CN118119643A - 靶向bcma的组合物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含BCMA抗原结合分子的BCMA结合物(例如，抗体)和嵌合抗原受体(CAR)构建体。所述BCMA结合物与BCMA特异性结合。本发明的BCMA CAR还包含铰链区(例如，CD28铰链)、跨膜结构域和一个或多个细胞内NK细胞信号传导结构域。表达BCMA CAR的NK细胞在杀死癌细胞方面具有增加的功效。本文所提供的还包括BCMA结合物和BCMA CAR的治疗用途。

Description

靶向BCMA的组合物及其使用方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2021年10月20日提交的美国临时申请第63/257,822号；和2021年10月20日提交的美国临时申请第63/257,846号的优先权和权益，所述临时申请中每一者的内容通过引用整体并入本文。

序列表的交叉引用

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背景技术

B细胞成熟抗原(也称为BCMA、CD269、TNFRSF17)是一种非糖基化I型跨膜蛋白，是肿瘤坏死受体超家族的成员，优先在分化的浆细胞中表达。BCMA已显示在各种癌症中过表达，特别是各种B细胞相关癌症，包括淋巴瘤、多发性骨髓瘤等癌症。靶向BCMA已成为治疗BCMA阳性癌症(包括淋巴瘤、多发性骨髓瘤和其他癌症)的有前途的方法。用于靶向BCMA的最常见治疗方式包括BCMA特异性抗体(例如，双特异性抗体构建体，包括(双特异性T细胞接合剂)免疫肿瘤疗法)、抗体-药物偶联物(ADC)和嵌合抗原受体(CAR)修饰的免疫细胞疗法。

嵌合抗原受体(CAR)技术被设计为不仅减轻一般的免疫抑制性肿瘤微环境，而且还用于将免疫效应细胞复位向到细胞表面肿瘤特异性抗原。CAR是人工产生的，用于在免疫效应细胞上作为跨膜受体表达，以鉴定肿瘤细胞表面抗原。

自然杀伤(NK)细胞是CAR工程化的有吸引力的竞争者，因为它们介导对肿瘤细胞的有效细胞毒性，并且与T细胞不同，在同种异体环境中缺乏引起移植物抗宿主病(GVHD)的潜力。因此，NK细胞可作为现成的细胞治疗产品用于直接临床应用。CAR-NK细胞也保留了经由其天然受体识别和靶向肿瘤细胞的内在能力，因此原则上，经由下调CAR靶抗原使疾病逃逸的可能性小于在CAR-T细胞的情况下所观察到的。

本公开提供了靶向CAR-NK细胞的新颖抗BCMA抗体和B细胞成熟抗原(BCMA)，其能够经由优化的CAR构型靶向癌细胞上的BCMA抗原。

发明内容

本发明提供了新颖的人类抗BCMA抗体、其抗原结合片段，并且尤其提供了包含新的BCMA结合物的新颖BCMACAR构建体和表达BCMA-CAR的NK细胞。本发明还提供了用于治疗与BCMA异常相关的癌症的新的BCMA结合物、BCMACAR和/或表达BCMA-CAR的NK细胞的使用方法。本发明涉及抗体和其抗原结合片段，以及编码人类抗BCMA抗体的多核苷酸，以及包含本发明的抗BCMA抗体或其抗原结合片段的特异性结合BCMA的嵌合抗原受体(CAR)。特别是，本发明是基于以下观察结果：与表达除了具有不同(例如，IgG1)铰链结构域外等效的CAR构建体的CAR-NK细胞相比，靶向包含含CAR的CD28铰链结构域的BCMA的CAR-NK细胞在小鼠多发性骨髓瘤模型中的肿瘤抑制方面出乎意料地更有效。因此，本发明提供了改进的BCMA-CAR构建体，用于在NK细胞中信号传导，从而对BCMA阳性肿瘤产生更有效的免疫疗法。

在本发明的一个方面，本文所提供的包括人类抗BCMA抗体和其抗原结合片段；此类人类抗BCMA抗体和其片段以高特异性和亲和力结合人类BCMA。

在一些实施方案中，本发明的抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含三个重链互补区(HCDR)，其中HCDR1包含SYAIH(SEQ ID NO:2)，HCDR2包含VTWHDGS NKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)，并且HCDR3包含AKFGEPQYF QH(SEQ ID NO:4)。

在一些实施方案中，本发明的抗BCMA抗体或其抗原结合片段以大于0并且小于150nM的K_D结合BCMA。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段以大于1pM且小于10nM的K_D结合BCMA。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段以0.05μg/ml至0.5μg/ml之间的EC50结合人类细胞上呈递的BCMA。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个轻链可变区(LCDR)，其中LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个轻链可变区(LCDR)，其中LCDR1包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且LCDR3包含QQLNSYPWT(SEQ ID NO:14)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个轻链可变区(LCDR)，其中LCDR1包含RASQGINNYLA(SEQ ID NO:6)，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且LCDR3包含QQLKSYPFT(SEQ ID NO:8)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个轻链可变区(LCDR)，其中LCDR1包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且LCDR3包含QQLNSYPFT(SEQ ID NO:12)。

在一些实施方案中，BCMA抗体或其抗原结合片段是包含IgG恒定区的抗体。

在一个实施方案中，本公开涵盖抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含三个LCDR，其中，

LCDR1包含RASQGIX₁X₂YLA(SEQ ID NO:79)，

LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且/或

LCDR3包含QQLX₃SYPX₄T(SEQ ID NO:80)；

其中，X₁选自S或N；

X₂选自S或N；

X₃选自N或K；并且/或

X₄选自F或W。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含可变重链区(VH)，所述VH包含SEQ ID NO:1。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH与SEQID NO:1至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一。在一些实施方案中，BCMA抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO:9。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH与SEQ ID NO:9至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含可变轻链区(VL)，所述VL包含SEQ ID NO:5、10或13。在一些实施方案中，BCMA抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL与SEQ ID NO:5、10或13至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一。

在一些实施方案中，BCMA抗原结合片段选自由以下组成的组：IgA抗体、IgG抗体、IgE抗体、IgM抗体、双特异性或多特异性抗体、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd'片段、Fd片段、分离的C DR或其组；单链可变片段(scFv)、多肽-Fc融合体、单结构域抗体、骆驼抗体；掩蔽抗体、小模块免疫药物(Small Modular ImmunoPhar maceutical,“SMIPsTM”)、单链、串联双价抗体、VHH、抗运载蛋白、纳米抗体、微小抗体、BiTE、锚蛋白重复蛋白、DARPIN、Avimer、DART、TCR样抗体、Adnectin、Affilin、Trans-body；Affibody、Tri merX、MicroProtein、Fynomer、Centyrin；和KALBITOR。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含接头序列。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:15-18的接头。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或抗原结合片段包含信号肽。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含SEQ IDNO:85-87的scFv。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含scFv，所述scFv与SEQ ID No:85-87至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一。

在一些实施方案中，本公开涵盖药物组合物，其包含如本文所述的抗BCMA抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载剂。作为非限制性实例，抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含：

重链可变区，所述重链可变区包含三个重链互补区(HCDR)，其中HCDR1包含SYAIH(SEQ ID NO:2)，HCDR2包含VTWHDGS NKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)，并且HCDR3包含AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)。在其他实例中，抗BCMA抗体或其片段可包含轻链可变互补决定区(LCDR)2，所述LCDR2包含AASTLQS(SE Q ID NO:7)。

作为非限制性实例，本发明的抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包括HCDR1，所述HCDR1包含SYAIH(SEQ ID NO:2)，HCDR2，所述HCDR2包含VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)，和HCDR3，所述HCDR3包含AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)；和三个LCDR，其包括LCDR1，所述LCDR1包含RASQGINNYLA(SEQ ID NO:6)，LCDR2，所述LCDR2包含A ASTLQS(SEQID NO:7)，和LCDR3，所述LCDR3包含QQLKS YPFT(SEQ ID NO:8)。

在一个实施方案中，本发明的抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包括HCDR1，所述HCDR1包含SYAIH(SEQ ID NO:2)，HCDR2，所述HCDR2包含VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)，和HCDR3，所述HCDR3包含AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)；和三个LCDR，其包括LCDR1，所述LCDR1包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)，LCDR2，所述LCDR2包含AASTLQS(SEQID NO:7)，和LCDR3，所述LCDR3包含QQLNSYPWT(SEQ ID NO:14)。

在另一个实施方案中，本发明的抗BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个HCDR，其包括HCDR1，所述HCDR1包含SYAIH(SEQ ID NO:2)，HCDR2，所述HCDR2包含VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)，和HCDR3，所述HCDR3包含AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)；和三个LCDR，其包括LCDR1，所述LCDR1包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)，LCDR2，所述LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，和LCDR3，所述LCDR3包含QQLNSYPFT(SEQ ID NO:12)。

在本发明的另一方面，所提供的包括嵌合抗原受体(CAR)，其包含细胞外BCMA结合结构域、CD28铰链区、跨膜结构域和一个或多个细胞内细胞信号传导结构域，其中BCMA结合结构域包含如本文所述的抗BCMA抗体或其抗原结合片段。因此，如本文所述的BCMA结合CAR识别并特异性结合BCMA抗原。

在一些实施方案中，本发明提供了编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，所述CAR包含BCMA抗原结合结构域、CD28铰链区、跨膜结构域和一个或多个细胞内细胞信号传导结构域。在一些实施方案中，多核苷酸可包含至少一种修饰。

在一些实施方案中，多核苷酸包含编码BCMA抗原结合结构域的序列，所述BCMA抗原结合结构域包含：(a)重链可变区互补决定区(HCDR)1，所述HCDR1包含SEQ ID NO:2；(b)HCDR2，所述HCDR2包含SEQ ID NO:3；和(c)HCDR3，所述HCDR3包含SEQ ID NO:4。

在一些实施方案中，多核苷酸包含编码BCMA抗原结合结构域的序列，所述BCMA抗原结合结构域包含：(a)轻链可变区互补决定区(LCDR)1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:6；(b)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:7；和(c)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:8。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码BCMA抗原结合结构域的序列，所述BCMA抗原结合结构域包含：(a)LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:11；(b)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:7；和(c)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:12。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码BCMA抗原结合结构域的序列，所述BCMA抗原结合结构域包含：(a)LCDR1，所述LCDR1包含SEQ ID NO:11；(b)LCDR2，所述LCDR2包含SEQ ID NO:7；和(c)LCDR3，所述LCDR3包含SEQ ID NO:14。

在一些实施方案中，多核苷酸编码BCMA抗原结合结构域，所述BCMA抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:1或9至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸编码BCMA抗原结合结构域，所述BCMA抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:5、10或13中的任一者至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗原结合片段选自由以下组成的组：Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段或单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，抗原结合结构域包含scFv。在一些实施方案中，scFv的VH和VL通过接头连接。在一些实施方案中，接头包含约50个氨基酸至约2个氨基酸。在一些实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:15-18至少75％、至少85％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，多核苷酸编码BCMA结合CAR，其以小于约1×10^-6M、小于约1×10^-7M、小于约1×10^-8M或小于约1×10^-9M的K_D结合BCMA。

在一些实施方案中，多核苷酸包含编码跨膜结构域的序列。本发明的BCMA结合CAR的跨膜结构域是CD28、CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD 16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD154、ICOS/CD278、GITR/CD357、NKG2D或其任何组合。在一些实施方案中，跨膜结构域是CD28跨膜结构域。

在一些实施方案中，多核苷酸包含编码铰链区的序列。本发明的BCMA结合CAR的铰链结构域是CD28铰链区。作为一个非限制性实例，铰链区包含与SEQ ID NO:36至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，多核苷酸包含编码共刺激区的序列。在一些实施方案中，共刺激区是以下的信号传导区：CD28、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序化死亡-1(PD-1)、可诱导T细胞共刺激因子(ICOS)、CD8γ、CD3δ、CD3ε、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF1.4)、NKG2C、Igα(CD79a)、Fcγ受体、MHC I类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整合素、信号传导淋巴细胞性活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD 19、CD4、CD8α、CD8β、11.2β、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、ITGAE、CD103、ITGAL、LFA-1、ITGAM、ITGAX、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244，2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGLl、CDIOO(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A，Lyl08)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD 162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD 19a、特异性结合CD83的配体或其任何组合。在一些实施方案中，共刺激区包含与SEQ ID NO:28至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，多核苷酸包含编码活化结构域的序列。作为一个非限制性实例，活化结构域是CD3ζ结构域。在一些实施方案中，活化结构域包含与SEQ ID NO:30至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约7、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，多核苷酸还包含编码自杀基因的序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含选自以下的自杀基因：利妥昔单抗、iCaspase 9、单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)和更昔洛韦、阿昔洛韦或FIAU；氧化还原酶和放线菌酮；胞嘧啶脱氨酶和5-氟胞嘧啶；胸苷激酶胸苷酸激酶(Tdk::Tmk)。在一些实施方案中，其中自杀基因是iCaspase9。

在一些实施方案中，多核苷酸还包含编码细胞因子的序列。在一些实施方案中，细胞因子选自IL-7、IL-12、IL-15、IL-18或IL-21。在一些实施方案中，细胞因子是IL-15。在一些实施方案中，IL-15的氨基酸序列包含SEQ ID NO:23。

在一些实施方案中，如本文所述的BCMA结合CAR包含与SEQ ID NO:19-21至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开包含载体，所述载体包含如先前实施方案中任一项所述的多核苷酸。

在一些实施方案中，载体是反转录病毒载体、DNA载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或其任何组合。

在一些实施方案中，本公开提供了表达如本文所述的BCMA结合CAR的细胞。在一些实施方案中，CAR表达细胞包含编码如本文所述的BCMA结合CAR的多核苷酸。在其他实施方案中，CAR表达细胞包含如本文所述的载体。

在一些实施方案中，细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，免疫细胞是NK细胞、T细胞或肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、iNKT细胞、B细胞、巨噬细胞、树突细胞或其混合物。在一些实施方案中，本公开涉及免疫细胞群体，其包含如上述实施方案中任一项所述的免疫细胞。

在一些实施方案中，本公开涉及组合物，其包含如上述实施方案中任一项所述的多核苷酸、如上述实施方案中任一项所述的载体、如上述实施方案中任一项所述的CAR或如上述实施方案中任一项所述的细胞。

作为一个非限制性实例，本公开涉及NK细胞，其包含编码CAR的多核苷酸，所述CAR包含：(a)特异性结合BCMA的抗原结合分子，其包含重链可变区(VH)，所述VH与SEQ ID NO:1或9至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一；和轻链可变区(VL)，所述VL与SEQ ID NO:5、10或13至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一；(b)CD28铰链区；(c)跨膜结构域；和(d)一个或多个细胞内细胞信号传导结构域。

在一些方面，本公开涵盖编码BCMA结合CAR的多核苷酸，其包含：(a)CD28铰链，(b)跨膜结构域，(c)共刺激结构域，和(d)IL-15细胞因子。

在一个方面，本公开涵盖免疫细胞，其具有编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，其中CAR包含：(a)抗原结合结构域；(b)CD28铰链；和(c)CD28跨膜结构域。在一些实施方案中，免疫细胞包含与肿瘤细胞上表达的BCMA结合的CAR。

在本发明的另一方面，所提供的包括使用如本文所述的抗BCMA抗体、其抗原结合片段、BCMA结合CAR、载体、细胞和组合物的方法。

在一些实施方案中，本公开提供了使用抗BCMA抗体、其抗原结合片段、BCMA结合CAR、多核苷酸、载体和/或表达BCMA结合CAR的细胞治疗个体的癌症的方法；所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的本公开中讨论的抗体、CAR、多核苷酸、载体、细胞和组合物中的任一者的步骤。

在一些实施方案中，本方法还包括向个体提供有效量的额外疗法的步骤。

在一些实施方案中，额外疗法包括手术、放射线、基因疗法、免疫疗法或激素疗法。

在一些实施方案中，通过输注、注射、静脉内、动脉内、腹膜内、气管内、瘤内、肌内、内视镜下、病灶内、颅内、经皮、皮下、局部、通过灌注、在肿瘤微环境中或其组合向个体施用含有多核苷酸的细胞或含有载体的细胞。

在一些实施方案中，癌症是免疫细胞恶性肿瘤，例如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症选自多发性骨髓瘤、淋巴瘤和/或白血病。

附图说明

应当注意，这些和其他附图中所示的各种组件仅用于说明目的，并且除非在其中明确列举，否则不应将其读入权利要求中。

图1是具有IL-15细胞因子(例如，可溶性IL-15)和来自CD28的铰链区的示例性BCMA-CAR构建体的示意图。

图2是用具有IgG铰链和CD28铰链的BCMACAR转导的NK细胞与未转导的(NT)细胞相比的体外细胞毒性测定图。

图3是表达具有IgG铰链或CD28铰链结构域的BCMA-CAR的共同给药的NK细胞中肿瘤进展的图示。

图4是在表达具有CD28铰链结构域的BCMA-CAR(1M或3M)的不同的共同给药的NK细胞的情况下肿瘤进展的图示。

图5是表达具有CD28铰链结构域的BCMA-CAR(1M)的不同的共同给药的NK细胞的图示。

图6是在MM1S肿瘤细胞接种后一天(“1天延迟给药”)以1M或3M浓度施用的表达BCMA-CAR的NK细胞；未转导的NK细胞作为对照(NT-NK)的图示。

图7是在MM1s肿瘤细胞接种后一天(“1天延迟给药”)施用以100万或300万剂量施用的包含BCMACAR的NK细胞的小鼠的Kaplan Meier存活曲线。

图8是在用包含BCMA-CAR的1000万个NK细胞进行体内处理后收集的小鼠的肺组织病理学分析的幻灯片描述。

图9A是示出在1天延迟剂量下小鼠血浆中IL-15分泌的图。图9B是示出在9天延迟剂量下小鼠血浆中IL-15分泌的图。图9C是示出在9天延迟剂量下小鼠血液中CAR-NK细胞增殖的图。图9D是示出在1天延迟剂量下小鼠血液中CAR-NK细胞增殖的图。

图10A是示出与C11D5.3VLVH-Fc相比，用包含CD28铰链或IgG铰链的BCMA-CART细胞以不同的效应物:靶标(E:T)比率治疗后，肿瘤细胞系杀伤的图。图10B是示出用包含CD28铰链或IgG铰链的BCMA-CART细胞以不同的E:T比率治疗后，作为凋亡标志物的半胱天冬酶+MM1s靶细胞％的图。图10C是示出用包含CD28铰链或IgG铰链的BCMA-CART细胞以不同的E:T比率治疗后，表达MM1s肿瘤细胞的BCMA的线粒体损伤％的图。

图11A至图11B是在存在或不存在800ng/mL可溶性BCMA的情况下，分别含有BCMA28-1和BCMA28-2 CAR的NK细胞的体外细胞毒性的图示。图11C是在存在或不存在800ng/mL可溶性BCMA的情况下，C11D5.3Fc阳性对照的体外细胞毒性的图示。

图12是示出用10M剂量的BCMACAR NK，在肿瘤细胞接种后9天给药(“9天延迟剂量”)(图12A)和肿瘤细胞接种后1天给药(“1天延迟剂量”)(图12B)而治疗的小鼠体重波动的图。

图13示出了用表达荧光素酶的MM肿瘤细胞接种，然后接受一剂(10Mx1)或两剂(10Mx2)表达BCMA28-2的CAR-NK细胞的小鼠存活的代表性图像。

图14示出了在4个独立脐带血单位(CBU)供体中产生的含有NK细胞的BCMA28-2CAR构建体对多种肿瘤细胞系的体外杀伤活性。图14A示出了在4个独立的CBU供体中含有MM1s(BCMA^低)细胞中的CAR-NK细胞的BCMA28-2构建体相比于等效的未转导(UTD)NK细胞的体外杀伤活性。图14B示出了在4个独立的供体中含有JJN3(BCMA KO)细胞中的CAR-NK细胞的BCMA28-2构建体相比于等效的未转导(UTD)NK细胞的体外杀伤活性。图14C示出了在4个CBU独立的供体中含有RPMI-8226(BCMA^高)细胞中的CAR-NK细胞的BCMA28-2构建体相比于等效的未转导(UTD)NK细胞的体外杀伤活性。图14D示出了在4个CBU独立的供体中含有JIN亲本(BCMA^中)细胞中的CAR-NK细胞的BCMA28-2构建体相比于等效的未转导(UTD)NK细胞的体外杀伤活性。

图15A和图15B示出了在体外MM1S肿瘤模型中，在多轮肿瘤细胞添加后，表达BCMA28-2的CAR NK细胞的重复杀伤抗肿瘤活性。

图16示出了BCMA28-2构建体对RPMI-8226肿瘤的体内功效。

具体实施方式

定义

为了与长期存在的专利法惯例保持一致，当在本说明书中与包括权利要求的词语一起使用时，词语“一个/种(a/an)”表示一个/种或多于一个/种(即，至少一个/种)文章的语法对象。举例而言，“一个要素”意指一个要素或多于一个要素。本公开的一些实施方案可由或基本上由一个或多个要素、方法步骤、和/或公开的方法组成。预期本文所述的任何方法或组合物可相对于本文所述的任何其他方法或组合物来实施，并且可组合不同的实施方案。

在整个说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise/comprises/comprising)”应被理解为暗示包含所述步骤或要素或步骤或要素组，但不排除任何其他步骤或要素或步骤或要素组。“由……组成”意指包括并限于短语“由……组成”之后的任何内容。因此，短语“由……组成”表示所列要素是必需的或强制性的，并且可能不存在其他要素。“基本上由……组成”意指包括在所述短语之后列出的任何要素，并且限于不干扰或有助于在公开中为所列要素指定的活动或作用的其他要素。因此，短语“基本上由……组成”表示所列要素是必需的或强制性的，但没有其他要素是任选的，并且可能存在或可能不存在，这取决于它们是否影响所列要素的活动或作用。

在整个本说明书中对“一个实施方案”、“一实施方案”、“特定实施方案”、“相关实施方案”、“某个实施方案”、“另一个实施方案”或“进一步的实施方案”或其组合的提及意指结合实施方案描述的特定特征、结构或特性包括在本发明的至少一个实施方案中。因此，在整个本说明书中的各个地方出现的前述短语不一定都指同一实施方案。此外，特定特征、结构或特性可在一个或多个实施方案中以任何适宜方式组合。

如本文所用，术语“或”和“和/或”用于描述多个组合或相互排斥的组分。例如，“x、y和/或z”可指单独的“x”、单独的“y”、单独的“z”、“x、y和z”、“(x和y)或z”、“x或(y和z)”或“x或y或z”。特别考虑到，x、y或z可被特定而言排除在实施方案之外。

在整个本申请中，术语“约”是根据其在细胞和分子生物学领域中的简单和普通含义使用，以表示一个值包括用于确定所述值的装置或方法的误差标准偏差。

亲和力：如本文所用，术语“亲和力”是指结合部分(例如，抗原结合部分(例如，本文所述的可变结构域)和/或Fc受体结合部分(例如，本文所述的FcRn结合部分))与靶标(例如，抗原(例如，BCMA)和/或FcR(例如，FcRn))之间的结合相互作用的特性并且指示结合相互作用的强度。在一些实施方案中，亲和力的量度表示为解离常数(K_D)。在一些实施方案中，结合部分对靶标具有高亲和力(例如，K_D小于约10^-7M、小于约10^-8M或小于约10^-9M、小于约10^-10、小于约10^-10、小于约10^-11、小于约10^-12)。在一些实施方案中，结合部分对靶标具有低亲和力(例如，K_D高于约10^-7M、高于约10^-6M、高于约10^-5M或高于约10^-4M)。在一些实施方案中，结合部分在第一pH对靶标具有高亲和力，在第二pH对靶标具有低亲和力，并且在第一pH与第二pH之间的pH水平对靶标具有中等亲和力。

大约或约：如本文所用，术语“大约”或“约”在应用于一个或多个所关注值时是指与所陈述的参考值类似的值。在某些实施方案中，除非另外说明或从上下文另外显而易见(除了此类数目超过可能值的100％)，否则术语“大约”或“约”是指在任一方向上(大于或小于)在所陈述的参考值的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更少内的值的范围。

抗体：如本文所用，术语“抗体”是指包括至少一个免疫球蛋白可变区的多肽，例如提供免疫球蛋白可变结构域或免疫球蛋白可变结构域序列的氨基酸序列。例如，抗体可包括重(H)链可变区(本文缩写为VH)和轻(L)链可变区(本文缩写为VL)。在另一实例中，抗体包括两个重(H)链可变区和两个轻(L)链可变区。术语“抗体”涵盖抗体的抗原结合片段(例如，单链抗体、Fab、F(ab')₂、Fd、Fv和dAb片段)以及完整抗体，例如IgA、IgG、IgE、IgD、IgM型(以及其亚型)的完整免疫球蛋白。免疫球蛋白的轻链可为κ型或λ型。

抗原结合片段或其抗体片段是指完整抗体的一部分。抗原结合片段或其抗体片段是指完整抗体的与抗原(例如，BCMA)结合的一部分。抗原结合片段可含有完整抗体的抗原决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段、线性抗体、抗体模拟物、scFv和单链抗体。

结合部分：如本文所用，“结合部分”是能够特异性结合靶标的任何分子或分子的一部分，所述靶标例所关注的靶标(例如，抗原(例如，BCMA)和/或FcR(例如，FcRn))。结合部分包括例如抗体、其抗原结合片段、Fc区或其Fc片段、抗体模拟物、肽和适体。

BCMA：如本文所用，术语“BCMA”是指B细胞成熟抗原。人类BCMA蛋白由184个氨基酸组成：1-54：胞外结构域；55-77：跨膜结构域；78-184：细胞质结构域。BCMA的氨基酸序列包含：

MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAILWTCLGLSLIISLAVFVLMFLLRKISSEPLKDEFKNTGSGLLGMANIDLEKSRTGDEIILPRGLEYTVEECTCEDCIKSKPKVDSDHCFPLPAMEEGATILVTTKTNDYCKSLPAALSATEIEKSISAR(SEQ ID NO:22)，胞外结构域序列以下划线表示。)

BCMA缺乏信号肽，并且类似于其他受体如BAFF受体、跨膜活化剂、亲环蛋白配体相互作用物和钙调节剂(TACI)。这些受体在B细胞成熟和分化为浆细胞中起主要作用。它们的配体包括在MM患者中表达增加的BAFF和APRIL。BCMA是一种细胞表面受体，也称为CD269和肿瘤坏死因子受体超家族成员17(TNFRSF17)，由TNFRSF17基因编码。此受体主要在成熟B淋巴细胞和大多数多发性骨髓瘤(MM)病例中表达。

互补决定区(CDR)：可变结构域的“CDR”是可变区内的氨基酸残基，其根据Kabat、Chothia、Kabat与Chothia的积累、AbM、接触(contact)的定义和/或构象定义或本领域中众所周知的任何CDR确定方法进行鉴定。抗体CDR可被鉴定为最初由Kabat等人定义的高变区。参见例如Kabat等人,1992,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,NIH,Washington D.C。CDR的位置也可被鉴定为最初由Chothia和其他人描述的结构环结构。参见例如Chothia等人,Nature 342:877-883,1989。CDR鉴定的其他方法包括“AbM定义”，其为Kabat与Chothia之间的折衷，并且使用Oxford Molecular的AbM抗体建模软件(现为)导出；或基于观察到的抗原接触的CDR的“接触定义”，列出于MacCallum等人,J.Mol.Biol.,262:732-745,1996。在本文称为CDR的“构象定义”的另一种方法中，CDR的位置可被鉴定为对抗原结合产生焓贡献的残基。参见例如Makabe等人,Journal of Biological Chemistry,283:1 156-1166,2008。还有其他CDR边界定义可能不严格遵循上述方法之一，但仍会与Kabat CDR的至少一部分重叠，尽管根据特定残基或残基组的预测或实验结果可能会缩短或延长它们，或甚至整个CDR都不会显著影响抗原结合。如本文所用，CDR可指代由本领域中已知的任何方法(包括方法的组合)定义的CDR。本文使用的方法可利用根据这些方法中的任一者定义的CDR。对于含有多于一个CDR的任何给定实施方案，CDR可根据Kabat、Chothia、扩展、AbM、接触和/或构象定义中的任一者来定义。

嵌合抗原受体(CAR)：一种嵌合分子，其包括抗原结合部分(例如BCMA抗体)和信号传导结构域，例如来自T细胞受体的信号传导结构域(例如，CD3ζ)。通常，CAR由抗原结合部分、跨膜结构域和胞内结构域组成。胞内结构域通常包括具有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)的信号传导链，例如CD3ζ或FceRIy。在一些情况下，胞内结构域还包括至少一个额外共刺激结构域如CD28和/或CD137的细胞内部分。

恒定区：如本文所用，术语“恒定区”是指对应于或来源于抗体的一个或多个恒定区免疫球蛋白结构域的多肽。恒定区可包括以下任何或所有免疫球蛋白结构域：CH1结构域、铰链区、CH2结构域、CH3结构域(来源于IgA、IgD、IgG、IgE或IgM)、和CH4结构域(来源于IgE或IgM)。

工程化的：如本文所用，如本文所用的术语“工程化的”是指由人工产生的实体，包括细胞、核酸、多肽、载体等。在至少一些情况下，工程化的实体是合成的，并且包含不是天然存在的或以它在本公开中使用的方式配置的要素。

表位：如本文所用，“表位”是本领域中的术语，并且是指抗体可特异性结合的抗原的局部区域。表位可为例如多肽的邻接氨基酸(线性或邻接表位)，或者表位可例如来自一种或多种多肽的两个或更多个非邻接区域(构象、非线性、不连续或非邻接表位)。在某些实施方案中，抗体结合的表位可通过例如NMR光谱、X射线衍射结晶学研究、ELISA测定、氢/氘交换与质谱联用(例如液相色谱电喷雾质谱)、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如，定点诱变作图)来确定。对于X射线结晶学，可使用本领域中已知的任何方法完成结晶(例如，Giege R等人,(1994)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4):339-350；McPherson A(1990)Eur J Biochem 189:1-23；Chayen NE(1997)Structure 5:1269-1274；McPherson A(1976)J Biol Chem 251:6300-6303)。抗体:抗原晶体可使用众所周知的X射线衍射技术进行研究，并且可使用本领域中已知的计算机软件例如Refmac和Phenix进行精制。可使用本领域技术人员已知的任何方法完成诱变作图研究。参见例如Champe M等人,(1995)J Biol Chem 270:1388-1394和Cunningham BC&Wells JA(1989)Science 244:1081-1085中对诱变技术的描述，包括丙氨酸扫描诱变技术。

Fc区：如本文所用，术语“Fc区”是指两个“Fc多肽”的二聚体，每个“Fc多肽”包含抗体的恒定区，不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域。在一些实施方案中，“Fc区”包括通过一个或多个二硫键、化学接头或肽接头连接的两个Fc多肽。“Fc多肽”是指IgA、IgD和IgG的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，以及IgE和IgM的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，并且还可包括这些结构域N末端的部分或全部柔性铰链。对于IgG，“Fc多肽”包含免疫球蛋白结构域Cgamma2(Cγ2)和Cgamma3(Cγ3)以及Cgamma1(Cγ1)与Cγ2之间的铰链下部。尽管Fc多肽的边界可能不同，但人类IgG重链Fc多肽通常定义为包含在T223或C226或P230开始至其羧基末端的残基，其中编号是根据Kabat等人(1991,NIH Publication 91-3242,National Technical Information Services,Springfield,VA)中的EU索引。对于IgA，Fc多肽包含免疫球蛋白结构域Calpha2(Cα2)和Calpha3(Cα3)以及Calpha1(Cα1)与Cα2之间的铰链下部。Fc区可为合成的、重组的或从天然来源如IVIG产生的。

分离的：如本文所用，术语“分离的”是指基本上不含其他材料的分子或生物制品或细胞材料。在一个方面，术语“分离的”是指分别与例如存在于天然来源中的其他DNA或RNA，或蛋白质或多肽，或细胞或细胞器，或组织或器官分离的核酸如DNA或RNA，或蛋白质或多肽，或细胞或细胞器，或组织或器官。术语“分离的”也指通过重组DNA技术产生时基本上不含细胞材料、病毒材料或培养基的核酸或肽，或化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品的核酸或肽。此外，“分离的核酸”意在包括不作为片段天然存在并且不会在天然状态下发现的核酸片段。术语“分离的”在本文中还用于指从其他细胞蛋白中分离的多肽，并且意在涵盖纯化的和重组的多肽。术语“分离的”在本文中也用于指从其他细胞或组织中分离出来的细胞或组织，并且意在涵盖经培养和工程化的细胞和组织。

K_a：如本文所用，“K_a”是指特定结合部分与靶标形成结合部分/靶标复合物的缔合速率。

K_d：如本文所用，“K_d”是指特定结合部分/靶标复合物的解离速率。

K_D：如本文所用，“K_D”是指解离常数，由K_d与K_a的比率(即K_d/K_a)获得，并表示为摩尔浓度(M)。K_D值可使用本领域中充分确立的方法来确定，例如，通过使用表面等离子体共振，或使用例如系统的生物传感器系统。

自然杀伤细胞：自然杀伤细胞或NK细胞是一种对先天免疫系统至关重要的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞所起的作用类似于脊椎动物适应性免疫反应中的细胞毒性T细胞所起的作用。NK细胞对病毒感染的细胞提供快速反应，在感染后约3天起作用，并对肿瘤形成作出反应。

同一性百分比：如本文所用，“同一性百分比”和两个序列之间的类似短语是序列共有的相同位置数量的函数(即， 考虑到空位的数量和每个空位的长度，其需要引入以实现两个序列的最佳比对。此外，在确定两个氨基酸序列之间的序列同一性程度时，技术人员可考虑所谓的“保守”氨基酸取代，其通常可描述为一个氨基酸残基被另一个具有相似化学结构并且对多肽的功能、活性或其他生物学特性几乎没有影响或基本没有影响的氨基酸残基取代的氨基酸取代。此类保守的氨基酸取代是本领域众所周知的，例如来自WO 04/037999、GB-A-2 357 768、WO 98/49185、WO 00/46383和WO 01/09300；并且此类取代的(优选)类型和/或组合可基于来自WO 04/037999以及WO 98/49185和来自其中引用的进一步参考文献的相关教导选择。

预防：如本文所用，“预防(prevent)”和类似词语如“预防(prevented)”、“预防(preventing)”等表示用于预防、抑制疾病或疾患例如癌症或降低所述疾病或疾患发生或复发的可能性的方法。预防还指延迟疾病或疾患的发作或复发或延迟疾病或疾患的症状的发生或复发。如本文所用，“预防”和类似词语还包括在疾病或疾患发作或复发之前降低疾病或疾患的强度、效果、症状和/或负担。

样品：如本文所用，术语“样品”通常是指生物样品。样品可取自个体的组织或细胞。在一些实例中，样品可包含或来源于组织活检、血液(例如，全血)、血浆、细胞外液、干血斑、培养细胞、丢弃的组织。样品可能在收集之前已从来源中分离出来。非限制性实例包括血液、脑脊液、胸膜液、羊水、淋巴液、唾液、尿液、粪便、眼泪、汗液或粘膜排泄物，以及在收集之前从主要来源分离的其他体液。在一些实例中，在样品制备期间将样品从其主要来源(细胞、组织、体液如血液、环境样品等)分离。样品可以或可以不从其主要来源纯化或以其他方式富集。在一些情况下，将主要来源在进一步加工之前均质化。可过滤或离心样品以去除血沉棕黄层、脂质或颗粒物质。样品也可经纯化或富集核酸，或者可用RNA酶处理。样品可能含有完整、片段化或部分降解的组织或细胞。

单链可变片段(scFv)：如本文所用，术语“单链可变片段”或“scFv”是指经共价连接以形成V_H::V_L异二聚体的免疫球蛋白(例如，小鼠或人类)的重链(V_H)和轻链(V_L)的可变区的融合蛋白。重链(V_H)和轻链(V_L)是直接连接或通过肽编码接头(例如10、15、20、25个氨基酸)连接，所述接头连接V_H的N末端与V_L的C末端，或V_H的C末端与V_L的N末端。接头通常富含甘氨酸以提高柔性，以及富含丝氨酸或苏氨酸以提高溶解性。接头可连接细胞外抗原结合结构域的重链可变区和轻链可变区。接头的非限制性实例公开于Shen等人，Anal.Chem.80(6):1910-1917(2008)和WO 2014/087010，其内容特此通过引用整体并入。

受试者：如本文所用，术语“受试者”通常是指具有正在经受加工或分析的生物样品并且在特定情况下患有或怀疑患有癌症的个体。受试者可为作为方法或材料的对象的任何生物体或动物受试者，包括哺乳动物，例如人类、实验动物(例如，灵长类动物(如猿、猴、猩猩或黑猩猩)、大鼠、小鼠、兔)、家畜(例如，牛、绵羊、山羊、猪、火鸡和鸡)、家养宠物(例如，狗、猫和啮齿动物)、马和转基因非人类动物。受试者可为患者，例如患有或怀疑患有疾病(可称为医学疾患)，例如良性或恶性瘤形成或癌症。受试者可能正在经受或已经经受治疗。受试者可能是无症状的。受试者可为健康个体，但希望预防癌症。至少在一些情况下，术语“个体”可互换使用。如本文所用，“受试者”或“个体”可能或可能不被安置在医疗机构中，并且可被视为医疗机构的门诊患者。个体可能正在经由互联网接收一种或多种医学组合物。个体可包括任何年龄的人类或非人类动物，并且因此包括成人和青少年(即儿童)和婴儿，并包括子宫内的个体。所述术语并不意味着需要医学治疗，因此，个体可能自愿或非自愿地参与临床实验或支持基础科学研究。

靶标：如本文所用，“靶标”是由抗体或其抗原结合片段的结合部分特异性结合的任何分子。在一些实施方案中，靶标是本文所述的抗原(例如，BCMA)。在一些实施方案中，靶标是FcR(例如，FcRn)。如本文所用，术语“第一靶标”和“第二靶标”是指两种不同分子种类的分子，而非相同分子种类的两种分子。例如，在一些实施方案中，第一靶标是血清蛋白并且第二靶标是FcRn。

治疗有效量：如本文所用，术语“治疗有效量”是指以适用于任何医学治疗的合理益处/风险比赋予受治疗受试者治疗效果的治疗性分子(例如，本文所述的抗BCMA抗体)的量。治疗效果可为客观的(即，可通过一些测试或标志物来测量)或主观的(即，受试者给出效果的指示或感觉到效果)。特别是，“治疗有效量”是指有效治疗、改善或预防特定疾病或疾患，或表现出可检测的治疗或预防效果的治疗性分子或组合物的量，例如通过改善与疾病相关的症状，预防或推迟疾病的发作，和/或也减轻疾病症状的严重程度或频率。可在可能包含多个单位剂量的给药方案中施用治疗有效量。对于任何特定的治疗性分子，治疗有效量(和/或有效给药方案内的适当单位剂量)可变化，例如，取决于施用途径，取决于与其他医药剂的组合。此外，对于任何特定受试者的特定治疗有效量(和/或单位剂量)可取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所采用的特定医药剂的活性；所采用的特定组合物；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的特定治疗性分子的施用时间、施用途径和/或排泄或代谢速率；治疗的持续时间；以及医学技术中众所周知的类似因素。

治疗：如本文所用，术语“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”包括对疾病或病理疾患的症状或病理学的任何有益或期望的效果，并且可包括对正在治疗的疾病或疾患(例如，癌症)的一种或多种可测量标志物的甚至最小程度的减少。治疗可任选地包括减少或改善疾病或疾患的症状，或延迟疾病或疾患的进展。“治疗”不一定表示完全根除或治愈疾病或疾患或其相关症状。作为非限制性实例，治疗可指部分或完全减轻、改善、缓解、抑制特定疾病、病症和/或疾患(例如，BCMA阳性癌症)、延迟其发作、降低其严重程度和/或降低其一种或多种症状或特征的发生率的治疗性分子(例如，本文所述的抗BCMA抗体和BCMA结合CAR)的任何施用。在一些情况下，治疗可针对不表现出相关疾病、病症和/或疾患的迹象的受试者和/或仅表现出疾病、病症和/或疾患的早期迹象的受试者。替代地或另外地，此类治疗可针对表现出相关疾病、病症和/或疾患的一种或多种确定迹象的受试者。

肿瘤抗原：如本文所用，“肿瘤抗原”意指具有抗原性的生物分子，其表达会导致癌症。

在治疗、诊断或生理目的或效果的情形下的任何方法还可用“使用”权利要求语言来描述，例如“使用”本文讨论的任何化合物、组合物或药剂以实现或实施所描述的治疗、诊断或生理目的或效果。

I.抗体

本公开是部分基于表现出与BCMA(例如，人类BCMA)结合的工程化抗体和其抗原结合片段的发现。BCMA是一种具有单个跨膜结构域、细胞质C末端和细胞外N末端的蛋白质。BCMA优先由成熟B淋巴细胞表达，并且其过表达和活化与对生存、生长、粘附、破骨细胞活化、血管生成、转移和免疫抑制至关重要的基因表达增强相关。有证据表明BCMA在各种血液系统恶性肿瘤中表达，表明BCMA可能在这些疾病中作为生物标志物或治疗靶点发挥重要作用。

本文所述的抗BCMA抗体经设计为与BCMA结合。在某些实施方案中，本发明公开的抗BCMA抗体和其片段与人类BCMA结合。在某些实施方案中，人类BCMA包含具有Uniprot参考号：Q02223(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列或其片段或由其组成。SEQ ID NO:22提供如下：

MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAILWTCLGLSLIISLAVFVLMFLLRKINSEPLKDEFKNTGSGLLGMANIDLEKSRTGDEIILPRGLEYTVEECTCEDCIKSKPKVDSDHCFPLPAMEEGATILVTTKTNDYCKSLPAALSATEIEKSISAR(SEQ ID NO:22)

在某些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体和其抗原结合片段与BCMA的胞外结构域结合。在某些实施方案中，抗BCMA抗体和其抗原结合片段与人类BCMA的胞外结构域结合。在某些实施方案中，人类BCMA的胞外结构域包含SEQ ID NO:22的氨基酸1至54或由其组成。

在某些实施方案中，BCMA蛋白包含与SEQ ID NO:22或其片段中所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约100％同一的氨基酸序列或由其组成。

本文所述的抗BCMA抗体可为免疫球蛋白、重链抗体、轻链抗体、基于LRR的抗体或具有抗体样特性的其他蛋白质支架，以及本领域中已知的其他免疫结合部分，包括例如Fab、Fab'、Fab'2、Fab₂、Fab₃、F(ab')₂、Fd、Fv、Feb、scFv、SMIP、抗体、双价抗体、三价抗体、四价抗体、微小抗体(minibody)、最大抗体(maxibody)、tandab、DVD、BiTe、TandAb等，或其任何组合。不同类别抗体的亚基结构和三维构型是本领域中已知的。

抗体可为具有四条多肽链的免疫球蛋白分子，例如两条重(H)链和两条轻(L)链。重链可包括重链可变结构域和重链恒定结构域。重链恒定结构域可包括CH1、铰链、CH2、CH3和(在一些情况下)CH4区。合适的重链恒定区可来源于任何免疫球蛋白(例如，IgA、IgG或IgE)。在一些实施方案中，合适的重链恒定区可来源于IgG1、IgG2或IgG4。在特定实施方案中，合适的重链恒定区来源于IgG1。轻链可包括轻链可变结构域和轻链恒定结构域。轻链恒定结构域可包括κ轻链或λ轻链。重链的重链可变结构域和轻链的轻链可变结构域通常可进一步细分为具有可变性的区，称为互补决定区(CDR)，其间散布着更保守的区，称为框架区(FR)。此类重链和轻链可变结构域可各自包括三个CDR和四个框架区，从氨基末端至羧基末端按以下次序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4，其中的一者或多者可如本文所述进行工程化。每个结构域的氨基酸分配是根据以下中的定义：Kabat Sequences ofProteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987和1991))，或Chothia和Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；Chothia等人,Nature342:878-883(1989)。如本文所用，CDR是针对重链(HCDR1、HCDR2、HCDR3)和轻链(LCDR1、LCDR2、LCDR3)中的每一者而提及。

本发明的实施方案包括包含在本文所述的vH和vL结构域中发现的CDR的抗体，所述CDR使用常规编号系统如IMGT、Kabat和Chothia编号系统来识别。此类编号系统是本领域中众所周知的。

重链可变区

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其片段包含共同的重链可变区。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含重链可变区(VH)互补决定区(CDR)序列：

vHCDR1：SYAIH(SEQ ID NO:2)

vHCDR2：VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)

vHCDR3：AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)

在某些实施方案中，根据Kabat编号系统鉴定CDR。

在一些实施方案中，重链可变区(VH)包含氨基酸序列QITLRESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与以下具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链氨基酸序列：

QITLRESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:54)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:54具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链氨基酸序列，同时还包括本文所述的vH CDR1、vHCDR2和/或vHCDR3序列中的一者或多者。

在一些实施方案中，工程化抗体包含具有与SEQ ID NO:1同一的氨基酸序列的重链可变区。在某些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1中所列的氨基酸序列至少约70％、75％、80％(例如，至少约85％、至少约90％或至少约95％)同一或同源的氨基酸序列。例如，VH包含与SEQ ID NO:1中所列的氨基酸序列约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同一或同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含不多于30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个相对于SEQ ID NO:1的氨基酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA可变重链区由包含以下的核酸序列的多核苷酸编码：

cagatcactttaagggagagcggaggcgatgtggtgcagcccggtcgttctttaagactgagctgtgccgccagcggcttcaccttcagcagctacgccatccactgggtgagacaagctcccggtaaaggtttagagtgggtggctgtgacttggcacgacggctccaacaagtactatgccgagagcgtgatgggtcgtttcaccatctctcgtgacaacagcaagaacactttatatttacacatgaactctttaagggccgaggacaccggcgtgtactactgcgccagagccaagttcggcgagccccagtacttccagcactggggccaaggtacactggtgaccgtgtccagc(SEQ ID NO:55)

在一些实施方案中，抗BCMA抗体重链由包含核酸序列的多核苷酸编码，所述核酸序列与SEQ ID NO:56具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性：

cagatcactttaagggagagcggaggcgatgtggtgcagcccggtcgttctttaagactgagctgtgccgccagcggcttcaccttcagcagctacgccatccactgggtgagacaagctcccggtaaaggtttagagtgggtggctgtgacttggcacgacggctccaacaagtactatgccgagagcgtgatgggtcgtttcaccatctctcgtgacaacagcaagaacactttatatttacacatgaactctttaagggccgaggacaccggcgtgtactactgcgccagagccaagttcggcgagccccagtacttccagcactggggccaaggtacactggtgaccgtgtccagcgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaagg acaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtataccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggt(SEQ ID NO:56)

在一些实施方案中，工程化抗体包含由具有与SEQ ID NO:56同一的核酸序列的多核苷酸编码的重链。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含编码抗体的核酸序列，所述抗体包含不多于30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个相对于SEQ ID NO:54的氨基酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体由包含核酸序列的多核苷酸编码，所述核酸序列编码与SEQ ID NO:9具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链氨基酸序列；同时还包括本文所述的vHCDR1、vHCDR2和/或vHCDR3序列中的一者或多者。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其片段包含共同的重链可变区。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含重链可变区(VH)互补决定区(CDR)序列：

vHCDR1：SYAIH(SEQ ID NO:2)

vHCDR2：VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)

vHCDR3：AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)

在某些实施方案中，根据Kabat编号系统鉴定CDR。

在一些实施方案中，重链的可变区包含氨基酸序列EVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:9)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含重链，所述重链包含与以下具有至少70％、75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列：

EVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:57)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:57具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链氨基酸序列，同时还包括本文所述的vHCDR1、vHCDR2和/或vHCDR3序列中的一者或多者。

在一些实施方案中，工程化抗体包含与SEQ ID NO:57同一的重链氨基酸序列。在某些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9中所列的氨基酸序列至少约70％(例如，至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％)同一或同源的氨基酸序列。例如，VH包含与SEQ ID NO:9中所列的氨基酸序列约70％、75％、80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同一或同源的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含不多于30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个相对于SEQ ID NO:9的氨基酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA可变重链由包含以下的核酸序列的多核苷酸编码：

gaggtgcagttagtggagagcggaggcgatgtggtgcagcccggtcgttctttaagactgagctgtgccgccagcggcttcaccttcagcagctacgccatccactgggtgagacaagctcccggtaaaggtttagagtgggtggctgtgacttggcacgacggctccaacaagtactatgccgagagcgtgatgggtcgtttcaccatctctcgtgacaacagcaagaacactttatatttacacatgaactctttaagggccgaggacaccggcgtgtactactgcgccagagccaagttcggcgagccccagtacttccagcactggggccaaggtacaaccgtgaccgtgtccagc(SEQ ID NO:58)

在一些实施方案中，编码抗BCMA抗体的多核苷酸包含与以下具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链核酸序列：

gaggtgcagttagtggagagcggaggcgatgtggtgcagcccggtcgttctttaagactgagctgtgccgccagcggcttcaccttcagcagctacgccatccactgggtgagacaagctcccggtaaaggtttagagtgggtggctgtgacttggcacgacggctccaacaagtactatgccgagagcgtgatgggtcgtttcaccatctctcgtgacaacagcaagaacactttatatttacacatgaactctttaagggccgaggacaccggcgtgtactactgcgccagagccaagttcggcgagccccagtacttccagcactggggccaaggtacaaccgtgaccgtgtccagcgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactct actccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtataccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggt(SEQ ID NO:59)

在一些实施方案中，工程化抗体包含与SEQ ID NO:59同一的重链核酸序列。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含编码抗体的核酸序列，所述抗体包含不多于30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个相对于SEQ ID NO:9的氨基酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体由包含核酸序列的多核苷酸编码，所述核酸序列编码与SEQ ID NO:59具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的重链氨基酸序列；同时还包括本文所述的vHCDR1、vHCDR2和/或vHCDR3序列中的一者或多者。

如本领域技术人员将理解的，任何此类重链CDR序列可例如通过分子生物学技术，容易地与本文提供的或本领域中以其他方式已知的任何其他抗体序列或结构域组合，所述任何其他抗体序列或结构域包括任何框架区、CDR或恒定结构域、或其如本文中所公开的或本领域中以其他方式已知的部分，如可存在于本文公开的或本领域中以其他方式已知的任何形式的抗体或其抗原结合片段中。

在本文所述的各种工程化抗体中，重链恒定结构域可为任何类别(或亚类)。在本文所述的各种工程化抗体中，重链恒定结构域可包括IgG、IgM、IgA、IgD或IgE中的任何一者或多者的氨基酸序列，包括亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。在各种实施方案中，本文所述的工程化抗体的恒定结构域可包括免疫球蛋白重链恒定结构域的两个或更多个类别(或亚类)的混合物。例如，抗BCMA抗体可包括具有选自IgG、IgM、IgA、IgD或IgE类恒定结构域的免疫球蛋白恒定结构域序列的恒定结构域的第一部分和具有与第一不同的并且选自IgG、IgM、IgA、IgD或IgE类恒定结构域的免疫球蛋白恒定结构域序列的恒定结构域的第二部分。在一些情况下，本文所述的抗BCMA抗体的恒定结构域可包括特定类别恒定结构域的两个或更多个亚类的混合物，例如具有选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类恒定结构域的免疫球蛋白恒定结构域序列的恒定结构域的第一部分和具有与第一不同的并且选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类恒定结构域的免疫球蛋白恒定结构域序列的恒定结构域的第二部分。在一些特定实施方案中，恒定结构域包括全部或部分IgG2恒定结构域和全部或部分IgG4恒定结构域。

在一些情况下，抗BCMA抗体包括抗体恒定区、Fc区或Fc片段，其表现出与一种或多种Fc受体(例如，FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIA、FcγRIIIB、FcγRIV或FcRn受体)的改变结合(与参考恒定区相比)。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包括抗体恒定区、Fc区或Fc片段，其表现出与一种或多种Fcγ受体(例如，FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIA、FcγRIIIB或FcγRIV)的减少结合(与参考恒定区相比)。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包括抗体恒定区、Fc区或Fc片段，其在血清pH和/或细胞内pH下表现出与FcRn受体的增加结合(与参考恒定区相比)。

例如，抗BCMA抗体可包括IgG抗体的恒定区、Fc区或Fc片段，其经工程化以包括氨基酸残基251-256、285-290、308-314、385-389和428-436(Kabat编号(Kabat等人,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,NIH))中的一者或多者的氨基酸添加、缺失或取代。不希望受理论束缚，据认为这些恒定区、Fc区或Fc片段氨基酸中的一者或多者介导与Fc受体例如FcRn的相互作用。在一些实施方案中，这些公开的氨基酸中的一者或多者被组氨酸、精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺取代。在一些实施方案中，非组氨酸残基被组氨酸残基取代。在一些实施方案中，组氨酸残基被非组氨酸残基取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包括具有在位置308、309、311、312和314中的一者或多者处的氨基酸修饰的IgG抗体的恒定区、Fc区或Fc片段。在一些实施方案中，在位置308、309、311、312和314中的一者或多者处的取代分别是被苏氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天冬氨酸和亮氨酸取代。在一些实施方案中，在位置308、309和311中的一者或多者处的残基分别被异亮氨酸、脯氨酸和谷氨酸取代。在又其他实施方案中，在位置308、309、311、312和314中的一者或多者处的残基分别被苏氨酸、脯氨酸、丝氨酸、天冬氨酸和亮氨酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包括具有在位置251、252、254、255和256中的一者或多者处的氨基酸修饰，更具体地，具有在这些位置中的一者或多者处的取代的IgG抗体的恒定区、Fc区或Fc片段。在一些实施方案中，残基251被亮氨酸或精氨酸取代，残基252被亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、色氨酸或苏氨酸取代，残基254被苏氨酸或丝氨酸取代，残基255被亮氨酸、甘氨酸、异亮氨酸或精氨酸取代，和/或残基256被丝氨酸、苯丙氨酸、精氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、天冬酰胺或苏氨酸取代。在一些实施方案中，残基251被亮氨酸取代，残基252被酪氨酸或亮氨酸取代，残基254被苏氨酸或丝氨酸取代，和/或残基255被精氨酸取代。在又其他实施方案中，残基252被苯丙氨酸取代和/或残基256被天冬氨酸取代。在一些实施方案中，残基251被亮氨酸取代，残基252被酪氨酸取代，残基254被苏氨酸或丝氨酸取代，和/或残基255被精氨酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包括具有在位置428、433、434、435和436中的一者或多者处的氨基酸修饰，更具体地，具有在这些位置中的一者或多者处的取代的IgG抗体的恒定区、Fc区或Fc片段。在一些实施方案中，残基428被甲硫氨酸、苏氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或丝氨酸取代，残基433被赖氨酸、精氨酸、丝氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺或组氨酸取代，残基434被苯丙氨酸、酪氨酸或组氨酸取代，残基435被酪氨酸取代，和/或残基436被组氨酸、天冬酰胺、精氨酸、苏氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸或苏氨酸取代。在一些实施方案中，在一个或多个位置433、434、435和436处的残基分别被赖氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和组氨酸取代。在一些实施方案中，残基428被甲硫氨酸取代和/或残基434被酪氨酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包括具有在位置385、386、387和389中的一者或多者处的氨基酸修饰，更具体地，具有在这些位置中的一者或多者处的取代的IgG抗体的恒定区、Fc区或Fc片段。在一些实施方案中，残基385被精氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、组氨酸、赖氨酸或丙氨酸取代，残基386被苏氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、赖氨酸、精氨酸、异亮氨酸或甲硫氨酸取代，残基387被精氨酸、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、丙氨酸或脯氨酸取代，和/或残基389被脯氨酸或丝氨酸取代。在一些实施方案中，在位置385、386、387和389中的一者或多者处的残基分别被精氨酸、苏氨酸、精氨酸和脯氨酸取代。在一些实施方案中，在位置385、386和389中的一者或多者处的残基分别被天冬氨酸、脯氨酸和丝氨酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包括具有以下取代中的一者或多者的IgG抗体的恒定区、Fc区或Fc片段：残基251处的亮氨酸、残基252处的酪氨酸或亮氨酸、残基254处的苏氨酸或丝氨酸、残基255处的精氨酸、残基308处的苏氨酸、残基309处的脯氨酸、残基311处的丝氨酸、残基312处的天冬氨酸、残基314处的亮氨酸、残基385处的精氨酸、残基386处的苏氨酸、残基387处的精氨酸、残基389处的脯氨酸、残基428处的甲硫氨酸、残基433处的赖氨酸、残基434处的苯丙氨酸或酪氨酸、位置435处的酪氨酸和/或位置436处的酪氨酸。可包括在恒定区、Fc区或Fc片段中的额外氨基酸取代包括在例如美国专利第6,277,375号；第8,012,476号；和第8,163,881号中描述的那些。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体包括重链恒定结构域，其包括例如PCT公开第WO 94/28027号和第WO 98/47531号；和Xu等人,(2000)Cell Immunol 200:16-26中描述的Ala-Ala突变。因此，在一些实施方案中，在包括Ala-Ala突变的重链恒定区内具有一个或多个突变的抗BCMA抗体具有降低的效应子功能或没有效应子功能。根据这些实施方案，本文所述的抗BCMA抗体的恒定区可包含在位置234处对丙氨酸的取代和/或在位置235处对丙氨酸的突变(EU编号)。

如本领域技术人员将理解的，任何此类重链恒定区序列可例如通过分子生物学技术，容易地与本文提供的或本领域中以其他方式已知的任何其他抗体序列或结构域组合，所述任何其他抗体序列或结构域包括任何框架区、CDR或恒定结构域、或其如本文中所公开的或本领域中以其他方式已知的部分，如可存在于本文公开的或本领域中以其他方式已知的任何形式的抗体或其抗原结合片段中。

轻链可变区

还提供了BCMA抗体或其片段，其包含在一个或多个轻链可变区中的各种指定序列，包括在轻链互补决定区LCDR1-3中。在各种实施方案中，具有指定轻链可变区的分子具有如上所述的重链序列。在某些实施方案中，根据Kabat编号系统鉴定CDR。

因此，在一些方面，本发明提供了抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含具有RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)(LCDR1)、AASTLQS(SEQ ID NO:7)(LCDR2)和QQLNSYPWT(SEQID NO:14)(LCDR3)的互补决定区(CDR)序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，本发明提供了抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含具有RASQGINNYLA(SEQ ID NO:6)(LCDR1)、AASTLQS(SEQ ID NO:7)(LCDR2)和QQLKSYPFT(SEQ IDNO:8)(LCDR3)的互补决定区(CDR)序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，本发明提供了抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含具有RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)(LCDR1)、AASTLQS(SEQ ID NO:7)(LCDR2)和QQLNSYPFT(SEQID NO:12)(LCDR3)的互补决定区(CDR)序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，本发明提供了包含轻链可变区(VL)的抗BCMA抗体或其抗原结合片段，所述VL包含SEQ ID NO:5、10或13的氨基酸序列。

在一些实例中，本发明提供了BCMA抗体或其片段，其包含SYAIH(SEQ ID NO:2)(HCDR1)、VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)(HCDR2)和AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)(HCDR3)的重链可变互补决定区(CDR)序列；和具有RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)(LCDR1)、AASTLQS(SEQ ID NO:7)(LCDR2)和QQLNSYPWT(SEQ ID NO:14)(LCDR3)的互补决定区(CDR)序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，BCMA抗体或其片段包含SYAIH(SEQ ID NO:2)(HCDR1)、VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)(HCDR2)和AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)(HCDR3)的重链可变互补决定区(CDR)序列；和具有RASQGINNYLA(SEQ ID NO:6)(LCDR1)、AASTLQS(SEQ IDNO:7)(LCDR2)和QQLKSYPFT(SEQ ID NO:8)(LCDR3)的互补决定区(CDR)序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，BCMA抗体或其片段包含SYAIH(SEQ ID NO:2)(HCDR1)、VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)(HCDR2)和AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)(HCDR3)的重链可变互补决定区(CDR)序列；和具有RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)(LCDR1)、AASTLQS(SEQ ID NO:7)(LCDR2)和QQLNSYPFT(SEQ ID NO:12)(LCDR3)的互补决定区(CDR)序列的轻链可变区。

在一些实施方案中，BCMA抗体或其片段包含免疫球蛋白轻链可变(VL)区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含与SEQ ID NO:5至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％同一的氨基酸序列；和免疫球蛋白重链可变(VH)区，所述免疫球蛋白重链可变区包含与SEQ IDNO:1至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA抗体或其片段包含免疫球蛋白轻链可变(VL)区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含与SEQ ID NO:10至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％同一的核酸序列；和免疫球蛋白重链可变(VH)区，所述免疫球蛋白重链可变区包含与SEQ IDNO:9至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％同一的核酸序列。

在一些实施方案中，BCMA抗体或其片段包含免疫球蛋白轻链可变(VL)区，所述免疫球蛋白轻链可变区包含与SEQ ID NO:13至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％同一的氨基酸序列；和免疫球蛋白重链可变(VH)区，所述免疫球蛋白重链可变区包含与SEQID NO:1至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段包含具有表2中所示的氨基酸序列的轻链可变区(VL)和/或LCDR。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:5、10或13具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的可变轻链氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:5、10或13具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的可变轻链氨基酸序列，同时还包括本文所述的vLCDR1、vLCDR2和/或vLCDR3序列中的一者或多者。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:73、74或75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链氨基酸序列。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:73具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链氨基酸序列：

DIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPWTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:73)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:74具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链氨基酸序列：

DIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGINNYLAWYQQKPGIAPKLLIYAASTLQSGVPSRFGGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLKSYPFTFGPGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:74)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链氨基酸序列：

DIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ IDNO:75)

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:73、74或75具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链氨基酸序列，同时还包括本文所述的vL CDR1、vLCDR2和/或vLCDR3序列中的一者或多者。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段包含与SEQ ID NO:5、10和13同一的可变轻链(VL)氨基酸序列。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含不多于30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个相对于SEQ ID NO:5、10和13的氨基酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:76-78具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链核酸序列。在一些实施方案中，工程化抗体包含与SEQ ID NO:76-78同一的轻链核酸序列。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:76具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链核酸序列：

gacatcgtgatgacccagagccccagctttctgagcgccagcgtgggcgatcgtgtgaccatcacttgtcgtgccagccaaggtatcagcagctatttagcttggtaccagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatctacgccgccagcactttacagagcggcgtgccttctcgtttttctggcagcggctctggcaccgagttcactttaaccatcagctctttacagcccgaggacttcgccacctattactgccagcagctgaactcctacccttggaccttcggccaaggtaccaaggtggacatcaagcgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(SEQ ID NO:76)

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:77具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链核酸序列，

gacatcgtgatgacccagagccctagctttttaagcgccagcgtgggcgacagagtgaccatcacttgtcgtgccagccaaggtatcaacaactatttagcttggtaccagcagaagcccggtatcgcccccaagctgctgatctacgccgccagcacactgcagagcggcgtgcctagcagatttggtggcagcggctctggcacagagttcactttaaccatcagctctttacagcccgaggacttcgccacctactactgccagcagctgaagagctaccccttcaccttcggccccggcaccaaggtggagatcaagcgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(SEQ ID NO:77)

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:78具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的轻链核酸序列：

gacatcgtgatgacccagagccctagctttttaagcgccagcgtgggcgacagagtgaccatcacttgtcgtgccagccaaggtatcagcagctatttagcttggtaccagcagaagcccggcaaggcccccaagctgctgatctacgccgccagcactttacagagcggagtgcctagcagattcagcggcagcggctccggcaccgagttcactttaaccatcagctctttacagcccgaggacttcgccacctactactgccagcagctgaacagctaccccttcaccttcggccccggcaccaaggtggacatcaagcgtacggtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt(SEQ ID NO:78)

在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含编码抗体的核酸序列，所述抗体包含不多于30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2个相对于SEQ ID NO:5、10和13的氨基酸取代。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段的轻链包含：三个LCDR，其中，

LCDR1包含RASQGIX₁X₂YLA(SEQ ID NO:79)，

LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且/或

LCDR3包含QQLX₃SYPX₄T(SEQ ID NO:80)；

其中，X₁选自S或N；

X₂选自S或N；

X₃是选自N或K的带电氨基酸；并且/或

X₄是选自F或W的疏水性氨基酸。

如本领域技术人员将理解的，任何此类轻链CDR序列可例如通过分子生物学技术，容易地与本文提供的或本领域中以其他方式已知的任何其他抗体序列或结构域组合，所述任何其他抗体序列或结构域包括任何框架区、CDR或恒定结构域、或其如本文中所公开的或本领域中以其他方式已知的部分，如可存在于本文公开的或本领域中以其他方式已知的任何形式的抗体或其抗原结合片段中。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体包括轻链，所述轻链包括任何轻链恒定结构域序列，例如本领域技术人员已知的轻链恒定序列。如本领域技术人员将意识到的，轻链恒定结构域可为κ轻链恒定结构域或λ轻链恒定结构域。在某些实施方案中，如本文中所公开的轻链恒定结构域是κ轻链恒定结构域。在各种实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体包括轻链恒定结构域。

示例性抗体

工程化抗体可包括本文所述的各种重链和轻链。在一些实施方案中，抗BCMA抗体可包括两条重链和轻链。在各种实施方案中，本公开涵盖包括至少一个如本文中所公开的重链和/或轻链、至少一个如本文中所公开的重链和/或轻链框架结构域、至少一个如本文中所公开的重链和/或轻链CDR结构域，和/或如本文中所公开的任何重链和/或轻链恒定结构域的抗体。

在一些实施方案中，工程化抗体包含与SEQ ID NO:1同一的免疫球蛋白VH氨基酸序列和与SEQ ID NO:13同一的免疫球蛋白VL氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA抗体或其片段包含免疫球蛋白VL区，其包含与SEQ ID NO:13至少90％同一的氨基酸序列；和免疫球蛋白VH区，其包含与SEQ ID NO:1至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:13具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的VH和/或VL氨基酸序列，同时还包括本文所述的vH CDR1、vHCDR2、vHCDR3、vLCDR1、vLCDR2和/或vLCDR3序列中的一者或多者。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其片段包含共同的重链可变区。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含vHCDR和vLCDR序列：

vHCDR1：SYAIH(SEQ ID NO:2)

vHCDR2：VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)

vHCDR3：AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)

vLCDR1：RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)

vLCDR2：AASTLQS(SEQ ID NO:7)

vLCDR3：QQLNSYPWT(SEQ ID NO:14)

在某些实施方案中，根据Kabat编号系统鉴定CDR。

在一些实施方案中，工程化抗体包含与SEQ ID NO:1同一的免疫球蛋白VH氨基酸序列和与SEQ ID NO:5同一的免疫球蛋白VL氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA抗体或其片段包含免疫球蛋白VL区，其包含与SEQ ID NO:5至少90％同一的氨基酸序列；和免疫球蛋白VH区，其包含与SEQ ID NO:1至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:5和/或SEQ ID NO:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的VH和/或VL氨基酸序列，同时还包括本文所述的vH CDR1、vHCDR2、vHCDR3、vLCDR1、vLCDR2和/或vLCDR3序列中的一者或多者。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其片段包含共同的重链可变区。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含vHCDR和vLCDR序列：

vHCDR1：SYAIH(SEQ ID NO:2)

vHCDR2：VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)

vHCDR3：AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)

vLCDR1：RASQGINNYLA(SEQ ID NO:6)

vLCDR2：AASTLQS(SEQ ID NO:7)

vLCDR3：QQLKSYPFT(SEQ ID NO:8)

在某些实施方案中，根据Kabat编号系统鉴定CDR。

在一些实施方案中，工程化抗体包含与SEQ ID NO:9同一的免疫球蛋白VH氨基酸序列和与SEQ ID NO:10同一的免疫球蛋白VL氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA抗体或其片段包含免疫球蛋白VL区，其包含与SEQ ID NO:10至少90％同一的氨基酸序列；和免疫球蛋白VH区，其包含与SEQ ID NO:9至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含与SEQ ID NO:9和/或SEQ ID NO:10具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的VH和/或VL氨基酸序列，同时还包括本文所述的vH CDR1、vHCDR2、vHCDR3、vLCDR1、vLCDR2和/或vLCDR3序列中的一者或多者。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其片段包含共同的重链可变区。在一些实施方案中，抗BCMA抗体包含vHCDR和vLCDR序列：

vHCDR1：SYAIH(SEQ ID NO:2)

vHCDR2：VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)

vHCDR3：AKFGEPQYFQH(SEQ ID NO:4)

vLCDR1：RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)

vLCDR2：AASTLQS(SEQ ID NO:7)

vLCDR3：QQLNSYPFT(SEQ ID NO:12)

在某些实施方案中，根据Kabat编号系统鉴定CDR。

示例性单链可变片段

在一些实施方案中，本公开提供了单链可变片段。在一些实施方案中，scFv是人类scFv。“单链可变片段”或“scFv”是指经共价连接以形成V_H::VL异二聚体的免疫球蛋白(例如，小鼠或人类)的重链(V_H)和轻链(V_L)的可变区的融合蛋白。重链(V_H)和轻链(V_L)是直接连接或通过肽编码接头(例如10、15、20、25个氨基酸)连接，所述接头连接V_H的N末端与V_L的C末端，或V_H的C末端与V_L的N末端。接头通常富含甘氨酸以提高柔性，以及富含丝氨酸或苏氨酸以提高溶解性。接头可连接细胞外抗原结合结构域的重链可变区和轻链可变区。接头的非限制性实例公开于Shen等人，Anal.Chem.80(6):1910-1917(2008)和WO 2014/087010，其内容通过引用整体并入本文。在某些实施方案中，接头是G4S接头。

替代地或另外地，scFv可来源于Fab'(而非来源于抗体，例如获自Fab文库)。在某些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段是Fab。在某些实施方案中，Fab是交联的。在某些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段是F(ab)₂。任何前述分子可包含在具有异源序列的融合蛋白中以形成抗BCMA抗原抗体或其抗原结合片段。

在某些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段以至少约1x 10^-12M、至少约1x 10^-7M、至少约1x 10^-8M、至少约1x 10^-9M、或至少约1x 10^-10M的解离常数(K_d)结合至BCMA(例如，人类BCMA)。在某些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段以至少约2x 10^-8M的解离常数(K_D)结合至BCMA(例如，人类BCMA)。在某些实施方案中，抗BCMA抗体或其抗原结合片段以约2x ^10-8M与约8x 10^-9M之间的解离常数(K_D)结合至BCMA(例如，人类BCMA)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段以约1nM至50nM、约5nM至30nM、约5nM至25nM、或约8nM至20nM的解离常数(K_D)结合至BCMA(例如，人类BCMA)。在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段以至少约50nM、至少约40nM、至少约35nM、至少约30nM、至少约25nM、至少约20nM、至少约19nM、至少约18nM、至少约17nM、至少约16nM、至少约15nM、至少约14nM、至少约13nM、至少约12nM、至少约11nM、至少约10nM、至少约9nM、至少约8nM、至少约7nM、至少约6nM、至少约5nM的解离常数(K_D)结合至BCMA(例如，人类BCMA)。

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含可变重链，所述可变重链包含SEQ ID No:1-4。在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含可变重链，所述可变重链包含表1中提供的一种或多种CDR序列。在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含可变轻链，其包含表2中提供的一种或多种轻链序列。

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含接头，所述接头包含以下提供的SEQ ID NO:15中所列的氨基酸序列或由其组成：

GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:15)。在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含接头，所述接头包含以下提供的SEQ ID NO:81中所列的核酸序列或由其组成：

ggagggggcggtagcggagggggaggatctgggggtgggggctcc(SEQ ID NO:81)

在一些实施方案中，接头包含以下所列的氨基酸序列或由其组成：

GGGGSGGGGSGGGSGGGGS(SEQ ID NO:16)

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含接头，所述接头包含以下提供的SEQ ID NO:82中所列的核酸序列或由其组成：

ggggggggggggagcggagggggggggagtggtggggggtcaggagggggaggaagt(SEQ ID NO:82)

在一些实施方案中，接头包含以下所列的氨基酸序列或由其组成：

GGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS(SEQ ID NO:17)

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含接头，所述接头包含以下提供的SEQ ID NO:83中所列的核酸序列或由其组成：

gggggagggggatcaggaggcggtgggagcgggggaggtggatccggtggagggtcaggaggtggagggtcc(SEQ ID NO:83)。

在一些实施方案中，接头包含以下所列的氨基酸序列或由其组成：

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS(SEQ ID NO:18)

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含接头，所述接头包含以下提供的SEQ ID NO:84中所列的核酸序列或由其组成：

ggtggtggcggcagcggcggcggcggtagcggtggcggcggttctggaggaggaggcagcggtggaggaagcggaggtggaggctcc(SEQ ID NO:84)。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体或其片段包含保守序列修饰(例如，本文所述的抗BCMA抗体或其片段)。在一些实施方案中，保守序列修饰是不显著影响或改变包含氨基酸序列的目前公开的抗BCMA抗体或其片段(例如，抗体或其片段)的结合特征的氨基酸修饰。保守修饰可包括氨基酸取代、添加和缺失。可通过本领域中已知的标准技术，例如定点诱变和PCR介导的诱变，将修饰引入抗BCMA抗体或其片段。氨基酸可根据其物理化学性质如电荷和极性进行分类。保守氨基酸取代是其中氨基酸残基被同一组内的氨基酸代替的取代。例如，氨基酸可按电荷分类：带正电荷的氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、组氨酸，带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸，并且中性电荷的氨基酸包括丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。此外，氨基酸可按极性分类：极性氨基酸包括精氨酸(碱性极性)、天冬酰胺、天冬氨酸(酸性极性)、谷氨酸(酸性极性)、谷氨酰胺、组氨酸(碱性极性)、赖氨酸(碱性极性)、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸；非极性氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸和缬氨酸。因此，CDR区内的一个或多个氨基酸残基可被来自同一组的其他氨基酸残基代替，并且可测试经改变的抗体的保留功能。在某些实施方案中，指定序列或CDR区内的不多于一个、不多于两个、不多于三个、不多于四个、不多于五个残基经改变。

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含氨基酸序列：

EVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPFTFGPGTKVDIK(SEQ ID NO:85)

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含以下氨基酸序列：

QITLRESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPG KGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGINNYLAWYQQKPGIAPKLLIYAASTLQSGVPSRFGGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLKSYPFTFGPGTKVEIK(SEQ ID NO:86)

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含以下氨基酸序列：

QITLRESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPWTFGQGTKVDIK(SEQ ID NO:87)

在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含与SEQ ID NO:51-53中的任一者具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含与SEQ ID NO:51-53中的任一者具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，同时包含相应可变区。在一些实施方案中，抗BCMA scFv包含与SEQ ID NO:51-53中的任一者具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，同时包含相应CDR区。

核苷酸序列

本公开包括编码一个或多个重链、重链可变结构域、重链框架区、重链CDR、重链恒定结构域、轻链、轻链可变结构域、轻链框架区、轻链CDR、轻链恒定结构域、或其他免疫球蛋白样序列、或本文中所公开的抗体的核苷酸序列。在一些实施方案中，核苷酸序列是针对哺乳动物表达进行密码子优化。在各种实施方案中，此类核苷酸序列可存在于载体中。在各种实施方案中，此类核苷酸可存在于细胞的基因组中，例如需要治疗的受试者的细胞或用于产生抗体的细胞，例如用于产生抗体的哺乳动物细胞。

工程化抗体和融合蛋白

在一些实施方案中，本公开提供了融合蛋白，其包含(i)一个或多个本文所述的抗原结合区(例如，免疫球蛋白的抗原结合区、重链抗体、轻链抗体、基于LRR的抗体或其他具有抗体样特性的蛋白质支架，以及本领域中已知的其他抗原结合部分，包括例如Fab、Fab'、Fab'2、Fab₂、Fab₃、F(ab')₂、Fd、Fv、Feb、scFv、SMIP、抗体、双价抗体、三价抗体、四价抗体、微小抗体、最大抗体、tandab、DVD、BiTe、TandAb等)，例如一个或多个本文所述的可变结构域，或其部分(例如，一个或多个本文所述的CDR)，和(ii)一种或多种额外多肽。例如，白蛋白是一种丰富的血清蛋白，可通过与FcRn相互作用介导的pH依赖性循环来保护其免于降解。在一些实施方案中，如本文所述的一个或多个可变结构域或工程化抗体或其部分(例如，一个或多个本文所述的CDR)与白蛋白、其一部分(例如结合至FcRn的白蛋白部分)和/或以提高的亲和力结合至FcRn的白蛋白工程化变体融合。在其他情况下，一个或多个如本文所述的可变结构域或工程化抗体或其部分(例如，一个或多个本文所述的CDR)与结合至白蛋白的多肽融合以形成融合蛋白-白蛋白复合物，其又可与FcRn结合。在一些实施方案中，结合至白蛋白的多肽是单链可变片段(scFv)。白蛋白或其部分可包括一个或多个氨基酸的突变，所述突变可改变其与FcRn的结合。此类突变是本领域中已知的(参见例如Andersen等人,Nature Communications 3:610doi:10.1038/nocmms1607(2012))。在其他情况下，一个或多个本文所述的可变结构域或工程化抗体或其部分(例如，一个或多个本文所述的CDR)与转铁蛋白融合。转铁蛋白通过与转铁蛋白受体结合而被循环(参见例如Widera等人,Adv.Drug Deliv.Rev.55:1439-66(2003))。

嵌合抗原受体(CAR)

在一些实例中，BCMA抗体也可与抗原特异性例如肿瘤抗原特异性CAR(也称为嵌合抗原受体、人工T细胞受体或嵌合免疫受体)和/或经工程化以表达CAR的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)组合使用。通常，CAR包括结合部分、细胞外铰链和间隔元件、跨膜区和执行信号传导功能的胞内结构域(Cartellieri等人,Biomed Biotechnol2010:956304,2010)。在许多情况下，结合部分是单克隆抗体的抗原结合片段，例如scFv，或是单结构域抗体。几种不同的胞内结构域已用于生成CAR。例如，胞内结构域可由具有IT AM如CD3ζ或FcRIγ的信号传导链组成。在一些情况下，胞内结构域还包括至少一个额外共刺激结构域如CD28和/或CD137的细胞内部分。

根据本公开的BCMA抗体和其片段经工程化以包括特异性结合一种或多种所关注的靶标的一种或多种结合部分。细胞外抗原结合区如scFv或Fab可为决定抗原特异性的CAR的一部分。细胞外抗原结合区可结合至任何互补靶标，例如BCMA。在本文中所公开的任何实施方案的某些方面，细胞外抗原结合区如scFv可包含对抗原具有特异性的轻链CDR。轻链CDR可为抗原结合单元(例如CAR的scFv轻链)的互补决定区。BCMA抗体和其片段涵盖核酸(例如，RNA和DNA)、蛋白质(例如，抗体)和其组合。

表达CAR的CTL可用于靶向特定细胞类型，例如肿瘤细胞。因此，肿瘤抗原特异性单克隆抗体可用于工程化CTL，所述CTL表达含有抗原特异性抗体的抗原结合片段的CAR，从而将经工程化的CTL靶向表达肿瘤抗原的肿瘤细胞。工程化T细胞先前已用于一些类型的癌症的过继疗法(参见例如Park等人,Mol Ther 15(4):825-833,2007)。使用表达CAR的T细胞比基于标准CTL的免疫疗法更普遍，因为表达CAR的CTL不受HLA限制，并因此可用于任何患有表达靶抗原的肿瘤的患者。

作为结合部分的抗体或其片段

在一些实施方案中，本文所述的抗体或其片段是抗BCMA抗体。在一些情况下，本文所述的一种或多种结合部分是或包括抗体、其抗原结合片段和/或其Fc区(或Fc片段)。IgG抗体的基本结构由通过二硫键连接在一起的两条相同的多肽轻链和两条相同的多肽重链组成。位于每条链的氨基末端的第一个结构域在氨基酸序列中是可变的，提供了在每个单独抗体中发现的抗体结合特异性。这些被称为可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区。每条链的其他结构域的氨基酸序列相对不变，并且被称为恒定重链(CH)区和恒定轻链(CL)区。对于IgG抗体，轻链包括一个可变区(VL)和一个恒定区(CL)。IgG重链包括可变区(VH)、第一恒定区(CH1)、铰链区、第二恒定区(CH2)和第三恒定区(CH3)。在IgE和IgM抗体中，重链包括额外的恒定区(CH4)。

抗体可包括例如单克隆抗体、重组产生的抗体、单特异性抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人类抗体、工程化抗体、人源化抗体、嵌合抗体、免疫球蛋白、合成抗体、包含两个重链分子和两个重链分子的四聚体抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-抗体重链对、抗体内体、抗体融合体(有时在本文中称为“抗体偶联物”)、异源偶联物抗体、单结构域抗体、单价抗体、单链抗体或单链Fv(scFv)、骆驼化抗体、affybody、Fab片段、F(ab')2片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、抗独特型(anti-Id)抗体(包括例如抗-抗独特型(anti-anti-Id)抗体)、微小抗体、结构域抗体、合成抗体(有时称为“抗体模拟物”)，以及上述任一者的抗原结合片段。在某些实施方案中，本文所述的抗体是指多克隆抗体群。

如本文所用，术语“Fc片段”是指Fc区的一个或多个片段，其保留本文所述的Fc功能和/或活性，例如与Fc受体的结合。如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”是指保留特异性结合抗原的能力的抗体的一个或多个片段。涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”中的结合片段的实例包括Fab片段、F(ab')₂片段、Fd片段、Fv片段、scFv片段、dAb片段(Ward等人,(1989)Nature 341:544-546)，以及分离的互补决定区(CDR)。这些抗体片段可使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且可以与完整抗体相同的方式筛选片段的用途。

在一些方面，本发明提供了结合人类BCMA的抗体或其片段，其包含人类重链恒定区和/或轻链恒定区，其中人类重链恒定区包含同种型变体，其包含人类IgG1、人类IgG2、人类IgG3或人类IgG4的Fc区。

在另一方面，本发明提供了与人类BCMA结合的人源化抗体或其片段，其中所述抗体包含变体人类IgG Fc区，其包含氨基酸取代S324N，用天冬酰胺代替亲本抗体的氨基酸位置324处的丝氨酸，而包含变体人类IgG Fc区的抗体与亲本抗体相比表现出改善的补体依赖性细胞毒性(CDC)。

抗体或片段可通过本领域中已知的用于合成抗体的任何方法产生(参见例如Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor LaboratoryPress,第2版.1988)；Brinkman等人,1995,J.Immunol.Methods 182:41-50；WO 92/22324；WO 98/46645)。嵌合抗体可使用例如Morrison,1985,Science 229:1202中描述的方法产生，并且人源化抗体可通过例如美国专利第6,180,370号中描述的方法产生。

本文所述的额外的组合物和方法是双特异性抗体和多价抗体，如例如Segal等人,J.Immunol.Methods 248:1-6(2001)；和Tutt等人,J.Immunol.147:60(1991)中所描述。

工程化抗原结合区

在一些实施方案中，结合部分是或包括抗体(例如，IgG抗体，例如，IgG1、IgG2或IgG3抗体)，或抗原结合片段，其经工程化以与一个或多个靶标(即，抗原)结合，即具有不同的亲和力。例如，可通过修饰(例如，通过添加、缺失或取代)一个或多个抗体CDR内和/或涉及抗体CDR结构的位置处的氨基酸来工程化抗体。可经修饰的抗体的示例性非限制性位点包括以下(氨基酸位置基于Kabat编号指示(Kabat等人,(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest,NIH))。

在一些实施方案中，这些公开的氨基酸中的一者或多者可被组氨酸、精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺取代。不希望受理论束缚，据认为用组氨酸取代这些位置中的一者或多者处的氨基酸可产生具有pH依赖性抗原结合特性的抗体。在一些实施方案中，非组氨酸残基被组氨酸残基取代。在一些实施方案中，组氨酸残基被非组氨酸残基取代。额外的工程化抗原结合区包括在例如美国公开第20110229489号中描述的那些。

工程化恒定区

在一些情况下，结合部分是或包括结合一种或多种Fc受体(例如，FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、FcγRIIIA、FcγRIIIB、FcγRIV或FcRn受体)的抗体恒定区、Fc区或Fc片段。

在一些情况下，结合部分可为或包括IgG抗体的恒定区、Fc区或Fc片段，其经工程化以包括本文所述的氨基酸残基(例如，251-256、285-290、308-314、385-389和428-436(Kabat编号(Kabat等人,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,NIH)))中的一者或多者的氨基酸添加、缺失或取代。

生成和产生BCMA抗体和其片段

在一些实施方案中，本文所述的BCMA抗体是通过用人类BCMA免疫人源化小鼠生成的。在一些实施方案中，本文所述的抗体或其片段经进一步工程化以包括一种或多种结合部分。例如，可获得参考多肽(例如，治疗性抗体或治疗性融合蛋白)的序列，并且可添加、缺失或取代一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸残基被甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、精氨酸、缬氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺取代。在一些实施方案中，包含一个或多个氨基酸的抗体的取代增强了抗体与BCMA的结合。

可通过首先从宿主动物中分离抗体和产生抗体的细胞，获得基因序列，并使用基因序列在宿主细胞(例如，CHO细胞)中重组表达抗体来重组制备抗体。可采用的另一种方法是在植物(例如，烟草)或转基因乳中表达抗体序列。已公开了在植物或乳中重组表达抗体的方法。参见例如Peeters等人,Vaccine 19:2756,2001；Lonberg,N.和D.HuszarInt.Rev.Immunol 13:65,1995；和Pollock等人,J Immunol Methods231:147,1999。制备抗体衍生物例如人源化、单链等的方法是本领域已知的。

测量结合部分与靶标的相互作用

本文所述的抗体或其片段(例如，本文所述的抗BCMA抗体)与靶标(例如，BCMA和/或FcRn)的结合特性可通过本领域中已知的方法，例如以下方法之一来测量：BIACORE分析、酶联免疫吸附测定(ELISA)、x射线结晶学、序列分析和扫描诱变。可使用表面等离子体共振(SPR)来分析抗体与BCMA和/或FcRn的结合相互作用。SPR或生物分子相互作用分析(BIA)实时检测生物特异性相互作用，无需标记任何相互作用物。BIA芯片的结合表面处质量的变化(指示结合事件)会导致表面附近光的折射率发生变化。折射率的变化会产生可检测的信号，所述信号被测量为生物分子之间实时反应的指示。使用SPR的方法描述于例如美国专利第5,641,640号；Raether(1988)Surface Plasmons Springer Verlag；Sjolander和Urbaniczky(1991)Anal.Chem.63:2338-2345；Szabo等人,(1995)Curr.Opin.Struct.Biol.5:699-705，和BIAcore International AB(Uppsala,Sweden)提供的在线资源。此外，还可使用从Sapidyne Instruments(Boise,Id.)获得的(动力学排除测定)测定。

来自SPR的信息可用于提供关于结合部分与靶标(例如，抗BCMA抗体与BCMA和/或FcRn)的结合的平衡解离常数(K_D)和动力学参数(包括K_on和K_off)的准确和定量测量。此类数据可用于比较不同的分子。来自SPR的信息也可用于开发结构-活性关系(SAR)。例如，可评价特定结合部分在各种pH水平下与靶标的动力学和平衡结合参数。可鉴定给定位置处的变异氨基酸，所述氨基酸与在特定pH水平下的特定结合参数(例如，高亲和力、低亲和力和慢K_off)相关。

II.CAR实施方案

此外，本公开涉及其中BCMACAR构建体更适合用于NK细胞的方法和组合物，因为它们具有一种或多种与NK细胞更相关的组分，而不是适合于其他免疫细胞(包括T细胞)的生物学。

在一些实施方案中，本发明涉及嵌合抗原受体(CAR)融合蛋白，其从N末端至C末端包含：(i)针对BCMA的单链可变片段(scFv)(即“BCMA结合物”)；(ii)铰链区；(iii)跨膜结构域；和(iv)一个或多个细胞内信号传导结构域，例如至少一个共刺激结构域和活化结构域。

在特定实施方案中，本公开涉及将NK细胞(例如，脐带血(CB)衍生的NK细胞)重编程以靶向表达BCMA的癌细胞。本公开提供了许多新颖的CAR构建体，其并入了融合至铰链区(特别是CD28或IgG1铰链区)的不同BCMA scFv、跨膜结构域和包含CD247(也称为CD3ζ)和CD28的细胞质部分的信号传导结构域。在替代实施方案中，使用除CD28之外的其他共刺激结构域。

BCMA结合物

根据本发明的适宜BCMA结合物可为特异性结合BCMA的scFv。通常，scFv可为VH-接头-VL或VL-接头-VH的形式。

可使用连接VH和VL链的特定接头。接头氨基酸序列的一个实例如下：

GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:15)、或GGGGSGGGGSGGGSGGGGS(SEQ ID NO:16)、或GGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGGGS(SEQ ID NO:17)、或GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:18)、或GGTGGTGGTGGTTCTGGTGGTGGTGGTTCTGGCGGCGGCGGCTCCGGTGGTGGTGGATCC(SEQ ID NO:24)。在一些实施方案中，接头包含与SEQ ID NO:15-18和24至少75％、至少85％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，接头包含GGGGSGGGGSGGGSGGGGS(SEQ ID NO:16)的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR的BCMA结合物区包含可变重链区(VH)和可变轻链区(VL)。在一些实施方案中，BCMA结合物在VH和VL区中分别含有三个重链互补决定区(HCDR)，即HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及三个轻链互补决定区(LCDR)，即LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在一些实施方案中，HCDR1包含SYAIH(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列，HCDR2包含VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列，并且HCDR3包含AKFGEPQYFQH(SEQ IDNO:4)的氨基酸序列。

在一些实施方案中，LCDR1包含RASQGINNYLA(SEQ ID NO:6)的氨基酸序列，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列，并且LCDR3包含QQLKSYPFT(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列。

在一些实施方案中，LCDR1包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列，并且LCDR3包含QQLNSYPFT(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列。

在一些实施方案中，LCDR1包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列，并且LCDR3包含QQLNSYPWT(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA结合物的重链可变区(VH)包含以下氨基酸序列：

QITLRESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)。

设想除CDR序列以外的任何位置处的任何氨基酸取代可改变为另一种氨基酸，例如保守氨基酸取代(如本文所定义)。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1 70％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1 75％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1 80％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1 85％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1 90％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:1 95％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:199％同一的序列。

在一些实施方案中，BCMA结合物的重链可变区(VH)包含以下氨基酸序列：

EVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:9)。

设想除CDR序列以外的任何位置处的任何氨基酸取代可改变为另一种氨基酸，例如保守氨基酸取代(如本文所定义)。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9 70％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9 75％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9 80％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9 85％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9 90％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:9 95％同一的序列。在一些实施方案中，VH包含与SEQ ID NO:999％同一的序列。

在一些实施方案中，BCMA结合物包含轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，VL包含以下氨基酸序列：

DIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGINNYLAWYQQKPGI APKLLIYAASTLQSGVPSRFGGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQ QLKSYPFTFGPGTKVEIK(SEQ ID NO:5)。

设想除CDR序列以外的任何位置处的任何氨基酸取代可改变为另一种氨基酸，例如保守氨基酸取代(如本文所定义)。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:5 70％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:5 75％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:5 80％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:5 85％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:5 90％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:5 95％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:599％同一的序列。

在一些实施方案中，CAR的BCMA结合区包含轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，VL包含以下氨基酸序列：

DIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGK APKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQ QLNSYPFTFGPGTKVDIK(SEQ ID NO:10)。

设想除CDR序列以外的任何位置处的任何氨基酸取代可改变为另一种氨基酸，例如保守氨基酸取代(如本文所定义)。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:10 70％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:10 75％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:10 80％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:1085％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:10 90％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:10 95％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ IDNO:10 99％同一的序列。

在一些实施方案中，CAR的BCMA结合区包含轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，VL包含以下氨基酸序列：

DIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGK APKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQ QLNSYPWTFGQGTKVDIK(SEQ ID NO:13)。

设想除CDR序列以外的任何位置处的任何氨基酸取代可改变为另一种氨基酸，例如保守氨基酸取代(如本文所定义)。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:13 70％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:13 75％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:13 80％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:1385％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:13 90％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ ID NO:13 95％同一的序列。在一些实施方案中，VL包含与SEQ IDNO:13 99％同一的序列。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含SEQ ID NO:1的VH和SEQID NO:5的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少70％同一的VH和与SEQ ID NO:5至少70％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少75％同一的VH和与SEQ ID NO:5至少75％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少80％同一的VH和与SEQ ID NO:5至少80％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少90％同一的VH和与SEQ ID NO:5至少90％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少95％同一的VH和与SEQ ID NO:5至少95％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少97％同一的VH和与SEQ ID NO:5至少97％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:9至少70％同一的VH和与SEQ ID NO:10至少70％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:9至少75％同一的VH和与SEQ ID NO:10至少75％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:9至少80％同一的VH和与SEQ ID NO:10至少80％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:9至少90％同一的VH和与SEQ ID NO:10至少90％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:9至少95％同一的VH和与SEQ ID NO:10至少95％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:9至少97％同一的VH和与SEQ ID NO:10至少97％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含SEQ ID NO:1的VH和SEQID NO:13的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少70％同一的VH和与SEQ ID NO:13至少70％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少75％同一的VH和与SEQ ID NO:13至少75％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少80％同一的VH和与SEQ ID NO:13至少80％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少90％同一的VH和与SEQ ID NO:13至少90％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少95％同一的VH和与SEQ ID NO:13至少95％同一的VL。

在一些实施方案中，嵌合抗原受体中的BCMA-结合物包含与SEQ ID NO:1至少97％同一的VH和与SEQ ID NO:13至少97％同一的VL。

在一些实施方案、一个实施方案、特定实施方案中，特异性结合抗原的分子以约1×10^-7M的解离常数(K_d)结合。在一些实施方案中，抗原结合分子在K_d为约1×10^-9M至约5×10^-9M时以“高亲和力”特异性结合抗原。在一些实施方案中，抗原结合分子在K_d为1×10^-10M至约5×10^-10M时以“非常高的亲和力”特异性结合抗原。在一个实施方案中，抗原结合分子具有10^-9M的K_d。在一个实施方案中，解离率小于约1×10^-5。在其他实施方案中，抗原结合分子以约1×10^-7M与约1×10^-13M之间的K_d结合人类BCMA。在另一个实施方案中，抗原结合分子以约1×10^-10M至约5×10^-10M的K_d结合人类BCMA。

在另一个特定实施方案中，特异性结合抗原的分子在相似的结合条件下不与其他蛋白质发生交叉反应。在另一个特定实施方案中，特异性结合抗原的分子不与其他非BCMA蛋白发生交叉反应。在一个特定实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其结合BCMA的亲和力高于结合另一种不相关抗原的亲和力。在某些实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其结合BCMA(例如，人类BCMA)的亲和力高于结合另一种不相关抗原20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高，如通过例如放射免疫测定、表面等离子体共振或动力学排除测定所测量的。在一个特定实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其抗原结合片段与不相关非BCMA蛋白的结合程度小于抗体与BCMA蛋白结合的10％、15％或20％，如通过例如放射免疫测定所测量的。

在一个特定实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其结合人类BCMA的亲和力高于结合另一种类的BCMA的亲和力。在某些实施方案中，本文提供了抗体或其片段，其结合人类BCMA的亲和力高于结合另一种类的BCMA 5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或更高，如通过例如放射免疫测定、表面等离子体共振或动力学排除测定所测量的。在一个特定实施方案中，如通过例如放射免疫测定、表面等离子体共振或动力学排除测定所测量的，本文所述的结合人类BCMA的抗体或其片段将以低于抗体或其片段与人类BCMA蛋白的结合的10％、15％或20％结合另一种类的BCMA蛋白。

铰链区

在特定实施方案中，CAR多肽包含连接抗原结合结构域与跨膜结构域的细胞外间隔结构域(也可称为铰链)。铰链结构域是提供scFv与细胞膜和介导NK细胞活化或T细胞活化的细胞内信号传导模块分离的间隔物。细胞外间隔结构域可包括但不限于来自人类蛋白质的铰链。例如，在一个实施方案中，铰链可为人类Ig(免疫球蛋白)铰链，例如IgG4铰链，或CD8a铰链；由多肽制成的人工间隔物，例如Gly3；或IgG(例如，人类IgGl或IgG4)的CH1、CH2和/或CH3结构域。

在特定情况下，细胞外间隔结构域可包含(i)IgG4的铰链区、CH2和CH3区，(ii)IgG4的铰链区，(iii)IgG4的铰链区和CH2，(iv)CD8-α的铰链区，(v)CD28的铰链区，(vi)IgGl的铰链区、CH2和CH3区，(vii)IgGl的铰链区。

根据本发明，特别有用的铰链来源于CD28。在某些实施方案中，CAR多肽包含特定CD28铰链氨基酸序列或由特定CD28铰链核酸序列编码。实例如下：

示例性合适的CD28铰链含有以下氨基酸序列：

RAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP KDPK(SEQ ID NO:36)

示例性合适的CD28铰链由以下核酸序列编码：

cgggcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaac cattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccaaagatcc caaa(SEQ ID NO:35)

示例性合适的IgG铰链含有以下氨基酸序列：

RTVTVSSQDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPK(SEQ ID NO:37)

示例性合适的IgG铰链含有以下核酸序列：

cgtacggtcactgtctcttcacaggatcccgccgagcccaaatctcctgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcaaccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaaaagatcccaaa(SEQ ID NO:38)

跨膜结构域

跨膜将细胞内信号传导结构域连接到CAR的铰链区。在一些实施方案中，CAR包含跨膜结构域。在一些实施方案中，根据本发明的合适的跨膜结构域是以下的跨膜结构域：CD28、4-1BB/CD137、CD8(例如，CD8α)、CD4、CD19、CD3ε、CD45、CD5、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CTLA4、PD-1或CD154。示例性跨膜结构域在整体并入本文的WO2020227446中公开。

在一些实施方案中，跨膜是CD28跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域是包含以下氨基酸序列的CD28跨膜结构域：

FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV(SEQ ID NO:26)

在一些实施方案中，跨膜由以下核酸序列编码：

ttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtg(SEQ ID NO:27)

共刺激结构域

CAR可包含一个或多个共刺激结构域。需要共刺激信号来实现稳健的嵌合抗原受体(CAR)，其包含细胞扩增、功能、持久性和抗肿瘤活性。在一些实施方案中，根据本发明的共刺激区是以下的信号传导区：CD28、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序化死亡-1(PD-1)、可诱导T细胞共刺激因子(ICOS)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1(CD11a/CD18)、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF14)、NKG2C、Igα(CD79a)、Fcγ受体、MHC I类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整合素、信号传导淋巴细胞性活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、IL2Rβ、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、CD11b、ITGAD、CD11d、ITGAE、CD103、ITGAL、CD11a、LFA-1、ITGAM、ITGAX、CD11c、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCE/RANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244，2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGL1、CD100(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A，Ly108)、SLAM(SLAMF1，CD150，IPO-3)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD19a、特异性结合CD83的配体或其任何组合。

在一些实施方案中，共刺激结构域包含：

RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS(SEQ ID NO:28)

在一些实施方案中，共刺激结构域由以下编码：

aggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctca(SEQ ID NO:29)

活化结构域

根据本发明，CAR构建体还可包括活化结构域。在特定实施方案中，CAR多肽包含免疫细胞活化部分。活化部分与共刺激部分共同作用以激活下游信号传导级联，从而导致NK细胞活化、增殖、获得效应功能以及分泌炎性细胞因子和趋化因子。在一些实施方案中，活化部分是CD3ζ。

CD3ζ氨基酸序列的一个实例如下：

RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO:30)

CD3ζ核酸序列的一个实例如下：

cgcgtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaaaagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc(SEQ ID NO:31)

信号肽

在特定实施方案中，CAR多肽包含信号肽。信号肽是CAR多肽胞外结构域的一部分。在一些实施方案中，胞外结构域是CAR蛋白的位于细胞质外并暴露于细胞外间隙的部分。信号肽的功能是将识别的蛋白质信号转移至细胞内质网。在一些实施方案中，信号肽可选自重链信号肽、IL-15信号肽、CD8a信号肽、GMCSF-R信号肽。

信号肽氨基酸序列的一个实例如下：

MEFGLSWLFLVAILKGVQC(SEQ ID NO:51)

信号肽核酸序列的一个实例如下：

atggaattcggattgtcatggttgttcctcgtcgcaattctcaagggcgtgcagtgc(SEQ ID NO:52)。

信号肽氨基酸序列的一个实例如下：

MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEA(SEQ ID NO:32)

信号肽核酸序列的一个实例如下：

Atgcgcattagcaagccccacctgcggagcatcagcatccagtgctacctgtgcctgctgctgaacagccacttcctgaccgaggcc(SEQ ID NO:33)。

在一些实施方案中，CAR包含裂解位点。裂解位点的一个实例是：

GPQCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:39)。

在一些实施方案中，裂解位点是由以下编码：

ggaccgcagtgtactaattatgctctcttgaaattggctggagatgttgagagcaatcccgggccc(SEQ ID NO:40)。

细胞因子

在一些实施方案中，CAR表达细胞中细胞因子的表达提高了它们的抗肿瘤功效。在一个实施方案中，细胞因子作为CAR的一部分表达。在另一个实施方案中，细胞因子在单独的表达系统中表达。在一些实施方案中，细胞因子可选自IL-15、IL-12、IL-2、IL-18、IL-21或其组合。在一个实施方案中，细胞因子选自生长激素，例如人类生长激素、N-甲硫氨酰人类生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，例如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和促黄体激素(LH)；肝生长因子(HGF)；成纤维细胞生长因子(FGF)；催乳激素；胎盘催乳素；抑制苗勒氏管的物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；活化素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神经生长因子(NGF)，例如NGF-β；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)，例如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素，例如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(CSF)，例如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)，例如IL-1、IL-1α、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-15；肿瘤坏死因子，例如TNFα或TNF-β；和其他多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。

在一个实施方案中，细胞因子是IL-15。在一个实施方案中，细胞因子IL-15区包含如下氨基酸序列：

GIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:23)。

IL-15核酸序列的一个实例如下：

ggcatccacgtgttcatcctgggctgcttcagcgccggactgcccaagaccgaggccaactgggtgaacgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggacctgatccagagcatgcacatcgacgccaccctgtacaccgagagcgacgtgcaccccagctgcaaggtgaccgccatgaagtgctttctgctggaactgcaggtgatcagcctggaaagcggcgacgccagcatccacgacaccgtggagaacctgatcatcctggccaacaacagcctgagcagcaacggcaacgtgaccgagagcggctgcaaagagtgcgaggaactggaagagaagaacatcaaagagtttctgcagagcttcgtgcacatcgtgcagatgttcatcaacaccagc(SEQ ID NO:34)

在一些实施方案中，本公开涵盖的IL-15多肽可包含SEQ ID NO:23或与SEQ IDNO:23至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多％同一的序列。

自杀基因

在特定实施方案中，自杀基因与任何种类的细胞疗法结合使用以控制其使用并允许在所需事件和/或时间时终止细胞疗法。自杀基因用于转导细胞中，目的是在需要时引发转导细胞死亡。已经修饰以含有本公开所涵盖的载体的本公开的抗原靶向细胞可包含一种或多种自杀基因。在一些实施方案中，如本文所用，术语“自杀基因”被定义为在施用前药或其他剂后实现基因产物转变为杀死其宿主细胞的化合物的基因。在其他实施方案中，自杀基因编码基因产物，当需要时，所述基因产物由靶向自杀基因产物的剂(例如抗体)靶向。“自杀基因产物”描述了由自杀基因编码的蛋白质或多肽。

可使用的自杀基因/前药组合的实例是单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)和更昔洛韦、阿昔洛韦或FIAU；氧化还原酶和放线菌酮；胞嘧啶脱氨酶和5-氟胞嘧啶；胸苷激酶胸苷酸激酶(Tdk::Tmk)和AZT；和脱氧胞苷激酶和阿糖胞苷。可使用大肠杆菌(E.coli)嘌呤核苷磷酸化酶，一种所谓的自杀基因，可将前药6-甲基嘌呤脱氧核苷转化为有毒的嘌呤6-甲基嘌呤。与前药疗法一起使用的自杀基因的其他实例是大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因和HSV胸苷激酶基因。

示例性自杀基因还包括CD20、CD52、EGFRv3或诱导型半胱天冬酶9。在一个实施方案中，EGFR变体III(EGFRv3)的截短形式可用作可由西妥昔单抗消融的自杀抗原。本领域中已知的可用于本公开的其他自杀基因包括嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)、细胞色素p450酶(CYP)、羧肽酶(CP)、羧基酯酶(CE)、硝基还原酶(NTR)、鸟嘌呤核糖基转移酶(XGRTP)、糖苷酶、甲硫氨酸-α,γ-裂解酶(MET)和胸苷磷酸化酶(TP)。

在一些实施方案中，诱导型半胱天冬酶9(iC9)用作示例性自杀基因。一个实例iC9描述于例如Yagyu S等人,Mol Ther.2015年9月；23(9):1475-85，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，iCaspase9包含以下氨基酸序列：

MSTESMIRDVELAEEALPKKTGGPQGSRRCLFLSLFSFLIVAGATTLFCLLHFGVIGPQREEFPRDLSLISPLAQAVRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVELRDNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKVNLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINRPDYLDFAESGQVYFGIIAL(SEQ ID NO:25)。

在一些实施方案中，本公开涉及提供使用26kd TNFα的不可裂解突变体终止细胞疗法的方法和组合物。TNFα突变体是不可裂解的，这使它们与膜结合并且不可分泌。可靶向表达不可裂解的TNFα突变体的细胞进行选择性缺失，包括例如使用目前临床上FDA批准的TNFα抗体，例如依那西普、英利昔单抗或阿达利单抗。突变的TNFα多肽可与一种或多种治疗性转基因，例如编码CAR的基因共表达。此外，表达TNF-α突变体的细胞对肿瘤靶标具有优异的活性，这是由膜结合TNFα蛋白的生物活性介导的。

在特定实施方案中，自杀基因是肿瘤坏死因子(TNF)α突变体，其不能被天然裂解TNF的标准酶如TNFα转化酶(也称为TACE)裂解。因此，在特定实施方案中，TNFα突变体是膜结合的并且不可分泌的。本公开中使用的TNFα突变体可被一种或多种结合所述突变体的剂(包括至少一种抗体)靶向，使得在所述剂与细胞表面上的TNFα突变体结合后，细胞死亡。本公开的实施方案允许将TNFα突变体用作表达它的细胞的标志物。

可靶向表达不可裂解的TNFα突变体的细胞进行选择性缺失，包括例如使用目前临床上FDA批准的TNFα抗体，例如依那西普、英利昔单抗或阿达利单抗。突变的TNFα多肽可与细胞中的一种或多种治疗性转基因，例如编码CAR(包括靶向BCMA的CAR)的基因共表达。此外，表达TNF-α突变体的细胞对肿瘤靶标具有优异的活性，这是由膜结合TNFα蛋白的生物活性介导的。

野生型TNFα具有26kD跨膜形式和17kD分泌组分。在一些实施方案中，Perez等人(1990)中描述的TNFα突变体可用于本公开。在特定实施方案中，TNFα突变体包含在位置-3、-2、-1、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或其组合处的相应氨基酸的缺失。特定组合包括在以下位置处的缺失：-3至并包括13；-3至并包括12；-3至并包括11；-3至并包括10；-3至并包括9；-3至并包括8；-3至并包括7；-3至并包括6；-3至并包括5；-3至并包括4；-3至并包括3；-3至并包括2；-3至并包括1；-3至并包括-1；-3至并包括-2；-2至并包括13；-2至并包括12；-2至并包括11；-2至并包括10；-2至并包括9；-2至并包括8；-2至并包括7；-2至并包括6；-2至并包括5；-2至并包括4；-2至并包括3；-2至并包括2；-2至并包括1；-2至并包括-1；-1至并包括13；-1至并包括12；-1至并包括11；-1至并包括10；-1至并包括9；-1至并包括8；-1至并包括7；-1至并包括6；-1至并包括5；-1至并包括4；-1至并包括3；-1至并包括2；-1至并包括1；1至并包括13；1至并包括12；1至并包括11；1至并包括10；1至并包括9；1至并包括8；1至并包括7；1至并包括6；1至并包括5；1至并包括4；1至并包括3；1至并包括2；等等。在特定实施方案中，本公开的TNF-α突变体的实例至少包括关于17kD TNF的以下缺失：(1)Val1缺失和Proll2缺失；(2)Val13缺失；(3)Val1缺失和Val13缺失；(4)Val1至并包括Pro12缺失和Val13缺失(缺失13aa)；(5)Ala-3至并包括Val 13缺失(缺失16aa)。

TNFα突变体可通过任何合适的方法产生，但在特定实施方案中，它们通过定点诱变产生。在一些情况下，TNFα突变体可具有除了使蛋白质不可裂解的那些突变以外的突变。在特定情况下，TNFα突变体可具有除了Val、Pro12和/或Val13或介于两者之间的区域处的缺失以外的1、2、3或更多个突变。除了使突变体不可分泌的那些突变之外的突变可为氨基酸取代、缺失、添加、倒位等中的一种或多种。例如，在另外的突变是氨基酸取代的情况下，取代可以是或可以不是保守氨基酸。在一些情况下，蛋白质的N末端和/或C末端可能存在1、2、3、4、5或更多个额外的氨基酸。在一些情况下，TNFα突变体具有(1)一个或多个使突变体不可分泌的突变；(2)一个或多个阻止突变体的外向内信号传导的突变；和/或(3)一个或多个干扰突变体与TNF受体1和/或TNF受体2结合的突变。

在特定实施方案中，TNFα突变多肽包含以下关于SEQ ID NO:25的缺失：氨基酸残基1和氨基酸残基12；氨基酸残基1和氨基酸残基13；氨基酸残基1-12；氨基酸残基1-13；或氨基酸残基-1至13。

示例性TNFα突变多肽序列、突变体和变体在WO2020106619和WO2021055349中公开，它们通过引用整体并入本文。

示例性全长BCMA-CAR序列

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含：MEFGLSWLFLVAILKGVQCEVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPFTFGPGTKVDIKRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO:19)。

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:19至少70％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:19至少75％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:19至少80％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:19至少85％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:19至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQID NO:19至少95％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:19至少97％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:19至少99％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含核酸序列，其包含：

atggaatttggactgtcatggctttttcttgtcgccatcctgaaaggggtacagtgtgaagtgcaactggtcgaatctgggggagacgttgtccagcccgggaggtctttgcggttgtcatgcgcagcttcaggttttactttctcttcatacgccatccattgggttcggcaagcgcctggtaagggactcgaatgggttgcagtgacctggcatgacggatcaaacaagtattatgcagaatcagtaatgggcaggtttaccatttcacgcgacaatagcaaaaatacactttatttgcacatgaattcactcagagccgaagataccggcgtctattattgcgccagagcaaaatttggggagccacagtacttccaacattggggacaaggcactaccgtcaccgtgagttcaggcggggggggatcaggcggaggaggttcaggcggcggcggcagtgacatagtgatgactcagagtccttcatttttgagcgcaagtgttggggatagggtcactataacgtgtagagcatctcaaggcatttcttcatatttggcctggtatcaacagaaacctggaaaggccccaaagctccttatttacgctgcatcaaccctgcaatctggcgtcccaagccgattctctgggtctggaagcggcacagaatttaccctgactatatcatctctccaacctgaagattttgccacctattattgtcagcaattgaattcatacccgttcacattcggccctggaactaaagtcgacatcaagcgggcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccaaagatcccaaattttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcacgcgtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaaaagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctga(SEQ ID NO:42)。

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:42至少70％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:42至少75％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:42至少80％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:42至少85％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:42至少90％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:42至少95％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:42至少97％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:42至少99％同一的核酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR经由接头和裂解肽与IL-15连接，所述IL-15包含SEQID NO:45：

MEFGLSWLFLVAILKGVQCEVQLVESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPFTFGPGTKVDIKRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGPQCTNYALLKLAGDVESNPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQID NO:45)

与由SEQ ID NO:45表示的IL-15连接的BCMA-CAR在本说明书中有时称为BCMA28-1。另一种与IL-15连接的BCMA-CAR，其中CD28铰链由IgG1铰链代替，在本说明书中有时称为BCMAIg1。

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:45至少70％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:45至少75％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:45至少80％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:45至少85％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:45至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:45至少95％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:45至少97％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:45至少99％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL-15包含：

atggaatttggactgtcatggctttttcttgtcgccatcctgaaaggggtacagtgtgaagtgcaactggtcgaatctgggggagacgttgtccagcccgggaggtctttgcggttgtcatgcgcagcttcaggttttactttctcttcatacgccatccattgggttcggcaagcgcctggtaagggactcgaatgggttgcagtgacctggcatgacggatcaaacaagtattatgcagaatcagtaatgggcaggtttaccatttcacgcgacaatagcaaaaatacactttatttgcacatgaattcactcagagccgaagataccggcgtctattattgcgccagagcaaaatttggggagccacagtacttccaacattggggacaaggcactaccgtcaccgtgagttcaggcggggggggatcaggcggaggaggttcaggcggcggcggcagtgacatagtgatgactcagagtccttcatttttgagcgcaagtgttggggatagggtcactataacgtgtagagcatctcaaggcatttcttcatatttggcctggtatcaacagaaacctggaaaggccccaaagctccttatttacgctgcatcaaccctgcaatctggcgtcccaagccgattctctgggtctggaagcggcacagaatttaccctgactatatcatctctccaacctgaagattttgccacctattattgtcagcaattgaattcatacccgttcacattcggccctggaactaaagtcgacatcaagcgggcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccaaagatcccaaattttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcacgcgtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaaaagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagat ggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgcggaccgcagtgtactaattatgctctcttgaaattggctggagatgttgagagcaatcccgggcccatgcgcattagcaagccccacctgcggagcatcagcatccagtgctacctgtgcctgctgctgaacagccacttcctgaccgaggccggcatccacgtgttcatcctgggctgcttcagcgccggactgcccaagaccgaggccaactgggtgaacgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggacctgatccagagcatgcacatcgacgccaccctgtacaccgagagcgacgtgcaccccagctgcaaggtgaccgccatgaagtgctttctgctggaactgcaggtgatcagcctggaaagcggcgacgccagcatccacgacaccgtggagaacctgatcatcctggccaacaacagcctgagcagcaacggcaacgtgaccgagagcggctgcaaagagtgcgaggaactggaagagaagaacatcaaagagtttctgcagagcttcgtgcacatcgtgcagatgttcatcaacaccagctga(SEQ ID NO:46)。

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:46至少70％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:46至少75％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:46至少80％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:46至少85％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:46至少90％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:46至少95％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:46至少97％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:46至少99％同一的核酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含：MEFGLSWLFLVAILKGVQCQITLRESGGDVVQPGRSLR LSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGINNYLAWYQQKPGIAPKLLIYAASTLQSGVPSRFGGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLKSYPFTFGPGTKVEIK RAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO:20)

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:20至少70％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:20至少75％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:20至少80％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:20至少85％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:20至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQID NO:20至少95％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:20至少97％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:20至少99％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含核酸序列，其包含：

atggaattcgggctgtcctggcttttcttggtcgcaattcttaagggcgtccaatgtcagataactctgcgcgagtcaggaggagacgtggtgcaaccgggcagatctctcaggctttcatgtgccgccagtggcttcacatttagctcttatgcaatacattgggtcaggcaggctcctggcaagggcttggaatgggtagcggttacctggcatgatggatctaacaaatactacgccgagtctgttatgggtcgattcacaatttctcgagacaattcaaaaaacacactctacctgcatatgaactcacttagagcagaggacactggtgtctattactgcgccagagcaaaattcggcgagccacagtatttccagcactggggacaaggaaccctcgtaacagtatctagtgggggcggagggtctggaggaggggggagcgggggaggcggctctgatattgttatgacccaatcaccatcttttctgagcgctagtgtcggcgacagggttacaatcacatgccgagcaagccaaggaatcaacaattatctcgcatggtatcaacaaaaaccaggtatcgccccgaaacttcttatttacgcagcatcaaccctgcaaagcggagttccttctagatttggtggcagcggctccgggactgaattcactcttactatttcctcccttcaacccgaagatttcgccacatattactgccagcagcttaagtcataccccttcacttttggcccaggaactaaag ttgaaatcaaacgggcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccaaagatcccaaattttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcacgcgtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaaaagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctga(SEQ ID NO:43)

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:43至少70％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:43至少75％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:43至少80％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:43至少85％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:43至少90％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:43至少95％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:43至少97％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:43至少99％同一的核酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR经由接头和裂解肽与IL-15连接，所述IL-15包含SEQID NO:47：

MEFGLSWLFLVAILKGVQCQITLRESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGINNYLAWYQQKPGIAPKLLIYAASTLQSGVPSRFGGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLKSYPFTFGPGTKVEIKRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGPQCTNYALLKLAGDVESNPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQID NO:47)

与由SEQ ID NO:47表示的IL-15连接的BCMA-CAR在本说明书中有时称为BCMA28-2。另一种与IL-15连接的BCMA-CAR，其中CD28铰链由IgG1铰链代替，在本说明书中有时称为BCMAIg2。

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:47至少70％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:47至少75％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:47至少80％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:47至少85％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:47至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:47至少95％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:47至少97％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:47至少99％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL-15包含：

atggaattcgggctgtcctggcttttcttggtcgcaattcttaagggcgtccaatgtcagataactct

gcgcgagtcaggaggagacgtggtgcaaccgggcagatctctcaggctttcatgtgccgccagtggct

tcacatttagctcttatgcaatacattgggtcaggcaggctcctggcaagggcttggaatgggtagcggtt

acctggcatgatggatctaacaaatactacgccgagtctgttatgggtcgattcacaatttctcgagacaat

tcaaaaaacacactctacctgcatatgaactcacttagagcagaggacactggtgtctattactgcgccag

agcaaaattcggcgagccacagtatttccagcactggggacaaggaaccctcgtaacagtatctagtgg

gggcggagggtctggaggaggggggagcgggggaggcggctctgatattgttatgacccaatcacca

tcttttctgagcgctagtgtcggcgacagggttacaatcacatgccgagcaagccaaggaatcaacaatt

atctcgcatggtatcaacaaaaaccaggtatcgccccgaaacttcttatttacgcagcatcaaccctgcaa

agcggagttccttctagatttggtggcagcggctccgggactgaattcactcttactatttcctcccttcaac

ccgaagatttcgccacatattactgccagcagcttaagtcataccccttcacttttggcccaggaactaaag

ttgaaatcaaacgggcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaat

ggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccaa

agatcccaaattttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggc

ctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactcccc

gccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgc

tcacgcgtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctata

acgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaaaagacgtggccgggaccctgag

atggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataag

atggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatgg

cctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccc

tcgcggaccgcagtgtactaattatgctctcttgaaattggctggagatgttgagagcaatcccgggccca

tgcgcattagcaagccccacctgcggagcatcagcatccagtgctacctgtgcctgctgctgaacagcc

acttcctgaccgaggccggcatccacgtgttcatcctgggctgcttcagcgccggactgcccaagaccg

aggccaactgggtgaacgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggacctgatccagagcatgcacatc

gacgccaccctgtacaccgagagcgacgtgcaccccagctgcaaggtgaccgccatgaagtgctttct

gctggaactgcaggtgatcagcctggaaagcggcgacgccagcatccacgacaccgtggagaacctg

atcatcctggccaacaacagcctgagcagcaacggcaacgtgaccgagagcggctgcaaagagtgc

gaggaactggaagagaagaacatcaaagagtttctgcagagcttcgtgcacatcgtgcagatgttcatca

acaccagctga(SEQ ID NO:48)

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:48至少70％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:48至少75％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:48至少80％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:48至少85％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:48至少90％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:48至少95％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:48至少97％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:48至少99％同一的核酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含氨基酸序列，其包含：

MEFGLSWLFLVAILKGVQCQITLRESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPWTFGQGTKVDIKRTVTVSSQDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(SEQ ID NO:21)

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:21至少70％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:21至少75％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:21至少80％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:21至少85％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:21至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQID NO:21至少95％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:21至少97％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:21至少99％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含核酸序列，其包含：

atggaattcggattgtcatggttgttcctcgtcgcaattctcaagggcgtgcagtgccaaattactcttcgagagtccggcggagatgtggtacagccagggagaagcctgagactctcctgtgcagcaagcggatttaccttttcttcttacgctatccactgggttagacaggctcccggtaagggactggaatgggtcgcagtaacatggcacgacggttcaaataagtactacgcagagtcagtcatgggaaggtttactatttcacgggacaattctaagaacacactctacctgcatatgaactccctcagagctgaagacaccggcgtatattattgtgctagagctaaatttggagaaccacagtattttcaacactggggccaaggcacacttgtaacggtttcaagcggtggtggggggtctggcggaggaggtagtggaggtggaggctccgatatcgttatgacacaatcacccagcttcttgtcagcttctgttggtgatcgggtaacaattacttgtcgcgcatctcagggtatcagttcatatctggcatggtatcagcaaaagcctggaaaagcccctaaacttctgatttacgccgcgagcacactgcaaagtggagttccgtcaagattctctggctctgggtccggtaccgaatttactttgactatcagctcactccaacctgaggatttcgccacgtactattgccaacagcttaactcctatccttggacatttggtcagggcactaaagttgatattaaacgtacggtcactgtctcttcacaggatcccgccgagcccaaatctcctgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaaga accaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcaaccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaaaagatcccaaattttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcacgcgtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaaaagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctga(SEQ ID NO:44)

在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:44至少70％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:44至少75％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:44至少80％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:44至少85％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:44至少90％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:44至少95％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:44至少97％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:44至少99％同一的核酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR经由接头和裂解肽与IL-15连接，所述IL-15包含SEQID NO:49：

MEFGLSWLFLVAILKGVQCQITLRESGGDVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYAIHWVRQAPGKGLEWVAVTWHDGSNKYYAESVMGRFTISRDNSKNTLYLHMNSLRAEDTGVYYCARAKFGEPQYFQHW GQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPWTFGQGTKVDIKRTVTVSSQDPAEPKSPDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKDPKFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGPQCTNYALLKLAGDVESNPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO:49)

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:49至少70％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:49至少75％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:49至少80％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:49至少85％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:49至少90％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:49至少95％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:49至少97％同一的氨基酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:49至少99％同一的氨基酸序列。

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL-15包含：

atggaattcggattgtcatggttgttcctcgtcgcaattctcaagggcgtgcagtgccaaattactcttcgagagtccggcggagatgtggtacagccagggagaagcctgagactctcctgtgcagcaagcggatttaccttttcttcttacgctatccactgggttagacaggctcccggtaagggactggaatgggtcgcagtaacatggcacgacggttcaaataagtactacgcagagtcagtcatgggaaggtttactatttcacgggacaattctaagaacacactctacctgcatatgaactccctcagagctgaagacaccggcgtatattattgtgctagagctaaatttggagaaccacagtattttcaacactggggccaaggcacacttgtaacggtttcaagcggtggtggggggtctggcggaggaggtagtggaggtggaggctccgatatcgttatgacacaatcacccagcttcttgtcagcttctgttggtgatcgggtaacaattacttgtcgcgcatctcagggtatcagttcatatctggcatggtatcagcaaaagcctggaaaagcccctaaacttctgatttacgccgcgagcacactgcaaagtggagttccgtcaagattctctggctctgggtccggtaccgaatttactttgactatcagctcactccaacctgaggatttcgccacgtactattgccaacagcttaactcctatccttggacatttggtcagggcactaaagttgatattaaacgtacggtcactgtctcttcacaggatcccgccgagcccaaatctcctgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggatgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcaaccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaaaaagatcccaaattttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctcacgcgtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaaaagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgcggaccgca gtgtactaattatgctctcttgaaattggctggagatgttgagagcaatcccgggcccatgcgcattagcaagccccacctgcggagcatcagcatccagtgctacctgtgcctgctgctgaacagccacttcctgaccgaggccggcatccacgtgttcatcctgggctgcttcagcgccggactgcccaagaccgaggccaactgggtgaacgtgatcagcgacctgaagaagatcgaggacctgatccagagcatgcacatcgacgccaccctgtacaccgagagcgacgtgcaccccagctgcaaggtgaccgccatgaagtgctttctgctggaactgcaggtgatcagcctggaaagcggcgacgccagcatccacgacaccgtggagaacctgatcatcctggccaacaacagcctgagcagcaacggcaacgtgaccgagagcggctgcaaagagtgcgaggaactggaagagaagaacatcaaagagtttctgcagagcttcgtgcacatcgtgcagatgttcatcaacaccagctga(SEQ ID NO:50)

在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:50至少70％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:50至少75％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR包含与SEQ ID NO:50至少80％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:50至少85％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:50至少90％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:50至少95％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:50至少97％同一的核酸序列。在一些实施方案中，BCMA-CAR-IL15包含与SEQ ID NO:50至少99％同一的核酸序列。

本公开的实施方案涵盖表达如本文涵盖的一种或多种CAR和一种或多种自杀基因的细胞。在特定实施方案中，NK细胞包含编码一种或多种CAR和一种或多种工程化非分泌的、膜结合的TNF-α突变体多肽的重组核酸。在特定实施方案中，除了表达一种或多种CAR和TNF-α突变体多肽外，细胞还包含编码一种或多种治疗基因产物的核酸。

载体

在某些方面，本文提供了包含本发明的多核苷酸的载体。在一些实施方案中，载体选自DNA载体、RNA载体、质粒、慢病毒载体、腺病毒载体、AAV载体或反转录病毒载体。在一些实施方案中，载体可为病毒载体。病毒载体的实例至少包括反转录病毒、慢病毒、腺病毒或腺相关病毒载体。非病毒载体的实例至少包括质粒、转位子、脂质、纳米粒子等。

在免疫细胞是用编码基因工程化受体的载体转导，并且还需要将另一种或多种基因转导到细胞如自杀基因和/或细胞因子和/或任选的治疗基因产物中的情况下，抗原靶向受体、自杀基因、细胞因子和任选的治疗基因可包含或可不包含在同一载体上或同一载体中。在一些情况下，CAR、自杀基因、细胞因子和任选的治疗基因由相同的载体分子如相同的病毒载体分子表达。在此类情况下，CAR、自杀基因、细胞因子和任选的治疗基因的表达可能受到或可能不受到相同的调节元件的调控。当CAR、自杀基因、细胞因子和任选的治疗基因位于同一载体上时，它们可能表达为或可能不表达为单独的多肽。例如，在它们作为单独的多肽表达的情况下，它们可在载体上由2A元件或IRES元件(或者两种类型可在同一载体上使用一次或多于一次)隔开。

在一些实施方案中，细胞因子和自杀基因由相同的多肽表达，其中它们由2A元件隔开。在一些实施方案中，2A元件可在细胞中蛋白质的翻译过程中诱导核糖体跳跃。

在一些实施方案中，2A元件包含以下氨基酸序列：QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ IDNO:53)。

细胞

本公开涵盖任何种类的免疫细胞或干细胞，其具有至少一种编码基因工程化受体的载体，所述基因工程化受体包含BCMACAR，所述BCMACAR包含CD28铰链结构域。在一些情况下，不同的载体编码CAR与编码自杀基因和/或细胞因子。包括NK细胞的免疫细胞可来源于脐带血(包括来自多种来源的混合脐带血)、外周血、诱导多能干细胞(iPSC)、造血干细胞(HSC)、骨髓或其混合物。例如，NK细胞可来源于细胞系，例如但不限于NK-92细胞。NK细胞可为脐带血单核细胞，例如CD56⁺NK细胞。

本公开涵盖任何种类的免疫细胞或其他细胞，包括常规T细胞、γ-δT细胞、NKT和不变NK T细胞、调节性T细胞、巨噬细胞、B细胞、树突细胞、间充质基质细胞(MSC)，或其混合物。

NK细胞是先天免疫反应的关键组分和抵御恶性细胞的第一道防线的重要参与者。与T细胞不同，NK细胞无需事先致敏即可杀死恶性细胞的能力有助于其快速发挥作用，T细胞需要识别HLA分子情形中呈递的肿瘤抗原。

在一些情况下，NK细胞已经在存在有效量的通用抗原呈递细胞(UAPC)，包括以任何合适的比率的情况下扩增。细胞可与UAPC一起培养，例如比率为10:1至1:10；9:1至1:9；8:1至1:8；7:1至1:7；6:1至1:6；5:1至1:5；4:1至1:4；3:1至1:3；2:1至1:2；或1:1，包括比率为1:2。在一些情况下，NK细胞在IL-2存在下扩增，例如浓度为10-500、10-400、10-300、10-200、10-100、10-50、100-500、100-400、100-300、100-200、200-500、200-400、200-300、300-500、300-400或400-500U/mL。

在用载体进行基因修饰后，可立即输注或可储存NK细胞。在某些方面，在基因修饰后，细胞可在基因转移到细胞后的约1、2、3、4、5天或更长时间内作为大量群体离体繁殖数天、数周或数月。在另一方面，克隆转染子并且克隆证明存在单个整合或附加体维持的表达盒或质粒，并且离体扩增CAR的表达。

本公开的实施方案涵盖表达如本文涵盖的一种或多种CAR和一种或多种自杀基因的细胞。在特定实施方案中，NK细胞包含编码一种或多种CAR和一种或多种工程化非分泌的、膜结合的TNF-α突变体多肽的重组核酸。在特定实施方案中，除了表达一种或多种CAR和TNF-α突变体多肽外，细胞还包含编码一种或多种治疗基因产物的核酸。

细胞可直接从个体获得，或者可从存放处或其他储存设施获得。作为疗法的细胞对于被提供细胞作为疗法的个体而言可为自体的或同种异体的。

细胞可来自需要治疗医学疾患的个体，并在对其进行操纵以表达CAR、任选的自杀基因、任选的细胞因子和任选的治疗基因产物(例如，使用标准转导技术和过继细胞疗法的扩展)后，它们可能会被提供给最初来源的个体。在一些情况下，储存细胞以供个体或另一个体以后使用。

免疫细胞可包含在细胞群体中，并且所述群体可具有用一个或多个受体和/或一个或多个自杀基因和/或一种或多种细胞因子转导的大多数细胞。细胞群体可包含用一个或多个CAR和/或一个或多个自杀基因和/或一种或多种细胞因子转导的51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的免疫细胞。一个或多个CAR和/或一个或多个自杀基因和/或一种或多种细胞因子可为单独的多肽。

免疫细胞可用一个或多个CAR和/或一个或多个自杀基因和/或一种或多种细胞因子产生，以用于关于特定目的的模块化。例如，可生成细胞，包括用于商业分布，表达CAR和/或一个或多个自杀基因和/或一种或多种细胞因子(或与编码突变体的核酸一起分布以用于随后的转导)，并且使用者可取决于其预期目的对其进行修饰以表达一种或多种其他所关注的基因(包括治疗基因)。例如，对治疗抗原阳性细胞(包括抗原阳性癌症或感染因子感染的细胞)感兴趣的个体可获得或产生自杀基因表达细胞(或异源细胞因子表达细胞)并对其进行修饰以表达包含抗原特异性scFv的受体，或反之亦然。

在特定实施方案中，使用NK细胞，并且可修饰表达一个或多个CAR和/或一个或多个自杀基因和/或一种或多种细胞因子的转导的NK细胞的基因组。可以任何方式修饰基因组，但在特定实施方案中，例如通过CRISPR基因编辑来修饰基因组。可对细胞的基因组进行修饰以增强细胞对任何目的的有效性。

作为非限制性实例，NK细胞可表达结合BCMA的CAR，其包含选自由SEQ ID NO:19-21、45、47和49组成的组的氨基酸序列。在一些实例中，NK细胞可包含多核苷酸，所述多核苷酸包含选自由SEQ ID NO:42-44、46、48和50组成的组的核酸序列。

III.治疗方法

在各种实施方案中，为了改善患有医学疾患的个体的医学疾患或为了降低个体中医学疾患的风险或延迟其严重程度和/或发作，靶向在其表面上表达所需靶标的患病细胞或其他细胞。在特定情况下，为了杀死癌细胞，靶向表达内源性抗原的癌细胞。在其他情况下，为了杀死受感染的细胞，靶向感染因子感染的细胞。

在一些实施方案中，本文所述的抗体或其片段(例如，如本文所述的抗BCMA抗体)用于治疗一种或多种BCMA相关疾患的方法中。在一些实施方案中，本文所述的抗体或其片段(例如，如本文所述的抗BCMA抗体)用作药物。BCMA相关疾患可包括但不限于由以下原因引起的疾患，包括，包括全部或部分由BCMA表达引起的症状，或已知与BCMA表达一起发生的症状。

根据本公开，本文所述的抗体、其片段以及CAR和组合物可用于治疗与BCMA相关的癌症。癌症是一组广泛的各种疾病，其特征为体内异常细胞的不受控制生长。不受调控的细胞分裂和生长导致形成恶性肿瘤，所述恶性肿瘤侵袭邻近组织，并且还可经由淋巴系统或血流转移至身体的远处部位。在一些实施方案中，“癌症”或“癌组织”包含实质瘤。可通过本发明的方法治疗的癌症的实例包括但不限于免疫系统的癌症，包括淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和其他白细胞恶性肿瘤。

在一些方面，本发明提供了一种用于治疗癌症的方法，其包括施用结合BCMA的剂(例如，本文所述的抗BCMA抗体或其片段)。

在各种实施方案中，施用本文所述的抗体或其片段(例如，本文所述的抗BCMA抗体或其片段)导致如本文所述或本领域中以其他方式已知的BCMA相关疾患的一种或多种症状或生物标志物的发生率、频率、水平和/或量降低，例如一种或多种症状或生物标志物与受试者中的先前测量值或与参考值相比降低至少3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％。

在一些实施方案中，向患有癌症的受试者施用本文所述的抗体或其片段(例如，本文所述的抗BCMA抗体)导致癌症的一种或多种症状或生物标志物比参考抗体(例如，交叉竞争BCMA结合的抗体)在可比条件下的更大减少或改善。

在一些实施方案中，本文所述的抗体或其片段(例如，本文所述的抗BCMA抗体)可与参考蛋白(例如，交叉竞争BCMA结合的抗体)相比以降低的剂量量施用，同时实现相等、同等有效、可比地有效或基本上有效的结果，其中抗BCMA抗体以与参考(例如，交叉竞争BCMA结合的抗体)相同、等效或基本上等效的制剂和/或通过与其相同、等效或基本上等效的施用途径进行施用。在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体可与参考抗体(例如，交叉竞争BCMA结合的抗体)相比以增加的时间间隔施用，同时实现相等、同等有效、可比地有效或基本上有效的结果，其中抗BCMA抗体以与参考相同、等效或基本上等效的制剂和/或通过与其相同、等效或基本上等效的施用途径进行施用。在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体可与参考抗体相比以减少的单位剂量数目和/或减少的治疗时段施用，同时实现相等、同等有效、可比地有效或基本上有效的结果，其中抗BCMA抗体以与参考(例如，交叉竞争BCMA结合的抗体)相同、等效或基本上等效的制剂和/或通过与其相同、等效或基本上等效的施用途径进行施用。

根据一些此类实施方案，与有效剂量的参考抗体(例如，例如交叉竞争BCMA结合的抗体)相比，所施用剂量的本文描述的抗BCMA抗体在被施用于受试者时更少可能引发不良反应，例如不良免疫反应。因此，在各种实施方案中，如本文中所公开的抗BCMA抗体对于所施用的每活性单位比参考抗体更少可能诱发不良反应或副作用。在各种实施方案中，如本文中所公开的抗BCMA抗体对于所施用的每活性单位比参考抗体更少可能诱发具有特定严重程度的不良反应或副作用。在各种实施方案中，如本文中所公开的抗BCMA抗体对于所施用的每活性单位比参考抗体在更低程度上或在更少的患者中诱发一种或多种不良反应或副作用。可能与施用能够结合BCMA的抗体相关的不良反应或副作用的实例可包括头痛、鼻咽炎、背痛、恶心、腹泻、高血压、上呼吸道感染、腹痛、呕吐、贫血、咳嗽、外周水肿和/或尿路感染。

在一些实施方案中，在向受试者施用(例如，以单剂量)后，本文所述的抗体或其片段(例如，本文所述的抗BCMA抗体)在施用后的限定时间(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天)处测量的血浆中的水平相对于对照(例如，交叉竞争BCMA结合的抗体)在相同限定时间处的水平有所增加。例如，在施用单剂量后的限定时间处，本文所述的抗BCMA抗体的水平高于参考抗体的相应水平至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、300％、400％或500％。

在一些实施方案中，本文所述的抗体或其片段(例如，本文所述的抗BCMA抗体)在施用(例如，以单剂量)后的限定时间(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天)处测量的血浆中的水平相对于对照在相同限定时间处的水平有所增加。例如，在施用后的限定时间处，本文所述的抗BCMA抗体的水平高于参考抗体的相应水平至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、300％、400％或500％。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体具有增加的半衰期(例如，相对于对照，例如参考抗体，例如交叉竞争BCMA结合的抗体)，并且因此抗BCMA抗体可以增加的剂量间时间间隔向受试者施用。例如，抗BCMA抗体可每周、每两周、每三周、每四周、每6周、每8周或更长的持续时间施用一次。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其片段的治疗有效量为参考治疗蛋白(例如，交叉竞争BCMA结合的抗体)的有效量的约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％。在一些实施方案中，本文所述的单个剂量的抗BCMA抗体实现与两个或更多个剂量的参考抗体相当的治疗效果。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其片段是以约90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％受试者中的靶抗原(例如，BCMA)浓度的剂量施用。

在一些实施方案中，可使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统中的任一者将本文所述的抗BCMA抗体或其片段物理地引入受试者中。本文中所公开的制剂的示例性施用途径包括静脉内、肌内、皮下、腹膜内、脊髓或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外施用”是指除肠内和局部施用以外的施用模式，通常通过注射，并包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下腔、脊髓内、硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。在一些实施方案中，制剂经由非肠胃外途径施用，包括局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、经阴道、经直肠、舌下或局部。还可例如一次、多次和/或在一个或多个延长的时间段内进行施用。

在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体或其片段可用于多种诊断和治疗应用。例如，如本文所述的工程化抗体的可检测标记型式可用于检测样品(例如，生物样品)中BCMA的存在或量的测定中。本文所述的工程化抗体可用于体外测定中以研究与BCMA的结合。在一些实施方案中，本文所述的抗BCMA抗体可用作经设计为鉴定另外可用于治疗BCMA相关病症的额外新颖化合物的测定中的阳性对照。例如，本文所述的抗BCMA抗体可用作鉴定与BCMA结合的额外化合物(例如，小分子、适体或抗体)的测定中的阳性对照。

本文所述的抗体或其抗原结合片段可用于监测受试者，例如患有、怀疑患有、有发展风险或正在治疗一种或多种BCMA相关疾患的受试者。监测可包括确定BCMA在受试者中，例如在受试者的血清中的量或活性。在一些实施方案中，评价是在施用如本文所述的抗BCMA抗体后至少一(1)小时，例如至少2、4、6、8、12、24或48小时，或至少1天、2天、4天、10天、13天、20天或更多天，或至少1周、2周、4周、10周、13周、20周或更长时间进行。受试者可在以下一个或多个时期进行评价：治疗开始之前；治疗期间；或在一种或多种治疗要素已被施用之后。评价可包括评价进一步治疗的需要，例如评价是否应改变剂量、施用频率或治疗持续时间。评价还可包括评价添加或删除所选治疗方式，例如添加或删除对于本文所述的BCMA相关病症的任何治疗的需要。在本发明的一个实施方案中，公开了包含BCMA结合结构域的嵌合抗原受体(CAR)，以用于治疗包括多发性骨髓瘤的各种血液恶性肿瘤。BCMA蛋白是在癌细胞上表达。CAR的BCMA抗原结合部分与其BCMA片段的胞外结构域内的表位相互作用。

在特定实施方案中，如本文所考虑的CAR构建体、核酸序列、载体、免疫细胞等，和/或包含其的药物组合物用于预防、治疗或改善疾病，例如癌性疾病。在特定实施方案中，例如，本公开的药物组合物可特别用于预防、改善和/或治疗癌症，包括表达特定抗原并且可能是或可能不是实质瘤的癌症。

在特定实施方案中，利用受体的免疫细胞可为NK细胞、T细胞、γδT细胞、αβT细胞或NKT或不变NKT(iNKT)，或经工程化以对哺乳动物进行细胞治疗的不变NKT细胞。在细胞为NK细胞的此类情况下，NK细胞疗法可为任何种类并且NK细胞可为任何种类。在特定实施方案中，细胞是经工程化以表达一个或多个CAR和/或一个或多个自杀基因和/或一种或多种细胞因子的NK细胞。在特定实施方案中，细胞是用CAR转导的NK细胞。

在特定实施方案中，本公开部分考虑了可单独或使用标准载体和/或基因递送系统以任何组合，并且在至少一些方面，连同药学上可接受的载剂或赋形剂施用的CAR表达细胞、CAR构建体、CAR核酸分子和CAR载体。在某些实施方案中，在施用之后，核酸分子或载体可稳定地整合到受试者的基因组中。

在特定实施方案中，可使用对某些细胞或组织具有特异性并在NK细胞中持续存在的病毒载体。合适的医药载剂和赋形剂是本领域中众所周知的。根据本公开制备的组合物可用于预防或治疗或延迟上述鉴定的疾病。

此外，本公开涉及用于预防、治疗或改善肿瘤性疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的表达CAR、核酸序列、载体的细胞的步骤，如本文所考虑的和/或由如本文所考虑的方法产生的。

施用示例性CAR细胞的组合物的可能适应症是癌性疾病，包括肿瘤性疾病，包括例如B细胞恶性肿瘤、多发性骨髓瘤、乳腺癌、胶质母细胞瘤、肾癌、胰腺癌或肺癌。施用靶向抗原的CAR细胞的组合物的示例性适应症是癌性疾病，包括表达抗原的任何恶性肿瘤。本公开的组合物的施用可用于所有阶段(I、II、III或IV)和类型的癌症，包括例如微小残留疾病、早期癌症、晚期癌症、和/或转移性癌症和/或难治性癌症。

本公开进一步涵盖与经由免疫细胞起作用的其他化合物，例如双特异性抗体构建体、靶向毒素或其他化合物的共同施用方案。本发明化合物共同施用的临床方案可涵盖在施用其他组分的同时、之前或之后共同施用。特定的组合疗法包括化学疗法、放射线、手术、激素疗法或其他类型的免疫疗法。

在一个特定方面，本发明提供了一种抑制表达BCMA的癌细胞群体的增殖或减少表达BCMA的癌细胞群体的方法，所述方法包括使表达BCMA的癌细胞群体与结合BCMA表达细胞的本发明的抗BCMACAR表达细胞(例如，BCMACAR表达NK细胞)接触。在一个方面，本发明提供了用于抑制表达BCMA的癌细胞群体的增殖或减少表达BCMA的癌细胞群体的方法，所述方法包括使表达BCMA的癌细胞群体与结合BCMA表达细胞的本发明的抗BCMACAR表达细胞(例如，BCMACAR表达NK细胞)接触。在某些方面，相对于阴性对照，本发明的抗BCMACAR表达细胞(例如，BCMACAR表达NK细胞)减少骨髓性白血病或与BCMA表达细胞相关的另一种癌症的受试者或动物模型中的细胞和/或癌细胞的数量、量或百分比至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少65％、至少75％、至少85％、至少95％或至少99％。在一个方面，受试者是人。

在一些实施方案中，本治疗方法有用的癌症包括任何恶性细胞类型，例如在实质瘤或血液肿瘤中发现的那些。示例性实质瘤可包括但不限于选自由以下组成的组的器官肿瘤：胰腺、结肠、盲肠、胃、脑、头、颈、卵巢、肾、喉、肉瘤、肺、膀胱、黑色素瘤、前列腺和乳腺。示例性血液肿瘤包括骨髓肿瘤、T或B细胞恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤、母细胞瘤、骨髓瘤等。可使用本文提供的方法治疗的癌症的其他实例包括但不限于肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、胃癌(gastric/stomach cancer)(包括胃肠道癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney/renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、各种类型的头颈癌和黑色素瘤。

癌症可特定地属于以下组织学类型，但不限于此等：恶性肿瘤；癌瘤；未分化癌；巨细胞癌和梭形细胞癌；小细胞癌；乳头状癌；鳞状细胞癌；淋巴上皮癌；基底细胞癌；毛母细胞癌；移行细胞癌；乳头状移行细胞癌；腺癌；恶性胃泌素瘤；胆管癌；肝细胞癌；合并肝细胞癌和胆管癌；小梁腺癌；腺样囊性癌；腺瘤性息肉中的腺癌；家族性结肠息肉病腺癌；实质癌瘤；恶性类癌瘤；鳃-肺泡腺癌；乳头状腺癌；嫌色细胞癌；嗜酸细胞癌；嗜酸性腺癌；嗜碱性粒细胞癌；透明细胞腺癌；颗粒细胞癌；滤泡性腺癌；乳头状和滤泡状腺癌；非包膜硬化性癌；肾上腺皮质癌；子宫内膜癌；皮肤附件癌；大汗腺癌；皮脂腺癌；耵聍腺癌；粘液表皮样癌；囊腺癌；乳头状囊腺癌；乳头状浆液性囊腺癌；粘液性囊腺癌；粘液性腺癌；印戒细胞癌；浸润性导管癌；髓样癌；小叶癌；炎性癌；乳腺佩吉特病；腺泡细胞癌；腺鳞癌；腺癌伴鳞状化生；恶性胸腺瘤；恶性卵巢间质瘤；恶性昏迷；恶性颗粒细胞瘤；恶性男性母细胞瘤；支持细胞癌；恶性间质细胞瘤；恶性脂质细胞瘤；恶性副神经节瘤；恶性乳腺外副神经节瘤；嗜铬细胞瘤；血管肉瘤；恶性黑色素瘤；无色素性黑色素瘤；浅表扩散黑色素瘤；雀斑样恶性黑色素瘤；肢端黑色素瘤；结节性黑色素瘤；巨大色素痣中的恶性黑色素瘤；上皮样细胞黑色素瘤；恶性蓝色痣；肉瘤；纤维肉瘤；恶性纤维性组织细胞瘤；粘液肉瘤；脂肪肉瘤；平滑肌肉瘤；横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；肺泡横纹肌肉瘤；间质肉瘤；恶性混合瘤；苗勒管混合瘤；肾母细胞瘤；肝母细胞瘤；癌肉瘤；恶性间充质瘤；恶性布伦纳肿瘤；恶性叶状肿瘤；滑膜肉瘤；恶性间皮瘤；无性细胞瘤；胚胎癌；恶性畸胎瘤；恶性卵巢基质；绒毛膜癌；恶性中肾瘤；血管肉瘤；恶性血管内皮瘤；卡波西肉瘤；恶性血管外皮细胞瘤；淋巴管肉瘤；骨肉瘤；皮质旁骨肉瘤；软骨肉瘤；恶性软骨母细胞瘤；间充质软骨肉瘤；骨巨细胞瘤；尤因氏肉瘤；恶性牙源性肿瘤；成釉细胞牙肉瘤；恶性成釉细胞瘤；成釉细胞纤维肉瘤；恶性松果体瘤；脊索瘤；恶性胶质瘤；室管膜瘤；星形细胞瘤；原生质星形细胞瘤；纤维星形细胞瘤；星形母细胞瘤；胶质母细胞瘤；少突胶质细胞瘤；少突胶质母细胞瘤；原始神经外胚层；小脑肉瘤；神经节神经母细胞瘤；成神经细胞瘤；视网膜母细胞瘤；嗅觉神经源性肿瘤；恶性脑膜瘤；神经纤维肉瘤；恶性神经鞘瘤；恶性颗粒细胞瘤；恶性淋巴瘤；霍奇金病；霍奇金的；副肉芽肿；小淋巴细胞恶性淋巴瘤；大细胞弥漫性恶性淋巴瘤；滤泡性恶性淋巴瘤；蕈样肉芽肿；其他特定的非霍奇金淋巴瘤；B细胞淋巴瘤；低级别/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中级别/滤泡性非霍奇金淋巴瘤；中级别弥漫性NHL；高级别免疫母细胞NHL；高级别淋巴母细胞NHL；高级别小非裂解细胞NHL；大块疾病NHL；套细胞淋巴瘤；AIDS相关淋巴瘤；华氏巨球蛋白血症；恶性组织细胞增多症；多发性骨髓瘤；肥大细胞肉瘤；免疫增殖性小肠疾病；白血病；淋巴白血病；浆细胞白血病；红白血病；淋巴肉瘤细胞白血病；髓性白血病；嗜碱性白血病；嗜酸性粒细胞白血病；单核细胞白血病；肥大细胞白血病；巨核细胞白血病；髓性肉瘤；毛细胞白血病；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性淋巴细胞白血病(ALL)；急性髓性白血病(AML)；和慢性粒细胞白血病。

作为非限制性实例，本发明的抗BCMA抗体、CAR、细胞和组合物用于治疗B细胞相关疾病。在一些实施方案中，癌症是B细胞相关疾病。在一些实施方案中，B细胞相关疾病选自由以下组成的组：浆细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、小非裂解核细胞淋巴瘤、地方性伯基特淋巴瘤、散发性伯基特淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、结外粘膜淋巴瘤组织淋巴瘤、结节性单核细胞B细胞淋巴瘤、脾淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、纵隔原发性B细胞淋巴瘤、肺B细胞血管中心性淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、未知恶性肿瘤B细胞、淋巴瘤样肉芽肿、移植后淋巴组织增生性病症、免疫调节疾病、类风湿性关节炎、重症肌无力、特发性血小板减少性紫癜、抗磷脂综合征、恰加斯病、格雷夫斯病、韦格纳肉芽肿、结节性多动脉炎、干燥综合征、寻常型天疱疮、硬皮病、多发性硬化症、抗磷脂综合征、ANCA相关血管炎、古德帕斯彻病、川崎病、自身免疫性溶血性贫血、急进性肾小球肾炎、重链病和原发性或免疫细胞淀粉样变性。

药物组合物

本公开的药物组合物包含有效量的组合物，所述组合物包含分散在药学上可接受的载剂中的NK细胞。在一些实施方案中，组合物包含药学上可接受的载剂、稀释剂、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。在一些实施方案中，组合物包含赋形剂。鉴于本公开，包含所述组合物的药物组合物的制备将是本领域技术人员已知的，如Remington:The Science andPractice of Pharmacy,第21版Lippincott Williams and Wilkins,2005所示例，其通过引用并入本文。此外，对于动物(例如，人类)施用，应理解制剂应符合FDA生物标准办公室要求的无菌性、热原性、一般安全性和纯度标准。

如本文所用，“药学上可接受的载剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如，抗菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、凝胶、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等材料和其组合，如本领域普通技术人员已知的(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版Mack Printing Company,1990,第1289-1329页，其通过引用并入本文)。除非任何常规载剂与活性成分不相容，否则考虑其在药物组合物中的使用。

药物组合物可包含不同类型的载剂，这取决于它是以固体、液体还是气雾剂形式施用，以及对于诸如注射的施用途径是否需要无菌。本发明公开的组合物可经静脉内、皮内、透皮、鞘内、动脉内、内视镜下、腹膜内、鼻内、阴道内、直肠内、局部、肌内、经皮、皮下、粘膜、经口、表面、局部、吸入(例如，气雾剂吸入)、注射、输注、连续输注、直接局部灌注冲洗靶细胞、经由导管、经由灌洗、在乳膏中、在脂质组合物(例如，脂质体)中、通过局部灌注、在肿瘤微环境中、或通过如本领域普通技术人员已知的其他方法或前述的任何组合(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版Mack Printing Company,1990，其通过引用并入本文)。

制剂和施用

在各种实施方案中，本文所述的抗体或其抗原结合片段(例如，本文所述的抗BCMA抗体)可并入药物组合物中。此种药物组合物可用于例如预防和/或治疗疾病，例如BCMA相关病症。药物组合物可通过本领域技术人员已知的方法来配制(例如在Remington’sPharmaceutical Sciences,第17版,Alfonso R.Gennaro编辑,Mack Publishing Company,Easton,Pa.(1985)中描述)。

可根据受试者的年龄和状况选择适宜施用方式。含有本文所述的抗体或其片段(例如，本文所述的抗BCMA抗体)的药物组合物的单剂量可选自0.001至1000mg/kg体重的范围。另一方面，可在0.001至100000mg/体重的范围内选择剂量，但本公开不限于此类范围。施用剂量和施用方法根据患者的体重、年龄、状况等而变化，并且可由本领域技术人员根据需要加以适当选择。

在各种实施方案中，药物组合物可经配制为包括药学上可接受的载剂或赋形剂。药学上可接受的载剂的实例包括但不限于生理相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。本发明的组合物可包括药学上可接受的盐，例如酸加成盐或碱加成盐。

在各种实施方案中，包括如本文所述的抗体的组合物，例如注射用无菌制剂，可根据常规医药学实践、使用注射用蒸馏水作为媒介物来配制。例如，生理盐水或含有葡萄糖的等渗溶液和其他补充剂如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇和氯化钠可用作注射用水溶液，任选地与适宜增溶剂组合使用，所述增溶剂例如醇如乙醇和多元醇如丙二醇或聚乙二醇，以及非离子表面活性剂如聚山梨醇酯80^TM、HCO-50等。

如本文所公开，药物组合物可为本领域中已知的任何形式。此类形式包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如，可注射和可输注溶液)、分散液或悬浮液、片剂、丸剂、粉末、脂质体和栓剂。

任何特定形式的选择或使用均可能部分取决于预期的施用模式和治疗应用。例如，含有用于全身或局部递送的组合物的组合物可为可注射或可输注溶液的形式。因此，可配制组合物以通过肠胃外模式(例如，静脉内、皮下、腹膜内或肌内注射)施用。如本文所用，肠胃外施用是指除肠内和局部施用以外的施用模式，通常通过注射，并包括但不限于静脉内、鼻内、眼内、经肺、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、肺内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下腔、脊髓内、硬膜外、脑内、颅内、颈动脉内和胸骨内注射和输注。

施用途径可为肠胃外施用，例如通过注射施用、经鼻施用、经肺施用或经皮施用。可通过静脉注射、肌内注射、腹膜内注射、皮下注射进行全身或局部施用。

在各种实施方案中，本发明的药物组合物可配制成溶液、微乳液、分散液、脂质体或其他适于在高浓度下稳定储存的有序结构。无菌可注射溶液可通过将所需量的本文所述的组合物与上文所列举的一种成分或成分的组合(视需要)一起并入适当溶剂中、接着过滤灭菌来制备。通常，分散液是通过将本文所述的组合物并入含有基本分散介质和来自上文所列举成分的所需其他成分的无菌媒介物中来制备。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其产生本文所述的组合物的粉末加上来自其先前无菌过滤的溶液的任何其他所需成分(见下文)。溶液的适当流动性可例如通过使用包衣例如卵磷脂、在分散液的情况下通过保持所需粒度、和通过使用表面活性剂来保持。可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶来延长可注射组合物的吸收。

药物组合物可以包含在水或另一种药学上可接受的液体中的无菌溶液或悬浮液的可注射制剂的形式肠胃外施用。例如，药物组合物可如下配制：通过将治疗性分子与药学上可接受的媒介物或介质适当组合，所述媒介物或介质例如无菌水和生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、调味赋形剂、稀释剂、媒介物、防腐剂、粘合剂，接着混合成普遍接受的制药实践所需的单位剂量形式。包含在药物制剂中的活性成分的量使得提供指定范围内的合适剂量。油性液体的非限制性实例包括芝麻油和大豆油，并且可将其与苯甲酸苄酯或苯甲醇组合作为增溶剂。可包括的其他项目是缓冲液如磷酸盐缓冲液或乙酸钠缓冲液、舒缓剂如盐酸普鲁卡因、稳定剂如苯甲醇或苯酚、和抗氧化剂。经配制的注射剂可包装在合适的安瓿中。

在一些实施方案中，可冷冻配制组合物以在低于0℃(例如，-20℃或-80℃)的温度下储存。将冷冻保存的细胞解冻并注射给受试者。作为用于冷冻制剂的培养基，示例了以下冷冻保存介质；

用于冷冻制剂的各组分都可从任何市售来源获得。作为一个非限制性实例，上述各组分都可从以下供应商获得：

在一些实施方案中，组合物可经配制用于在2-8℃(例如，4℃)下储存长达2年(例如，一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、10个月、11个月、1年、1.5年或2年)。因此，在一些实施方案中，本文所述的组合物在2-8℃(例如，4℃)下储存至少1年是稳定的。

在特定情况下，药物组合物可经配制成溶液。在一些实施方案中，组合物可例如配制成适宜浓度并且适合于2-8℃(例如，4℃)下储存的缓冲溶液。

包括一种或多种如本文所述的工程化抗体的组合物可配制在免疫脂质体组合物中。此类制剂可通过本领域中已知的方法制备。具有延长循环时间的脂质体公开于例如美国专利第5,013,556号中。

在某些实施方案中，组合物可与保护化合物免于快速释放的载剂一起配制，例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方法是本领域中已知的。参见例如J.R.Robinson(1978)"Sustained and ControlledRelease Drug Delivery Systems,"Marcel Dekker,Inc.,New York。

在一些实施方案中，组合物可配制成适合肺内施用(例如，经由吸入器或喷雾器施用)给哺乳动物如人类的组合物。用于配制此类组合物的方法是本领域中众所周知的。干粉吸入剂制剂和用于施用所述制剂的合适系统也是本领域中已知的。肺部施用可为口服和/或鼻腔施用。用于肺部递送的药物装置的实例包括计量吸入器、干粉吸入器(DPI)和雾化器。例如，本文所述的组合物可通过干粉吸入器施用至受试者的肺部。这些吸入器是无推进剂的装置，其可将可分散且稳定的干粉制剂输送到肺部。干粉吸入器是医学领域中众所周知的，并包括但不限于：(AstraZeneca；London，England)、吸入器(Cambridge，Mass.)；(GlaxoSmithKline；London，England)；和ECLIPSE^TM(Sanofi-Aventis；Paris，France)。还参见例如PCT公开第WO 04/026380号、第WO 04/024156号和第WO 01/78693号。DPI装置已用于多肽如胰岛素和生长激素的肺部施用。在一些实施方案中，本文所述的组合物可通过计量吸入器进行肺内施用。这些吸入器依靠推进剂将离散剂量的化合物递送到肺部。其他装置和肺内施用方法在例如美国专利申请公开第20050271660号和第20090110679号中阐述，其中每一者的公开内容通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，组合物可经配制用于例如以药学上可接受的溶液、悬浮液或软膏的形式递送至眼睛。用于治疗眼睛的制剂可为无菌水溶液的形式，其含有例如额外成分，例如但不限于防腐剂、缓冲液、张度剂、抗氧化剂和稳定剂、非离子润湿剂或澄清剂，和增粘剂。如本文所述的制剂可通过常规方法，例如以滴剂的形式或通过将眼睛在含有一种或多种组合物的治疗溶液中浸洗，来局部施用于需要治疗的受试者(例如，患有AMD的受试者)的眼睛。

在某些实施方案中，用于将药物引入眼睛玻璃体腔的多种装置可能适合于施用如本文所述的组合物。例如，美国公开第2002/0026176号描述了一种含药物的塞子，所述塞子可通过巩膜插入，使得其伸入玻璃体腔以将医药剂递送至玻璃体腔中。在另一实例中，美国专利第5,443,505号描述了一种可植入装置，用于引入脉络膜上腔或无血管区域中以将药物持续释放到眼睛内部。美国专利第5,773,019号和第6,001,386号各自公开了一种可附接到眼睛巩膜表面的可植入药物递送装置。用于向眼睛递送治疗剂的其他方法和装置(例如，经巩膜贴剂和经由隐形眼镜递送)描述于例如Ambati和Adamis(2002)Prog Retin Eye Res21(2):145-151；Ranta和Urtti(2006)Adv Drug Delivery Rev 58(11):1164-1181；Barocas和Balachandran(2008)Expert Opin Drug Delivery 5(1):1-10(10)；Gulsen和Chauhan(2004)Invest Opthalmol Vis Sci 45:2342-2347；Kim等人,(2007)OphthalmicRes39:244-254；和PCT公开第WO04/073551号，其公开内容通过引用整体并入本文。

在某些实施方案中，如本文所述的抗体的施用是通过向受试者施用编码所述抗体的核酸来实现的。可将编码本文所述治疗性抗体的核酸掺入基因构建体中以用作基因治疗方案的一部分，以递送可用于在细胞内表达和产生抗体的核酸。此类组分的表达构建体可在任何治疗有效的载剂中施用，例如能够有效地将组分基因递送至体内细胞的任何制剂或组合物。方法包括将受试基因插入病毒载体，包括重组反转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、慢病毒和单纯疱疹病毒-1(HSV-1)，或重组细菌或真核质粒。病毒载体可直接转染细胞；质粒DNA可借助于例如阳离子脂质体(lipofectin)或衍生的多聚赖氨酸偶联物、短杆菌素S、人工病毒包膜或其他此类细胞内载剂，以及直接注射基因构建体或CaPO₄沉淀来递送(参见例如WO04/060407)。合适的反转录病毒的实例包括本领域技术人员已知的pLJ、pZIP、pWE和pEM(参见例如Eglitis等人(1985)Science 230:1395-1398；Danos和Mulligan(1988)ProcNatl Acad Sci USA 85:6460-6464；Wilson等人,(1988)Proc Natl Acad Sci USA 85:3014-3018；Armentano等人,(1990)Proc Natl Acad Sci USA 87:6141-6145；Huber等人,(1991)Proc Natl Acad Sci USA 88:8039-8043；Ferry等人,(1991)Proc Natl Acad SciUSA 88:8377-8381；Chowdhury等人,(1991)Science 254:1802-1805；van Beusechem等人,(1992)Proc Natl Acad Sci USA 89:7640-7644；Kay等人,(1992)Human Gene Therapy 3:641-647；Dai等人,(1992)Proc Natl Acad Sci USA 89:10892-10895；Hwu等人,(1993)JImmunol150:4104-4115；美国专利第4,868,116号和第4,980,286号；和PCT公开第WO89/07136号、第WO89/02468号、第WO89/05345号和第WO92/07573号)。另一种病毒基因递送系统利用腺病毒衍生的载体(参见例如Berkner等人,(1988)BioTechniques 6:616；Rosenfeld等人,(1991)Science 252:431-434；和Rosenfeld等人,(1992)Cell68:143-155)。来源于腺病毒Ad 5型dl324株或其他腺病毒株(例如，Ad2、Ad3、Ad7等)的合适的腺病毒载体是本领域技术人员已知的。另一个可用于递送受试基因的病毒载体系统是腺相关病毒(AAV)。参见例如Flotte等人,(1992)Am J Respir Cell Mol Biol 7:349-356；Samulski等人,(1989)JVirol 63:3822-3828；和McLaughlin等人,(1989)J Virol 62:1963-1973。

在各种实施方案中，皮下施用可通过例如注射器、预充式注射器、自动注射器(例如，一次性或可再用的)、笔型注射器、贴片注射器、可佩戴注射器、带有皮下输注组的移动式注射器输液泵、或其他与进行皮下注射的抗体药物结合的装置来完成。

本公开的注射系统可采用如美国专利第5,308,341号中所述的递送笔。笔装置，最常用于向糖尿病患者自我递送胰岛素，是本领域中众所周知的。此类装置可包含至少一个注射针头(例如，长约5mm至8mm的31号针头)，通常预填充有一个或多个治疗单位剂量的治疗溶液，并且可用于尽可能少痛苦地向受试者快速递送溶液。一种药物递送笔包括小瓶支架，其中可接收治疗药物或其他药物的小瓶。笔可为完全机械装置，或者其可与电子电路结合以准确地设置和/或指示注射到使用者体内的药物剂量。参见例如美国专利第6,192,891号。在一些实施方案中，笔装置的针头是一次性的并且试剂盒包括一根或多根一次性替换针头。适用于递送任何一种本发明特征组合物的笔装置也描述于例如美国专利第6,277,099号；第6,200,296号；和第6,146,361号，其中每一者的公开内容通过引用整体并入本文。一种基于微针的笔装置描述于例如美国专利第7,556,615号中，其公开内容通过引用整体并入本文。还参见由Scandinavian Health Ltd制造的精密笔型注射器(PPI)装置MOLLY^TM。

在一些实施方案中，本文所述的组合物可通过局部施用治疗性地递送至受试者。如本文所用，“局部施用”或“局部递送”可指不依赖于将组合物或剂经由血管系统运输至其预期靶组织或部位的递送。例如，可通过注射或植入组合物或剂或通过注射或植入含有组合物或剂的装置来递送组合物。在某些实施方案中，在靶组织或部位附近局部施用后，组合物或剂或其一种或多种组分可扩散到非施用部位的预期靶组织或部位。

在一些实施方案中，本文提供的组合物以单位剂型存在，所述单位剂型可适合自我施用。此种单位剂型可提供在容器内，通常例如小瓶、药筒、预填充注射器或一次性笔。计量器，例如在美国专利第6,302,855号中描述的计量器装置，也可例如与本文所述的注射系统一起使用。

本文所述的组合物的合适剂量(所述剂量能够治疗或预防受试者的病症)可取决于多种因素，包括例如待治疗受试者的年龄、性别和体重以及所使用的特定抑制剂化合物。例如，与如本文所述的抗体的不同制剂的剂量相比，治疗患有BCMA相关病症的受试者可能需要不同剂量的包括所述抗体的一种组合物。影响施用至受试者的剂量的其他因素包括例如病症的类型或严重程度。例如，患有一种BCMA相关病症的受试者可能需要与患有另一种BCMA相关病症的受试者施用不同的剂量。其他因素可包括例如同时或先前影响受试者的其他医学病症、受试者的一般健康状况、受试者的遗传倾向、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合和任何其他被施用至受试者的治疗剂。还应理解，任何特定受试者的具体剂量和治疗方案也可基于治疗医师的判断进行调整。

在一些实施方案中，本文所述的组合物以固定剂量或以毫克/千克(mg/kg)剂量施用。在一些实施方案中，选择剂量以减少或避免产生对抗组合物中的一种或多种抗体或其抗原结合片段的抗体或其他宿主免疫反应。尽管绝非意在限制，例如本文所述的组合物的抗体的示例性剂量包括例如1-1000mg/kg、1-100mg/kg、0.5-50mg/kg、0.1-100mg/kg、0.5-25mg/kg、1-20mg/kg和1-10mg/kg。本文所述的组合物的示例性剂量包括但不限于0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、4mg/kg、8mg/kg或20mg/kg。

在一些实施方案中，组合物以足以减轻或治疗与异常BCMA表达相关的疾病的一种或多种症状的剂量和施用间隔施用。在一些实施方案中，每天、每天两次、每周一次、每周两次、每周三次、每两周一次、每月一次、每2个月一次、每6个月一次或每年一次施用组合物。在一些实施方案中，治疗包括单次施用抗体。

在一些实施方案中，组合物是包含一种或多种赋形剂的药物组合物。

药物溶液可包括治疗有效量的本文所述的组合物。此类有效量可由本领域普通技术人员部分地基于所施用的组合物的效果或组合物与一种或多种额外的活性剂的组合效果容易地确定(如果使用多于一种剂)。本文所述的组合物的治疗有效量还可根据例如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及组合物(和一种或多种额外的活性剂)引发个体的所需反应的能力的因素而变化，所需反应例如至少一种疾患参数的改善，例如BCMA相关病症的至少一种症状的改善。例如，治疗有效量的本文所述的组合物可抑制(减轻其严重程度或消除其发生)和/或预防特定病症和/或本领域中已知的或本文描述的所述特定病症的任何一种症状。治疗有效量也是其中组合物的任何毒性或有害作用被治疗有益作用超过的量。

本文所述的任何组合物的合适人类剂量可在例如I期剂量递增研究中进一步评价。参见例如vanGurp等人,(2008)Am J Transplantation8(8):1711-1718；Hanouska等人,(2007)Clin Cancer Res 13(2,第1部分):523-531；和Hetherington等人,(2006)Antimicrobial Agents and Chemotherapy 50(10):3499-3500。

组合物的毒性和治疗功效可通过细胞培养物或实验动物(例如，任何BCMA相关病症的动物模型)中的已知医药学程序确定。这些程序可用于例如确定LD₅₀(50％人群致死剂量)和ED₅₀(50％人群治疗有效剂量)。毒性作用与治疗作用之间的剂量比是治疗指数，并且可将其表示为比值LD₅₀/ED₅₀。本文所述的表现出高治疗指数的组合物是优选的。虽然可使用表现出毒性副作用的组合物，但应小心地设计一种将此类化合物靶向到受影响组织的部位的递送系统，并最小化对正常细胞的潜在损害，从而减少副作用。

本领域技术人员将理解，从细胞培养测定和动物研究获得的数据可用于配制用于人类的剂量范围。本文所述的组合物的适当剂量通常在包括ED₅₀并且毒性很小或没有毒性的组合物的循环浓度范围内。取决于所用剂型和所用施用途径，剂量可在此范围内变化。对于本文所述的组合物，治疗有效剂量可最初从细胞培养测定中估计。可在动物模型中配制剂量以实现循环血浆浓度范围，所述范围包括如在细胞培养物中确定的I₀(即，实现症状的半数最大抑制的抗体浓度)。此信息可用于更准确地确定人类的有用剂量。例如，可通过高效液相色谱法测量血浆中的水平。在一些实施方案中，例如，在需要局部施用(例如，对眼睛或关节)的情况下，细胞培养或动物建模可用于确定在局部部位内达到治疗有效浓度所需的剂量。

组合疗法

根据本公开，抗体、抗原结合片段、CAR、表达CAR的载体和细胞以及本文所述的组合物可与其他疗法组合用于癌症治疗。

在各种实施方案中，如本文所述的抗BCMA抗体可包括在还包括向受试者施用至少一种额外剂的治疗过程中。在各种实施方案中，与如本文所述的抗BCMA抗体组合施用的额外剂可为化学治疗剂。

在一些实施方案中，抗BCMA抗体、其片段可偶联至(例如，连接至)治疗剂(例如，化学治疗剂和放射性原子)用于结合至癌细胞，将治疗剂递送至癌细胞，并杀死表达人类BCMA的癌细胞。在一些实施方案中，抗BCMA抗体连接至治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂是化学治疗剂、细胞因子、放射性原子、siRNA或毒素。在一些实施方案中，治疗剂是化学治疗剂。在一些实施方案中，剂是放射性原子。

在一些实施方案中，所述方法可与用于BCMA相关病症的其他疗法结合进行。例如，所述组合物可在化学疗法的同时、之前或之后施用至受试者。在一些实施方案中，所述组合物可在过继治疗方法的同时、之前或之后施用于受试者。

在各种实施方案中，与如本文所述的抗BCMA抗体组合施用的额外剂可与抗BCMA抗体同时施用，与抗BCMA抗体在同一天施用，或与抗BCMA抗体在同一周施用。在各种实施方案中，与如本文所述的抗BCMA抗体组合施用的额外剂可与抗BCMA抗体在单一制剂中施用。在某些实施方案中，以与如本文所述的抗BCMA抗体的施用暂时分开的方式施用额外剂，例如，在施用抗BCMA抗体之前或之后一个或多个小时、之前或之后一天或多天、之前或之后一周或多周，或之前或之后一个或多个月。在各种实施方案中，一种或多种额外剂的施用频率可与如本文所述的抗BCMA抗体的施用频率相同、相似或不同。

组合疗法中涵盖包括施用如本文所述的两种不同抗体的治疗方案和/或包括通过多种制剂和/或施用途径施用如本文所述的抗体的治疗方案。

在一些实施方案中，组合物可与一种或多种额外治疗剂一起配制，例如用于治疗或预防受试者中BCMA相关病症(例如，癌症或自身免疫病症)的额外疗法。用于治疗受试者中BCMA相关病症的额外剂可根据所治疗的特定病症而变化，但可包括但不限于利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松、异环磷酰胺(osfamide)、卡铂、依托泊苷、地塞米松、阿糖胞苷、顺铂、环磷酰胺或氟达拉滨。

本文所述的组合物可替换或增强先前或当前施用的疗法。例如，在用本文所述的组合物治疗后，一种或多种额外活性剂的施用可停止或减少，例如，以更低水平施用，例如，降低施用本文所述的抗BCMA抗体后交叉竞争BCMA结合的参考抗体的水平。在一些实施方案中，可维持先前疗法的施用。在一些实施方案中，将维持先前疗法直到组合物的水平达到足以提供治疗效果的水平。所述两种疗法可组合施用。

在某些实施方案中，本实施方案的组合物和方法涉及免疫细胞群体(包括NK细胞群体)与至少一种额外疗法的组合。额外疗法可为放射疗法、手术(例如，乳房肿瘤切除术和乳房切除术)、化学疗法、基因疗法、DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、免疫疗法、骨髓移植、纳米疗法、单克隆抗体疗法、激素疗法、溶瘤病毒、或前述的组合。额外疗法可为辅助或新辅助疗法的形式。

在一些实施方案中，额外疗法为施用小分子酶抑制剂或抗转移剂。在一些实施方案中，额外疗法是施用副作用限制剂(例如，旨在减少治疗副作用的发生和/或严重程度的剂，例如抗恶心剂等)。在一些实施方案中，额外疗法是放射疗法。在一些实施方案中，额外疗法是手术。在一些实施方案中，额外疗法是放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，额外疗法是γ照射。在一些实施方案中，额外疗法是靶向PBK/AKT/mTOR途径的疗法、HSP90抑制剂、微管蛋白抑制剂、细胞凋亡抑制剂和/或化学预防剂。额外疗法可为本领域中已知的一种或多种化学治疗剂。

在特定实施方案中，除了本公开的创造性细胞疗法之外，可能已经、可能或将向个体提供针对癌症的特定额外疗法，包括手术、放射线、免疫疗法(除了本公开的细胞疗法)、激素疗法、基因疗法、化学疗法等中的一者或多者。

可在相对于额外的癌症疗法之前、期间、之后或以各种组合施用免疫细胞疗法。施用的时间间隔可从同时至数分钟至数天至数周。在向患者分开提供免疫细胞疗法与额外治疗剂的实施方案中，人们通常会确保在每次递送时间之间并不存在显著时间段，使得两种化合物仍能够对患者有利地发挥组合作用。在此类情况下，预期可在彼此相距约12h至24h或72h内，并且更特定而言，在彼此相距约6-12h内向患者提供抗体疗法和抗癌疗法。在一些情况下，可能需要显著延长治疗时间段，其中在各自施用之间流逝数天(2、3、4、5、6或7)至数周(1、2、3、4、5、6、7或8)。

可采用各种组合。对于下面的实例，免疫细胞疗法是“A”并且抗癌疗法是“B”：

A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/B

B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A

B/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A

考虑到剂的毒性(如果有的话)，将本实施方案的任何化合物或细胞疗法施用于患者将遵循用于施用此类化合物的一般方案。因此，在一些实施方案中，存在监测可归因于组合疗法的毒性的步骤。

A.化学疗法

根据本实施方案，可使用多种化学治疗剂。术语“化学疗法”是指使用药物治疗癌症。“化学治疗剂”用于表示在癌症治疗中施用的化合物或组合物。这些剂或药物根据它们在细胞内的活动模式进行分类，例如，它们是否以及在什么阶段影响细胞周期。或者，可基于其直接交联DNA、嵌入DNA或通过影响核酸合成诱导染色体和有丝分裂畸变的能力来表征剂。

化学治疗剂的实例包括烷化剂，例如噻替哌和环磷酰胺；烷基磺酸盐，例如白消安、异丙硫丹和哌泊硫丹；氮丙啶类，例如苯多巴、卡波醌、美多巴和乌多巴；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺、三乙烯三聚氰胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺；番荔枝(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康)；苔藓抑素；卡利他汀；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他丁；多卡霉素(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；刺五加素；潘拉司他汀；肉毒杆菌素；海绵抑素；氮芥，例如苯丁酸氮芥、氯萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、甲氯乙胺、盐酸甲氯乙胺、美法仑、诺维比辛、芬乃斯特、泼尼莫司汀、曲磷酰胺和尿嘧啶芥；亚硝基脲类，例如卡莫司汀、氯脲佐菌素、氟替莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷尼司汀；抗生素，例如烯二炔抗生素(例如，加利车霉素，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ω1I)；达尼霉素，包括达尼霉素A；双膦酸盐，例如氯膦酸盐；埃斯帕霉素；以及新制癌素发色团和相关的色蛋白烯二炔抗生素发色团、阿克拉霉素、放线菌素、蒽霉素(authrarnycin)、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素、卡拉霉素、胭脂红霉素、嗜癌素、色霉素、放线菌素、柔红霉素、去托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、埃索比星、伊达比星、马赛霉素、丝裂霉素，例如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、奎拉霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁和佐柔比星；抗代谢物，例如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，例如二甲叶酸、蝶罗呤和曲美沙特；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多西氟尿苷、依西他滨和氟尿苷；雄激素，例如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷和睾酮内酯；抗肾上腺素，例如米托坦和三氯司坦；叶酸补充剂，例如亚叶酸；乙酰丙酮；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；吖啶；苯丁酸；比生群；依达曲沙；脱氧麻黄碱；去甲高辛；二嗪酮；艾弗米赛(elformithine)；乙酸艾立替铵；埃坡霉素；胃泌素；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；洛尼达宁；美登素类，例如美登素和安丝霉素；米托胍；米托蒽醌；莫匹丹莫；硝基苯胺；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSK多糖复合物；雷佐生；根瘤菌素；西佐非兰；螺锗；肌松酸；三嗪酮；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌素(尤其是T-2毒素、维拉库林A、罗瑞丁A和蛇形菌素)；聚氨酯；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；米托溴醇；米托内酯；哌泊溴烷；加西托星；阿拉伯糖苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；紫杉醇类，例如太平洋紫杉醇和多西他赛吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；铂配位络合物，例如顺铂、奥沙利铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺万龙；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；伊立替康(例如，CPT-11)；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄醇，例如视黄酸；卡培他滨；卡铂、丙卡巴肼、普利霉素、吉西他滨、萘维滨、法尼基蛋白转移酶抑制剂、转铂和上述任何物质的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

B.放射疗法

导致DNA损伤并已广泛使用的其他因素包括通常称为γ射线、X射线和/或放射性同位素向肿瘤细胞的定向递送。还考虑了其他形式的DNA损伤因素，例如微波、质子束照射(美国专利5,760,395和4,870,287)和UV照射。很可能所有这些因素都对DNA、DNA前体、DNA的复制和修复以及染色体的组装和维持产生广泛损伤。X射线的剂量范围为每天50至200伦琴持续延长时间段(3至4周)的剂量到2000至6000伦琴的单次剂量。放射性同位素的剂量范围变化很大，并且取决于同位素的半衰期、发射的辐射的强度和类型以及肿瘤细胞的吸收。

C.免疫疗法

本领域技术人员将理解额外的免疫疗法可与实施方案的方法组合或结合使用。在癌症治疗的情况下，免疫疗法通常依赖于使用免疫效应细胞和分子来靶向和破坏癌细胞。利妥昔单抗是这样的实例。免疫效应物可为例如对肿瘤细胞表面上的一些标志物具有特异性的抗体。抗体可单独作为治疗的效应物，或者它可募集其他细胞来实际实现细胞杀伤。抗体也可与药物或毒素(化学治疗剂、放射性核素、蓖麻毒素A链、霍乱毒素、百日咳毒素等)偶联并用作靶向剂。或者，效应物可为携带表面分子的淋巴细胞，所述表面分子直接或间接地与肿瘤细胞靶标相互作用。各种效应细胞包括细胞毒性T细胞和NK细胞。

抗体-药物偶联物已成为开发癌症疗法的突破性方法。癌症是世界上主要的死亡原因之一。抗体-药物偶联物(ADC)包含与细胞杀伤药物共价连接的单克隆抗体(MAb)。此方法将MAb针对其抗原靶标的高特异性与高效的细胞毒性药物相结合，从而产生将有效负载(药物)递送至具有富集抗原水平的肿瘤细胞的“武装的”MAb。所述药物的靶向递送也最小化其在正常组织中的暴露，从而降低毒性并提高治疗指数。FDA批准的两种ADC药物，2011年(布仑妥昔单抗维多丁)和2013年(恩美曲妥珠单抗或T-DM1)，验证了所述方法。目前有多于30种ADC候选药物处于癌症治疗临床试验的各个阶段(Leal等人，2014)。随着抗体工程化和接头-有效负载优化变得越来越成熟，新ADC的发现和开发越来越依赖于适合于这种方法的新靶标的识别和验证以及靶向MAb的产生。ADC靶标的两个标准是肿瘤细胞中上调/高水平的表达和稳健的内化。

在免疫疗法的一个方面，肿瘤细胞必须带有一些易于靶向，即不存在于大多数其他细胞上的标志物。存在许多肿瘤标志物并且这些中的任一者都可能适合于在本实施方案的上下文中靶向。常见肿瘤标志物包括CD20、癌胚抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、TAG-72、HMFG、唾液酸化路易斯抗原、MucA、MucB、PLAP、层粘连蛋白受体、erb B和p155。免疫疗法的另一个方面是将抗癌作用与免疫刺激作用相结合。还存在免疫刺激分子，包括：细胞因子如IL-2、IL-4、IL-12、GM-CSF、γ-IFN，趋化因子如MIP-1、MCP-1、IL-8，和生长因子如FLT3配体。

目前正在研究或使用的免疫疗法的实例是免疫佐剂，例如牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、二硝基氯苯和芳香族化合物(美国专利5,801,005和5,739,169；Hui和Hashimoto，1998；Christodoulides等人，1998)；细胞因子疗法，例如干扰素α、β和γ、IL-1、GM-CSF和TNF(Bukowski等人，1998；Davidson等人，1998；Hellstrand等人，1998)；基因疗法，例如TNF、IL-1、IL-2和p53(Qin等人，1998；Austin-Ward和Villaseca，1998；美国专利5,830,880和5,846,945)；和单克隆抗体，例如抗CD20、抗神经节苷脂GM2和抗p185(Hollander，2012；Hanibuchi等人，1998；美国专利5,824,311)。预期一种或多种抗癌疗法可与本文所述的抗体疗法一起使用。

在一些实施方案中，免疫疗法可为免疫检查点抑制剂。免疫检查点调高信号(例如，共刺激分子)或调低信号。可通过免疫检查点阻断靶向的抑制性免疫检查点包括腺苷A2A受体(A2AR)、B7-H3(也称为CD276)、B和T淋巴细胞衰减剂(BTLA)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4，也称为CD152)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)、杀伤细胞免疫球蛋白(KIR)、淋巴细胞活化基因3(LAG3)、程序化死亡1(PD-1)、T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3(TIM-3)和T细胞活化的V结构域Ig抑制因子(VISTA)。特别是，免疫检查点抑制剂靶向PD-1轴和/或CTLA-4。

免疫检查点抑制剂可为药物，例如小分子、配体或受体的重组形式，或者特别是抗体，例如人类抗体(例如，国际专利公开WO2015016718；Pardoll,Nat Rev Cancer,12(4):252-64,2012；两者都通过引用并入本文)。可使用免疫检查点蛋白或其类似物的已知抑制剂，特别是可使用嵌合、人源化或人类形式的抗体。如本领域技术人员所知，替代和/或等效名称可用于本公开中提到的某些抗体。此类替代和/或等效名称在本公开的上下文中是可互换的。例如，已知兰布鲁珠单抗(lambrolizumab)还以替代和等效名称MK-3475和派姆单抗(pembrolizumab)为人所知。

在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1与其配体结合伴侣结合的分子。在一个特定方面，PD-1配体结合伴侣是PDL1和/或PDL2。在另一个实施方案中，PDL1结合拮抗剂是抑制PDL1与其结合伴侣结合的分子。在一个特定方面，PDL1结合伴侣是PD-1和/或B7-1。在另一个实施方案中，PDL2结合拮抗剂是抑制PDL2与其结合伴侣结合的分子。在一个特定方面，PDL2结合伴侣是PD-1。拮抗剂可为抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。示例性抗体描述于美国专利第US8735553号、第US8354509号和第US8008449号，全部通过引用并入本文。用于本文提供的方法中的其他PD-1轴拮抗剂是本领域中已知的，例如描述于美国专利申请第US20140294898号、第US2014022021号和第US20110008369号，全部通过引用并入本文。

在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体(例如，人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体选自由以下组成的组：纳武单抗、派姆单抗和CT-011。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是免疫粘附素(例如，包含融合到恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)的PDL1或PDL2的细胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。纳武单抗，也称为MDX-1106-04、MDX-1106、ONO-4538、BMS-936558和是一种抗PD-1抗体，描述于WO2006/121168。派姆单抗，也称为MK-3475、Merck 3475、兰布鲁珠单抗、和SCH-900475，是一种抗PD-1抗体，描述于WO2009/114335。CT-011，也称为hBAT或hBAT-1，是一种抗PD-1抗体，描述于WO2009/101611。AMP-224，也称为B7-DCIg，是一种PDL2-Fc融合可溶性受体，描述于WO2010/027827和WO2011/066342。

可在本文提供的方法中靶向的另一个免疫检查点是细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)，也称为CD152。人类CTLA-4的完整cDNA序列具有Genbank登录号L15006。CTLA-4存在于T细胞表面，并且当与抗原呈递细胞表面的CD80或CD86结合时充当“关闭”开关。CTLA4是免疫球蛋白超家族的成员，其在辅助T细胞表面表达并向T细胞传递抑制信号。CTLA4与T细胞共刺激蛋白CD28相似，并且两种分子都与抗原呈递细胞上的CD80和CD86(也分别称为B7-1和B7-2)结合。CTLA4向T细胞传递抑制信号，而CD28传递刺激信号。细胞内CTLA4也存在于调节性T细胞中，并且可能对其功能很重要。经由T细胞受体和CD28活化T细胞导致CTLA-4(B7分子的抑制性受体)的表达增加。

在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体(例如，人类抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。

适用于本方法的抗人类CTLA-4抗体(或从其衍生的VH和/或VL结构域)可使用本领域中众所周知的方法产生。或者，可使用本领域公认的抗CTLA-4抗体。例如，公开于以下的抗CTLA-4抗体可在本文中所公开的方法中使用：US 8,119,129、WO 01/14424、WO 98/42752；WO 00/37504(CP675,206，也称为曲美木单抗(tremelimumab)；以前称为曲美木单抗(ticilimumab))，美国专利第6,207,156号；Hurwitz等人,(1998)Proc Natl Acad Sci USA95(17):10067-10071；Camacho等人,(2004)J Clin Oncology 22(145):Abstract No.2505(抗体CP-675206)；和Mokyr等人,(1998)Cancer Res58:5301-5304。上述出版物中的每一者的教导通过引用并入本文。也可使用与任何这些本领域公认的抗体竞争结合CTLA-4的抗体。例如，人源化CTLA-4抗体描述于国际专利申请第WO2001014424号、第WO2000037504号和美国专利第8,017,114号；全部通过引用并入本文。

示例性抗CTLA-4抗体是伊匹单抗(也称为10D1、MDX-010、MDX-101和)或其抗原结合片段和变体(参见例如WO 01/14424)。在其他实施方案中，抗体包含伊匹单抗的重链和轻链CDR或VR。因此，在一个实施方案中，抗体包含伊匹单抗的VH区的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及伊匹单抗的VL区的CDR1、CDR2和CDR3结构域。在另一个实施方案中，抗体与CTLA-4上与上述抗体相同的表位竞争结合和/或结合。在另一个实施方案中，所述抗体与上述抗体具有至少约90％的可变区氨基酸序列同一性(例如，与伊匹单抗具有至少约90％、95％或99％的可变区同一性)。

用于调节CTLA-4的其他分子包括CTLA-4配体和受体，例如描述于美国专利第US5844905号、第US5885796号和国际专利申请第WO1995001994号和第WO1998042752号；全部通过引用并入本文，并且免疫粘附素例如描述于美国专利第US8329867号，通过引用并入本文。

D.手术

大约60％癌症患者将接受某种类型的手术，包括预防性、诊断性或分期、治愈性和姑息性手术。治愈性手术包括切除，其中全部或部分癌组织被物理去除、切除和/或破坏，并且可与其他疗法结合使用，所述其他疗法例如本实施方案的治疗、化学疗法、放射疗法、激素疗法、基因疗法、免疫疗法和/或替代疗法。肿瘤切除是指对至少部分肿瘤进行物理去除。除肿瘤切除外，手术治疗包括激光手术、冷冻手术、电手术和显微镜控制手术(莫氏手术)。

在切除癌细胞、组织或肿瘤的全部或一部分后，可能会在体内形成空腔。治疗可通过灌注、直接注射或向所述区域局部应用额外抗癌疗法来完成。此类治疗可重复，例如，每1、2、3、4、5、6或7天，或每1、2、3、4和5周或每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。这些治疗也可具有不同剂量。

E.重组基因技术

根据本公开，可采用本领域中技术范围内的常规分子生物学、微生物学和重组DNA技术。此类技术在文献中有所描述(参见例如Sambrook,Fritsch和Maniatis,MolecularCloning:A Laboratory Manual,第二版(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；DNA Cloning:A Practical Approach,第I卷和第II卷(D.N.Glover编,1985)；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait编辑1984)；Nucleic AcidHybridization(B.D.Hames和S.J.Higgins编辑(1985))；Transcription And Translation(B.D.Hames和S.J.Higgins编辑(1984))；Animal Cell Culture(R.I.Freshney编辑(1986))；Immobilized Cells and Enzymes(IRL Press，(1986))；B.Perbal,A PracticalGuide To Molecular Cloning(1984)；F.M.Ausubel等人(编辑),Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.(1994)。

基因例如编码多肽如本文所述的抗BCMA抗体的核酸的重组表达，可包括构建含有编码所述多肽的核酸的表达载体。在一些实施方案中，BCMA核酸序列可为用于哺乳动物细胞表达的密码子优化序列。一旦获得多核苷酸，就可使用本领域中已知的技术通过重组DNA技术来产生用于生产多肽的载体。已知的方法可用于构建包含多肽编码序列和适当的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括例如体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。

可通过常规技术将表达载体转移到宿主细胞中，然后可通过常规技术培养转染的细胞以产生多肽。本文所提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献都通过引用整体并入。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的，而不旨在具限制性。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。尽管与本文所述的方法和材料类似或等效的方法和材料可用于本发明的实践或测试，但本文阐述了适宜方法和材料。

F.其他剂

预期其他剂可与本实施方案的某些方面组合使用以提高治疗的疗效。这些额外剂包括影响细胞表面受体和GAP连接上调的剂、细胞生长抑制剂和分化剂、细胞粘附抑制剂、增加过度增殖细胞对细胞凋亡诱导剂的敏感性的剂或其他生物剂。通过提高GAP连接的数量来增加细胞间信号传导将增加对邻近过度增殖细胞群体的抗过度增殖作用。在其他实施方案中，细胞生长抑制剂或分化剂可与本实施方案的某些方面组合使用以提高治疗的抗过度增殖功效。考虑使用细胞粘附抑制剂来提高本实施方案的功效。细胞粘附抑制剂的实例是局部粘附激酶(FAK)抑制剂和洛伐他汀。进一步预期增加过度增殖细胞对细胞凋亡的敏感性的其他剂，例如抗体c225，可与本实施方案的某些方面组合使用以提高治疗功效。

本公开的试剂盒

本文所述的任何组合物都可包含在试剂盒中。在一个非限制性实例中，细胞、产生细胞的试剂、载体和产生载体的试剂和/或其组分可包含在试剂盒中。在某些实施方案中，NK细胞可包含在试剂盒中，并且它们可能或可能尚未表达包含(a)CD28铰链、任选的细胞因子或任选的自杀基因的BCMA-CAR。这样的试剂盒可以具有或可以不具有用于操纵细胞的一种或多种试剂。此类试剂包括例如小分子、蛋白质、核酸、抗体、缓冲液、引物、核苷酸、盐和/或其组合。编码一种或多种CAR、自杀基因产物和/或细胞因子的核苷酸可包括在试剂盒中。蛋白质，例如细胞因子或抗体，包括单克隆抗体可包括在试剂盒中。编码工程化CAR受体组分的核苷酸可包括在试剂盒中，包括产生相同组分的试剂。

实施例

包括以下实施例以证明本发明的某些实施方案。本领域技术人员应当理解，以下实施例中公开的技术代表发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，并且因此可认为构成其实践的某些模式。然而，根据本公开，本领域技术人员应理解，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可对所公开的特定实施方案进行许多改变并且仍然获得类似或相似的结果。

实施例1：抗BCMA单克隆抗体的产生和结合

本实施例展示了抗BCMA抗体的表征。根据文献中描述的方法使小鼠(携带人类转基因重链基因座和κ基因座的Trianni小鼠，8-10周龄)免疫。对于初次免疫，向动物跗关节注射作为与等体积的GerbUMM的乳液的5μg重组BCMA-小鼠Fc。每3-4天以相同方式使小鼠免疫，共10次加强免疫。具有高抗原特异性抗体滴度的动物在脾脏和淋巴结收获前四天用相同的免疫原进行融合前加强，以进行RNA提取或杂交瘤融合的进一步处理。

从小鼠分离脾脏并转移到含有10ml RPMI、10％FBS(0.2um过滤)的50ml管中，并且物理分离以分离淋巴细胞。通过以1200rpm离心10分钟来收获淋巴细胞。使淋巴细胞悬浮在EasySep缓冲液(2ml；0.2um过滤)中。

通过产生和选择免疫的scFv噬菌体展示文库来鉴定抗BCMA scFv。首先，从先前用表达BCMA的CHO细胞免疫的一只个别小鼠的脾细胞的单细胞悬液中纯化总RNA。然后使用总RNA作为模板通过随机引物cDNA从小鼠中生成scFv文库，以从小鼠抗体基因中扩增可变区。将重链和κ链扩增子组合并克隆到噬粒载体中。针对重组BCMA蛋白(人类BCMA-Fc、人类BCMA-6His)和/或表达食蟹猴BCMA的细胞进行了三轮选择以鉴定BCMA特异性scFv噬菌体克隆。然后通过ELISA或流式细胞术筛选所选scFv克隆的周质提取物。选择克隆以进行测序，并通过Octet使用周质提取物确认结合。经由噬菌体展示总共鉴定了19个克隆。除了19个克隆外，其他42个新鉴定的BCMA抗体克隆也用于抗体选择。表2示出了人类BCMA scFv对人类BCMA的结合亲和力。

Octet分析

进行Octet结合分析以评价与BCMA结合的动力学。

使用具有一组抗BCMA克隆的人类BCMA蛋白进行Octet结合测定以进行结合表征。首先将人类BCMA捕获到适当涂层的Octet传感器尖端上，然后将其定位到含有抗BCMA克隆的孔中以进行关联。在将传感器尖端放置在解离孔中后，计算每个抗BCMA克隆和相应的人类BCMA蛋白的相互作用的反应。

FACS分析

使用过表达BCMA的CHO细胞，通过FACS测试抗BCMA克隆的细胞上结合。将细胞与抗BCMA克隆一起温育，并且随后与能够结合抗BCMA克隆的二抗一起温育。这些样品经适当洗涤并在Attune NxT流式细胞仪(Thermo Fisher Scientific)上进行评估。FACS分析在FlowJo中进行。

表3示出了示例性抗BCMA克隆对示例性抗BCMA抗体和人类BCMA的Octet和FACS分析结果。观察到示例性Fab(IgG)具有高k_on率和低k_off率，其中K_D值在低皮摩尔范围内。

表3：从周质提取物中通过噬菌体展示产生的scFv的Octet分析。

表4：2个先导抗BCMA克隆的Octet和FACS分析。

实施例2：嵌合抗原受体的构建体

本实施例示出了用于减少肿瘤负荷的示例性CAR构建体。图1示出了包含BCMA结合区的CAR构建体。

BCMACAR包含抗BCMA特异性结合物、IgG1铰链或CD28铰链、CD28跨膜结构域和IL-15细胞因子(例如，可溶性IL-15)。此种CAR可包含SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47或SEQ IDNO:49的氨基酸。

实施例3：BCMA IgG铰链和BCMACD28铰链CAR构建体的体外功效

本实施例示出了与CB-NK细胞中的IgG铰链结构域相比，包含CD28铰链结构域作为SEQ ID NO 45的BCMACAR的功效。

在标准的四小时51铬(51Cr)释放测定中评估了CB-NK细胞的细胞毒性。简而言之，将靶细胞加载有51Cr，洗涤，并与CB-NK细胞共培养4小时，所述CB-NK细胞用具有不同BCMA特异性scFv结合物的不同CAR构建体转导，之后去除上清液并使用γ计数器测量51Cr水平。

BCMA结合物在含有IgG1铰链或CD28铰链的CAR骨架中进行了测试。然后将这些CAR转导到CB-NK中，并用铬释放杀伤测定测试体外杀伤功效。

所有构建体都表现出比未转导的CB-NK更高的杀伤，含有CD28铰链的构建体显示出略微增强的杀伤，特别是在较低的E:T比率下，如图2中可见。

实施例4：CD28铰链结构域与IgG1铰链结构域在减少体内肿瘤负荷方面的比较。

本实施例示例了使用具有CD28铰链的BCMA-CAR构建体减少小鼠肿瘤负荷的益处。

1000万个BCMACAR-NK细胞(约70％CAR+ve)，包含BCMAIg1、BCMAIg2、BCMA28-1或BCMA28-2，用于此实验。10-12周龄雌性NSG小鼠在肿瘤接种前24小时以150cGy进行全身照射。MM.1S-ffluc-MDA细胞在PBS悬浮液中制备，浓度为2.5x10⁶个细胞/毫升，用于以0.5x10^6/动物静脉内接种细胞。在给药前1天、肿瘤接种后6天拍摄生物发光图像，并基于总通量将动物随机分组，每组4或5只动物。动物在肿瘤接种后0、1或9天给药。将相关浓度的CAR NK细胞重悬于PBS中，并小批量转移到冰上的温育池(vivarium)中，以确保及时输注到动物体内，同时保持CAR NK细胞活力。每周在Xenogen IVIS上进行生物发光图像以监测肿瘤进展。每周测量体重三次，同时进行临床观察以监测任何毒性迹象。每周进行一次微量采样(经由颌下采集血液)进行细胞动力学分析，以通过ddPCR或流式细胞分析量化体内CAR NK扩增。在人道或研究终点，对来自所关注研究的动物进行尸检以获得用于病理学评估的各种组织。

对于qPCR CK，在RNA酶A存在下，使用MagMAX^TMDNA Multi-Sample Ultra 2.0试剂盒从小鼠全血样品(50μL)中提取和纯化基因组DNA(gDNA)。然后使用优化的基于数字液滴PCR(ddPCR)的双链测定方法分析经纯化的gDNA，所述方法被设计为同时确定CAR构建体和参考a-肌动蛋白1(ACTA1)基因(人类和小鼠基因组中的单拷贝基因)的拷贝数。以7天时间间隔对肿瘤的进展进行监测和成像。图3表示相对于未经治疗的小鼠(单独的肿瘤)和用未转导的NK细胞(NT NK)处理的小鼠的生长，与具有CD28铰链结构域的BCMACAR相比，用具有IgG铰链的BCMA-CAR转导的脐带血来源的NK细胞处理后小鼠中肿瘤的生长。

观察到与单独的肿瘤或NT NK相比，接受BCMA-CD28的小鼠的肿瘤负荷较低。与BCMA IgG相比，接受BCMACD28的小鼠在死于非肿瘤负荷相关死亡之前的前2周内具有更好的肿瘤控制。检查肺、肝和脾的淋巴细胞浸润。图8示出了将正常小鼠的肺与用BCMA28-2CAR-NK细胞处理的小鼠的肺进行比较的示例性组织病理学载玻片。所有组织通过浸入以及肺的气管滴注固定在10％缓冲福尔马林中。完全固定(24-48小时)后，修剪器官并加工用于石蜡包埋。石蜡块以4-6微米切片，并且将组织切片固定在载玻片上，用苏木精和曙红(H&E)染色，并且盖上盖玻片。

体重波动总结于图12中。

病理学评价由董事会认证(ECVP)兽医病理学家进行。肿瘤性病灶根据其在检查器官中的存在情况进行评分。非肿瘤性病灶根据其严重程度和分布情况进行评分。在软件系统中捕获了组织病理学结果。

观察到淋巴细胞浸润到肺、肝和脾中，并被认为是非肿瘤负荷相关死亡的原因，如图8中可见。然而，将剂量减少到100万和300万个总NK细胞显著改善了非肿瘤负荷相关的死亡并提高了存活率，如图4中可见。

实施例5：共同给药的BCMA-CAR在MM1s肿瘤小鼠中的抗肿瘤活性比较

本实施例比较了示例性共同给药的BCMA-CAR NK细胞的抗肿瘤活性。

100万个BCMACAR-NK细胞(约70％CAR+ve)，包含SEQ ID NO:19或20，与小鼠中的MM1s肿瘤共同给药。每隔6-7天对肿瘤的进展进行监测和成像。图5示出用包含BCMA28-1或BCMA28-2的1M BCMA-NK细胞处理的小鼠存活率的图示。观察到与共同给药包含BCMA28-1的CAR-NK细胞的小鼠相比，给药具有BCMA28-2的BCMA-CAR的小鼠表现最好，与肿瘤相关死亡相比，超过50％的小鼠在第77天存活。

实施例6：BCMA-CARs-NK和BCMA-CAR-T的延迟给药方案

本实施例表明，与其他测试的BCMA-CAR相比，BCMA28-1效果最好，然而，所有CAR构建体都提供稳健的抗肿瘤活性。

CAR-T细胞生产：

为了生产CAR-T，从Stem cell Technologies购买人类白细胞分离产品(leukopaks)。使用Ficoll密度梯度从新鲜的白细胞中分离出PBMC。来自Stemcell技术的EasySep Human T细胞分离试剂盒用于纯化T细胞，然后使用来自Miltenyi Biotec的TCell TransAct珠和研究级IL-2活化/扩增T细胞。在T细胞活化的第2天，通过针刺法用VSVG病毒转导细胞，然后在第7天用于体外测定。

CAR-NK细胞生产：

对于CAR-NK生产，用于研究的脐带血(CB)单位获自MD安德森癌症中心脐带血库。通过Ficoll密度梯度离心从冷冻的CB单位中分离CB单核细胞。除了每2天供给一次IL-2外，脐带血来源的NK细胞(CB-NK细胞)的离体扩增在第0天使用uAPC刺激。在第6天，使用针刺法用RD114病毒转导细胞。在第8天或第9天加入第二轮uAPC来刺激细胞，并且每2天供给一次IL-2，直到第15天用于体内或体外研究。

在MM1s肿瘤细胞接种后一天，将包含BCMA28-2的100万或300万个BCMACAR-NK细胞(约70％CAR+ve)施用于小鼠IV(“1天延迟给药”)

以7天时间间隔对肿瘤的进展进行监测和成像。图6表示在1天延迟给药方案中，用未转导的NK细胞或用具有CD28铰链结构域的BCMA-CAR转导的NK细胞处理的小鼠中肿瘤的生长与天数的函数。图7示出了表达BCMA28-2的NK细胞的1天延迟给药Kaplan Meier存活曲线。重复类似的实验，即延迟9天给药表达BCMA28-2 CAR的NK细胞。观察到与仅肿瘤或未转染的NK细胞相比，BCMA28-2CAR-NK细胞产生了延长的存活。

观察到从共同给药转换为延迟给药设置(1天和9天延迟给药)继续显示BCMACAR-NK治疗的积极抗肿瘤影响。

实施例7：BCMA-CAR-NK细胞中IL-15的分泌

本实施例表明，如通过监测每1000个细胞的CAR拷贝数和IL-15分泌所测量的，示例性BCMA-CAR-IL-15构建体转导的NK细胞在体内持续存在。

使用Meso Scale Discovery平台上的电化学发光免疫测定和U-PLEX人类IL15测定试剂盒(目录号K151URK/(BRS20-735)，供应商MSD)对NSG小鼠血浆样品中的人类IL-15进行生物分析。在测定中，生物素化的捕获抗体首先与板表面上的链霉亲和素偶联。将校准物、对照物和样品添加到板中，并在室温下振荡温育。校准物、对照物和样品中的人类IL-15然后与捕获抗体结合。洗涤后，将含有与电化学发光标记(MSD GOLD SULFO-TAG)偶联的检测抗体的溶液添加到板中，接着进行另一个温育期。与检测抗体温育后，洗涤板并将2X读数缓冲液添加到孔中。立即在MSD Sector Imager S600中读取所述板。在延迟给药设置中观察到表达SEQ ID NO:20的BCMA-CAR的BCMACAR-NK细胞的稳健的剂量依赖性扩增和IL-15产生的增加，如图9中可见。

实施例8：使用BCMACAR构建体在T细胞环境中改善肿瘤细胞杀伤等

本实施例证明了BCMACAR构建体(例如，BCMAIg1、BCMAIg2、BCMA28-1、BCMA28-2)在肿瘤细胞杀伤活性中的用途。

根据制造商的方案，使用Promega的CellTiter-Glow发光细胞存活率测定评估T细胞环境中的细胞毒性。为了分析细胞凋亡和线粒体损伤，MM.1S-ffluc-MDA靶细胞用来自Invitrogen的CellTracker深红色染料标记，并且来自Sartorius的MultiCyt细胞凋亡试剂盒用于根据制造商的方案测量半胱天冬酶阳性和线粒体损伤。简而言之，通过使用在裂解时发出荧光的NucView 488半胱天冬酶-3/7底物检测半胱天冬酶3和7的活化。线粒体膜电位通过完整线粒体腔内的荧光小分子与活性膜电位的隔离来确定，当线粒体去极化泄漏到细胞质中时，细胞表现出荧光降低。来自Intellicyte的iQue流式细胞仪用于获取流式细胞仪读数。

BCMACAR构建体(例如，BCMAIg1、BCMAIg2、BCMA28-1、BCMA28-2)在人类原代T细胞的相同CAR骨架中针对BCMA阳性细胞系MM.1S-ffluc-MDA进行了测试。

所有BCMACAR构建体都显示出高于表达CD19 CAR的T细胞(阴性对照)的杀伤。此外，与含有IgG1铰链的CAR骨架中的相同结合物相比，利用CD28铰链的构建体显示出增强水平的细胞毒性、细胞凋亡和线粒体损伤。基于3种不同测定读数的肿瘤细胞的特异性杀伤见图10(A-C)。

实施例9：转染CAR-NK细胞凋亡的分析

本实验被设计用于分析在存在或不存在可溶性BCMA的情况下，用BCMA28-1或BCMA28-2转导的CAR-NK中的细胞凋亡。

为了分析细胞凋亡，MM.1S-ffluc-MDA靶细胞用来自Invitrogen的CellTracker深红色染料标记，并且来自Sartorius的MultiCyt细胞凋亡试剂盒用于根据制造商的方案测量半胱天冬酶阳性。在存在或不存在800ng/mL从ACRO Biosciences获得的可溶性重组BCMA的情况下，效应细胞与靶细胞共培养。简而言之，通过使用在裂解时发出荧光的NucView488半胱天冬酶-3/7底物检测半胱天冬酶3和7的活化。来自Intellicyte的iQue流式细胞仪用于获取流式细胞仪读数。

观察到在800ng/mL可溶性BCMA存在下，特别是在高E:T比率下，CAR-NK在靶细胞中诱导较低水平的细胞凋亡，如图11中可见。

实施例10：BCMACAR构建体对MM1S肿瘤的体内功效

本实施例示出了在CB-NK细胞中表达的含有CAR的BCMA28-2对MM1S肿瘤的功效。

10-12周龄雌性NSG小鼠在肿瘤接种前24小时以150cGy进行全身照射。MM.1S-ffluc-MDA细胞在PBS悬浮液中制备，浓度为2.5x10⁶个细胞/毫升，用于以0.5x10⁶/动物静脉内接种细胞。在给药前1天、肿瘤接种后6天拍摄生物发光图像，并基于总通量将动物随机分组，每组4只动物。动物在肿瘤接种后7天给药。已在冷冻制剂(例如，38.6％PLASMA-LYTE A+50％CS10+10％HSA+0.8％AA+维生素+30mM海藻糖)中冷冻保存的表达CAR的NK(即CAR NK)细胞解冻，并直接用PBS缓冲液注射给小鼠，无需洗涤。每周在Xenogen IVIS上进行生物发光图像以监测肿瘤进展。每周称取体重三次，同时进行临床观察以监测任何毒性迹象。每周进行一次微量采样(经由颌下采集血液)进行细胞动力学分析，以通过ddPCR或流式细胞分析量化体内CAR NK扩增。在人道或研究终点，对来自所关注研究的动物进行尸检以获得用于毒理学/病理学评估的各种组织。

与单独的肿瘤相比，所有CAR转导的NK细胞都显示出存活益处(图13)。

CAR-NK细胞制造

对于CAR-NK生产，用于研究的脐带血(CB)单位获自MD安德森癌症中心脐带血库。通过Ficoll密度梯度离心从冷冻的CB单位中分离CB单核细胞。除了每2天供给一次IL-2外，脐带血来源的NK细胞(CB-NK细胞)的离体扩增在第0天使用uAPC刺激。在第6天，使用针刺法用RD114病毒转导细胞。在第8天或第9天加入第二轮uAPC来刺激细胞，并且每2天供给一次IL-2，直到第15天用于体内或体外研究或在第21天冷冻保存用于以后使用。

实施例11：BCMACAR构建体对多种肿瘤系的体外功效

本实施例示出了在CB-NK细胞中表达的BCMA28-2 CAR对不同肿瘤细胞的功效。

将MM1S-Luc、RPMI-8226-Luc、JJN3-Luc和JJN3-Luc BCMA KO细胞用PBS洗涤一次，将细胞与细胞示踪剂深红色染料(Invitrogen#C34565)在PBS中的1:10,000稀释液中在37℃下温育20分钟，细胞密度为250万/毫升。温育结束时，向细胞中加入20ml细胞培养基，将细胞以500g离心5分钟，去除上清液并使用相应的细胞培养基再洗涤细胞一次。然后将细胞以25万/毫升重悬于培养基中，并将30μul细胞添加到V形底384孔测定板(Greiner，目录：781280)的每个孔中。将细胞在37℃细胞温育器，5％CO₂中温育1-2小时。在第15天收获新鲜的效应细胞，并在不含细胞因子的NK细胞培养基(具有10％HI-FBS和2mM谷氨酰胺的CellGenix GMP SCGM)中洗涤细胞一次，然后将10μl效应细胞以不同的E:T比率添加到测定板中。将靶细胞和效应孔共培养20小时，然后将细胞离心并收集上清液用于细胞因子释放测定。将细胞与在相应的靶细胞培养基中以1:500稀释的10μl半胱天冬酶3/7试剂(Intellicyt，目录：91035)在37℃的细胞温育器中一起温育1小时，然后呈递以进行使用Sartorius iQue3或Sartorius iQue screener Plus的FACS分析。具有阳性半胱天冬酶3/7染色的靶细胞百分比用于报告效应细胞的细胞毒性。

通过含有不同的CBU供体来源的BCMA28-2 CAR构建体的NK细胞对多种肿瘤细胞系证明了体外杀伤活性(如图14A至图14D所示)。

实施例12.BCMACAR NK细胞在多轮再刺激下在体外杀伤肿瘤细胞的能力

本实施例示出了在CB-NK细胞中表达的BCMA28-2 CAR的功效。

收获效应细胞并重悬于补充有10％热灭活FBS(Sigma，目录号：F4135-500mL)、1％L-谷氨酰胺(Gibco，目录号：25030-081)、1％Penn Strep(Gibco，目录号：15140-122)和100IU/mL人类IL-2(Miltenyi，目录号：130-097-748)的SCGM(CellGenix，目录号：20802-0500)中。将效应细胞一式三份接种到48孔平底非组织培养处理板(Corning，目录号：3548)，密度为2e5个细胞/孔(MM1S模型)。收获先前用NucLight Red Lentivirus(Sartorius，目录号：4476)转导并用1μg/mL嘌呤霉素(Sigma，目录号：P8833-10MG)选择的靶细胞，并重悬于上述完全培养基中，并以5e4个细胞/孔的密度接种。将板置于IncuCyteS3(Sartorius Inc.)中，并且每30分钟使用10X物镜在明场和红色通道中测量每孔一式四份的读数。如上所述制备靶细胞并且每48-72小时重新接种，密度为5e4个细胞/孔(MM1S模型)，共9次肿瘤刺激/再攻击。靶细胞的细胞溶解表示为每个图像的平均红色物体计数(图15A)和红色物体计数曲线下的总平均面积(图15B)。

实施例13：BCMACAR构建体对RPMI-8226肿瘤的体内功效

10-12周龄雌性NSG小鼠在肿瘤接种前24小时以150cGy进行全身照射。RPMI-8226-luc细胞在PBS悬浮液中制备，浓度为2.5x10⁶个细胞/毫升，用于以0.5x10⁶/动物静脉内接种细胞。在给药前1天、肿瘤接种后6天拍摄生物发光图像，并基于总通量将动物随机分组，每组4只动物。动物在肿瘤接种后7天给药。将相关浓度的表达CAR的NK细胞重悬于PBS中，并小批量转移到冰上的温育池中，以确保及时输注到动物体内，同时保持表达CAR的NK细胞的活力。每周在Xenogen IVIS上进行生物发光图像以监测肿瘤进展。每周称取体重三次，同时进行临床观察以监测任何毒性迹象。每周进行一次微量采样(经由颌下采集血液)进行细胞动力学分析，以通过ddPCR或流式细胞分析量化体内CAR NK扩增。

与UTD NK相比，BCMA28-2(具有CD28共刺激结构域)-CAR NK处理组表现出抗肿瘤活性(图16)。

Claims (81)

1.一种B细胞成熟抗原(BCMA)抗体或其抗原结合片段，所述BCMA抗体或其抗原结合片段包含：

重链可变区，所述重链可变区包含三个重链互补区(HCDR)，其中HCDR1包含SYAIH(SEQID NO:2)，HCDR2包含VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)，并且HCDR3包含AKFGEPQYFQH(SEQID NO:4)。

2.如权利要求1所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段以大于0nM且小于150nM的K_D结合至BCMA。

3.如权利要求1或2所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段以大于1pM且小于10nM的K_D结合至BCMA。

4.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段以0.05μg/ml至0.5μg/ml之间的EC50结合至人类细胞上呈递的BCMA。

5.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段包含三个轻链可变区(LCDR)，其中LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)。

6.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段包含三个轻链可变区(LCDR)，其中LCDR1包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且LCDR3包含QQLNSYPWT(SEQ ID NO:14)。

7.如权利要求1-5中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段包含三个轻链可变区(LCDR)，其中LCDR1包含RASQGINNYLA(SEQ ID NO:6)，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且LCDR3包含QQLKSYPFT(SEQ ID NO:8)。

8.如权利要求1-5中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段包含三个轻链可变区(LCDR)，其中LCDR1包含RASQGISSYLA(SEQ ID NO:11)，LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且LCDR3包含QQLNSYPFT(SEQ ID NO:12)。

9.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段是包含IgG恒定区的抗体。

10.一种B细胞成熟抗原(BCMA)抗体或其抗原结合片段，所述BCMA抗体或其抗原结合片段包含三个LCDR，其中，

LCDR1包含RASQGIX₁X₂YLA(SEQ ID NO:79)，

LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且/或

LCDR3包含QQLX₃SYPX₄T(SEQ ID NO:80)；

其中，X₁选自S或N；

X₂选自S或N；

X₃选自N或K；并且/或

X₄选自F或W。

11.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含含SEQ ID NO:9的重链可变区(VH)。

12.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含与SEQ ID NO:9至少95％同一的VH序列。

13.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)。

14.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含与SEQ ID NO:1至少95％同一的VH序列。

15.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含含SEQ ID NO:5、10或13的轻链可变区(VL)。

16.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体，其中所述抗体或所述抗原结合片段包含与SEQ ID NO:5、10或13至少90％同一的VL序列。

17.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段选自由以下组成的组：IgA抗体、IgG抗体、IgE抗体、IgM抗体、双特异性或多特异性抗体、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2片段、Fd'片段、Fd片段、分离的CDR或其组；单链可变片段(scFv)、多肽-Fc融合体、单结构域抗体、骆驼抗体；掩蔽抗体、小模块免疫药物(“SMIPsTM”)、单链、串联双价抗体、VHH、抗运载蛋白、纳米抗体、微小抗体、BiTE、锚蛋白重复蛋白、DARPIN、Avimer、DART、TCR样抗体、Adnectin、Affilin、Trans-body；Affibody、TrimerX、MicroProtein、Fynomer、Centyrin；和KALBITOR。

18.如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述BCMA抗体或其片段是单链可变片段(scFv)。

19.如权利要求18所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述结合BCMA的scFv包含接头序列。

20.如权利要求19所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述结合BCMA的scFv包含选自SEQ ID NO:15-18的接头。

21.如权利要求18所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述结合BCMA的scFv包含信号肽。

22.如权利要求18所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述结合BCMA的scFv包含选自由SEQ ID NO:85-87组成的组的序列。

23.如权利要求22所述的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中所述结合BCMA的scFv包含与SEQ ID NO:85、86或87至少80％同一的序列。

24.一种与包含以下的抗体或抗原结合片段竞争的BCMA抗体或其抗原结合片段：

重链可变区，所述重链可变区包含三个重链互补区(HCDR)，其中HCDR1包含SYAIH(SEQID NO:2)，HCDR2包含VTWHDGS NKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)，并且HCDR3包含AKFGEPQYF QH(SEQ ID NO:4)。

25.一种与包含三个LCDR的抗体或抗原结合片段竞争的BCMA抗体或其抗原结合片段，其中，

LCDR1包含RASQGIX₁X₂YLA(SEQ ID NO:79)，

LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)，并且/或

LCDR3包含QQLX₃SYPX₄T(SEQ ID NO:80)；

其中，X₁选自S或N；

X₂选自S或N；

X₃选自N或K；并且/或

X₄选自F或W。

26.一种治疗癌症的方法，所述方法包括向需要治疗的受试者施用如前述权利要求中任一项所述的BCMA抗体或其抗原结合片段。

27.如权利要求26所述的方法，其中所述癌症是免疫细胞恶性肿瘤，例如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。

28.一种药物组合物，所述药物组合物包含BCMA抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载剂，其中所述BCMA抗体或其抗原结合片段包含：

重链可变区，所述重链可变区包含三个重链互补区(HCDR)，其中HCDR1包含SYAIH(SEQID NO:2)，HCDR2包含VTWHDGSNKYYAESVMG(SEQ ID NO:3)，并且HCDR3包含AKFGEPQYFQH(SEQID NO:4)。

29.一种药物组合物，所述药物组合物包含BCMA抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载剂，其中所述BCMA抗体或其片段包含：

轻链可变互补决定区(LCDR)2，所述LCDR2包含AASTLQS(SEQ ID NO:7)。

30.一种编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，所述CAR包含特异性结合至B细胞成熟抗原(BCMA)的抗原结合分子、CD28铰链区、跨膜结构域和一个或多个细胞内细胞信号传导结构域。

31.如权利要求30所述的多核苷酸，其中所述特异性结合至BCMA的抗原结合分子包含：

(a)重链可变区(VH)互补决定区(CDR)1，所述VH CDR1包含SEQ ID NO:2；

(b)VH CDR2，所述VH CDR2包含SEQ ID NO:3；和

(c)VH CDR3，所述VH CDR3包含SEQ ID NO:4。

32.如权利要求31所述的多核苷酸，其中所述特异性结合至BCMA的抗原结合分子包含：

(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包含SEQ ID NO:6；

(b)VL CDR2，所述VL CDR2包含SEQ ID NO:7；和

(c)VL CDR3，所述VL CDR3包含SEQ ID NO:8。

33.如权利要求32所述的多核苷酸，其中所述特异性结合至BCMA的抗原结合分子包含：

(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包含SEQ ID NO:11，

(b)VL CDR2，所述VL CDR2包含SEQ ID NO:7，和

(c)VL CDR3，所述VL CDR3包含SEQ ID NO:12。

34.如权利要求31所述的多核苷酸，其中所述特异性结合至BCMA的抗原结合分子包含：

(a)轻链可变区(VL)互补决定区(CDR)1，所述VL CDR1包含SEQ ID NO:11，

(b)VL CDR2，所述VL CDR2包含SEQ ID NO:7，和

(c)VL CDR3，所述VL CDR3包含SEQ ID NO:14。

35.如权利要求30-34中任一项所述的多核苷酸，其中所述特异性结合至BCMA的抗原结合分子包含与SEQ ID NO:1或9至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

36.如权利要求30-35中任一项所述的多核苷酸，其中所述特异性结合至BCMA的抗原结合分子包含与SEQ ID NO:5、10或13中的任一者至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

37.如前述权利要求中任一项所述的多核苷酸，其中所述抗原结合片段选自由以下组成的组：Fab片段、F(ab')2片段、Fv片段或单链可变片段(scFv)。

38.如权利要求30-37中任一项所述的多核苷酸，其中所述抗原结合分子包含scFv。

39.如权利要求30-38中任一项所述的多核苷酸，其中所述VH和所述VL通过接头连接。

40.如权利要求39所述的多核苷酸，其中所述接头包含约50个氨基酸至约2个氨基酸。

41.如权利要求39所述的多核苷酸，其中所述接头包含与SEQ ID NO:15-18至少75％、至少85％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一的氨基酸序列。

42.如权利要求30-41中任一项所述的多核苷酸，其中所述抗原结合分子以小于约1×10^-6M、小于约1×10^-7M、小于约1×10^-8M或小于约1×10^-9M的K_D结合至BCMA。

43.如权利要求30-42中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域是以下的跨膜结构域：CD28、CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、ICOS/CD278、GITR/CD357、NKG2D或其任何组合。

44.如权利要求43所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域是CD28跨膜结构域。

45.如权利要求30-44中任一项所述的多核苷酸，其中所述铰链区包含与SEQ ID NO:56至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

46.如权利要求30-45中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸还包含共刺激区。

47.如权利要求46所述的多核苷酸，其中所述共刺激区是以下的信号传导区：CD28、OX-40、4-1BB/CD137、CD2、CD7、CD27、CD30、CD40、程序化死亡-1(PD-1)、可诱导T细胞共刺激因子(ICOS)、CD8γ、CD3δ、CD3ε、CD247、CD276(B7-H3)、LIGHT(肿瘤坏死因子超家族成员14；TNFSF1.4)、NKG2C、Igα(CD79a)、Fcγ受体、MHC I类分子、TNF受体蛋白、免疫球蛋白样蛋白、细胞因子受体、整联蛋白、信号传导淋巴细胞性活化分子(SLAM蛋白)、活化NK细胞受体、BTLA、Toll配体受体、ICAM-1、B7-H3、CDS、ICAM-1、GITR、BAFFR、LIGHT、HVEM(LIGHTR)、KIRDS2、SLAMF7、NKp80(KLRF1)、NKp44、NKp30、NKp46、CD19、CD4、CD8α、CD8β、11.2β、IL2Rγ、IL7Rα、ITGA4、VLA1、CD49a、ITGA4、IA4、CD49D、ITGA6、VLA-6、CD49f、ITGAD、ITGAE、CD103、ITGAL、LFA-1、ITGAM、ITGAX、ITGB1、CD29、ITGB2、CD18、LFA-1、ITGB7、NKG2D、TNFR2、TRANCERANKL、DNAM1(CD226)、SLAMF4(CD244，2B4)、CD84、CD96(Tactile)、CEACAM1、CRT AM、Ly9(CD229)、CD160(BY55)、PSGLl、CDIOO(SEMA4D)、CD69、SLAMF6(NTB-A，Lyl08)、BLAME(SLAMF8)、SELPLG(CD 162)、LTBR、LAT、GADS、SLP-76、PAG/Cbp、CD 19a、特异性结合CD83的配体或其任何组合。

48.如权利要求30-47中任一项所述的多核苷酸，其中所述共刺激区包含与SEQ ID NO:28至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

49.如权利要求30-48中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸还包含活化结构域。

50.如权利要求49所述的多核苷酸，其中所述活化结构域是CD3ζ结构域。

51.如权利要求49或50所述的多核苷酸，其中所述活化结构域包含与SEQ ID NO:30至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约7、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

52.如权利要求30-51中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸还包含自杀基因。

53.如权利要求52所述的多核苷酸，其中所述自杀基因选自利妥昔单抗、iCaspase 9、单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)和更昔洛韦、阿昔洛韦或FIAU；氧化还原酶和放线菌酮；胞嘧啶脱氨酶和5-氟胞嘧啶；胸苷激酶胸苷酸激酶(Tdk::Tmk)。

54.如权利要求52-53中任一项所述的多核苷酸，其中所述自杀基因是iCaspase9。

55.如权利要求30-54中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸还包含细胞因子。

56.如权利要求55所述的多核苷酸，其中所述细胞因子选自IL-7、IL-12、IL-15、IL-18或IL-21。

57.如权利要求55-56中任一项所述的多核苷酸，其中所述细胞因子是IL-15。

58.如权利要求57所述的多核苷酸，其中IL-15的氨基酸序列包含SEQ ID NO:23。

59.如权利要求30-58中任一项所述的多核苷酸，其中所述CAR包含与SEQ ID NO:19-21至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约7、至少约98％、至少约99％或约100％同一的氨基酸序列。

60.一种载体，所述载体包含如权利要求59所述的多核苷酸。

61.如权利要求60所述的载体，所述载体是反转录病毒载体、DNA载体、质粒、RNA载体、腺病毒载体、腺病毒相关载体、慢病毒载体或其任何组合。

62.一种CAR，所述CAR由如权利要求30-59中任一项所述的多核苷酸编码。

63.一种细胞，所述细胞包含如权利要求30-59中任一项所述的多核苷酸、如权利要求60-61中任一项所述的载体、如权利要求62所述的CAR，或其任何组合。

64.如权利要求63所述的细胞，其中所述细胞是免疫细胞。

65.如权利要求63-64中任一项所述的细胞，其中所述细胞是NK细胞、T细胞或肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、iNKT细胞、B细胞、巨噬细胞、树突细胞或其混合物。

66.一种组合物，所述组合物包含如权利要求30-59中任一项所述的多核苷酸、如权利要求60-61中任一项所述的载体、如权利要求62所述的CAR或如权利要求63-65中任一项所述的细胞。

67.一种免疫细胞群体，所述免疫细胞群体包含如权利要求63-66中任一项所述的细胞。

68.一种治疗个体的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的如权利要求66所述的组合物的步骤。

69.如权利要求68所述的方法，所述方法还包括向所述个体提供有效量的额外疗法的步骤。

70.如权利要求68所述的方法，其中所述额外疗法包括手术、放射线、基因疗法、免疫疗法或激素疗法。

71.如权利要求68-70中任一项所述的方法，其中含有所述多核苷酸的细胞或含有所述载体的细胞是通过输注、注射、静脉内、动脉内、腹膜内、气管内、瘤内、肌内、内视镜下、病灶内、颅内、经皮、皮下、局部、通过灌注、在肿瘤微环境中或其组合施用于所述个体。

72.如权利要求68-71中任一项所述的方法，其中所述癌症选自多发性骨髓瘤、淋巴瘤和/或白血病。

73.一种NK细胞，所述NK细胞包含编码CAR的多核苷酸，所述CAR包含：

(a)特异性结合至BCMA的抗原结合分子，其包含

重链可变区(VH)，所述VH与SEQ ID NO:1或9至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一，和

轻链可变区(VL)，所述VL与SEQ ID NO:5、10或13中的任一者至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％同一；

(b)CD28铰链区；

(c)跨膜结构域；和

(d)一个或多个细胞内细胞信号传导结构域。

74.一种编码结合BCMA的CAR的多核苷酸，所述多核苷酸包含：

(a)CD28铰链，

(b)跨膜结构域，

(c)共刺激结构域，和

(d)IL-15细胞因子。

75.一种NK细胞，所述NK细胞包含如权利要求74所述的多核苷酸。

76.一种具有编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸的免疫细胞，其中所述CAR包含：

(a)抗原结合结构域，

(b)CD28铰链，和

(c)CD28跨膜结构域。

77.如权利要求76所述的免疫细胞，其中所述细胞包含与肿瘤细胞上表达的BCMA结合的CAR。

78.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码根据权利要求1-25中任一项所述的抗BCMA抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。

79.如权利要求78所述的多核苷酸，所述多核苷酸包含至少一种化学修饰。

80.如权利要求78所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含选自由以下组成的组的核苷酸序列：SEQ ID No:55-56、58-59、63、67、71和76-78。

81.一种NK细胞，所述NK细胞表达根据权利要求62所述的结合BCMA的CAR。