CN117925453A - 一种防治当归早薹的贝莱斯芽孢杆菌菌株、微生物菌剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种防治当归早薹的菌株分离、微生物菌剂制备及其应用，本菌株是从当归根际土壤中分离纯化并培养获得的，经微生物16S rDNA测序鉴定为芽孢杆菌属。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，湖北武汉，武汉大学生命科学学院；邮编：430072，保藏日期为2021年6月24日，保藏编号为：CCTCC NO:M 2021767。本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌菌株XG3可促进当归种子萌发，延迟拟南芥开花约2天。田间试验验证，该微生物菌剂可增加当归根重、根直径和支根数，可有效防治当归早薹，可制备成绿色环保、高效、低毒、性价比高的当归早薹防治微生物菌剂，提高当归产量，具有重要的环境保护意义和经济价值，值得推广和应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种贝莱斯芽孢杆菌菌株，具体涉及一种可促进当归种子萌发和植株生长的菌株，该菌株制备的微生物菌剂可用于当归早薹防治和当归产量提高，属于微生物技术领域。
背景技术
当归作为一种低温长日照多年生植物，整个生长发育周期一般为3年，第一年6-7月在山地播种育苗，10-11月收苗进行窖藏，第二年清明节前后移苗种植，10月下旬至11月上旬开始采挖成药当归，部分留种至第三年抽薹开花结籽，用于后续种植。但在实际生产过程中，当归生长易受到各种生态因子的扰动，在第二年营养生长阶段提早抽薹开花，肉质根柴化，油气减少，药效活性成分含量降低，药材品质下降，严重影响当归的产量和日常供应。上世纪80年代对全国范围当归早薹情况进行调研，甘肃岷县正常年早薹率为10％-30％，严重时高达80％，陕西宝鸡一带早薹率约30％，严重时高达90％以上。2020年对甘肃定西、陇南、张掖、甘南藏族自治州四个地区的10个乡镇当归早薹情况进行调研，30个种植区早薹率从11％-86％不等，平均早薹率为51.62％。近40年发展，当归早薹问题仍然存在甚至愈加严重，如何更好的降低当归生产过程的早薹率成为制约当归产业可持续发展的瓶颈问题。
虽然对当归早薹问题已经展开大量的研究，当归早薹情况依旧十分严重，通过控制种苗，加强田间管理等各种措施进行规避，但情况仍然不容乐观。当归早薹形成机制复杂，既有种子、种苗等的内在问题，也包括贮藏、施肥、移栽密度、土壤等外在因素。尽管在种苗选择时可剔除易早薹大苗，但由于当归早薹只有种苗抽薹后才能发现，此时再进行补苗已为时过晚，平均30％左右抽薹率对当归药材的产量和药农的经济收益等存在严重危害，部分药农为了降低早薹对产量和收益的影响，选择增大种植数量进行弥补，但较高的种植密度又容易造成当归早薹。如何更早的发现问题，从而更早的进行干预，降低对当归药材产业的不良影响成为值得思考的问题。随着近些年生物菌肥研究的不断深入，微生物菌剂以其绿色、高效、安全等特点得到广泛认可，进一步开发当归丰富的微生物资源应用于当归早薹的防治，或者代替传统化肥农药在种植过程中应用，减少农残等在当归药材中的积累，将更好的服务于当归的优质高产和绿色种植。
发明内容
发明目的：本发明的目的是提供一种防治当归早薹的贝莱斯芽孢杆菌XG3及其该菌株分离、发酵培养方法和微生物菌剂制备方法。本发明另外一个目的是提供该菌株在当归种子萌发和植物生长过程中的应用及其该菌株的微生物菌剂在防治当归生产栽培过程中早薹中的应用。
技术方案：为实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
本发明提供的防治当归早薹的贝莱斯芽孢杆菌XG3，该菌株是从当归根际土壤中分离纯化并培养获得的，经微生物16S rDNA测序鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus spp.)。该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO:M 2021767，保藏日期为2021年6月24日，分类命名为Bacillus velezensis XG3；该菌株的16S rDNA序列如Sequencelisting所示。
本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株分离、发酵培养方法，包括振荡、接种、分离、培养及保存，具体步骤为：
a)振荡：将当归根部周围土壤剥离，抖落、收集根际表面土壤，5g土壤置于100mL无菌水的三角瓶中，37℃恒温摇床160r/min振荡2h，静置30min，得10-1的土壤原液，再用移液枪吸取1mL上清液加到9mL无菌水中，充分摇匀，即得10-2的土壤稀释液，依次类推，制得10-1-10-6的土壤稀释液；
b)分离：吸取0.1mL10-4、10-5、10-6的土壤稀释液，接入已配制好的LB固体培养基中，每一稀释度设3个重复。将平板倒置，37℃培养并随时观察菌落生长情况，用接种环接种形态不同的细菌于LB固体培养基上，反复纯化，直至得到单一菌落。
c)培养及保存：将平板上纯化完成的细菌挑取至装有LB液体培养基的三角瓶中，37℃恒温摇床160r/min振荡24h，与50％甘油按体积比1：1装入已灭菌冻存管在，混合均匀，封口膜封口，于-80℃超低温冰箱中保存。
一种防治当归早薹的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：将Bacillusvelezensis XG3菌种接种于LB液体培养基中，恒温摇床活化培养，然后取活化菌种至装有LB液体培养基的三角瓶中进行发酵，摇床培养，发酵液离心后收集菌体沉淀，加入蔗糖、海藻糖、谷氨酸钠、葡萄糖制成的复合保护剂，真空冷冻干燥后得到微生物菌剂冻干粉。
作为优选方案，本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株微生物菌剂制备方法，包括以下步骤：将Bacillus velezensis XG3菌种接种于LB液体培养基中，于37℃恒温摇床140r/min活化培养，24h后以1％(v/v)比例取过夜活化的菌株于新的LB液体培养基中，140r/min培养24h后，测定其OD值，发酵液4000rpm，离心5min，弃去上清，收集菌体沉淀。
将菌体沉淀用复合保护剂溶液溶解得到菌液(复合保护剂溶液由葡萄糖15mg/mL、蔗糖5.37mg/mL、海藻糖1.26mg/mL和谷氨酸钠1.87mg/mL组成)，将样品放入-80℃超低温冰箱中预冻，结束后迅速转入真空冷冻干燥机中，-40℃，10Pa干燥，最后将冻干物碾碎，即真空冷冻干燥得到冻干粉菌剂。
本发明分离得到的贝莱斯芽孢杆菌XG3可用于促进当归种子萌发和植物生长，按以上发酵方法获得发酵液，稀释为不同OD浓度的菌液，与当归种子、拟南芥进行共培养。
本发明制备得到的贝莱斯芽孢杆菌XG3微生物菌剂在当归生产栽培过程中防治早薹的应用，按上述制备方法获得的微生物菌剂，加水溶解为不同剂量溶液后，与当归植株进行共培养。
有益效果：与现有研究相比，本发明具有以下优点：
本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株可促进当归种子萌发，延迟拟南芥开花时间，制备的微生物菌剂可提高当归产量和防治当归早薹，后续可用于研制成本低、无污染、增产稳定、可有效防治当归早薹的多效复合生物菌肥，进而应用于当归绿色健康种植产业，有利于当归产业绿色可持续发展。
附图说明
图1为贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株的菌落正面图；
图2为贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株的菌落背面图；
图3为贝莱斯芽孢杆菌XG3对拟南芥开花影响；
图4为贝莱斯芽孢杆菌XG3微生物菌剂制备保护剂筛选实验；
图5为贝莱斯芽孢杆菌XG3微生物菌剂保护剂中心组合设计试验结果；
图6为贝莱斯芽孢杆菌XG3微生物菌剂；
图7为贝莱斯芽孢杆菌XG3微生物菌剂对当归生长影响结果。
具体实施方案
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的发酵培养工艺及功能评价仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
以下实施例所用到的化学试剂均可从常规市售获得。
实施例1
一株新的贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株，它是通过以下方法分离得到：
(1)振荡：将当归根部周围土壤剥离，抖落收集根际表面土壤，将5g土壤置于100mL无菌水的三角瓶中，37℃恒温摇床140r/min振荡2h，静置30min，取得土壤原液(10-1)，再用移液枪吸取1mL上清液加到9mL无菌水中，充分摇匀，即得土壤稀释液(10-2)，依次类推，制得10-1-10-6土壤稀释液。
(2)分离：吸取0.1mL 10-4、10-5、10-6的土壤稀释液，接入已配制好的LB固体培养基(10g/L蛋白胨、5g/L酵母提取物、10g/LNaCl组成)中，每一稀释度设3个重复。将平板倒置，30℃培养并随时观察菌落生长情况，用接种环接种形态不同的细菌于LB固体培养基上，反复纯化，直至得到单一菌落。
(3)培养及保存：将平板上纯化完成的细菌挑取至装有LB液体培养基的三角瓶中，37℃恒温摇床140r/min振荡24h，与50％甘油1：1装入已灭菌冻存管在，混合均匀，封口膜封口，于-80℃超低温冰箱中保存。
实施例2
本发明分离得到的新的贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株，它是通过以下方法进行分子鉴定：
将贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株按照实施例1方法发酵培养，菌液送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行16r DNA测序。上游引物27F(5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)，下游引物1492R(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)，16Sr DNA序列在核糖体数据库(http:// rdp.cme.msu.edu/index.jsp)上进行比对，经Blast序列比对分析，如表1，XG3菌株与贝莱斯芽孢杆菌同源性为100.0％，该菌株被鉴定为Bacillus(芽孢杆菌属)，推测为Bacillusvelezensis(贝莱斯芽胞杆菌)。
该菌的序列为：
GGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGT。
表1XG3菌株序列比对结果表
实施例3
贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株对当归种子萌发影响，它是通过以下方法进行试验：
优选籽粒饱满且品质均匀的当归种子600粒，每150粒装于1个培养瓶中，标号1-4依次用75％乙醇消毒1min，升汞消毒9min，无菌水漂洗5次，倒去无菌水。按照实施例2中发酵培养方法得到贝莱斯芽孢杆菌XG3菌液，稀释并进行OD600测定，将已稀释的50mL OD600分别为0.05、0.5、1的XG3菌液倒入1-3号培养瓶，将50mLLB液体培养基倒入4号培养瓶，浸泡24h。之后将种子转移至装有2层无菌滤纸的培养皿中，每个培养皿整齐摆放30粒种子，每个样品重复5个处理，倒入约5mL无菌水使种子和滤纸充分饱和，用封口膜密封培养皿，以防污染。将培养皿和种子一起称重并记录。然后将以上培养皿放置于光照培养箱中培养，每24h称重培养皿并补足到原重并记录种子的发芽数。染菌种子用消毒镊子及时剔除。结果如表2所示，本发明筛选获得的贝莱斯芽孢杆菌XG3菌液能促进当归种子萌发。
表2不同浓度XG3菌液处理下当归种子的短期发芽势
实施例4
贝莱斯芽孢杆菌XG3对拟南芥开花影响，它是通过以下方法考察：
取适量Col-0拟南芥种子，用75％乙醇(v/v)消毒5min，5％次氯酸钠消毒5min，再用无菌水反复清洗4-6次，每次1min，然后放入已灭菌种子点播至1/2MS培养基中，每瓶15-20粒种子，保证种子间均匀分布，疏密适宜，以便于后期生长和移栽。在拟南芥幼苗长至4-6叶期时，约正式培养后2-3周，用镊子将生长状态相对一致的拟南芥幼苗从培养基中慢慢取出，去除根上的培养基，移植于配制好的基质土中。基质土按泥炭土、蛭石、珍珠岩按照1：1：1的比例混合均匀，121℃，15min高温灭菌。在转移至基质土适应性培养3天后采用灌根法接种XG3液体菌株，每周一次至完全开花，观察并记录拟南芥生长状态，开花时间和开花莲座叶数量。结果如图3所示：以空白水为对照组，XG3处理拟南芥出现显著晚花现象，提示其具有开发为当归早薹防治微生物菌剂潜力。
实施例5复合保护剂的筛选实验
本发明通过单因素试验和中心组合设计试验方法优化出最佳的XG3微生物菌剂的复合保护剂。
(1)单因素试验选择海藻糖(mus，0.5、1、2mg/mL)、蔗糖(suc，2.5、5、10mg/mL)、谷氨酸钠(msg，0.5、1、2mg/mL)、葡萄糖(glu，5、10、15mg/mL)作为保护剂，分别设置三个浓度，以无菌水为对照，以冻干后贝莱斯芽孢杆菌存活率为指标，筛选出保护效果较好的保护剂浓度。根据单因素试验的筛选结果，采用响应面中心组合设计对海藻糖、蔗糖、谷氨酸钠、葡萄糖的配比进行优化，以冻干后贝莱斯芽孢杆菌存活率为指标，确定最佳配方。
(2)为提高菌剂冻干粉中的活菌数，通常在菌体冷冻前加入各类的保护剂以维持菌株的活性和稳定性。从图4可知，在不加任何保护剂，无菌水冻干菌体，其存活率为20.12％，在加入不同保护剂后，菌体存活率出现不同程度上升。根据单因素试验结果，利用Design-Expert 11.0软件进行二次回归拟合，得出拟合方程存活率Y＝88.74+5.10A-3.82B+0.2176C+3.22D-2.48A2-8.17B2-7.57C2-1.94D2。据方差分析(表3)表明拟合的回归方程符合以上检验原则，适应性较好，经回归模型预测分析得到XG3冻存保护剂最佳配方(图5)为葡萄糖15mg/mL、蔗糖5.37mg/mL、海藻糖1.26mg/mL和谷氨酸钠1.87mg/mL，预测存活率为87.96％。在此配方条件进行验证试验，得到XG3存活率为82.45％，实测值与预测值相差不大，说明该配方可行。从图6可以看出，空白水冻干后制成的微生物菌剂粉末颜色偏黄，保护剂冻干后制成的微生物菌剂粉末颜色为灰白色，保护剂冻干后体积与冻干前体积相差不大，稍有缩小，空白水冻干体积缩小较明显。
表3响应面模型方差分析
实施例6
一种贝莱斯芽孢杆菌XG3菌株微生物菌剂制备方法，包括以下步骤：
(1)将Bacillus velezensis XG3接种于LB液体培养基中，于37℃恒温摇床140r/min活化培养，24h后以1％(v/v)比例取过夜活化的菌株于新的LB液体培养基中，140r/min培养24h后，测定其OD值，发酵液4000rpm，离心5min，弃去上清，收集菌体沉淀。
(2)按每100mL菌液离心得到的菌体沉淀加入1mL复合保护剂(葡萄糖15mg/mL、蔗糖5.37mg/mL、海藻糖1.26mg/mL和谷氨酸钠1.87mg/mL)溶液，将样品放入-80℃超低温冰箱中预冻，结束后迅速转入真空冷冻干燥机中，-40℃，10Pa干燥，最后将冻干物碾碎即真空冷冻干燥得到冻干XG3粉菌剂。
实施例7贝莱斯芽孢杆菌XG3微生物菌剂对当归生长影响和早薹防治试验，它是通过试验田样本进行验证得到：
优选未灌根处理当归种苗，以空白水为对照组(Control)，每垄500mL，按实施例6方法制备得到的XG3微生物菌剂低剂量(XG3L)每垄0.8g，XG3微生物菌剂中剂量(XG3M)每垄2.4g，XG3微生物菌剂高剂量(XG3H)每垄7.2g。在当归苗返青后一周进行干预，每两周一次，共三次，首次采用灌根处理，每株5mL，之后采用喷施方法处理。监测其对当归抽薹开花和品质形成的影响。空白对照组当归早薹率32.03％，XG3低、中、高剂量早薹率为18.75％、22.27％和11.72％，说明本发明制备的XG3微生物菌剂可有效防治当归早薹发生，此外如图7所示，本发明制备的微生物菌剂还可以显著增加当归产量，增长主根直径、增加支根数。
以上结果表明，本发明筛选获得一株新的当归根际细菌-贝莱斯芽孢杆菌XG3，并建立其分离、培养、保存、促生功能分析及其微生物菌剂制备的方法，贝莱斯芽孢杆菌XG3具有较好的促进当归种子萌发、当归植株生长和延迟拟南芥开花的功能，对其开发制备的微生物菌剂，能有效防治当归早薹，提高当归产量，具有重要的实际应用价值。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一株防治当归早薹的贝莱斯芽孢杆菌，其保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC NO:M 2021767，分类命名为Bacilus velezensis XG3。
2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的分离发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)振荡：将当归根部周围土壤剥离，抖落、收集根际表面土壤，将土壤置于无菌水的三角瓶中，恒温摇床振荡，静置，取得土壤原液，再用移液枪吸取上清液，加无菌水，依次稀释制得10-1-10-6稀释液；
b)分离：吸取10-4、10-5、10-6的土壤稀释液，接入已配制好的LB固体培养基中，每一稀释度设3个重复；将平板倒置，37℃培养并随时观察菌落生长情况，用接种环接种形态不同的细菌于LB固体培养基上，反复纯化，直至得到单一菌落；
c)培养及保存：将平板上纯化完成的细菌挑取至装有LB液体培养基的三角瓶中，恒温摇床振荡，与甘油1：1装入已灭菌冻存管中，混合均匀，封口膜封口，于-80℃超低温冰箱中保存。
3.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的分离发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)振荡：将当归根部周围土壤剥离，抖落、收集根际表面土壤，5g土壤置于100mL无菌水的三角瓶中，37℃恒温摇床160r/min振荡2h，静置30min，得10-1的土壤原液，再用移液枪吸取1mL上清液加到9mL无菌水中，充分摇匀，即得10-2的土壤稀释液，依次类推，制得10-1-10-6的土壤稀释液；
b)分离：吸取0.1mL10-4、10-5、10-6的土壤稀释液，接入已配制好的LB固体培养基中，每一稀释度设3个重复；将平板倒置，37℃培养并随时观察菌落生长情况，用接种环接种形态不同的细菌于LB固体培养基上，反复纯化，直至得到单一菌落；
c)培养及保存：将平板上纯化完成的细菌挑取至装有LB液体培养基的三角瓶中，37℃恒温摇床160r/min振荡24h，与50％甘油按体积比1：1装入已灭菌冻存管中，混合均匀，封口膜封口，于-80℃超低温冰箱中保存。
4.一种防治当归早薹的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的Bacilus velezensis XG3菌种接种于LB液体培养基中，恒温摇床活化培养，然后取活化菌种至装有LB液体培养基的三角瓶中进行发酵，摇床培养，发酵液离心后收集菌体沉淀，加入蔗糖、海藻糖、谷氨酸钠、葡萄糖制成的复合保护剂，真空冷冻干燥后得到微生物菌剂冻干粉。
5.根据权利要求4所述的一种防治当归早薹的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将Bacilus velezensis XG3菌种接种于LB液体培养基中，于37℃恒温摇床140r/min活化培养，24h后以体积比1％比例取过夜活化的菌株于新的LB液体培养基中，140r/min培养24h后，测定其OD值，发酵液4000rpm，离心5min，弃去上清，收集菌体沉淀；
将菌体沉淀用复合保护剂溶液溶解得到菌液，复合保护剂溶液由葡萄糖15mg/mL、蔗糖5.37mg/mL、海藻糖1.26mg/mL和谷氨酸钠1.87mg/mL组成，然后将菌液样品放入-80℃超低温冰箱中预冻，结束后迅速转入真空冷冻干燥机中，-40℃，10Pa干燥，最后将冻干物碾碎，即真空冷冻干燥得到冻干粉菌剂。
6.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备促进当归种子萌发的培养剂中进行应用。
7.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备防治当归早薹的微生物菌剂中的应用。
8.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌在制备提高当归产量的微生物菌剂中的应用。
9.一种防治当归早薹的微生物菌剂，其特征在于，它包括Bacilus velezensis XG3。
10.一种防治当归早薹的多效复合生物菌肥，其特征在于，它包括Bacilus velezensisXG3。
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|---|---|---|---|---|
| CN118516288A (zh) * | 2024-07-23 | 2024-08-20 | 山东省农业科学院 | 一株贝莱斯芽孢杆菌及微生物菌剂、生物农药与应用 |
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2023
- 2023-12-28 CN CN202311832429.2A patent/CN117925453A/zh active Pending
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