CN117924479A - 一种抗inhba的单克隆抗体及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗INHBA的单克隆抗体及其应用，本发明提供了一种抗INHBA蛋白的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区与轻链可变区，所述重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的CDR‑H1，如SEQ ID NO:2所示的CDR‑H2，如SEQ ID NO:3所示的CDR‑H3，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:9所示的CDR‑L1，如SEQ ID NO:10所示的CDR‑L2，如SEQ ID NO:11所示的CDR‑L3。本发明提供的单克隆抗体能够预防或治疗INHBA蛋白异常导致疾病，且能够增强与嘧啶类似物联合使用时治疗癌症的疗效。

Description

一种抗INHBA的单克隆抗体及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗INHBA的单克隆抗体及其应用。

背景技术

激活素（activins）和抑制素（inhibins）是TGFβ超家族成员，对生殖调节至关重要，但具有几乎完全相反的生物学作用。激活素增强促卵泡激素（FSH）合成和分泌，并影响性腺发育、月经周期、妊娠维持和免疫调节。激活素和抑制素还能调节其他生物功能，如细胞增殖、分化、伤口修复以及组织和器官形成。激活素和抑制素的失调不仅会导致卵巢癌、前列腺癌、多囊卵巢综合征等生殖系统疾病，还与神经系统疾病和肌肉骨骼疾病等密切相关。激活素A（activin A）由抑制素βA亚基（inhibin βA, INHBA）编码，广泛表达于各种组织和细胞中，与炎症、纤维化等疾病相关，激活素和抑制素的多功能性使其成为诊断、预防和治疗各种疾病的潜在生物标志物和理想靶点。

胰腺癌是消化道常见恶性肿瘤之一，在肿瘤领域素有“癌症之王”的称号。 据柳叶刀杂志记载，胰腺癌确诊后的五年生存率约10%，是预后最差的恶性肿瘤之一。 胰腺癌临床症状隐匿且不典型，是诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。 其发病率和死亡率近年来明显上升。胰腺癌患者的治疗效益比较差，这与其对化疗药物易耐药，以及化疗药联合免疫治疗部分不响应有关，因此寻找新的靶点治疗胰腺癌成为亟待解决的问题。

发明内容

为了解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种抗INHBA蛋白的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变区与轻链可变区，所述重链可变区包含3个互补决定区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，所述轻链可变区包含3个互补决定区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，其中，CDR-H1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，CDR-H2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，CDR-H3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，CDR-L1的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，CDR-L2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，CDR-L3的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示。

进一步，所述重链可变区还包括4个框架区FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4，所述轻链可变区还包括4个框架区FR-L1、FR-L2、FR-L3、FR-L4，所述FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4的氨基酸序列分别具有与SEQ ID NO:4-7氨基酸序列至少90%序列一致性，所述FR-L1、FR-L2、FR-L3、FR-L4的氨基酸序列分别具有与SEQ ID NO:12-15氨基酸序列至少90%序列一致性。

在一些具体的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段在FR序列中的一个或多个具有一个或多个氨基酸残基的取代。在一些更具体的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段在FR序列中包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多个取代。

进一步，所述FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-7所示，所述FR-L1、FR-L2、FR-L3、FR-L4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:12-15所示。

进一步，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:8至少90%序列一致性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO:16至少90%序列一致性的氨基酸序列。

进一步，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。

在一些具体的实施方案中，所述单克隆抗体及其抗原结合片段能够结合完整的抗原的表位或抗原的功能片段。

在一些具体的实施方案中，所述单克隆抗体还包括免疫球蛋白恒定区，包括重链恒定区、轻链恒定区。在一些更具体的实施方案中，所述重链恒定区包括CH1、铰链和CH2-CH3区。在一些更具体的实施方案中，所述单克隆抗体的重链具有如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列至少90%序列一致性的氨基酸序列，所述单克隆抗体的轻链具有如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列至少90%序列一致性的氨基酸序列。

在一些具体的实施方案中，所述单克隆抗体及其抗原结合片段是多特异性的，例如双特异性的、三特异性的、四特异性的、五特异性的。

术语“抗体”在本文中以广义使用并且包括多克隆抗体、单克隆抗体和双特异性抗体。除了完整免疫球蛋白分子之外，术语“抗体”还包括那些免疫球蛋白分子的片段或聚合物，以及免疫球蛋白分子或其片段的人形式或人源化形式。抗体通常是约 150,000 道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成。每条重链在一端具有可变结构域(VH)，接着是多个恒定结构域。每条轻链在一端具有可变结构域(VL)并且在另一端具有恒定结构域。

进一步，所述单克隆抗体或其抗原结合片段可以是无岩藻糖基化的抗体，或部分无岩藻糖基化的抗体。

术语“CDR”和“互补决定区”可互换使用，并且是指抗体的参与结合至抗原的可变链的一部分。因此，CDR是“抗原结合位点”的一部分或者是“抗原结合位点”。在一些实施方案中，单克隆抗体包含共同形成抗原结合位点的六个 CDR，分别位于重链可变区、轻链可变区。“CDR”可指由本领域已知的任何方法(包括方法的组合)定义的 CDR。

术语“片段”或“抗原结合片段”可包括特定区域或特定氨基酸残基的插入、缺失、取代或其它选定修饰，条件是与未修饰的肽或蛋白质相比，片段的活性不会显著改变或受损。这些修饰可提供一些额外的性质，如除去或添加能够二硫化物结合的氨基酸，以增加其生物寿命，改变其分泌特性等。在任何情况下，抗原结合片段必须具有生物活性。

本发明提供了一种物质，所述物质包括：

1）一种多核苷酸，所述多核苷酸编码前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。

进一步，所述多核苷酸包括DNA或RNA。

进一步，所述多核苷酸包括mRNA、tRNA、rRNA、snRNA、hRNA、反义 RNA、tCRNA、dsRNA、SCRNA、具有催化活性的 RNA、各种病毒 RNA、单链 DNA、闭环 DNA、连接 DNA。

在一些具体的实施方案中，所述多核苷酸包括保守的核酸取代。所述保守的核酸取代是指编码相同或基本相同的氨基酸序列的那些核酸，或在多核苷酸不编码氨基酸序列的情况下，基本相同或相关的序列。在一些具体的实施方案中，所述多核苷酸应用遗传密码的简并性，大量功能相同的核酸编码大多数蛋白质。

2）一种载体，所述载体包括前面所述的多核苷酸。

进一步，所述载体包括：病毒载体、非病毒载体。

进一步，所述病毒载体包括腺病毒载体、慢病毒载体、腺相关病毒载体。

进一步，所述非病毒载体包括质粒、转座子载体。

3）一种细胞，所述细胞包括前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，前面所述的多核苷酸，前面所述的载体。

进一步，所述细胞包括外源核酸引入的细胞及其后代。

进一步，所述细胞包括真核细胞或原核细胞。

进一步，所述真核细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、卵生动物细胞、酵母细胞。

进一步，所述原核细胞包括细菌、放线菌、古细菌、螺旋体、衣原体、支原体、立克次氏体和蓝细菌。

在一些具体的实施方案中，所述细胞包括转化体或转化细胞，不考虑其传代次数，后代的多核苷酸含量可以并非与亲本细胞完全相同，可包含突变。

在本发明中所使用的术语“细胞”指原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属；细菌细胞如鼠伤寒沙门氏菌；真菌细胞如酵母；昆虫细胞如S2（果蝇胚胎细胞）或 Sf9（昆虫卵巢细胞）；动物细胞如 CHO（仓鼠卵巢癌细胞）、COS（非洲绿猴肾细胞） 或 Bowes（黑素瘤细胞）等。

4）一种抗体衍生物，所述抗体衍生物包括前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段上直接或间接的偶联可检测标记物。

进一步，所述可检测标记物包括放射性同位素、磷光化学品、化学发光化学品、荧光化学品、多肽、亲和标记物、以及可通过正电子发射断层扫描或磁共振成像检测到的分子。

在一些具体的实施方案中，所述抗体衍生物中的可检测标记物与本发明的单克隆抗体偶联，这些可检测标记物包括但不限于放射性同位素(例如[125]碘)、磷光化学品、化学发光化学品、荧光化学品或多肽 (例如藻红蛋白(PE) 、异硫氰酸荧光素(FITC)、Cy-chrome、罗丹明、绿色荧光蛋白(GFP)、蓝荧光蛋白(BFP)、德克萨斯红、酶 (例如，辣根过氧化物酶 (HPR)、β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶(AP))、亲和标记物(例如，可由相应抗体(例如，地高辛(DIG)，其由抗 DIG 抗体识别)识别的抗原)或对标记物(例如链霉亲和素和生物素)具有高亲和力的分子)，以及可通过正电子发射断层扫描(PET)或磁共振成像(MRI)检测到的分子(造影剂)。

进一步，所述的偶联可以是共价结合，也可以是非共价结合。

5）一种检测INHBA的组合物，所述组合物包括前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，前面所述的多核苷酸，前面所述的载体，前面所述的细胞，前面所述的抗体衍生物。

在本发明中所使用的“组合物”是指具有有益生物效应的任何物质。有益生物效应包括治疗效应(例如，治疗病症或其它非期望的生理疾患)和预防效应(例如，预防病症或其它非期望的生理疾患)两者。所述术语还涵盖本文具体提及的有益剂的药学上可接受的、药理学活性的衍生物，包括但不限于细菌、载体、多核苷酸、细胞、盐、酯、酰胺、前药、活性代谢物、异构体、片段、类似物等。

6）一种调节INHBA蛋白活性或表达水平的药物组合物，所述药物组合物包括前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，前面所述的多核苷酸，前面所述的载体，前面所述的细胞；

7）一种预防或治疗INHBA蛋白异常导致疾病的药物组合物，所述药物组合物包括预防或治疗有效量的前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。

在本发明中所使用的“有效量”是指包括但不限于可改善、逆转、减轻、预防或诊断医学疾患或病症(例如，癌症)的症状或病征的量。除非另外明确地或通过上下文来规定，否则“有效量”不限于足以改善疾患的最小量。疾病或病症的严重性以及治疗预防、治疗或减轻疾病或病症的能力可通过生物标志物或通过临床参数来测量，而不暗示任何限制。

本发明提供了前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，前面所述的多核苷酸，前面所述的载体，前面所述的细胞，或前面所述的抗体衍生物在如下任一项所述的应用：

1）检测INHBA蛋白或其片段中的应用；

2）制备检测INHBA蛋白异常导致疾病的产品中的应用；

3）制备预防或治疗INHBA蛋白异常导致疾病的产品中的应用。

进一步，所述产品包括试剂盒、芯片、层析试纸条、膜条、系统、装置。

4）制备调节INHBA蛋白活性或水平的药物组合物中的应用。

进一步，所述INHBA蛋白异常导致疾病包括肺癌、胃癌、食管癌、尿路上皮癌、浆细胞癌、前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、先兆子痫、β地中海贫血、急性淋巴细胞白血病、散发性包涵体肌炎、杜氏肌营养不良症、乳腺癌、神经内分泌癌、神经胶质瘤、肌肉萎缩、肌营养不良症、病态肥胖症、进行性骨化性纤维发育不良、头颈鳞状细胞癌、骨质疏松症、肺病高血压。

本发明提供了前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。

进一步，所述肿瘤包括白血病，脑癌，前列腺癌，肝癌，卵巢癌，胃癌，结直肠癌，咽喉癌，乳腺癌，皮肤癌，黑色素瘤，肺癌，肉瘤，子宫颈癌，睾丸癌，膀胱癌，内分泌癌，子宫内膜癌，食道癌，神经胶质瘤，淋巴瘤，神经母细胞瘤，骨肉瘤，胰腺癌，恶性体癌，肾癌，鼻咽癌。

在具体的实施方案中，所述“肿瘤”的治疗效果包括但不限于肿瘤尺寸减小、肿瘤生长速度降低、以及肿瘤转移减少。本发明中所使用的“肿瘤”是指异常组织团块，包括良性和恶性团块。本发明中所使用的“肿瘤”是指异常的细胞增殖与转移。

本发明提供了前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段联合嘧啶类似物在制备预防或治疗胰腺癌的药物组合物中的应用。

进一步，所述嘧啶类似物包括胞嘧啶类似物、尿嘧啶类似物。

进一步，所述胞嘧啶类似物包括阿扎胞苷、地西他滨、阿糖胞苷、吉西他滨及其药学上可接受的盐。

进一步，所述尿嘧啶类似物包括氟二氧嘧啶、氟尿苷、卡培他滨及其药学上可接受的盐。

在一些具体的实施方案中，所述胞嘧啶类似物包括但不限于阿扎胞苷、地西他滨、阿糖胞苷、吉西他滨及其药学上可接受的盐。在一些具体的实施方案中，所述尿嘧啶包括但不限于氟二氧嘧啶、氟尿苷、卡培他滨及其药学上可接受的盐。

在本文中使用的术语“治疗”包括缓解与特定障碍或病症相关的症状。例如，如本文所用，术语“治疗癌症”包括缓解与癌症相关的症状。在一个实施方式中，术语“治疗癌症”是指癌性肿瘤大小的减小。在一个实施方式中，术语“治疗癌症”是指无进展存活期的增加。如本文所用，术语“无进展存活期”是指在治疗癌症期间和之后，患者伴随疾病(即，癌症)活着，但不具有疾病复发或症状增加的时间长度。

在本文中使用的术语“预防”包括预防特定障碍或病症。例如，如本文所用，术语“预防癌症”是指防止与癌症相关的症状的发作或持续。在一个实施方式中，术语“预防癌症”是指减缓或停止癌症的进展。

本发明提供了一种预防或治疗胰腺癌的药物组合物，所述药物组合物包括预防或治疗有效量的前面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。

在本发明使用的术语“药物组合物”是指包含至少一种生物活性药剂的任何组合物。当在本文中使用时，术语“药物组合物”还是指包含待递送到对象以例如实现治疗、预防、诊断、阻止或预后效果的活性药物成分的组合物。术语“生物活性药剂”是指能够在生物系统例如活细胞、组织、器官和人类中引发响应的任何分子。在本发明的生物活性药剂的非限制性实例包括单克隆抗体及其抗原结合片段，前述的多核苷酸、载体以及细胞。

本发明提供了根据前面所述的药物组合物，所述药物组合物还可包括嘧啶类似物。

进一步，所述嘧啶类似物包括胞嘧啶类似物、尿嘧啶类似物。

进一步，所述胞嘧啶类似物包括阿扎胞苷、地西他滨、阿糖胞苷、吉西他滨及其药学上可接受的盐。

进一步，所述尿嘧啶类似物包括氟二氧嘧啶、氟尿苷、卡培他滨及其药学上可接受的盐。

在本发明所使用的术语“药学上可接受的盐”是指本文中所列举的化合物的相关盐，所述盐需具备安全性和有效性，即不改变其生物学活性的同时不对受试个体造成健康上的负面影响。药学上可接受的盐包括指定化合物中存在的酸性或碱性基团的盐。药学上可接受的盐的实例包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、醋酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、延胡索酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和巴莫酸盐。药学上可接受的盐还包括制定化合物与氨基酸形成的盐。带有碱性基团的盐包括但不限于铝、钙、镁、钾、钠、锌、铁、铜、锂等。

在一些具体的实施方案中，所述药物组合物中包含本发明制备的单克隆抗体和嘧啶类似物。在一个具体的实施方案中，所述药物组合物包括本发明制备的单克隆抗体和吉西他滨。在具体的实施方案中，所述单克隆抗体和吉西他滨的质量比为1:2。

进一步，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅剂。

在本文中，“药学上可接受的辅剂”是指可与所述药物组合物中各成分兼容的化合物，且在施用于个体时不会危害该个体的健康。在一些实施方案中，药学上可接受的辅剂包括，但不限于填充剂、结合剂、润滑剂、助流剂、崩散剂等。

本发明提供了一种体外非治疗性抑制胰腺癌细胞或组织的方法，所述方法包括将前面所述的预防或治疗胰腺癌的药物组合物施用到体外胰腺癌细胞或组织上的步骤。

如本文所用，术语“受试者”、“个体”或“受试个体”是指易感疾病或病症的任何生物体。例如，受试者可以是动物、哺乳动物、灵长类动物、家畜动物(例如，绵羊、奶牛、马、猪)、伴侣动物(例如，狗、猫)或实验动物(例如，小鼠、兔子、大鼠、豚鼠、仓鼠)。在一个实例中，受试者是哺乳动物。在一个实施方式中，受试者是人。在一个实施方式中，受试者是非人动物。

本发明的有益效果：

本实验室自主研发抗INHBA抗体12E7，该抗INHAB抗体在体外和体内都具有抑制胰腺癌肿瘤增长的效果，该抗INHBA抗体能够明显提高化疗药物吉西他滨对胰腺癌的治疗效果。

附图说明

图1是杂交瘤细胞培养48 h细胞活力结果图；

图2是杂交瘤细胞培养72 h细胞活力结果图；

图3是杂交瘤细胞Western blot实验结果图；

图4是细胞增殖实验结果图；

图5是抗INHBA抗体拮抗activin A抑制MPC-11细胞活性的验证结果图；

图6是本发明抗INHBA抗体12E7拮抗activin A抑制MPC-11细胞活性的结果图；

图7是不同治疗后皮下胰腺癌小鼠模型肿瘤大小对比图；

图8是不同治疗后皮下胰腺癌小鼠肿瘤大小统计图与肿瘤重量统计图；

图9是不同治疗后肿瘤组织的染色结果图。

具体实施方式

在描述本发明方法之前，应当理解本发明不限于所描述的具体方法和实验条件，因为此类方法和条件可以变化。还应理解，本发明所使用的术语仅出于描述具体实施例的目的，而不是限制性的，因为本发明的范围仅受所附权利要求限制。

实施例1单克隆抗体的制备与筛选

1、实验材料

实验材料如表1所示：

表1

2、抗INHBA抗体的制备和初步筛选

使用INHBA蛋白多次免疫BALB/c小鼠取免疫后的小鼠脾脏获得脾淋巴细胞，取小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合从而获得杂交瘤细胞，对杂交瘤细胞进行筛选和克隆、获得目标杂交瘤细胞株，对单克隆杂交瘤细胞进行ELISA实验进行检测，通过WesternBlot实验筛选获得结果较好的抗INHBA单克隆抗体。具体步骤如下：

将胰腺癌细胞以每孔1000个接种于96孔板，待细胞贴壁后，每孔加入含有相同浓度相同体积的抗体的培养基，在不同时间吸弃培养基后使用CCK8试剂与RPMI-1640完全培养基以1：10的配比加入细胞中，孵育1h后检测450、630 nm处的吸光度值，通过比较吸光度值的差异比较细胞生长速度，从而确定最佳的单克隆抗体。通过western blot实验筛选能和INHBA蛋白结合的抗INHBA抗体，结果如图1、2、3所示，经过初筛确定1号（3G11）、3号（7E3）、11号（6E5）、13号（12E7）、15号(13D9)为进一步筛选的杂交瘤细胞株。

3、抗INHBA抗体的增殖实验与筛选验证

通过细胞增殖实验对抗INHBA抗体进一步筛选，结果如图4所示，结果显示，12E7杂交瘤细胞株分泌的抗INHBA抗体具有更好的封闭效果，能够明显抑制肿瘤细胞的增殖，这为胰腺癌的靶向治疗提供了新的方向和方法。

之后对12E7杂交瘤细胞分泌的抗INHBA抗体进行筛选验证，选择已有文献报道INHBA编码的activin A呈剂量依赖式抑制小鼠浆细胞瘤细胞MPC-11，使用抗INHBA抗体抵抗或部分恢复activinA对细胞的抑制效果，从而恢复MPC-11细胞的增长速度，从而筛选出具有拮抗activinA的抗INHBA抗体，首先使用文章报道的抗体进行了验证，结果如图5所示，验证结果与其报道实验结论一致，因此构建了以下抗体筛选验证策略：

将MPC-11细胞以3000/孔接种于96孔板，分别加入含有或不含有activin A蛋白和抗INHBA抗体，培养两天后使用MTT法检测细胞的活力，验证抗INHBA抗体的生物学活性。

实验结果如图6所示，结果显示，12E7杂交瘤细胞分泌的抗INHBA抗体能够明显抑制acrivin A的活性，证明本发明得到的12E7杂交瘤细胞分泌的抗INHBA抗体是具有拮抗activinA的抗INHBA抗体。

将12E7杂交瘤细胞分泌的抗INHBA抗体进行了测序，并将之命名为12E7，具体序列如表2所示：

表2序列

实施例2单克隆抗体在动物水平的治疗效果

1、实验方法

将人源胰腺癌细胞系SW1990消化成单个悬浮细胞，检测细胞浓度并调整细胞浓度为1×10⁷/ml,每只小鼠腋下接种100 μl细胞悬液，待其成瘤后（4天左右），每组分别给予小鼠IgG（25 μg/ml）、抗INHBA抗体（25 μg/ml）、吉西他滨(50 μg/ml)、抗INHBA抗体+吉西他滨、抗体每两天给药一次、吉西他滨每四天给药一次，每2天检测肿瘤的大小（长径和短径），当对照组肿瘤的长径接近15 mm时结束实验，评估肿瘤的大小和重量。苏木素伊红染色和免疫组化检测治疗后肿瘤的变化。

2、实验结果

通过使用胰腺癌细胞系SW1990构建皮下胰腺癌小鼠模型，检测抗INHBA抗体的治疗效果，结果如图7、8、9所示，结果显示抗INHBA抗体能够明显抑制肿瘤生长，而抗INHBA抗体联合吉西他滨更加显著性的抑制肿瘤的生长，这表明抗INHBA抗体能够抑制肿瘤生长，抗INHBA抗体联合嘧啶类似物吉西他滨相比于单药更显著性的抑制肿瘤生长，治疗效果优异。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种抗INHBA蛋白的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变区与轻链可变区，所述重链可变区包含3个互补决定区CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3，所述轻链可变区包含3个互补决定区CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3，其中，CDR-H1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，CDR-H2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，CDR-H3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，CDR-L1的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，CDR-L2的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，CDR-L3的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区还包括4个框架区FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4，所述轻链可变区还包括4个框架区FR-L1、FR-L2、FR-L3、FR-L4，所述FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4的氨基酸序列分别具有与SEQ ID NO:4-7氨基酸序列至少90%序列一致性，所述FR-L1、FR-L2、FR-L3、FR-L4的氨基酸序列分别具有与SEQ ID NO:12-15氨基酸序列至少90%序列一致性。

3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:8至少90%序列一致性的氨基酸序列，所述轻链可变区具有与SEQ IDNO:16至少90%序列一致性的氨基酸序列。

4.一种物质，所述物质包括：

1）一种多核苷酸，所述多核苷酸编码权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段；

2）一种载体，所述载体包括权利要求4中1）所述的多核苷酸；

3）一种细胞，所述细胞包括权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，权利要求4中1）所述的多核苷酸，权利要求4中2）所述的载体；

4）一种抗体衍生物，所述抗体衍生物包括权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段上直接或间接的偶联可检测标记物；

5）一种检测INHBA的组合物，所述组合物包括权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，权利要求4中1）所述的多核苷酸，权利要求4中2）所述的载体，权利要求4中3）所述的细胞，权利要求4中4）所述的抗体衍生物；

6）一种调节INHBA蛋白活性或表达水平的药物组合物，所述药物组合物包括权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，权利要求4中1）所述的多核苷酸，权利要求4中2）所述的载体，权利要求4中3）所述的细胞；

7）一种预防或治疗INHBA蛋白异常导致疾病的药物组合物，所述药物组合物包括预防或治疗有效量的权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。

5.权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，权利要求4中1）所述的多核苷酸，权利要求4中2）所述的载体，权利要求4中3）所述的细胞，或权利要求4中4）所述的抗体衍生物在如下任一项所述的应用：

1）检测INHBA蛋白或其片段中的应用；

2）制备检测INHBA蛋白异常导致疾病的产品中的应用；

3）制备预防或治疗INHBA蛋白异常导致疾病的药物组合物中的应用；

4）制备调节INHBA蛋白活性或水平的药物组合物中的应用。

6.权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段在抑制肿瘤细胞增殖中的应用。

7.权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段联合嘧啶类似物在制备预防或治疗胰腺癌的药物组合物中的应用。

8.一种预防或治疗胰腺癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括预防或治疗有效量的权利要求1-3任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还可包括嘧啶类似物。

10.一种体外非治疗性抑制胰腺癌细胞或组织的方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求8或9任一项所述的药物组合物施用到体外胰腺癌细胞或组织上的步骤。