CN117881962A - 用于蛋白糖谱表征的标准品 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种通过使用作为糖蛋白标准品的拟糖蛋白来使信号相对化的方法，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，以及涉及所述拟糖蛋白的相应用途。由此，关于特定聚糖结构(A)是否存在于目标蛋白上的陈述是可能得。公开了在诸如癌症、自身免疫性疾病或炎性疾病的疾病诊断中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种通过使用作为糖蛋白标准品的拟糖蛋白来使信号相对化的方法，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个，优选地4个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，以及涉及所述拟糖蛋白的相应用途。由此，关于特定聚糖结构(A)是否存在于目标蛋白上的陈述是可能得。公开了在诸如癌症、自身免疫性疾病或炎性疾病的疾病诊断中的应用。
背景技术
聚糖存在于多种不同的蛋白质上，在蛋白上它们对蛋白质运输、稳定性和折叠有影响，最终改变蛋白质的生物化学和生物物理性质。此外，聚糖可介导蛋白水解模式或直接介导配体-受体相互作用、致癌信号转导、免疫识别、迁移以及细胞-细胞和细胞-基质粘附两者。因此，特定聚糖可对肿瘤细胞发挥选择性优势。因此，可将特定聚糖的存在或特定蛋白质上特定聚糖的存在用作，例如用于癌症诊断的生物标志物。
可以通过使用特异性结合特定聚糖结构的结合分子来分析聚糖结构。除了对聚糖结构特异的抗体之外，也可以使用凝集素。凝集素是对其它分子的一部分的糖基高度特异的碳水化合物结合蛋白。这些结合分子可以用在如酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫凝集素测定(ELLA)、磁性ELLA(MELLA)的测定中以分析特定聚糖结构的存在与否。
然而，通过应用这些方法获得的信号需要通过(阳性)对照或标准品进行相对化，以允许有效陈述所述特定聚糖结构的存在与否或在样品中对其定量。可商购的糖蛋白标准品仅含有一种聚糖结构，其与目标聚糖结构不相同，即这些标准品不能用于评估目标蛋白质上与疾病相关的聚糖结构的存在与否。因此，包含特定聚糖结构的蛋白质标准品不容易获得。获得这种对照品的一种可能性是将目标聚糖结构与目标蛋白质缀合。然而，这是复杂的、劳动密集的且昂贵的。此外，对于每种新的目标聚糖结构和目标蛋白质的组合，必须重复该过程。
因此，对可靠、廉价和通用的糖蛋白标准品存在持续的需求。本发明旨在解决这种需要。
发明内容
通过如权利要求和本文所述的实施方案中所限定的主题解决了这种需要。
本发明人惊奇地发现，不必提供这类修饰的(糖)目标蛋白来使从确定信号(1)中获得的信号相对化，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，而是可以将拟糖蛋白用作标准品。该标准品提供了从确定实际上包含在拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得的信号(2)。该拟糖蛋白包含通过生物素结合到至少一个预定义的聚糖决定簇上的链霉亲和素分子，该聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)。因此，链霉亲和素可以被看作拟糖蛋白的支架，其本身充当用于相对化的标准品。如实施例中所示，可以将负载生物素化的聚糖结构(A)的链霉亲和素用作标准品。
因此，本发明涉及一种用于使信号(1)相对化的方法，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述方法包括：将从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得的信号与信号(2)进行比较，所述信号(2)从确定实际上包含在拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，从而使所述信号(1)针对所述信号(2)相对化，反之亦然。
此外，本发明涉及一种用于使从确定被怀疑存在于目标蛋白质上的聚糖结构(A)中获得的信号(1)相对化的方法，所述方法包括将从确定被怀疑存在于所述目标蛋白质上的所述聚糖结构(A)中获得的信号与信号(2)进行比较，所述信号(2)从确定实际上包含在作为标准品的拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素-链霉亲和素相互作用与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，其中相对化包括将信号(1)与来自标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关(in relation)，从而使所述信号(1)针对所述信号(2)相对化，反之亦然。
本发明进一步涉及拟糖蛋白用于使信号(1)针对信号(2)相对化的用途，所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇实际上包含被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过链霉亲和素结合分子与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)。
此外，本发明涉及作为标准品的拟糖蛋白用于使信号(1)针对信号(2)相对化的用途，所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇实际上包含被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素-链霉亲和素相互作用与至少一个预先定义的包含所述聚糖结构(A)的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，其中相对化包括将信号(1)与来自标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关。
相对化可以包括将信号(1)与来自标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关。有利地，通过这种比较，信号(1)针对所述信号(2)相对化，反之亦然。
相对化包括将从确定怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得的信号与信号(2)进行比较，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，(i)其中，如果信号(1)低于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)不存在于所述目标蛋白上，或(ii)其中，如果信号(1)等于或高于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
相对化可进一步包括将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)的浓度系列中获得。
所述浓度系列可包括对应于预定阈值浓度的浓度，高于该预定阈值浓度时，已知所述聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
信号可以是信号强度。
可以通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫凝集素测定(ELLA)、磁性ELLA(MELLA)获得信号(1)和信号(2)，优选ELLA或MELA。
所述聚糖结构(A)可以选自：核心岩藻糖、触角岩藻糖、含有Fucα1-6GlcNAc-N-Asn的N-连接的低聚糖、Fucα1-6/3GlcNAc、α-L-Fuc、Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、Fucα1-2Gal、Fucα1-6GlcNAc、Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc、支链N-连接的六糖(hexa-saccharide)、Manα1-3Man、α-D-Man、(GlcNAcβ1-4)2-4、Galβ1-4GlcNAc、GlcNAcα1-4Galβ1-4GlcNAc、(GlcNAcβ1-4)2-5、Neu5Ac(唾液酸)、Galβ1-3GalNAc-丝氨酸/苏氨酸、Galα1-3GalNAc、Galβ1-6Gal、Galβ1-4GlcNAc、Galβ1-3GalNAc、GalNAcα1-3GalNAc、GalNAcα1-3Gal、GalNAcα/β1-3/4Gal、α-GalNAc、GalNAcβ1-4Gal、GalNAcα1-3(Fucα1-2)Gal、GalNAcα1-2Gal、GalNAcα1-3GalNAc、GalNAcβ1-3/4Gal、GalNAc-Ser/Thr(Tn抗原)、Galβ1-3GalNAc-Ser/Thr(T抗原)、GalNAcβ1-4GlcNAc(LacdiNAc)、α-2,3Neu5Ac(α2-3连接的唾液酸)、α-2,6Neu5Ac(α2-6连接的唾液酸)、α-2,8Neu5Ac(α2-8连接的唾液酸)、唾液酸(α-2,3Neu5Ac、α-2,6Neu5Ac或α-2,8Neu5Ac)、Neu5Acα4/9-O-Ac-Neu5Ac、Neu5Acα2-3Galβ1-4Glc/GlcNAc、Neu5Acα2-6Gal/GalNAc、N-连接双-触角、N-连接的三/四触角、支链β1-6GlcNAc、Galα1-3(Fucα1-2)Galβ1-3/4GlcNAc、Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、NeuAcα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、NeuAcα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、高甘露糖、唾液酸路化易斯a(唾液酸化Lea)抗原、唾液酸化路易斯x(唾液酸化Lex)抗原、路易斯x(Lex)抗原、唾液酸化Tn抗原、唾液酸化T抗原、路易斯y(Ley)抗原、硫酸化核心1聚糖、Tn抗原、T抗原、核心2聚糖、路易斯a(Lea)抗原、(GlcNAcβ1-4)n、β-D-GlcNAc、GalNAc、Gal-GlcNAc、GlcNAc、Galα1-3Gal、Galβ1-3GalNAc、α-Gal、α-GalNAc、(GlcNAc)n、支链(LacNAc)n。
目标蛋白可以是癌症生物标志蛋白质、自身免疫性疾病生物标志蛋白或炎性疾病生物标志蛋白。所述癌症生物标志蛋白可以是卵巢癌生物标志蛋白、乳腺癌生物标志蛋白、结肠直肠癌生物标志蛋白、胰腺癌生物标志蛋白、前列腺癌生物标志蛋白、甲状腺癌生物标志蛋白、肝癌生物标志蛋白、肺癌生物标志蛋白、胃癌生物标志蛋白、睾丸癌生物标志蛋白或膀胱癌生物标志蛋白。所述前列腺癌生物标志蛋白可以是β-结合珠蛋白、TIMP-1、PSA、fPSA或tPSA。
所述聚糖结构(A)的存在可以指示癌症。
附图说明
当分别结合非限制性实例和附图考虑时，参考详细描述将更好地理解本发明。附图示出了：
图1描绘了本发明的示例性实施方案的示例性方案。将MAA-II凝集素和任选的封闭剂(比如BSA)物理吸附在ELISA板孔的底部。使用具有共固定的抗链霉亲和素抗体和辣根过氧化物酶(HRP)的磁性粒子来选择性地找出(fish out)分析物(在这种情况下为聚糖-链霉亲和素生物缀合物)，并且随后将其施加到凝集素-生物识别界面。使用邻苯二胺和过氧化氢形成有色产物2，3-二氨基吩嗪，从而产生光学信号，该种光学信号通过常规ELISA读数器检测(如，λ＝450-490nm)。
图2A描绘了在pH考察期间链霉亲和素(左列)和MAA-II凝集素(右列)的斜率值。图2B示出了描绘使用CM5芯片在pH 4.0乙酸缓冲液中三种不同配体的固定的传感图。
图3描绘了在链霉亲和素修饰的CM5芯片上的抗-链霉亲和素Ab的SCK(单循环动力学)分析。
图4描绘了在一侧(site)具有棱镜(prism)的裸Au SPR芯片(A)，其经(B)11-巯基十一烷酸的自组装单层或(C)羧甲基葡聚糖修饰，分别产生2D和3D基质。由于倏逝波幅指数衰减(红色箭头)，因此与高浓度负电荷、空间障碍和解离阶段中更高的再结合机会一起的3D基质不太适于观察夹心构型(即MAA-II/拟糖蛋白/Ab)的制备。
图5描绘了用于2D构型的测定工作流程，包括在每个步骤之后的表面的示意性呈现(图5A)以及拟糖蛋白(糖缀合物)捕获和结合分析抗-链霉亲和素抗体的传感图(图5B)。
图6描绘了当连接体密度(在2D构型的情况下，即在基质中没有扩散阻挡层)在Au表面附近和在界面上相同时，在平坦表面(如SPR芯片，A)上的模型情况。然而，这种情况对于球形界面(例如MNP，B)是不同的。三个样品的NTA分析显示成功的固定化和与拟糖蛋白的相互作用(C)。
图7描绘了未修饰的MNP(黑线)和MNP+Ab(在使用过量抗体的情况下，浅线)的NTA分析-观察到由固定在表面上的抗体引起的峰最大值的明显增加。
图8描绘了拟糖蛋白(蛋白质标准品)的MS分析，显示了在～13kDa处的峰(单一链霉亲和素单体)的最高强度。
图9描绘了显示其它峰(与图8相比具有较低强度)的MS分析(A)；在具有纯链霉亲和素的样品中不能检测到与生物素化的聚糖相对应的～1030Da的峰(B)，但是，该峰存在于所有其它样品中，即使这些其它样品具有较低的聚糖/链霉亲和素比例，并且在脱盐过程之后，暗示了该聚糖存在于链霉亲和素上(C)-这是已经使用SPR证实的事实。该峰的强度随着聚糖/链霉亲和素比率的增加而增加(D)。ELLBA用于寻找最佳比例，以制备具有饱和密度的聚糖的拟糖蛋白，所述聚糖为竞争性构型，使用未缀合的和生物素化的MAA-II凝集素(E)，其中1+5和更高的比例被证明是最佳的(F)。
具体实施方式
下文详细描述了本发明，并且还将通过所附的实施例和附图进一步阐释本发明。
如果可以获得，现有技术中使用的标准品通常是目标蛋白，这些目标蛋白被怀疑在目标蛋白上的(目标)聚糖结构(A)标记。因此，现有技术中的标准品是包含聚糖结构(A)的目标蛋白本身。然而，合成此类标准品是复杂的、耗时的且昂贵的。因此，本发明旨在提供一种可靠的、廉价的和通用的聚糖结构或糖蛋白标准品，以用于使从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构中获得的信号相对化。
本发明人惊奇地发现，不必提供这样的经修饰的目标(糖)蛋白来使从确定信号(1)中获得的信号相对化，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，而是可以使用拟糖蛋白作为标准品。从确定拟糖蛋白上的聚糖结构(A)中获得的信号(2)允许信号(1)的相对化。该拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，该聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)。因此，可以将链霉亲和素看作拟糖蛋白的支架，目标聚糖结构(A)可以与该支架偶联。
如实施例中所示，可以将负载生物素化的聚糖结构(A)的链霉亲和素作为标准品。这是开发如本文所述的糖缀合物或示例性拟糖蛋白的第一项研究，所述糖缀合物或示例性拟糖蛋白由与至多四个生物素化-聚糖结合的链霉亲和素分子以形成在蛋白质/链霉亲和素支架上具有4个聚糖的拟糖蛋白组成。同时，本发明的概念允许使用生物素化的聚糖制备任何种类的具有存在于链霉亲和素表面上的定义的聚糖结构(A)的拟糖蛋白。然后，这种具有(至多)4个聚糖的拟糖蛋白可以用作用于如采用WO2019/185515A1中公开的MELLA技术确定所述聚糖结构(A)的蛋白质标准品。在一个示例性实施方案中，此类拟糖蛋白能够同时结合凝集素和抗-链霉亲和素抗体，即以夹心构型结合凝集素和抗-链霉亲和素抗体以提供光学信号，该光学信号被认为是使用Glycanostics的用于前列腺癌(以及其他)诊断的MELLA方案可以使来自分析样品的信号相对化的信号(图1)。
因此，本发明涉及一种用于使信号(1)相对化的方法，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述方法包括将从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得的信号与信号(2)进行比较，所述信号(2)从确定实际上包含在拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，从而使所述信号(1)针对所述信号(2)相对化，反之亦然。
此外，本发明涉及一种用于使信号(1)相对化的方法，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述方法包括：将从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得的信号与信号(2)进行比较，所述信号(2)从确定实际上包含在作为标准品的拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素-链霉亲和素相互作用与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，其中相对化包括将信号(1)与来自标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关，从而使所述信号(1)针对所述信号(2)相对化，反之亦然。
本发明进一步涉及拟糖蛋白用于使信号(1)针对信号(2)相对化的用途，所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇实际上包含被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素-链霉亲和素相互作用与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)。
此外，作为标准品的拟糖蛋白用于使信号(1)针对信号(2)相对化的用途，所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇实际上包含被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素-链霉亲和素相互作用与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，其中相对化包括将信号(1)与来自所述标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关。
可以将“相对化”看作描述将一个信号(1)与另一个信号(2)进行比较，从而提供关于如何将信号(1)与信号(2)相关的信息的过程。信号(2)可以看作本发明上下文中的标准。换言之，信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息，例如信号强度，置于背景或相关中。因此，信号(2)可以作为阳性对照，从而提供关于考虑信号(1)是否为阳性所需的信号的信息。或者或另外，信号(2)不仅可以是阳性对照，而且可以是浓度系列的结果，从而允许通过将信号(1)与一系列不同浓度的信号(2)进行比较(相对化)来定量聚糖结构(A)的量。在此上下文中，本发明的方法和用途也可描述为对目标蛋白进行糖谱表征。
与上述一致，“相对化”可以包括将信号(1)与来自标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关。有利地，通过这种比较，信号(1)针对所述信号(2)相对化，反之亦然。
术语“蛋白质的糖谱表征”意指目标蛋白质的碳水化合物结构，如共价连接的碳水化合物的组成和/或结构，如共价连接的碳水化合物的量、存在或缺失。术语“糖谱表征”意指确定目标蛋白质上的碳水化合物结构(如共价连接的碳水化合物的组成和/或结构，如共价连接的碳水化合物的量、存在或缺失)。
由信号(1)和信号(2)提供的信息可以提供聚糖结构(A)是否存在于目标蛋白上的信息。为此目的，将信号(1)(从确定被怀疑存在于所述目标蛋白质上的所述聚糖结构(A)中获得)与标准/信号(2)(从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得)进行比较(相对化)。在信号(1)等于或高于信号(2)的情况下，指示所述聚糖结构(A)被认为存在于目标蛋白上。因此，相对化可以包括将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中，如果信号(1)低于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)不存在于所述目标蛋白上。
否则，如果信号(1)低于信号(2)，则指示所述聚糖结构(A)被认为不存在于目标蛋白上。因此，相关可以包括将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中，如果信号(1)等于或高于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
然而，本发明的方法和用途不限于定性陈述。相反，如果将信号(1)与在一系列不同浓度的拟糖蛋白下测定的一系列信号(2)进行比较，则允许对样品中被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)的量进行定量分析。因此，(在本发明的方法和用途中的)相对化可以包括将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)的浓度系列中获得。
如本文所述的“浓度系列”涉及从确定在两种或更多种不同浓度的拟糖蛋白下的聚糖结构(A)中获得的信号(2)的数据集。该数据集可用于如通过线性回归提供或计算标准曲线，该标准曲线允许从信号(强度)(1)到样品中聚糖结构(A)的实际水平或量的结论。该浓度系列还可以允许设定提供信号(强度)的预定阈值，在该预定阈值处认为聚糖结构(A)存在于目标蛋白上。换言之，浓度系列可以用于设定数据点的基线(阈值)，在该数据点没有向(浓度系列中的)待分析的样品中加入拟糖蛋白。因此，该浓度系列还可以包括对应于预定阈值浓度的浓度，高于该预定阈值浓度时，已知所述聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。在该预定阈值浓度以上，已知所述聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白质上。
如本文所用的“拟糖蛋白”涉及链霉亲和素分子，至少1个且至多4个，即1、2、3或4个，优选4个生物素化的聚糖结构(A)通过生物素-链霉亲和素相互作用非共价地结合到该链霉亲和素分子上。因此，拟糖蛋白通过生物素-链霉亲和素相互作用结合。因此，链霉亲和素充当支架，其可以与期望的聚糖结构(A)偶联。因此，可以提供高度通用的并且可快速获得的拟糖蛋白标准品。因此，优选地，以过量，如至少4:1(聚糖结构(A)：链霉亲和素)、至少5:1、至少7.5:1或至少10:1的摩尔比将聚糖结构(A)加入链霉亲和素中。优选地，以4.5:1至5.5:1的摩尔比，最优选以5:1的摩尔比将聚糖结构(A)加入到链霉亲和素中。
“链霉亲和素”是从细菌阿维丁链霉菌(streptomyces avidinii)纯化的蛋白质。链霉亲和素同四聚体对生物素(也称为维生素B7或维生素H)具有极高的亲和力。生物素与链霉亲和素的结合具有约为10-14mol/L级的解离常数(Kd)，因此它们的结合是自然界中已知的最强的非共价相互作用之一。野生型链霉亲和素的示例性氨基酸序列是：MRKIVVAAIAVSLTTVSITASASADPSKDSKAQVSAAEAGITGTWYNQLGSTFIVTAGADGALTGTYESAVGNAESRYVLTGRYDSAPATDGSGTALGWTVAWKNNYRNAHSATTWSGQYVGGAEARINTQWLLTSGTTEANAWKSTLVGHDTFTKVKPSAASIDAAKKAGVNNGNPLDAVQQ(SEQ ID NO:1)。链霉亲和素的示例性野生型序列也显示于UniProt数据库条目P22629，1991年8月1日的1版中。例如在本文所述的方法或用途的背景下的如本文所用的链霉亲和素也可以包括链霉亲和素突变蛋白。链霉亲和素突变蛋白例如公开于WO2017/186669或WO2014/076277中。本发明的方法和用途中使用的链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白可以衍生自在N-或/和C-末端截短的链霉亲和素变体。本发明优选的多肽包含最小链霉亲和素的氨基酸序列，其N-末端地起始于氨基酸位置10-16的区域，并C-末端地终止于氨基酸位置133-142的区域。这样的链霉亲和素突变蛋白多肽优选对应于突变区之外的最小链霉亲和素，其包含从位置Ala13至Ser139的氨基酸序列，并且任选具有代替Ala13的N-末端甲硫氨酸残基。在本申请中，氨基酸位置的编号始终是指成熟wt-链霉亲和素的编号(Argarana等，Nucleic Acids Res.14(1986),1871-1882,cf.SEQ ID NO:1)，其还以登录号UniProtKB-P22629,1991年8月1日的v1保藏。在本文所述的方法或用途的上下文中，本文所用的“链霉亲和素”也可以涉及除链霉亲和素之外的其它生物素结合部分，例如结合生物素的蛋白质或适体。
链霉亲和素可以具有与SEQ ID NO:1的氨基酸序列基本相同的氨基酸序列。本文所用的链霉亲和素可以具有与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。本文所用的链霉亲和素可由与SEQ ID NO:1具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列组成。
通常，当在本文中使用时，在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“百分比(％)同一性的”或“百分比(％)同一性”是指两个或更多个序列或子序列相同的程度。如果两个序列在被比较的区域上具有相同的氨基酸或核苷酸序列，则它们是“相同的”。当在比较窗口或指定区域上比较和比对最大对应性时，如果两个序列具有指定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸(即，在指定区域上，或当未指定时，在整个序列上，60％同一性，任选地65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％同一性)，则两个序列是“基本上同一的”，如使用以下序列比较算法之一或通过手动比对和目视检查所测量。任选地，同一性存在于长度为至少约30个核苷酸(或10个氨基酸)的区域上，或更优选地存在于长度为100至500或1000或更多个核苷酸(或20、50、200或更多个氨基酸)的区域上。
可以采用例如程序BLASTP，blastp 2.2.5版(2002年11月16日)(参见Altschul等，Nucleic Acids Res，1997)测定序列同源性或序列同一性百分比。在本实施方案中，同源性百分比基于包括前肽序列的完整多肽序列比对(矩阵：BLOSUM 62；间隙罚分：11.1；截止值设置为10-3)，优选地在配对比较中使用野生型蛋白支架作为参考。作为BLASTP程序输出的结果表示的“阳性”(同源氨基酸)数除以程序选定的用于比对的氨基酸总数来计算百分比。
“聚糖”或“聚糖结构(A)”涉及由糖苷连接的单糖组成的化合物，并且还可以指糖缀合物的碳水化合物部分，比如糖蛋白、糖脂、糖RNA(参见，例如Flynn等，Cell,184(12):3109-3124)或蛋白聚糖，即使碳水化合物仅为单糖或低聚糖。
有利地，在本文所述拟糖蛋白中与链霉亲和素结合的聚糖结构(A)是生物素化的。“生物素化”是将生物素共价地连接到蛋白质、核酸或其它分子上，特别是连接到本文所述的聚糖结构(A)上的过程。将聚糖结构(A)生物素化的各种方法是本领域技术人员已知的。例如，生物素化可以基于还原胺化，其中伯胺与醛偶联以形成亚胺或腙(如果伯胺作为酰肼基存在的话)。然后将该亚胺(腙)还原成仲胺，其稳定形成的键(参见下面的方案)。使用该反应步骤，可以容易地将生物素-LC-酰肼与任何碳水化合物的还原端偶联以形成稳定的生物素标记的产物。参见，例如，Grün等，(2006),Analytical Biochemistry,354(1):54-63，在此通过引用以其整体并入。
还可以通过聚乙二醇连接体将生物素连接至聚糖，比如聚糖和生物素之间的三乙二醇醇(PEG3)间隔子。示例性聚糖结构(A)是3'-唾液酸化乳糖胺-PEG3-生物素(单臂，～1100Da)，其是一种在聚糖和生物素之间具有β连接的三乙二醇醇(PEG3)间隔子的生物素化的3'-唾液酸化N-乙酰基乳糖胺(LacNAc＝LN＝Galβ1，4GlcNAc)。这种生物素化的聚糖可从例如Sussex Chemicals,Ottawa,Canada商购获得。
本发明不限于任何特定的聚糖结构(A)。相反，拟糖蛋白的模块性构建允许实际上任何聚糖结构(A)向本文所述的拟糖蛋白的支架-链霉亲和素上的非共价附着(attachment)。示例性聚糖结构(A)包括但不限于，核心岩藻糖、触角岩藻糖、含有Fucα1-6GlcNAc-N-Asn的N-连接的低聚糖、Fucα1-6/3GlcNAc、α-L-Fuc、Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、Fucα1-2Gal、Fucα1-6GlcNAc、Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc、支链N-连接的六糖、Manα1-3Man、α-D-Man、(GlcNAcβ1-4)2-4、Galβ1-4GlcNAc、GlcNAcα1-4Galβ1-4GlcNAc、(GlcNAcβ1-4)2-5、Neu5Ac(唾液酸)、Galβ1-3GalNAc-丝氨酸/苏氨酸、Galα1-3GalNAc、Galβ1-6Gal、Galβ1-4GlcNAc、Galβ1-3GalNAc、GalNAcα1-3GalNAc、GalNAcα1-3Gal、GalNAcα/β1-3/4Gal、α-GalNAc、GalNAcβ1-4Gal、GalNAcα1-3(Fucα1-2)Gal、GalNAcα1-2Gal、GalNAcα1-3GalNAc、GalNAcβ1-3/4Gal、GalNAc-Ser/Thr(Tn抗原)、Galβ1-3GalNAc-Ser/Thr(T抗原)、GalNAcβ1-4GlcNAc(LacdiNAc)、α-2,3Neu5Ac(α2-3连接的唾液酸)、α-2,6Neu5Ac(α2-6连接的唾液酸)、α-2,8Neu5Ac(α2-8连接的唾液酸)、唾液酸(α-2,3Neu5Ac、α-2,6Neu5Ac或α-2,8Neu5Ac)、Neu5Acα4/9-O-Ac-Neu5Ac、Neu5Acα2-3Galβ1-4Glc/GlcNAc、Neu5Acα2-6Gal/GalNAc、N-连接双-触角、N-连接的三/四触角、支链β1-6GlcNAc、Galα1-3(Fucα1-2)Galβ1-3/4GlcNAc、Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、NeuAcα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、NeuAcα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、高甘露糖、唾液酸化路易斯a(唾液酸化Lea)抗原、唾液酸化路易斯x(唾液酸化Lex)抗原、路易斯x(Lex)抗原、唾液酸化Tn抗原、唾液酸化T抗原、路易斯y(Ley)抗原、硫酸化核心1聚糖、Tn抗原、T抗原、核心2聚糖、路易斯a(Lea)抗原、(GlcNAcβ1-4)n、β-D-GlcNAc、GalNAc、Gal-GlcNAc、GlcNAc、Galα1-3Gal、Galβ1-3GalNAc、α-Gal、α-GalNAc、(GlcNAc)n、支链(LacNAc)n。
本文所用的碳水化合物缩写包括：N-乙酰神经氨酸的“Neu5Ac”；岩藻糖的“Fuc”，N-乙酰基半乳糖胺的“GalNAc”；N-乙酰基葡糖胺的“GlcNAc”；半乳糖的“Gal”(如Varki A,Cummings RD,Esko JD,Freeze HH,Stanley P,Bertozzi CR,Hart GW,E.ME.,Essentialsof Glycobiology,第2版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor(NY),2009)。
此外，如本文所用，以下术语定义如下：
“核心岩藻糖”意指岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C6原子连接，
“触角岩藻糖”意指岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，或者岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与相邻岩藻糖的C2原子连接，
“含有Fucα1-6GlcNAc-N-Asn的N-连接的低聚糖”意指具有岩藻糖的寡糖，所述岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C6原子连接，所述N-乙酰葡糖胺通过N-糖苷键与天冬酰胺连接，
“Fucα1-6/3GlcNAc”意指岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C6(C3)原子连接，
“α-L-Fuc”意指α-L-岩藻糖，
“Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc”意指岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C2原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接；同时，第二岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，
“Fucα1-2Gal”意指岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C2原子连接，
“Fucα1-6GlcNAc”意指岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C6原子连接，
“Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc”意指甘露糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子相连，所述N-乙酰葡糖胺通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子相连，
“支链N-连接的六糖”意指由通过N-糖苷键与天冬酰胺连接的若干糖组成的非线性聚糖
“Manα1-3Man”意指甘露糖通过其C1原子的α-糖苷键与甘露糖的C3原子连接，
“α-D-Man”指α-D-甘露糖，
“(GlcNAcβ1-4)2-4”意指N-乙酰葡糖胺通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子重复地连接，
“Galβ1-4GlcNAc”意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“GlcNAcα1-4Galβ1-4GlcNAc”意指N-乙酰葡糖胺通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C4原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“N-乙酰葡糖胺”意指葡糖胺和乙酸之间的酰胺，
“(GlcNAcβ1-4)2-5”意指N-乙酰葡糖胺通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子重复地连接，
“Neu5Ac”(或唾液酸)意指N-乙酰神经氨酸，
“Galβ1-3GalNAc-丝氨酸/苏氨酸”意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，所述N-乙酰葡糖胺与丝氨酸/苏氨酸连接，
“Galα1-3GalNAc”意指半乳糖通过其C1原子α-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3原子连接，
“Galβ1-6Gal”意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与半乳糖的C6原子连接，
“Galβ1-4GlcNAc”意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，
“Galβ1-3GalNAc”意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3原子连接，
“GalNAcα1-3GalNAc”意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3原子连接，
“GalNAcα1-3Gal”意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C3原子连接，
“GalNAcα/β1-3/4Gal”意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的α-或β-糖苷键与半乳糖的C3或C4原子连接，
“α-GalNAc”意指α-半乳糖胺和乙酸之间的酰胺，
“GalNAcβ1-4Gal”意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的β-糖苷键与半乳糖的C4原子连接，
“GalNAcα1-3(Fucα1-2)Gal”意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C3原子连接，同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C2原子连接，
“GalNAcα1-2Gal”意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C3原子连接，
“GalNAcα1-3GalNAc”意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3原子连接，
“GalNAcβ1-3/4Gal”意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的β-糖苷键与半乳糖的C3或C4原子连接，
“GalNAc-Ser/Thr”(或Tn抗原)意指N-乙酰半乳糖胺通过O-糖苷键与丝氨酸/苏氨酸连接，
“Galβ1-3GalNAc-Ser/Thr”(T抗原或Thomsen-Friedenreich抗原)意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3原子连接，所述N-乙酰半乳糖胺通过O-糖苷键与丝氨酸/苏氨酸连接，
“GalNAcβ1-4GlcNAc”(或LacdiNAc)意指N-乙酰半乳糖胺通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“α2-3Neu5Ac”(或α2-3-连接的唾液酸)意指N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与相邻糖的C3原子连接，
“α2-6Neu5Ac”(或α2-6-连接的唾液酸)意指N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与相邻糖的C6原子连接，
“α2-8Neu5Ac”(或α2-8-连接的唾液酸)意指N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与相邻N-乙酰神经氨酸的C8原子连接，
“Neu5Acα4/9-O-Ac-Neu5Ac”意指N-乙酰基神经氨酸通过其C4原子的α-糖苷键与相邻O-乙酰N-乙酰神经氨酸的C9原子连接，
“Neu5Acα2-3Galβ1-4Glc/GlcNAc”意指N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与半乳糖的C3原子相连，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与葡萄糖或N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“Neu5Acα2-6Gal/GalNAc”意指N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与半乳糖或N-乙酰半乳糖胺的C6原子连接，
“N-连接的双触角”意指具有通过N-糖苷键与天冬酰胺连接的两个触角(糖链)的非线性聚糖，
“N-连接的三/四触角”意指具有通过N-糖苷键与天冬酰胺连接的三/四个触角(糖链)的非线性聚糖，
“支链β1-6GlcNAc”意指N-乙酰葡糖胺通过其C1原子的β糖苷键与相邻糖的C6原子连接，
“Galα1-3(Fucα1-2)Galβ1-3/4GlcNAc”意指半乳糖通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C3原子相连，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3或C4原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C2原子连接，
“Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc”意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“NeuAcα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc”意指N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与半乳糖的C3原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc”意指岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C2原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接；同时，第二岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc”意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，
“NeuAcα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc”意指N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与半乳糖的C3原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺C4原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，
“Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc”意指岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C2原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接；同时，第二岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，
“高甘露糖”意指含有多于三个甘露糖单元的聚糖，
“唾液酸化路易斯a”(唾液酸化Lea)抗原为Neu5Acα2-3/6Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc，其含义是N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与半乳糖的C3或C6原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“唾液酸化路易斯x”(唾液酸化Lex)抗原为Neu5Acα2-3/6Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc，其含义是N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与半乳糖的C3或C6原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，
“路易斯x”(Lex)抗原为“Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc”，其含义是半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，
“唾液酸化Tn抗原”为“Neu5Acα2-3/6GalNAc-Ser/Thr”，其含义是N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3或C6原子连接，所述N-乙酰半乳糖胺通过O-糖苷键与丝氨酸/苏氨酸连接，
“唾液酸化T抗原”为“Neu5Acα2-3/6Galβ1-3GalNAc-Ser/Thr”，其含义是N-乙酰神经氨酸通过其C2原子的α-糖苷键与半乳糖的C3或C6原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3原子连接，所述N-乙酰半乳糖胺通过O-糖苷键与丝氨酸/苏氨酸连接，
“路易斯y”(Ley)抗原为“Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc”，其含义是岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C2原子连接，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接；同时，第二个岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接，
“硫酸化核心1聚糖”是一种基于T抗原的硫酸化延伸形式的聚糖，
“核心2聚糖”是一种基于延伸形式的Galβ1-3(GlcNAcβ1-6)GalNAc-Ser/Thr的聚糖，其含义是一种延伸形式的聚糖，其具有经由半乳糖的C1原子的β-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3原子连接的半乳糖，同时N-乙酰葡糖胺通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C6原子连接，所述N-乙酰半乳糖胺与丝氨酸/苏氨酸连接，
“路易斯a”(Lea)抗原为Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc，其含义是半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C3原子连接；同时岩藻糖通过其C1原子的α-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接，
“(GlcNAcβ1-4)n”意指N-乙酰葡糖胺通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子重复地连接，
“β-D-GlcNAc”意指β-D-葡糖胺和乙酸之间的酰胺，
“GalNAc”意指半乳糖胺和乙酸之间的酰胺，即N-乙酰半乳糖胺，
“Gal-GlcNAc”意指半乳糖通过非特异性连接与N-乙酰葡糖胺连接，
“GlcNAc”意是指葡糖胺和乙酸之间的酰胺，即N-乙酰葡糖胺。
“Galα1-3Gal”意指半乳糖通过其C1原子的α-糖苷键与半乳糖的C3原子连接，
“Galβ1-3GalNAc”意指半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰半乳糖胺的C3原子连接，
“α-Gal”意指α-半乳糖，
“α-GalNAc”意指α-D-半乳糖胺和乙酸之间的酰胺，
“(GlcNAc)n”意指N-乙酰葡糖胺通过非特异性连接(linkage)与N-乙酰葡糖胺连接，
“支链(LacNAc)n”为Galβ1,4-GlcNAc的支链和重复形式，其含义是半乳糖的支链和重复形式，所述半乳糖通过其C1原子的β-糖苷键与N-乙酰葡糖胺的C4原子连接。
如本文所用的“信号”涉及通过确定(被怀疑存在在)目标蛋白上的聚糖结构(A)获得的信息。该信息通常是例如在特定波长处的吸收或在特定波长处的荧光发射的信号强度。优选地，信号强度取决于存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)的量。因此，信号也可以看作提供了关于目标蛋白的糖普表征的信息。
本文所述的拟糖蛋白在本发明的方法和用途中用作标准品。这些涉及确定提供信号(1)或信号(2)的聚糖结构(A)。如本文所用，“确定聚糖结构(A)”涉及适于分析特定聚糖结构(A)是否存在于目标蛋白上，优选适于确定(样品中)聚糖结构(A)的量的任何方法。换言之，也可以将确定聚糖结构(A)看作对怀疑在其上具有聚糖结构(A)的目标蛋白质进行糖普表征的方法。因此，该方法提供了这样一种信号，该信号是相对化的(信号(1))或者是用于相对化的基础(信号(2))。合适的方法包括但不限于酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫凝集素测定(ELLA)、磁性ELLA(MELLA)，优选为ELLA或MELLA。因此，可以通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫凝集素测定(ELLA)、磁性ELLA(MELLA)获得信号(1)和信号(2)，优选ELLA或MELLA。优选地，信号(1)和信号(2)在相同条件下获得，所述相同条件包括相同浓度的相同试剂。然而，本发明不限于这些方法，而是可以包括涉及聚糖分析的任何其他测定方法。
可以将ELISA看作是各种相似或ELISA-样测定的起点。ELISA基于免疫球蛋白与目标分子(比如被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A))的特异性相互作用，其中该种特异性相互作用允许产生这样一种信号，该信号仅在目标分子存在时产生，并且信号(强度)对应于分析样品中目标分子的浓度。如ELISA、ELLA和MELLA的测定是本领域技术人员已知的。各种ELISA变形，比如夹心ELISA、竞争性ELISA和反向ELISA也是本领域已知的。在本发明的上下文中，初级免疫球蛋白，即结合目标分子的免疫球蛋白，结合被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)。因此，初级免疫球蛋白，优选抗体或其片段，特异性结合目标聚糖结构(A)。在ELLA中，初级免疫球蛋白被特异性结合聚糖结构(A)的凝集素替代。磁性ELLA(MELLA)是WO2019/185515A1中描述的ELLA的进一步发展，在此通过引用以其整体并入。可以将这些测定的读数，例如信号强度，看作本发明上下文中的信号(1)或信号(2)。通常，读出是偶联至第二免疫球蛋白的酶的酶促反应的结果，所述第二免疫球蛋白结合至初级免疫球蛋白、目标蛋白(目标糖蛋白的蛋白质骨架)或凝集素。或者，酶可以(直接)与凝集素偶联。经常使用的读数包括但不限于变为琥珀色以检测经常用作缀合蛋白的HRP(辣根过氧化物酶)的OPD(邻苯二胺二盐酸盐)；在检测HRP时变蓝，加入硫酸或磷酸后变黄的TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)；在检测HRP时变成绿色的ABTS(2,2-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐)；或在检测碱性磷酸酶时变成黄色的PNPP(p-硝基苯基磷酸,二钠盐)。除了这些比色读数之外，也可以使用放射性标记、荧光标记、电化学标记、化学发光标记、比色法或甚至无标记形式(例如SPR)。另一个实例是10-乙酰基-3,7-二羟基吩噁嗪(红试剂)检测过氧化氢(H2O2)或过氧化物酶活性。在过氧化物酶存在的情况下，/>红色试剂与H2O2以1:1的化学计量反应以产生红色荧光氧化产物：试卤灵。试卤灵具有约571nm和585nm的最大激发和发射。
当用于本文时术语“凝集素”指碳水化合物结合蛋白。凝集素通常对一种或多种碳水化合物部分是高度特异性的(例如，其特异性地与其它分子的末端糖苷残基反应，所述其它分子例如糖蛋白的一种或多种聚糖(例如糖蛋白的支链糖分子，例如本发明含义内的靶多肽和本文中表1所述的生物标志物)。凝集素是本领域公知的，技术人员容易获得以确定哪种凝集素可以用于结合一种或多种目标碳水化合物部分，如附着于蛋白质的聚糖的一种或多种碳水化合物部分。本文描述了本发明上下文中应用的优选凝集素。术语“凝集素”也包括Siglecs(结合唾液酸的免疫球蛋白样凝集素)，半乳凝素(特异性结合含β-半乳糖苷的聚糖的凝集素)和选择素(结合唾液酸化路易斯X(SLex)决定簇NeuAcα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc和相关的唾液酸化的岩藻糖化的聚糖)。值得注意的是，本文使用的术语“凝集素”也指聚糖结合抗体。因此，当在本文使用时，术语“凝集素”也可包括凝集素、Siglec、半乳凝素、选择素等，以及聚糖结合抗体。凝集素还可以包括识别聚糖的DNA/RNA适体。
凝集素可以从豆科植物的种子获得，也可以从其它植物和动物来源获得。凝集素可以含有特定单糖和低聚糖(例如糖蛋白的聚糖)的结合位点。它们可以通过与膜糖蛋白中的特定糖残基结合而凝集细胞。优选地，本发明的凝集素选自：朝鲜槐凝集素II(MAA II)；刀豆凝集素A(Con A)；橙黄网孢盘菌凝集素(AAL)；西洋接骨木(SNA-I)凝集素；如本文所定义的多花紫藤凝集素(WFL)。
本发明进一步优选的凝集素示于下表1。
本发明特别优选的凝集素是具有下列UniProtKB登录号的凝集素：P0DKL3、P02866、P18891、O04366、A0A218PFP3、Q945S3、Q00022、Q6YNX3、Q71QF2、P02872、P18670、Q2UNX8、Q8L5H4、A0A089ZWN7、P05045、P19588、P83410、P17931、P56470、P24146、Q41263、Q39990、Q2F1K8、G9M5T0、B3XYC5、P02870、P19664、P0DKL3、P49300、A9XX86、Q40423、P16300、P05088、P05087、Q9AVB0、P02867、O24313、Q9SM56、P06750、B9SPG3、Q9BZZ2、P20916、Q9NYZ4、Q96RL6、P05046、P93535、P02876、P10968、P10969、P22972或P56625以及它们相应的成熟形式。
本发明的示例性凝集素还包括：
朝鲜槐凝集素II(MAA II)是来自朝鲜槐种子的血凝素同工凝集素。其是识别含有通过α2-3键与相邻半乳糖残基连接的末端唾液酸的低聚糖的唾液酸结合凝集素。结合三糖序列Neu5Acα2-3-Gal-β-1-4-GlcNAc。优选地，MAAII具有SEQ ID NO:2(或其成熟形式)。
刀豆凝集素A(Con A)是一种最初从刀豆-矮性刀豆(Canavalia ensiformis)提取的D-甘露糖特异性凝集素。优选地，Con A具有SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4(Con A，成熟形式)。
橙黄网孢盘菌凝集素(AAL)是一种自橙黄网孢盘菌(橙皮蘑菇)提取的岩藻糖特异性凝集素。优选地，AAL具有SEQ ID NO:5(或其成熟形式)。AAL的分离描述于，例如(Debray等，Kochibe等)。
西洋接骨木(SNA-I)凝集素是从西洋接骨木(欧洲接骨木)中提取的Neu5Acα2-6)Gal/GalNAc特异性凝集素。优选地，SNA-I具有SEQ ID NO:6(或其成熟形式)。
多花紫藤凝集素(WFL)是从多花紫藤(日本紫藤)中提取的凝集素。优选地，WFL具有SEQ ID NO:7(或其成熟形式)。
此外，本发明含义内的合适凝集素可明确包括本文公开的凝集素的翻译后加工形式和成熟形式。
术语“抗体”还包括但不限于、但涵盖单克隆、单特异性、聚-或多-特异性抗体比如双特异性抗体、人源化、骆驼化、人的、单链的、嵌合的、合成的、重组的、杂交的、突变的、移植的和体外产生的抗体，其中嵌合或人源化抗体是优选的。术语“人源化的抗体”通常被定义为其中HC和LC的特异性编码CDR已经被转移到适当的人可变框架(“CDR移植”)的抗体。术语“抗体”还包括scFv、单链抗体、双体或四体、结构域抗体(dAb)和纳米抗体。就本发明而言，术语“抗体”应还包含具有若干抗原结合位点的双、三或多聚体抗体或者双、三或多功能抗体。所述术语还包括抗原结合部分。术语“抗体”还包括FN3支架、adnectin、亲和体(affibody)、anticalin、avimer、双环肽、DARPin、Kunitz结构域、Obody或诸如DNA、RNA或肽适体的适体。
本发明优选的抗体包括但不限于抗-PSA、抗-AFP、抗-MUC16、抗-WFDC2、抗-MUC1、抗-ERBB2、抗-CEACAM5、抗-FUT3或抗-TG抗体等。本发明进一步优选的抗体示于下表1中。
此外，本文中所用术语“抗体”还涉及本文所述抗体(包括片段)的衍生物。抗体的“衍生物”包含由引入氨基酸残基置换、缺失或添加而被改变的氨基酸序列。此外，衍生物涵盖由任意类型的分子共价连接到抗体或蛋白质而被修饰的抗体。这样的分子的实例包括糖、PEG、羟基、乙氧基、羧基或氨基，但不限于这些。实际上，所述抗体的共价修饰导致糖基化、聚乙二醇化、乙酰化、磷酸化和酰胺化，而又不限于这些。
目标蛋白质不限于特定蛋白质。相反，由于拟糖蛋白的多功能性，本发明的方法和用途可以用于测定特定聚糖结构(A)是否存在于目标蛋白上。然而，目标蛋白优选是糖蛋白，或者换言之，目标蛋白是被怀疑具有聚糖结构(A)的蛋白。由于目标蛋白上聚糖结构(A)的存在与否对于疾病的诊断或预测可能是重要的，因此优选地，目标蛋白为其糖谱表征与疾病相关的蛋白。本文所用的术语“糖蛋白”(或“糖基化蛋白”)是指含有一个或多个N-、O-、S-或C-共价连接的各种类型的碳水化合物的蛋白，例如，从单糖到支链聚糖(包括它们的修饰形式，比如磺基-或磷酸基团附着)。N-连接聚糖是与天冬酰胺的-NH2基团结合的碳水化合物。O-连接的聚糖是与丝氨酸、苏氨酸或羟基化氨基酸的-OH基团结合的碳水化合物。S-连接的聚糖是与半胱氨酸的–SH基团结合的碳水化合物。C-连接的聚糖是通过C-C键与色氨酸结合的碳水化合物。
术语“碳水化合物”是指具有化学计量式Cn(H2O)n的化合物(如醛糖和酮糖)。通用术语“碳水化合物”包括单糖、低聚糖和多糖以及通过羰基(糖醇)还原、一个或多个端基向羧酸的氧化、或氢原子、氨基、硫醇基或类似基团对一个或多个羟基的替换而衍生自单糖的物质。碳水化合物还包括这些化合物的衍生物。
如本文已经描述的，目标蛋白上特定聚糖结构(A)的存在可能与诸如癌症、自身免疫性疾病或炎性疾病的特定疾病的诊断有关。已知蛋白质(感兴趣的，即生物标志蛋白)和聚糖结构(A)的一些组合指示疾病。表1中示例性列出了指示疾病的目标蛋白和聚糖的具体组合以及结合特定聚糖结构的抗体或凝集素。因此，本发明的方法和用途可用于诊断诸如癌症、自身免疫性疾病或炎性疾病的疾病。因此，所述聚糖结构(A)的存在可以指示诸如癌症、自身免疫性疾病或炎性疾病的疾病。
在本上下文中，目标蛋白优选地是癌症生物标志蛋白、自身免疫性疾病生物标志蛋白或炎性疾病生物标志蛋白。
如本文所用，“自身免疫性疾病”是指一组以与针对自身组织的抗体产生相关的疾病为特征的疾病。自身免疫性疾病的非限制性实例包括但不限于：桥本氏病、原发性胆汁性肝硬化、系统性红斑狼疮、风湿热、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜和病毒后脑脊髓炎、阿德森氏病、自身免疫性肠病、原发性胆汁性肝硬化、古德帕斯彻氏综合症、桥本氏甲状腺炎、重症肌无力、粘液性水肿、类天疱疮、类风湿性关节炎、Sjogren综合征、交感性眼炎、红斑狼疮的两种形式、甲状腺毒症、溃疡性结肠炎、多发性硬化症、乳糜泻、1型糖尿病、格雷夫斯氏病、炎性肠病和银屑病。
如本文所用，“炎性疾病”是指一组特征为身体的炎性机制的损伤和/或异常功能的疾病。炎性疾病的非限制性实例包括但不限于：坏死性小肠结肠炎、肠胃炎、盆腔炎(PID)、积脓症、胸膜炎、肾盂炎、咽炎、咽峡炎、关节炎、痤疮、尿路感染、寻常痤疮、哮喘、乳糜泻、慢性前列腺炎、结肠炎、憩室炎、肾小球肾炎、脓疱性汗腺炎、过敏、炎性肠病、间质性膀胱炎、肥大细胞活化综合征、肥大细胞增多症、耳炎、盆腔炎疾病、再灌注损伤、风湿热、类风湿性关节炎、鼻炎、结节病、移植排斥、血管炎。
如本文所用，“癌症”是指一组特征在于体内异常细胞不受控制地生长的疾病。未受调节的细胞分裂可导致形成侵入邻近组织并可通过淋巴系统或血流转移至身体的远处部分的恶性肿瘤或细胞。癌症的非限制性实例包括癌症的非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非NSCLC、神经胶质瘤、胃肠癌、肾癌(如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌(如肾细胞癌(RCC))、前列腺癌(如激素难治性前列腺腺癌)、甲状腺癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、胶质母细胞瘤(多形性胶质母细胞瘤)、子宫颈癌、胃癌(stomach cancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌和头颈癌(或肿瘤)、胃癌(gastric cancer)、生殖细胞肿瘤、小儿肉瘤、鼻窦自然杀伤、黑色素瘤(例如，转移性恶性黑色素瘤，如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛门区癌症、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊髓肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症，包括石棉诱导的癌症、病毒相关癌症(例如人乳头瘤病毒(HPV)相关肿瘤)和源自两种主要血细胞谱系中任一种的血液恶性肿瘤(两种主要血细胞谱系即髓细胞系(其产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞和肥大细胞)或淋巴样细胞系(其产生B、T、NK和浆细胞))，比如所有类型的白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，如急性、慢性、淋巴细胞性和/或骨髓性白血病，比如急性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、未分化AML(MO)、成骨髓细胞性白血病(Ml)、成骨髓细胞性白血病(M2；细胞成熟)、早幼粒细胞性白血病(M3或M3变体[M3V])、骨髓单核细胞性白血病(M4或嗜酸性粒细胞增多的M4变体[M4E])、单核细胞性白血病(M5)、红白血病(M6)、成巨核细胞性白血病(M7)、分离的粒细胞肉瘤和绿色瘤；淋巴瘤，比如霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤、间变性(例如Ki 1+)大细胞淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、血管中心淋巴瘤、肠T细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、前体T淋巴母细胞性淋巴瘤、T淋巴母细胞性淋巴瘤；和淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)、外周T细胞淋巴瘤、淋巴母细胞性淋巴瘤、移植后、淋巴增生性疾病、真性组织细胞性淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、成淋巴细胞性淋巴瘤(LBL)、淋巴样谱系血液系统肿瘤、急性成淋巴细胞性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特(Burkitt's)淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性组织细胞性淋巴瘤(DHL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B-成淋巴细胞性淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(CTLC)(也称为蕈样真菌病或塞扎里(Sezary)综合征)和具有Waldenstrom巨球蛋白血症的淋巴浆细胞样淋巴瘤(LPL)；骨髓瘤，比如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、郁积性骨髓瘤(也称为无痛性骨髓瘤)、单发性、浆细胞瘤和多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛发细胞淋巴瘤；骨髓系血液细胞肿瘤、间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；精原细胞瘤、畸胎瘤、中枢和外周神经肿瘤，包括星形细胞瘤、神经鞘瘤；间充质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；和其它肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌和畸胎瘤、淋巴样谱系血液细胞肿瘤，例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞疾病，比如T前淋巴细胞性白血病(T-PLL)，包括小细胞和脑形细胞类型；大颗粒淋巴细胞性白血病(LGL)，优选T细胞类型；a/d T-NHL肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后T细胞淋巴瘤(多形和免疫母细胞性亚型)；血管中心(鼻)T细胞淋巴瘤；头或颈癌、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性骨髓性淋巴瘤，以及上述癌症的任何组合。优选的癌症也示于表1中。
癌症还可以是卵巢癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、睾丸癌或膀胱癌。因此，生物标志蛋白(目标蛋白)可以是卵巢癌生物标志蛋白、乳腺癌生物标志蛋白、结肠直肠癌生物标志蛋白、胰腺癌生物标志蛋白、前列腺癌生物标志蛋白、甲状腺癌生物标志蛋白、肝癌生物标志蛋白、肺癌生物标志蛋白、胃癌生物标志蛋白、睾丸癌生物标志蛋白或膀胱癌生物标志蛋白。
在本发明的含义内的示例性癌症、具有异常糖基化的癌症生物标志物、凝集素、抗体和相应的聚糖修饰也示于下表1中。表1中使用了凝集素缩写：癌症、具有异常糖基化的相应癌症生物标志物、凝集素和抗体。:AAA–欧洲鳗鲡凝集素(Anguilla anguillaagglutinin,UniProtKB登录号:Q7SIC1)、AAL–橙黄网孢盘菌凝集素(Aleuria aurantialectin)、ABA–双孢蘑菇凝集素(Agaricus bisporus agglutinin)、ACA -尾穗苋凝集素(Amaranthus caudatus agglutinin)、AHA–花生凝集素(Arachis hypogaea agglutinin)＝花生凝集素(peanut agglutinin(PNA))、AIA-木波罗凝集素(Artocarpus integrifoliaagglutinin)＝木菠萝凝集素(Jacalin)、AlloA-双叉犀金龟凝集素(Allomyrinadichotoma agglutinin)、AOL–米曲霉凝集素(Aspergillus oryzae lectin)、BanLec–香蕉凝集素(Musa paradisiaca lectin)、BS-I-单叶豆凝集素(Bandeiraea simplicifolialectin)＝单叶加纳籽(豆)凝集素I(Griffonia(Bandeiraea)simplicifolia lectin I)、Con A–刀豆凝集素(Concanavalin A)、DBA–双花扁豆凝集素(Dolichos biflorusagglutinin)、DSA–曼陀罗凝集素(Datura stramonium agglutinin)木菠萝凝集素(Jacalin)、ECL–鸡冠刺桐凝集素(Erythrina cristagalli lectin)、GNA–雪钟花凝集素(Galanthus nivalis agglutinin)、GSA I(GSL I)–单叶加纳籽(豆)凝集素I(Griffonia(Bandeiraea)simplicifolia lectin I)、GSL II-单叶加纳籽(豆)凝集素II(Griffonia(Bandeiraea)simplicifolia lectin II),HHL–朱顶红凝集素(Hippeastrum hybrid(Amaryllis)lectin),HPA–罗马蜗牛凝集素(Helix pomatia agglutinin),LBA–棉豆凝集素(Phaseolus lunatus(利马豆(lima bean),LBA))、LEL–番茄凝集素(Lycopersiconesculentum(番茄(tomato))lectin)、LCA–小扁豆凝集素(Lens culinaris agglutinin)、LTA–翅荚百脉根凝集素(Lotus tetragonolobus lectin),MAA I–朝鲜槐凝集素I(Maackiaamurensis agglutinin I)、MAA II–朝鲜槐凝集素II(Maackia amurensis agglutininII)、MGBL 1-巨噬细胞-半乳糖结合凝集素1、MGBL 2(巨噬细胞-半乳糖结合凝集素2)、NPA–黄水仙凝集素(Narcissus pseudonarcissus(水仙花(Daffodil))lectin),PHA E–菜豆凝集素E(Phaseolus vulgaris agglutinin E)、PHAL-菜豆凝集素L(Phaseolus vulgarisagglutinin L)、PhoSL-翘鳞环锈伞凝集素(Pholiota squarrosa lectin)、PNA–花生凝集素(Peanut agglutinin)、PSL–豌豆凝集素(Pisum sativum lectin)、PTA I–四棱豆凝集素I(Psophocarpus tetragonolobus lectin I)、PTA II-四棱豆凝集素II(Psophocarpustetragonolobus II)、PWM-美洲商陆凝集素(Phytolacca americana)、RCA I–蓖麻凝集素I(Ricinus communis agglutinin I)、RCA II–蓖麻凝集素II(Ricinus communisagglutinin II)、SBA–大豆凝集素(Soybean agglutinin)(大豆凝集素(Glycine maxagglutinin))、SCA–美洲接骨木凝集素(Sambucus canadensis agglutinin)＝西洋接骨木凝集素(Sambucus nigra agglutinin(SNA))、SJA–槐树凝集素II(Sophora japonicaagglutinin II)、SNA–西洋接骨木凝集素(Sambucus nigra agglutinin)、SSA-无梗接骨木凝集素(Sambucus sieboldiana agglutinin)、SSL–南欧丹参凝集素(Salvia sclarealectin)、STL-马铃薯凝集素(Solanum tuberosum lectin)、TJA-I–日本栝楼凝集素I(Trichosanthes japonica agglutinin I)、TJA-II–日本栝楼凝集素(Trichosanthesjaponica agglutinin)(Yamashita等)、TVA-麦胚凝集素(Triticum vulgarisagglutinin)＝WGA–小麦胚芽凝集素(wheat germ agglutinin)、UEA–荆豆凝集素(Ulexeuropaeus agglutinin)、VVA–长柔毛野豌豆凝集素(Vicia villosa lectin)、WFA–多花紫藤凝集素(Wisteria floribunda lectin)、WGA–小麦胚芽凝集素(wheat germagglutinin)＝TVA–麦胚凝集素(Triticum vulgaris agglutinin)。符号“↑”，向上指向的箭头表示相应聚糖或复合物(例如，二聚体、三聚体等)的浓度增加。符号“↓”，向下指向的箭头表示相应聚糖或复合物(例如二聚体、三聚体等)的浓度增加。
表1：癌症、具有异常糖基化的相应癌症生物标志物、凝集素和抗体。该表的组合仅仅是不同癌症类型的实例。本发明并不限于这些示例性组合。
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表1中所示的参考文献如下：
[1]C.Ohyama,M.Hosono,K.Nitta,M.Oh-eda,K.Yoshikawa,T.Habuchi,Y.Arai,M.Fukuda,Carbohydrate structure and differential binding of prostate specificantigen to Maackia amurensis lectin between prostate cancer and benignprostate hypertrophy,Glycobiology,14(2004)671-679。
[2]K.Fukushima,T.Satoh,S.Baba,K.Yamashita,α1,2-Fucosylated andβ-N-acetylgalactosaminylated prostate-specific antigen as an efficient marker ofprostatic cancer,Glycobiology,20(2010)452-460。
[3]T.Ishikawa,T.Yoneyama,Y.Tobisawa,S.Hatakeyama,T.Kurosawa,K.Nakamura,S.Narita,K.Mitsuzuka,W.Duivenvoorden,J.H.Pinthus,Y.Hashimoto,T.Koie,T.Habuchi,Y.Arai,C.Ohyama,An AutomatedMicro-Total Immunoassay Systemfor Measuring Cancer-Associated2,3-linked Sialyl N-Glycan-Carrying Prostate-Specific Antigen May Improvethe Accuracy of Prostate Cancer Diagnosis,Int.J.Mol.Sci.,18(2017)15。
[4]D.Pihikova,P.Kasak,P.Kubanikova,R.Sokol,J.Tkac,Aberrantsialylationof a prostate-specific antigen:Electrochemical label-freeglycoprofiling inprostate cancer serum samples,Anal.Chim.Acta,934(2016)72-79。
[5]C.Ohyama,T.Koie,T.Yoneyama,Y.Tobisawa,Quantification ofprostatecancer-associated aberrant glycosylation of prostate-specific antigen,Glycoscience:Biology and Medicine,Springer2015,pp.1373-1377。
[6]E.Llop,M.Ferrer-Batalle,S.Barrabes,P.E.Guerrero,M.Ramirez,R.Saldova,P.M.Rudd,R.N.Aleixandre,J.Comet,R.de Llorens,R.Peracaula,Improvement of Prostate Cancer Diagnosis by Detecting PSAGlycosylation-Specific Changes,Theranostics,6(2016)1190-1204。
[7]M.Ferrer-Batalle,E.Llop,M.Ramirez,R.N.Aleixandre,M.Saez,J.Comet,R.de Llorens,R.Peracaula,Comparative Study of Blood-BasedBiomarkers,alpha 2,3-Sialic Acid PSA and PHI,for High-Risk ProstateCancer Detection,International Journal of Molecular Sciences,18(2017)12。
[8]T.Yoneyama,C.Ohyama,S.Hatakeyama,S.Narita,T.Habuchi,T.Koie,K.Mori,K.I.Hidari,M.Yamaguchi,T.Suzuki,Measurement of aberrantglycosylation ofprostate specific antigen can improve specificity in earlydetection ofprostate cancer,Biochem.Biophys.Res.Commun.,448(2014)390-396。
[9]N.Idil,I.Percin,V.Karakoc,H.Yavuz,N.Aksoz,A.Denizli,Concanavalin Aimmobilized magnetic poly(glycidyl methacrylate)beads forprostate specificantigen binding,Colloid Surf.B-Biointerfaces,134(2015)461-468。
[10]M.V.Dwek,A.Jenks,A.J.Leathem,A sensitive assay tomeasurebiomarker glycosylation demonstrates increased fucosylation ofprostatespecific antigen(PSA)in patients with prostate cancer compared withbenignprostatic hyperplasia,Clin.Chim.Acta,411(2010)1935-1939。
[11]K.Hagiwara,Y.Tobisawa,T.Kaya,T.Kaneko,S.Hatakeyama,K.Mori,Y.Hashimoto,T.Koie,Y.Suda,C.Ohyama,T.Yoneyama,Wisteriafloribunda Agglutininand Its Reactive-Glycan-Carrying Prostate-SpecificAntigen as a NovelDiagnostic and Prognostic Marker of Prostate Cancer,Int.J.Mol.Sci.,18(2017)16。
[12]T.Kaya,T.Kaneko,S.Kojima,Y.Nakamura,Y.Ide,K.Ishida,Y.Suda,K.Yamashita,High-sensitivity immunoassay with surface plasmonfield-enhancedfluorescence spectroscopy using a plastic sensor chip:Application toquantitative analysis of total prostate-specific antigen andGalNAcβ1–4GlcNAc-linked prostate-specific antigen for prostate cancerdiagnosis,Anal.Chem.,87(2015)1797-1803。
[13]Q.K.Li,L.Chen,M.-H.Ao,J.H.Chiu,Z.Zhang,H.Zhang,D.W.Chan,Serumfucosylated prostate-specific antigen(PSA)improves thedifferentiation ofaggressive from non-aggressive prostate cancers,Theranostics,5(2015)267。
[14]K.Fujita,T.Hayashi,K.Matsuzaki,W.Nakata,M.Masuda,A.Kawashima,T.Ujike,A.Nagahara,M.Tsuchiya,Y.Kobayashi,S.Nojima,M.Uemura,E.Morii,E.Miyoshi,N.Nonomura,Decreased fucosylated PSA as aurinary marker for highGleason score prostate cancer,Oncotarget,7(2016)56643-56649。
[15]S.Takahashi,T.Sugiyama,M.Shimomura,Y.Kamada,K.Fujita,N.Nonomura,E.Miyoshi,M.Nakano,Site-specific and linkage analyses offucosylated N-glycanson haptoglobin in sera of patients with various types ofcancer:possibleimplication for the differential diagnosis of cancer,Glycoconjugate J.,33(2016)471-482。
[16]S.Kazuno,T.Fujimura,T.Arai,T.Ueno,K.Nagao,M.Fujime,K.Murayama,Multi-sequential surface plasmon resonance analysis ofhaptoglobin–lectincomplex in sera of patients with malignant and benignprostate diseases,Anal.Biochem.,419(2011)241-249。
[17]S.-J.Yoon,S.-Y.Park,P.-C.Pang,J.Gallagher,J.E.Gottesman,A.Dell,J.-H.Kim,S.-I.Hakomori,N-glycosylation status ofβ-haptoglobin insera ofpatients with prostate cancer vs.benign prostate diseases,Int.J.Oncol.,36(2010)193-203。
[18]T.Fujimura,Y.Shinohara,B.Tissot,P.C.Pang,M.Kurogochi,S.Saito,Y.Arai,M.Sadilek,K.Murayama,A.Dell,Glycosylation status ofhaptoglobin in seraof patients with prostate cancer vs.benign prostate diseaseor normalsubjects,Int.J.Cancer,122(2008)39-49。
[19]K.Fujita,M.Shimomura,M.Uemura,W.Nakata,M.Sato,A.Nagahara,Y.Nakai,S.Takamatsu,E.Miyoshi,N.Nonomura,Serumfucosylated haptoglobin as a novelprognostic biomarker predicting high-Gleason prostate cancer,The Prostate,74(2014)1052-1058。
[20]S.Weiz,M.Wieczorek,C.Schwedler,M.Kaup,E.I.Braicu,J.Sehouli,R.Tauber,V.Blanchard,Acute-phase glycoprotein N-glycome ofovarian cancerpatients analyzed by CE-LIF,Electrophoresis,37(2016)1461-1467。
[21]R.Saldova,L.Royle,C.M.Radcliffe,U.M.Abd Hamid,R.Evans,J.N.Arnold,R.E.Banks,R.Hutson,D.J.Harvey,R.Antrobus,Ovarian canceris associated withchanges in glycosylation in both acute-phase proteins andIgG,Glycobiology,17(2007)1344-1356。
[22]G.Turner,M.Goodarzi,S.Thompson,Glycosylation ofalpha-1-proteinaseinhibitor and haptoglobin in ovarian cancer:evidence fortwo differentmechanisms,Glycoconjugate J.,12(1995)211-218。
[23]K.Chen,A.Gentry-Maharaj,M.Burnell,C.Steentoft,L.Marcos-Silva,U.Mandel,I.Jacobs,A.Dawnay,U.Menon,O.Blixt,Microarray Glycoprofiling of CA125improves differential diagnosis ofovarian cancer,J.Proteome Res.,12(2013)1408-1418。
[24]R.Saldova,W.B.Struwe,K.Wynne,G.Elia,M.J.Duffy,P.M.Rudd,Exploringthe glycosylation of serum CA125,International journal ofmolecular sciences,14(2013)15636-15654。
[25]H.Zhuang,J.Gao,Z.Hu,J.Liu,D.Liu,B.Lin,Co-expression ofLewis yantigen with human epididymis protein 4 in ovarian epithelialcarcinoma,PLoSOne,8(2013)e68994。
[26]J.Wu,X.Xie,S.Nie,R.J.Buckanovich,D.M.Lubman,Alteredexpression ofsialylated glycoproteins in ovarian cancer sera using lectin-basedELISA assayand quantitative glycoproteomics analysis,J.Proteome Res.,12(2013)3342-3352。
[27]H.Ideo,Y.Hinoda,K.Sakai,I.Hoshi,S.Yamamoto,M.Oka,K.Maeda,N.Maeda,S.Hazama,J.Amano,Expression of mucin 1 possessing a3’-sulfated core1 inrecurrent and metastatic breast cancer,Int.J.Cancer,137(2015)1652-1660。
[28]S.A.Svarovsky,L.Joshi,Cancer glycan biomarkers andtheirdetection–past,present and future,Anal.Methods,6(2014)3918-3936。
[29]S.J.Storr,L.Royle,C.J.Chapman,U.M.A.Hamid,J.F.Robertson,A.Murray,R.A.Dwek,P.M.Rudd,The O-linked glycosylation of secretory/shedMUC1 from anadvanced breast cancer patient's serum,Glycobiology,18(2008)456-462。
[30]H.A.Badr,D.M.AlSadek,A.A.Darwish,A.I.ElSayed,B.O.Bekmanov,E.M.Khussainova,X.Zhang,W.C.Cho,L.B.Djansugurova,C.-Z.Li,Lectin approachesfor glycoproteomics in FDA-approved cancerbiomarkers,Expert review ofproteomics,11(2014)227-236。
[31]Y.Taeda,M.Nose,S.Hiraizumi,N.Ohuchi,Expression ofL-PHA-bindingproteins in breast cancer:Reconstitution and molecularcharacterization ofbeta 1-6 branched oligosaccharides in three-dimensionalcell culture,BreastCancer Res.Treat.,38(1996)313-324。
[32]S.Y.Park,S.J.Yoon,Y.T.Jeong,J.M.Kim,J.Y.Kim,B.Bernert,T.Ullman,S.H.Itzkowitz,J.H.Kim,S.i.Hakomori,N-glycosylation status ofβ-haptoglobin insera of patients with colon cancer,chronic inflammatorydiseases and normalsubjects,Int.J.Cancer,126(2010)142-155。
[33]Y.Takeda,S.Shinzaki,K.Okudo,K.Moriwaki,K.Murata,E.Miyoshi,Fucosylated haptoglobin is a novel type of cancer biomarker linkedto theprognosis after an operation in colorectal cancer,Cancer,118(2012)3036-3043。
[34]S.Y.Park,S.H.Lee,N.Kawasaki,S.Itoh,K.Kang,S.Hee Ryu,N.Hashii,J.M.Kim,J.Y.Kim,J.Hoe Kim,α1-3/4 fucosylation at Asn 241 ofβ-haptoglobin is anovel marker for colon cancer:A combinatorial approachfor development ofglycan biomarkers,Int.J.Cancer,130(2012)2366-2376。
[35]S.-Y.Park,S.-J.Yoon,S.-I.Hakomori,J.-M.Kim,J.-Y.Kim,B.Bernert,T.Ullman,S.H.Itzkowitz,J.H.Kim,Dimeric Lea(Lea-on-Lea)statusofβ-haptoglobinin sera of colon cancer,chronic inflammatory disease andnormal subjects,Int.J.Oncol.,36(2010)1291-1297。
[36]R.S.Bresalier,J.C.Byrd,D.Tessler,J.Lebel,J.Koomen,D.Hawke,E.Half,K.F.Liu,N.Mazurek,C.Great Lakes-New England,A circulatingligand for galectin-3 glycoprotein elevated in individual is ahaptoglobin-related with coloncancer,Gastroenterology,127(2004)741-748。
[37]E.Saeland,A.I.Belo,S.Mongera,I.van Die,G.A.Meijer,Y.vanKooyk,Differential glycosylation of MUC1 and CEACAM5 between normalmucosa andtumour tissue of colon cancer patients,Int.J.Cancer,131(2012)117-128。
[38]Y.Qiu,T.H.Patwa,L.Xu,K.Shedden,D.E.Misek,M.Tuck,G.Jin,M.T.Ruffin,D.K.Turgeon,S.Synal,Plasma glycoprotein profiling forcolorectal cancerbiomarker identification by lectin glycoarray and lectin blot,J.ProteomeRes.,7(2008)1693-1703。
[39]C.Li,D.M.Simeone,D.E.Brenner,M.A.Anderson,K.A.Shedden,M.T.Ruffin,D.M.Lubman,Pancreatic cancer serum detection using alectin/glyco-antibodyarray method,J.Proteome Res.,8(2008)483-492。
[40]J.Zhao,T.H.Patwa,W.Qiu,K.Shedden,R.Hinderer,D.E.Misek,M.A.Anderson,D.M.Simeone,D.M.Lubman,Glycoprotein microarrays withmulti-lectindetection:unique lectin binding patterns as a tool for classifyingnormal,chronic pancreatitis and pancreatic cancer sera,J.Proteome Res.,6(2007)1864-1874。
[41]E.Miyoshi,M.Nakano,Fucosylated haptoglobin is a novel markerforpancreatic cancer:detailed analyses of oligosaccharide structures,Proteomics,8(2008)3257-3262。
[42]S.Nie,A.Lo,J.Wu,J.Zhu,Z.Tan,D.M.Simeone,M.A.Anderson,K.A.Shedden,M.T.Ruffin,D.M.Lubman,Glycoprotein biomarker panel forpancreatic cancerdiscovered by quantitative proteomics analysis,J.ProteomeRes.,13(2014)1873-1884。
[43]K.Kusama,Y.Okamoto,K.Saito,T.Kasahara,T.Murata,Y.Ueno,Y.Kobayashi,Y.Kamada,E.Miyoshi,Reevaluation of Pholiota squarrosalectin-reactive haptoglobin as a pancreatic cancer biomarker using animproved ELISAsystem,Glycoconjugate J.,(2017)1-8。
[44]N.Parker,C.Makin,C.Ching,D.Eccleston,O.Taylor,D.Milton,J.M.Rhodes,A new enzyme-linked lectin/mucin antibody sandwich assay(CAM 17.1/WGA)assessed in combination with CA19-9 and peanut lectinbinding assay forthe diagnosis of pancreatic cancer,Cancer,70(1992)1062-1068。
[45]J.Y.Yiannakou,P.Newland,F.Calder,A.N.Kingsnorth,J.M.Rhodes,Prospective study of CAM 17 center dot 1/WGA mucin assay forserologicaldiagnosis of pancreatic cancer,Lancet,349(1997)389-392。
[46]T.Yue,I.J.Goldstein,M.A.Hollingsworth,K.Kaul,R.E.Brand,B.B.Haab,The prevalence and nature of glycan alterations on specific proteinsinpancreatic cancer patients revealed using antibody-lectin sandwich arrays,Mol.Cel.Proteom.,8(2009)1697-1707。
[47]S.Pan,T.A.Brentnall,R.Chen,Glycoproteins and glycoproteomicsinpancreatic cancer,World journal of gastroenterology,22(2016)9288。
[48]K.Shimizu,K.Nakamura,S.Kobatake,S.Satomura,M.Maruyama,F.Kameko,J.Tajiri,R.Kato,The clinical utility of Lens culinarisagglutinin-reactivethyroglobulin ratio in serum for distinguishing benign frommalignantconditions of the thyroid,Clin.Chim.Acta,379(2007)101-104。
[49]T.Kanai,M.Amakawa,R.Kato,K.Shimizu,K.Nakamura,K.-i.Ito,Y.Hama,M.Fujimori,J.Amano,Evaluation of a new method for thediagnosis of alterationsof Lens culinaris agglutinin binding of thyroglobulinmolecules in thyroidcarcinoma,Clinical chemistry and laboratory medicine,47(2009)1285-1290。
[50]K.YAMAMOTO,T.TSUJI,O.TARUTANI,T.OSAWA,Structuralchanges ofcarbohydrate chains of human thyroglobulin accompanyingmalignanttransformations of thyroid glands,The FEBS Journal,143(1984)133-144。
[51]A.Naitoh,Y.Aoyagi,H.Asakura,Highly enhanced fucosylation ofserumglycoproteins in patients with hepatocellular carcinoma,Journalofgastroenterology and hepatology,14(1999)436-445。
[52]Y.H.Ahn,P.M.Shin,N.R.Oh,G.W.Park,H.Kim,J.S.Yoo,Alectin-coupled,targeted proteomic mass spectrometry(MRM MS)platform foridentification ofmultiple liver cancer biomarkers in human plasma,J.Proteomics,75(2012)5507-5515。
[53]Y.H.Ahn,P.M.Shin,Y.S.Kim,N.R.Oh,E.S.Ji,K.H.Kim,Y.J.Lee,S.H.Kim,J.S.Yoo,Quantitative analysis of aberrant protein glycosylation inlivercancer plasma by AAL-enrichment and MRM mass spectrometry,Analyst,138(2013)6454-6462。
[54]J.H.Lee,C.H.Cho,S.H.Kim,J.G.Kang,J.S.Yoo,C.L.Chang,J.-H.Ko,Y.-S.Kim,Semi-quantitative measurement of a specific glycoform using aDNA-taggedantibody and lectin affinity chromatography for glyco-biomarkerdevelopment,Mol.Cel.Proteom.,14(2015)782-795。
[55]H.Toyoda,T.Kumada,T.Tada,Y.Kaneoka,A.Maeda,F.Kanke,S.Satomura,Clinical utility of highly sensitive Lens culinaris agglutinin-reactivealpha-fetoprotein in hepatocellular carcinoma patients with alpha-fetoprotein<20 ng/mL,Cancer Sci.,102(2011)1025-1031。
[56]X.Yi,S.Yu,Y.Bao,Alpha-fetoprotein-L3 in hepatocellularcarcinoma:ameta-analysis,Clin.Chim.Acta,425(2013)212-220。
[57]M.A.Comunale,M.Wang,J.Hafner,J.Krakover,L.Rodemich,B.Kopenhaver,R.E.Long,O.Junaidi,A.M.D.Bisceglie,T.M.Block,Identification and developmentof fucosylated glycoproteins as biomarkers ofprimary hepatocellularcarcinoma,J.Proteome Res.,8(2008)595-602。
[58]Y.Liu,J.He,C.Li,R.Benitez,S.Fu,J.Marrero,D.M.Lubman,Identification and Confirmation of Biomarkers Using an Integrated PlatformforQuantitative Analysis of Glycoproteins and Their Glycosylations,J.ProteomeRes.,9(2010)798-805。
[59]L.F.Hoagland,M.J.Campa,E.B.Gottlin,J.E.Herndon,E.F.Patz,Haptoglobin and posttranslational glycan-modified derivatives asserumbiomarkers for the diagnosis of nonsmall cell lung cancer,Cancer,110(2007)2260-2268。
[60]D.Wang,M.Hincapie,T.Rejtar,B.L.Karger,Ultrasensitivecharacterization of site-specific glycosylation of affinity-purified haptoglobinfrom lung cancer patient plasma using 10μm id porouslayer open tubularliquid chromatography-linear ion trap collision-induceddissociation/electrontransfer dissociation mass spectrometry,Anal.Chem.,83(2011)2029-2037。
[61]H.Y.Tsai,K.Boonyapranai,S.Sriyam,C.J.Yu,S.W.Wu,K.H.Khoo,S.Phutrakul,S.T.Chen,Glycoproteomics analysis to identify a glycoformonhaptoglobin associated with lung cancer,Proteomics,11(2011)2162-2170。
[62]J.N.Arnold,R.Saldova,M.C.Galligan,T.B.Murphy,Y.Mimura-Kimura,J.E.Telford,A.K.Godwin,P.M.Rudd,Novel GlycanBiomarkers for the Detection ofLung Cancer,J.Proteome Res.,10(2011)1755-1764。
[63]Y.Hirao,H.Matsuzaki,J.Iwaki,A.Kuno,H.Kaji,T.Ohkura,A.Togayachi,M.Abe,M.Nomura,M.Noguchi,Glycoproteomics approach foridentifyingglycobiomarker candidate molecules for tissue type classificationof non-smallcell lung carcinoma,J.Proteome Res.,13(2014)4705-4716。
[64]M.Ferens-Sieczkowska,E.M.Kratz,B.Kossowska,E.Passowicz-Muszynska,R.Jankowska,Comparison of Haptoglobin andAlpha(1)-Acid GlycoproteinGlycosylation in the Sera of Small Cell andNon-Small Cell Lung CancerPatients,Postep.Hig.Med.Dosw.,67(2013)828-836。
[65]Y.Q.Liang,T.R.Ma,A.Thakur,H.J.Yu,L.Gao,P.Y.Shi,X.T.Li,H.Ren,L.Y.Jia,S.Zhang,Z.Li,M.W.Chen,Differentially expressedglycosylated patternsof alpha-1-antitrypsin as serum biomarkers for thediagnosis of lung cancer,Glycobiology,25(2015)331-340。
[66]S.D.Shiayan,V.V.Nasonov,N.V.Bovin,L.I.Novikova,V.A.Aleshkin,A.G.Lutov,STUDIES OF N-LINKED OLIGOSACCHARIDECHAINS OF ALPHA(1)-ACIDGLYCOPROTEIN ISOLATED FROMASCITIC FLUID OF STOMACH-CANCER PATIENTS ANDNORMALSERUM,Eksperimentalnaya Onkologiya,15(1993)53-61。
[67]J.Bones,J.C.Byrne,N.O’Donoghue,C.McManus,C.Scaife,H.Boissin,A.Nastase,P.M.Rudd,Glycomic and glycoproteomic analysis ofserum from patientswith stomach cancer reveals potential markers arisingfrom host defenseresponse mechanisms,J.Proteome Res.,10(2010)1246-1265。
[68]S.H.Lee,S.Jeong,J.Lee,I.S.Yeo,M.J.Oh,U.Kim,S.Kim,S.H.Kim,S.Y.Park,J.H.Kim,S.H.Park,J.H.Kim,H.J.An,Glycomic profiling oftargeted serumhaptoglobin for gastric cancer using nano LC/MS andLC/MS/MS,Mol.Biosyst.,12(2016)3611-3621。
[69]L.Valmu,H.Alfthan,K.Hotakainen,S.Birken,U.H.Stenman,Site-specificglycan analysis of human chorionic gonadotropin beta-subunitfrom malignanciesand pregnancy by liquid chromatography-electrospray massspectrometry,Glycobiology,16(2006)1207-1218。
[70]T.Kamoto,S.Satomura,T.Yoshiki,Y.Okada,F.Henmi,H.Nishiyama,T.Kobayashi,A.Terai,T.Habuchi,O.Ogawa,Lectin-reactivealpha-fetoprotein(AFP-L3％)curability and prediction of clinical course aftertreatment of non-seminomatous germ cell tumors,Jpn.J.Clin.Oncol.,32(2002)472-476。
[71]S.Ambrose,N.Gordon,J.Goldsmith,W.Wei,M.Zeegers,N.James,M.Knowles,R.Bryan,D.Ward,Use of Aleuria alantia Lectin AffinityChromatography to EnrichCandidate Biomarkers from the Urine of Patientswith Bladder Cancer,Proteomes,3(2015)266。
[72]R.Azevedo,A.Peixoto,C.Gaiteiro,E.Fernandes,M.Neves,L.Lima,L.L.Santos,J.A.Ferreira,Over forty years of bladder cancerglycobiology:Wheredo glycans stand facing precision oncology？,Oncotarget,8(2017)91734-91764。
[73]E.A.Lityńska,M.Bubka,A.Amoresano,A.Casbarra,Characterization of the oligosaccharide component ofα3β1 integrin fromhumanbladder carcinoma cell line T24 and its role in adhesion and migration,European journal of cell biology,85(2006)47-57。
[74]S.Cotton,R.Azevedo,C.Gaiteiro,D.Ferreira,L.Lima,A.Peixoto,E.Fernandes,M.Neves,D.Neves,T.Amaro,R.Cruz,A.Tavares,M.Rangel,A.M.N.Silva,L.L.Santos,J.A.Ferreira,Targeted O-glycoproteomics exploredincreasedsialylation and identified MUC16 as a poor prognosis biomarker inadvanced-stage bladder tumours,Mol.Oncol.,11(2017)895-912。
[75]N.Yang,S.Feng,K.Shedden,X.L.Xie,Y.S.Liu,C.J.Rosser,D.M.Lubman,S.Goodison,Urinary Glycoprotein Biomarker Discovery for BladderCancerDetection Using LC/MS-MS and Label-Free Quantification,Clin.Cancer Res.,17(2011)3349-3359。
[76]Yamashita K,Umetsu K,Suzuki T,Ohkura T(1992)Purification andcharacterization of a Neu5Ac alpha 2-->6Gal beta 1-->4GlcNAc and HSO3(-)-->6Gal beta 1-->GlcNAc specific lectin in tuberous roots of Trichosanthesjaponica.Biochemistry 31(46):11647-11650。
本发明还涉及以下项目：
1.一种用于使信号(1)相对化的方法，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述方法包括：
将从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得的信号与信号(2)进行比较，所述信号(2)从确定实际上包含在优选作为标准品的拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素(为了避免产生歧义，通过生物素-链霉亲和素相互作用)与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，优选地，其中相对化包括将信号(1)与来自标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关，
从而使所述信号(1)针对所述信号(2)相对化，反之亦然。
2.根据项目1所述的方法，其中相对化包括
将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，
(i)其中，如果信号(1)低于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)不存在于所述目标蛋白上，或
(ii)其中，如果信号(1)等于或高于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
3.根据项目1所述的方法，其中相对化包括
将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)的浓度系列中获得。
4.根据项目3所述的方法，其中所述浓度系列包括对应于预定阈值浓度的浓度，高于该预定阈值浓度时，已知所述聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
5.优选地作为标准品的拟糖蛋白用于使信号(1)针对信号(2)相对化的用途，所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇实际上包含被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过链霉亲和素结合分子，优选通过生物素-链霉亲和素相互作用与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，其中相对化包括将信号(1)与来自所述标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关。
6.根据项目5所述的用途，其中相对化包括将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，
(i)其中，如果信号(1)低于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)不存在于所述目标蛋白上，或
(ii)其中，如果信号(1)等于或高于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
7.根据项目6所述的用途，其中相对化包括将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)的浓度系列中获得。
8.根据项目7所述的用途，其中所述浓度系列包括对应于预定阈值浓度的浓度，高于该预定阈值浓度时，已知所述聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
9.根据项目1至8中任一项所述的方法或用途，其中所述信号是信号强度。
10.根据前述项目中任一项所述的方法或用途，其中通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫凝集素测定(ELLA)、磁性ELLA(MELLA)获得信号(1)和信号(2)，优选ELLA或MELLA。
11.根据前述项目中任一项所述的方法或用途，其中所述聚糖结构(A)选自：核心岩藻糖、触角岩藻糖、含有Fucα1-6GlcNAc-N-Asn的N-连接的低聚糖、Fucα1-6/3GlcNAc、α-L-Fuc、Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、Fucα1-2Gal、Fucα1-6GlcNAc、Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc、支链N-连接的六糖、Manα1-3Man、α-D-Man、(GlcNAcβ1-4)2-4、Galβ1-4GlcNAc、GlcNAcα1-4Galβ1-4GlcNAc、(GlcNAcβ1-4)2-5、Neu5Ac(唾液酸)、Galβ1-3GalNAc-丝氨酸/苏氨酸、Galα1-3GalNAc、Galβ1-6Gal、Galβ1-4GlcNAc、Galβ1-3GalNAc、GalNAcα1-3GalNAc、GalNAcα1-3Gal、GalNAcα/β1-3/4Gal、α-GalNAc、GalNAcβ1-4Gal、GalNAcα1-3(Fucα1-2)Gal、GalNAcα1-2Gal、GalNAcα1-3GalNAc、GalNAcβ1-3/4Gal、GalNAc-Ser/Thr(Tn抗原)、Galβ1-3GalNAc-Ser/Thr(T抗原)、GalNAcβ1-4GlcNAc(LacdiNAc)、α-2,3Neu5Ac(α2-3连接的唾液酸)、α-2,6Neu5Ac(α2-6连接的唾液酸)、α-2,8Neu5Ac(α2-8连接的唾液酸)、唾液酸(α-2,3Neu5Ac、α-2,6Neu5Ac或α-2,8Neu5Ac)、Neu5Acα4/9-O-Ac-Neu5Ac、Neu5Acα2-3Galβ1-4Glc/GlcNAc、Neu5Acα2-6Gal/GalNAc、N-连接双-触角、N-连接的三/四触角、支链β1-6GlcNAc、Galα1-3(Fucα1-2)Galβ1-3/4GlcNAc、Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、NeuAcα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、NeuAcα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、高甘露糖、唾液酸化路易斯a(唾液酸化Lea)抗原、唾液酸化路易斯x(唾液酸化Lex)抗原、路易斯x(Lex)抗原、唾液酸化Tn抗原、唾液酸化T抗原、路易斯y(Ley)抗原、硫酸化核心1聚糖、Tn抗原、T抗原、核心2聚糖、路易斯a(Lea)抗原、(GlcNAcβ1-4)n、β-D-GlcNAc、GalNAc、Gal-GlcNAc、GlcNAc、Galα1-3Gal、Galβ1-3GalNAc、α-Gal、α-GalNAc、(GlcNAc)n、支链(LacNAc)n。
12.根据前述项目中任一项所述的方法或用途，其中所述目标蛋白是癌症生物标志蛋白、自身免疫性疾病生物标志蛋白或炎性疾病生物标志蛋白。
13.根据项目13所述的方法或用途，其中所述癌症生物标志蛋白是卵巢癌生物标志蛋白、乳腺癌生物标志蛋白、结肠直肠癌生物标志蛋白、胰腺癌生物标志蛋白、前列腺癌生物标志蛋白、甲状腺癌生物标志蛋白、肝癌生物标志蛋白、肺癌生物标志蛋白、胃癌生物标志蛋白、睾丸癌生物标志蛋白或膀胱癌生物标志蛋白。
14.根据项目14所述的方法或用途，其中所述前列腺癌生物标志蛋白是β-结合珠蛋白、TIMP-1、PSA、fPSA或tPSA。
15.根据前述项目中任一项所述的方法或用途，其中所述聚糖结构(A)的存在指示癌症。
16.根据前述项目中任一项所述的方法或用途，其中所述目标蛋白获自从受试者获得的样品。
17.根据项目16所述的方法或用途，其中所述样品为唾液样品、血清样品、组织样品、血液样品、尿液样品、淋巴液样品、鼻咽洗液样品、痰样品、口腔拭子样品、咽喉拭子样品、鼻拭子样品、支气管肺泡灌洗样品或支气管分泌物样品。
18.根据项目16或17所述的方法或用途，其中所述受试者为哺乳动物，优选为人。
****
需要指出的是，除非上下文另有明确指示，本文所用单数形式“一(a)”、“一种(an)”和“所述/该(the)”包括所复数指代。因此，例如，提及的“一种试剂”包括一种或多种这样不同的试剂，提及“所述方法”包括提及本领域普通技术人员已知的可修饰或置换本文所述的方法的等效步骤和方法。
除非另有说明，一系列元素之前的术语“至少”将被理解为是指该系列中的每一个元素。本领域技术人员将认识到或采用常规实验能够确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等价方案。本发明旨在涵盖这种等价方案。
术语“和/或”无论在本文何处使用均包括“和”、“或”以及“所述术语所连接的元素的全部或任何其它组合”。
术语“小于”或“大于”不包括具体的数目。
例如，小于20意指小于所指示的数目。类似地，大于或高于意指大于或高于所指示的数目，例如大于80％大于或高于所指示的数目80％。
本说明书及随后的权利要求中，除非上下文有其它要求，词语“包括/包含(comprise)”以及变形词语诸如“包括/包含(comprises)”和“包括/包含(comprising)”将被理解为意指包括陈述的整数或步骤或者整数或步骤的集合，但并不排除任何其它的整数或步骤或者整数或步骤的集合。当本文使用时，术语“包括/包含(comprising)”能够用术语“含有(containing)”或“包括(including)”替代或有时在本文中使用时用术语“具有(having)”替代。当本文使用时，“由...组成”排除了未规定的任何元素、步骤或成分。
术语“包括(including)”意指“包括但不限于”。“包括”和“包括但不限于”可互换使用。
本文使用的术语“约”或“近似”或“基本上”意为在给出的值或范围的20％内，优选为15％内，优选为10％内，更优选为5％内。然而它还包括具体数目，如“约20”包括数目20。
应该理解的是，本发明并不限于本文所述的具体的方法学、方案、材料、试剂和物质等，因为这些能够改变。本文所使用的术语只用于描述特定实施方案的目的而并不意在限制本发明的范围，本发明的范围仅由权利要求限定。
本说明书全文所引用的所有出版物和专利(包括所有的专利、专利申请、科学出版物、指导书等)，无论在前还是在后，其以其整体并入本文。本文的任何内容均不能被解释为承认本发明由于在先发明而不早于这样的公开物。在通过引入方式并入的材料与本说明书矛盾或不一致时，本说明书将取代任何这样的材料。
在本文中引用的所有文献和专利文献的内容均通过引用以其整体并入。
实施例
从以下仅用于说明目的实施例将更好地理解本发明及其优点。这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
材料和方法
化学品
未缀合的链霉亲和素(～55kDa，未糖基化)、MAA-II(～130kDa)和抗-链霉亲和素抗体(～150kDa)购自美国Vector Labs。聚糖3'-唾液酸化乳糖胺-PEG3-生物素(单臂，～1100Da)获自加拿大Sussex Research。脱盐柱(MWCO＝7000Da)购自美国Thermo。所有常用化学品，例如缓冲液成分等，购自美国Sigma Merck。对于所有实验，使用超纯去离子水(G＝0.055μS)。所有缓冲液在使用前用0.22μm无菌过滤器过滤。
表面等离子体共振(SPR)
用于SPR的所有试剂都购自GE Healthcare，包括HBS-P+(缓冲液10×；BR-1006-71)、偶联试剂盒(BR100050)、EDC(0.4M)、NHS(0.1M)、乙醇胺盐酸盐(1M；pH 8.5)。为了再生，使用NaOH(50mM；BR-1003-58)和为了偶联，使用pH 4.0的乙酸盐缓冲液(BR-1003-51)。SPR测定在BiacoreX100(GE Healthcare)上在25℃下以30μL/min的恒定流速进行，所述BiacoreX100采用传感器芯片CM5(29-1496-04)或用11-巯基十一烷酸(UV/VIS乙醇中5mM，美国Sigma Merck；在RT下温育过夜)修饰的Au芯片。使用原始SW Biacore X100对照软件运行仪器。
纳米颗粒示踪分析(NTA)
将所有样品在0.1M PB(pH 7.4，0.22μm过滤)中稀释，并在连续流动下测量(制备500μl的总体积以用于单次运行)。如所建议的，通过预测试理想的颗粒/帧(frame)值(20–100颗粒/帧)来发现测量浓度。根据NanoSight NS300的制造商软件手册设置以下设置：确定检测阈值包括尽可能多的颗粒，计数10–100红十字限制。蓝色交叉计数被限制到最小。调节自动聚焦以避免不清楚的颗粒。对于每次测量，在以下条件下捕获五个60s视频：池温度：25℃；注射器速度：10μl/min。在捕获之后，采用检测阈值＝10，通过内置NanoSight软件NTA3.1Build 3.1.46分析视频。
结果和讨论
链霉亲和素-聚糖拟糖蛋白制备
将冻干的链霉亲和素重悬于无菌的0.1M PB(pH 7.4)中以获得1mg.ml-1的浓度。对于已知浓度的生物素化聚糖，在37℃下采用温和的混合(500rpm)将这两种溶液以1+5分子比率混合1小时。最后，使用具有7k MWCO的Zeba Spin脱盐柱(预先用PB平衡)在3000rpm下将拟糖蛋白从多余的聚糖中纯化1分钟。在c＝～0.9mg.ml-1下获得拟糖蛋白，并将其储存在4℃下以用于实验工作的其余部分。
SPR结合分析。在第一次运行中，使用羧甲基葡聚糖CM5 SPR芯片来发现最佳的固定pH值，随后用于将配体固定在传感器表面上。基于在不同pH值的传感器界面上配体预浓缩期间的斜率值，所有情况的最佳pH是4.0(图2A)。链霉亲和素和MAA-II凝集素的pI值分别是5.0和4.7，而对于拟糖蛋白也预测了类似的值。在所有三种情况下，即对于链霉亲和素、拟糖蛋白和MAA-II凝集素，使用用于活化和乙醇胺封闭的胺偶联(EDC/NHS方案)(图2B)。为了完成夹心构型，抗-链霉亲和素抗体(Ab)和MAA-II凝集素应同时结合拟糖蛋白。然而，可能由于空间障碍、相当高的负电荷密度和棱镜/金界面的层厚度/距离(以及这些因素的组合)，在单循环动力学(SCK)期间仅可观察到Ab结合至链霉亲和素修饰的CM5芯片(图3)。对于其余的实验，SCK期间样品的浓度越高，通常阴性反应(negative response)越强-甚至在使用拟糖蛋白修饰的芯片的凝集素结合期间(具有MAA-II、SNA-I和WGA，所有这些都应结合唾液酸化的/带负电荷的聚糖部分)也是如此。
为了确认成功制备了夹心(MAA-II/聚糖-链霉亲和素/抗体)，通过将裸Au芯片浸入5mM 11-巯基十一烷酸的乙醇溶液(RT，黑暗，过夜)制备2D芯片。这种方法的优点是基本上所有的负电荷(羧基)都位于表面上，并且在固定/封闭后被除去。整个夹心制备以及测定工作流程示于图5A中。
在下表2中汇总了应用于每个步骤的条件的详细概述。
表2：使用SPR结合分析，用于夹心制备的各个步骤的概述，即分子类型、条件和结果，如图4所示。所有R.U.都是在从检测池(FC2)中减去空白(流动池1，FC1)之后计算的。尽管表面的再生是任选的，并且不应用于GlycanosticsMELLBA测定，仅使用50mM NaOH不能完全再生表面。
MNP修饰和富集过程的NTA分析
为了进行NTA分析以观察磁性纳米颗粒(MNP，130nm COOH封端的，葡聚糖包被的纳米标签)的修饰，所有三个样品，即裸MNP，Ab修饰的MNP(MNP+Ab)和富含拟糖蛋白的Ab修饰的MNP(MNP+Ab+C)被同等处理，在空白的情况下无论使用特定的化学/成分还是使用PB，所有三个样品因此以相同的方式/相同的次数分离。在这种情况下，使用用于生物识别的球形界面产生更高的信号，因为配体密度随着更长的连接体分子而降低，从而与用于上述SPR实验的平面表面相比降低了对MELLBA的空间阻碍(图6A和B；假说，然而在别处公开)。NTA的结果示于图6C。在修饰/富集之后，由于修饰的MNP的直径增加，它们更可能在试管底部形成沉淀。对于NTA分析，将每个样品在无菌PB中稀释500x。
未修饰的(但分离相等次数)MNP几乎只产生一个单峰，d≤140nm，而在Ab缀合(胺偶联，10分钟，RT)后有两个主要级分–(i)≤120nm(与未修饰的颗粒相比稍弱)和约20％的(ii)≤150nm。在将这些颗粒用纯化的拟糖蛋白孵育之后，可以观察到至少四个不同的级分–甚至更大的聚集体在～220nm处出现。如果在固定化过程中MNP的结合能力不饱和(假设)，则通过将固定化的ab周围的葡聚糖基质“压缩(compressing)”来引起过程1(ab固定化)中流体动力学直径(dH)的降低。否则，如图7所示，dH增加。该实验的一个重要方面是在过程2中dH增加～20nm–这一值受聚糖实际情况(三糖以及PEG3连接体是高度水合的且相当柔性的)的影响。
检测聚糖含量的MALDI-TOF MS和ELLBA
使用不同的链霉亲和素+生物素化-聚糖比率(即，每体积分子数的1+0、1+1、1+2、1+3、1+4、1+5、1+6和1+7比率)来制备完整糖基化的蛋白标准品。如前面其它地方所述，使用MALDI-TOF质谱测定法(Bruker，USA)和先前优化的方案(使用2,5-二羟基苯乙酮(DHA)基质)来检测电离的样品组分的质量片段(m/z参数)。在图9中，详细显示了质谱，即所有样品(A)中的链霉亲和素片段，差异为～13kDa，即～55kDa同源四聚体中一个亚基的质量。最强的峰也总是在～13kDa(图8)，而其它峰具有低得多的强度。只有先前与生物素化-聚糖孵育的样品(除了1+0，即裸露的链霉亲和素之外的所有样品，图9B)也显示存在m/z＝～1300Da的峰，3'-唾液酸化的聚糖衍生物(图9C)。此外，该峰的强度随着聚糖/链霉亲和素比率的增加而增加(图9D)。然而，由于链霉亲和素仅可结合至多4个生物素，因此重要的是使用适当的聚糖/链霉亲和素比率以维持蛋白标准品被这些聚糖完全饱和。
为此目的，使用酶联凝集素结合测定(ELLBA)来找出完全饱和比率。在图9E左中描绘了该测定构型–将蛋白标准品固定在ELISA板孔的底部，用未缀合的MAA-II(2,3-唾液酸/Gal特异的，其可有效封闭所有可用的聚糖表位)，随后用生物素化的MAA-II孵育，所述MAA-II携带若干生物素分子并结合至不饱和链霉亲和素标准品上的游离生物素结合位点。随后，将链霉亲和素-过氧化物酶用于产生光学信号(OPD/过氧化氢)。链霉亲和素-HRP仅与生物素化MAA-II上存在的游离生物素分子结合，因此与链霉亲和素上存在的聚糖分子的量成反比关系(图9E右)。
结论
通过将生物素化的聚糖附着至链霉亲和素制备的拟糖蛋白(蛋白标准品)同时被MAA-II凝集素和抗-链霉亲和素抗体识别。这一意外发现表明，这种拟糖蛋白可作为ELISA样分析形式(包括MELLA)的蛋白标准品应用。
实施例2
实验工作显示，当在4℃下储存时，糖蛋白标准品–在本文中也称为拟糖蛋白(标准品)或本发明的标准品，例如如上文实施例1中应用的标准品稳定至少1周，这种标准可以以高度可再现的方式制备，即对于在18周内以17个独立制备批次制备糖蛋白标准品，RSD为8.17％。
Claims (15)
1.一种用于使信号(1)相对化的方法，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述方法包括：
将从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得的信号与信号(2)进行比较，所述信号(2)从确定实际上包含在作为标准品的拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素-链霉亲和素相互作用与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，
其中相对化包括将信号(1)与来自标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关，
从而使所述信号(1)针对所述信号(2)相对化，反之亦然。
2.根据权利要求1所述的方法，其中相对化包括
将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，
(i)其中，如果信号(1)低于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)不存在于所述目标蛋白上，或
(ii)其中，如果信号(1)等于或高于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
3.根据权利要求1所述的方法，其中相对化包括
将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)的浓度系列中获得。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述浓度系列包括对应于预定阈值浓度的浓度，高于该预定阈值浓度时，已知所述聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
5.作为标准品的拟糖蛋白用于使信号(1)针对信号(2)相对化的用途，所述拟糖蛋白包含通过生物素与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇实际上包含被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)，所述信号(1)从确定被怀疑存在于目标蛋白上的聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，其中所述拟糖蛋白包含通过生物素-链霉亲和素相互作用与至少一个预先定义的聚糖决定簇结合的链霉亲和素分子，所述聚糖决定簇包含所述聚糖结构(A)，其中相对化包括将信号(1)与来自所述标准品的信号(2)进行比较，从而信号(2)允许将通过信号(1)获得的信息置于相关。
6.根据权利要求5所述的用途，其中相对化包括将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)中获得，
(i)其中，如果信号(1)低于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)不存在于所述目标蛋白上，或
(ii)其中，如果信号(1)等于或高于信号(2)，则指示所述怀疑的聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
7.根据权利要求6所述的用途，其中相对化包括将信号(1)与信号(2)进行比较，所述信号(1)从确定被怀疑存在于所述目标蛋白上的所述聚糖结构(A)中获得，所述信号(2)从确定实际上包含在所述拟糖蛋白中的所述聚糖结构(A)的浓度系列中获得。
8.根据权利要求7所述的用途，其中所述浓度系列包括对应于预定阈值浓度的浓度，高于该预定阈值浓度时，已知所述聚糖结构(A)存在于所述目标蛋白上。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法或用途，其中所述信号是信号强度。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶联免疫凝集素测定(ELLA)、磁性ELLA(MELLA)获得信号(1)和信号(2)，优选ELLA或MELLA。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所述聚糖结构(A)选自：核心岩藻糖、触角岩藻糖、含有Fucα1-6GlcNAc-N-Asn的N-连接的低聚糖、Fucα1-6/3GlcNAc、α-L-Fuc、Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、Fucα1-2Gal、Fucα1-6GlcNAc、Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAc、支链N-连接的六糖、Manα1-3Man、α-D-Man、(GlcNAcβ1-4)2-4、Galβ1-4GlcNAc、GlcNAcα1-4Galβ1-4GlcNAc、(GlcNAcβ1-4)2-5、Neu5Ac(唾液酸)、Galβ1-3GalNAc-丝氨酸/苏氨酸、Galα1-3GalNAc、Galβ1-6Gal、Galβ1-4GlcNAc、Galβ1-3GalNAc、GalNAcα1-3GalNAc、GalNAcα1-3Gal、GalNAcα/β1-3/4Gal、α-GalNAc、GalNAcβ1-4Gal、GalNAcα1-3(Fucα1-2)Gal、GalNAcα1-2Gal、GalNAcα1-3GalNAc、GalNAcβ1-3/4Gal、GalNAc-Ser/Thr(Tn抗原)、Galβ1-3GalNAc-Ser/Thr(T抗原)、GalNAcβ1-4GlcNAc(LacdiNAc)、α-2,3Neu5Ac(α2-3连接的唾液酸)、α-2,6Neu5Ac(α2-6连接的唾液酸)、α-2,8Neu5Ac(α2-8连接的唾液酸)、唾液酸(α-2,3Neu5Ac、α-2,6Neu5Ac或α-2,8Neu5Ac)、Neu5Acα4/9-O-Ac-Neu5Ac、Neu5Acα2-3Galβ1-4Glc/GlcNAc、Neu5Acα2-6Gal/GalNAc、N-连接双-触角、N-连接的三/四触角、支链β1-6GlcNAc、Galα1-3(Fucα1-2)Galβ1-3/4GlcNAc、Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、NeuAcα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、Fucα1-2Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAc、Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、NeuAcα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAc、高甘露糖、唾液酸化路易斯a(唾液酸化Lea)抗原、唾液酸化路易斯x(唾液酸化Lex)抗原、路易斯x(Lex)抗原、唾液酸化Tn抗原、唾液酸化T抗原、路易斯y(Ley)抗原、硫酸化核心1聚糖、Tn抗原、T抗原、核心2聚糖、路易斯a(Lea)抗原、(GlcNAcβ1-4)n、β-D-GlcNAc、GalNAc、Gal-GlcNAc、GlcNAc、Galα1-3Gal、Galβ1-3GalNAc、α-Gal、α-GalNAc、(GlcNAc)n、支链(LacNAc)n。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所述目标蛋白是癌症生物标志蛋白、自身免疫性疾病生物标志蛋白或炎性疾病生物标志蛋白。
13.根据权利要求13所述的方法或用途，其中所述癌症生物标志蛋白是卵巢癌生物标志蛋白、乳腺癌生物标志蛋白、结肠直肠癌生物标志蛋白、胰腺癌生物标志蛋白、前列腺癌生物标志蛋白、甲状腺癌生物标志蛋白、肝癌生物标志蛋白、肺癌生物标志蛋白、胃癌生物标志蛋白、睾丸癌生物标志蛋白或膀胱癌生物标志蛋白。
14.根据权利要求14所述的方法或用途，其中所述前列腺癌生物标志蛋白是β-结合珠蛋白、TIMP-1、PSA、fPSA或tPSA。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法或用途，其中所述聚糖结构(A)的存在指示癌症。
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