CN118126846A - 一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及菌株培养技术领域，具体公开了一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法和应用，所述植物内生真菌菌株的培养方法为链格孢菌BB‑1的培养方法，链格孢菌BB‑1的保藏编号为：CCTCCNO:M20232213；具体培养方法包括以下步骤：将链格孢菌BB‑1先于营养培养基中培养活化，培养时间为5d，培养温度为28℃，得到活化链格孢菌BB‑1。本发明拟金茅内生真菌菌株的培养中采用营养培养基先培养活化，优化菌株的活性度，再通过纳米二氧化硅改性剂协配，通过高比表面积的纳米二氧化硅承载菌株，从而将其作用到液体基内培养，增强菌株的培养效果，改进菌株的抗菌和土壤重金属的协调处理效率。
Description
技术领域
本发明涉及拟金茅培养技术领域，具体涉及一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法和应用。
背景技术
拟金茅是禾本科拟金茅属优良的纤维植物，是造纸，人造棉及人造丝的好原料。拟金茅是云南金沙江干热河谷地区的优势草种，对当地的生态修复发挥着重要作用。对于拟金茅的链格孢菌BB-1内生真菌对土壤具有修复作用，但现有技术培养的菌株对重金属土壤中修复效果一般，很难实现重金属铬的高效修复，以及重金属修复和抑菌效果很难协调改进，限制了菌株的培养效率，基于此，本发明对其进一步的改进处理。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明的目的是提供一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明解决技术问题采用如下技术方案：
本发明提供了一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，所述植物内生真菌菌株的培养方法为链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的培养方法，链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的保藏编号为：CCTCCNO:M20232213；具体培养方法包括以下步骤：
步骤一：将链格孢菌BB-1先于营养培养基中培养活化，培养时间为5d，培养温度为28℃，得到活化链格孢菌BB-1；
步骤二：按照重量份称取原料：
将磷酸铵镁2-4份、磷酸氢钠0.2-0.3份、泛酸3-5份和蒙脱土液6-10份搅拌混合充分，得到液体基；
步骤三：将活化链格孢菌BB-1、纳米二氧化硅改性剂按照重量比5:1混合，然后送入到液体基内培养2-3d，培养温度为30℃；
步骤四：将步骤三的产物进行抑菌、土壤重金属测试，其中抑菌处理方法为：
将步骤三的产物、马铃薯环腐病菌按照重量比1:5混合测试抗菌性，先测试未经处理土壤中马铃薯环腐病菌含量、土壤重金属Cr含量测试含量值；然后测试经过步骤三的产物、马铃薯环腐病菌按照重量比1:5混合处理后的土壤马铃薯环腐病菌含量、土壤重金属Cr含量测试含量值，测试仪器为重金属测试仪、马铃薯环腐病菌浓度测试仪；通过测试公式测试具体的抗菌性、重金属处理效率；
土壤铬重金属去除率（%）=（处理前的土壤铬重金属含量-处理后的土壤铬重金属含量/处理前的土壤铬重金属含量）×100%；马铃薯环腐病菌抑菌率（%）=（处理前的马铃薯环腐病菌含量-处理后的马铃薯环腐病菌含量/处理前的马铃薯环腐病菌含量）×100%；
土壤测试，将步骤三的产物、测试土壤按照重量比1:5混合测试土壤重金属，测试结束，即可。
优选地，所述营养培养基包括葡萄糖10-15份、琼脂5-10份、氯化钙2-5份、蒸馏水10-15份、氯化钠1-2份。
优选地，所述蒙脱土液的制备方法为：
S01：将2-4份羧甲基纤维素钠、1-3份尿素和1-2份硬脂酸加入到6-10份去离子水中混合充分，得到第一改性液；
S02：将蒙脱土先按照重量比1:5加入到第一改性液中第一搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第一改性的蒙脱土；
S03：将1-3份十二烷基苯磺酸钠溶液加入到4-7份木质素磺酸钠溶液中，随后再加入2-5份硅烷偶联剂，搅拌充分，得到第二改性液；
S04：将第一改性的蒙脱土、第二改性液按照重量比2:4混合第二搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第二改性的蒙脱土；
S05：第二改性的蒙脱土、质量分数5%的壳聚糖溶液按照重量比2:5混合充分，得到蒙脱土液。
优选地，所述第一搅拌改性的转速为450-550r/min，搅拌时间为20-30min；所述第二搅拌改性处理的转速为350-400r/min，搅拌时间为10-15min。
优选地，所述十二烷基苯磺酸钠溶液的质量分数为4-8%；所述木质素磺酸钠溶液的质量分数为10-15%。
优选地，所述硅烷偶联剂为硅烷偶联剂KH560。
优选地，所述纳米二氧化硅改性剂的制备方法为：
将纳米二氧化硅加入到足量的盐酸溶液中混合均匀，然后水洗、干燥，将干燥的纳米二氧化硅、改性液按照重量比2:5搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到纳米二氧化硅改性剂；
改性液的制备方法为：将3-5份羟基乙酸和4-7份海藻酸钠、2-5份草酸钠和10-15份去离子水混合搅拌充分，最后水洗、干燥，得到改性液。
优选地，所述盐酸溶液的质量分数为2-5%。
优选地，所述搅拌改性处理的搅拌温度为45-50℃，搅拌时间为1-2h，搅拌转速为450-500r/min。
本发明还提供了一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法在土壤铬重金属去除和马铃薯环腐病菌抑菌中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明拟金茅内生真菌菌株的培养中采用营养培养基先培养活化，优化菌株的活性度，再通过纳米二氧化硅改性剂协配，通过高比表面积的纳米二氧化硅承载菌株，从而将其作用到液体基内培养，增强菌株的培养效果，改进菌株的抗菌和土壤重金属的协调处理效率，采用纳米二氧化硅改性剂、蒙脱土液共同协调增效，产品性能效果进一步的增强，纳米二氧化硅改性剂采用的纳米二氧化硅经过改性液改性，改性液中的羟基乙酸和海藻酸钠、草酸钠相互调配，原料之间的互相组合，优化纳米二氧化硅的分散度和活性效能，改进菌株在液体基内的培养效率，而蒙脱土液采用蒙脱土经过第一改性、第二改性联合处理，优化蒙脱土对承载的纳米二氧化硅聚集，从而便于菌株在液体基内更好的生长，进而提高菌株的性能效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本实施例的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，所述植物内生真菌菌株的培养方法为链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的培养方法，链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的保藏编号为：CCTCCNO:M20232213，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，建议的分类命名：链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1），该培养物已于2023年11月13日由中国典型培养物保藏中心收到，并登记入册；该培养物的存活性本保藏中心于2023年11月20日检测完毕，结果为存活；具体培养方法包括以下步骤：
步骤一：将链格孢菌BB-1先于营养培养基中培养活化，培养时间为5d，培养温度为28℃，得到活化链格孢菌BB-1；
步骤二：按照重量份称取原料：
将磷酸铵镁2-4份、磷酸氢钠0.2-0.3份、泛酸3-5份和蒙脱土液6-10份搅拌混合充分，得到液体基；
步骤三：将活化链格孢菌BB-1、纳米二氧化硅改性剂按照重量比5:1混合，然后送入到液体基内培养2-3d，培养温度为30℃；
步骤四：将步骤三的产物进行抑菌、土壤重金属测试，其中抑菌处理方法为：
将步骤三的产物、马铃薯环腐病菌按照重量比1:5混合测试抗菌性，土壤测试，将步骤三的产物、测试土壤按照重量比1:5混合测试土壤重金属，测试结束，即可。
优选地，所述营养培养基包括葡萄糖10-15份、琼脂5-10份、氯化钙2-5份、蒸馏水10-15份、氯化钠1-2份。
本实施例的蒙脱土液的制备方法为：
S01：将2-4份羧甲基纤维素钠、1-3份尿素和1-2份硬脂酸加入到6-10份去离子水中混合充分，得到第一改性液；
S02：将蒙脱土先按照重量比1:5加入到第一改性液中第一搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第一改性的蒙脱土；
S03：将1-3份十二烷基苯磺酸钠溶液加入到4-7份木质素磺酸钠溶液中，随后再加入2-5份硅烷偶联剂，搅拌充分，得到第二改性液；
S04：将第一改性的蒙脱土、第二改性液按照重量比2:4混合第二搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第二改性的蒙脱土；
S05：第二改性的蒙脱土、质量分数5%的壳聚糖溶液按照重量比2:5混合充分，得到蒙脱土液。
本实施例的第一搅拌改性的转速为450-550r/min，搅拌时间为20-30min；所述第二搅拌改性处理的转速为350-400r/min，搅拌时间为10-15min。
本实施例的十二烷基苯磺酸钠溶液的质量分数为4-8%；所述木质素磺酸钠溶液的质量分数为10-15%。
本实施例的硅烷偶联剂为硅烷偶联剂KH560。
本实施例的纳米二氧化硅改性剂的制备方法为：
将纳米二氧化硅加入到足量的盐酸溶液中混合均匀，然后水洗、干燥，将干燥的纳米二氧化硅、改性液按照重量比2:5搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到纳米二氧化硅改性剂；
改性液的制备方法为：将3-5份羟基乙酸和4-7份海藻酸钠、2-5份草酸钠和10-15份去离子水混合搅拌充分，最后水洗、干燥，得到改性液。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为2-5%。
本实施例的搅拌改性处理的搅拌温度为45-50℃，搅拌时间为1-2h，搅拌转速为450-500r/min。
本实施例的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法在土壤铬重金属去除和马铃薯环腐病菌抑菌中的应用。
实施例
本实施例的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，所述植物内生真菌菌株的培养方法为链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的培养方法，链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的保藏编号为：CCTCCNO:M20232213，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，建议的分类命名：链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1），该培养物已于2023年11月13日由中国典型培养物保藏中心收到，并登记入册；该培养物的存活性本保藏中心于2023年11月20日检测完毕，结果为存活；具体培养方法包括以下步骤：
步骤一：将链格孢菌BB-1先于营养培养基中培养活化，培养时间为5d，培养温度为28℃，得到活化链格孢菌BB-1；
步骤二：按照重量份称取原料：
将磷酸铵镁2份、磷酸氢钠0.2份、泛酸3份和蒙脱土液6份搅拌混合充分，得到液体基；
步骤三：将活化链格孢菌BB-1、纳米二氧化硅改性剂按照重量比5:1混合，然后送入到液体基内培养2d，培养温度为30℃；
步骤四：将步骤三的产物进行抑菌、土壤重金属测试，其中抑菌处理方法为：
将步骤三的产物、马铃薯环腐病菌按照重量比1:5混合测试抗菌性，土壤测试，将步骤三的产物、测试土壤按照重量比1:5混合测试土壤重金属，测试结束，即可。
营养培养基包括葡萄糖10份、琼脂5份、氯化钙2份、蒸馏水10份、氯化钠1份。
本实施例的蒙脱土液的制备方法为：
S01：将2份羧甲基纤维素钠、1份尿素和1份硬脂酸加入到6份去离子水中混合充分，得到第一改性液；
S02：将蒙脱土先按照重量比1:5加入到第一改性液中第一搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第一改性的蒙脱土；
S03：将1份十二烷基苯磺酸钠溶液加入到4份木质素磺酸钠溶液中，随后再加入2份硅烷偶联剂，搅拌充分，得到第二改性液；
S04：将第一改性的蒙脱土、第二改性液按照重量比2:4混合第二搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第二改性的蒙脱土；
S05：第二改性的蒙脱土、质量分数5%的壳聚糖溶液按照重量比2:5混合充分，得到蒙脱土液。
本实施例的第一搅拌改性的转速为450r/min，搅拌时间为20min；所述第二搅拌改性处理的转速为350r/min，搅拌时间为10min。
本实施例的十二烷基苯磺酸钠溶液的质量分数为4%；所述木质素磺酸钠溶液的质量分数为10%。
本实施例的硅烷偶联剂为硅烷偶联剂KH560。
本实施例的纳米二氧化硅改性剂的制备方法为：
将纳米二氧化硅加入到足量的盐酸溶液中混合均匀，然后水洗、干燥，将干燥的纳米二氧化硅、改性液按照重量比2:5搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到纳米二氧化硅改性剂；
改性液的制备方法为：将3份羟基乙酸和4份海藻酸钠、2份草酸钠和10份去离子水混合搅拌充分，最后水洗、干燥，得到改性液。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为2%。
本实施例的搅拌改性处理的搅拌温度为45℃，搅拌时间为1h，搅拌转速为450r/min。
本实施例的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法在土壤铬重金属去除和马铃薯环腐病菌抑菌中的应用。
实施例
本实施例的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，所述植物内生真菌菌株的培养方法为链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的培养方法，链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的保藏编号为：CCTCCNO:M20232213，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，建议的分类命名：链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1），该培养物已于2023年11月13日由中国典型培养物保藏中心收到，并登记入册；该培养物的存活性本保藏中心于2023年11月20日检测完毕，结果为存活；具体培养方法包括以下步骤：
步骤一：将链格孢菌BB-1先于营养培养基中培养活化，培养时间为5d，培养温度为28℃，得到活化链格孢菌BB-1；
步骤二：按照重量份称取原料：
将磷酸铵镁4份、磷酸氢钠0.3份、泛酸5份和蒙脱土液10份搅拌混合充分，得到液体基；
步骤三：将活化链格孢菌BB-1、纳米二氧化硅改性剂按照重量比5:1混合，然后送入到液体基内培养3d，培养温度为30℃；
步骤四：将步骤三的产物进行抑菌、土壤重金属测试，其中抑菌处理方法为：
将步骤三的产物、马铃薯环腐病菌按照重量比1:5混合测试抗菌性，土壤测试，将步骤三的产物、测试土壤按照重量比1:5混合测试土壤重金属，测试结束，即可。
优选地，所述营养培养基包括葡萄糖15份、琼脂10份、氯化钙5份、蒸馏水15份、氯化钠2份。
本实施例的蒙脱土液的制备方法为：
S01：将4份羧甲基纤维素钠、3份尿素和2份硬脂酸加入到10份去离子水中混合充分，得到第一改性液；
S02：将蒙脱土先按照重量比1:5加入到第一改性液中第一搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第一改性的蒙脱土；
S03：将3份十二烷基苯磺酸钠溶液加入到7份木质素磺酸钠溶液中，随后再加入5份硅烷偶联剂，搅拌充分，得到第二改性液；
S04：将第一改性的蒙脱土、第二改性液按照重量比2:4混合第二搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第二改性的蒙脱土；
S05：第二改性的蒙脱土、质量分数5%的壳聚糖溶液按照重量比2:5混合充分，得到蒙脱土液。
本实施例的第一搅拌改性的转速为550r/min，搅拌时间为30min；所述第二搅拌改性处理的转速为400r/min，搅拌时间为15min。
本实施例的十二烷基苯磺酸钠溶液的质量分数为8%；所述木质素磺酸钠溶液的质量分数为15%。
本实施例的硅烷偶联剂为硅烷偶联剂KH560。
本实施例的纳米二氧化硅改性剂的制备方法为：
将纳米二氧化硅加入到足量的盐酸溶液中混合均匀，然后水洗、干燥，将干燥的纳米二氧化硅、改性液按照重量比2:5搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到纳米二氧化硅改性剂；
改性液的制备方法为：将5份羟基乙酸和7份海藻酸钠、5份草酸钠和15份去离子水混合搅拌充分，最后水洗、干燥，得到改性液。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为5%。
本实施例的搅拌改性处理的搅拌温度为50℃，搅拌时间为2h，搅拌转速为500r/min。
本实施例的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法在土壤铬重金属去除和马铃薯环腐病菌抑菌中的应用。
实施例
本实施例的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，所述植物内生真菌菌株的培养方法为链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的培养方法，链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的保藏编号为：CCTCCNO:M20232213，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，建议的分类命名：链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1），该培养物已于2023年11月13日由中国典型培养物保藏中心收到，并登记入册；该培养物的存活性本保藏中心于2023年11月20日检测完毕，结果为存活；具体培养方法包括以下步骤：
步骤一：将链格孢菌BB-1先于营养培养基中培养活化，培养时间为5d，培养温度为28℃，得到活化链格孢菌BB-1；
步骤二：按照重量份称取原料：
将磷酸铵镁3份、磷酸氢钠0.25份、泛酸4份和蒙脱土液8份搅拌混合充分，得到液体基；
步骤三：将活化链格孢菌BB-1、纳米二氧化硅改性剂按照重量比5:1混合，然后送入到液体基内培养2.5d，培养温度为30℃；
步骤四：将步骤三的产物进行抑菌、土壤重金属测试，其中抑菌处理方法为：
将步骤三的产物、马铃薯环腐病菌按照重量比1:5混合测试抗菌性，土壤测试，将步骤三的产物、测试土壤按照重量比1:5混合测试土壤重金属，测试结束，即可。
优选地，所述营养培养基包括葡萄糖12.5份、琼脂7.5份、氯化钙3.5份、蒸馏水12.5份、氯化钠1.5份。
本实施例的蒙脱土液的制备方法为：
S01：将3份羧甲基纤维素钠、2份尿素和1.5份硬脂酸加入到8份去离子水中混合充分，得到第一改性液；
S02：将蒙脱土先按照重量比1:5加入到第一改性液中第一搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第一改性的蒙脱土；
S03：将2份十二烷基苯磺酸钠溶液加入到5.5份木质素磺酸钠溶液中，随后再加入3.5份硅烷偶联剂，搅拌充分，得到第二改性液；
S04：将第一改性的蒙脱土、第二改性液按照重量比2:4混合第二搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第二改性的蒙脱土；
S05：第二改性的蒙脱土、质量分数5%的壳聚糖溶液按照重量比2:5混合充分，得到蒙脱土液。
本实施例的第一搅拌改性的转速为500r/min，搅拌时间为25min；所述第二搅拌改性处理的转速为370r/min，搅拌时间为12.5min。
本实施例的十二烷基苯磺酸钠溶液的质量分数为6%；所述木质素磺酸钠溶液的质量分数为12.5%。
本实施例的硅烷偶联剂为硅烷偶联剂KH560。
本实施例的纳米二氧化硅改性剂的制备方法为：
将纳米二氧化硅加入到足量的盐酸溶液中混合均匀，然后水洗、干燥，将干燥的纳米二氧化硅、改性液按照重量比2:5搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到纳米二氧化硅改性剂；
改性液的制备方法为：将4份羟基乙酸和5.5份海藻酸钠、3.5份草酸钠和12.5份去离子水混合搅拌充分，最后水洗、干燥，得到改性液。
本实施例的盐酸溶液的质量分数为3.5%。
本实施例的搅拌改性处理的搅拌温度为47℃，搅拌时间为1.5h，搅拌转速为470r/min。
本实施例的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法在土壤铬重金属去除和马铃薯环腐病菌抑菌中的应用。
对比例1.
与实施例3不同是未加入蒙脱土液。
对比例2.
与实施例3不同是蒙脱土液中未采用第一改性液处理。
对比例3.
与实施例3不同是蒙脱土液中未采用第二改性液处理。
对比例4.
与实施例3不同是第一改性液的制备方法不同：未加入尿素和硬脂酸。
对比例5.
与实施例3不同是未添加纳米二氧化硅改性剂。
对比例6.
与实施例3不同是纳米二氧化硅改性剂制备中未采用改性液处理。
对比例7.
与实施例3不同是改性液中未加入羟基乙酸和海藻酸钠。
首先测试未经处理土壤铬重金属、马铃薯环腐病菌含量；然后经过测试产品处理后，再测试处理后的土壤铬重金属、马铃薯环腐病菌含量；
土壤铬重金属去除率（%）=（处理前的土壤铬重金属含量-处理后的土壤铬重金属含量/处理前的土壤铬重金属含量）×100%；
马铃薯环腐病菌抑菌率（%）=（处理前的马铃薯环腐病菌含量-处理后的马铃薯环腐病菌含量/处理前的马铃薯环腐病菌含量）×100%；
将实施例1-3及对比例1-7产品性能测试；
| 土壤铬重金属去除率（%） | 马铃薯环腐病菌抑菌率（%） | |
| 实施例1 | 99.7 | 99.8 |
| 实施例2 | 99.8 | 99.8 |
| 实施例3 | 99.9 | 99.9 |
| 对比例1 | 95.2 | 95.8 |
| 对比例2 | 96.8 | 97.1 |
| 对比例3 | 97.3 | 97.9 |
| 对比例4 | 98.4 | 98.8 |
| 对比例5 | 96.1 | 97.5 |
| 对比例6 | 97.8 | 98.3 |
| 对比例7 | 98.5 | 99.1 |
从实施例1-3及对比例1-7中可看出，采用实施例1-3的产品，土壤铬重金属去除率、马铃薯环腐病菌抑菌率可实现协调式改进；
通过对比例1-7中发现，未加入蒙脱土液、未添加纳米二氧化硅改性剂，产品的性能均有明显变差趋势，采用二者协配，产品的土壤铬重金属去除率、马铃薯环腐病菌抑菌率可实现协调式改进；
蒙脱土液中未采用第一改性液处理、蒙脱土液中未采用第二改性液处理、第一改性液的制备方法不同：未加入尿素和硬脂酸、纳米二氧化硅改性剂制备中未采用改性液处理、改性液中未加入羟基乙酸和海藻酸钠，产品的性能均有变差趋势，采用本发明的方法制备的第一改性液、第二改性液，产品的性能效果最为显著，以及采用本发明的方法制备的改性液产品的性能效果最为显著，采用其他方法代替均不如本发明的效果明显。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (10)
1.一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述植物内生真菌菌株的培养方法为链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的培养方法，链格孢菌BB-1（Alternaria alternata BB-1）的保藏编号为：CCTCCNO:M20232213；具体培养方法包括以下步骤：
步骤一：将链格孢菌BB-1先于营养培养基中培养活化，培养时间为5d，培养温度为28℃，得到活化链格孢菌BB-1；
步骤二：按照重量份称取原料：
将磷酸铵镁2-4份、磷酸氢钠0.2-0.3份、泛酸3-5份和蒙脱土液6-10份搅拌混合充分，得到液体基；
步骤三：将活化链格孢菌BB-1、纳米二氧化硅改性剂按照重量比5:1混合，然后送入到液体基内培养2-3d，培养温度为30℃；
步骤四：将步骤三的产物进行抑菌、土壤重金属测试，其中抑菌处理方法为：
将步骤三的产物、马铃薯环腐病菌按照重量比1:5混合测试抗菌性，土壤测试，将步骤三的产物、测试土壤按照重量比1:5混合测试土壤重金属，测试结束，即可。
2.根据权利要求1所述的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述营养培养基包括葡萄糖10-15份、琼脂5-10份、氯化钙2-5份、蒸馏水10-15份、氯化钠1-2份。
3.根据权利要求1所述的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述蒙脱土液的制备方法为：
S01：将2-4份羧甲基纤维素钠、1-3份尿素和1-2份硬脂酸加入到6-10份去离子水中混合充分，得到第一改性液；
S02：将蒙脱土先按照重量比1:5加入到第一改性液中第一搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第一改性的蒙脱土；
S03：将1-3份十二烷基苯磺酸钠溶液加入到4-7份木质素磺酸钠溶液中，随后再加入2-5份硅烷偶联剂，搅拌充分，得到第二改性液；
S04：将第一改性的蒙脱土、第二改性液按照重量比2:4混合第二搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到第二改性的蒙脱土；
S05：第二改性的蒙脱土、质量分数5%的壳聚糖溶液按照重量比2:5混合充分，得到蒙脱土液。
4.根据权利要求3所述的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述第一搅拌改性的转速为450-550r/min，搅拌时间为20-30min；所述第二搅拌改性处理的转速为350-400r/min，搅拌时间为10-15min。
5.根据权利要求3所述的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述十二烷基苯磺酸钠溶液的质量分数为4-8%；所述木质素磺酸钠溶液的质量分数为10-15%。
6.根据权利要求3所述的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述硅烷偶联剂为硅烷偶联剂KH560。
7.根据权利要求3所述的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述纳米二氧化硅改性剂的制备方法为：
将纳米二氧化硅加入到足量的盐酸溶液中混合均匀，然后水洗、干燥，将干燥的纳米二氧化硅、改性液按照重量比2:5搅拌改性处理，搅拌结束，水洗、干燥，得到纳米二氧化硅改性剂；
改性液的制备方法为：将3-5份羟基乙酸和4-7份海藻酸钠、2-5份草酸钠和10-15份去离子水混合搅拌充分，最后水洗、干燥，得到改性液。
8.根据权利要求7所述的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述盐酸溶液的质量分数为2-5%。
9.根据权利要求7所述的一种拟金茅内生真菌菌株的培养方法，其特征在于，所述搅拌改性处理的搅拌温度为45-50℃，搅拌时间为1-2h，搅拌转速为450-500r/min。
10.一种如权利要求1-9任一项所述拟金茅内生真菌菌株的培养方法在土壤铬重金属去除和马铃薯环腐病菌抑菌中的应用。
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