CN1179752C - 含咪唑丙酰胺基的苯并二氮杂�类化合物以及制法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有咪唑基的苯并二氮杂卓类化合物，特别是涉及通式I的新化合物及其制备方法，和这些化合物在抑制法尼基蛋白转移酶和抑制癌基因Ras蛋白法尼基化的作用。本发明还涉及这些化合物作为药物治疗与法尼基蛋白转移酶相关的癌症的应用。

Description

含咪唑丙酰胺基的苯并二氮杂䓬类化合物以及制法和用途
背景技术
本发明涉及含有咪唑基的苯并二氮杂类化合物，特别是涉及通式I的新化合物及其制备方法，和这些化合物在抑制法尼基蛋白转移酶和抑制癌基因Ras蛋白法尼基化的作用。本发明还涉及这些化合物作为药物治疗与法尼基蛋白转移酶相关的癌症的应用。
Figure C0012352100071
抗癌药物是目前药物研究开发的重要内容之一，特别是针对特定靶位的抗癌药物设计和开发已成为抗癌药物研究的主流。
Ras原癌基因在细胞正常生长过程中起很重要的作用，Ras基因发生突变会使细胞增殖难以控制，研究发现50％的结肠癌中和90％的胰腺癌中存在Ras癌基因。Ras癌基因的表达物Ras蛋白在细胞生长和增殖过程中起信号转导作用。正常Ras蛋白作用过程是以GTP的活性结合形式开始，经过法尼基化到细胞膜内侧进行信号转导，再水解为GDP的非活性形式这样一个循环过程。一旦Ras基因发生突变，Ras蛋白则始终结合为GTP形式，连续的生长信号转导导致细胞的恶性增殖，造成组织的癌变。在整个信号转导过程中Ras蛋白结合到细胞膜上才能起作用，但因本身疏水性差难以结合到细胞膜上，Ras蛋白须在法尼基蛋白转移酶(FPTase)催化下进行法尼基化，增加其亲脂性，以利于与细胞膜的结合。所有的Ras蛋白末端均有一个向外伸展片段，即CAAX。法尼基化即发生在CAAX上，其中C为Cys，A为疏水性氨基酸，X为Met或Ser等可与法尼基蛋白转移酶特异性结合的氨基酸。法尼基化即FPP(法尼基焦磷酸酯)中的法尼基(十五碳三烯)与Cys中的巯基结合的过程。因此能抑制法尼基蛋白转移酶的活性，阻止Ras蛋白进行信号转导，将是寻找具有应用价值的抗癌药物的新途径。
本发明是基于CAAX结构小分子模拟肽的法尼基蛋白转移酶抑制剂。
近期发现法尼基蛋白转移酶同家族酶香叶基酶(GGTase)，尤其是GGTase-I酶在细胞分化和增殖过程中起很重要的信号传导作用。并发现许多现有的法尼基蛋白转移酶抑制剂，对GGTase-I酶有抑制活性。本发明的化合物对GGTase酶有潜在的抑制活性，对与GGTase酶相关的疾病有潜在的药用价值。
迄今为止对法尼基蛋白转移酶抑制剂的研究非常活跃，现有技术中记载专利WO99/30,992报道的一类含有咪唑基和苯并二氮杂环化合物对法尼基蛋H白转移酶具有一定抑制作用。它的结构特征如下
Figure C0012352100081
R1′＝F、Cl、Br、CN；R2′、R3′＝ArCH2；Ar为R1取代的苯基。
Z＝CO，SO2，CO2，CONR，SO3。
但这类化合物活性不高，对酶和细胞作用的选择性差。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种新型咪唑丙酰胺基取代的苯并二氮杂化合物；
本发明的另一目的在于提供一种制备咪唑丙酰胺基取代的苯并二氮杂的方法；
本发明的又一目的在于提供一种该类化合物在抑制法尼基蛋白转移酶和治疗以抑制法尼基蛋白转移酶为机理的疾病的药物中的用途。
为了完成本发明之目的，本发明采用如下技术方案：
本发明是涉及具有通式I的新型化合物：
式中：
R1选自Nα-乙酰组氨酰胺基、Nα-苯甲酰组氨酰胺基、3-(4-咪唑基)丙酰胺基、3-(4-咪唑基)丙烯酰胺基、硝基、氨基；
R2选自氢、卤素；
R3选自氢、ω-烷氧羰基烷基、ω-羧基烷基或烷基；
R4选自氢、烷氧基等；
R5选自氢、卤素。
本发明中所述的卤素是氟、氯和溴。本发明还涉及通式I所示的化合物，其中R3中所述的烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基和苄基，R4中所述的烷氧基是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基或苄氧基。R3的羧基或烷氧羰基经1，2，3个碳原子相连。
现有技术中没有完全制备通式I所述的化合物的方法。
为了制备本发明I所述的化合物，本发明用两种方法来完成：
方法一：
该方法包括在碱性条件下，将7-硝基-5-苯基苯并二氮杂与溴代脂肪酸酯反应，得到了7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂，然后还原硝基为氨基，再与取代的咪唑丙酸反应，最后再经过脱保护基和水解得到本发明目的物。
方法一的具体步骤如下：
一种制备具有法尼基蛋白转移酶抑制剂作用的通式I化合物的方法，其特征是包括如下步骤：
(1)选自溶剂DMF、DMSO、二氧六环、乙二醇独甲醚、乙氰或甲醇，在0-80℃条件下，在选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢化钠的作用下，将溴代脂肪酸酯与7-硝基-5-苯基苯并二氮杂反应，得到7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(2)将得到7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂在还原剂作用下，还原为7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(3)L-组氨酸在乙酰氯或乙酸酐或苯甲酰氯作用下生成Nα-L-乙酰组氨酸和Nα-L-苯甲酰组氨酸；
(4)Nα-L-乙酰组氨酸或Nα-L-苯甲酰组氨酸或3-(4-咪唑基)丙烯酸和2，4-二硝基氟苯反应得到Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-乙酰基组氨酸或Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-苯甲酰基组氨酸或3-(4-(Nim-2，4-二硝基苯基咪唑基))丙烯酸；
(5)Nim-Dnp-乙酰基组氨酸、Nim-Dnp-苯甲酰基组氨酸或3-(4-(Nim-Dnp咪唑基))丙烯酸在DCC和HOBt存在下与7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂反应，合成Dnp保护的取代4-咪唑丙酰胺基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(6)7-Dnp保护的取代咪唑丙酰胺基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂与巯基乙醇反应得到7-取代咪唑丙酰胺基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂化合物，再用氢氧化锂水解，在酸化即得到本发明的目的物。
该方法中使用的还原剂为如Pd/C-H2，RaneyNi-H2，SnCl2·2H2O等。
在方法一中可以将选自氢、6-，8-或9-卤素、1-甲基，乙基，丙基，异丙基，苄基、3-甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，苄氧基基团取代7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂在还原剂的作用下，还原为7-氨基-所述取代的-5-苯基苯并二氮杂。
另外，得到的7-氨基-所述取代的-5-苯基苯并二氮杂可以在DCC和HOBt存在下，可以与Nim-Dnp-乙酰基组氨酸、Nim-Dnp-苯甲酰基组氨酸或3-(4-(Nim-Dnp咪唑基))丙烯酸反应，合成7-保护的取代咪唑丙酰胺基-所述取代的-5-苯基苯并二氮杂；再用巯基乙醇脱保护和用氢氧化锂水解后，得到7-取代咪唑丙酰胺基所述取代的-5-苯基苯并二氮杂。
本发明的产物也可以经过另一方法制得，即方法二，它包括在碱性条件下7-硝基-5-苯基苯并二氮杂与溴代脂肪酸酯反应得到7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂，然后还原硝基为氨基，再与咪唑丙酰氯反应，最后水解、酸化得到本发明目的物。
其具体步骤如下：
一种制备具有法尼基蛋白转移酶抑制剂作用的通式I化合物的方法，其特征是包括如下步骤：
(1)溶剂DMF、DMSO、二氧六环、乙二醇独甲醚、乙氰或甲醇，在0-80℃条件下，在选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢化钠的作用下，将溴代脂肪酸酯与7-硝基-5-苯基苯并二氮杂反应，得到7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(2)得到7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂在还原剂作用下原为7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(3)3-(4-咪唑基)丙烯酸在Pd/C-H2作用下还原为3-(4-咪唑基)丙酸；
(4)3-(4-咪唑基)丙酸与氯化亚砜反应得到咪唑-丙酰氯，此酰氯再与7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂反应，生成7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂，再用氢氧化锂水解，酸化得到本发明的目的物。
本发明两个方法中的酸化步骤，其pH值为3-6。
在方法二中，可以将选自氢、6-，8-或9-卤素、1-甲基，乙基，丙基，异丙基，苄基、3-甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，苄氧基基团取代7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂在还原剂的作用下，还原为7-氨基-所述取代的-5-苯基苯并二氮杂。
将得到的7-氨基-所述取代的-5-苯基苯并二氮杂，可以与3-(4-咪唑基)丙酰氯反应，生成7-咪唑丙酰胺基-所述取代的-5-苯基苯并二氮杂；再用氢氧化锂水解，酸化得到7-咪唑丙酰胺基-所述取代的-5-苯基苯并二氮杂。
以下结合结构图描述本发明通式I的合成路线：
方法1：
本发明的化合物有明显的抑制法尼基蛋白转移酶(FPTase)的活性，并抑制癌基因表达的Ras蛋白的法尼基化。
本发明的化合物能抑制癌细胞生长信号的转导，因而能抑制癌的生长。
由此可见，本发明的化合物可以用于治疗但不仅限于如下疾病：如结肠癌、胰腺癌、白血病和神经系统癌症等。
本发明的化合物可以用于治疗其他因基因突变引起的细胞增殖性疾病。
本发明的化合物可单独或组合用于治疗以上疾病。
本发明化合物可用口服方法或非肠胃道用药。口服用药可以是片剂、胶囊剂、包衣剂，非经肠胃道用药剂型有注射剂和栓剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟知的方法制备的。为制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的助剂，例如淀粉，明胶，阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇；液体剂型所用的溶剂例如有水，乙醇，丙二醇，植物油类如玉米油，花生油，橄榄油等。含有本发明化合物的制剂中还可有其他助剂，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂，色素等。
在片剂、胶囊剂、包衣剂，注射剂或栓剂中含有本发明式I化合物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明式I化合物一般含量为10-500mg，优选的单元剂型含有20-100mg。
为治疗结肠癌、胰腺癌和骨髓白血病等其他细胞增殖性疾病，患者服用剂量为0.1mg/Kg_60mg/Kg每天，优选剂量为0.5mg/Kg-40mg/Kg每天。
具体实施方式
以下将结合实施例对发明作进一步说明，但并不限制本发明的范围。
方法一：
7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
实施例1  7-硝基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂的制备
50ml圆底烧瓶中加入7-肖基-5-苯基苯并二氮杂(2.0g 7.2mmol)、碳酸钾(20g 14.4mmol)、20ml乙腈和溴乙酸乙酯(1.8g 10.6mmol)，室温反应2小时。反应毕加入50ml水，用乙酸乙酯萃取，减压浓缩除去乙酸乙酯，剩余物用无水乙醇重结晶，得1.8g白色结晶。经测定该结晶物为7-硝基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。mp：141-143℃，收率81.6％。
实施例2  7-硝基-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
以实施例1相同的方法进行，不同的是取3-溴丙酸甲酯1.8g代替溴乙酸乙酯，得油状物。该油状物为7-硝基-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂，不经进一步纯化留做实施例5中使用。
实施例3  7-硝基-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
以实施例1相同的方法进行，不同的是取4-溴丁酸乙酯1.8g代替溴乙酸乙酯，得油状物。该油状物为7-硝基-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂，不经进一步纯化留做实施例6中使用。
7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
实施例4  7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂的制备
取50ml三口瓶加入经实施例1制备的7-硝基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂和氯化亚锡(4.8g 21.6mmol)，再加入30ml乙醇，氮气保护下50-70℃反应4小时，反应毕浓缩除去乙醇，加入20ml饱和碳酸钠溶液，用二氯甲烷萃取，再浓缩除去二氯甲烷，用二氯甲烷和石油醚重结晶得浅黄色固体1.7g，mp：164-165℃，收率91.8％。经测定该固体为7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
实施例5  7-氨基-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
以实施例4相同的方法进行，不同的是取实施例2的油状7-硝基-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂代替7-硝基-1-(乙氧羰基亚甲基)-5-苯基苯并二氮杂。用二氯甲烷重结晶得浅黄色固体，收率53.5％，mp：148-151℃。经测定该固体为7-氨基-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
实施例6  7-氨基-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
以实施例4相同的方法进行，不同的是取实施例3的油状7-硝基-1-(3-乙氧羰基丙基)苯并二氦杂代替7-硝基-1-(乙氧羰基亚甲基)-5-苯基苯并二氮杂。用二氯甲烷重结晶得浅黄色固体，收率48.4％，mp：175-177℃。经测定该固体为7-氨基-1-(3-乙氧羰基丙基)苯并二氮杂。
保护组胺酸的制备
实施例7 N im -2，4-二硝基苯基-N α -乙酰组胺酸的制备
L-组氨酸(5.0g 32mmol)中加入18.5ml冰醋酸，室温搅拌下滴加3.5ml乙酸酐和9ml冰醋酸的溶液，迅速升温至100℃搅拌5分钟。反应毕加入少量水，蒸干溶剂得白色固体5.4g。
上述固体中加入6.0g碳酸氢钠和40ml水，搅拌下慢慢滴加2，4-二硝基氟苯(5.0g 27mmol)和25ml甲醇的溶液，室温反应一天。反应毕用浓盐酸酸化，蒸干溶剂得黄色固体，用柱层析分离，然后用甲醇重结晶5次得奶黄色固体6.0g，收率62.1％，mp：117-119℃。经检测此固体为Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-乙酰组胺酸。
实施例8  N im -2，4-二硝基苯基-N α -苯甲酰组胺酸的制备
L-组氨酸(5.0g 32mmol)中加入9ml 15％氢氧化钠和60ml水溶解，冰浴冷却下滴加苯甲酰氯(7.5ml 64.4mmol)再滴加18ml15％氢氧化钠溶液。滴毕继续冰浴反应1小时，然后用浓盐酸酸化，滤集析出的固体，用石油醚洗去生成的苯甲酸，得6.0g Nim-苯甲酰组胺酸。mp：244-247℃，收率81.0％。
上述固体中加入碳酸氢钠(2.2g)和20ml水，慢慢滴加2，4-二硝基氟苯(5.0g27mmol)和25ml甲醇的溶液，室温反应一天。反应毕用浓盐酸酸化，滤集析出的黄色固体，用柱层析分离，得浅黄色固体5.05g，收率61.6％，mp：127-130℃。经检测此固体为Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-苯甲酰组胺酸。
实施例9  3-(4-Nim-2，4-二硝基苯基咪唑基))丙烯酸的制备
3-(4-咪唑基)丙烯酸(2.0g 14.0mmol)中加入碳酸氢钠3.2g和20ml水溶解，室温慢慢滴加2，4-二硝基氟苯(2.96g 16mmol)和10ml甲醇的溶液，室温反应一天，用浓盐酸酸化，滤集析出的红色固体，用甲醇重结晶得浅黄色固体1.6g，收率36.4％。经测定此固体为3-(4-(Nim-2，4-二硝基苯基-咪唑基))丙烯酸。
7-(N im -乙酰组胺酰胺基)-1-(ω羧基烷基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
实施例10  7-(α-乙酰组胺酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂的 制备
Nim-2，4二硝基苯基-Nα-乙酰组氨酸(1.62g 4.4mmol)与DCC(0.72g 3.5mmol和HOBt(1.0g 7.7mmol)溶于20mlDMF中，在冰浴下反应1小时，然后加入7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂(1.0g 3.0mmol)，继续冰浴反应2小时，室温反应一天。滤除生成的DCU，加入饱和碳酸氢钠水溶液100ml，析出灰色固体，滤集固体2.0g。此固体为7-(Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂，不经进一步纯化直接进行如下脱保护反应。
上述固体中加入10ml 2-巯基乙醇，室温搅拌2小时，加入饱和碳酸氢钠水溶液100ml析出灰黄色固体，滤集固体1.0g，此固体7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂，不经纯化进行如下水解反应。
上述固体溶于8ml甲醇和2ml水中，加入0.3g氢氧化锂，室温反应2小时。用醋酸酸化反应液，其pH为4，蒸干溶剂，得到的固体进行柱层析分离，活性炭脱色，然后冷冻干燥得白色固体0.35g，mp：246-248℃。收率23.8％(以7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂计)。经测定此固体为7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
FAB质谱m/e 489(M+1)
1HNMR(300MHz DMSO-d6)
1.79(s 3H)，2.49-2.97(m 1H)，3.70-3.74(d 1H)，3.88-3.95(t 1H)，4.21-4.27(d1H)，4.46-4.57(m 2H)，6.71(s 1H)，7.38-7.76(m 8H)，8.52-8.71(t 1H)，10.68(s 1H)。
实施例11  7-(N α -乙酰组胺酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
以实施例10相同的方法进行，不同的是取7-氨基-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂代替实施例10的7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂，得白色固体0.4g，mp：195-198℃分解，收率27.5％(以7-氨基-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂计)。经测定此固体为7-Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
实施例12  7-(N α -乙酰组胺酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并二氮杂的制备
以实施例10相同的方法进行，不同的是取7-氨基-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂代替实施例10的7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂，得白色固体0.3g，mp：200-204℃分解，收率27.5％(以7-氨基-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂计)。经测定此固体为7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
实施例13  7-(N α -苯甲酰组胺酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂的制备
以实施例10相同的方法进行，不同的是以Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-苯甲酰组胺酸(1.8g 4.4mmol)代替Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-乙酰组胺酸，得7-(Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂0.45g，收率26.5％，mp：226-229℃分解。
1HMR(300MHz DMSO-d6)
2.95-3.08(m 2H)，3.78-3.82(d 1H)，4.41-4.56(dd 2H)，4.56-4.62(d 1H)，4.67-4.72(m1H)，6.84(s 1H)，7.42-7.56(m 11H)，7.81-7.84(m 3H)，7.91-7.94(m 1H)，8.67-8.69(d1H)，10.30(s 1H)。
实施例14  7-(N α -苯甲酰组胺酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮 杂的制备
以实施例11相同的方法进行，不同的是以Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-苯甲酰组胺酸(1.8g 4.4mmol)代替Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-乙酰组胺酸，得白色固体0.3g，收率13.6％，mp：189-192℃分解。经测定此固体为7-(Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
实施例15  7-(N α -苯甲酰组胺酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并二氮 杂的制备
以实施例12相同的方法进行，不同的是以Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-苯甲酰组胺酸(1.8g 4.4mmol)代替Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-乙酰组胺酸，得白色固体0.4g，收率17.8％，mp：194-197℃分解。经测定此固体为7-(Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
实施例16  7-(3-(4-咪唑基)丙烯酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二 氮杂的制备
以实施例10相同的方法进行，不同的是以3-(4-(Nim-2，4-二硝基苯基咪唑基))丙烯酸代替Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-乙酰组胺酸，得白色固体0.25g，收率21.4％，mp：202-205℃分解。经测定此固体为7-(3-(4-咪唑基)丙烯酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
1HNMR(300MHz DMSO-d6)
3.71-3.74(d 1H)，3.86-3.91(d 1H)，4.21-4.27(d 1H)，4.49-4.53(d 1H)，6.93-6.74(d1H)，7.34-7.68(m 10H)，7.82-7.86(t 1H)，10.42(s 1H)。
以下实施例将具体描述方法二的步骤：
实施例17  3-(4-咪唑基)丙酸的制备
3-(4-咪唑基)丙烯酸(7.0g 50mmol)溶于150ml冰醋酸中，加入350mg 10％Pd/C，在1.5atm氢气压下反应至不吸氢为止，滤除催化剂，蒸去醋酸，用乙醇和石油醚结晶得白色固体6.7g，收率95％，mp：197-201℃。
7-(3-(4-咪唑)烯酰胺基)-1-(ω-羧基烷基)-5-苯基苯并二氮杂的制 备
实施例18  7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮 杂的制备
3-(4-咪唑基)丙酸(1g 7.1mmol)中加入15ml新蒸的氯化亚砜，放置过夜，蒸去氯化亚砜，加入二氯甲烷30ml和DMF 10ml，0℃下慢慢滴入三乙胺(1ml 7.3mmol)和7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂(2.4g 7.1mmol)和20ml二氯甲烷的溶液，滴毕室温反应一天。蒸去溶剂，柱层析分离得灰白色固体2.0g，此固体为7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂，不经纯化进行如下反应。
上述固体溶于30ml和10ml水中，加入氢氧化锂(0.9g 20mmol)，室温搅拌1小时，用醋酸酸化，蒸去溶剂，柱层析分离，活性炭脱色，然后冷冻干燥得白色固体1.1g，总收率34.8％，mp：218-220℃。经测定此固体为7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
1HNMR(300MHz DMSO-d6)
2.50-2.55(m 1H)，2.71-2.76(m 1H)，3.68-3.72(d 1H)，3.93-3.98(d 1H)，4.18-4.23(d 1H)，4.48-4.51(d 1H)，6.68(s 1H)，7.29-7.58(m 8H)，7.70-7.72(d 1H)，10.27(s1H)。
实施例19  7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮 杂的制备
以实施例18相同得方法进行，不同的是以7-氨基-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂代替7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。得白色固体1.2g，mp：160-163℃，收率38.0％。经测定此固体为7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
实施例20  7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并 二氮杂的制备
以实施例18相同的方法进行，不同的是以7-氨基-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂代替7-氨基-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。得白色固体1.1g，mp：128-131℃，收率33.7％。经测定此固体为7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
实验例1  法尼基蛋白转移酶抑制活性实验
法尼基蛋白转移酶抑制剂活性依据将[3H]标记的法尼基磷酸盐中[3H]法尼基蛋白转移酶p21H-Ras蛋白的量而定，每个反应总体积25μl，其中含有50mTris-Cl(pH7.5)，25m MgCl2，20mM KCl，1mM DTT，2.5-5μMP21H-ras，10-15pmolFPP(25,000-30,000dpm/pm01)或GGPP和6-7μg部分纯化法尼基蛋白转移酶以及不同浓度的受试化合物。反应物在硅化管避光条件下，37℃反应1小时，加入SDS和TCA终止反应。加入2ml 6％TCA和2％SDS混合液，充分混匀后，放置冰上一小时。反应物通过直径为2.4cm的玻璃滤膜过滤，6％TCA反复冲洗滤膜，置液闪仪上测定并计数。同时设不含酶或不含P21H-ras蛋白的空白对照，计算时减去空白对照组，Bio-Rad法测定蛋白浓度。
为了鉴定H-Ras P21蛋白的法尼基化，参照Laemmliin方法进行SDS~AGE电泳。在上述反应物中加入5SDS样品缓冲液终止反应，上样并经12.5％SDS/PAGE胶分析，电泳后用Enlightning处理，并将胶固定，加用增感屏放置-7曝光14-30天，便清楚可见法尼基化H-ras蛋白的位置。
用以上方法对本发明的部分化合物进行活性测定其结果如下：
  化合物     对法尼基蛋白转移酶抑制率(％)
    10-5     10-6     10-7     10-8
实施例1     0     50.8
实施例14     48.6     55.0
实施例17     34.3     62.9
实施例18     0     61.6
实施例19     37.5     52.0
实施例20     55.7     58.4     56.8

Claims (34)

1、如通式I的含咪唑丙酰胺基的苯并二氮杂化合物
R1选自Nα-乙酰组胺酰胺基、Nα-苯甲酰组胺酰胺基、3-(4-咪唑基)丙酰胺基或3-(4-咪唑基)丙烯酰胺基；
R2选自氢、卤素；
R3选自ω-C1-C2烷氧羰基C1-C3烷基或ω-羧基C1-C3烷基；
R4选自氢、C1-C2烷氧基；
R5选自氢、卤素。
2、如权利要求1所述的化合物，其特征在于所述的卤素是氟、氯和溴。
3、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于所述的R3中所述的烷基是甲基、乙基或异丙基。
4、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于所述的R4中所述的烷氧基是甲氧基或乙氧基。
5、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于所述的R3的羧基或烷氧羰基经1、2或3个碳原子的烷基链与所述的化合物上的氮相连。
6、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
7、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
8、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
9、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
10、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
11、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-乙酰组胺酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
12、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
13、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
14、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
15、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
16、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
17、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(Nα-苯甲酰组胺酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
18、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(3-(4-咪唑基)丙烯酰胺基)-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
19、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(3-(4-咪唑基)丙烯酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
20、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-乙氧羰基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
21、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-羧基亚甲基-5-苯基苯并二氮杂。
22、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(2-甲氧羰基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
23、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(2-羧基乙基)-5-苯基苯并二氮杂。
24、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(3-乙氧羰基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
25、如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于该化合物是7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(3-羧基丙基)-5-苯基苯并二氮杂。
26、一种制备如权利要求1所述的含咪唑丙酰胺基的5-苯基苯并二氮杂化合物的方法，其特征是包括如下步骤：
(1)溶剂选自二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氧六环、乙二醇独甲醚、乙氰或甲醇，在0-80℃条件下，在碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化钠或氢化钠的作用下，将溴代脂肪酸酯与7-硝基-5-苯基苯并二氮杂反应，得到7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(2)将得到的7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂在还原剂作用下，还原为7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(3)L-组胺酸在乙酰氯或乙酸酐或苯甲酰氯作用下生成Nα-L-乙酰组胺酸或Nα-L-苯甲酰组胺酸；
(4)Nα-L-乙酰组胺酸或Nα-L-苯甲酰组胺酸或3-(4-咪唑基)丙烯酸和2，4-二硝基氟苯反应得到Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-乙酰基组胺酸或Nim-2，4-二硝基苯基-Nα-苯甲酰基组胺酸或3-(4-(Nim-2，4-二硝基苯基咪唑基))丙烯酸；
(5)Nim-2，4-二硝基苯基-乙酰基组胺酸、Nim-2，4-二硝基苯基-苯甲酰基组胺酸或3-(4-(Nim-2，4-二硝基苯基咪唑基))丙烯酸在二环己基碳二亚胺和叔丁醇存在下与7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂反应，合成2，4-二硝基苯基保护的取代4-咪唑丙酰胺基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(6)7-2，4-二硝基苯基保护的取代咪唑丙酰胺基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂与巯基乙醇反应得到7-取代咪唑丙酰胺基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂化合物，再用氢氧化锂水解，再酸化即得到7-取代咪唑丙酰胺基-1-(ω-羧烷基)-5-苯基苯并二氮杂化合物。
27、如权利要求26所述的制备化合物的方法，其特征是用选自氢、6-，8-或9-卤素、1-甲基、乙基、丙基、异丙基、苄基、3-甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基或苄氧基基团取代的7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂，在还原剂的作用下，还原为7-氨基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂。
28、如权利要求26或27所述的制备化合物的方法，其特征是得到的7-氨基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂在二环己基碳二亚胺和叔丁醇存在下，与Nim-2，4-二硝基苯基-乙酰基组胺酸、Nim-2，4-二硝基苯基-苯甲酰基组胺酸或3-(4-(Nim-2，4-二硝基苯基咪唑基))丙烯酸反应，合成7-保护的取代咪唑丙酰胺基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂；再用巯基乙醇脱保护和用氢氧化锂水解后，得到7-取代咪唑丙酰胺基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂。
29、-种制备如权利要求1所述的含咪唑丙酰胺基的5-苯基苯并二氮杂化合物的方法，其特征是包括如下步骤：
(1)溶剂选自二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氧六环、乙二醇独甲醚、乙氰或甲醇，在0-80℃条件下，在碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化钠或氢化钠的作用下，将溴代脂肪酸酯与7-硝基-5-苯基苯并二氮杂反应，得到7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(2)将得到的7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂在还原剂作用下原为7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂；
(3)3-(4-咪唑基)丙烯酸在Pd/C-H2作用下还原为3-(4-咪唑基)丙酸；
(4)3-(4-咪唑基)丙酸与氯化亚砜反应得到咪唑-丙酰氯，此酰氯再与7-氨基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂反应，生成7-(3-(4-咪唑基)丙酰胺基)-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂，再用氢氧化锂水解，酸化得到本发明的目的物。
30、如权利要求29所述的制备化合物的方法，其特征是用选自氢、6-，8-或9-卤素、1-甲基、乙基、丙基、异丙基、苄基、3-甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基或苄氧基基团取代的7-硝基-1-(ω-烷氧羰基烷基)-5-苯基苯并二氮杂，在还原剂的作用下，还原为7-氨基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂。
31、如权利要求29或30所述的制备化合物的方法，其特征是将得到的7-氨基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂在二环己基碳二亚胺和叔丁醇存在下，与Nim-2，4-二硝基苯基-乙酰基组胺酸、Nim-2，4-二硝基苯基-苯甲酰基组胺酸或3-(4-(Nim-2，4-二硝基苯基咪唑基))丙烯酸反应，合成7-保护的取代咪唑丙酰胺基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂；再用巯基乙醇脱保护和用氢氧化锂水解后，得到7-取代咪唑丙酰胺基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂。
32、如权利要求29中所述的制备化合物的方法，其特征是得到的7-氨基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂，与3-(4-咪唑基)丙酰氯反应，生成7-咪唑丙酰胺基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂；再用氢氧化锂水解，酸化得到7-取代咪唑丙酰胺基-所述取代的5-苯基苯并二氮杂。
33、一种如权利要求1所述的化合物在制备抑制法尼基蛋白转移酶抑制剂中的应用。
34、如权利要求33所述的应用，其特征在于用于治疗癌症。
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