CN118109200A - 一种比率量子点及其在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用、应用方法 - Google Patents
一种比率量子点及其在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用、应用方法 Download PDFInfo
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Abstract
本申请适用于分析化学技术领域，提供一种比率量子点及其在同时检测APE1酶和miRNA‑21中的应用、应用方法，所述比率量子点是由发射峰为520‑530纳米的CdTe量子点和发射峰为637‑647纳米的CdTe量子点混合得到。本申请采用该比率量子点作为检测APE1酶和miRNA‑21方法的信号报告器，可以降低反应体系背景信号的干扰，降低实验的假阳性现象，提高实验的准确度和灵敏度，实现了APE1最低检测浓度可低至0.25U每毫升；此外，该比率量子点在APE1酶抑制剂的药物筛选上也体现出了巨大的潜能。
Description
技术领域
本申请属于分析化学技术领域，尤其涉及一种比率量子点及其在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用、应用方法。
背景技术
脱嘌呤/脱嘧啶内切酶1(APE1)在DNA碱基切除修复(BER)过程中起着关键作用。BER是一种细胞机制，负责修复由化学修饰或自然衰变引起的受损DNA碱基。miRNA-21是一种小型非编码RNA，参与RNA沉默和转录后调控等基本细胞过程。已有的研究已经确定了它们的异常表达与各种癌症的关联，如结肠癌、乳腺癌、胃癌等。基于这些信息，建立一种鉴定APE1酶和miRNA-21的分析方法对促进早期癌症诊断至关重要。
传统的APE1酶和miRNA-21检测方法中，大部分采用的是荧光标记的方法。荧光方法，它虽有安全、简单、灵敏度高的优点。然而，荧光方法依赖于用荧光团和猝灭剂进行外部标记，用于均相测定，涉及到复杂的设计，不仅设计序列繁琐而且费用高。如果进行复杂生物样本的检测时，荧光修饰法很容易受到背景信号的干扰，影响实验的准确度和灵敏度。
发明内容
本申请实施例的目的在于提供一种比率量子点及其在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用、应用方法，旨在解决现有的APE1酶和miRNA-21检测方法存在的准确度和灵敏度差、设计序列繁琐且费用高的问题。
本申请实施例的第一方面提供了一种比率量子点，所述比率量子点是由发射峰为520-530纳米的CdTe量子点和发射峰为637-647纳米的CdTe量子点混合得到。
本申请实施例的第二方面提供了一种上述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用。
本申请实施例的第三方面提供了一种上述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，包括：
将AP探针、APE1酶、MOPS缓冲液混合孵育后进行退火处理，得到酶切产物；
在所述酶切产物中加入发夹探针和miRNA-21进行扩增反应，得到第一复合体；
在所述第一复合体中加入银纳米材料进行反应，得到第二复合体；
在所述第二复合体中加入酸溶液进行酸裂解处理，将pH值调至中性后，经磁分离，在所得上清液中加入上述的比率量子点进行离子交换反应后，进行荧光强度测量，对所得荧光强度进行荧光比率分析，以实现对APE1酶和miRNA-21的检测。
本申请实施例提供的一种比率量子点，该比率量子点是由发射峰为520-530纳米的CdTe量子点和发射峰为637-647纳米的CdTe量子点混合得到，与传统的单一CdTe量子点相比，采用该比率量子点作为检测APE1酶和miRNA-21方法的信号报告器，可以降低反应体系背景信号的干扰，降低实验的假阳性现象，提高实验的准确度和灵敏度，便于有效地实现APE1和miRNA-21的同时检测，实现了APE1最低检测浓度可低至0.25U每毫升；此外，该比率量子点在APE1酶抑制剂的药物筛选上也体现出了巨大的潜能。
本申请实施例提供了比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，该方法可简单、灵敏的检测APE1酶和miRNA-21，为以后的研究、生产、临床检测等提供了方便；另外，该方法采用的DNA探针设计简单、合成方便、可重复性高、制备成本低，所采用的比率量子点能够降低反应体系背景信号，操作简单、成本低，不但为APE1酶和miRNA-21的检测提供了一种新的手段，而且为构建高选择性的生物传感器提供了一种新的思路。
附图说明
图1为本申请实施例提供的利用比率量子点检测APE1酶和miRNA-21的方法的实现原理图；
图2为本申请实施例提供的比率量子点不同比例的探索结果；
图3为本申请实施例提供的比率量子点与单量子点在不同比例胎牛血清中的稳定性结果；
图4为本申请实施例提供的比率量子点与单量子点在胎牛血清中的时间稳定性结果；
图5为本申请实施例提供的比率量子点和银纳米材料的表征图；
图6为本申请实施例提供的比率量子点传感器可行性实验的表征图；
图7为本申请实施例提供的利用比率量子点检测APE1酶和miRNA-21的方法的反应条件优化实验结果；
图8为本申请实施例提供的比率量子点传感器测定APE1酶活性和miRNA-21检测结果图；
图9为本申请实施例提供的比率量子点传感器对APE1酶抑制剂的筛选活性检测结果图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的,旨在对本公开提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本公开的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
本申请创新性地提出了一种比率量子点，以及基于比率量子点的纳米传感器同时检测APE1酶和miRNA-21的方法，能够实现对APE1酶和miRNA-21的高灵敏、高准确检测。
其中，所述比率量子点是由发射峰为520-530纳米的CdTe量子点和发射峰为637-647纳米的CdTe量子点混合得到。
优选地，所述发射峰为520-530纳米的CdTe量子点和发射峰为637-647纳米的CdTe量子点的质量比例为(2-8):(12 -18)，更优选为8:12。本申请具体实施例虽然仅以发射峰为525纳米CdTe量子点和发射峰为642纳米CdTe量子点为例，但本领域技术人员应当明了发射峰在±5nm范围内的波动对该比率量子点的制备及使用效果的影响可忽略不计。
本申请实施例还提供了一种上述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用以及应用方法。
其中，比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，主要分为三个过程：(1)APE1酶切反应；(2)CHA的核酸信号扩增；(3)化学信号的扩增：通过引入银纳米材料，为实验提供游离的银离子，比率CdTe量子点与银离子之间的离子交换，产生荧光信号的放大输出。该应用方法具体包括以下步骤：
将AP探针、APE1酶、MOPS缓冲液混合孵育后进行退火处理，得到酶切产物；
在所述酶切产物中加入发夹探针和miRNA-21进行扩增反应，得到第一复合体；
在所述第一复合体中加入银纳米材料进行反应，得到第二复合体；
在所述第二复合体中加入酸溶液进行酸裂解处理，将pH值调至中性后，经磁分离，在所得上清液中加入上述的比率量子点进行离子交换反应后，进行荧光强度测量，利用该比率量子点的荧光强度比值(F535nm/F648nm)的变化实现对APE1酶和miRNA-21的检测。
优选地，所述将AP探针、APE1酶、MOPS缓冲液混合孵育后进行退火处理，得到酶切产物的步骤，包括：
将AP探针、APE1酶、MOPS缓冲液混合孵育30分钟后，置于80℃的条件下退火5分钟，得到酶切产物。
其中，所述AP探针的5’端通过生物素共价键修饰了磁珠。
优选地，所述AP探针和发夹探针在体系中的最终浓度均优选为100nM。
优选地，所述银纳米材料的加入量为0.8微升。
优选地，所述比率量子点的加入量为50微升。
其中，所述AP探针(HP1)为含有AP位点(脱嘌呤嘧啶位点，无碱基位点)的单链DNA，所述AP位点位于能够与miRNA-21互补的AP探针的序列中。
所述发夹探针(HP2)为茎-环结构的单链DNA，能够与AP探针(HP1)配对杂交形成稳定的HP1-HP2复合体。
所述miRNA-21是一个含有22个碱基的非编码RNA链，能够与AP探针(HP1)通过碱基互补作用进行互补杂交。
其中，AP探针(HP1)5’至3’的序列为Biotin-TCA ACA TCA GTC TGA TAA GCT ACATTG GAT GCT CTA GCT TAT CAG ACT GXT GTT GA(SEQ ID NO.1)，X代表AP位点。
酶切产物(CHP1)5’至3’的序列为TCA ACA TCA GTC TGA TAA GCT ACA TTG GATGCT CTA GCT TAT CAG ACT G(SEQ ID NO.2)。
发夹探针(HP2)5’至3’的序列为SH-TAA GCT AGA GCA TCC AAT GTA GCT TAT CAGACT GAT GGG CAT GCT GA(SEQ ID NO.3)。
miRNA-21的5’至3’的序列为UAG CUU AUC AGA CUG AUG UUG A(SEQ ID NO.4)。
值得注意的是，HP1发夹结构的5端通过生物素-链霉亲和素共价键作用修饰了磁珠，然后通过APE1酶的酶切作用，产生酶切产物(CHP1),CHP1酶切产物在miRNA-21的辅助下进行无酶催化发夹组装(CHA)信号放大的循环，产生大量的MB-HP1-HP2复合体，获得的复合体通过Ag-S共价键的作用，引入银纳米材料，形成MB-HP1-HP2-AgNPs复合体，在酸破坏和磁分离的辅助下，体系产生大量游离的银离子，比率CdTe量子点可以选择性地和游离的银离子发生离子交换反应，导致荧光强度改变，利用该比率量子点的荧光强度比值(F535nm/F648nm)的变化实现对APE1酶和miRNA-21的灵敏检测。
本申请的一种或多种实施例中，荧光检测条件为：激发波长为480纳米，激发和发射狭缝均为5纳米。
为了保证发夹探针形成发夹结构，本申请实施方式的一种或多种实施例中,将发夹探针放入孵育缓冲溶液中升温至95℃进行孵育，然后冷却至室温形成发夹结构；所述孵育缓冲溶液中含有氯化镁和磷酸盐。
下面将结合具体实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
另外，需要说明的是，以下实施例中原料的含量可进行等比例的增加或减少，所给出的数值是尽可能精确，但是本领域技术人员理解由于不可能避免的测量误差和实验操作问题，每一个数字都应该被理解为约数，而不是绝对准确的数值。
实施例1：比率量子点的合成
首先合成发射波长525纳米和发射波长642纳米的单一CdTe量子点，在将两者以8:12的比例混合，形成发射波长在527纳米和647纳米的比率量子点。
实施例2：利用比率量子点检测APE1酶和miRNA-21的方法
AP探针(HP1-MB)的孵育：首先，取10毫克每毫升链霉亲和素修饰的磁珠(MB)悬浮液30微升，50微摩的生物素修饰的HP1链30微升，将两者加入到同一EP管中，再加入140微升MOPS缓冲液(含10毫摩磷酸盐，137毫摩氯化钠，2.7毫摩氯化钾)混合，在金属浴中室温振摇30分钟，洗涤3次，磁力架分离除去游离的HP1，然后在300微升MOPS缓冲液中重悬，4度保存备用。
APE1酶切反应：先将2.7微升的7.5微摩HP1链和2微升的0.1U每微升APE1酶和140微升的10毫摩MOPS缓冲液加入到同一EP管中，37度孵育30分钟，然后在80度退火5分钟，形成酶切产物CHP1。
CHA的核酸信号扩增：在发生APE1酶切反应后，往体系中加入2微升的10微摩的HP2链和1微升的10微摩miRNA-21链继续在37度反应一个小时，形成大量的MB-HP1-HP2复合体。
化学信号的扩增：在CHA扩增反应后，在往体系中加入0.8微升的银纳米材料，25度黑暗条件下反应30分钟，形成MB-HP1-HP2-AgNPs复合体,然后加入2.5微升的(10％,v/v)硝酸溶液进行酸裂解5分钟，再用0.5摩尔的氢氧化钠将体系PH值调到7，后进行磁分离，取上清液，此时上清液中含有大量游离的银离子，再加入比率CdTe量子点50微升,量子点与银离子发生离子交换5分钟，后在荧光分光光度计下测量荧光强度；荧光检测条件为:激发波长为480纳米，激发和发射狭缝均为5纳米。
图1为本申请实施例提供的利用比率量子点检测APE1酶和miRNA-21的方法的实现原理图：首先，设计了一个AP探针(HP1)，在该探针的5’端修饰了生物素，用于磁珠(MB)的修饰。在APE1的存在下引发AP探针(HP1)的裂解，产生一个酶切产物(CHP1)，该酶切产物可以与另一靶标miRNA-21发生杂交，在HP2发夹结构的辅助下，引发CHA信号循环放大反应，产生大量的CHA循环产物HP1-HP2复合体(图1A)，HP2的5’端被修饰巯基，在银-硫共价键的作用下，引入银纳米材料，随即形成大量的HP1-HP2-AgNPs复合体,在酸破坏和磁分离的辅助下，体系产生大量游离的银离子，比率CdTe量子点可以选择性地和游离的银离子发生离子交换反应，导致荧光比率信号降低(图1B)。
本申请在前期研发过程中还进行了比率量子点不同比例的探索，如图2所示，图2中1h代表发射峰为525纳米的CdTe量子点，5h代表发射峰为642纳米的CdTe量子点，最终确定发射峰为525纳米的CdTe量子点和发射峰为642纳米的CdTe量子点的质量比例为(2-8):(12 -18)，并以选取了8:12的比率量子点(实施例1)开展了以下测试。
首先，本申请考察了比率量子点与单量子点在不同比例胎牛血清中的稳定性，如图3所示，发现比率量子点(图3A,B图)在血清中的稳定性比单一量子点好，能更好降低反应假阳性现象，更利于复杂生物样本中的应用。进一步，本申请还考察了比率量子点与单量子点在20％胎牛血清中时间稳定性上的影响，如图4所示，发现比率量子点(图4A,B图)的时间稳定性比单一量子点好，能更好降低反应假阳性现象，更利于复杂生物样本中的应用。
图5为本申请实施例的比率量子点和银纳米材料的表征图：银纳米材料的透射电子显微镜(TEM)图像显示出均匀的球形(图5B)，颗粒大小约为10纳米(图5A)。同时，水动力学粒径分析仪(DLS)结果也显示银纳米材料在10纳米左右处具有强烈的峰值(图5I)。银纳米材料的紫外可见吸收光谱中特征峰出现在400纳米处，峰宽较宽(图5H)，X射线光电子能谱仪(XPS)中银的3d轨道的结合能为364.2电子伏特(图5J)。随后，本申请对合成的比率CdTe量子点进行了表征。比率量子点的TEM图像显示有两个纳米颗粒(图5C)和两种晶格类型(图5F)。左边圈出的纳米尺寸对应紫外吸收峰475纳米和荧光发射峰527纳米。右边圈出的纳米颗粒与紫外吸收峰585纳米和荧光发射峰647纳米相一致。比例量子点的形态和晶格放大图像显示在图5E中。比例量子点中的Cd、Te、O和C元素的存在通过能量色散X射线光谱仪(EDS)进行了分析(图5K,G)。在向比率CdTe量子点中加入Ag+后，会发生了离子交换(CER)反应，为考察CER反应是否成功发生，开展了TEM、XPS和荧光表征，结果如下：CdTe量子点的TEM电镜图像从球形变为Ag2Te的聚集体(图5D)；XPS(图5L,M)显示，比率CdTe量子点的XPS图案中观察到Ag(图5M)；荧光强度图2N,O显示，随着Ag离子浓度的增加，其比率量子点荧光强度比值逐渐降低。
进一步，图6为本申请实施例的比率量子点传感器可行性实验的表征图：为了验证所提出的方法是否符合预期，通过荧光方法测量该比率传感器的可行性，结果显示在图6A,B中。图6A显示了“AND”逻辑门的建立。该逻辑门的输入是APE1和miRNA-21，任意一个APE1和miRNA-21的不存在定义为“0”，存在定义为“1”。输出是荧光信号，定义为“1”，无信号或极低的信号定义为“0”。图6B显示APE1和miRNA-21双靶标组(1,1)的荧光强度比值明显低于APE1单一靶标组(1,0)和单一靶标组miRNA-21(0,1)和无APE1和miRNA-21非靶标组(0,0)，表明只有APE1和miRNA-21的共存才能启动CHA反应。这些结果表明所提出的策略可以敏感地检测APE1和miRNA-21。
进一步，为了高效地检测APE1和miRNA-21，本申请优化了几种反应条件，进行了一系列单因素变化实验，包括APE1切割的反应时间，APE1失活的反应时间，以及HP1和HP2的最终浓度，AgNPs的浓度和QDs的比例等单因素变化实验，实验条件与结果如图7所示。CdTeQDs的比值被用来评估优化效果。首先，本申请优化了APE1切割的反应时间。在该实验中，APE1的切割分别进行了20、25、30和35分钟。如图7A所示，随着反应时间的增加，F535nm/F648nm达到最低点的时间为30分钟，然后随着反应时间的增加而增加。这种现象的可能原因是APE1的切割需要30分钟才能达到最高效率，因此确定反应时间为大约30分钟是最佳的。接下来，本申请优化了APE1失活的时间，范围从0到15分钟。如图7B所示，在失活过程进行了5分钟后，F535nm/F648nm达到最低值。随着失活时间的延长，F535nm/F648nm开始平稳下降，因为在80℃的长时间失活过程中，会导致非特异性组装，使得所有DNA链的二级结构发生变化。因此，本申请选择了5分钟作为APE1失活的时间。接下来，本申请优化了HP1和HP2的浓度，确定了它们的最终浓度为100nM，结果如图7C所示。此外，本申请选取了0.8μL AgNPs和50μL CdTeQDs用于双靶标检测(图7D，E)。
图8为本申请实施例中比率量子点传感器测定APE1酶活性和miRNA-21检测结果图：本申请在最佳条件下调查了比率量子点传感器的检测性能。首先，在miRNA-21浓度被确定为50纳摩的情况下，检测了不同浓度的APE1酶，如图8A所示，随着APE1酶浓度从0.25到1.75U每毫升增加，荧光强度逐渐变化，荧光比值呈下降趋势。进一步的数据分析见图5B，荧光比值与APE1浓度在0.25到1.25U每毫升范围内呈良好的线性关系。根据3σ/S的方法计算(其中σ表示背景信号的标准偏差，S为拟合回归方程的斜率)，所提出的策略能够计算的APE1最低浓度为0.25U每毫升，并且具有优秀的线性关系(R2为0.99915)。回归方程描述为FL535nm/FL648nm＝-0.0106899C+0.0596793。为了建立miRNA-21的相应标准曲线，将APE1浓度设定为1U每毫升，在图8C和8D中显示了类似的结果。图8C显示，随着miRNA-21浓度的增加，荧光强度比值逐渐下降。图8D显示，在10到50纳摩的浓度范围内，荧光比值下降与miRNA-21浓度之间存在良好的线性关系。根据3σ/S的计算方法确定miRNA-21的最低检测浓度为10纳摩，R2为0.99466。miRNA-21的回归方程为FL535nm/FL648nm＝-0.000540259C+0.0683549。
图9为本申请实施例中比率量子点传感器对APE1酶抑制剂的筛选活性检测结果图：由于APE1可以作为恶性肿瘤的重要标志物之一，因此对于相关药物开发和肿瘤治疗而言，APE1抑制剂的筛选具有重要意义。在本研究中，本申请进一步调查了来源Panaxjaponicus C.A.Mey(白三七)和Pronephrium penangianum(Hook.)Holtt(鸡血七)中提取的天然化合物对APE1活性的影响。如图9A和图9C所示，在浓度为10微摩时，所研究的化合物对APE1活性表现出不同的影响。其中，有2种药物(一种来源Panax japonicus C.A.Mey的化合物11，另一种来源Pronephrium penangianum(Hook.)Holtt的化合物3)显示出最强的抑制效果，而其他则对APE1具有激活效果。热图清晰地展示了药物对APE1的不同影响，通过热图的颜色变化表现出来(图9B，D)。此外，新方法被用于研究对APE1活性的NCA(一种广为人知的抑制剂)的影响。正如本申请所预期，NCA显示出对APE1出色的抑制效果(图9)。这一结果进一步验证了该新方法在APE1抑制剂筛选中的可靠性。
以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种比率量子点，其特征在于，所述比率量子点是由发射峰为520-530纳米的CdTe量子点和发射峰为637-647纳米的CdTe量子点混合得到。
2.根据权利要求1所述的比率量子点，其特征在于，所述发射峰为520-530纳米的CdTe量子点和发射峰为637-647纳米的CdTe量子点的质量比例为(2-8):(12-18)。
3.根据权利要求1所述的比率量子点，其特征在于，所述发射峰为520-530纳米的CdTe量子点和发射峰为637-647纳米的CdTe量子点的质量比例为8:12。
4.一种权利要求1所述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用。
5.一种权利要求1所述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，其特征在于，包括：
将AP探针、APE1酶、MOPS缓冲液混合孵育后进行退火处理，得到酶切产物；
在所述酶切产物中加入发夹探针和miRNA-21进行扩增反应，得到第一复合体；
在所述第一复合体中加入银纳米材料进行反应，得到第二复合体；
在所述第二复合体中加入酸溶液进行酸裂解处理，将pH值调至中性后，经磁分离，在所得上清液中加入权利要求1所述的比率量子点进行离子交换反应后，进行荧光强度测量，利用该比率量子点的荧光强度比值(F535nm/F648nm)的变化实现对APE1酶和miRNA-21的检测。
6.根据权利要求5所述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，其特征在于：
所述AP探针的5’至3’的序列如SEQ ID NO.1所示；
所述酶切产物的5’至3’的序列如SEQ ID NO.2所示；
所述发夹探针的5’至3’的序列如SEQ ID NO.3所示；
所述miRNA-21的5’至3’的序列如SEQ ID NO.4所示。
7.根据权利要求5所述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，其特征在于，所述将AP探针、APE1酶、MOPS缓冲液混合孵育后进行退火处理，得到酶切产物的步骤，包括：
将AP探针、APE1酶、MOPS缓冲液混合孵育30分钟后，置于80℃的条件下退火5分钟，得到酶切产物。
8.根据权利要求5所述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，其特征在于，所述AP探针的5’端通过生物素共价键修饰了磁珠；
所述AP探针和发夹探针在体系中的最终浓度均为100nM。
9.根据权利要求5所述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，其特征在于，所述银纳米材料的加入量为0.8微升；所述比率量子点的加入量为50微升。
10.根据权利要求5所述的比率量子点在同时检测APE1酶和miRNA-21中的应用方法，其特征在于，包括：
将2.7微升的7.5微摩AP探针和2微升的0.1U每微升APE1酶和140微升的10毫摩MOPS缓冲液置于37℃孵育30分钟后，在80度退火5分钟，形成酶切产物；
在所述酶切产物中加入2微升的10微摩的发夹探针和1微升的10微摩miRNA-21链继续在37℃反应1小时，形成第一复合体；
在所述第一复合体中加入0.8微升的银纳米材料，置于25℃黑暗条件下反应30分钟，形成第二复合体；
在所述第二复合体中加入2.5微升的酸溶液进行酸裂解5分钟，将pH值调至中性后进行磁分离，取上清液，再加入权利要求1所述的比率量子点50微升进行离子交换5分钟后，进行荧光强度测量，对所得荧光强度进行荧光比率分析，以实现对APE1酶和miRNA-21的检测。
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