CN118141702A - 一种具有协同增效作用的多肽组合物及其应用 - Google Patents
一种具有协同增效作用的多肽组合物及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有协同增效作用的多肽组合物，其包括以下质量浓度的组成：0.0001％～5％棕榈酰五肽‑4，0.0001％～5％脱羧肌肽，0.0001％～5％乙酰基八肽‑3，0.0001％～5％六肽‑11。本发明将各种多肽成分合理组合、配合共用，能够清除氧自由基，发挥抗氧化的作用，亦能够抑制弹性蛋白酶的活性，促进胶原蛋白生成和表达，增加皮肤的弹性和紧致度，并且克服了不同活性多肽之间存在的拮抗作用，并使其发挥了协同增效的效果。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有协同增效作用的多肽组合物及其应用。
背景技术
衰老是机体在发育成熟后，随着年龄的增长，受遗传、内外界环境等多方面因素的影响发生的一种不可逆转的机体退化的过程。其中，人体衰老主要体现在人体皮肤的衰老。随着时间推移，人体新陈代谢减缓，细胞的自我更新和修复能力减弱，胶原蛋白和弹性蛋白等基质流失，人体内衰老机制被激活，皮肤随即进入老化阶段。同时，外界的一些环境因素，如粉尘污染、经历长时间的暴晒或受紫外线辐射等，也间接加速了皮肤的老化。人体皮肤衰老明显的特征是皮肤松弛、面部产生皱纹、色素沉着、皮肤粗糙等问题，主要原因在于内源性和外源性因素的影响导致的真皮层中成纤维细胞数量减少，合成胶原蛋白和弹性蛋白的能力下降，基质金属蛋白酶分泌增加，加速了胶原蛋白降解，造成皮肤胶原蛋白流失，产生过量的氧自由基以及细胞间物质更新能力减弱。因此，提高皮肤的胶原蛋白含量、清除过量的氧自由基等可作为延缓皮肤衰老的一个重要方法。
近年来，随着抗衰老行业的稳步发展、抗衰老知识的普及、抗衰老理念的深度渗透，我国抗衰老行业正处于高速发展阶段。现阶段越来越多消费者意识到抗衰老产品不仅适用于解决已经出现的衰老问题，还适用于对衰老的预防，故抗衰老产品消费群体持续扩张。与此同时，为了延缓皮肤衰老，越来越多的抗衰老产品应运而生，但其往往只是针对某一方面的效果，作用靶点单一，如缺少清除自由基和抗氧化、无法促进胶原蛋白生成或无法抑制弹性蛋白酶等，无法提供全面的抗衰老效果，从而导致产品效果并不理想。
CN115607499A公开了一种用于抗皱紧致的人参灵芝多肽组合物，包括以下质量份数的组分：人参提取物0.001-0.005份；中国灵芝提取物0.001-0.004份；天门冬提取物0.005-0.02份；燕窝提取物0.001-0.004份；乙酰基六肽-8 0.01-0.04份；二肽-2 0.0005-0.0010份；寡肽-10.0002-0.0005份；棕榈酰四肽-7 0.0003-0.0005份；防腐剂0.007-0.009份；保湿剂1.192-1.5953份；溶剂1.721-2.182份。然而，天然活性物质其结构在热、空气、光或化学环境的影响下极易改变，因而失去其原有功能。
CN114010526A公开一种抗衰多肽组合物及其应用，该组合物包含六肽-11与三氟乙酰三肽-2，两者的浓度比为(3～5):(5～7)。然而该发明的复配方式针对靶点单一，仅通过降低氧化应激即ROS水平减缓衰老。
因此，突破现有的多肽组合的组合机制，开发一种配合性强、作用靶点互补、能够全面抗衰老的多肽组合物，从根源上延缓皮肤衰老具有极为重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种具有协同增效作用的多肽组合物及其应用。
本发明所采取的技术方案是：
第一个方面，本发明提供一种具有协同增效作用的多肽组合物，所述多肽组合物包括以下质量浓度的组成：0.0001％～5％棕榈酰五肽-4，0.0001％～5％脱羧肌肽，0.0001％～5％乙酰基八肽-3，0.0001％～5％六肽-11。
在一些实例中，所述多肽组合物包括以下质量浓度的组成：0.0001％～0.002％棕榈酰五肽-4，0.0001％～0.002％脱羧肌肽，0.0001％～0.002％乙酰基八肽-3，0.0001％～0.002％六肽-11。
在一些实例中，所述多肽组合物包括以下质量浓度的组成：0.0005％棕榈酰五肽-4，0.0005％脱羧肌肽，0.0005％乙酰基八肽-3，0.0005％六肽-11。
在一些实例中，所述多肽组合物中还含有溶剂组分；以质量浓度计，所述多肽组合物中含有95～99.998％溶剂组分。
第二个方面，本发明提供一种抗衰老护肤品，所述护肤品中含有第一个方面所述的多肽组合物。
在一些实例中，所述多肽组合物在护肤品中的添加量为0.0004～5wt％。
在一些实例中，所述护肤品中还含有溶剂、油脂、螯合剂、乳化剂、保湿剂、增稠剂、增溶剂、润肤剂、流变调节剂、抗氧化剂、美白剂、调理剂、舒缓剂以及天然香料/色素。
在一些实例中，所述护肤品的剂型包括水剂、乳液剂、膏霜剂、凝胶剂、油剂、粉剂、片剂、泥剂、气雾剂、贴剂、膜剂或纳米制剂。
第三个方面，本发明第一个方面所述的多肽组合物在制备抗衰老试剂中的应用。
在一些实例中，所述抗衰老试剂中含有质量百分比为0.0004～5wt％的多肽组合物。
本发明的有益效果是：
1、本发明将各种多肽成分合理组合、配合共用，克服了不同活性多肽之间存在的拮抗作用，并使其发挥了协同增效的效果，从而实现多靶点全面延缓皮肤衰老的功效。所述的多肽组合物安全性高、稳定性好，可以应用于化妆品领域，满足消费者日益增长的护理皮肤的需求。
2、本发明所述的多肽组合物能够清除氧自由基，发挥抗氧化的作用，亦能够抑制弹性蛋白酶的活性，促进胶原蛋白生成和表达，增加皮肤的弹性和紧致度，抗光老化，改善皮肤表面的皱纹，从而延缓皮肤衰老，可以从根本上全面解决皮肤衰老问题。
附图说明
图1是各实例对胶原蛋白I含量的影响结果图。
图2是各实例对弹性蛋白酶抑制率的影响结果图。
图3是各实例对HSF细胞ROS的影响结果图。
具体实施方式
下文的公开提供了许多不同的实施方式或例子用来实现本发明的不同方案。
本发明实施例的组合物中各多肽的浓度如下：
| 原料名称 | 脱羧肌肽 | 乙酰基八肽-3 | 棕榈酰五肽-4 | 六肽-11 |
| 实例1(组合物1) | 20ppm | / | / | / |
| 实例2(组合物2) | / | 20ppm | / | / |
| 实例3(组合物3) | / | / | 20ppm | / |
| 实例4(组合物4) | 10ppm | / | / | 10ppm |
| 实例5(组合物5) | / | 10ppm | / | 10ppm |
| 实例6(组合物6) | / | / | 10ppm | 10ppm |
| 实例7(组合物7) | 10ppm | 10ppm | / | / |
| 实例8(组合物8) | 10ppm | / | 10ppm | / |
| 实例9(组合物9) | / | 10ppm | 10ppm | / |
| 实例10(组合物10) | 5ppm | 5ppm | / | 10ppm |
| 实例11(组合物11) | 5ppm | / | 5ppm | 10ppm |
| 实例12(组合物12) | / | 5ppm | 5ppm | 10ppm |
| 实例13(组合物13) | 5ppm | 5ppm | 10ppm | / |
| 实例14(组合物14) | 5ppm | 5ppm | 5ppm | 5ppm |
注：“/”表示该组合物中不含该原料。
性能检测实验
1.主要试剂：
磷酸盐缓冲液(PBS)，噻唑蓝(MTT)，二甲基亚砜(DMSO)，高糖培养基1×DMEM胎牛血清(FBS)，胶原蛋白I型ELISA检测试剂盒，活性氧(ROS)试剂盒，弹性蛋白酶，人皮肤成纤维细胞系(HSF)。
2.主要仪器：
酶标仪、水浴锅、荧光显微镜。
3.检测实验方法：
胶原蛋白I型检测步骤如下：
1)取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，计数1～4×105个/mL，制成细胞悬液。
2)将孔内的完全培养基吸出，加入PBS/溶剂，暴露于UVB灯下照射15min(辐照强度：80-90uW/cm3，辐照剂量：80mJ/cm2)；空白对照组加入完全培养基，不用照射。
3)照射15min后，将PBS溶液吸出，实验组加入完全培养基，设置样品浓度，按照稀释倍数稀释好样品浓度，加入受试药物；对照组加入PBS或者溶剂，培养48h。
4)收集细胞，离心取上清，加入RIPA裂解液，用涡旋仪震匀3次(30s/次，间隔3min)，离心12000rpm*10min。吸取上清液，按ELISA试剂盒说明书进行检测。
弹性蛋白酶抑制检测步骤如下：
1)弹性蛋白酶检测：取PBS缓冲液(pH8.0)与不同质量浓度的样品溶液混合后加入弹性蛋白酶溶液(2mg/mL)，在25℃下孵育15min，随后加入AAAPAN溶液孵育15min。
2)吸光度测定：在410nm处测定吸光度值。空白用50mmol/LPBS缓冲液(pH8.0)。
细胞ROS检测检测步骤如下：
1)细胞铺板：取处于对数生长期状态细胞，用0.25％胰蛋白酶消化，接种于6孔板上，加入完全培养基，置37℃、5％ CO2培养箱中培养24h。
2)造模给药：用真空泵将原培养基溶液吸出，设置组别：实验组加入PBS，暴露于UV灯下照射15min(辐照剂量：80mJ/cm2)；空白对照组不用照射。将PBS溶液吸出，实验组加入完全培养基和稀释好样品，放入培养箱内培养24h，对照组加入PBS或者其它溶剂。
3)ROS染色：按说明书操作。
4)荧光拍照：用PBS洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。置于荧光显微镜下观察。
4.统计分析：
所有实验按照平行设计原则，至少重复三次，实验数据以均数标准差(Mean±SD)表示，使用T检验数据分析。与control相比，P<0.05，有显著性；P<0.01，有明显显著性；P<0.001，有非常明显显著性。
检测结果
1.胶原蛋白I型检测试验
I型胶原蛋白是人体中最丰富的弹性胶原蛋白，它形成大的嗜酸性纤维，称为胶原纤维，I型胶原具有良好的力学性能，其网状架构为皮肤提供了保护和弹性。胶原蛋白I检测，以UV对照组为参照比值，各样品由高到低设定3个给药浓度。
图1为不同产品对胶原蛋白I含量影响检测结果。结果显示，在相同的浓度下，使用脱羧肌肽、乙酰基八肽-3和棕榈酰五肽-4中单独的多肽或任意两种多肽均不能提高细胞中的胶原蛋白I含量，也因此单独的多肽或任意两种多肽的联合使用并不能有效对抗皮肤衰老。然而，当实例11、12、13使用脱羧肌肽、乙酰基八肽-3和六肽-11中的任意两种多肽，再进一步与棕榈酰五肽-4联用，此种多肽组合能显著地提高细胞中的胶原蛋白I含量，表现出优异的抗光老化、抗衰抗皱功效，这说明棕榈酰五肽-4与其中两种多肽发生了协同增效的作用。当实例14使用的多肽种类进一步增加至四种，此时多肽组合物促胶原蛋白生成的能力得到了进一步提升。由此可知，经紫外辐射，细胞中胶原蛋白I的含量降低，而20ppm棕榈酰五肽-4在单独使用时未能提高光老化细胞中的胶原蛋白含量，胶原蛋白含量甚至进一步降低，但其却出乎意料地具有激发其他多肽促胶原蛋白生成能力的作用，能作为协同其他多肽共同作用的中间调剂。
2.弹性蛋白酶抑制测试
弹性蛋白酶是一种具有降解胶原蛋白、弹性蛋白等多种蛋白质的酶，而皮肤老化时弹性蛋白降解，是皮肤皱纹和皮肤松弛的重要原因。因此，抑制弹性蛋白酶可以起到抗衰老抗皱作用。
如图2结果显示，，测试样品对弹性蛋白酶的抑制率分别为组合物1(60.00％)、组合物2(60.00％)、组合物3(68.57％)、组合物4(55.71％)、组合物5(61.43％)、组合物6(50.00％)、组合物7(52.86％)、组合物8(65.71％)、组合物9(51.43％)、组合物10(65.71％)、组合物11(64.29％)、组合物12(84.29％)、组合物13(75.71％)、组合物14(87.14％)，其中，组合物14的弹性蛋白酶抑制率最高。
根据组合物1～9的效果不难得知，相比于单独使用一种多肽，当两种多肽联合使用时其对弹性蛋白酶的抑制率降低，说明多肽之间存在拮抗作用，简单地将多肽组合进行使用并不能获得预期效果；甚至当三种多肽联合使用的时候，部分组合对弹性蛋白酶的抑制率也并未高于单独的一种多肽。通过组合物12和组合物13可知，当乙酰基八肽-3和棕榈酰五肽-4联合使用时，可与脱羧肌肽或六肽-11发挥协同增效的作用，从而提高对弹性蛋白酶的抑制效果。当脱羧肌肽、乙酰基八肽-3、棕榈酰五肽-4和六肽-11这四种多肽联合使用，此时对弹性蛋白酶的抑制作用进一步提高，从而发挥优异的增加皮肤弹性、紧致皮肤、抗衰抗皱的功效。这说明乙酰基八肽-3和棕榈酰五肽-4联合使用时出乎意料地具有激发其他多肽抑制弹性蛋白酶能力的效果，能作为协同其他多肽共同作用的中间调剂。
3.细胞ROS测试
细胞内ROS是引发细胞氧化损伤的直接原因之一，是细胞凋亡的一个重要标志，ROS水平与胶原纤维含量呈负相关，降低细胞内ROS的含量是抗衰、抗氧化的有效方式和重要途径。含有抗氧化活性成分的护肤品可以在一定程度上帮助皮肤抵御氧化损伤。因此本实验在紫外辐射模型上，本实验通过ROS生成量来证明产品的抗氧化作用。
如图3所示，与正常对照组相比，经UV辐射后，模型组的单位细胞ROS含量显著提高(如图3中浅色部分所示)。ROS水平与胶原纤维含量呈负相关，ROS含量增加将会引发细胞氧化损伤，导致衰老。与模型组相比，本发明的组合物均可以降低单位细胞ROS水平，表现出显著的ROS抑制作用，具有优异的抗氧化能力。
由此可知，本发明将脱羧肌肽、乙酰基八肽-3、棕榈酰五肽-4和六肽-11组合，配合共用，得到的多肽组合物能够清除氧自由基，发挥抗氧化的作用，从而延缓皮肤衰老，可以在化妆品领域应用于抗衰老的产品中。
以上是对本发明所作的进一步详细说明，不可视为对本发明的具体实施的局限。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的简单推演或替换，都在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种具有协同增效作用的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物包括以下质量浓度的组成：0.0001％～5％棕榈酰五肽-4，0.0001％～5％脱羧肌肽，0.0001％～5％乙酰基八肽-3，0.0001％～5％六肽-11。
2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物包括以下质量浓度的组成：0.0001％～0.002％棕榈酰五肽-4，0.0001％～0.002％脱羧肌肽，0.0001％～0.002％乙酰基八肽-3，0.0001％～0.002％六肽-11。
3.根据权利要求2所述的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物包括以下质量浓度的组成：0.0005％棕榈酰五肽-4，0.0005％脱羧肌肽，0.0005％乙酰基八肽-3，0.0005％六肽-11。
4.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合物中还含有溶剂组分；
以质量浓度计，所述多肽组合物中含有95～99.998％溶剂组分。
5.一种抗衰老护肤品，其特征在于，所述护肤品中含有如权利要求1～4任一项所述的多肽组合物。
6.根据权利要求5所述的抗衰老护肤品，其特征在于，所述多肽组合物在护肤品中的添加量为0.0004～5wt％。
7.根据权利要求5所述的抗衰老护肤品，其特征在于，所述护肤品中还含有溶剂、油脂、螯合剂、乳化剂、保湿剂、增稠剂、增溶剂、润肤剂、流变调节剂、抗氧化剂、美白剂、调理剂、舒缓剂以及天然香料/色素。
8.根据权利要求5所述的抗衰老护肤品，其特征在于，所述护肤品的剂型包括水剂、乳液剂、膏霜剂、凝胶剂、油剂、粉剂、片剂、泥剂、气雾剂、贴剂、膜剂或纳米制剂。
9.权利要求1～4任一项所述的多肽组合物在制备抗衰老试剂中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗衰老试剂中含有质量百分比为0.0004～5wt％的多肽组合物。
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