CN117903986A - 贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用 - Google Patents
贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117903986A CN117903986A CN202410074838.9A CN202410074838A CN117903986A CN 117903986 A CN117903986 A CN 117903986A CN 202410074838 A CN202410074838 A CN 202410074838A CN 117903986 A CN117903986 A CN 117903986A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus
- belicus
- saline
- plant growth
- rgpb
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title claims abstract description 82
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 title claims description 17
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 title claims description 12
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 title abstract description 10
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims abstract description 50
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims abstract description 29
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 14
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 239000000589 Siderophore Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229930192334 Auxin Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 claims abstract description 6
- 239000002363 auxin Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 claims description 4
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 abstract description 45
- 241000209094 Oryza Species 0.000 abstract description 28
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 27
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 241000315694 Bacillus tequilensis Species 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000009642 citrate test Methods 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 230000015784 hyperosmotic salinity response Effects 0.000 description 2
- 238000009654 indole test Methods 0.000 description 2
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000004382 potting Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- RSTKLPZEZYGQPY-UHFFFAOYSA-N 3-(indol-3-yl)pyruvic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)C(=O)O)=CNC2=C1 RSTKLPZEZYGQPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000012271 agricultural production Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用，属于微生物技术领域。所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌RGPB‑1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2023年07月13日，保藏编号为CGMCC No.27879。贝莱斯芽孢杆菌RGPB‑1不仅具有产铁载体、耐盐耐碱和产植物生长素的能力，还能显著促进盐碱地水稻生长。试验证实，该菌株能够提高生长在盐碱地中的水稻的株高、茎粗、地上干重、地下干重和全株干重，是一株耐盐碱的植物促生菌株。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用。
背景技术
水稻作为主要的粮食作物之一，除了应用于主食外，还有很多其他用途。但从随着育种技术的进步，水稻单产已经达到较高水平，粮食产量仅靠提高单产来突破难度越来越大。
盐碱地是一系列受盐碱作用，包括各种盐土、碱土及其他不同程度盐化合碱化土壤的统称。盐碱地就是土地含盐量较高，不适合种植常见的农作物或绝大部分植物。因此，虽然盐碱地作为一种重要的土地资源，但据统计绝大部分的盐碱地尚未得到开发利用，有着巨大的农业生产潜力。因此，利用盐碱地扩大水稻种植面积，已成为确保粮食安全和产量的重要举措之一。
然而，盐碱胁迫会通过影响水稻的多个生理过程降低其产量及品质。针对盐碱地水稻生产的迫切需求，通过功能微生物改善盐碱胁迫下作物生长微环境、促进作物生长的研究也有相关报道，但不同微生物分泌大分子有机物、小分子酸、生长激素等物质不同，对盐碱地作物的促生作用有很大的区别，有的甚至会影响作物的生长。由于微生物改良是盐碱地生物修复的重要组成部分，因此，筛选能够适应盐碱环境并且能够改善土壤质地、促进水稻生长的菌株，是利用盐碱地提高水稻产量的关键。
发明内容
本发明的目的在于提供一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用，该贝莱斯芽孢杆菌不仅具有产铁载体、耐盐耐碱和产植物生长素的能力，还能够显著促进盐碱地水稻生长。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一株贝莱斯芽孢杆菌，所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2023年07月13日，保藏编号为CGMCC No.27879。
在本发明中，本发明的贝莱斯芽孢杆菌来源于黑龙江省大庆市林甸县盐碱地水稻田。所述贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1为短杆状、产芽孢的革兰氏阳性菌，菌落呈白色、圆形，边缘不规整。
本发明还提供了一种菌剂，所述菌剂包括上述的贝莱斯芽孢杆菌或由上述贝莱斯芽孢杆菌制备得到。
本发明还提供了一种植物促生长剂，所述植物促生长剂含有上述的贝莱斯芽孢杆菌或由上述的贝莱斯芽孢杆菌制备得到。
本发明还提供了一种生物肥料，所述生物肥料含有上述的贝莱斯芽孢杆菌或由上述的贝莱斯芽孢杆菌制备得到。
在本发明中，上述菌剂、植物促生长剂或生物肥料可由贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis RGPB-1经发酵培养得到。本发明的上述菌剂、植物促生长剂或生物肥料的制备方法优选的包括以下步骤：
将所述贝莱斯芽孢杆菌在液体培养基中培养，离心取沉淀，用无菌水重悬沉淀，得到菌液，菌液与无菌水混合即得。
在本发明中，将所述贝莱斯芽孢杆菌在液体培养基中培养，所述液体培养基可为LB液体培养基，所述LB液体培养基的成分组成见表1。所述培养的温度为28～32℃，所述培养的时间为46～50h。在本发明中，培养后进行离心取沉淀，本发明对离心的方式没有具体限定，采用本领域公知的离心方法进行即可。在本发明中，用无菌水重悬沉淀，得到菌液，菌液与无菌水混合即得。所述菌液的OD600优选为1.2～1.6，进一步优选为1.4。当菌液与无菌水混合时，所述菌液与无菌水的体积比优选为1：9～11，进一步优选为1:9.5～10.5，更进一步优选为1:10。
在本发明中，经试验表明，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis RGPB-1具有高效的产铁载体、产吲哚乙酸的能力，还具有耐盐碱的能力，对盐碱地中的植物具有显著地促进其生长的能力。
基于上述功能，本发明提供以下应用：
本发明还提供了一种上述贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂或生物肥料在固氮中的应用。
本发明还提供了一种上述贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂或生物肥料在产植物生长素中的应用。
本发明还提供了一种上述贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂或生物肥料在促进植物生长中的应用。
在本发明中，所述植物生长素优选的包括吲哚乙酸。所述植物优选的包括盐碱胁迫下的植物。所述植物优选的包括水稻。
在以上所述的应用中，是将贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂或生物肥料喷洒在植物土壤中。
在本发明中，所述植物土壤包括盐碱地土壤。
与现有技术相比，本发明技术方案的有益效果为：
本发明提供了一种贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用，本发明从盐碱地水稻根际分离筛选得到的贝莱斯芽孢杆菌，该菌株不仅具有产铁载体、耐盐耐碱和产植物生长素的能力，还能够显著促进盐碱地水稻生长。经试验证实，该菌株能够提高生长在盐碱地中的水稻的株高、茎粗、水稻地上干重、水稻地下干重和水稻全株干重，是一株耐盐碱的植物促生菌株。
生物保藏信息：
本发明的贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis，于2023年07月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.27879。
附图说明
图1中a为特基拉芽孢杆菌CSJS-1的菌落图，b为贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1的菌落图，c为特基拉芽孢杆菌CSJS-1的显微形态图，d为贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1的显微形态图；
图2中a为特基拉芽孢杆菌CSJS-1的系统发育树，b为贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1的系统发育树；
图3为贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1的产铁载体能力检测结果图；
图4为贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1产IAA能力检测结果。
具体实施方式
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
1、耐盐碱根际促生菌的分离、筛选与鉴定
1.1试验材料
主要试剂与培养基：试验所用试剂均购于天津科密欧化学试剂有限公司。
试验中用到的培养基配方见表1。
表1培养基配方
供试土壤与有机基质：试验所用盐碱土一部分为模拟盐碱土(模拟轻度盐碱土、模拟中度盐碱土)，另一部分为实际盐碱土。模拟盐碱土土壤取自东北农业大学盆栽场，通过加入碳酸钠调节土壤盐含量制备得到模拟盐碱土(含盐量：轻度0.1％，中度0.15％)；实际盐碱土取自黑龙江省大庆市肇源县，基本理化性质见表2。
表2供试土壤的基本理化性质
| 理化性质 | 盆栽土 | 实际盐碱土 | 模拟轻度盐碱土 | 模拟中度盐碱土 |
| pH | 7.45 | 7.81 | 7.92 | 8.47 |
| 含盐量％ | 0.05 | 0.12 | 0.10 | 0.15 |
| SOM％ | 1.59 | 2.02 | 1.59 | 1.56 |
| 速效钾mg/kg | 127.36 | 257.43 | 120.41 | 106.67 |
| 速效磷mg/kg | 21.34 | 42.29 | 20.01 | 15.84 |
供试水稻：水稻品种为五优稻4号(Oryza sativa L.)
1.2、耐盐碱根际促生菌的分离、筛选
根际土壤取自黑龙江省大庆市林甸县盐碱地水稻田，选取生长情况基本一致且生长健壮、无病虫害的水稻，整根挖出，完整采集根系，装入无菌采样袋中低温保存运输。称取10g土样混于装有100mL无菌水的锥形瓶中，在摇床上振荡30min，静置5min后进行梯度稀释，将100μL不同梯度土壤悬液浇注于分别含有0％、0.05％、0.1％、0.15％及0.2％Na2CO3的LB及PDA平板上培养，挑取长势较好的细菌及真菌菌落进行分离纯化。
1.3、菌株显微形态及生理生化特征
观察记录菌落形态。将分离纯化后的细菌进行革兰氏染色，在显微镜下观察菌株形态，并对其进行生理生化特征测定；对真菌采用插片法进行培养，培养3d后将插片取出，在显微镜下观察真菌孢子形态。
采用平板涂布法，待涂布后培养基长出单菌落后，进一步挑取单菌落多次划线进行纯化。将分离的菌株进行一系列促生能力测定，最终筛选出2株促生能力较强的细菌菌株命名为：特基拉芽孢杆菌CSJS-1和贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1。其菌落形态、光学显微镜下的细胞及芽孢形态见图1。
图1结果表明，特基拉芽孢杆菌CSJS-1为长杆状、产芽孢的革兰氏阳性菌，菌落呈白色，光滑，凸起状；贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1为短杆状、产芽孢的革兰氏阳性菌，菌落呈白色、圆形，边缘不规整。
特基拉芽孢杆菌CSJS-1的生理生化特性如下：接触酶(+)、明胶液化(－)、吲哚试验(+)、甲基红(－)、V-P试验(－)、葡萄糖水解(+)、淀粉水解(－)、产氨试验(+)、硝酸盐还原试验(+)、柠檬酸盐试验(+)、纤维素分解试验(+)、亚硝酸还原试验(－)；贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1的生理生化特性如下：接触酶(+)、明胶液化(+)、吲哚试验(+)、甲基红(+)、V-P试验(－)、葡萄糖水解(+)、淀粉水解(+)、产氨试验(+)、硝酸盐还原试验(+)、柠檬酸盐试验(－)、纤维素分解试验(－)、亚硝酸还原试验(－)；其中，(+)表示阳性；(－)表示阴性。
1.4、分子生物学鉴定
将筛选到的2株促生菌送至上海美吉生物公司进行测序。利用BLAST软件对测序结果进行对比分析，即在GenBank中将2株菌PCR扩增后的16S rDNA序列与已知序列进行对比分析，结合其生理生化鉴定，并利用MEGA构建系统发育树。构建系统发育树结果如图2所示。
图2结果表明，细菌特基拉芽孢杆菌CSJS-1与贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1同属于芽孢杆菌属Bacillus sp.。
2、耐盐碱根际促生菌的促生特性分析
2.1、产铁载体特性
将菌株贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1点接在CAS的固体平板上，30℃培养72h，如菌株产生橙黄色晕圈，则说明其具有产生铁载体的能力，然后再进行定量测定。将具有分泌铁载体的能力的贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1接种于LB液体培养基中置于恒温摇床中30℃，150r·min-1震荡培养48h。将培养液转移到离心管中离心，取适量上清液或未接菌培养基上清液与等量的CAS检测液混合，常温反应1h，测定630nm下的OD值。
当蓝色CAS检测平板中的Fe3+与微生物产生的铁载体螯合形成络天青-铁螯合物时，Fe3+就会被平板上的微生物“夺走”，此时即可在微生物的菌落周围形成橘黄色晕圈。
如图3所示，菌株贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1在CAS检测平板上能形成显著的橙黄色晕圈，说明该菌株具有产铁载体的能力。
为了准确的验证贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1分泌嗜铁素的能力，进一步对贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1进行了嗜铁素定量测定，即将上述上清液与与等量CAS检测液混合反应后在630nm下测定的OD值为As，未接菌培养基上清液与等量CAS检测液混合反应后的OD值为Ar，铁载体合成率(SU)＝[(Ar-As)/Ar]×100％。
结果显示，贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1分泌铁载体合成率可达72.32％。
2.2、产吲哚乙酸(IAA)特性
将筛选出的菌种贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1接种于含有100mg·L-1L-色氨酸5mL LB液体培养基中，置于恒温摇床中30℃、150r·min-1震荡培养48h，然后将培养液离心，取25mL上清液，加入2mL Salkowski显色液，测定530nm下的OD值，在标准曲线上计算出的IAA产量，对照组(CK)为未接菌培养基上清液。
图4结果表明，贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1通过吲哚-3-丙酮酸途径将色氨酸转变为IAA，而在无机酸存在下，合成的吲哚乙酸又能与FeCl3作用，生成红色的螯合物。为了更好地体现菌株的产IAA能力，对菌株其进行了产IAA定量检测，贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1产生IAA产量可达25.38mg·L-1。
3、耐盐碱根际促生菌的生长特性分析
3.1、菌株耐盐性
将筛选到的促生菌特基拉芽孢杆菌CSJS-1与贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1分别接种于含质量体积百分数为0.05％、0.1％、0.15％、0.2％及0.25％Na2CO3的LB培养基平板上，观察株菌的生长情况。结果见表3。
表3 2株促生菌在不同盐浓度培养基上的生长情况
| 盐浓度 | 特基拉芽孢杆菌CSJS-1 | 贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1 |
| 0.05％ | + | + |
| 0.10％ | + | + |
| 0.15％ | + | + |
| 0.20％ | - | - |
| 0.25％ | - | - |
注：表中“+”表示菌株正常生长，“-”表示无法生长。
表3结果表明，在盐浓度为0.05％、0.10％及0.15％的培养基中，特基拉芽孢杆菌CSJS-1与贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1均具有一定的耐盐能力。
3.2、菌株耐碱性
将筛选到的促生菌特基拉芽孢杆菌CSJS-1与贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1分别接种于pH为8、9、10、11及12的LB培养基平板上，观察株菌的生长情况。结果见表4。
表4 2株促生菌在不同pH培养基上的生长情况
| pH | 特基拉芽孢杆菌CSJS-1 | 贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1 |
| 8 | + | + |
| 9 | + | + |
| 10 | + | + |
| 11 | + | + |
| 12 | - | - |
注：表中“+”表示菌株正常生长，“-”表示无法生长。
表4结果表明，特基拉芽孢杆菌CSJS-1与贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1在pH为8、9、10的培养基中均能正常生长，表明上述2株菌株均具有一定的耐碱能力。
4、贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1对水稻秧苗的作用
将贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1接种于LB液体培养基中，30℃摇床培养48h，离心弃上清，沉淀用无菌水重悬后，使菌液的OD600为1.4，取50mL菌液，用无菌水配成500mL菌悬液，将菌悬液喷洒于含有模拟中度盐碱土的标准水稻育秧盘(30cm×60cm)中，分别在水稻播种前、秧苗1叶1心、2叶1心期施用，共施用3次，每次施用时，即在30cm×60cm标准水稻育秧盘喷洒菌悬液500mL，同时对照组用500mL无菌水喷洒标准水稻育秧盘。取30天水稻秧苗，测定其生长指标，结果见表5。
表5贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1对水稻秧苗生长指标的影响
注：同列数据后不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。
表5结果表明，施用贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1的处理组水稻秧苗各项指标显著优于处理组，其地下部分干重较对照组提高105.4％，壮苗指数较对照组提高110.6％，因此贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1促进了盐碱地中水稻的生长。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一株贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌RGPB-1，分类命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2023年07月13日，保藏编号为CGMCCNo.27879。
2.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂包括权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或由权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌制备得到。
3.一种植物促生长剂，其特征在于，所述植物促生长剂含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或由权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌制备得到。
4.一种生物肥料，其特征在于，所述生物肥料含有权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌或由权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌制备得到。
5.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌、权利要求2所述菌剂、权利要求3所述植物促生长剂或权利要求4所述生物肥料在产铁载体中的应用。
6.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌、权利要求2所述菌剂、权利要求3所述植物促生长剂或权利要求4所述生物肥料在产植物生长素中的应用。
7.权利要求1所述贝莱斯芽孢杆菌、权利要求2所述菌剂、权利要求3所述植物促生长剂或权利要求4所述生物肥料在促进植物生长中的应用。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述植物生长素包括吲哚乙酸。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述植物包括为盐碱胁迫下的植物。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述植物包括水稻。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410074838.9A CN117903986A (zh) | 2024-01-18 | 2024-01-18 | 贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410074838.9A CN117903986A (zh) | 2024-01-18 | 2024-01-18 | 贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117903986A true CN117903986A (zh) | 2024-04-19 |
Family
ID=90690624
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410074838.9A Pending CN117903986A (zh) | 2024-01-18 | 2024-01-18 | 贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117903986A (zh) |
-
2024
- 2024-01-18 CN CN202410074838.9A patent/CN117903986A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111019856B (zh) | 玫瑰色考克氏菌sdb9及其制备方法和应用 | |
| CN114875016B (zh) | 一种适合荧光假单胞菌的制剂化载体及其菌剂 | |
| CN113755382A (zh) | 一株阿氏芽孢杆菌ndfy-1及其应用 | |
| CN117603886B (zh) | 一种耐盐碱根际促生菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN113913331B (zh) | 一种产聚谷氨酸耐盐碱的短小芽孢杆菌及其应用 | |
| CN109456915B (zh) | 一种沙福芽孢杆菌株x3及其应用 | |
| CN117106614B (zh) | 一株根际细菌青岛假单胞菌yim b08402和其微生物菌剂及应用 | |
| CN102747006B (zh) | 一种解钾菌及其制备方法和应用 | |
| CN111484947B (zh) | 一种耐高温的解磷固氮芽孢杆菌及其应用 | |
| CN109652340B (zh) | 一种大豆专用多功能促生菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN109486705B (zh) | 一种苍白假芽孢杆菌株x21及其应用 | |
| US11805783B2 (en) | Growth-promoting bacterial agent capable of improving content of soybean oil, preparation method and use thereof | |
| CN115029278B (zh) | 一株巨大芽孢杆菌及其促作物生长的应用 | |
| CN111793585B (zh) | 布氏乳杆菌及其培养法和在农业种植中的应用 | |
| CN111662846B (zh) | 一种溶磷菌p5及其发酵产物、菌剂与应用 | |
| CN112481169B (zh) | 一种耐盐碱泌铵型自生固氮菌株及其应用 | |
| CN117586925B (zh) | 特基拉芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用 | |
| CN110241040B (zh) | 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用 | |
| CN117903986A (zh) | 贝莱斯芽孢杆菌、菌剂、植物促生长剂、生物肥料与应用 | |
| CN117431195B (zh) | 一种耐盐碱的促生菌、促生菌菌剂及其应用 | |
| CN116676227B (zh) | 白色伯克霍尔德氏菌、菌剂及其应用以及促进植物生长的方法 | |
| CN114774311B (zh) | 黄微杆菌及其在促进作物生长以及提高作物耐寒性能中的应用 | |
| CN116286437B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌2-20及其应用 | |
| CN115287210B (zh) | 一株自生固氮细菌及其应用 | |
| CN111484943B (zh) | 一种耐高温的促生根芽孢杆菌及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |