CN118021793A - 表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用 - Google Patents
表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118021793A CN118021793A CN202410313948.6A CN202410313948A CN118021793A CN 118021793 A CN118021793 A CN 118021793A CN 202410313948 A CN202410313948 A CN 202410313948A CN 118021793 A CN118021793 A CN 118021793A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- drug
- epigallocatechin gallate
- resistant
- carbapenem
- resistant bacteria
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 title claims abstract description 74
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 71
- 229940030275 epigallocatechin gallate Drugs 0.000 title claims abstract description 71
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims abstract description 45
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 31
- 241000588626 Acinetobacter baumannii Species 0.000 claims abstract description 57
- YZBQHRLRFGPBSL-RXMQYKEDSA-N carbapenem Chemical compound C1C=CN2C(=O)C[C@H]21 YZBQHRLRFGPBSL-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims abstract description 53
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 41
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 19
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims description 7
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 101001011382 Homo sapiens Interferon regulatory factor 3 Proteins 0.000 claims description 6
- 101000665442 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase TBK1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102100029843 Interferon regulatory factor 3 Human genes 0.000 claims description 6
- 102100038192 Serine/threonine-protein kinase TBK1 Human genes 0.000 claims description 6
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 6
- -1 lyophilisate Substances 0.000 claims description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 4
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims description 4
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 4
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004979 bone marrow derived macrophage Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 2
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003906 humectant Substances 0.000 claims 2
- 239000006196 drop Substances 0.000 claims 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 102100029064 Serine/threonine-protein kinase WNK1 Human genes 0.000 description 4
- 101710124574 Synaptotagmin-1 Proteins 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 4
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 3
- 108010007457 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Proteins 0.000 description 3
- 102100034221 Growth-regulated alpha protein Human genes 0.000 description 3
- 101001069921 Homo sapiens Growth-regulated alpha protein Proteins 0.000 description 3
- 101001057508 Homo sapiens Ubiquitin-like protein ISG15 Proteins 0.000 description 3
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 102100027266 Ubiquitin-like protein ISG15 Human genes 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 102100039398 C-X-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 101000889128 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- 102100031256 Cyclic GMP-AMP synthase Human genes 0.000 description 1
- 101710118064 Cyclic GMP-AMP synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000006833 Multifunctional Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010047290 Multifunctional Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 101710196623 Stimulator of interferon genes protein Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000009470 Ventilator-Associated Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 210000000887 face Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000012177 negative regulation of immune response Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960004063 propylene glycol Drugs 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007143 thioglycolate medium Substances 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及医学技术领域，尤其涉及表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用。经体外细胞实验(Westernblot、ELISA和免疫荧光)和体内动物实验研究，证实了表没食子儿茶素没食子酸酯能够降低碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌细菌载量、降低碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的炎症细胞因子水平、减轻碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导肺组织病理损伤，表明，表没食子儿茶素没食子酸酯可显著抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的发生发展，可用于制备抗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的药物。
Description
技术领域
本发明涉及医学技术领域，尤其涉及表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用。
背景技术
鲍曼不动杆菌是引起医院内感染的重要病原体，主要引发呼吸道感染，也可引发脓毒血症、泌尿系统感染、继发性手术部位感染及呼吸机相关肺炎。鲍曼不动杆菌具有强大的获得耐药性和克隆传播能力，与其他耐药细菌相比，目前几乎没有抗生素可供治疗广泛耐药鲍曼不动杆菌。对于碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌的治疗主要基于两种或两种以上抗生素的联合，而过度使用抗生素导致耐药性进一步增加，临床治疗面临愈加严重的考验。因此，亟需开发治疗细菌感染和避免耐药性的新策略。除了依赖抗生素，深入研究碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌与人体免疫应答相互作用机制，对于新型药物的开发有重要意义。
表没食子儿茶素没食子酸酯具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗动脉硬化、抗血栓形成、抗血管增生、抗炎以及抗肿瘤作用。至今，表没食子儿茶素没食子酸酯作为单体在制备碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的应用未见报道。因此，提供能够治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的新策略具有重要的现实意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
表没食子儿茶素没食子酸酯或活性成分包括表没食子儿茶素没食子酸酯的组合物在如下(1)～(5)中至少一种应用：
(1)制备抑制耐药菌诱导的cGAS-STING信号通路的药物或试剂；
(2)制备降低耐药菌细菌载量的药物或试剂；
(3)制备降低耐药菌诱导的炎症细胞因子水平的药物或试剂；
(4)制备降低耐药菌诱导肺组织病理损伤的药物或试剂；
(5)制备抗耐药菌感染的药物或试剂。
本发明中，所述耐药菌为碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌。
所述抗耐药菌感染包括如下1)～2)中的至少一种：
1)抑制cGAS-STING信号通路；
2)抑制耐药菌诱导的免疫应答。
所述免疫应答为巨噬细胞介导的免疫应答，所述巨噬细胞包括腹腔巨噬细胞、骨髓来源巨噬细胞、RAW264.7、THP-1和iBMDM中的一种或多种。
本发明所述应用中，抑制耐药菌诱导的免疫应答包括：
Ⅰ、降低耐药菌的细菌载量；和/或
Ⅱ、降低耐药菌诱导的炎症细胞因子水平；和/或
Ⅲ、降低耐药菌诱导的肺组织病理损伤。
本发明所述应用中，所述cGAS-STING信号通路为肺泡巨噬细胞中的cGAS-STING信号通路。
进一步的，所述抑制cGAS-STING信号通路包括抑制如下至少一方面：
STING高尔基体转移、TBK1磷酸化水平、IRF3磷酸化水平。
本发明所述应用中，所述药物还包括赋形剂，所述赋形剂包括载体、溶剂、乳化剂、分散剂、湿润剂、粘合剂、稳定剂、着色剂和香料中的至少一种。
本发明所述应用中，所述药物的给药剂量包括：
所述给药为口服给药时，表没食子儿茶素没食子酸酯的剂量为10mg～60mg/次，每日1～2次；
所述给药为肠胃外给药时，表没食子儿茶素没食子酸酯的剂量为10mg～30mg/次，每日1次。
本发明还提供一种抗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的药物组合物，其活性成分包括有效剂量的表没食子儿茶素没食子酸酯。
在本发明的一些具体实施方案中，上述药物组合物还包括一种或多种惰性、无毒、药理学合适的赋形剂。
进一步的，所述赋形剂包括载体、溶剂、乳化剂、分散剂、湿润剂、粘合剂、稳定剂、着色剂和香料中的至少一种。
本发明中，所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、冲剂、滴剂、冻干物、颗粒剂、软膏剂或针剂。
本发明具有如下有益效果：
(1)本发明研究发现，表没食子儿茶素没食子酸酯具有高效抗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的用途：降低碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌细菌载量、降低碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的炎症细胞因子水平、减轻碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导肺组织病理损伤。
(2)本发明提供的表没食子儿茶素没食子酸酯具有高效抗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的用途，具有潜在的临床转化价值：表没食子儿茶素没食子酸酯或其作为成分制备的制剂具有治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的应用前景，按照国家创新药物审批办法开发研制，有望成为具有我国独立自主知识产权的国家1类高效低毒治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌新药，产业化前景明确。
附图说明
图1示表没食子儿茶素没食子酸酯对TBK1、IRF3、p65、p38、ERK的磷酸化水平的影响；
图2示表没食子儿茶素没食子酸酯对cGAS-STING信号通路相关细胞因子IFN-β、ISG15、TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL1、CXCL2的表达量的影响；
图3示表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的STING高尔基体转移情况；
图4示表没食子儿茶素没食子酸酯抗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的结果，其中，4-A～4-C依次为各处理组的肺部菌落数、肺组织病理染色和炎症细胞因子检测结果；
图5示表没食子儿茶素没食子酸酯组对小鼠生存率的影响；
图6示口服表没食子儿茶素没食子酸酯抗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的效果，其中，6-A～6-C依次为肺部菌落数、肺泡灌洗液蛋白总量和炎症细胞因子水平。
具体实施方式
本发明提供了表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
如无特殊说明，本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
其中，本发明具体实施例中涉及的实验材料和仪器信息如下：
1、实验动物
C57BL/6雌性，8周龄，体重18-20g，清洁级，由上海斯莱克实验动物有限公司提供。实验动物生产许可证号SYXK(苏)2021-0074。试验期间饲养室温度20±3.2℃，相对湿度为65～75％，自由摄食和饮水。
2、药品和试剂：
2.1药品
表没食子儿茶素没食子酸酯，白色粉末，含量为≥95％，由生工生物工程(上海)股份有限公司提供，-20℃冰箱保存。临用时加PBS溶解，现用现配。
2.2试剂
细胞株：THP-1，购自南京科佰生物科技有限公司；胎牛血清，Gibco公司生产，批号：948573；RPMI-1640培养基，Procell公司购买；TNF-α检测试剂盒、IL-1β检测试剂盒、IL-6检测试剂盒，ThermoFisher Scientific，美国；cGAS、STING、TBK1、p-TBK1、IRF3、p-IRF3、p38、p-p38、p65、p-p65抗体，Cell Signaling Technology，美国。
2.3仪器
电子天平秤，上海奥豪斯仪器有限公司；恒温细胞培养箱，Thermo公司，美国；生物安全操作台，苏州安泰空气技术有限公司；多功能酶标仪(SpectraMax M5)，MolecularDevices公司，美国；激光共聚焦显微镜，徕卡公司，日本。
具体实施例中涉及的统计分析方法如下：
通过GraphPadPrism 8.0软件对实验数据进行统计分析及绘图。两组之间的比较使用Student’s t检验，计量资料使用均数±标准误(mean±SD)表示，计数资料使用卡方检验进行分析，当P＜0.05时认为有统计学差异。每组实验均重复三次以上。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的cGAS-STING信号通路的激活
(1)取8周龄C57BL/6雌性小鼠，腹腔注射4mL硫乙醇酸盐培养基(4％，质量体积比)，4天后，无菌条件下用PBS灌洗腹腔巨噬细胞，RPMI-1640完全培养基重悬并调整至1×106cells/mL，每孔2mL铺于6孔板中，贴壁4h。
(2)用新鲜培养基洗去未贴壁细胞，分别加入10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL孵育巨噬细胞1h后加入2×107CFU碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌，感染1h后提取蛋白，Westernblot检测相应蛋白表达水平。
结果：
表没食子儿茶素没食子酸酯抑制cGAS-STING信号通路的激活。如图1所示，碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染可诱导cGAS-STING信号通路的激活，即增加TBK1、IRF3、p65、p38、ERK的磷酸化水平；表没食子儿茶素没食子酸酯可有效降低碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的TBK1、IRF3、p65、p38、ERK的磷酸化水平。可见表没食子儿茶素没食子酸酯抑制cGAS-STING信号通路的激活。
实施例2表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的cGAS-STING信号通路相关细胞因子表达
(1)取腹腔巨噬细胞，RPMI-1640完全培养基重悬并调整至1×106cells/mL，每孔1mL铺于12孔板中，贴壁4h。
(2)用新鲜培养基洗去未贴壁细胞，分别加入40μg/mL孵育巨噬细胞1h后加入1×107CFU碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌，感染4h后提取RNA，逆转cDNA，RT-PCR检测IFN-β、ISG15、TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL1、CXCL2的表达水平。
结果：
表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的cGAS-STING信号通路相关细胞因子的表达如图2(对应数据见表1)。
结果显示，表没食子儿茶素没食子酸酯可抑制巨噬细胞的IFN-β、ISG15、TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL1、CXCL2的表达。可见，表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的。
表1cGAS-STING信号通路相关细胞因子的表达量
实施例3表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的STING高尔基体转移
(1)取腹腔巨噬细胞，RPMI-1640完全培养基重悬并调整至1×105cells/mL，每孔100μL铺于8孔腔室显微镜成像皿中，贴壁4h。
(2)用新鲜培养基洗去未贴壁细胞，分别加入40μg/mL孵育巨噬细胞1h后加入1×105CFU碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌，感染1h后洗去培养基，加入4％多聚甲醛固定1h，5％BSA封闭30min，STING和GM130抗体孵育夜，荧光二抗试剂盒孵育1h后，以DAPI染细胞核，激光共聚焦显微镜拍摄。
结果：
表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的STING高尔基体转移。如图3所示，正常状态下，STING分散在细胞质中；碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染后，STING主要在高尔基体周围；表没食子儿茶素没食子酸酯降低高尔基体周围的STING聚集。可见表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的STING高尔基体转移
实施例4表没食子儿茶素没食子酸酯有效治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染
(1)本次实验选取15只8周龄C57BL/6雌鼠作为实验对象并随机分为3组，表没食子儿茶素没食子酸酯用PBS稀释至2mg/mL，分别在感染前24h、8h、4h腹腔注射200μL表没食子儿茶素没食子酸酯。
(2)用PBS将碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌稀释至2×108CFU/mL，吸取50μL稀释后的菌液，经鼻腔感染以氯胺酮麻醉的小鼠，24h后，颈椎脱臼处死，取肺组织进行组织匀浆，用以菌落计数、病理染色和炎症细胞因子检测。
结果：
表没食子儿茶素没食子酸酯有效治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染。在细胞中证实表没食子儿茶素没食子酸酯抑制碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌诱导的cGAS-STING信号通路激活作用后，进一步通过建立碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染模型来评估表没食子儿茶素没食子酸酯的体内抗感染作用。在感染前8h腹腔注射表没食子儿茶素没食子酸酯(20mg/kg)，通过鼻腔感染碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌(1×107CFU)24h后，处死小鼠。如图4A、4B、4C(对应数据见表2、3)所示，表没食子儿茶素没食子酸酯可显著降低肺部菌落数、肺组织病理损伤和肺部炎症细胞因子水平。
表2各处理组的肺部菌落数
表3各处理组的肺部炎症细胞因子水平
实施例5表没食子儿茶素没食子酸酯提高碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染诱导的小鼠生存率
(1)本次实验选取20只8周龄C57BL/6雌鼠作为实验对象并随机分为2组，表没食子儿茶素没食子酸酯用PBS稀释至2mg/mL，分别在感染前8h注射200μL表没食子儿茶素没食子酸酯。
(2)用PBS将碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌稀释至2×109CFU/mL，吸取50μL稀释后的菌液，经鼻腔感染以氯胺酮麻醉的小鼠，记录小鼠死亡情况。
结果：
表没食子儿茶素没食子酸酯提高碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染诱导的小鼠生存率。在证实表没食子儿茶素没食子酸酯有效治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的基础上，建立碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染致死模型，进一步验证表没食子儿茶素没食子酸酯的治疗作用。在感染前8h腹腔注射表没食子儿茶素没食子酸酯(20mg/kg)，通过鼻腔感染碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌(1×108CFU)。结果显示，表没食子儿茶素没食子酸酯组的小鼠生成率显著提高(图5，对应数据见表4)。
表4表没食子儿茶素没食子酸酯对小鼠生存率的影响
注：表中数值代表对应天数中存活的小鼠数量。
实施例6口服表没食子儿茶素没食子酸酯有效治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染
(1)本次实验选取18只8周龄C57BL/6雌鼠作为实验对象并随机分为3组，表没食子儿茶素没食子酸酯用PBS稀释至2mg/mL，分别在感染前8h灌胃200μL表没食子儿茶素没食子酸酯。
(2)用PBS将碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌稀释至2×108CFU/mL，吸取50μL稀释后的菌液，经鼻腔感染以氯胺酮麻醉的小鼠，24h后，颈椎脱臼处死，取肺组织进行组织匀浆，用以菌落计数；取肺泡灌洗液进行蛋白总量和炎症细胞因子水平检测。
表5各处理组的肺部菌落数
表6各处理组的肺泡灌洗液蛋白总量
表7各处理组的炎症细胞因子水平
结果：
口服表没食子儿茶素没食子酸酯有效治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染。在证实表没食子儿茶素没食子酸酯有效治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染后，进一步通过口服给药表没食子儿茶素没食子酸酯来评估其体内抗感染作用。在感染前8h灌胃给药表没食子儿茶素没食子酸酯(20mg/kg)，通过鼻腔感染碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌(1×107CFU)24h后，处死小鼠。如图6A、6B、6C(对应数据见表5、6、7)所示，口服表没食子儿茶素没食子酸酯可显著降低肺部菌落数、肺泡灌洗液蛋白总量和炎症细胞因子水平。
综上所述，表没食子儿茶素没食子酸酯可以在体内外有效治疗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染。
制备例1
取表没食子儿茶素没食子酸酯单体化合物20g，加入药用淀粉280g，二者充分混合，制成1000粒胶囊，每粒重0.3g，含表没食子儿茶素没食子酸酯20mg。
制备例2
取表没食子儿茶素没食子酸酯单体化合物100g，加入药用淀粉200g，二者充分混合，制成1000片，每片重0.3g，含表没食子儿茶素没食子酸酯100mg。
制备例3
取表没食子儿茶素没食子酸酯单体化合物20g，加入1,2-丙二醇100mL，充分溶解，加灭菌注射用水稀释至1000mL，混匀后分装到1000支安瓶中，每支1mL，含表没食子儿茶素没食子酸酯20mg。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (12)
1.表没食子儿茶素没食子酸酯或活性成分包括表没食子儿茶素没食子酸酯的组合物在如下(1)～(5)中至少一种应用：
(1)制备抑制耐药菌诱导的cGAS-STING信号通路的药物或试剂；
(2)制备降低耐药菌细菌载量的药物或试剂；
(3)制备降低耐药菌诱导的炎症细胞因子水平的药物或试剂；
(4)制备降低耐药菌诱导肺组织病理损伤的药物或试剂；
(5)制备抗耐药菌感染的药物或试剂。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述耐药菌为碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗耐药菌感染包括如下1)～2)中的至少一种：
1)抑制cGAS-STING信号通路；
2)抑制耐药菌诱导的免疫应答。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述免疫应答为巨噬细胞介导的免疫应答，所述巨噬细胞包括腹腔巨噬细胞、骨髓来源巨噬细胞、RAW264.7、THP-1和iBMDM中的一种或多种。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抑制耐药菌诱导的免疫应答包括：
Ⅰ、降低耐药菌的细菌载量；和/或
Ⅱ、降低耐药菌诱导的炎症细胞因子水平；和/或
Ⅲ、降低耐药菌诱导的肺组织病理损伤。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述cGAS-STING信号通路为肺泡巨噬细胞中的cGAS-STING信号通路。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抑制cGAS-STING信号通路包括抑制如下至少一方面：
STING高尔基体转移、TBK1磷酸化水平、IRF3磷酸化水平。
8.根据权利要求1～7任一项所述的应用，其特征在于，所述药物包括表没食子儿茶素没食子酸酯和药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂包括载体、溶剂、乳化剂、分散剂、湿润剂、粘合剂、稳定剂、着色剂和香料中的至少一种。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物的给药剂量包括：
所述给药为口服给药时，剂量为10mg～60mg/次，每日1～2次；
所述给药为肠胃外给药时，为10mg～30mg/次，每日1次。
10.一种抗碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌感染的药物组合物，其特征在于，其活性成分包括有效剂量的表没食子儿茶素没食子酸酯。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，还包括赋形剂，所述赋形剂包括载体、溶剂、乳化剂、分散剂、湿润剂、粘合剂、稳定剂、着色剂和香料中的至少一种。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，其剂型为片剂、胶囊剂、冲剂、滴剂、冻干物、颗粒剂、软膏剂或针剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410313948.6A CN118021793A (zh) | 2024-03-19 | 2024-03-19 | 表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410313948.6A CN118021793A (zh) | 2024-03-19 | 2024-03-19 | 表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118021793A true CN118021793A (zh) | 2024-05-14 |
Family
ID=91002224
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410313948.6A Pending CN118021793A (zh) | 2024-03-19 | 2024-03-19 | 表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118021793A (zh) |
-
2024
- 2024-03-19 CN CN202410313948.6A patent/CN118021793A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112587537A (zh) | 三羟基苯甲酰-beta-d-葡萄糖在制备抗冠状病毒药物方面的应用 | |
| CN102697784B (zh) | 一种兽用恩诺沙星注射液及其制备方法 | |
| SK138597A3 (en) | A pharmaceutical composition containing n-chlorophenylcarbamates, n-chlorophenylthiocarbamates and n-phosphonoglycine derivatives for inhibiting the growth of cancers and viruses in mammals | |
| CN114732818B (zh) | 一种抗特发性肺纤维化药物尼达尼布在结核病治疗中的应用 | |
| CN111939156B (zh) | 一种联合抗菌药物组合物及其应用 | |
| CN118021793A (zh) | 表没食子儿茶素没食子酸酯在制备抗耐药菌的药物中的应用 | |
| CN110974814A (zh) | 双硫仑在细菌感染疾病中的潜在应用 | |
| CN115192593B (zh) | 柔红霉素在治疗多重耐药菌感染疾病中的应用 | |
| US11752120B2 (en) | Use of succinic acid in increasing sensitivity of bacteria to antibiotics | |
| CN109528731B (zh) | 具有协同作用治疗多发性骨髓瘤的药物组合物及其应用 | |
| CN113908121B (zh) | 一种氯硝柳胺注射液及其制备和应用 | |
| CN109620827B (zh) | 杂环丙烯酮类化合物作为抗菌剂的用途 | |
| CN114617886A (zh) | 化合物及其药学上可接受的盐的抗菌用途 | |
| KR20230047396A (ko) | 리라글루티드 및 제피티닙의 항바이러스 용도 | |
| CN112438975B (zh) | 糖尿病治疗药物在抑菌中的应用 | |
| CN109718227B (zh) | 补骨脂查尔酮和异补骨脂查尔酮的用途 | |
| CN101829129A (zh) | 兽用复方硫酸庆大霉素注射液及其制备方法 | |
| CN114569590B (zh) | 新鱼腥草素钠的医药用途 | |
| CN117530922B (zh) | 一种兽用高稳定性复方注射液及其制备方法和应用 | |
| Yu et al. | Combination therapy with TCM preparation kumu injection and azithromycin against bacterial infection and inflammation: in vitro and in vivo | |
| US20230123135A1 (en) | Method of treatment using meta-arsenite | |
| CN115068489A (zh) | 一种抑制金黄色葡萄球菌的组合物及其应用 | |
| CN113813281B (zh) | 肌苷在制备预防和治疗结核病药物中的应用 | |
| CN116077486A (zh) | 桑根酮d在增效多黏菌素抗菌活性中的应用 | |
| CN114522169A (zh) | 一种治疗幽门螺杆菌中药单体组合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |