CN118076384A - 抗pdl1抗体及其用途 - Google Patents

Abstract

以高结合亲和力与人程序性死亡配体1(PDL1)特异性结合的抗体、包括此类抗体的药物组合物，以及使用此类药物组合物治疗如癌症等目标疾病的方法。

Description

抗PDL1抗体及其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2021年6月17日提交的美国临时申请第63/211,794号和于2022年6月16日提交的美国专利申请第17/842,733号的优先权的权益，所述美国申请中的每一个均特此通过引用整体并入。

序列表

本申请含有已经以ASCII格式电子提交并且特此通过引用整体并入的序列表。创建于2022年6月10日的所述ASCII副本命名为112124-0020-70001WO00_SEQ.txt并且大小为65,515字节。

背景技术

程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)是在免疫细胞上表达的细胞表面受体并且充当负调控免疫应答的免疫检查点。程序性细胞死亡配体1(PDL1)是PD-1的配体之一。PDL1与PD-1的结合触发PD-1介导的信号传导途径，从而导致免疫应答的负调控。

考虑到免疫抑制作用，PD1/PDL1抑制剂被认为可激活针对例如癌细胞的免疫应答。事实上，针对PD1和PDL1的抗体已经在治疗各种类型的癌症方面显示出临床益处。

发明内容

本公开是基于与人PDL1具有增强的结合亲和力的抗PDL1抗体的开发。此类抗PDL1抗体预期可在激活免疫应答和治疗如癌症等疾病方面表现出优异的效果。

因此，本公开的一方面的特征在于一种与人程序性死亡配体1(PDL1)结合的分离的抗体。本文公开的抗PDL1抗体可以包括(a)重链可变区，所述重链可变区包括：(i)重链互补决定区(CDR)1，所述重链CDR1包括GDTFSTYAIS(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；(ii)重链CDR2，所述重链CDR2包括GIIPX₁FGKAH(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列，其中X₁是I或L；以及(iii)重链CDR3，所述重链CDR3包括KFX₂FVX₃GSPFGMDV(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列，其中X₂是H或R，并且X₃是S或R。可替代地或另外地，所述抗PDL1抗体可以包括(b)轻链可变区，所述轻链可变区包括：(i)轻链CDR1，所述轻链CDR1包括RASQSVSSYX₄X₅(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列，其中X₄是L或M，并且X₅是A、S或E；(ii)轻链CDR2，所述轻链CDR2包括DASNRAX₆(SEQ IDNO:14)的氨基酸序列，其中X₆是T、P、M或E；以及(iii)轻链CDR3，所述轻链CDR3包括QQRX₇NWPT(SEQ ID NO:19)的氨基酸序列，其中X₇是S或A。在一些实施例中，所述抗体不是12A4。

在一些实施例中，所述重链CDR2是GIIPIFGKAHYAQKFQG(SEQ ID NO:3)或GIIPLFGKAHYAQKFQG(SEQ ID NO:4)。可替代地或另外地，所述重链CDR3是KFHFVSGSPFGMDV(SEQ ID NO:6)、KFHFVRGSPFGMDV(SEQ ID NO:7)或KFRFVSGSPFGMDV(SEQ ID NO:8)。

在一些实施例中，所述轻链CDR1是RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:10)、RASQSVSSYLS(SEQ ID NO:11)、RASQSVSSYMA(SEQ ID NO:12)或RASQSVSSYLE(SEQ ID NO:13)。可替代地或另外地，所述轻链CDR2是DASNRAT(SEQ ID NO:15)、DASNRAP(SEQ ID NO:16)、DASNRAM(SEQ ID NO:17)或DASNRAE(SEQ ID NO:18)。可替代地或另外地，所述轻链CDR3是QQRSNWPT(SEQ ID NO:20)或QQRANWPT(SEQ ID NO:21)。

在一些实施例中，本文公开的抗PDL1抗体可以包括与抗体12A4a、12A4b、12A4c、12A4d、12A4e、12A4f、12A4g、12A4h、12A4i、12A4ad、12A4ba、12A4bd或12A4bad的重链CDR1-CDR3和/或轻链CDR1-CDR3相同的重链CDR1-CDR3和/或轻链CDR1-CDR3。在一些实例中，所述抗PDL1抗体可以包括与抗体12A4a、12A4b、12A4c、12A4d、12A4e、12A4f、12A4g、12A4h、12A4i、12A4ad、12A4ba、12A4bd或12A4bad的重链可变区和/或轻链可变区相同的重链可变区和/或轻链可变区。

本文公开的抗PDL1抗体中的任一种可以是全长抗体或其抗原结合片段。可替代地，所述抗体可以是单链可变片段(scFv)。本文公开的抗PDL1抗体中的任一种可以是人抗体或人源化抗体。

在另一方面，本文提供了一种核酸或一组核酸，所述一种核酸或一组核酸共同编码本文公开的抗PDL1抗体中的任一种。在一些实施例中，所述核酸或一组核酸可以是载体或一组载体，例如表达载体。

本文还提供了宿主细胞，所述宿主细胞包括编码本文公开的抗PDL1抗体的所述核酸或一组核酸。此类宿主细胞可以是细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。

进一步地，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括所述抗PDL1抗体中的任一种或其编码核酸以及药学上可接受的载剂。本公开还提供了一种用于抑制PDL1阳性细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的所述药物组合物。在一些情况下，所述受试者是患有癌症的人类患者。

另外，本公开提供了一种用于产生与人PDL1结合的抗体的方法，所述方法包括：(i)在允许表达本文公开的抗PDL1抗体的条件下培养包括所述抗体的编码核酸的宿主细胞；以及(ii)采集因此产生的所述抗体。

同样在本公开的范围内的是用于治疗与PD1-PDL1信号传导相关的病症(如癌症)的包括所述抗PDL1抗体中的任一种或其编码核酸的药物组合物，以及所述抗体或所述编码核酸用于制造用于治疗目标疾病的药物的用途。

在以下描述中阐述了本发明的一个或多个实施例的细节。本发明的其它特征或优点从以下附图和若干实施例的详细说明以及还从所附权利要求中将变得显而易见。

附图说明

以下附图形成本说明书的一部分，并且被包含在内以进一步说明本公开的某些方面，通过参考附图与本文呈现的具体实施例的详细说明的组合可以更好地理解所述方面。

图1是示出了如通过竞争性噬菌体ELISA测定的，相对于亲本克隆12A4，示例性抗PDL1抗体12A4bad与人PDL1的结合的图。

图2是示出了相对于德瓦鲁单抗(durvalumab)，示例性抗PDL1单克隆抗体12A4bad的基于细胞的亲和力测定的图。所测试的mAb表现出与高度表达PDL1的人乳腺癌细胞系MDAMB-231的剂量依赖性特异性结合。

图3是示出了相对于德瓦鲁单抗，示例性抗PDL1单克隆抗体12A4bad的PDL1/PD1阻断生物测定的结果的图。单克隆抗体12A4bad可以有效地阻断两种经基因工程化的细胞系PD-1效应细胞和PDL1 aAPC/CHO-K1细胞中的PDL1-PD1结合。

具体实施方式

本文提供了与人PDL1具有高结合亲和力的抗体(“抗PDL1抗体”)。相对于亲本12A4抗PDL1抗体，本文公开的抗PDL1抗体显示出与PDL1的高结合亲和力。

程序性死亡配体1(PDL1)，也称为CD274或B7同源物1，是一种约40kDa的1型跨膜蛋白，其在某些情况下发挥抑制免疫系统的自适应臂的作用。来自各种物种的PDL1分子在本领域是众所周知的。PDL1与存在于激活的T细胞、B细胞和髓系细胞上的其受体PD-1结合，以调节激活或抑制。据报道，PDL1的上调可能允许癌细胞逃避宿主免疫系统。抗PDL1抗体已作为有前景的抗癌剂被报道。

因此，本文公开的抗PDL1抗体可以用作用于治疗与PD1-PDL1信号传导相关的疾病(例如，各种类型的癌症)的治疗剂。本文所公开的抗体也可以用于研究目的。

I.高亲和力抗PDL1抗体

本公开提供了与PDL1(例如，人PDL1)结合的抗体。在一些实施例中，本文公开的抗PDL1抗体能够与在细胞表面上表达的PDL1结合。因此，本文公开的抗体可以出于治疗或诊断目的而用于阻断PD1-PDL1相互作用和/或靶向表达PDL1的免疫细胞。如本文所使用的，术语“抗PDL1抗体”是指能够与PDL1多肽结合的任何抗体，其可以具有合适的来源，例如人或非人哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、兔、灵长类动物，如猴等)。

抗体(可互换地以复数形式使用)是能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区的至少一个抗原识别位点来与靶标(如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)特异性结合的免疫球蛋白分子。如本文所使用的，术语“抗体”(例如，抗PDL1抗体)不仅涵盖完整(例如，全长)多克隆抗体或单克隆抗体，而且涵盖其抗原结合片段(如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链抗体(scFv)、包括抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双功能抗体、单结构域抗体(例如，纳米抗体)、单结构域抗体(例如，仅V_H抗体)、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)以及包括所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰构型，所述经修饰构型包含抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和经共价修饰的抗体。抗体(例如，抗半乳凝素-9抗体)包含任何类的抗体，如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不需要属于任何特定类。根据其重链恒定结构域的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白归为不同类。存在五大类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类中的若干类可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类的免疫球蛋白相对应的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类的免疫球蛋白的亚单元结构和三维构型是熟知的。

典型的抗体分子包括重链可变区(V_H)和轻链可变区(V_L)，它们通常参与抗原结合。V_H和V_L区可以进一步细分为高变区，也称为“互补决定区”(“CDR”)，其散布有更保守的被称为“框架区”(“FR”)的区。每个V_H和V_L通常由按以下顺序从氨基末端到羧基末端布置的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。框架区和CDR的范围可以使用本领域中已知的方法，例如通过Kabat定义、Chothia定义、AbM定义和/或接触定义来精确地鉴定，所有所述定义在本领域中都是熟知的。参见例如，Kabat,E.A.等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》,第五版,美国卫生与公众服务部(U.S.Department of Health and Human Services),NIH公开号91-3242；Chothia等人,(1989)《自然(Nature)》342:877；Chothia,C.等人(1987)《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917；Al-lazikani等人(1997)《分子生物学杂志(J.Molec.Biol.)》273:927-948；和Almagro,《分子识别杂志(J.Mol.Recognit.)》17:132-143(2004)。还参见hgmp.mrc.ac.uk and bioinf.org.uk/abs。

本文所描述的抗PDL1抗体可以是全长抗体，其含有两条重链和两条轻链，每条重链和轻链包含可变结构域和恒定结构域。可替代地，抗PDL1抗体可以是全长抗体的抗原结合片段。涵盖在术语全长抗体的“抗原结合片段”内的结合片段的实例包含(i)Fab片段—由V_L、V_H、C_L和C_H1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')₂片段—包含在铰链区处由二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由V_H和C_H1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的V_L和V_H结构域组成的Fv片段；(v)由V_H结构域组成的dAb片段(Ward等人,(1989)《自然》341:544-546)；以及(vi)保留功能的分离的互补决定区(CDR)。此外，虽然Fv片段的两个结构域V_L和V_H由单独的基因编码，但是这两个结构域可以使用重组方法通过使这两个结构域能够成为单个蛋白链的合成连接子来连接，在所述单个蛋白链中，V_L区和V_H区配对以形成单价分子(被称为单链Fv(scFv))。参见例如Bird等人(1988)《科学(Science)》242:423-426；和Huston等人(1988)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》85:5879-5883。

本文所描述的抗体可以具有合适的来源，例如鼠、大鼠或人。此类抗体是非天然存在的，即在没有人类行为(例如，用所期望的抗原或其片段免疫此类动物或从抗体文库中分离)的情况下将不会在动物中产生。本文所描述的抗体中的任何抗体(例如抗PDL1抗体)可以是单克隆的或多克隆的。“单克隆抗体”是指同质抗体群，并且“多克隆抗体”是指异质抗体群。这两个术语并不限制抗体的来源或制备抗体的方式。

在一些实施例中，抗PDL1抗体可以是人源化抗体或嵌合抗体。人源化抗体是指为特异性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的抗原结合片段的非人(例如，鼠)抗体的形式。通常，人源化抗体是来自接受者的CDR的残基被来自如小鼠、大鼠或兔等具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)的CDR的残基替代的人免疫球蛋白(接受者抗体)。在一些情况下，一个或多个人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被对应的非人残基替代。此外，人源化抗体可以包括既未在接受者抗体中发现也未在导入的CDR或框架序列中发现但被包含在内以进一步精化和优化抗体性能的残基。在一些情况下，人源化抗体可以包括至少一个并且通常两个可变结构域中的基本上所有可变结构域，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些区，并且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些区。人源化抗体最佳地还将包括免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白恒定区或结构域的至少一部分。抗体可以具有如WO 99/58572所描述的修饰的Fc区。其它形式的人源化抗体具有关于原始抗体改变的一个或多个CDR(一个、两个、三个、四个、五个或六个)，也称为“源自”来自原始抗体的一个或多个CDR的一个或多个CDR。人源化抗体还可以涉及亲和力成熟。用于构建人源化抗体的方法也是本领域熟知的。参见例如，Queen等人,《美国国家科学院院刊》,86:10029-10033(1989)。

在一些实施例中，本文所公开的抗PDL1抗体可以是嵌合抗体。嵌合抗体是指具有来自第一物种的可变区或可变区的一部分和来自第二物种的恒定区的抗体。通常，在这些嵌合抗体中，轻链和重链的可变区均模拟来源于一种哺乳动物(例如非人类哺乳动物，如小鼠、兔和大鼠)的抗体的可变区，而恒定部分与来源于另一种哺乳动物如人类的抗体中的序列同源。在一些实施例中，可以在可变区和/或恒定区中进行氨基酸修饰。为生产“嵌合抗体”而开发的技术是本领域所熟知的。参见例如，Morrison等人(1984)《美国国家科学院院刊》81,6851；Neuberger等人(1984)《自然》312,604；以及Takeda等人(1984)《自然》314:452。

在一些实施例中，本文所述的抗PDL1抗体对靶抗原(例如，PDL1)或其抗原表位具有合适的结合亲和力。如本文所使用的，“结合亲和力”是指表观缔合常数或K_A。K_A是解离常数(K_D)的倒数。本文所描述的抗PDL1抗体对PDL1的结合亲和力(K_D)可以为至少100nM、10nM、1nM、0.1nM或更低。增大的结合亲和力对应于减小的K_D。抗体相对于第二抗原对第一抗原的更高亲和力结合可以通过比用于与第二抗原结合的K_A(或数值K_D)更高的用于与第一抗原结合的K_A(或更小的数值K_D)来指示。在此类情况下，所述抗体相对于第二抗原(例如，第二构象或其模拟物中的相同的第一蛋白质；或第二蛋白质)对第一抗原(例如，第一构象或其模拟物中的第一蛋白质)具有特异性。结合亲和力的差异(例如，对于特异性或其它比较)可以为至少1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍、37.5倍、50倍、70倍、80倍、90倍、100倍、500倍、1000倍、10,000倍或10⁵倍。在一些实施例中，任何抗PDL1抗体可以进一步亲和力成熟以增加抗体对靶抗原或其抗原表位的结合亲和力。

可以通过各种方法来确定结合亲和力(或结合特异性)，包含平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子共振或光谱学(例如，使用荧光测定)。用于评估结合亲和力的示例性条件为处于HBS-P缓冲液(10mM HEPES pH7.4，150mM NaCl，0.005％(v/v)表面活性剂P20)中。这些技术可以用于测量结合的结合蛋白随着靶蛋白浓度变化的浓度。结合的结合蛋白的浓度([结合(Bound)])通常通过以下等式与游离靶蛋白的浓度([游离(Free)])相关：

[结合]＝[游离]/(Kd+[游离])。

然而，并不总是需要对K_A进行精确测定，因为有时例如通过功能性测定，例如体外或体内测定中的活性足以获得对亲和力的定量测量、获得对亲和力的定性测量或者获得对亲和力的推断，所述亲和力例如是使用如ELISA或FACS分析等方法确定的、与K_A成正比并且因此可以用于比较，如确定更高的亲和力是否例如高2倍。

在一些实施例中，本文所公开的抗PDL1抗体对于与PDL1阳性细胞结合具有低于10nM的EC₅₀值，例如<5nM、<2nM或<1nM。如本文所使用的，EC₅₀值是指与PDL1阳性细胞群中50％的细胞结合所需的抗体的最小浓度。EC₅₀值可以使用常规测定和/或本文所公开的测定来确定。参见例如下文实例1。

下表1中提供了许多示例性抗PDL1抗体(如通过Kabat方法鉴定的CDR)。参见例如，Kabat,E.A.等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列》,第五版,美国卫生与公共服务部,NIH公开号91-3242。还参见www2.mrc-lmb.cam.ac.uk/vbase/alignments2.php.2018EP187-A12(又名EP187-A12)

表1.示例性抗PDL1抗体

在一些实施例中，本文公开的抗PDL1抗体可以包括：(i)重链互补决定区(CDR)1，所述重链CDR1包括GDTFSTYAIS(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列；(ii)重链CDR2，所述重链CDR2包括GIIPX₁FGKAH(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列，其中X₁是I或L；以及(iii)重链CDR3，所述重链CDR3包括KFX₂FVX₃GSPFGMDV(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列，其中X₂是H或R，并且X₃是S或R；和/或(iv)轻链CDR1，所述轻链CDR1包括RASQSVSSYX₄X₅(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列，其中X₄是L或M，并且X₅是A、S或E；(v)轻链CDR2，所述轻链CDR2包括DASNRAX₆(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列，其中X₆是T、P、M或E；以及(vi)轻链CDR3，所述轻链CDR3包括QQRX₇NWPT(SEQ IDNO:19)的氨基酸序列，其中X₇是S或A。

在一些实例中，本文公开的抗PDL1抗体中的重链CDR2包括GIIPIFGKAHYAQKFQG(SEQ ID NO:3)的氨基酸序列。在其它实例中，重链CDR2可以包括GIIPLFGKAHYAQKFQG(SEQID NO:4)的氨基酸序列。

在一些实例中，本文公开的抗PDL1抗体的重链CDR3可以包括KFHFVSGSPFGMDV(SEQID NO:6)的氨基酸序列。在其它实例中，重链CDR3可以包括KFHFVRGSPFGMDV(SEQ ID NO:7)的氨基酸序列。在又其它实例中，重链CDR3可以包括KFRFVSGSPFGMDV(SEQ ID NO:8)的氨基酸序列。

在一些实例中，抗PDL1抗体的轻链CDR1可以包括RASQSVSSYLA(SEQ ID NO:10)的氨基酸序列。在其它实例中，轻链CDR1可以包括RASQSVSSYLS(SEQ ID NO:11)的氨基酸序列。可替代地，轻链CDR1可以包括RASQSVSSYMA(SEQ ID NO:12)的氨基酸序列。在其它实例中，轻链CDR1可以包括RASQSVSSYLE(SEQ ID NO:13)的氨基酸序列。

在一些实例中，本文公开的抗PDL1抗体的轻链CDR2可以包括DASNRAT(SEQ ID NO:15)的氨基酸序列。在其它实例中，轻链CDR2可以包括DASNRAP(SEQ ID NO:16)的氨基酸序列。可替代地，轻链CDR2可以包括DASNRAM(SEQ ID NO:17)的氨基酸序列。在又其它实例中，轻链CDR2可以包括DASNRAE(SEQ ID NO:18)的氨基酸序列。

在一些实例中，本文公开的抗PDL1抗体的轻链CDR3可以包括QQRSNWPT(SEQ IDNO:20)的氨基酸序列。可替代地，轻链CDR3可以包括QQRANWPT(SEQ ID NO:21)的氨基酸序列。

在一些情况下，本文公开的抗PDL1抗体可以具有本文公开的任何重链CDR1-CDR3区的组合和/或本文公开的任何轻链CDR1-CDR3区的组合，条件是所述抗体不具有与抗体12A4的重链和轻链CDR相同的重链和轻链CDR。在一些实例中，抗PDL1抗体具有与上表1中列出的示例性抗PDL1抗体(例如，12A4a、12A4b、12A4d、12A4ad、12A4ba、12A4bd或12A4bad)的重链和/或轻链CDR相同的重链和/或轻链CDR。在具体实例中，抗PDL1抗体具有与抗体12A4bad的重链和轻链CDR相同的重链和轻链CDR。

在一些情况下，本文公开的抗PDL1抗体可以具有上表1中提供的任何V_H和V_L序列的组合。在一些实例中，抗PDL1抗体可以包括与上表1中列出的示例性抗体(例如，12A4a、12A4b、12A4d、12A4ad、12A4ba、12A4bd或12A4bad)的V_H和V_L序列相同的V_H和V_L序列。在具体实例中，抗PDL1抗体具有与抗体12A4bad的V_H和V_L相同的V_H和V_L。

两种抗体具有相同的V_H和/或V_L CDR意味着当通过同一方法(例如，本领域已知的Kabat方法、Chothia方法、AbM方法、接触方法或IMGT方法)确定时，它们的CDR是相同的。参见例如，bioinf.org.uk/abs/。与本文所述的示例性抗体相比，此类抗PDL1抗体可以具有相同的V_H、相同的V_L或两者。

如本文所公开的示例性抗PDL1抗体中的任何一种的功能变体也在本公开的范围内。此类功能变体在结构和功能两者上基本上类似于示例性抗体。功能变体包括与示例性抗体基本上相同的V_H和V_L CDR。例如，其可以在抗体的总CDR区中仅包括至多8个(例如，8个、7个、6个、5个、4个、3个、2个或1个)氨基酸残基变异，并且以基本上类似的亲和力(例如，具有相同数量级的K_D值)与相同PDL1表位结合。在一些情况下，功能变体可以具有与示例性抗体相同的重链CDR3，并且任选地具有与示例性抗体相同的轻链CDR3。可替代地或另外地，功能变体可以具有与示例性抗体相同的重链CDR2。与示例性抗体的V_H相比，此类抗PDL1抗体可以包括仅在重链CDR1中具有CDR氨基酸残基变异的V_H片段。在一些实例中，抗PDL1抗体可以进一步包括与示例性抗体具有相同V_L CDR3的V_L片段，以及任选地相同的V_L CDR1或VLCDR₂。

可替代地或另外，氨基酸残基变异可以是保守氨基酸残基取代。如本文所用，“保守氨基酸取代”是指不改变进行氨基酸取代的蛋白质的相对电荷或大小特性的氨基酸取代。可以根据用于改变本领域的普通技术人员已知的多肽序列的方法来制备变体，所述方法如编制此类方法的参考文献中发现的，所述参考文献例如，《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》,J.Sambrook等人编,第二版,纽约冷泉港的冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NewYork),1989或《分子生物学实验室指南(Current Protocols in Molecular Biology)》,F.M.Ausubel等人编辑,纽约的约翰威利父子出版公司(John Wiley&Sons,Inc.,NewYork)。氨基酸的保守取代包含在以下组中的氨基酸之间进行的取代：(a)M、I、L、V；(b)F、Y、W；(c)K、R、H；(d)A、G；(e)S、T；(f)Q、N；以及(g)E、D。

在一些实施例中，与本文所描述的示例性抗体的V_H CDR相比，抗PDL1抗体可以包括单独或共同具有至少80％(例如，85％、90％、95％或98％)序列同一性的重链CDR。可替代地或另外地，与作为本文所描述的示例性抗体的V_L CDR相比，抗PDL1抗体可以包括单独或共同具有至少80％(例如，85％、90％、95％或98％)序列同一性的轻链CDR。如本文所用，“单独地”意指相对于示例性抗体的对应CDR，抗体的一个CDR共享所指示的序列同一性。“共同地”意指组合的抗体的三个V_H或V_L CDR相对于组合的示例性抗体的对应三个V_H或V_L CDR共享所指示的序列同一性。

使用Karlin和Altschul《美国国家科学院院刊》87:2264-68,1990的算法来确定两个氨基酸序列的“同一性百分比”，所述算法如Karlin和Altschul《美国国家科学院院刊》90:5873-77,1993中那样进行修改。此类算法并入Altschul等人,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》215:403-10,1990的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)中。可以用XBLAST程序(分值＝50，字长＝3)来执行BLAST蛋白质检索以获得与所关注蛋白质分子同源的氨基酸序列。在两个序列之间存在空位的情况下，可以利用如Altschul等人,《核酸研究(NucleicAcids Res.)》25(17):3389-3402,1997中描述的带空位的BLAST(Gapped BLAST)。当利用BLAST程序和带空位的BLAST程序时，可以使用相应程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。

在一些实施例中，本文所描述的任何抗PDL1抗体的重链可以进一步包括重链恒定区(CH)或其一部分(例如，CH1、CH2、CH3或其组合)。重链恒定区可以具有任何合适的来源，例如人、小鼠、大鼠或兔。可替代地或另外地，抗PDL1抗体的轻链可以进一步包括轻链恒定区(CL)，其可以是本领域已知的任何CL。在一些实例中，CL是κ轻链。在其它实例中，CL是λ轻链。抗体重链和轻链恒定区是本领域众所周知的，例如IMGT数据库(www.imgt.org)或www.vbase2.org/vbstat.php.中提供的那些，这两个数据库以引用的方式并入本文中。

在一些实施例中，本文所公开的抗PDL1抗体可以是单链抗体(scFv)。scFv抗体可以包括V_H片段和V_L片段，所述片段可以通过柔性肽连接子连接。在一些情况下，scFv抗体可以处于朝向(N端至C端)。在其它情况下，scFv抗体可以处于/>朝向(N端至C端)。以下提供了示例性scFv抗PDL1抗体(CDR呈黑体，并且肽连接子呈黑体且加下划线)。

在一些实施例中，本文公开的抗PD-L1抗体中的任一种(例如，12A4bad)可以用于构建具有作为结合部分的抗PD-L1抗体(例如，V_L或V_H片段、scFv片段或Fab)的双特异性抗体或多特异性抗体。因此，包括本文公开的抗PD-L1抗体中的任一种(如12A4bad)的双特异性或多特异性抗体也在本公开的范围内。

本文所述的抗PDL1抗体中的任一种(例如，本文提供的示例性抗PDL1抗体)都可以与PDL1结合并抑制(例如，降低或消除)其活性。在一些实施例中，本文所述的抗PDL1抗体可以与PDL1结合并抑制其活性至少30％(例如，35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高，包含其中的任何增量)。本文所描述的抗PDL1抗体的抑制活性可以通过本领域已知的常规方法，例如通过用于测量K_i,^app值的测定来确定。

在一些实例中，抗体的K_i,^app值可以通过测量不同浓度的抗体对相关反应程度的抑制作用来确定；将作为抑制剂浓度的函数的伪一阶速率常数(v)的变化拟合到修正的莫里森等式(Morrison equation)(等式1)得到表观Ki值的估计值。对于竞争性抑制剂，可以根据从K_i,^app与底物浓度的绘图的线性回归分析中提取的y截距获得Ki^app。

其中A等于v_o/E，在抑制剂(I)不存在的情况下酶反应的初始速度(v_o)除以总酶浓度(E)。在一些实施例中，本文所描述的抗PDL1抗体对于靶抗原或抗原表位的Ki^app值可以为1000、500、100、50、40、30、20、10、5pM或更小。

II.抗PDL1抗体的制备

可以通过本领域已知的任何方法来制备如本文所描述的能够与PDL1结合的抗体。参见例如，Harlow和Lane,(1998),《抗体：实验室手册(Antibodies:A LaboratoryManual)》,纽约的冷泉港实验室(Cold Spring Harbor Laboratory)。在一些实施例中，抗体可以通过常规杂交瘤技术产生。可替代地，可以从合适的文库(例如，人抗体文库)中鉴定抗PDL1抗体。

在一些实例中，能够与本文所述的靶抗原(PDL1分子)结合的抗体可以通过本文提供的常规实践或指导从合适的抗体文库中分离(参见下面的实例1)。抗体文库可以用于通过常规筛选过程鉴定与靶抗原(例如，人PDL1，如细胞表面PDL1)结合的蛋白质。在选择过程中，用靶抗原或其片段探测多肽组分，并且如果多肽组分与靶标结合，通常通过保留在载体上来鉴定抗体文库成员。保留的展示文库成员从载体中回收并进行分析。所述分析可以包含扩增和随后在相似或不相似条件下的选择。例如，正选择和负选择可以交替。所述分析还可以包含确定多肽组分的氨基酸序列和多肽组分的纯化，用于详细的表征。

存在本领域已知的用于鉴定和分离能够与本文所描述的靶抗原结合的抗体的多种常规方法，包含噬菌体展示、酵母展示、核糖体展示或哺乳动物展示技术。

可以经由常规方法制备完整抗体(全长抗体)的抗原结合片段。例如，可以通过胃蛋白酶消化抗体分子来产生F(ab')2片段，并且可以通过减少F(ab')2片段的二硫桥键来生成Fab片段。

可以通过例如常规重组技术来产生如人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体和双特异性抗体等经基因工程化的抗体。在一个实例中，使用常规程序(例如，通过使用能够与编码单克隆抗体的重链和轻链的基因特异性地结合的寡核苷酸探针)可以容易地分离和测序编码对靶抗原具有特异性的单克隆抗体的DNA。一经分离，可以将DNA放置于一个或多个表达载体中，然后将所述表达载体转染到如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或不以其它方式产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞等宿主细胞中，以获得重组宿主细胞中单克隆抗体的合成。参见例如，PCT公开第WO 87/04462号。然后可以例如通过用编码序列取代代替同源鼠类序列的人重链和轻链恒定结构域(Morrison等人,(1984)《美国国家科学院院刊》81:6851)或者通过使非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或一部分与免疫球蛋白编码序列共价连接来对DNA进行修饰。以所述方式，可以制备具有靶抗原的结合特异性的经基因工程化的抗体，如“嵌合”抗体或“杂合”抗体。

为生产“嵌合抗体”而开发的技术是本领域所熟知的。参见例如，Morrison等人(1984)《美国国家科学院院刊》81,6851；Neuberger等人(1984)《自然》312,604；以及Takeda等人(1984)《自然》314:452。

用于构建人源化抗体的方法也是本领域熟知的。参见例如，Queen等人,《美国国家科学院院刊》,86:10029-10033(1989)。在一个实例中，按照本领域已知的方法对亲本非人抗体的V_H和V_L可变区进行三维分子建模分析。接下来，使用相同的分子建模分析来鉴定被预测对形成正确CDR结构具有重要性的框架氨基酸残基。同时，使用亲本V_H和V_L序列作为搜索查询来从任何抗体基因数据库中鉴别具有与亲本非人抗体的氨基酸序列同源的氨基酸序列的人V_H链和人V_L链。然后选择人V_H受体基因和人V_L受体基因。

可以用来自亲本非人抗体或其功能变体的CDR区替代所选人受体基因内的CDR区。在必要时，可以使用在亲本链的框架区内被预测在与CDR区相互作用时具有重要性的残基(参见以上描述)来取代人受体基因中的对应残基。

可以通过连接编码重链可变区的核苷酸序列和编码轻链可变区的核苷酸序列来通过重组技术制备单链抗体。优选地，在两个可变区之间并入柔性连接子。可替代地，所描述的用于产生单链抗体的技术(美国专利第4,946,778号和第4,704,692号)可以适用于产生噬菌体展示、酵母展示、哺乳动物细胞展示或mRNA展示scFv文库并且可以按照常规程序从所述文库中鉴别对PDL1具有特异性的scFv克隆体。可以对阳性克隆进行进一步筛选，以鉴定那些增强PDL1活性的克隆。

可以使用本领域所熟知的方法来对按照本领域所熟知的方法获得的和本文所描述的抗体进行表征。例如，一种方法是鉴别与抗原结合的表位或“表位映射”。存在多种本领域已知的用于映射和表征蛋白质上的表位位置的方法，所述方法包含解析抗体-抗原复合物的晶体结构、竞争测定、基因片段表达测定和基于合成肽的测定，如例如在以下文献的第11章中所描述的：Harlow和Lane,《使用抗体实验指南(Using Antibodies,aLaboratoryManual)》,纽约冷泉港的冷泉港实验室出版社,1999。在另外的实例中，表位映射可以用于确定与抗体结合的序列。表位可以是线性表位(即，含在单个氨基酸区段中)或由不一定含在单个区段中的氨基酸的三维相互作用形成的构象表位(一级结构线性序列)。可以对不同长度(例如，至少4-6个氨基酸长)的肽进行分离或合成(例如，重组)并且用于与抗体的结合测定。在另一个实例中，可以通过使用衍生自靶抗原序列的重叠肽并确定抗体的结合来在全身筛选中确定与抗体结合的表位。根据基因片段表达测定，随机地或通过特异性遗传构建体使编码靶抗原的开放阅读框片段化并且确定抗原的表达片段与待测试抗体的反应性。例如，基因片段可以通过PCR产生并且然后在存在放射性氨基酸的情况下在体外转录并翻译成蛋白质。然后通过免疫沉淀和凝胶电泳来确定抗体与放射性标记的抗原片段的结合。也可以通过使用在噬菌体颗粒表面展示的随机肽序列的大型文库(噬菌体文库)来鉴别某些表位。

可替代地，可以在简单的结合测定中测试重叠肽片段的限定文库与测试抗体的结合。在另外的实例中，可以执行抗原结合结构域的诱变、结构域交换实验和丙氨酸扫描诱变以鉴别表位结合所需的、足够的和/或必需的残基。例如，可以使用靶抗原的突变体执行结构域交换实验，其中PDL1的各种片段已经被来自密切相关但抗原性不同的蛋白质(如肿瘤坏死因子受体家族的另一个成员)的序列替换(交换)。通过评估抗体与突变的PDL1的结合，可以评估特定抗原片段对抗体结合的重要性。

可替代地，可以使用已知的与相同抗原结合的其它抗体来执行竞争测定以确定抗体是否结合了与其它抗体相同的表位。竞争测定是本领域技术人员所熟知的。

在一些实例中，可以通过重组技术制备抗PDL1抗体，如下所例示。

可以将对如本文所描述的抗PDL1抗体的重链和轻链进行编码的核酸克隆到一个表达载体中，每个核苷酸序列与适合的启动子可操作地连接。在一个实例中，对重链和轻链进行编码的核苷酸序列中的每个核苷酸序列与不同的启动子可操作地连接。可替代地，对重链和轻链进行编码的核苷酸序列可以与单个启动子可操作地连接，使得重链和轻链两者均从同一启动子表达。在必要时，可以在对重链和轻链进行编码的序列之间插入内部核糖体进入位点(IRES)。

在一些实例中，将对抗体的两条链进行编码的核苷酸序列克隆到两个载体中，所述载体可以被引入到相同或不同的细胞中。当在不同的细胞中表达这两条链时，其中的每条链均可以从表达这种链的宿主细胞中分离，并且分离的重链和轻链可以混合并在允许形成抗体的合适条件下温育。

通常，可以使用本领域已知的方法将对抗体的一条或所有链进行编码的核酸序列克隆到合适的表达载体中、与合适的启动子可操作地连接。例如，可以在合适条件下使核苷酸序列和载体与限制酶相接触，以在每个分子上产生可以彼此配对并且用连接酶连接在一起的互补端。可替代地，可以将合成核酸连接子与基因的末端连接。这些合成连接子含有对应于载体中的特定限制性位点的核酸序列。表达载体/启动子的选择将取决于用于产生抗体的宿主细胞的类型。

可以使用各种启动子来表达本文所描述的抗体，所述启动子包含但不限于巨细胞病毒(CMV)中间早期启动子、如劳斯肉瘤(Rous sarcoma)病毒LTR、HIV-LTR、HTLV-1LTR等病毒LTR、猿猴病毒40(SV40)早期启动子、大肠杆菌(E.coli)lac UV5启动子和单纯性疱疹tk病毒启动子。

还可以使用可调节的启动子。这些可调节的启动子包含使用来自大肠杆菌的阻遏物作为转录调制剂对携带有lac操纵基因的哺乳动物细胞启动子的转录进行调节的那些启动子[Brown,M.等人,《细胞(Cell)》,49:603-612(1987)]、使用四环素阻遏物(tetR)的那些启动子[Gossen,M.和Bujard,H.,《美国国家科学院院刊》89:5547-5551(1992)；Yao,F等人,《人类基因疗法(Human Gene Therapy)》,9:1939-1950(1998)；Shockelt,P.等人,《美国国家科学院院刊》,92:6522-6526(1995)]。其它系统包含FK506二聚体、使用雄二醇(astradiol)的VP16或p65、RU486、二元酚米乐甾酮(diphenol murislerone)或雷帕霉素(rapamycin)。诱导型系统可从英杰公司(Invitrogen)、克隆技术公司(Clontech)和阿瑞雅德公司(Ariad)获得。

可以使用包含具有操纵子的阻遏物的可调控启动子。在一个实施例中，来自大肠杆菌的lac阻遏物可以充当转录调节剂来调节来自携带lac操纵子的哺乳动物细胞启动子的转录[M.Brown等人,《细胞》,49:603-612(1987)；Gossen和Bujard(1992)；M.Gossen等人,《美国国家科学院院刊》,89:5547-5551(1992)]，所述携带有lac操纵基因的哺乳动物细胞启动子将四环素阻遏物(tetR)与转录激活子(VP 16)组合，以产生tetR-哺乳动物细胞转录激活子融合蛋白tTa(tetR-VP 16)，携带有tetO的哺乳动物启动子衍生自人巨细胞病毒(hCMV)主要立即早期启动子以用于产生tetR-tet操纵基因系统来控制哺乳动物细胞中的基因表达。在一个实施例中，使用四环素诱导型开关。当四环素操纵基因适当地定位在CMVIE启动子的TATA元件下游时，四环素阻遏物(tetR)而非tetR-哺乳动物细胞转录因子融合衍生物可以单独用作强效反式调节剂来调节哺乳动物细胞中的基因表达(Yao等人,《人类基因疗法》,10(16):1392-1399(2003))。这个四环素诱导型开关的一个特别的优点是其不需要使用四环素阻遏物-哺乳动物细胞反式激活子或阻遏物融合蛋白来实现其可调节作用，在一些情况下，所述四环素阻遏物-哺乳动物细胞反式激活子或阻遏物融合蛋白可能对细胞有毒(Gossen等人,《美国国家科学院院刊》,89:5547-5551(1992)；Shockett等人,《美国国家科学院院刊》,92:6522-6526(1995))。

另外，载体可以含有例如，以下中的一些或全部：可选择标志物基因，如用于在哺乳动物细胞中选择稳定或瞬时转染子的新霉素基因；用于高水平转录的来自人CMV的立即早期基因的增强子/启动子序列；用于mRNA稳定性的来自SV40的转录终止和RNA加工信号；用于适当的附加型复制的SV40多瘤复制起点和ColE1；内部核糖体结合位点(IRES)；通用多克隆位点；以及用于正义和反义RNA的体外转录的T7和SP6 RNA启动子。用于产生含有转基因的载体的合适的载体和方法是本领域熟知并且可获得的。

可用于实践本文所描述的方法的聚腺苷酸化信号的实例包含但不限于人胶原蛋白I聚腺苷酸化信号、人胶原蛋白II聚腺苷酸化信号和SV40聚腺苷酸化信号。

可以将包括对抗体中的任何抗体进行编码的核酸的一个或多个载体(例如，表达载体)引入到合适的宿主细胞中以用于产生抗体。可以在合适的条件下培养宿主细胞以用于表达抗体或其任何多肽链。可以通过常规方法，例如亲和力纯化通过培养的细胞(例如，来自细胞或培养上清液)来回收这种抗体或其多肽链。如果有必要，可以在合适的条件下在允许产生抗体的合适时间段内温育抗体的多肽链。

在一些实施例中，用于制备也如本文所描述的抗PDL1抗体的方法涉及对如本文所述的抗体的重链和轻链进行编码的重组表达载体。可以通过常规方法，例如磷酸钙介导的转染将重组表达载体引入到合适的宿主细胞(例如，dhfr-CHO细胞)中。可以选择并在允许表达形成抗体的两个多肽链的合适条件下培养阳性转化体宿主细胞，这两个多肽链可以从细胞或从培养基中回收。在必要时，可以在允许形成抗体的合适条件下培育从宿主细胞中回收的所述两个链。

在一个实例中，提供了两种重组表达载体，一种重组表达载体编码抗PDL1抗体的重链并且另一种重组表达载体编码抗PDL1抗体的轻链。可以通过常规方法，例如磷酸钙介导的转染将这两种重组表达载体都引入到合适的宿主细胞(例如，dhfr-CHO细胞)中。可替代地，可以将表达载体中的每种表达载体均引入到合适的宿主细胞中。可以选择并在允许表达抗体的多肽链的合适条件下培养阳性转化体。在将两种表达载体引入到相同的宿主细胞中时，可以从宿主细胞或从培养基中回收其中产生的抗体。如果有必要，可以从宿主细胞或从培养基中回收多肽链，并且然后在允许形成抗体的合适条件下温育多肽链。当将所述两种表达载体引入到不同的宿主细胞中时，所述两种表达载体中的每种表达载体可以从对应的宿主细胞或从对应的培养基中回收。然后可以在合适的条件下温育所述两个多肽链以用于形成抗体。

使用标准分子生物学技术来制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞以及从培养基中回收抗体。例如，可以用蛋白质A或蛋白质G偶联基质通过亲和色谱法来分离一些抗体。

编码如本文所描述的抗PDL1抗体的重链、轻链或两者的任何核酸，含有此类核酸的载体(例如，表达载体)；以及包括载体的宿主细胞都在本公开的范围内。

III.抗PDL1抗体的应用

本文所公开的任何抗PDL1抗体可以用于治疗、诊断和/或研究目的，所有这些都在本公开的范围内。

药物组合物

如本文所描述，抗体以及编码核酸或核酸组、包括所述核酸的载体或包括所述载体的宿主细胞可以与药学上可接受的载剂(赋形剂)混合，以形成用于治疗目标疾病的药物组合物。“可接受的”意指载剂必须与组合物的活性成分相容(并且优选地，能够稳定活性成分)并且对待治疗的受试者无害。包含缓冲液的药学上可接受的赋形剂(载剂)，所述缓冲液在本领域中是熟知的。参见例如，《雷明顿：药学科学与实践(Remington:The Science andPractice of Pharmacy)》,第20版,(2000),利平科特·威廉姆斯与威尔金斯公司(Lippincott Williams and Wilkins),K.E.Hoover编辑。

用于本发明方法的药物组合物可以包括冻干调配物或水溶液形式的药学上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂。《雷明顿：药学科学与实践》,第20版,(2000),利平科特·威廉姆斯与威尔金斯公司,K.E.Hoover编辑。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且可以包括缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包含抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化六甲铵；苯扎氯銨；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟苯甲酸烷基酯，如对羟苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3'-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或葡聚糖；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子，如钠；金属络合物(例如，Zn蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。

在一些实例中，本文所描述的药物组合物包括含有抗体(或编码核酸)的脂质体，所述脂质体可以通过本领域已知的方法制备，如以下文献中所描述的方法：Epstein等人,《美国国家科学院院刊》82:3688(1985)；Hwang等人,《美国国家科学院院刊》77:4030(1980)；以及美国专利第4,485,045号和第4,544,545号。具有增强的循环时间的脂质体公开于例如美国专利第5,013,556号中。特别有用的脂质体可以用包括磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物通过反相蒸发法产生。通过具有限定孔径的过滤器将脂质体挤出以产生具有期望直径的脂质体。

还可以将抗体或一种或多种编码核酸包埋在例如通过凝聚法技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中、胶状药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)中、或粗乳液中。这种技术是本领域已知的，参见例如，《雷明顿：药学科学与实践》第20版马克出版公司(Mack Publishing)(2000)。

在其它实例中，本文所描述的药物组合物可以被调配成缓释格式。持续释放制剂的适合的实例包含含有抗体的固体疏水性聚合物的半渗透基质，所述基质采用例如薄膜或微胶囊等成型物品的形式。缓释基质的实例包含聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(美国专利第3,773,919号)、L-谷氨酸和7乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物，如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的可注射微球)，乙酸异丁酸蔗糖酯和聚D-(-)-3-羟丁酸。

要用于体内施用的药物组合物必须是无菌的。这通过例如无菌过滤膜过滤而容易地实现。通常将治疗性抗体组合物放置在具有无菌进口端的容器中，例如，具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶中。

本文所描述的药物组合物可以采用单位剂型，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、溶液或悬浮液或栓剂，以用于口服、肠胃外或直肠施用或者通过吸入或吹入施用。

为了制备如片剂等固体组合物，可以将主要活性成分与药物载剂例如常规压片成分(如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或树胶)和如水等其它药物稀释剂混合，以形成含有本发明的化合物的均相混合物固体预调配组合物或其药学上可接受的无毒盐。在称这些预调配组合物均相时，这意味着活性成分均匀地分散在整个组合物中，使得组合物可以容易地细分成等效单位剂型，如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将这个固体预调配组合物细分成上述类型的单位剂型，所述单位剂型含有0.1至约500mg本发明的活性成分。可以包覆或以其它方式配混新组合物的片剂或丸剂以提供给出延长作用的优点的剂型。例如，片剂或丸剂可以包括内剂量组分和外剂量组分，后者在前者之上采用包膜的形式。这两种组分可以通过肠溶层分开，所述肠溶层用于抵抗胃中的崩解并且允许内组分完整地传递进入十二指肠或被延迟释放。多种材料可以用于这种肠溶层或包衣，此类材料包含多种聚合酸以及聚合酸与如虫胶、十六醇和乙酸纤维素等此类材料的混合物。

合适的表面活性剂具体地包含非离子剂，如聚氧乙烯山梨聚糖(例如，Tween^TM 20、40、60、80或85)和其它山梨聚糖(例如，Span^TM 20、40、60、80或85)。具有表面活性剂的组合物将方便地包括0.05与5％之间的表面活性剂并且可以介于0.1与2.5％之间。应当理解，如果有必要的话，可以添加其它成分，例如甘露醇或其它药学上可接受的媒剂。

可以使用如Intralipid^TM、Liposyn^TM、Infonutrol^TM、Lipofundin^TM和Lipiphysan^TM等可商购获得的脂肪乳剂来制备合适的乳剂。活性成分可以溶解在预混合的乳剂组合物中，或者可替代地，活性成分可以溶解在油(例如，大豆油、红花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)和在与磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水混合时形成的乳剂中。应当理解，可以添加其它成分，例如甘油或葡萄糖，以调整乳剂的张力。合适的乳剂通常含有至多20％的油，例如，介于5与20％之间。脂肪乳剂可以包括介于0.1μm与1.0μm之间、具体地介于0.1μm与0.5μm之间的脂肪滴，并且pH可以在5.5至8.0的范围内。

乳剂组合物可以是通过将抗体与Intralipid^TM或其组分(大豆油、卵磷脂、甘油和水)混合而制备的那些乳剂组合物。

治疗应用

为了实践本文所公开的方法，可以通过合适的途径向需要治疗的受试者(例如，人)施用有效量的本文所描述的药物组合物，所述合适的途径如静脉内施用(例如，如团注或通过一段时间内的连续输注)、通过肌肉内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、吸入或局部途径。包含喷射雾化器和超声雾化器的用于液体调配物的可商购获得的雾化器可用于施用。液体调配物可以直接雾化并且冻干粉可以在重构之后雾化。可替代地，本文所述的抗体可以使用碳氟化合物调配物和计量吸入器来雾化或者作为冻干粉和研磨粉吸入。

待通过本文所述的方法治疗的受试者可以是哺乳动物，更优选地是人。哺乳动物包含但不限于家畜、运动动物(sport animal)、宠物、灵长类动物、马、狗、猫、小鼠和大鼠。需要治疗的人类受试者可以是患有、有风险罹患或怀疑患有以携带PDL1⁺疾病细胞为特征的目标疾病/病症的人类患者。此类目标疾病/病症的实例包含造血系统癌症，例如B细胞谱系的癌症。实例包含但不限于血液学B细胞肿瘤，包含淋巴细胞性白血病，例如B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；B细胞急性淋巴母细胞性白血病(ALL)和B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)。

患有靶标癌症的受试者可以通过常规医学检查，例如实验室测试、器官功能测试、CT扫描或超声波来鉴定。在一些实施例中，通过本文所述的方法待治疗的受试者可以是已经经历或正经受抗癌疗法(例如，化学疗法、放射疗法、免疫疗法或外科手术)的人类癌症患者。

疑似患有任何此类目标疾病/病症的受试者可能显示出所述疾病/病症的一种或多种症状。有患有疾病/病症风险的受试者可以是具有所述疾病/病症的风险因素中的一种或多种风险因素的受试者。

如本文所使用的，“有效量”是指单独地或与一种或多种其它活性剂组合赋予受试者治疗效果所需的每种活性剂的量。确定抗体的量是否达到治疗效果对于本领域的技术人员而言将是显而易见的。如本领域技术人员所认识到的，有效量的变化取决于所治疗的具体病状、病状的严重程度、个体患者的参数，包含年龄、身体病状、体型、性别和体重、治疗的持续时间、并行疗法(如果存在的话)的性质、特定的施用途径以及健康从业者知识和专长范围内的类似因素。这些因素是本领域普通技术人员熟知的，并且可以通过常规实验解决。通常优选使用个别组分或其组合的最大剂量，也就是说，根据合理的医学判断的最高安全剂量。

如半衰期等经验性考虑通常将有助于确定剂量。例如，可以使用如人源化抗体或完全人抗体等与人免疫系统相容的抗体来延长抗体的半衰期并防止抗体受到宿主的免疫系统的攻击。可以在疗程中确定和调节施用频率，并且通常但未必基于目标疾病/病症的治疗和/或抑制和/或减轻和/或延缓。可替代地，抗体的持续连续释放调配物可能是适当的。用于实现持续释放的各种调配物和装置在本领域中是已知的。

在一个实例中，可以在已经给予了抗体的一次或多次施用的个体中凭经验确定如本文所描述的抗体的剂量。给予个体递增剂量的激动剂。为了评定激动剂的功效，可以遵循疾病/病症的指标。

出于本公开的目的，根据以上提到的因素，典型日剂量的范围可以为约0.1μg/kg至3μg/kg、至30μg/kg、至300μg/kg、至3mg/kg、至30mg/kg、至100mg/kg或更多的任何剂量。对于在若干天或更长时间内的重复施用，根据病状，治疗持续到出现期望的症状抑制或持续到达到足以减轻目标疾病或病症或其症状的治疗水平。这一疗法的进展通过常规技术和测定容易地监测。给药方案(包含使用的抗体)可以随时间推移而变化。

特定的给药方案，即，剂量、时间和重复，将取决于特定个体和所述个体的病史以及个别药剂的性质(如药剂的半衰期和本领域所熟知的其它考虑因素)。

出于本公开的目的，如本文所描述的抗体的适当剂量将取决于所采用的特异性抗体、抗体和/或非抗体肽(或其组合物)、疾病/病症的类型和严重程度、抗体是否出于预防或治疗目的而施用、既往疗法、患者的临床病史和对激动剂的应答、以及主治医师的判定。临床医生通常将施用抗体，直至达到实现期望结果的剂量。在一些实施例中，期望的结果是肿瘤微环境中抗肿瘤免疫应答的增加。确定剂量是否产生期望结果的方法对于本领域的技术人员而言将是显而易见的。一种或多种抗体的施用可以是连续的或间歇的，这取决于例如受者的生理病状、施用的目的是治疗性的还是预防性的以及熟练从业者已知的其它因素。抗体的施用可以在预选时间段内基本上是连续的，或者可以例如在发展目标疾病或病症之前、期间或之后采用一系列间隔剂量。

如本文所用，术语“治疗”是指向受试者施加或施用包含一种或多种活性剂的组合物，所述受试者患有目标疾病或病症、疾病/病症的症状或对疾病/症状有易感性，其目的是治疗、治愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、改进或影响病症、疾病的症状或对疾病或病症的易感性。

减轻目标疾病/病症包含延迟疾病的发展或进展或者降低疾病严重程度或延长存活期。减轻疾病或延长存活期不一定需要治愈结果。如本文所使用的，“延迟”目标疾病或病症的发展意指推迟、阻碍、减缓、放缓、稳定和/或延缓疾病的进展。这一延迟可以具有不同的时间长度，这取决于所治疗的疾病和/或个体的历史。“延迟”或减轻疾病的发展或者延迟疾病的发作的方法是降低在给定时间帧内发展疾病的一种或多种症状的可能性和/或与不使用所述方法相比在给定时间帧内降低症状的程度的方法。此类比较通常基于临床研究，使用足以给出统计学上显著的结果的许多受试者。

疾病的“发展”或“进展”意指疾病的初始表现和/或后续进展。疾病的发展可以是可检测到的并且可以使用如本领域熟知的标准临床技术进行评估。然而，发展还指可能无法检测到的进展。出于本公开的目的，发展或进展是指症状的生物学过程。“发展”包含发生、复发和发作。如本文所用，目标疾病或病症的“发作”或“发生”包含初始发作和/或复发。

根据要治疗的疾病的类型或疾病的位点，可以使用医学领域的普通技术人员已知的常规方法来向受试者施用药物组合物。这种组合物还可以通过其它常规途径施用，例如口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻腔、颊、阴道或通过植入式储药器施用。如本文所使用的，术语“肠胃外”包含皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。另外，可以通过可注射的贮库施用途径向受试者施用组合物，如使用1个月、3个月或6个月贮库可注射或可生物降解材料和方法。在一些实例中，眼内或玻璃体内施用药物组合物。

可注射组合物可以含有各种载剂，如植物油、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、乳酸乙酯、碳酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、乙醇和多元醇(甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)。对于静脉内注射，可以通过滴注方法施用水溶性抗体，由此输注含有抗体和生理学上可接受的赋形剂的药物调配物。生理学上可接受的赋形剂可以包含例如5％葡聚糖、0.9％盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)或其它合适的赋形剂。肌内制剂(例如，抗体的合适的可溶性盐形式的无菌调配物)可以在如注射用水、0.9％盐水或5％葡萄糖溶液等药物赋形剂中溶解和施用。

在一个实施例中，通过位点特异性或靶向局部递送技术施用抗体。位点特异性或靶向局部递送技术的实例包含抗体的各种可植入贮库源或局部递送导管(例如，输注导管、留置导管或针导管、合成移植物、外膜包裹物、分流器和支架或其它可植入装置)；位点特异性载剂；直接注射或直接应用。参见例如，PCT公开第WO 00/53211号和美国专利第5,981,568号。

也可以使用含有反义多核苷酸、表达载体或亚基因组多核苷酸的治疗组合物的靶向递送。受体介导的DNA递送技术在例如以下文献中进行了描述：Findeis等人,《生物技术趋势(Trends Biotechnol.)》(1993)11:202；Chiou等人,《基因治疗学：直接基因转移的方法和应用(Gene Therapeutics:Methods And Applications Of Direct Gene Transfer)》(J.A.Wolff编)(1994)；Wu等人,《生物化学期刊(J.Biol.Chem.)》(1988)263:621；Wu等人,《生物化学期刊》(1994)269:542；Zenke等人,《美国国家科学院院刊》(1990)87:3655；Wu等人,《生物化学期刊》(1991)266:338。

对于基因疗法方案中的局部施用，在约100ng到约200mg DNA的范围内施用含有多核苷酸(例如，编码本文所描述的抗体的多核苷酸)的治疗组合物。在一些实施例中，在基因疗法方案期间还可以使用约500ng至约50mg、约1μg至约2mg、约5μg至约500μg和约20μg至约100μg或更高的浓度范围的DNA。

本文所描述的治疗性多核苷酸和多肽可以使用基因递送媒剂来递送。基因递送媒剂可以是病毒或非病毒来源的(通常参见Jolly,《癌症基因疗法(Cancer Gene Therapy)》(1994)1:51；Kimura,《人类基因疗法》(1994)5:845；Connelly,《人类基因疗法》(1995)1:185；以及Kaplitt,《自然遗传学(Nature Genetics)》(1994)6:148)。这种编码序列的表达可以使用内源哺乳动物或异源启动子和/或增强子来诱导。编码序列的表达可以是构成的或调控的。

用于递送期望多核苷酸并在期望细胞中表达的基于病毒的载体是本领域所熟知的。示例性基于病毒的媒剂包含但不限于重组逆转录病毒(参见，例如，PCT公开第WO90/07936号；第WO 94/03622号；第WO 93/25698号；第WO 93/25234号；第WO 93/11230号；第WO93/10218号；第WO 91/02805号；美国专利第5,219,740号和第4,777,127号；英国专利第2,200,651号；以及欧洲专利第0 345 242号)；基于α病毒的载体(例如，辛德毕斯病毒载体、塞姆利基森林病毒(ATCC VR-67；ATCC VR-1247)、罗斯河病毒(ATCC VR-373；ATCC VR-1246)和委内瑞拉马脑炎病毒(ATCC VR-923；ATCC VR-1250；ATCC VR 1249；ATCC VR-532))；以及腺相关病毒(AAV)载体(参见例如，PCT公开第WO 94/12649号、第WO 93/03769号；第WO 93/19191号；第WO 94/28938号；第WO 95/11984号和第WO 95/00655号)。施用与杀伤的腺病毒连接的DNA(如以下中所描述的：Curiel,《人类基因疗法(Hum.Gene Ther.)》(1992)3:147)也可以采用。

也可以采用非病毒递送媒剂和方法，其包含但不限于单独与杀伤的腺病毒连接或不连接的聚阳离子浓缩DNA(参见例如，Curiel,《人类基因疗法》(1992)3:147)；配体连接的DNA(参见例如Wu,《生物化学杂志》(1989)264:16985)；真核细胞递送媒剂细胞(参见例如美国专利第5,814,482号；PCT公开第WO 95/07994号；第WO 96/17072号；第WO 95/30763号；和第WO 97/42338号)以及核酸电荷中和或与细胞膜的融合。也可以采用裸DNA。示例性裸DNA引入方法在PCT公开第WO 90/11092号和美国专利第5,580,859号中进行了描述。以下描述了可以充当基因递送媒剂的脂质体：美国专利第5,422,120号；PCT公开第WO 95/13796号；第WO 94/23697号；第WO 91/14445号；以及EP专利第0524968号。另外的方法在Philip,《分子与细胞生物学(Mol.Cell.Biol.)》(1994)14:2411和Woffendin,《美国国家科学院院刊》(1994)91:1581中进行了描述。

本文所描述的方法中使用的特定给药方案，即剂量、定时和重复，将取决于特定受试者和所述受试者的病史。

在一些实施例中，可以向需要治疗的受试者施用多于一种抗体或抗体与另一种合适的治疗剂的组合。抗体还可以结合用于增强和/或补充药剂的有效性的其它药剂使用。

可以通过本领域熟知的方法对目标疾病/病症的治疗功效进行评估。

诊断应用

本文公开的抗PDL1抗体中的任一种可以用于使用常规方法(例如本领域技术人员已知的任何免疫组织学方法)检测和定量生物样品中的PDL1水平或PDL1⁺细胞水平(参见例如Jalkanen等人,《细胞生物学杂志(J.Cell.Biol.)》101:976-985(1985)；Jalkanen等人,《细胞生物学杂志》105:3087-3096(1987))。可用于检测PDL1表达的其它基于抗体的方法包含免疫测定，如酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫沉淀或蛋白质印迹。合适的测定在本文其他地方更详细地描述。

术语“生物样品”意指从个体、细胞系、组织培养物或其它潜在地表达PDL1的细胞来源获得的任何生物样品。用于从哺乳动物获得组织活检和体液的方法在本领域是众所周知的。

为了执行本文公开的方法，可以使本文公开的抗PDL1抗体中的任一种与怀疑含有本文公开的靶抗原(例如，人PDL1蛋白或PDL1⁺细胞)的样品接触。一般而言，术语“接触(contacting)”或“接触(in contact)”是指在足以形成样品中的抗PDL1抗体与靶抗原之间的复合物(如果有的话)的合适条件下，将本文所公开的抗PDL1抗体与疑似含有靶抗原的样品接触合适的时段。如此形成的抗体-抗原复合物，如果有的话，可以通过常规方法确定。温育之后检测到此类抗体-抗原复合物表明样品中存在靶抗原。当需要时，可以定量抗体-抗原复合物的量，所述量指示样品中靶抗原的水平。

在一些实例中，如本文所描述的抗PDL1抗体可以与可检测标记缀合，所述可检测标记可以是能够直接或间接释放可检测信号的任何试剂。此类可检测信号的存在或信号强度表明样品中的靶抗原的存在或数量。可替代地，对抗PDL1抗体具有特异性或对靶抗原具有特异性的次级抗体可以用于本文所公开的方法中。例如，当所述方法中使用的抗PDL1抗体是全长抗体时，次级抗体可以与抗PDL1抗体的恒定区结合。在其它情况下，次级抗体可以与靶抗原的不同于抗PDL1抗体的结合表位的表位结合。本文所公开的任何次级抗体可以与可检测标记缀合。

本领域已知的任何合适的可检测标记可以用于本文所描述的测定方法。在一些实施例中，可检测标记可以是直接释放可检测信号的标记。实例包含荧光标记或染料。荧光标记包括荧光团，所述荧光团是可以在光激发后重新发射光的荧光化学化合物。荧光标记的实例包含但不限于呫吨衍生物(例如，荧光素、罗丹明、俄勒冈绿、曙红和德克萨斯红)、花青衍生物(例如，花青、吲哚碳花青、氧碳花青、硫碳花青和部花青)、方酸衍生物和经环取代的方酸(例如，Seta和Square染料)、方酸轮烷衍生物如SeTau染料、萘衍生物(例如，丹磺酰和氟硅酸钠衍生物)、香豆素衍生物、噁二唑衍生物(例如，吡啶基噁唑、硝基苯并噁二唑和苯并噁二唑)、蒽衍生物(例如，蒽醌，包含DRAQ5、DRAQ7和CyTRAK橙)、芘衍生物如级联蓝、噁嗪衍生物(例如，尼罗红、尼罗蓝、甲酚紫和噁嗪170)、吖啶衍生物(例如，脯氨酸、吖啶橙和吖啶黄)、芳基次甲基衍生物(例如，金胺、结晶紫和孔雀石绿)和四吡咯衍生物(例如，卟吩、酞菁和胆红素)。染料可以是包括发色团的分子，所述发色团负责染料的颜色。在一些实例中，可检测标记可以是异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白(PE)、生物素、别藻蓝蛋白(APC)或488。

在一些实施例中，可检测标记可以是间接释放可检测信号的分子，例如，通过将试剂转化为直接释放可检测信号的产物。在一些实例中，此类可检测标记可以是能够由无色底物产生有色产物的酶(例如，β-半乳糖苷酶、HRP或AP)。

用于治疗疾病的试剂盒

本公开还提供了用于治疗或缓解目标疾病，如本文所描述的造血系统癌症的试剂盒。此类试剂盒可以包含一个或多个包括抗PDL1抗体的容器，例如本文所描述的容器中的任何容器。在一些情况下，抗PDL1抗体可以与第二种治疗剂共同使用。

在一些实施例中，试剂盒可以包括用于根据本文所描述的任何方法使用的说明书。包含的说明书可以包括对施用用于治疗、延迟发作或减轻如本文所描述的那些目标疾病等目标疾病的抗PDL1抗体以及任选地第二治疗剂的描述。试剂盒可以进一步包括对基于鉴定所述个体是否患有目标疾病，例如应用如本文所描述的诊断方法来选择适于治疗的个体的描述。在仍其它实施例中，说明书包括对向处于目标疾病风险中的个体施用抗体的描述。

与抗PDL1抗体的使用相关的说明书通常包含关于用于预期治疗的剂量、给药方案和施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。本发明的试剂盒中提供的说明书通常是在标签或包装插页(例如，包含在试剂盒中的纸张)上的书面说明，但机器可读说明书(例如，磁性或光学存储盘上携带的说明书)也是可接受的。

标签或药品说明书指示组合物用于治疗疾病、延迟其发作和/或使其减轻，所述疾病例如癌症或免疫病症(例如自身免疫疾病)。说明书可以被提供用于实践本文所描述的任何方法。

本发明的试剂盒采用适合的包装。合适的包装包含但不限于小瓶、瓶、广口瓶、软包装(例如，密封的密拉(Mylar)或塑料袋)等。还设想了与具体装置(如吸入器、鼻部施用装置(例如，雾化器)或输注装置(如微型泵))组合使用的包装。试剂盒可以具有无菌进口端口(例如，容器可以是具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。容器也可以具有无菌进口端口(例如，容器可以是具有可被皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是抗PDL1抗体，如本文所述的抗PDL1抗体。

试剂盒可以任选地提供如缓冲液等另外的组分以及解释性信息。通常，试剂盒包括容器和位于容器上或与容器相关的标签或包装插页。在一些实施例中，本发明提供了制品，所述制品包括上文所描述的试剂盒的内容物。

一般技术

除非另有指示，否则本公开的实践将采用在本领域技术范围内的常规分子生物学(包含重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学技术。此类技术在以下文献中充分解释：如《分子克隆：实验室手册》,第二版(Sambrook等人,1989)冷泉港出版社；《寡核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis)》(M.J.Gait编辑,1984)；《分子生物学方法(Methods in Molecular Biology)》,胡玛纳出版社(Humana Press)；《细胞生物学：实验室手册(Cell Biology:A Laboratory Notebook)》(J.E.Cellis编辑,1989)学术出版社(Academic Press)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编辑,1987)；《细胞和组织培养简介(Introduction to Cell and Tissue Culture)》(J.P.Mather和P.E.Roberts,1998),普莱纽姆出版社(Plenum Press)；《细胞和组织培养：实验室程序(Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures》(A.Doyle、J.B.Griffiths和D.G.Newell编辑,1993-8)约翰·威利父子出版公司；《酶学方法(Methods inEnzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press,Inc.))；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir and C.C.Blackwell编辑)；《哺乳动物细胞基因转移载体(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编辑,1987)；《当代分子生物学实验指南》(F.M.Ausubel等人编辑1987)；《PCR：聚合酶链反应(PCR:The Polymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编辑,1994)；《免疫学实验指南(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编辑,1991)；《精编分子生物学实验指南(Short Protocols in Molecular Biology)》(约翰·威利父子出版公司,1999)；《免疫生物学(Immunobiology)》(C.A.Janeway和P.Travers,1997)；《抗体》(P.Finch,1997)；《抗体：实用方法(Antibodies:a practical approach)》(D.Catty.编辑,IRL出版社,1988-1989)；《单克隆抗体：实用方法(Monoclonal antibodies:a practicalapproach)》(P.Shepherd和C.Dean编辑,牛津大学出版社(Oxford University Press),2000)；《使用抗体：实验室手册(Using antibodies:a laboratory manual)》(E.Harlow和D.Lane(冷泉港实验室出版社,1999)；《抗体》(M.Zanetti和J.D.Capra编辑,哈伍德学术出版社(Harwood Academic Publishers),1995)；《DNA克隆：实用方法(DNA Cloning:Apractical Approach)》,第I卷和第II卷(D.N.Glover编辑1985)；《核酸杂交(Nucleic AcidHybridization)》(B.D.Hames和S.J.Higgins编辑,1985)；《转录和翻译(Transcriptionand Translation)》(B.D.Hames和S.J.Higgins编辑,1984)；《动物细胞培养(Animal CellCulture)》(R.I.Freshney编辑,1986)；《固定化细胞和酶(Immobilized Cells andEnzymes)》(lRL出版社,1986)；以及B.Perbal,《分子克隆实用指南(A practical Guide ToMolecular Cloning)》(1984)；F.M.Ausubel等人(编辑)。

无需进一步详细阐述，据信本领域的技术人员可以基于以上描述在最大程度上利用本发明。因此，以下具体实施例应当被解释为仅是说明性的，并且不以任何方式限制本公开的其余内容。本文引用的所有公开出于本文引用的目的或主题通过引用并入。

实例1：高亲和力抗PDL1抗体的制备

该实例公开了与人PDL1具有高结合亲和力的示例性抗PDL1抗体的制备。

(i)12A4 Fab展示文库的生成

将在NsiI和KpnI位点之间展示抗体Fab VL基因的噬菌粒pSY6用NsiI与KpnI双重消化，凝胶纯化，并通过适当的双重消化连接到12A4 VL基因插入物以产生pSY6_12A4VL。然后将噬菌粒pSY1_12A4VL用PspOMI和BglII依次消化，凝胶纯化以去除通用VH基因插入物，并通过适当的限制性酶消化连接到12A4 VH基因插入物以产生pSY9噬菌粒。然后用与所描述的程序类似的程序产生含有尿嘧啶的单链DNA模板(Sidhu S.S等人《酶学方法(MethodsEnzymol)》328,333–63(2000))。

(ii)pSY9_CDRW_L1_L2_L3文库的构建

如下构建允许同时筛选CDR L1、L2和L3的抗体文库。采用单氨基酸CDR步行策略(Yang W.P.等人《分子生物学杂志》254,392–403(1995))。随机化的位置包含CDR-L1中的24-25和27-34；CDR-L2中的位置50-56；以及CDR-L3中的位置91-97。每个位置在给定的CDR处用简并密码子NNS单独随机化以编码所有20种氨基酸。通过Kunkel诱变将随机化并入pSY9 ssDNA模板中(Kunkel T.A.《美国国家科学院院刊》82,488–92(1985)；Sidhu S.S等人《酶学方法》328,333–63(2000))。如所描述的那样进行引物的磷酸化和Kunkel诱变(SidhuS.S等人《酶学方法》328,333–63(2000))。如所描述的那样将所获得的共价闭合环状DNA电穿孔到电胜任SS320细胞中以制备pSY9_CDRW_L1_L2_L3文库(Sidhu S.S等人《酶学方法》328,333–63(2000))。滴定法测量的表观多样性(titered apparent diversity)为1.31×10¹⁰，大于设计理论多样性的1.8×10⁷。

(iii)pSY9_CDRW_H1_H2_H3文库的构建

如下构建允许同时筛选CDR H1、H2和H3的抗体文库。采用单氨基酸CDR步行策略(Yang W.P.等人《分子生物学杂志》254,392–403(1995))。随机化的位置包含CDR-H1中的27-35、CDR-H2中的位置50和52-58，以及CDR-H3中的位置95-102。每个位置在给定的CDR处用简并密码子NNS单独随机化以编码所有20种氨基酸。通过Kunkel诱变将随机化并入pSY9ssDNA模板中(Kunkel T.A.《美国国家科学院院刊》82,488–92(1985)；Sidhu S.S等人《酶学方法》328,333–63(2000))。如所描述的那样进行引物的磷酸化和Kunkel诱变(Sidhu S.S等人《酶学方法》328,333–63(2000))。如所描述的那样将所获得的共价闭合环状DNA电穿孔到电胜任SS320细胞中以制备pSY9_CDRW_H1_H2_H3文库(Sidhu S.S等人《酶学方法》328,333–63(2000))。滴定法测量的表观多样性为1.38×10¹⁰，大于设计理论多样性的3.7×10⁷。

(iv)亲和力成熟抗体的选择

与先前描述的选择类似地进行选择(Ye J.D.等人《美国国家科学院院刊》105,82–87(2008))。使用人PD-L1的细胞外结构域的生物素化的N末端段(Met1-Thr239)作为抗原。在除第一轮外的每一轮中，首先将纯化的噬菌体池与链霉亲和素珠一起温育15分钟，并将上清液用于随后在KingFisher磁性颗粒处理器(赛默飞世尔公司(Thermo Fisher))上的选择。将噬菌体(10^10-11cfu)与生物素化的PD-L1(第1-5轮分别为10、4、2、0.5和0.5nM)一起温育15分钟-1小时。然后经1.5-15分钟将链霉亲和素磁珠添加到溶液中，以使生物素化的PDL1与结合的噬菌体一起捕获。在第四轮中，在珠上捕获抗原/抗体复合物后，将珠用补充有0.05％20(PT)的PBS洗涤，并将>1000倍的非生物素化PD-L1与珠在RT下一起温育1小时。然后将珠用PT洗涤五次，并在100mM DTT中洗脱15分钟。每轮选择后，如所描述的那样扩增回收的噬菌体(Sidhu S.S等人《酶学方法》328,333–63(2000))。

(v)在低抗原浓度的情况下的噬菌体ELISA筛选(PESLA)

在3-5轮选择后，通过噬菌体ELISA分析单独的克隆(Ye J.D.等人《美国国家科学院院刊》105,82–87(2008))。对所述程序进行修改，以便以高通量的方式筛选高亲和力结合物。从新鲜的LB/Amp板中挑选四十八个或更多个单独的菌落，将所述菌落接种在96孔深孔板中的300μL含有100μg/mL氨苄青霉素和10¹⁰PFU/mL M13KO7辅助噬菌体的2YT培养基中，并在37℃和以300rpm振荡的情况下生长过夜。然后将深孔板在3500rpm和4℃下离心15分钟，以使细胞沉淀。将上清液用噬菌体稀释缓冲液(PBS、0.5％ BSA和0.05％ Tween 20)稀释3倍以制备噬菌体溶液。在4℃下用100μL含0.1μg/mL PD-L1的100mM碳酸氢钠包被缓冲液(pH9.6)包被96孔Maxisorp板过夜。去除包被溶液，并用200μL/孔的含1％(w/v)BSA的PBS将Maxisorp板封闭1小时。去除封闭溶液后，将Maxisorp板用含有0.05％(v/v)Tween 20(PT)的PBS洗涤4次，并在室温下用100μL/孔的噬菌体溶液温育1小时。用PT缓冲液洗涤6次后，将Maxisorp板用100μL/孔的抗M13/辣根过氧化物酶缀合物(在噬菌体稀释缓冲液中稀释3000×)在室温下温育30分钟。用PT缓冲液洗涤6次后，将Maxisorp板用100μL/孔的Ultra TMB-ELISA底物温育5–10分钟，用100μL/孔的1M磷酸淬灭，并在微孔板读取器中以分光光度法的方式在450nm下读取。由于低抗原浓度作为限制因素，所以更高的信号与更紧密结合的克隆相关。对这些较紧密的结合物进行了小规模制备和测序，以鉴定独特的克隆。

(vi)用竞争性噬菌体ELISA表征独特的克隆

从文库pSY9_CDRW_L1_L2_L3和pSY9_CDRW_H1_H2_H3中分别鉴定出六个独特的克隆(12A4a、12A4e、12A4f、12A4g、12A4h和12A4i)和3个独特的克隆(12A4b、12A4c和12A4d)。以下提供了它们的序列比对(相对于亲本抗体的突变加了下划线)：

轻链可变区序列比对(从上到下的序列为SEQ ID NO:50-63)

重链可变区序列比对(从上到下的序列为SEQ ID NO:64-77)

竞争性噬菌体ELISA用于表征这些克隆的结合亲和力。将MaxiSorp ELISA板在4℃下用PD-L1包被过夜，并在RT下用BSA封闭1小时。将PD-L1的系列稀释液与亚饱和浓度的噬菌体在RT下温育1小时，并且然后添加到经封闭且洗涤的ELISA板中。在温育和洗涤15分钟后，添加抗M13抗体/HRP缀合物并温育30分钟，然后用TMB显影5-10分钟并用1M磷酸淬灭。通过读板器分析结合信号。克隆12A4a、12A4b和12A4d显示出对PD-L1的结合改善(下表2)。

(vii)组合来自不同CDR的有益突变

为了测试这些突变是否具有加性效应，通过Kunkel诱变制备了四个新的克隆(12A4ad、12A4ba、12A4bd和12A4bad)。用竞争性噬菌体ELISA测量它们与PD-L1的结合亲和力。结果显示出12A4bad与PD-L1的结合亲和力最高。参见下表2。图1中示出了竞争性噬菌体ELISA的范例绘图。

表2.通过竞争性噬菌体ELISA测量的示例性亲和力成熟克隆的结合亲和力

克隆	Fab Kd(nM)	相对于12A4亲本克隆的改善
			12A4	11.2	1
12A4a	8.3	1.3
			12A4b	3.4	3.3
12A4d	4.7	2.4
			12A4ad	5.0	2.2
12A4ba	2.1	5.3
			12A4bd	1.8	6.3
12A4bad	1.5	7.5

出乎意料的是，与亲本抗体12A4相比，多种变体(例如，上表2中列出的变体)显示出更佳的与PD-L1的结合活性。

实例2.示例性抗PDL1单克隆抗体12A4bad的表征

(i)与表达PD-L1的肿瘤细胞的结合亲和力

PDL1在大范围的肿瘤细胞中表达，包含肺癌、乳腺癌、黑色素瘤等。MDA MB-231是PDL1表达水平高并且对T细胞显示出强免疫抑制作用的乳腺癌细胞系。该实验研究了示例性抗PDL1单克隆抗体12A4bad与MDA MB-231细胞的结合亲和力。

将培养的MDA MB-231细胞用Accutase处理并收集以用于结合测定。将细胞沉淀重悬并解离为单细胞溶液。将1×10⁵个MDAMB-231细胞铺板在96孔板中用于抗体结合。在细胞染色缓冲液中连续稀释抗体12A4bad和德瓦鲁单抗，并在RT下温育30分钟。在荧光标记的抗人IgG Fc二级抗体染色后，使用Accuri C6细胞计数器分析仪(BD生物科学(BDBiosciences))分析样品。

如图2所示，抗PDL1抗体12A4bad与MDA MB-231细胞的Kd为0.07783nM，低于德瓦鲁单抗的Kd(Kd＝0.1673nM)。对照人IgG1在10nM和100nM的浓度下没有显示出任何结合。

(ii)PD1/PD-L1相互作用的阻断

PD1是在激活的T细胞和B细胞上表达的免疫抑制受体并且在调节免疫应答中起着关键作用。PD1与邻近细胞上的其配体PDL1的结合抑制TCR信号传导和TCR介导的增殖、转录激活和细胞因子产生。PDL1/PD1阻断测定由两种经基因工程化的细胞系PD1效应细胞和PDL1 aAPC/CHOK1细胞组成。当共培养时，PD1/PDL1相互作用抑制TCR介导的发光。当PDL1/PD1相互作用被破坏时，TCR激活诱导发光(通过NFAT途径的激活)，所述发光可以通过添加Bio-Glo试剂和用光度计定量来检测。

该实验研究了示例性抗PDL1抗体12A4bad对PD1/PD-L1相互作用的阻断活性。简言之，将4×10⁴个PDL1 aAPC/CHOK1细胞铺板在96孔板中并培养过夜。在测定缓冲液(RPMI1640/1％ FBS)中连续稀释抗体12A4bad和德瓦鲁单抗。然后用40ul稀释的抗体缓冲液代替培养基，并在RT下温育30分钟。将PD1效应细胞解冻，并将6×10⁴个细胞(在40ul中)添加到具有不同经稀释抗体的每个孔中。将板在细胞培养温育器中保持6小时。然后，向每个孔中添加80ul新制备的Bio-Glo试剂。在500rpm的振荡和RT的情况下反应15分钟后，使用Bio-Tek Syring4读板器记录发光信号。

如图3所示，两种抗体都有效地阻断了PDL1-PD1结合，并在PD-1效应细胞中产生发光信号。PDL1抗体12A4bad的EC₅₀为0.3444nM，低于德瓦鲁单抗的EC₅₀(EC₅₀＝0.5308nM)。

其它实施例

本说明书中公开的特征中的所有特征可以以任何组合来组合。本说明书中公开的每个特征可以被用于相同、等效或类似目的的替代性特征替代。因此，除非另有明确说明，否则所公开的每个特征仅是通用系列的等效或类似特征的实例。

通过以上描述，本领域的技术人员可以很容易地确定本发明的实质特性，并且在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种改变和修改以使其适于各种用途和条件。因此，其它实施例也在权利要求内。

等效方案

尽管本文已经描述和展示了若干个本发明实施例，但本领域的普通技术人员将容易想到用于执行本文所述的功能和/或获得这些结果和/或这些优点中的一个或多个优点的各种其它装置和/或结构，并且此类变型和/或修改中的每个变型和/或修改被视为处于本文所述的本发明实施例的范围内。更一般地，本领域的技术人员将容易地理解，本文所述的所有参数、尺寸、材料和构型意味着示例性的，并且实际参数、尺寸、材料和/或构型将取决于使用本发明教导所使用的一种或多种具体应用。仅使用常规实验，本领域的技术人员将认识到或能够确定本文所述的具体本发明实施例的许多等效物。因此，应理解，前述实施例仅通过实例的方式呈现，并且在所附权利要求以及其等效物的范围内，可以以不同于具体描述的和要求保护的方式来实践本发明实施例。本公开的本发明实施例涉及本文所描述的每个单独的特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法。另外，如果两个或更多个此类特征、系统、制品、材料、试剂盒和/或方法的任何组合并不相互矛盾，则此类特征、系统、制品、材料、试剂盒和/或方法被包含在本公开的本发明范围内。

如本文中定义和使用的所有定义都应当理解为对字典定义的控制、通过引用并入的文件中的定义和/或定义术语的普通含义。

本文所公开的所有参考文献、专利和专利申请相对于各自所引用的主题而通过引用并入，在一些情况下，其可能涵盖整个文件。

除非明确相反指出，否则如本文在说明书和权利要求中所使用的，不定冠词“一个(a)”和“一种(an)”应被理解为表示“至少一个”。

如本文在说明书和权利要求中使用的，短语“和/或”应理解为意指如此结合的要素的“任一或两者”，即在一些情况下结合存在和在其它情况下分离存在的要素。用“和/或”列出的多个要素应以相同的方式解释，即，如此结合的要素中的“一个或多个要素”。除了通过“和/或”从句具体标识的要素之外，还可以任选地存在其它要素，而无论是与具体标识的那些要素相关还是不相关。因此，作为非限制性实例，当与如“包括(comprising)”等开放式语言结合使用时，对“A和/或B”的引用在一个实施例中可以仅指A(任选地包含除了B之外的要素)；在另一个实施例中，仅指B(任选地包含除了A之外的要素)；在又另一个实施例中，指A和B两者(任选地包含其它要素)；等。

如本文在说明书和权利要求中所使用的，“或”应被理解为具有与如上所定义的“和/或”相同的含义。例如，在将列表中的项分开时，“或”或“和/或”应被解释为包含性的，即，包含许多要素或要素列表中的至少一个要素，但还包含多于一个要素以及任选地另外的未列出的项。仅明确指出相反的术语如“仅一个”或“恰好一个”或当在权利要求中使用时，“由……组成”指包含许多元素或元素列表中的恰好一个元素。一般而言，当之前有排他性术语，如“任一个”、“……之一”、“……中的仅一个”、或“……中的恰好一个”时，如本文所使用的，术语“或”应当仅被解释为指示排他性替代方案(即，“一个或另一个而不是两个”)。当在权利要求中使用时，“基本上由……组成”应当具有如在专利法领域中所使用的普通含义。

如本文在说明书和权利要求中所使用的，关于一个或多个要素的列表的短语“至少一个”应被理解为是指选自要素列表中的任一个或多个要素中的至少一个要素、但不一定包含要素列表内具体列出的每一个要素中的至少一个要素，并且不排除要素列表中的要素的任何组合。此定义还允许除术语“至少一个”所指要素列表内具体确定的要素外，还可以任选地存在要素，无论与具体确定的这些要素相关还是无关。因此，作为非限制性实例，在一个实施例中，“A和B中的至少一个”(或等效地，“A或B中的至少一个”，或等效地“A和/或B中的至少一个”)可以指任选地包含多于一个A，不存在B(并且任选地包含除B以外的要素)的至少一个；在另一个实施例中，可以指任选地包含多于一个B，不存在A(并且任选地包含除A以外的要素)的至少一个；在又另一个实施例中，可以指任选地包含多于一个A的至少一个，以及任选地包含多于一个B(以及任选地包含其它要素)的至少一个；等。

还应当理解，除非明确指出相反，否则在本文所要求保护的包含多于一个步骤或动作的任何方法中，所述方法的步骤或动作的顺序不一定限于叙述的方法的步骤或动作的顺序。

序列表

<110> 科霸治疗公司（Sparx Therapeutics）

<120> 抗PDL1抗体及其用途

<130> 112124-0020-70001WO00

<140> 尚未分配

<141> 与此同时

<150> US 17/842,733

<151> 2022-06-22

<150> US 63/211,794

<151> 2021-06-17

<160> 77

<170> PatentIn第3.5版

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 1

Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Ile Ser

1 5 10

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa为Ile或Leu

<400> 2

Gly Ile Ile Pro Xaa Phe Gly Lys Ala His

1 5 10

<210> 3

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 3

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 4

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 4

Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 5

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa为His或Arg

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa为Ser或Arg

<400> 5

Lys Phe Xaa Phe Val Xaa Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 6

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 6

Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 7

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 7

Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 8

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 8

Lys Phe Arg Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa为Leu或Met

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (11)..(11)

<223> Xaa为Ala、Ser或Glu

<400> 9

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Xaa Xaa

1 5 10

<210> 10

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 10

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 11

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 11

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 12

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Met Ala

1 5 10

<210> 13

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 13

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Glu

1 5 10

<210> 14

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa为Thr、Pro、Met或Glu

<400> 14

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Xaa

1 5

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 15

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 16

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 16

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro

1 5

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 17

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Met

1 5

<210> 18

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 18

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Glu

1 5

<210> 19

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa为Ser或Ala

<400> 19

Gln Gln Arg Xaa Asn Trp Pro Thr

1 5

<210> 20

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 20

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

1 5

<210> 21

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 21

Gln Gln Arg Ala Asn Trp Pro Thr

1 5

<210> 22

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 22

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 23

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 23

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 24

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 24

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 25

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 26

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 26

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 27

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 27

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 28

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 28

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe Arg Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 29

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 29

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 30

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 30

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 31

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 31

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 32

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 33

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 33

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ala Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 34

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 34

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 35

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 35

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Met Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 36

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 36

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 37

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 37

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 38

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 38

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 39

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 39

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Met Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Glu Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ala Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 40

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 40

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 41

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 41

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 42

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 42

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 43

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 43

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 44

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 44

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 45

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 45

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 46

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 46

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 47

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 47

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 48

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 48

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 49

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 49

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 50

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 50

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 51

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 51

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 52

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 52

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 53

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 53

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 54

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 54

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 55

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 55

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ala Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 56

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 56

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Met Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 57

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 57

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 58

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 58

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Met Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Glu Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ala Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 59

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 59

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 60

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 60

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 61

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 61

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 62

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 62

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 63

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 63

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Pro Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 64

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 64

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 65

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 65

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 66

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 66

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 67

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 67

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe Arg Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 68

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 68

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 69

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 69

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 70

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 70

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 71

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 71

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 72

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 72

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 73

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 73

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 74

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 74

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 75

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 75

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 76

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 76

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 77

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成的

<400> 77

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Leu Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Lys Phe His Phe Val Arg Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

Claims (20)

1.一种与人程序性死亡配体1(PDL1)结合的抗体，其中所述抗体包括：

(a)重链可变区，所述重链可变区包括

(i)重链互补决定区(CDR)1，所述重链CDR1包括GDTFSTYAIS(SEQ ID NO:

1)的氨基酸序列，

(ii)重链CDR2，所述重链CDR2包括GIIPX₁FGKAH(SEQ ID NO:2)的氨基酸序列，其中X₁是I或L，以及

(iii)重链CDR3，所述重链CDR3包括KFX₂FVX₃GSPFGMDV(SEQ ID NO:5)的氨基酸序列，其中X₂是H或R，并且X₃是S或R；以及

(b)轻链可变区，所述轻链可变区包括

(i)轻链CDR1，所述轻链CDR1包括RASQSVSSYX₄X₅(SEQ ID NO:9)的氨基酸序列，其中X₄是L或M，并且X₅是A、S或E，

(ii)轻链CDR2，所述轻链CDR2包括DASNRAX₆(SEQ ID NO:14)的氨基酸序列，其中X₆是T、P、M或E，以及

(iii)轻链CDR3，所述轻链CDR3包括QQRX₇NWPT(SEQ ID NO:19)的氨基酸序列，其中X₇是S或A；

条件是所述抗体不是12A4。

2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述重链CDR2是GIIPIFGKAHYAQKFQG(SEQ ID NO:3)或GIIPLFGKAHYAQKFQG(SEQ ID NO:4)。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述重链CDR3是KFHFVSGSPFGMDV(SEQID NO:6)、KFHFVRGSPFGMDV(SEQ ID NO:7)或KFRFVSGSPFGMDV(SEQ ID NO:8)。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中所述轻链CDR1是RASQSVSSYLA(SEQ IDNO:10)、RASQSVSSYLS(SEQ ID NO:11)、RASQSVSSYMA(SEQ ID NO:12)或RASQSVSSYLE(SEQID NO:13)。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中所述轻链CDR2是DASNRAT(SEQ ID NO:15)、DASNRAP(SEQ ID NO:16)、DASNRAM(SEQ ID NO:17)或DASNRAE(SEQ ID NO:18)。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述轻链CDR3是QQRSNWPT(SEQ IDNO:20)或QQRANWPT(SEQ ID NO:21)。

7.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包括与抗体12A4a、12A4b、12A4c、12A4d、12A4e、12A4f、12A4g、12A4h、12A4i、12A4ad、12A4ba、12A4bd或12A4bad的重链CDR1-CDR3和/或轻链CDR1-CDR3相同的重链CDR1-CDR3和/或轻链CDR1-CDR3。

8.根据权利要求7所述的抗体，其中所述抗体包括与抗体12A4a、12A4b、12A4c、12A4d、12A4e、12A4f、12A4g、12A4h、12A4i、12A4ad、12A4ba、12A4bd或12A4bad的重链可变区和/或轻链可变区相同的重链可变区和/或轻链可变区。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是全长抗体或其抗原结合片段。

10.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体是单链可变片段(scFv)。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人抗体或人源化抗体。

12.一种核酸或一组核酸，其共同编码与人PDL1结合的抗体，其中所述抗体是在权利要求1至8中任一项中阐述的。

13.根据权利要求12所述的核酸或一组核酸，其是载体或一组载体。

14.根据权利要求13所述的核酸或一组核酸，其中所述载体是表达载体。

15.一种宿主细胞，其包括根据权利要求11至13中任一项所述的核酸或一组核酸。

16.根据权利要求15所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。

17.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至11中任一项所述的抗体或根据权利要求12至14中任一项所述的核酸或一组核酸以及药学上可接受的载剂。

18.一种用于抑制PDL1阳性细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据权利要求17所述的药物组合物。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述受试者是患有癌症的人类患者。

20.一种用于产生与人PDL1结合的抗体的方法，所述方法包括：

(i)在允许表达所述抗体的条件下培养根据权利要求15或权利要求16所述的宿主细胞；以及

(ii)采集因此产生的所述抗体。