CN118001409A - 用于治疗和/或辅助治疗t细胞介导的免疫性疾病的药盒 - Google Patents
用于治疗和/或辅助治疗t细胞介导的免疫性疾病的药盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118001409A CN118001409A CN202410047735.3A CN202410047735A CN118001409A CN 118001409 A CN118001409 A CN 118001409A CN 202410047735 A CN202410047735 A CN 202410047735A CN 118001409 A CN118001409 A CN 118001409A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- treatment
- mediated immune
- cell mediated
- regulatory
- kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 46
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 title claims abstract description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 62
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 title claims description 14
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims abstract description 60
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims abstract description 47
- 230000017128 negative regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 claims abstract description 14
- FAWLNURBQMTKEB-URDPEVQOSA-N 213546-53-3 Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C(C)C)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N)C(C)C FAWLNURBQMTKEB-URDPEVQOSA-N 0.000 claims abstract description 9
- LQSHXYHWYGKAMX-FQEVSTJZSA-N O[C@@]1(C(N(CC1)C)=O)C#CC=1C=C(C=CC1)C1=CC(=CC(=N1)C(=O)N)OC Chemical compound O[C@@]1(C(N(CC1)C)=O)C#CC=1C=C(C=CC1)C1=CC(=CC(=N1)C(=O)N)OC LQSHXYHWYGKAMX-FQEVSTJZSA-N 0.000 claims description 39
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 15
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims description 13
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims description 13
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 8
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 8
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 7
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AYIYVEPNEPUJCF-GNXRPPCSSA-N (1e,6e)-1,7-bis(3,4-dimethoxyphenyl)-4-[(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methylidene]hepta-1,6-diene-3,5-dione Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1\C=C\C(=O)C(C(=O)\C=C\C=1C=C(OC)C(OC)=CC=1)=CC1=CC=C(O)C(OC)=C1 AYIYVEPNEPUJCF-GNXRPPCSSA-N 0.000 claims description 2
- IBAKVEUZKHOWNG-UHFFFAOYSA-N 4-n-[2-(4-phenoxyphenyl)ethyl]quinazoline-4,6-diamine Chemical compound C12=CC(N)=CC=C2N=CN=C1NCCC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 IBAKVEUZKHOWNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WPTTVJLTNAWYAO-KPOXMGGZSA-N Bardoxolone methyl Chemical group C([C@@]12C)=C(C#N)C(=O)C(C)(C)[C@@H]1CC[C@]1(C)C2=CC(=O)[C@@H]2[C@@H]3CC(C)(C)CC[C@]3(C(=O)OC)CC[C@]21C WPTTVJLTNAWYAO-KPOXMGGZSA-N 0.000 claims description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 2
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 claims description 2
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 claims description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010043778 thyroiditis Diseases 0.000 claims description 2
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 43
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 27
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 27
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 12
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 230000001185 psoriatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 206010040867 Skin hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 2
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 2
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000028990 Skin injury Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011502 immune monitoring Methods 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开一种用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，包括：独立存在的NF‑κB抑制剂和调节性T淋巴细胞。NF‑κB抑制剂联合调节性T淋巴细胞治疗对T细胞介导的免疫性疾病如银屑病复发有协同治疗的效果，能够抑制自身免疫反应，提高病患的治疗效果及生活质量。
Description
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒。
背景技术
银屑病是一种与免疫和炎症相关的慢性疾病，主要病理特征为表皮细胞过度增殖、炎症细胞浸润和真皮组织血管增生，发病率较高且呈逐年上升的趋势。银屑病一直是皮肤科领域研究的热点和难点，其致病机制至今尚未明了，目前研究认为T细胞介导的细胞免疫在其中扮演着重要角色。银屑病在病理上表现为与自身免疫系统和炎症反应相关，某些机体的免疫细胞和炎症因子的变化是该病发病、加重和复发的重要原因。
银屑病复发以免疫T细胞反应为主要表现，其特征是在停止治疗后，先前的炎症部位复发。银屑病的特异性部位记忆与CD8+CD103+组织常驻记忆细胞(Tissue ResidentMemory T cells，Trm)有关，表皮中的Trm细胞曾经被认为只提供对病原体的“前线”保护和癌症发展过程中的免疫监测，近些年研究Trm细胞明显参与了银屑病发病机制中部位特异性T细胞驱动的疾病记忆，表皮Trm细胞在银屑病病变的患者和介导有害的促炎反应中被保留下来，并在刺激下产生白细胞介素IL-17A和IL-22细胞因子，这两种细胞因子都是关键的银屑病发病因子。
目前，糖皮质激素、角质剥脱剂、生物制剂、免疫抑制剂等是临床上银屑病的常见治疗用药。临床研究发现，大部分银屑病患者在治疗初期均能取得良好的治疗效果，但随着用药时间的延长，疾病大部分出现了复发或加重的现象，无论停药还是持续使用也无法改善。目前国内外研究中对此现象仍无突破性进展，银屑病复发成为难以攻克的重大医学问题。因此，减少银屑病复发是临床中亟待解决的重要问题。
发明内容
本发明的其中一个目的在于提供一种用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，通过采用NF-κB抑制剂治疗联合调节性T淋巴细胞(Tregs)过继回输治疗的方式，治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病，如银屑病复发等。
根据本发明的一个方面，提供了一种用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其包括：独立存在的NF-κB抑制剂和调节性T淋巴细胞。
本发明中，调节性T淋巴细胞可以为从离体外周血中分离的调节性T淋巴细胞或者人工培养的调节性T淋巴细胞；其中，人工培养的调节性T淋巴细胞，可以是细胞库保存的细胞，也可以是市售的细胞。
在一些实施方式中，用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，可以包括独立存在的NF-κB抑制剂以及用于从离体外周血中分离调节性T淋巴细胞的试剂和/或试剂盒。
在一些实施方式中，NF-κB抑制剂可以选自NIK SMI1、Bortezomib、BardoxoloneMethyl、NF-κB-IN-1、QNZ(EVP4593)中的至少一种。
在一些实施方式中，NF-κB抑制剂为NIK SMI1。
在一些实施方式中，药盒中还含有调节性T淋巴细胞培养基和/或调节性T淋巴细胞保存液。
在一些实施方式中，调节性T淋巴细胞培养基可以为含10％FBS的1640培养基。
在一些实施方式中，调节性T淋巴细胞为CD4+CD25+T细胞。
在一些实施方式中，T细胞介导的免疫性疾病包括银屑病、银屑病复发、特异性皮炎、湿疹、类风湿性关节炎、Ⅰ型糖尿病、甲状腺炎和胃炎等。
在一些实施方式中，本发明提供的治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒可用于治疗银屑病复发，减轻银屑病复发的症状。
用于治疗银屑病复发时，本发明提供的治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒中，NIK SMI1的治疗有效量为(2.198～21.98)mg/kg；调节性T淋巴细胞的治疗有效量为(1×106～5×106)个/kg；给药方式可以是静脉给药。
本发明提供的治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，可显著下调IL-6、TNF-α、IL-17A等细胞因子的表达水平、显著降低体内Th17细胞、组织常驻记忆T细胞的数量，因此，还能够应用于制备至少具有以下(1)～(5)任意一项效果的药物：
(1)降低IL-6表达水平；
(2)降低TNF-α表达水平；
(3)降低IL-17A表达水平；
(4)降低Th17细胞水平；
(5)降低组织常驻记忆T细胞水平。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)本发明公开了利用NF-κB抑制剂联合调节性T淋巴细胞治疗在治疗T细胞介导的免疫性疾病如银屑病复发中的应用，提供了一种可用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病，尤其是银屑病复发的药盒。
(2)本发明公开了NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗在治疗银屑病复发中存在协同作用，能有效抑制自身免疫反应，减轻病状，有利于提高病患的治疗效果及生活质量。
(3)动物实验结果表明，本发明提供的药盒，可以显著改善银屑病皮损处的症状并降低PASI评分，减轻银屑病皮损组织中炎症细胞的浸润，降低IL-6、TNF-α、IL-17A炎症因子表达，下调体内Th17细胞(CD4+IL-17A+)的水平及组织常驻T记忆细胞(CD8+CD103+T细胞)水平，从而起到治疗T细胞介导的免疫性疾病如银屑病复发的作用。
附图说明
图1为小鼠不同处理后的银屑病皮损图；
图2为小鼠不同处理后的PASI评分图；*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；
图3为小鼠不同处理后的银屑病皮损的HE染色图；
图4为小鼠不同处理后的皮损处组织中IL-6水平表达的柱状统计图；*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；
图5为小鼠不同处理后的皮损处组织中IL-17A水平表达的柱状统计图；*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；
图6为小鼠不同处理后的皮损处组织中TNF-α水平表达的柱状统计图；*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；
图7为小鼠不同处理后的脾脏中TH17细胞(CD4+IL-17A+T细胞)的流式图；
图8为小鼠不同处理后的脾脏中TH17细胞(CD4+IL-17A+T细胞)的柱状统计图；*表示P＜0.05；**表示P＜0.01；
图9为小鼠不同处理后的皮损处组织常驻T记忆细胞(CD8+CD103+T细胞)的流式图；
图10为小鼠不同处理后的皮损处组织常驻T记忆细胞(CD8+CD103+T细胞)的柱状统计图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详细的说明。
实施例1、用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒包括独立存在的NIK SMI1和调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+T细胞)。
调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+T细胞)可以通过常规的提取分离方法从离体外周血中分离得到，给药时，将其与1640完全培养基(含10％FBS)混匀，配制成含(1×106～1×107)个/mL调节性T淋巴细胞的调节性T淋巴细胞悬液，静脉注射给药。
用于治疗银屑病复发患者时，可以将NIK SMI1溶解于生理盐水中静脉注射给药；给药剂量一般是2.198mg/kg～21.98mg/kg，给药周期是2天一次，共3次。调节性T淋巴细胞与1640完全培养基(含10％FBS)混匀，静脉注射给药；给药剂量一般是1×106个/kg～5×106个/kg，给药周期是2天一次，共3次。
实验例NIK SMI1联合Tregs过继回输治疗银屑病复发小鼠
1、制备及分离纯化C57BL/6小鼠CD4+CD25+T细胞
(1)制备C57BL/6小鼠脾脏细胞悬液
小鼠颈椎脱臼处死后，于75％酒精中浸泡5min；在无菌条件下取小鼠脾脏，置于培养皿中，倒入少量1640培养基，然后在40μm无菌滤网中研磨，收集细胞悬液于15mL离心管中，300g离心5min，弃上清后加入3mL红细胞裂解液冰上裂解5min，400g离心5min，PBS洗涤2次，300g离心5min，PBS重悬细胞后，即可计数。
(2)孵育Anti-CD4和Anti-CD25抗体
按照每106个细胞加0.1μg抗体将适量的Anti-CD4和Anti-CD25抗体加入步骤(1)制备好的脾细胞悬液中，室温下避光孵育30min；PBS洗1次后，用含2％FBS的PBS重悬细胞至3～4mL，备用。
(3)流式细胞仪分离纯化CD4+CD25+T淋巴细胞
使用BD FACSAria III流式细胞仪按标准操作流程将上述步骤(2)制备好的细胞悬液进行分选，细胞接收管提前加入2mL 1640完全培养基(含10％FBS)作为缓冲液，收集CD4阳性和CD25阳性群的细胞；将收集好的细胞放入37℃培养箱中保存备用，待所有细胞收集完成后统一处理。
(4)将收集的CD4+CD25+T淋巴细胞计数后，300g离心5min，用1640完全培养基重悬至2×106cell/mL，然后加入浓度为2.5μg/mL的抗小鼠CD3e和CD28抗体以及rmIL-2(10ng/mL)、rh TGF-β1(5ng/mL)，混匀后加到6孔板中；置于37℃，含5％CO2的培养箱中培养。
2、银屑病复发小鼠模型的建立
健康Balb/c雄性小鼠，先脱去小鼠背毛。脱毛处均外涂5％咪喹莫特软膏7天，1次/d，初次银屑病模型成功后，再过14天(免疫耐受期)，即从第21天开始，在背部脱毛区继续涂5％的咪喹莫特，连续7天(第21天-第28天，复发期)，再次出现鳞屑增多，皮肤增厚明显，红斑明显等现象，形成银屑病复发病状，从而得到银屑病复发小鼠模型。
3、动物分组及给药剂量
将已成模的小鼠随机分为模型对照组(模型组)、NF-κB抑制剂NIK SMI1组(NIKSMI1组)、调节性T淋巴细胞过继回输组(Tregs回输组)、NF-κB抑制剂(NIK SMI1)联合调节性T淋巴细胞(Tregs)过继回输治疗组(NIK SMI1+Tregs回输组)，每组6只；另取6只健康Balb/c雄性小鼠，设为正常对照组(正常组)。
调节性T淋巴细胞治疗用量(尾静脉注射)为Tregs细胞1×106个/只·day，NIKSMI1用量(尾静脉注射)为20mg/kg·day，NF-κB抑制剂(NIK SMI1)联合调节性T淋巴细胞(Tregs)过继回输治疗为(尾静脉注射Tregs细胞1×106个/只+尾静脉注射NIK SMI1 20mg/kg)·day，给药时间为第1、4、7天，共给药3次。正常组、模型组均等量注射生理盐水。
4、实验方法及结果分析
(1)银屑病复发小鼠皮损处的表观症状及PASI评分
用不同的药物处理小鼠，每日通过采取数码照相拍照来记录小鼠皮损处的表观症状情况，7天后，对小鼠皮损处的表观症状情况进行评分(红斑、鳞屑、浸润增厚水平)(由轻到重评为：0-4的积分)，将三者积分相加得到总积分。PASI评分标准如下:0，无；1，轻度；2，中度；3，重度；4，极重度。
结果如图1-2所示，从图1-2可以看出：各组小鼠给予不同治疗7天后，模型组小鼠中，皮损处背部皮肤明显增厚，且出现红斑、鳞屑等症状，与人类银屑病样皮损类似。与模型组相比，NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组、NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗组小鼠背部皮损处的皮肤增厚程度减轻，红斑的颜色变浅，且皮损伤的鳞屑变薄，PASI评分下降，其中NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗组小鼠对症状的改善效果更为显著，与NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组相比，差异具有显著性(P<0.01)，说明NIKSMI1联合调节性T淋巴细胞治疗可以显著改善银屑病复发小鼠背部皮损表观症状，两者具有协同作用。
(2)银屑病复发小鼠皮损组织中炎症细胞的浸润情况
用不同的药物处理小鼠，7天后，取小鼠皮损处组织进行HE染色检测。
结果如图3所示，从图3可以看出：各组小鼠给予不同治疗7天后，与模型组相比，NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组、NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗组小鼠皮损区域中，角化不全的细胞显著降低，表皮棘细胞层及表皮层厚度均显著下降，其中NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗组小鼠皮损中角化不全的细胞、表皮棘细胞层及表皮层厚度减少症状更为显著。
(3)银屑病复发小鼠皮损组织中炎症因子表达情况
用不同的药物处理小鼠，7天后，取各组小鼠的银屑病皮损处组织进行Elisa检测。
检测结果如图4-6所示：与模型组相比，NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组、NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗组小鼠背部皮损处IL-6、TNF-α、IL-17A水平表达均显著下降，其中NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗组小鼠对IL-6、TNF-α、IL-17A水平表达下调的效果更为显著，与NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组相比，差异具有显著性(P<0.01)，说明NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗可以显著降低银屑病复发小鼠背部皮损的炎症因子水平，NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗具有协同作用。
(4)银屑病复发小鼠体内Th17细胞(CD4+IL-17A+)水平
用不同的药物处理小鼠，7天后，利用流式细胞仪定量分析小鼠脾脏中的Th17细胞水平。
结果如图7-8所示，从图7-8中可以看出：与模型组相比，NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组、NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗组小鼠脾脏中的Th17细胞水平均显著下降，其中NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗对银屑病复发小鼠Th17细胞水平下调的效果更为显著，与NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组相比，差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)，说明NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗具有协同作用。
(5)银屑病复发小鼠皮损处组织常驻T记忆细胞(CD8+CD103+T细胞)水平
用不同的药物处理小鼠，7天后，利用流式细胞仪定量分析小鼠皮损处组织常驻T记忆细胞(CD8+CD103+T细胞)水平。
结果如图9-10所示，从图9-10中可以看出：与模型组相比，NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组、NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗组小鼠皮损处组织常驻T记忆细胞(CD8+CD103+T细胞)水平均显著下降，其中NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗对银屑病复发小鼠Th17细胞水平下调的效果更为显著，与NIK SMI1组、调节性T淋巴细胞过继回输治疗组相比，差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)，说明NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞治疗具有协同作用。
5、实验结论
NIK SMI1联合调节性T淋巴细胞过继回输治疗可显著改善银屑病复发小鼠皮损处的症状并降低PASI评分，减轻银屑病皮损组织中炎症细胞的浸润，降低银屑病皮损处组织中炎症因子表达，下调体内Th17细胞(CD4+IL-17A+)的水平及组织常驻T记忆细胞(CD8+CD103+T细胞)水平，通过调节自身免疫进而对银屑病复发起治疗作用。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其特征在于，包括：独立存在的NF-κB抑制剂和调节性T淋巴细胞。
2.根据权利要求1所述的用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其特征在于，所述NF-κB抑制剂选自NIK SMI1、Bortezomib、Bardoxolone Methyl、NF-κB-IN-1、QNZ(EVP4593)中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其特征在于，所述NF-κB抑制剂为NIK SMI1。
4.根据权利要求1所述的用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其特征在于，所述调节性T淋巴细胞为CD4+CD25+T细胞。
5.根据权利要求1～4任一项所述的用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其特征在于，所述T细胞介导的免疫性疾病包括银屑病、银屑病复发、特异性皮炎、湿疹、类风湿性关节炎、Ⅰ型糖尿病、甲状腺炎和胃炎。
6.根据权利要求5所述的用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其特征在于，所述T细胞介导的免疫性疾病为银屑病复发。
7.根据权利要求6所述的用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其特征在于，所述NIK SMI1的治疗有效量为(2.198～21.98)mg/kg。
8.根据权利要求6所述的用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒，其特征在于，所述调节性T淋巴细胞的治疗有效量为(1×106～5×106)个/kg。
9.根据权利要求1～8任一项所述的用于治疗和/或辅助治疗T细胞介导的免疫性疾病的药盒在制备至少具有以下(1)～(5)中任意一项效果的药物中的应用：
(1)降低IL-6表达水平；
(2)降低TNF-α表达水平；
(3)降低IL-17A表达水平；
(4)降低Th17细胞水平；
(5)降低组织常驻记忆T细胞水平。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410047735.3A CN118001409A (zh) | 2024-01-11 | 2024-01-11 | 用于治疗和/或辅助治疗t细胞介导的免疫性疾病的药盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410047735.3A CN118001409A (zh) | 2024-01-11 | 2024-01-11 | 用于治疗和/或辅助治疗t细胞介导的免疫性疾病的药盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118001409A true CN118001409A (zh) | 2024-05-10 |
Family
ID=90951069
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410047735.3A Pending CN118001409A (zh) | 2024-01-11 | 2024-01-11 | 用于治疗和/或辅助治疗t细胞介导的免疫性疾病的药盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118001409A (zh) |
-
2024
- 2024-01-11 CN CN202410047735.3A patent/CN118001409A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| El Hassan et al. | Post kala-azar dermal leishmaniasis in the Sudan: clinical features, pathology and treatment | |
| Stastny et al. | Homologous disease in the adult rat, a model for autoimmune disease: I. General features and cutaneous lesions | |
| Hu et al. | Brain-derived neurotrophic factor precursor in the immune system is a novel target for treating multiple sclerosis | |
| US11173188B2 (en) | Orange peel ferments and preparations and applications thereof | |
| CN107569488A (zh) | 吴茱萸碱在制备抗骨质疏松药物中的应用及其药物 | |
| CN112843222A (zh) | Ankrd22蛋白在制备治疗或延缓自身免疫性疾病的产品中的应用 | |
| Du et al. | Oridonin prolongs the survival of mouse cardiac allografts by attenuating the NF-κB/NLRP3 pathway | |
| CN114990206A (zh) | Commonγ-chain受体作为药物靶点在制备治疗狼疮性肾炎药物中的应用 | |
| Linnerbauer et al. | Intranasal delivery of a small-molecule ErbB inhibitor promotes recovery from acute and late-stage CNS inflammation | |
| Fowler et al. | Targeting the canonical nuclear factor-κB pathway with a high-potency IKK2 inhibitor improves outcomes in a mouse model of idiopathic pneumonia syndrome | |
| CN118001409A (zh) | 用于治疗和/或辅助治疗t细胞介导的免疫性疾病的药盒 | |
| Wang et al. | Suppressive effect of β, β-dimethylacryloyl alkannin on activated dendritic cells in psoriasis by the TLR7/8 pathway | |
| CN113662934A (zh) | 衣康酸二甲酯在制备治疗和/或预防神经退行性疾病的药物中的应用 | |
| CN113797345A (zh) | 糖皮质激素与糖酵解调节剂在制备急性移植物抗宿主病的药物中的应用 | |
| US11944601B2 (en) | Applications of ellagic acid in preparation of immunomodulatory medicines for treatment of neuromyelitis optica or immune rejection after skin transplantation | |
| CN100566750C (zh) | 一种抗t淋巴细胞瘤的自身t细胞疫苗及制备方法 | |
| TWI819495B (zh) | 克弗爾胜肽用於治療類風濕性關節炎之用途 | |
| Istiqomah et al. | The Effect of Hypoxic Mesenchymal Stem Cells on the expression of Transforming Growth Factors in Wistar Rats Excision Wound Model | |
| Takeuchi et al. | Possibility of inducing anterior chamber-associated immune deviation by TGF-β2 treatment of monocytes isolated from Behcet's patients | |
| Sheng-Xiao et al. | SAT0181 low dose interleukin-2 combined with tocilizumab selectively increases regulatory t cells helping refractory rheumatoid arthritis patients achieve remission more rapidly | |
| EP0889053B1 (de) | BK-RiV-Präparate zur Behandlung von proliferativen Zellerkrangungen | |
| CN101843606B (zh) | 大黄素作为急性白血病化疗药物的增敏剂和多药耐药逆转剂的应用 | |
| Iwamoto et al. | AB0344 Factors which contribute persistency and optimal use of Tofacitinib; Lessons from long term daily clinical use of Tofacitinib | |
| Genovese et al. | SAT0180 Efficacy and safety of sarilumab 200 MG Q2W administered as combination therapy or monotherapy in different patient populations with active RA | |
| KR20230002080A (ko) | 면역 억제 t 세포를 포함하는 면역 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |