CN117949575A - 一种噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，包括下述操作步骤：分别配置稀释剂、系统适用性溶液、对照溶液、噻托溴铵吸入粉雾剂供试品溶液进样，注入色谱仪，以流动相A和流动相B为洗脱液进行梯度洗脱。本发明的有益效果为：该检测方法能够在提高检测效率和检测灵敏度的同时减少检测试剂的用量。
Description
技术领域
本发明属于分析化学技术领域，涉及一种噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，该方法用于同时检测噻托溴铵吸入粉雾剂中的多种杂质。
背景技术
噻托溴铵粉吸入粉雾剂收载于印度药典(IP)2022版和进口药品注册标准JX20170278，其中印度药典中未规定有关物质的检查方法。进口药品注册标准方法中有关物质检测分为3个方法：
方法1为检测杂质B11H27SE(杂质A)与B11H28XX(杂质F)；
方法2为检测BA338BR(杂质G)与SCH871BR(杂质H)；
方法3为检测DTG-LM-PEG酯(PEG相关杂质1)与未知杂质A(PEG相关杂质2)。
但是，进口注册标准JX20170278的有关物质方法1和方法3存在基线不平、峰形较差、杂质峰归属及计算不准确等问题。
综上所述，继续对现有技术中的检测方法进行开发和优化。
本发明针对上述问题，提供了一种噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，该方法不仅能够准确、有效的检测该产品中各有关物质的含量，而且将方法1和方法3进行了合并，能够同时检测杂质A、杂质F、PEG相关杂质、以及其他未知杂质，方法更加简便快捷，各杂质检测结果也更加准确，有效的提高了检验效率。
发明内容
本发明为解决现有技术存在的问题，提供一种噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，该检测方法能够在提高检测效率和检测灵敏度的同时减少检测试剂的用量。
本发明的目的可通过以下技术方案来实现：
一种噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，
包括下述操作步骤：
分别配置稀释剂、系统适用性溶液、对照溶液、噻托溴铵吸入粉雾剂供试品溶液进样，注入色谱仪，以流动相A和流动相B为洗脱液进行梯度洗脱。
作为本方案的进一步改进，所述稀释剂为乙二胺四醋酸二钠溶液。
作为本方案的进一步改进，稀释剂的制备方法为：
取乙二胺四醋酸二钠250mg，加水950ml，超声使溶解，加入10ml的1mol/L盐酸溶液，用水稀释至1000ml，摇匀即制得所需稀释剂。
作为本方案的进一步改进，对照液为噻托溴铵对照品贮备液,对照液通过稀释剂和噻托溴铵对照品制备，对照液的浓度为2.25μg/ml。
作为本方案的进一步改进，所述系统适用性溶液为含噻托溴铵为10μg/ml、杂质F为0.025μg/ml。
作为本方案的进一步改进，
流动相A为磷酸盐缓冲液和乙腈；
流动相B为磷酸盐缓冲液和乙腈。
作为本方案的进一步改进，磷酸盐缓冲液通过下述步骤制得：
取磷酸二氢铵1.15g，加水1000ml使溶解，用16％磷酸溶液调节pH值至2.4，抽滤，即得到所需磷酸盐缓冲液。
作为本方案的进一步改进，
流动相A为800ml磷酸盐缓冲液和200ml乙腈；
流动相B为200ml磷酸盐缓冲液和800ml乙腈。
作为本方案的进一步改进，梯度洗脱采用的梯度程序包括：
作为本方案的进一步改进，液相色谱仪中，柱温为20℃、流速为0.8ml/min、进样体积为200μl、检测波长为240nm、320nm。
与现有技术相比，本发明具有下述有益效果：
1)本发明合并了进口注册标准中有关物质方法1(检测杂质A、杂质F和其他未知杂质)、有关物质方法3(检测PEG相关杂质)的检测方法，该方法操作简便，专属性高(各已知杂质、潜在降解杂质都能有效分离，且与空心胶囊杂质及辅料出峰不干扰检测)，抗干扰性强(基线平缓不影响杂质定量)，线性良好，精密度和耐用性好，同时提高了检测灵敏度，缩短了检测时间，提高检测效率。
2)可接受标准
本发明的技术方案的可接受标准：相对于噻托溴铵一水合物标示量：
杂质A:≤2.5％；杂质F:≤0.2％；PEG相关杂质1：≤1.0％；PEG相关杂质2：≤1.0％；其它单个未知杂质：≤0.5％。
进口注册标准有关物质方法1中：相对于噻托溴铵一水合物标示量：
B11H27SE:≤2.5％；B11H28XX:≤0.2％；其它单个未知杂质：≤0.5％。
进口注册标准有关物质方法3中：DTG-LM-PEG酯：≤1.0％；未知杂质A：≤1.0％。
附图说明
图1为进口注册标准方法1对照品溶液出峰情况(240nm)；
图2为进口注册标准方法1对照品溶液出峰情况(320nm)；
图3为进口注册标准方法1供试品溶液出峰情况(240nm)；
图4为进口注册标准方法1供试品溶液出峰情况(320nm)；
图5为进口注册标准方法3DTG-LM-PEG酯和未知杂质A检测对照品溶液图谱(S3)；
图6为进口注册标准方法3DTG-LM-PEG酯和未知杂质A供试品溶液图谱；
图7为进口注册标准方法3DTG-LM-PEG酯和未知杂质A加标供试品溶液图谱；
图8为本发明系统适用性溶液出峰情况(240nm)；
图9为本发明系统适用性溶液出峰情况(320nm)；
图10为本发明对照溶液图谱；
图11为本发明供试品溶液图谱(240nm)；
图12为本发明供试品溶液图谱(320nm)；
图13为本发明实施例2中杂质加样溶液(240nm波长)色谱图；
图14为本发明实施例2中杂质加样溶液(320nm波长)色谱图；
图15为本发明实施例6检测限浓度典型图谱(240nm波长)；
图16为本发明实施例6检测限浓度典型图谱(320nm波长)；
图17为本发明实施例6噻托溴铵定量限浓度典型图谱(240nm波长)；
图18为本发明实施例6杂质定量限浓度典型图谱(240nm波长)；
图19为本发明实施例6杂质定量限浓度典型图谱(320nm波长)；
具体实施方式
下面结合实施例及附图1～19，对本发明的技术方案作进一步的阐述。
产品：噻托溴铵粉吸入粉雾剂生产厂家：浙江仙琚制药股份有限公司
本发明噻托溴铵粉吸入粉雾剂单位剂量处方组成
一种噻托溴铵吸入粉雾剂中有关物质的检测方法，包括以下步骤：
有关物质1：
S1流动相的制备
S11磷酸盐缓冲液的制备
取磷酸二氢铵1.15g，加水1000ml使溶解，用16％磷酸溶液调节pH值至2.4，抽滤，即得所需磷酸盐缓冲液；
S12流动相A、B的制备
量取800ml磷酸盐缓冲液和200ml乙腈混匀，超声脱气，即得流动相A；量取200ml磷酸盐缓冲液和800ml乙腈混匀，超声脱气，即得流动相B。
S2噻托溴铵对照品贮备液
S21稀释剂的制备
取乙二胺四醋酸二钠250mg，加水950ml，超声使溶解，加入10ml的1mol/L盐酸溶液，用水稀释至1000ml，摇匀，即得所需稀释剂；
S22噻托溴铵对照品贮备液
精密称取噻托溴铵对照品适量(约相当于噻托溴铵一水合物22.5mg)，置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀(225μg/ml)，再精密移取1ml置100ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即制得所需噻托溴铵对照品贮备液(2.25μg/ml)
S23制备所需浓度的对照溶液
取噻托溴铵对照品贮备液1ml，置25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即制得噻托溴铵对照品贮备液(0.09μg/ml)
S3杂质F对照品贮备液
精密称取杂质F(B11H28XX)对照品约5.0mg，置100ml量瓶中，用乙腈：水(1:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密移取1ml置100ml量瓶中，用乙腈:水(1:1)稀释至刻度，摇匀，即得杂质F对照品贮备液(0.5μg/ml)。
S4系统适用性溶液
称取噻托溴铵对照品约5mg和PEG4000约100mg，置同一合适的玻璃容器中，加入20μl六甘醇和25ml二甲基亚砜，封盖，在80℃下放置1h后取出，冷却至室温，摇匀；
取其中的1ml置于20ml容量瓶中，加入1ml杂质F对照品贮备液，用所述稀释剂稀释至刻度，摇匀，制得系统适用性溶液(含噻托溴铵为10μg/ml、杂质F为0.025μg/ml)；
S5噻托溴铵吸入粉雾剂供试品溶液
取本品10粒，将内容物转移至25ml量瓶中，用乙腈:水(1:1)10ml分次洗涤胶囊壳内壁，洗液并入量瓶中，振摇，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得噻托溴铵吸入粉雾剂供试品溶液。
S6以流动相A和流动相B为洗脱液进行梯度洗脱
取稀释剂、系统适用性溶液、对照溶液、供试品溶液，注入液相色谱仪，
色谱条件如表1所示：
表1洗脱时色谱柱条件
系统适用性：
系统适用性溶液中，在240nm波长下，噻托铵与杂质A峰之间的分离度应不小于10；PEG相关杂质1与PEG相关杂质2之间的分离度应不小于5；6针对照溶液中，噻托铵峰面积的RSD应不大于5.0％，拖尾因子不大于2.0；对照品溶液(回标)中，与之前的进样的对照溶液的噻托铵峰面积计算RSD，要求RSD均不大于5.0％。
如图1～4所示，为进口注册标准有关物质方法1的色谱图；
更具体的，
图1为进口注册标准方法1对照品溶液出峰情况(240nm)，图中保留时间5.1min为杂质A峰、10.7min为杂质F峰；
图2为进口注册标准方法1对照品溶液出峰情况(320nm)；
图3进口注册标准方法1供试品溶液出峰情况(240nm)；
图4进口注册标准方法1供试品溶液出峰情况(320nm)
从图1～图4中可以看出，进口注册标准方法1得到的对照品溶液和供试品溶液色谱图中，噻托铵主峰(保留时间从2min～4min)的峰形较宽，峰形较差，与杂质A峰比较靠近，且杂质A峰也有拖尾现象。产生这些拖尾现象的主要原因为稀释剂。
另依据方法1在其他未知杂质的结果计算方法，色谱图中杂质出峰与杂质A峰相邻近的，以杂质A为对照计算；与杂质F峰相邻近的，以杂质F为对照计算。在实际的计算过程中，若杂质峰出现在杂质A峰与杂质F峰中间的位置，判断并计算该杂质峰的结果时将出现较大偏差。
图5～7为进口注册标准有关物质方法3色谱图；
从图5～图7中可以看出，进口注册标准DTG-LM-PEG酯和未知杂质A的检测图谱中基线不平稳，在空白溶液图谱中出峰(RT＝9.4min),且干扰供试品溶液的出峰。
由于该方法使用大体积进样在线萃取，易将供试品中的干扰物质收集后随流动相进入到色谱柱中，引起色谱柱堵塞、柱压升高、压力波动、基线异常等情况，并减少色谱柱柱效。该方法采用噻托溴铵线性溶液进样后得到线性曲线对供试品中的PEG酯和未知杂质A进行计算，而PEG酯及未知杂质A通过保留时间的方式进行判断，存在一定的不确定性。
图8～12为本发明有关物质方法1的色谱图。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种噻托溴铵吸入粉雾剂中有关物质的检测方法，该有关物质方法1对色谱条件进一步开发和优化，并将原进口注册标准中的有关物质1和有关物质3的检测方法进行合并，在流动相组成、梯度、溶液配制、定量方法、系统适用性要求等多个方面进行了改进：
1)流动相pH和梯度
将流动相中磷酸盐缓冲液的的pH值从2.8调节为2.4，并修改梯度，使基线更加平稳，各杂质峰峰形及分离更好。
2)进样体积
将原进口注册标准中的有关物质(DTG-LM-PEG酯和未知杂质A)的检测方法整合到一个方法中，为增加方法对于PEG酯的检测灵敏度，将进样体积从100μl修改为200μl。
3)增加系统适用性溶液配制及考察
系统适用性溶液图谱中出现噻托铵峰、杂质A峰、PEG相关杂质1峰、PEG相关杂质2峰、杂质F峰，更有利于系统色谱性能的评价，以及供试品中各杂质的判断和计算。
4)溶液配制及计算
通过对各杂质的线性和范围的考察，计算各杂质相对于噻托溴铵的相对响应因子，使用加校正因子的主成分自身对照法计算供试品中各杂质的含量更精确，更简单便捷。
如图8～12所示，其中图8中统适用性溶液出峰情况(240nm)，图中各组分出峰顺序依次为噻托铵、杂质A、PEG相关杂质1、PEG相关杂质2、杂质F，且本发明方法的基线平稳，杂质分离得更好，专属性更高。
下述实施例中，若无特殊说明，按照上述方法进行样品溶液配制和检测
实施例1系统适用性
噻托铵与杂质A峰之间的分离度大于10；
PEG相关杂质1与PEG相关杂质2之间的分离度大于5；6针对照溶液中，噻托铵峰面积的RSD小于5.0％，拖尾因子小于2.0。系统适用性结果均符合要求。
实施例2方法专属性(已知杂质加样研究)
如表2、图13、14所示：
空白溶液和空白辅助溶液在噻托溴铵主峰、杂质A、杂质B、PEG相关杂质1、PEG相关杂质2、杂质F处无干扰，如有干扰峰，干扰峰面积不大于定量限溶液面积；
杂质加样溶液中，杂质A、杂质B、PEG酯、杂质F与噻托铵主峰的分离度不小于1.5；杂质A、杂质B、PEG酯、杂质F分别与相邻峰分离度不小于1.5；杂质A、杂质B、PEG酯、杂质F色谱峰纯度显示光谱纯。
表2已知杂质加样研究测试表
实施例3方法专属性(破坏试验)
未降解空白辅料溶液：精密称定空白辅料550mg，置25ml量瓶中，加0.01mol/L盐酸至刻度，摇匀。精密移取2.0ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
未降解混合粉溶液：精密称定混合粉550mg，置25ml量瓶中，加0.01mol/L盐酸至刻度，摇匀。精密移取2.0ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
未降解供试品溶液：取本品10粒，将内容物转移至25ml量瓶中，用乙腈:水(1:1)10ml分次洗涤胶囊壳，洗涤液并入量瓶中，振摇，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
酸降解空白辅料溶液：精密称定空白辅料550mg，置25ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，放置4小时，加入1mol/L氢氧化钠溶液5ml进行中和，加0.01mol/L盐酸至刻度，摇匀。精密移取2.0ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
酸降解供试品溶液：精密称定混合粉550mg，置25ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，放置4小时，加入1mol/L氢氧化钠溶液5ml进行中和，加0.01mol/L盐酸至刻度，摇匀。精密移取2.0ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
碱降解空白辅料溶液：精密称定空白辅料550mg，置25ml量瓶中，加0.0025mol/L氢氧化钠溶液1ml，摇匀，放置5min，加0.01mol/L盐酸至刻度，摇匀。精密移取2.0ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
碱降解供试品溶液：精密称定混合粉550mg，置25ml量瓶中，加0.0025mol/L氢氧化钠溶液1ml，摇匀，放置5min，加0.01mol/L盐酸至刻度，摇匀。精密移取2.0ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
氧化降解空白辅料溶液：精密称定空白辅料550mg，置25ml量瓶中，加5％过氧化氢溶液5ml摇匀，放置4h，加0.01mol/L盐酸至刻度，摇匀。精密移取2.0ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
氧化降解供试品溶液：精密称定混合粉550mg，置25ml量瓶中，加5％过氧化氢溶液5ml摇匀，放置4h，加0.01mol/L盐酸至刻度，摇匀。精密移取2.0ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
光照降解空白辅料溶液：取空白辅料适量，置于透明玻璃瓶中进行光照，光源总照度不低于1.2×106Lux·hr，近紫外能量不低于200w·hr/m2，光照后进行充分混匀，精密称定空白辅料55mg，置25ml量瓶中，加稀释剂至刻度。
光照降解供试品溶液①：取混合粉适量，置于透明玻璃瓶中进行光照，光源总照度不低于1.2×106Lux·hr，近紫外能量不低于200w·hr/m2，光照后进行充分混匀，精密称定混合粉55mg，置25ml量瓶中，加稀释剂至刻度。
光照降解供试品溶液②：取噻托溴铵吸入粉雾剂胶囊适量，同光照降解供试品溶液①放置，光照后随机取其中的10粒，将内容物置25ml量瓶中，用乙腈:水(1:1)10ml分次洗涤胶囊壳，洗涤液并入量瓶中，振摇，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
高温降解空白辅料溶液：称取空白辅料5.5mg，置于空心胶囊壳(与供试品同批次空心胶囊壳)中，共填装10粒。将胶囊置于空白透明玻璃瓶中，60℃高温条件下放置5天，将内容物置25ml量瓶中，用乙腈:水(1:1)10ml分次洗涤胶囊壳，洗涤液并入量瓶中，振摇，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
高温降解供试品溶液：取噻托溴铵吸入粉雾剂胶囊适量，置于透明玻璃瓶中，60℃高温条件下放置5天，随机取本品10粒，将内容物转移至25ml量瓶中，用乙腈:水(1:1)10ml分次洗涤胶囊壳，洗涤液并入量瓶中，振摇，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
分别取上述溶液进样，按测定法测定，记录图谱。各条件的供试品降解溶液中产生的新降解杂质峰对噻托铵主峰和杂质A、PEG相关杂质1、PEG相关杂质2和杂质F的检测没有干扰，即噻托铵与降解杂质的分离度不小于1.5，已知杂质与其它降解杂质的分离度不小于1.5；各条件的供试品降解溶液主峰应显示光谱纯。
各条件的供试品降解溶液的总杂质和含量之和(质量平衡)与未降解的供试品溶液相比，应在90％～110％之间。
如果降解溶液中产生杂质A、PEG相关杂质1、PEG相关杂质2和杂质F，且色谱峰响应足够，降解产生的杂质A、杂质B、PEG相关杂质1、PEG相关杂质2和杂质F峰纯度应显示光谱纯。
表3杂质降解情况及分离度
表4各降解条件质量平衡结果
表5实施例3中各降解条件
结果显示，各条件的供试品降解溶液中：
1)各条件的降解供试品溶液，均未检测到其它新降解的未知杂质峰；
2)各条件的供试品降解溶液主峰、各降解杂质均显示光谱纯；
3)各降解条件下的质量平衡均符合要求
相比于进口注册标准中的有关物质1和有关物质3的方法，本发明方法具更好的杂质检出能力，以及更高的检测效率。
实施例4噻托溴铵的线性及各杂质的线性
噻托溴铵线性溶液：取噻托溴铵对照品贮备液(2.25μg/ml)，按照下表精密移取一定量，用稀释剂进行稀释，摇匀，得到噻托溴铵线性溶液L1～L6的6个浓度水平溶液。
表6实施例4中噻托溴铵线性溶液的配置
| 噻托溴铵线性溶液 | 相对于供试品浓度水平(％) | 溶液浓度(μg/ml) | 移取体积(ml) | 容量瓶(ml) |
| 线性溶液L1 | 0.05 | 0.0043 | 1 | 500 |
| 线性溶液L2 | 0.19 | 0.0172 | 2 | 250 |
| 线性溶液L3 | 0.48 | 0.0429 | 1 | 50 |
| 线性溶液L4 | 1.0 | 0.0858 | 1 | 25 |
| 线性溶液L5 | 1.9 | 0.1717 | 2 | 25 |
| 线性溶液L6 | 3.8 | 0.3433 | 4 | 25 |
杂质线性储备液：分别精密移取杂质A、杂质B、PEG酯杂质对照品贮备液(100μg/ml)各15ml和杂质F对照品贮备液(50μg/ml)2.5ml，置于250ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度。(杂质A、杂质B、PEG酯杂质浓度约6μg/ml，杂质F浓度约0.5μg/ml)
表7实施例4中杂质线性溶液的浓度及浓度水平对照表
线性溶液L1～L6的6个浓度水平溶液(杂质F为除L1外的5个浓度水平)分别以溶液浓度为横坐标，以响应峰面积为纵坐标，绘制线性回归图。
表8实施例4中以溶液浓度为横坐标，以响应峰面积为纵坐标，绘制线性回归图
表9实施例4通过斜率计算各杂质相对于噻托溴铵的相对校正因子
结果显示，各已知杂质及噻托溴铵在拟定的浓度范围内的线性良好，并通过斜率计算得到各杂质相对于噻托溴铵的相对校正因子，相对于进口注册标准中的方法，本发明的方法更加便捷且可靠，能准确检测样品中的杂质含量。
实施例5准确度
该方法的准确度是通过在供试品中加入已知杂质A、杂质B、PEG酯和杂质F，加入的杂质A、杂质B、PEG酯的浓度相当于供试品浓度水平的0.05％，2.5％和5.0％，加入的杂质F的浓度相当于供试品浓度水平的0.25％，2.5％和5.0％；各浓度水平溶液分别配制3份，按供试品溶液方法处理后，通过HPLC分析，分别计算杂质A、杂质B、PEG酯和杂质F的回收率。
LOQ浓度水平下加样的回收率应在70％～130％之间，RSD应不超过30.0％。100％和200％三个浓度水平下加样的回收率应在90％～110％之间，RSD应不超过10.0％。
表格10实施例5中各已知杂质的在规定的范围内的回收率
结果显示，各已知杂质的在规定的范围内的回收率良好，说明本方法能够准确的检测样品中的杂质含量。
实施例6检测限和定量限
取噻托溴铵及各杂质的线性溶液适量，分别定量稀释。
如表11、12及图15～19所示：
不同浓度的检测限溶液重复进样3针，各杂质的信噪比不小于3；
定量限溶液重复进样6针，信噪比不小于10，重复6针的峰面积RSD不大于10％。
表11实施例6不同浓度的检测限溶液各杂质的信噪比
表12实施例6不同浓度的定量限溶液各杂质的信噪比
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实施例7精密度
重复性：6份100％杂质加标溶液中，杂质A、杂质B、杂质F、PEG酯杂质含量的RSD均应不大于10.0％。
表13实施例7100％杂质加标溶液中各杂质含量的RSD
中间精密度：由另一名分析员(与重复性不同的分析员)，采用与重复性相同的杂质混合溶液和相同批号的噻托溴铵吸入粉雾剂，平行配制6份100％杂质加标溶液。6份100％杂质加标溶液中各杂质含量的RSD应不大于10.0％；
合并重复性项目的6份100％杂质加标溶液数据，共12份的各杂质含量的RSD，分别应不大于10.0％。
表14实施例7中合并重复性项目的6份100％杂质加标溶液数据，共12份的各杂质含量的RSD
实施例8耐用性
在方法规定的色谱条件上，修改流速为0.7ml/min和0.9ml/min、修改柱温为18℃和22℃、修改磷酸盐缓冲液的pH为2.2和2.6、修改仪器和色谱柱(见中间精密度)。
每次修改一个条件，保持其他参数不动。每个变化的条件，均须单独进行系统适用性测试，满足系统适用性要求后，供试品溶液和100％杂质加标溶液各进1针。
100％杂质加标溶液在各耐用性实验条件下，与正常值/重复性平均值比较，各杂质含量相对偏差不大于15.0％。
表15实施例8中100％杂质加标溶液在各耐用性实验条件下，与正常值/重复性平均值比较，各杂质含量相对偏差
实施例9溶液稳定性
分别配制一份对照品溶液和供试品溶液，分别于2～8℃和室温储存。不同时间点的供试品溶液与0h相比，单个杂质含量的变化绝对差值不大于0.05％，说明溶液稳定，报告稳定时间；
不同时间点的对照品溶液与0h相比，噻托铵的回收率均在95％～105％，说明溶液稳定，报告稳定时间。
表16实施例9中不同时间点的对照品溶液与0h相比，噻托铵的回收率
表17不同时间点的供试品溶液与0h相比，单个杂质含量的变化绝对差值
对比现有技术中，要求运行时间为主峰时间的3.5倍，主峰出峰时间为24分钟，现有技术的运行时间至少为84分钟；样品进样浓度为500μg/ml，喷雾剂样品本身浓度为0.05g/g，难以配制高浓度样品。
为了解决现有技术中的上述问题，本发明提供一种快速高效的检测方法：具体为能够快速有效检测糠酸莫米松原料药或糠酸莫米松鼻喷雾剂制剂中的有关物质，且糠酸莫米松峰与杂质峰之间的分离度不低于2.0，杂质间的分离度符合要求，该方法专属性好、灵敏度高、控制的杂质全面，为糠酸莫米松原料药及相关制剂的质量控制提供了新方法，并能够为糠酸莫米松鼻喷雾剂的标准制定提供依据。
本文中所描述的仅为本发明的优选实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此。本发明所属领域的技术人员对所描述的具体实施例进行的修改或补充或采用类似的方式替换，均应涵盖于本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，
包括下述操作步骤：
分别配置稀释剂、系统适用性溶液、对照溶液、噻托溴铵吸入粉雾剂供试品溶液进样，注入色谱仪，以流动相A和流动相B为洗脱液进行梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，所述稀释剂为乙二胺四醋酸二钠溶液。
3.根据权利要求2所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，稀释剂的制备方法为：
取乙二胺四醋酸二钠250mg，加水950ml，超声使溶解，加入10ml的1mol/L盐酸溶液，用水稀释至1000ml，摇匀即制得所需稀释剂。
4.根据权利要求1所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，对照液为噻托溴铵对照品贮备液,对照液通过稀释剂和噻托溴铵对照品制备，对照液的浓度为2.25μg/ml。
5.根据权利要求1所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，所述系统适用性溶液为含噻托溴铵为10μg/ml、杂质F为0.025μg/ml。
6.根据权利要求1所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，流动相A为磷酸盐缓冲液和乙腈；
流动相B为磷酸盐缓冲液和乙腈。
7.根据权利要求6所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，磷酸盐缓冲液通过下述步骤制得：
取磷酸二氢铵1.15g，加水1000ml使溶解，用16％磷酸溶液调节pH值至2.4，抽滤，即得到所需磷酸盐缓冲液。
8.根据权利要求7所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，
流动相A为800ml磷酸盐缓冲液和200ml乙腈；
流动相B为200ml磷酸盐缓冲液和800ml乙腈。
9.根据权利要求1所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，梯度洗脱采用的梯度程序包括：
10.根据权利要求1所述的噻托溴铵吸入粉雾剂有关物质分析方法，其特征在于，液相色谱仪中，柱温为20℃、流速为0.8ml/min、进样体积为200μl、检测波长为240nm、320nm。
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