CN117918350A - 4-松油烯醇与吐温80组合物在制备杀菌剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明适用于农业生物技术领域，提供了4‑松油烯醇与吐温80组合物在制备用于防治由植物病原菌引起的植物病害的杀菌剂中的应用，所述组合物包括4‑松油烯醇与吐温80，4‑松油烯醇与吐温80的体积比为1:1‑2:1，4‑松油烯醇的有效使用浓度为0.2‑0.4μL/mL，吐温80有效使用浓度为0.2μL/mL。所述植物病原菌为番茄灰霉病菌。本发明证明了4‑松油烯醇与吐温80组合物对植物病原真菌具有良好的抑制活性；并且4‑松油烯醇与吐温80组合物是一种无污染、对环境友好的小分子化合物，对非靶标生物及人畜安全，能够保证农产品及果蔬的高品质，符合可持续发展的要求，其研究和市场应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明属于农业生物技术领域，尤其涉及4-松油烯醇与吐温80组合物在制备杀菌剂中的应用。
背景技术
番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌侵染所致的常见病害。除危害番茄外，番茄灰霉病菌还可危害茄子、黄瓜、葡萄、草莓等多种重要的经济作物。该病害可以发生在寄主植物生长季节和农产品的储藏期间，危害严重。尤其是近年来设施栽培方式的大面积推广，导致该病菌侵染来源广、传播速度快，造成严重的经济损失。据报道，北方设施栽培方式一般年份番茄灰霉病的发生造成的经济损失可达20％-30％，严重的年份达到50％以上甚至绝收。
灰霉病菌繁殖速度非常快，产生分生孢子的数量非常多，因此很容易发生变异而产生抗药性，目前已对农业生产上常用的氨基甲酸酯类等多种杀菌剂产生抗性，不仅导致防效的降低，而且导致药剂使用量不断加大。化学药剂的过度使用，不仅造成农产品农残超标，危害消费者的身体健康，还会造成环境污染，破坏生态平衡，影响农业的可持续健康发展。因此，必须研发出高效、低毒、低残留和环境友好型的杀菌剂，并将其应用于生产实践中。我国农业要向着健康可持续方向发展，解决抗性、增强植物免疫能力、安全高效、与环境兼容性好等问题已经成为杀菌剂产品发展的方向。
4-松油烯醇，4-松油醇；萜品烯；4-甲基-1-(1-甲基乙基)-3-环己烯-1-醇；对盖-1-烯-4-醇。分子式：C10H18O，分子量：154.2493，CAS：562-74-3。分子结构式为：
呈暖的胡椒香、较淡的泥土香和陈腐的木材气息。天然品存在于肉豆蔻、小豆蔻，迷迭香、芜荽等中。目前，国内外尚无关于4-松油烯醇和吐温80组合物对番茄灰霉病菌的抑制作用的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供4-松油烯醇与吐温80组合物在制备杀菌剂中的应用，旨在解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
4-松油烯醇与吐温80组合物在制备用于防治由植物病原菌引起的植物病害的杀菌剂中的应用，所述组合物包括4-松油烯醇与吐温80，4-松油烯醇与吐温80的体积比为1:1-2:1。
进一步的，所述植物病原菌为番茄灰霉病菌。
进一步的，所述4-松油烯醇与吐温80组合物中4-松油烯醇的有效使用浓度为0.2-0.4μL/mL，吐温80有效使用浓度为0.2μL/mL。
进一步的，所述4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的菌丝生长抑制率呈剂量依赖性。
进一步的，所述4-松油烯醇与吐温80组合物中4-松油烯醇的浓度为0.4μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的菌丝生长抑制率超过100％。
进一步的，所述4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的孢子萌发的抑制率呈剂量依赖性。
进一步的，所述4-松油烯醇与吐温80组合物中4-松油烯醇的浓度为0.2μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的孢子萌发抑制率达到100％。
进一步的，所述4-松油烯醇与吐温80组合物中，4-松油烯醇的浓度为0.2μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄叶片和果实灰霉病菌引起的番茄病害抑制效果达到90％。
进一步的，所述植物为番茄、茄子、辣椒、黄瓜、葡萄或草莓。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明通过室内毒力测定，证明了4-松油烯醇与吐温80组合物对植物病原真菌具有良好的抑制活性；并且4-松油烯醇与吐温80组合物是一种无污染、对环境友好的小分子化合物，对非靶标生物及人畜安全，能够保证农产品及果蔬的高品质，符合可持续发展的要求，其研究和市场应用前景广阔。
附图说明
图1为本发明中4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑菌实验结果图。
图2为本发明中4-松油烯醇与吐温80组合物抑制番茄灰霉病菌分生孢子萌发的实验结果图。
图3为本发明中4-松油烯醇与吐温80组合物防治番茄叶片灰霉病的实验结果图。
图4为本发明中4-松油烯醇与吐温80组合物防治番茄果实灰霉病的实验结果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
以下结合具体实施例对本发明的具体实现进行详细描述。
实施例1、本发明一个实施例进行以下实验：
一、实验材料；
1、4-松油烯醇购自索莱宝公司，4℃保存待用；吐温80购自国药，常温保存。
2、本实验中植物病原菌保存在4℃冰箱，采用的培养基为马铃薯葡萄糖培养基(简称PDA)。PDA培养基配方：马铃薯(土豆)200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，自然pH。配制方法：将土豆洗净去皮，称200g切成小块，加1000ml蒸馏水煮沸20min，再用四层纱布过滤于大烧杯中，根据实验需要加20g琼脂，加入20g葡萄糖，搅拌均匀，补足水至1000ml，分装后121℃灭菌20分钟，冷却后备用。
3、本实验中测定番茄灰霉病菌的孢子萌发、芽管伸长采用是酵母提取物蛋白胨葡萄糖培养基(简称YPD)。YPD培养基配方：1％YeastExtract(酵母提取物)，2％Peptone(蛋白胨)，2％Dextrose(葡萄糖)。配制方法：分别称取酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，以及蒸馏水1000ml，自然pH。分装后121℃灭菌20分钟，冷却后备用。
二、4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的生防实验；
1、4-松油烯醇与吐温80组合物对植物病原菌菌丝生长的抑制作用；
实验方法：将番茄灰霉病菌分别在PDA平板上25℃活化培养5天左右备用；取PDA培养基加热溶化，冷却至45-50℃，分别加入不同质量的4-松油烯醇制成含0、0.2、0.4和0.8μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL药液的培养基，并分别倒入培养皿中冷却；用打孔器在活化好的植物病原菌菌株菌丝边缘(生长状况尽量一致)打取圆形菌饼(直径0.60cm)，再用接种针挑至含药平板中央，然后将培养皿倒置于培养箱(25℃)中培养。处理后及时观察测定菌丝的生长情况。等不含药物的对照平板基本长满后，并采用十字交叉法测得直径并处理数据，计算抑制率并拍照。每个处理重复3次。
抑制率(％)＝(对照新生长菌丝直径-处理新生长菌丝直径)/对照新生长菌丝直径×100。
实验结果如图1所示，随着4-松油烯醇浓度的升高，其对植物病原菌的抑制效果也有不同程度的提高。当4-松油烯醇浓度为0.4μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，可以显著抑制番茄灰霉病菌菌丝的生长。
表1总结了4-松油烯醇与吐温80组合物对植物病原菌菌丝生长的抑菌率。
表1 4-松油烯醇与吐温80组合物对病原菌孢子萌发的抑菌率
由表1可知，当4-松油烯醇浓度为0.4μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，对番茄灰霉病菌菌丝生长抑制率达到100％，表明4-松油烯醇与吐温80 组合物对番茄灰霉病菌的菌丝生长具有显著的抑制作用。
2、4-松油烯醇与吐温80组合物对植物病原菌对孢子萌发的抑制作用；
实验方法：将番茄灰霉病菌接种在PDA平板培养至产生分生孢子；收集孢子并用YPD液体调整分子孢子的浓度在6.1×105个/ml左右；分别在分生孢子悬液中加入不同体积的4-松油烯醇与吐温80组合物(4-松油烯醇浓度0、0.2、0.4和0.8μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL；采用凹玻片法检测4-松油烯醇与吐温80组合物对孢子萌发的抑制作用(在灭菌的凹玻片中分别加入孢子悬液50ul，25℃保湿培养，对照分生孢子萌发率达90％时，检测不同浓度4-松油烯醇与吐温80组合物处理的分生孢子萌发率并计算药物对分生孢子萌发的抑制率)。
实验结果如图2所示，随着4-松油烯醇与吐温80组合物含量的增加，对番茄灰霉病菌分生孢子萌发的抑制率明显提高。当含量超过0.2μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，就可以基本抑制分生孢子的萌发，孢子萌发抑制率均达100％。表明4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌孢子的萌发均具有较强的抑制作用。
3、4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄叶片灰霉病的防治；
实验方法：喷施4-松油烯醇与吐温80组合物悬浊液(4-松油烯醇浓度0、0.2、0.4和0.8μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL)，晾干表面。菌饼接到叶片上，25℃保湿培养2天后，拍照并测量发病面积，并计算防治效果。
防治效果(％)＝(对照病斑直径-处理病斑直径)/对照病斑直径×100。每个处理重复3次。
实验结果如图3所示，4-松油烯醇与吐温80组合物中4-松油烯醇浓度为0.4μL/mL以上，吐温80浓度为0.2μL/mL时，能有效抑制灰霉病的发生。
4、4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄果实灰霉病的防治；
实验方法：采用成熟的番茄果实，通过接种菌饼的方式，在对照组和处理组分别喷施清水和4-松油烯醇与吐温80(4-松油烯醇浓度0.4μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时)，放置3天左右。
实验结果如图4所示，4-松油烯醇与吐温80组合物中4-松油烯醇浓度为0.4μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，能有效抑制番茄灰霉病的发生。
以上结果表明，4-松油烯醇与吐温80组合物具有对番茄灰霉病菌具有较强的抑制作用，可将其制备成防治由果蔬灰霉病菌引起的植物病害的杀菌剂。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些均不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。
Claims (9)
1.4-松油烯醇与吐温80组合物在制备用于防治由植物病原菌引起的植物病害的杀菌剂中的应用，其特征在于，所述组合物包括4-松油烯醇与吐温80，4-松油烯醇与吐温80的体积比为1:1-2:1。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述植物病原菌为番茄灰霉病菌。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述4-松油烯醇与吐温80组合物中4-松油烯醇的有效使用浓度为0.2-0.4μL/mL，吐温80有效使用浓度为0.2μL/mL。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的菌丝生长抑制率呈剂量依赖性。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述4-松油烯醇与吐温80组合物中4-松油烯醇的浓度为0.4μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的菌丝生长抑制率超过100％。
6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的孢子萌发的抑制率呈剂量依赖性。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述4-松油烯醇与吐温80组合物中4-松油烯醇的浓度为0.2μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄灰霉病菌的孢子萌发抑制率达到100％。
8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述4-松油烯醇与吐温80组合物中，4-松油烯醇的浓度为0.2μL/mL，吐温80浓度为0.2μL/mL时，4-松油烯醇与吐温80组合物对番茄叶片和果实灰霉病菌引起的番茄病害抑制效果达到90％。
9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述植物为番茄、茄子、辣椒、黄瓜、葡萄或草莓。
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