(33):23514-24。
Datta-Mannan A,Chow CK,Dickinson C,Driver D,Lu J,Witcher DR,Wroblewski VJ.FcRn affinity-pharmacokinetic relationship of five humanIgG4antibodies engineered for improved in vitro FcRn binding properties incynomolgus monkeys.Drug Metabolism and Disposition.2012年8月1日；40(8):1545-55。
Datta-Mannan A,Witcher DR,Tang Y,Watkins J,Jiang W,WroblewskiVJ.Humanized IgG1 variants with differential binding properties to theneonatal Fc receptor:relationship to pharmacokinetics in mice andprimates.Drug metabolism and disposition.2007年1月1日；35(1):86-94。
Datta-Mannan A,Witcher DR,Tang Y,Watkins J,Wroblewski VJ.Monoclonalantibody clearance:impact of modulating the interaction of IgG with theneonatal Fc receptor.Journal of Biological Chemistry.2007年1月19日；282(3):1709-17。
Forbes EK,Biswas S,Collins KA,Gilbert SC,Hill AV,Draper SJ.Combiningliver-and blood-stage malaria viral-vectored vaccines:investigatingmechanisms of CD8+T cell interference.The Journal of Immunology.2011年10月1日；187(7):3738-50。
Hinton PR,Johlfs MG,Xiong JM,Hanestad K,Ong KC,Bullock C,Keller S,Tang MT,Tso JY,Vásquez M,Tsurushita N.Engineered human IgG antibodies withlonger serum half-lives in primates.Journal of Biological Chemistry.2004年2月1日；279(8):6213-6。
Hinton PR,Xiong JM,Johlfs MG,Tang MT,Keller S,Tsurushita N.Anengineered human IgG1 antibody with longer serum half-life.The Journal ofImmunology.2006年1月1日；176(1):346-56。
Hollevoet K,Declerck PJ.State of play and clinical prospects ofantibody gene transfer.Journal of translational medicine.2017；15(1):1-9。
Igawa T,Maeda A,Haraya K,Tachibana T,Iwayanagi Y,Mimoto F,Higuchi Y,Ishii S,Tamba S,Hironiwa N,Nagano K.Engineered monoclonal antibody with novelantigen-sweeping activity in vivo.PloS one.2013年5月7日；8(5):e63236。
Kabat EA,Te Wu T,Perry HM,Foeller C,Gottesman KS.Sequences ofproteins of immunological interest.DIANE publishing；1991.
Ko S,Jo M,Jung ST.Recent achievements and challenges in prolongingthe serum half-lives of therapeutic IgG antibodies through Fcengineering.BioDrugs.2021年3月；35(2):147-57。
Lee CH,Kang TH,Godon O,Watanabe M,Delidakis G,Gillis CM,Sterlin D,Hardy D,CognéM,Macdonald LE,Murphy AJ.An engineered human Fc domain thatbehaves like a pH-toggle switch for ultra-lo21ng circulationpersistence.Nature communications.2019年11月6日；10(1):1-1。
Lee JH,Sarker MK,Choi H,Shin D,Kim D,Jun HS.Lysophosphatidic acidreceptor 1inhibitor,AM095,attenuates diabetic nephropathy in mice bydownregulation of TLR4/NF-κB signaling and NADPH oxidase.Biochim Biophys ActaMol Basis Dis.2019；1865(6):1332-1340
Li HY,Oh YS,Choi JW,Jung JY,Jun HS.Blocking lysophosphatidic acidreceptor 1signaling inhibits diabetic nephropathy in db/db mice.Kidneyinternational.2017；91(6):1362-73。
Liu R,Oldham RJ,Teal E,Beers SA,Cragg MS.Fc-engineering for modulatedeffector functions—improving antibodies for cancer treatment.Antibodies.2020年11月17日；9(4):64。
Mackness BC,Jaworski JA,Boudanova E,Park A,Valente D,Mauriac C,Pasquier O,Schmidt T,Kabiri M,Kandira A,K.Antibody Fc engineeringfor enhanced neonatal Fc receptor binding and prolonged circulation half-life.InMAbs 2019年10月3日(第11卷，第7期，第1276-1288页)。Taylor&Francis.
Miyabe C,Miyabe Y,Nagai J,et al.Abrogation of lysophosphatidic acidreceptor 1ameliorates murine vasculitis.Arthritis Res Ther.2019；21(1):191
Nishikawa K,Okanari E,Shinohara Y,Matsunaga H,Nishida H,Iwase N,Ushiyama S.Therapeutic efficacy of a novel LPA1 receptor antagonist,UD-009,ina bleomycin-induced pulmonary fibrosis model.European RespiratoryJournal.2016；48:PA4032。
Orosa B,García S,Martínez P,González A,Gómez-Reino JJ,CondeC.Lysophosphatidic acid receptor inhibition as a new multipronged treatmentfor rheumatoid arthritis.Annals of the rheumatic diseases.2014年1月1日；73(1):298-305。
Padlan EA.Anatomy of the antibody molecule.Molecular immunology.1994；31(3):169-217。
Palmer SM,Snyder L,Todd JL等人Randomized,Double-Blind,Placebo-Controlled,Phase 2Trial of BMS-986020,a Lysophosphatidic Acid ReceptorAntagonist for the Treatment of Idiopathic Pulmonary Fibrosis.Chest.2018；154(5):1061-1069。
Petkova SB,Akilesh S,Sproule TJ,Christianson GJ,Al Khabbaz H,BrownAC,Presta LG,Meng YG,Roopenian DC.Enhanced half-life of geneticallyengineered human IgG1 antibodies in a humanized FcRn mouse model:potentialapplication in humorally mediated autoimmune disease.Internationalimmunology.2006年12月1日；18(12):1759-69。
Pradère JP,Klein J,Grès S等人LPA1 receptor activation promotes renalinterstitial fibrosis.J Am Soc Nephrol.2007；18(12):3110-3118
Rancoule C,AttanéC,Grès S等人Lysophosphatidic acid impairs glucosehomeostasis and inhibits insulin secretion in high-fat diet obesemice.Diabetologia.2013；56(6):1394-1402
Robbie GJ,Criste R,Dall'Acqua WF,Jensen K,Patel NK,Losonsky GA,Griffin MP.A novel investigational Fc-modified humanized monoclonal antibody,motavizumab-YTE,has an extended half-life in healthy adults.Antimicrobialagents and chemotherapy.2013年12月；57(12):6147-53。
Sakai N,Chun J,Duffield JS,Wada T,Luster AD,Tager A(2013)LPAR1-induced cytoskeleton reorganization drives fibrosis through CTGF-dependentfibroblast proliferation.FASEB J.2013年5月；27(5):1830-46
Sasagawa T,Suzuki K,Shiota T,Kondo T,Okita M(1998)The significance ofplasma lysophospholipids in patients with renal failure on hemodialysis.JNutr Sci Vitaminol(Tokyo).1998年12月；44(6):809-18
Saunders KO.Conceptual approaches to modulating antibody effectorfunctions and circulation half-life.Frontiers in immunology.2019年6月7日；10:1296。
Shields RL,Namenuk AK,Hong K,Meng YG,Rae J,Briggs J,Xie D,Lai J,Stadlen A,Li B,Fox JA.High resolution mapping of the binding site on humanIgG1 for FcγRI,FcγRII,FcγRIII,and FcRn and design of IgG1 variants withimproved binding to the FcγR.Journal of Biological Chemistry.2001年3月2日；276(9):6591-604。
Swaney JS,Chapman C,Correa LD,Stebbins KJ,Bundey RA,Prodanovich PC,Fagan P,Baccei CS,Santini AM,Hutchinson JH,Seiders TJ,Parr TA,Prasit P,EvansJF,Lorrain DS(2010)A novel,orally active LPA(1)receptor antagonist inhibitslung fibrosis in the mouse bleomycin model.Br J Pharmacol.2010；160(7):1699-713
Swaney JS,Chapman C,Correa LD等人Pharmacokinetic and pharmacodynamiccharacterization of an oral lysophosphatidic acid type 1receptor-selectiveantagonist.J Pharmacol Exp Ther.2011；336(3):693-700
Tager AM,LaCamera P,Shea BS,Campanella GS,Selman M,Zhao Z,PolosukhinV,Wain J,Karimi-Shah BA,Kim ND,Hart WK,Pardo A,Blackwell TS,Xu Y,Chun J,Luster AD(2007)The lysophosphatidic acid receptor LPAR1links pulmonaryfibrosis to lung injury by mediating fibrolast recruitment and vascularleak.Nat Med.2007年1月；14(1):45-54
Tokumura A,Carbone LD,Yoshioka Y,Morishige J,Kikuchi M,Postlewaite A,Watsky MA(2009)Elevated serum levels of arachidonoyl-lysophosphatidic acidand sphingosine 1-phosphate in systemic sclerosis.Int J Med Sci.20096(4):168-76
Vaccaro C,Bawdon R,Wanjie S,Ober RJ,Ward ES.Divergent activities ofan engineered antibody in murine and human systems have implications fortherapeutic antibodies.Proceedings of the National Academy of Sciences.2006年12月5日；103(49):18709-14。
Vaccaro C,Zhou J,Ober RJ,Ward ES.Engineering the Fc region ofimmunoglobulin G to modulate in vivo antibody levels.Naturebiotechnology.2005年10月；23(10):1283-8。
Watanabe N,Ikeda H,Nakamura K,Ohkawa R,Kume Y,Tomiya T,Tejima K,Nishikawa T,Arai M,Yanase M,Aoki J.Plasma lysophosphatidic acid level andserum autotaxin activity are increased in liver injury in rats in relation toits severity.Life sciences.2007年9月1日；81(12):1009-15。
Zalevsky J,Chamberlain AK,Horton HM,Karki S,Leung IW,Sproule TJ,LazarGA,Roopenian DC,Desjarlais JR.Enhanced antibody half-life improves in vivoactivity.Nature biotechnology.2010年2月；28(2):157-9。
Zhang MZ,Wang X,Yang H等人Lysophosphatidic Acid Receptor AntagonismProtects against Diabetic Nephropathy in a Type 2Diabetic Model.J Am SocNephrol.2017；28(11):3300-3311
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WO2006019447
WO2006053301
WO2009086320
WO2018035107
Claims (35)
1.一种与LPAR1结合的多肽，其中所述多肽是LPAR1的抑制剂。
2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽与功能活性LPAR1结合。
3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述LPAR1位于细胞的表面上。
4.根据权利要求3所述的多肽，其中所述细胞是活细胞。
5.根据权利要求1至4所述的多肽，其中所述多肽是LPAR1的变构抑制剂。
6.根据权利要求1至5所述的多肽，其中所述多肽是LPAR1的反向激动剂。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，其中所述多肽在与LPAR1结合时使LPAR1的活性降低至少50％。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的多肽，其中所述多肽以小于150nM的KD与LPAR1结合。
9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述多肽以小于10nM的KD与LPAR1结合。
10.根据权利要求8或权利要求9所述的多肽，其中所述KD是使用动力学排阻测定测量的。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的多肽，其中所述多肽与人LPAR1的构象表位结合，所述构象表位包含位于N末端加帽螺旋内的一个或多个残基和位于细胞外结构域2内的一个或多个残基。
12.根据权利要求11所述的多肽，其中所述多肽与包含全长LPAR1(SEQ ID NO:62)的残基36和193的LPAR1的表位结合。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含三个重链CDR(HCDR1-3)和三个轻链CDR(LCDR1-3)，其中所述多肽包含：
(a)包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:107具有至少80％同一性的序列的HCDR1，
(b)包含与SEQ ID NO:2、8至11、100或108中任一者具有至少80％同一性的序列的HCDR2，
(c)包含与SEQ ID NO:3、12至15、101或109中任一者具有至少80％同一性的序列的HCDR3，
(d)包含与SEQ ID NO:4、16至18、103或110中任一者具有至少80％同一性的序列的LCDR1，
(e)包含与SEQ ID NO:5、19、98或111具有至少80％同一性的序列的LCDR2，以及
(f)包含与SEQ ID NO:6、20至22、或112中任一者具有至少80％同一性的序列的LCDR3。
14.根据权利要求13所述的多肽，其中所述多肽包含：
(a)包含SEQ ID NO:1、7或107中任一者的HCDR1，
(b)包含SEQ ID NO:2、8至11、100或108中任一者的HCDR2，
(b)包含SEQ ID NO:3、12至15、101或109中任一者的HCDR3，
(d)包含SEQ ID NO:4、16至18、103或110中任一者的LCDR1，
(e)包含SEQ ID NO:5、19、98或111中任一者的LCDR2，以及
(f)包含SEQ ID NO:6、20至22、或112中任一者的LCDR3。
15.根据权利要求14所述的多肽，其中所述多肽包含：
(a)包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:7中任一者的HCDR1，
(b)包含SEQ ID NO:2、8至11或100中任一者的HCDR2，
(c)包含SEQ ID NO:3、12至15或101中任一者的HCDR3，
(d)包含SEQ ID NO:4、16至18或103中任一者的LCDR1，
(e)包含SEQ ID NO:5、19或98中任一者的LCDR2，以及
(f)包含SEQ ID NO:6、或20至22中任一者的LCDR3。
16.根据权利要求13或权利要求14所述的多肽，其中所述多肽包含：
(a)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:5的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(b)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:20的LCDR3；
(c)包含SEQ ID NO:7的HCDR1、包含SEQ ID NO:9的HCDR2、包含SEQ ID NO:13的HCDR3、包含SEQ ID NO:17的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:21的LCDR3；
(d)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:10的HCDR2、包含SEQ ID NO:14的HCDR3、包含SEQ ID NO:18的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(e)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:22的LCDR3；
(f)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(g)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:11的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:20的LCDR3；
(h)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:11的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；(i)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；(j)包含SEQID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；(k)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:15的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(l)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:15的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:5的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(m)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(n)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:100的HCDR2、包含SEQ ID NO:101的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(o)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:100的HCDR2、包含SEQ ID NO:101的HCDR3、包含SEQ ID NO:103的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
或
(p)包含SEQ ID NO:107的HCDR1、包含SEQ ID NO:108的HCDR2、包含SEQ ID NO:109的HCDR3、包含SEQ ID NO:110的LCDR1、包含SEQ ID NO:111的LCDR2和包含SEQ ID NO:112的LCDR3。
17.根据权利要求16所述的多肽，其中所述多肽包含：
(a)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:5的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(b)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:20的LCDR3；
(c)包含SEQ ID NO:7的HCDR1、包含SEQ ID NO:9的HCDR2、包含SEQ ID NO:13的HCDR3、包含SEQ ID NO:17的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:21的LCDR3；
(d)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:10的HCDR2、包含SEQ ID NO:14的HCDR3、包含SEQ ID NO:18的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(e)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:22的LCDR3；
(f)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:8的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:16的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(g)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:11的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:20的LCDR3；
(h)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:11的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；(i)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:12的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；(j)包含SEQID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；(k)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:15的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:19的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(l)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:15的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:5的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(m)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:2的HCDR2、包含SEQ ID NO:3的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；
(n)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:100的HCDR2、包含SEQ ID NO:101的HCDR3、包含SEQ ID NO:4的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3；或
(o)包含SEQ ID NO:1的HCDR1、包含SEQ ID NO:100的HCDR2、包含SEQ ID NO:101的HCDR3、包含SEQ ID NO:103的LCDR1、包含SEQ ID NO:98的LCDR2和包含SEQ ID NO:6的LCDR3。
18.根据权利要求16所述的多肽，其中所述多肽包含：
(a)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:3组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:5组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(b)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:20组成的LCDR3；
(c)由SEQ ID NO:7组成的HCDR1、由SEQ ID NO:9组成的HCDR2、由SEQ ID NO:13组成的HCDR3、由SEQ ID NO:17组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:21组成的LCDR3；
(d)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:10组成的HCDR2、由SEQ ID NO:14组成的HCDR3、由SEQ ID NO:18组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(e)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:22组成的LCDR3；
(f)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:8组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:16组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(g)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:11组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:20组成的LCDR3；
(h)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:11组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(i)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:12组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
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(k)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:15组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:19组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
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(m)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:2组成的HCDR2、由SEQ ID NO:3组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(n)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:100组成的HCDR2、由SEQ ID NO:101组成的HCDR3、由SEQ ID NO:4组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；
(o)由SEQ ID NO:1组成的HCDR1、由SEQ ID NO:100组成的HCDR2、由SEQ ID NO:101组成的HCDR3、由SEQ ID NO:103组成的LCDR1、由SEQ ID NO:98组成的LCDR2和由SEQ ID NO:6组成的LCDR3；或
(p)由SEQ ID NO:107组成的HCDR1、由SEQ ID NO:108组成的HCDR2、由SEQ ID NO:109组成的HCDR3、由SEQ ID NO:110组成的LCDR1、由SEQ ID NO:111组成的LCDR2和由SEQ IDNO:112组成的LCDR3。
19.根据权利要求1至12中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含三个重链CDR(HCDR1-HCDR3)和三个轻链CDR(LCDR1-LCDR3)
(其中所述CDR由非Kabat编号系统定义)，其中HCDR1包含X1X2X3X4X5X6(SEQ ID NO:72)(例如由其组成)，HCDR2包含X7IX8X9X10X11X12X13X14X15YX16-X17X18FX19G(SEQ ID NO:76)(例如由其组成)，HCDR3包含DX20X21X22X23X24X25X26X27X28X29DY(SEQ ID NO:80)(例如由其组成)，LCDR1包含X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40(SEQ ID NO:84)(例如由其组成)，LCDR2包含X41AX42X43X44X45X46(SEQ ID NO:88)(例如由其组成)并且LCDR3包含X47X48X49X50X51X52PLX53(SEQ ID NO:92)(例如由其组成)，其中：
X1的氨基酸选自由S、Y、T、G、R、E、K、D和N组成的组；
X2的氨基酸选自由K、R、L、T、G、V、A、S、F、W、Q、M、Y、I、E、H、N、D和P组成的组；
X3的氨基酸选自由R、K、H、T、S、F、G、V、A、L、N、Q、E、M、P、W和I组成的组；
X4的氨基酸选自由A和G组成的组；
X5的氨基酸选自由M和I组成的组；
X6的氨基酸选自由S、E、G、D、L、T、N、Q、I、V、A、K、M、H和Y组成的组；
X7的氨基酸选自由E组成的组；
X8的氨基酸选自由L、Q和D组成的组；
X9的氨基酸选自由P、A、G、F、S、T和W组成的组；
X10的氨基酸选自由R组成的组；
X11的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X12的氨基酸选自由G、R、S、Y、A、T、D、E和W组成的组；
X13的氨基酸选自由Y组成的组；
X14的氨基酸选自由T组成的组；
X15的氨基酸选自由N、H和S组成的组；
X16的氨基酸选自由R、N、F、K、Q、V、D、E、Y、G、M、P、W、H、L、I、S、T和A组成的组；
X17的氨基酸选自由Q、A、I、S、P、T、N、V、G、H、L、M、W、K、R、F、D、Y和E组成的组；
X18的氨基酸选自由G、D、E、H、L、V、Y、A、F、I、K、Q、W、R、M、P、S和N组成的组；
X19的氨基酸选自由T、K、Q、E、R和M组成的组；
X20的氨基酸选自由R、F、K、I、A、L、V、W、Y、M、P、Q、G和S组成的组；
X21的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X22的氨基酸选自由K、R、A、H、S、Q、T、P、M、W、Y、G、L、F、V、E和N组成的组；
X23的氨基酸不存在或选自由K和R组成的组
X24的氨基酸选自由R、Y、A、H、P、L、K、G、Q、N、I、F、W、S、T、M、E、V和D组成的组；
X25的氨基酸选自由A、Q、T、S、G、V、R、I、H、K、P、L、M和F组成的组；
X26的氨基酸选自由R和S组成的组；
X27的氨基酸选自由Y、H、Q和A组成的组；
X28的氨基酸选自由A、T、S、D和E组成的组；
X29的氨基酸选自由M和L组成的组；
X30的氨基酸选自由Q、K、R、S和T组成的组；
X31的氨基酸选自由A、S和T组成的组；
X32的氨基酸选自由S、T和D组成的组；
X33的氨基酸选自由Q、G、R、K、L、M、P、Y、S、A、N、H、W、D、E、F、T和I组成的组；
X34的氨基酸选自由S、G、H、N、T、Y和D组成的组；
X35的氨基酸选自由V、A和I组成的组；
X36的氨基酸选自由R、K、S、G和A组成的组；
X37的氨基酸选自由Y、F、L、Q、S、H、T、G、I、M、V、W、K、N、R、D和P组成的组；
X38的氨基酸选自由N、A、G、H、Q、S、Y、F和W组成的组；
X39的氨基酸选自由V、I、M和L组成的组；
X40的氨基酸选自由A、G和D组成的组；
X41的氨基酸选自由Y、H、R、T、A、D、K、L、N、Q、M、W、E、F和S组成的组；
X42的氨基酸选自由S、K、M、Q、R、V、Y、G、E、D、T、A、F、I、N、W、H和L组成的组；
X43的氨基酸选自由N、K、R、Q、T、Y、A、S、D和E组成的组；
X44的氨基酸选自由R、L、K和A组成的组；
X45的氨基酸选自由Y、I、K、M、Q、R、V、A、N、S、W、H、L、T、P、D、F、G和E组成的组；
X46的氨基酸选自由T、A、D、E、Q、R、S、H、K、P、L、F、G、I、M、V、W、Y和N组成的组；
X47的氨基酸选自由Q、S和L组成的组；
X48的氨基酸选自由H、N、S、T、A、Q和V组成的组；
X49的氨基酸选自由H、A、D和F组成的组；
X50的氨基酸选自由Y和L组成的组；
X51的氨基酸选自由S、K、V、D、N、R、H、T、A、G、Q、I、M、F、W、Y和L组成的组；
X52的氨基酸选自由S、A、T、G、V、W和Y组成的组；并且
X53的氨基酸选自由T和Y组成的组。
20.根据权利要求19所述的多肽，其中X21和/或X23不存在。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含四个重链框架区(HFR1-HFR4)和四个轻链框架区(LFR1-LFR4)，其中所述多肽包含：
(a)包含与SEQ ID NO:40具有至少60％同一性的序列或由所述序列组成的HFR1；
(b)包含与SEQ ID NO:41具有至少60％同一性的序列或由所述序列组成的HFR2；
(c)包含与SEQ ID NO:42具有至少60％同一性的序列或由所述序列组成的HFR3；
(d)包含与SEQ ID NO:43具有至少60％同一性的序列或由所述序列组成的HFR4；
(e)包含与SEQ ID NO:44具有至少60％同一性的序列或由所述序列组成的LFR1；
(f)包含与SEQ ID NO:45具有至少60％同一性的序列或由所述序列组成的LFR2；
(g)包含与SEQ ID NO:46具有至少60％同一性的序列或由所述序列组成的LFR3；以及
(h)包含与SEQ ID NO:47具有至少60％同一性的序列或由所述序列组成的LFR4。
22.根据权利要求21所述的多肽，其中所述多肽包含：
(a)包含与SEQ ID NO:40具有至少80％同一性的序列或由所述序列组成的HFR1；
(b)包含与SEQ ID NO:41具有至少80％同一性的序列或由所述序列组成的HFR2；
(c)包含与SEQ ID NO:42具有至少80％同一性的序列或由所述序列组成的HFR3；
(d)包含与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性的序列或由所述序列组成的HFR4；
(e)包含与SEQ ID NO:44具有至少80％同一性的序列或由所述序列组成的LFR1；
(f)包含与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性的序列或由所述序列组成的LFR2；
(g)包含与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性的序列或由所述序列组成的LFR3；以及
(h)包含与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性的序列或由所述序列组成的LFR4。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含VH区和VL区，其中所述多肽包含
(a)包含与SEQ ID NO:23、25、27、29、33、35、36、37、96、102或113中任一者具有至少70％同一性的序列或由所述序列组成的VH区；以及
(b)包含与SEQ ID NO:24、26、28、30、31、32、34、38、
39、97、99、104或114中任一者具有至少70％同一性的序列或由所述序列组成的VL区。
24.根据权利要求23所述的多肽，其中所述多肽包含
(a)包含SEQ ID NO:23的VH区和包含SEQ ID NO:24的VL区；
(b)包含SEQ ID NO:25的VH区和包含SEQ ID NO:26的VL区；
(c)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:28的VL区；
(d)包含SEQ ID NO:29的VH区和包含SEQ ID NO:30的VL区；
(e)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:31的VL区；
(f)包含SEQ ID NO:27的VH区和包含SEQ ID NO:32的VL区；
(g)包含SEQ ID NO:33的VH区和包含SEQ ID NO:34的VL区；
(h)包含SEQ ID NO:33的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(i)包含SEQ ID NO:35的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(j)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(k)包含SEQ ID NO:37的VH区和包含SEQ ID NO:39的VL区；
(l)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:38的VL区；
(m)包含SEQ ID NO:37的VH区和包含SEQ ID NO:38的VL区；
(n)包含SEQ ID NO:96的VH区和包含SEQ ID NO:97的VL区；
(o)包含SEQ ID NO:36的VH区和包含SEQ ID NO:99的VL区；
(p)包含SEQ ID NO:102的VH区和包含SEQ ID NO:99的VL区；
(q)包含SEQ ID NO:102的VH区和包含SEQ ID NO:104的VL区；
或
(s)包含SEQ ID NO:113的VH区和包含SEQ ID NO:114的VL区。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含VH和VL区，并且所述VH和VL区通过接头诸如多肽接头接合。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的多肽，其中所述多肽是抗体或其片段。
27.根据权利要求26所述的多肽，其中所述抗体或其片段选自由scFv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、可变结构域(例如VH或VL)、双价抗体、微抗体或全长抗体组成的列表。
28.根据权利要求26或27所述的多肽，其中所述抗体的Fc区已经突变以降低效应子功能、延长半衰期、改变ADCC或改善铰链稳定性。
29.一种构建体，所述构建体包含根据权利要求1至28中任一项所述的多肽。
30.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至29中任一项所述的多肽或构建体以及药学上可接受的稀释剂或载剂。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的多肽、构建体或组合物，所述多肽、所述构建体或所述组合物用作药物。
32.根据权利要求1至30中任一项所述的多肽、构建体或组合物，所述多肽、所述构建体或所述组合物用于治疗慢性肾病、肾纤维化、腹膜纤维化、肝纤维化、肺纤维化(例如特发性肺纤维化)、皮肤纤维化、全身性硬化症、骨关节炎、NASH、类风湿性关节炎、神经性疼痛或癌症。
33.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码根据权利要求1至29中任一项所述的多肽或构建体。
34.一种表达载体，所述表达载体包含根据权利要求33所述的多核苷酸序列。
35.一种细胞，所述细胞包含根据权利要求33所述的多核苷酸序列或根据权利要求34所述的表达载体。
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