CN117881467A - 深层过滤介质 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了深层过滤介质，其用于来自含有治疗性生物分子的细胞培养物的原料流的收获物澄清。所述深层过滤介质包含聚合物吸附剂和热塑性粘结剂的烧结混合物并且具有超少的可提取物，并且在使用前不需要预冲洗。此外，用于烧结深层过滤介质的构造材料表现出对伽马辐照的高稳定性并且与基于伽马射线的使用前灭菌过程相容。

Description

深层过滤介质
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年8月27日提交的美国临时专利申请第63/237,680号的优先权，该申请的全部内容通过引用整体并入本文。
背景技术
当前的生物制药生产工艺采用一系列过滤和色谱纯化步骤，以便从哺乳动物细胞培养物悬浮液中分离和纯化治疗性生物产品。这些治疗性生物产品可包括单克隆抗体、酶、抗体片段、蛋白、融合蛋白等。用于治疗性生物产品的分离和纯化的一系列过滤和色谱纯化步骤通常称为下游纯化工艺(DSP)。DSP的第一步通常是澄清步骤，该步骤旨在从含有治疗性生物产品的原料流(feedstream)中去除全细胞、细胞碎片和胶体材料。DSP中采用的澄清步骤可包括离心、微滤(通过切向流过滤或法向流过滤)，或者最近的深层过滤(depthfiltration)。
DSP澄清工艺中采用的常规深层过滤器通常基于纤维素、硅藻土和湿强度粘结剂树脂的湿铺混合物。DSP澄清工艺中采用的其他常规深层过滤器基于合成纤维、硅胶助滤剂和湿强度粘结剂树脂的湿铺混合物。上述类型的深层过滤器还可包括合成非织造纤维层，该合成非织造纤维层旨在通过絮凝或其他方式澄清经预处理的细胞培养物原料流，或旨在去除全细胞和细胞碎片。这种类型的常规深层过滤器的选定实例包括HC、/>HC Pro或/>深层过滤器，所有这些都可从EMD Millipore Corporation(Burlington,MA)商购获得。
通过湿铺法生产工艺制备的常规深层过滤器通常需要在使用前用高纯水进行深层冲洗，以减少有机和无机可提取物。
有机和无机可提取物有多种来源，这些有机和无机可提取物通常在湿铺生产期间引入深层过滤介质中。天然衍生的建筑材料诸如纤维素和硅藻土也可能是某些有机和无机可提取组分的来源。在DSP工艺中，深层过滤器可提取物可能污染含有治疗性生物产品的原料流并且这些可提取物必须在用于DSP过滤工艺之前从深层过滤器中去除。
Yavorsky(美国专利第7,673,757号；'757专利)公开了用于从工艺液体(processliquid)中去除生物污染物的过滤介质。Yavorsky的过滤器由用水不溶性热塑性粘结剂熔合(fused)的吸附材料制成。据描述，与含纤维素的过滤器相比，Yavorsky的过滤器减少了需要在使用前通过预冲洗去除的外来污染物(总有机碳：TOC)。然而，本发明人，发现'757专利的过滤器仍然具有不可接受的高水平的需要预冲洗的有机和无机污染物，并且还可能不具有对伽马辐照的所需稳定性，其中伽马辐照用于生物处理领域中所需的过滤器灭菌。
当前需要改进的深层过滤介质(depth filter media)，所述改进的深层过滤介质对于DSP过滤和澄清应用具有减少的可提取物。此外，当前需要改进的深层过滤介质，所述改进的深层过滤介质与基于伽马辐照的过滤器灭菌过程兼容。
发明内容
在此，我们报告了一种新型且非显而易见的全合成深层过滤介质的研发，所述深层过滤介质包含聚乙烯粘结剂和高表面积合成助滤剂的热熔混合物(thermally fusedmixture)。本发明的全合成深层过滤介质表现出比现有技术的深层过滤器显著减少的有机和无机可提取物。本发明的全合成深层过滤介质通过热工艺将聚乙烯粘结剂熔合至高表面积合成助滤剂来制备。该工艺形成含有粘结剂和高表面积助滤剂的坚固的过滤片材(filter sheet)，并且消除了对湿铺过滤介质生产工艺的需要。湿铺过滤器生产工艺可能是常规深层过滤介质中有机和无机可提取物增加的来源。在本发明的一些实施方案中，湿铺过滤器生产工艺被明确地排除在生产本发明的过滤器的手段之外。此外，本发明中采用的热工艺还消除了对目前用于常规深层过滤介质的湿强度粘结剂树脂的需要。湿强度粘结剂树脂是常规深层过滤介质中有机可提取物增加的另一个可能来源。在本发明的一方面，湿强度粘结剂树脂在本发明的深层过滤介质中的使用被明确排除(specificallyexcluded)在本发明的深层过滤器的实施方案或方面之外。
重要的是，本发明的新型深层介质在暴露于用于灭菌的伽马辐照之后还提供减少的有机和无机污染。这与现有技术的过滤介质形成鲜明对比，现有技术的过滤介质在伽马辐照后“脱落”增加量的污染物，从而需要进一步增加预冲洗时间和水量。
用于构建本发明的深层过滤介质的高表面积助滤剂用于通过包括静电和疏水相互作用的吸附机制来去除全细胞、亚微米颗粒、胶体物质、可溶性杂质(HCP和DNA)和细胞碎片。否则，此类物质可能不会通过颗粒筛分被捕获。先前已经报道了出于这些目的使用包含助滤剂的深层过滤器(Nguyen等人，Biotechnol.J.2018,1700771)。
在一个优选的实施方案中，本发明的合成吸附剂是聚苯乙烯。本领域技术人员已知的合适的聚苯乙烯的实例包括但不限于以下中的一种或多种：PrAOH(与二乙烯基苯交联的聚苯乙烯：阴离子，氢氧化物型；Purolite Corp.,King of Prussia,PA)、PrCH(与二乙烯基苯交联的聚苯乙烯：阳离子，氢型；Purolite Corp,King of Prussia,PA)、MB1/1h(与二乙烯基苯交联的聚苯乙烯：阳离子/阴离子氢型；Purolite Corp.,King of Prussia,PA)、聚苯乙烯吸附剂(Medapore P787(>63μm),Merck KGAa,Darmstadt,德国)、2％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基苯)(MilliporeSigma,Burlington,MA)、25％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基吡啶-共-乙基乙烯基苯)(MilliporeSigma,Burlington,MA)。另外的吸附剂可包括离子交换树脂诸如AmberliteTM、AmberliteTMXADTM和AmberChromTM离子交换树脂(DuPont,Wilmington,DE)。用于本发明的合适的高表面积助滤剂还可以包括各种色谱树脂中的一种或多种，这些色谱树脂包括离子交换色谱树脂和/>离子交换色谱树脂等，两者均可获自EMD Millipore(Burlington，MA)。本领域技术人员将认识到，可以选择合适的合成高表面积助滤剂，只要该助滤剂表现出足够的热稳定性，以便经受住深层过滤介质片材形成中所采用的烧结工艺。在本发明的另一个方面，单独或组合的硅藻土、二氧化硅、多孔玻璃、沸石、活性炭、非合成色谱介质和基于纤维素的材料被明确排除在本发明的深层过滤器的实施方案或方面之外。
本发明的全合成深层过滤介质还包含对伽马辐照表现出高稳定性的构造材料。因此，本发明的全合成深层过滤介质可以通过伽马辐照或其他辐照灭菌方式诸如X-射线和电子束来灭菌，而不会在下游纯化工艺(DSP)澄清应用中对深层过滤性能产生任何负面影响。此外，与现有技术的过滤介质不同，本发明的全合成深层过滤介质的构造材料的高伽马稳定性提供了非常低的有机和无机可提取物，即使在通过伽马辐照灭菌后也是如此。
因此，本发明的全合成深层过滤器提供了一种几乎不含有机和无机可提取物的深层过滤器，即使在伽马辐照之后也是如此，并且在使用前需要很少甚至不需要预冲洗。众所周知，常规深层过滤介质中使用的聚合物材料，诸如纤维素和聚丙烯酸类纤维，在电离辐照源诸如伽马射线、X-射线和电子束的存在下，可能会发生键断裂。这些分子变化通常会导致链断裂、重组和/或交联，这会改变原始材料的机械和/或化学性质，导致其作为外来可提取物“脱落”到工艺流体中。先前已经对各种聚合物与伽马辐照的灭菌剂量的相容性进行了评估。参见Kawamura,Y.“Effects of Gamma Irradiation on Polyethylene,Polypropylene,and Polystyrene”:Irradiation of Food and Packaging.第16章ACSSymposium Series.American Chemical Society,Washington,D.C.,2004；262-276。在本发明的另一个方面，除了用水或意欲过滤的溶液填充含有过滤介质的过滤装置之外，不需要在使用前进行预冲洗。在本发明的又一个方面，除了用足够的液体来润湿过滤器之外的预冲洗本发明的深层过滤器被明确排除在本发明的实施方案之外。
一方面，本发明考虑了一种深层过滤器，其包括：a)烧结深层过滤介质，所述烧结深层过滤介质包含聚乙烯粘结剂的热熔混合物，和b)一种或多种吸附剂，所述吸附剂选自PrAOH、PrCH、MB1/1h、聚苯乙烯吸附剂、2％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基苯)、25％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基吡啶-共-乙基乙烯基苯)。在本发明的另一方面，本发明考虑了，深层过滤介质是明显均匀的(significantly homogeneous)。在本发明的另一方面，本发明考虑了，深层过滤器的厚度为约1mm至约4mm或约2mm至约3mm。
另一方面，本发明考虑了，明确排除湿强度粘结剂树脂。
另一方面，本发明考虑了，聚乙烯与吸附剂的比率为约1:10至约10:1；约1:5至约5:1；约1:2至约2:1；或者聚乙烯与吸附剂的所述比率为约1:1。
另一方面，本发明考虑了，所述聚苯乙烯吸附剂的尺寸为直径约10μm至约120μm；直径约30μm至100μm；直径约50μm至80μm；直径约60μm至70μm或直径约63μm。
另一方面，本发明考虑了一种制备烧结深层过滤介质的方法，所述方法包括将聚乙烯粘结剂与吸附剂混合以制备混合物，将所述混合物铺展至基本上均匀的厚度并将所述混合物在约165℃加热约60分钟，所述吸附剂选自PrAOH、PrCH、MB1/1h、聚苯乙烯吸附剂、2％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基苯)、25％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基吡啶-共-乙基乙烯基苯)。
另一方面，本发明考虑了一种澄清原料流的方法，所述原料流含有靶蛋白，所述方法包括：a)提供：深层过滤器，其包括烧结深层过滤介质，所述深层过滤介质包含聚乙烯粘结剂和吸附剂，所述吸附剂选自PrAOH、PrCH、MB1/1h、聚苯乙烯吸附剂、2％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基苯)、25％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基吡啶-共-乙基乙烯基苯)；b)使所述深层过滤器与所述原料流接触，使得所述靶蛋白通过所述深层过滤器，所述靶蛋白保留在渗透物中并且污染物被所述深层过滤器吸附，从而与所述原料流中靶蛋白相对于污染物的比率相比，所述渗透物中靶蛋白相对于污染物的浓度增加了至少20％。
另一方面，本发明考虑了，与所述原料流中靶蛋白相对于污染物的比率相比，所述渗透物中靶蛋白相对于污染物的浓度增加了至少50％。
在本发明的另一个方面，本发明考虑了，与所述原料流中靶蛋白相对于污染物的比率相比，所述渗透物中靶蛋白相对于污染物的浓度增加了至少100％。
附图说明
图1示出了本发明的烧结深层过滤介质的照片。烧结深层过滤介质如实施例3、实施例ID 3-2中所述制备。示出了基于纤维素的基准样品CE25过滤介质(MilliporeSigma,Burlington,Ma)的照片以进行比较。
图2(A-D)示出了本发明的烧结深层过滤介质的横截面SEM显微照片。烧结深层过滤介质如实施例3、实施例ID 3-2中所述制备。SEM显微照片以100倍(A和B)和500倍(C和D)的放大倍数提供。SEM显微照片示出了，大于63μm的大聚苯乙烯珠被小得多的熔合聚乙烯颗粒捕获。
图3示出了含有单层本发明的烧结深层过滤介质且如实施例3中所述的23cm2安全帽过滤器装置的TOC(flush out curve)冲洗出曲线。
图4示出了在伽马辐照之前和之后，各自含有单层本发明的烧结深层过滤介质且如实施例3中所述的23cm2安全帽过滤器装置的TOC冲洗出曲线。
图5示出了含有单层本发明的烧结深层过滤介质且如实施例3中所述的23cm2安全帽过滤器装置的金属可提取物数据。
图6示出了在有和没有伽马辐照的情况下，对于选定的可提取物，各自含有单层本发明的烧结深层过滤介质且如实施例3中所述的23cm2安全帽过滤器装置的金属可提取物数据。
图7示出了使用烧结深层过滤介质进行以澄清CHO细胞培养收获物的应用测试的过滤器阻力曲线。该应用/实验的细节在实施例6中提供。
图8示出了使用烧结深层过滤介质进行以澄清Peptone T(Milliporesigma,Burlington,MA)模型原料流的应用测试的过滤器阻力曲线。该应用/实验的细节在实施例7中提供。
图9示出了来自'757专利的各种现有技术过滤介质在冲洗期间的水滤液的电导率的现有技术比较。
图10示出了在伽马辐照之前和之后，与两种现有技术介质相比，本发明的过滤介质在冲洗期间的水滤液的电导率。
图11示出了在伽马辐照之后，在冲洗现有技术CE25介质期间，水滤液的电导率增加。
图12示出了在伽马辐照之后，在冲洗现有技术DE40介质期间，水滤液的电导率增加
图13示出了在伽马辐照之后，在冲洗本发明的介质期间，水滤液的电导率未增加。
图14预示性地示出了，在暴露和未暴露于伽马辐照两种情况下，与各种已知的现有技术介质相比，冲洗本发明的过滤介质期间水滤液的电导率降低。
具体实施方式
定义
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域技术人员通常理解的含义。以下参考文献将为本领域技术人员提供本发明中使用的许多术语的一般定义：Process Scale Bioseparations for the Biopharmaceutical Industry,Abhinav A.Shukla、Mark R.Etzel和Shishir Gadam编辑。如本文所用，除非另有说明，否则以下术语具有它们所赋予的含义。
当介绍本公开的各要素或其一个或多个优选实施方案时，冠词“一个”、“一种”、“该”和“所述”旨在表示存在一个或多个该要素。术语“包含”、“包括”和“具有”旨在是包容性的并且意味着可以存在除了所列要素之外的另外要素。
过渡性短语“包括”、“基本上由…组成”和“由…组成”具有MPEP 2111.03(Manualof Patent Examining Procedure；United States Patent and Trademark Office)中给出的含义。使用过渡短语“基本上由......组成”的任何权利要求将被理解为仅叙述了本发明的必要要素，并且从属权利要求中叙述的任何其他要素被理解为对于它们所从属的权利要求中叙述的本发明来说是非必要的。
为了本说明书和所附权利要求的目的，除非另有说明，否则所有表示成分的量、材料的百分比或比例、反应条件的数值，以及本说明书和权利要求中使用的其他数值，应被理解为在所有情况下无论是否明确指出都用术语“约”修饰。术语“约”通常指人们认为等同于所叙述的值(即，具有相同功能或结果)的数值范围。在许多情况下，术语“约”可以包括四舍五入到最接近的有效数字的数值。
因此，除非有相反的指示，否则在以下说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是近似值，其可以根据本发明寻求获得的期望性质而变化。至少，并且不是作为将等同原则的应用限制于权利要求的范围的尝试，每个数值参数至少应当根据所记录的有效数字的数值并通过应用普通的四舍五入技术来解释。此外，本文公开的所有范围应理解为涵盖其中包含的所有子范围。换句话说，认为任何数值范围包括在该范围内的所有数值，就像对其进行了明确叙述一样。
在进一步详细描述本发明之前，将对许多术语进行定义。这些术语的使用并不限制本发明的范围，而仅用于便利描述本发明。
本文无论上文或下文中引用的所有出版物、专利和专利申请，均通过引用整体并入本文，其程度如同具体且单独地表明每个单个出版物、专利或专利申请通过引用并入一样。本文引用的所有出版物、专利和专利申请，也代表了本领域普通技术人员在做出本发明时对本发明领域的理解。
术语“泡点孔径”或“BP”是过滤介质中最大孔的孔径。
如本文所用，短语“细胞培养物”包括细胞、细胞碎片和胶体颗粒、感兴趣的生物分子、HCP和DNA。
术语“中国仓鼠卵巢细胞蛋白”和“CHOP”在本文中可互换使用，是指源自中国仓鼠卵巢(“CHO”)细胞培养物的宿主细胞蛋白(“HCP”)的混合物。HCP或CHOP通常作为杂质存在于细胞培养基或裂解物(例如，含有感兴趣的蛋白或多肽(例如，在CHO细胞中表达的抗体或免疫粘附素)的收获的细胞培养液)中。通常，存在于包含感兴趣蛋白的混合物中的CHOP的量提供了感兴趣蛋白的纯度的度量。通常，蛋白混合物中CHOP的量以ppm(百万分之)表示，相对于混合物中感兴趣蛋白的量而言。
如本文所用，术语“澄清步骤”或简称“澄清”，通常是指最初用于生物分子纯化中的一个或多个步骤。澄清步骤通常包括使用一个或多个步骤去除细胞和/或细胞碎片，所述步骤包括任何单独的下列操作或其各种组合，例如离心和深层过滤、切向流过滤、微滤、沉淀、絮凝和沉降。在一些实施方案中，本发明提供了相对于各种纯化方案中常用的常规澄清步骤的改进。澄清步骤通常涉及去除一种或多种不需要的实体(entity)，并且通常在涉及捕获所需靶分子的步骤之前进行。澄清的另一个方面是去除样品中的随后可能导致纯化过程中无菌过滤器结垢的可溶性和不溶性组分，从而使整个纯化过程更加经济。澄清步骤通常包括上游的(一个或多个)初级澄清步骤和下游的二级澄清。来自现代生产间歇生物反应器(<25,000L)的大收获体积和高细胞密度的细胞培养收获物和高固体原料的澄清，通常需要在任何后续色谱操作等之前进行初级和二级澄清步骤。
如本文所用，术语“粗过滤”或“粗/中过滤”通常是指在生物分子纯化中去除大部分全细胞和一些细胞碎片。
如本文所用，术语“精过滤”通常是指在生物分子纯化中去除大部分细胞碎片、胶体颗粒、和可溶性杂质诸如HCP、DNA、内毒素、病毒和脂质。
过滤器吞吐量(throughput)值通常以“升/平方米”或“L/m2”表示，但为了等效比较，使用“柱体积”或“CV”来考虑各样品之间厚度的大差异。
术语“污染物”、“杂质”和“碎片”在本文中可互换使用，并且是指任何外来的或有害的材料，包括生物大分子诸如DNA、RNA、一种或多种宿主细胞蛋白(HCP或CHOP)、内毒素、病毒、脂质和一种或多种添加剂，所述添加剂可能存在于含有使用根据本发明的深层过滤器将其与一种或多种所述外来或有害分子分离的感兴趣蛋白或多肽(例如抗体)的样品中。
应当理解，当宿主细胞是另一种哺乳动物、非哺乳动物或细菌细胞类型，例如大肠杆菌(E.coli)、酵母细胞、昆虫或植物时，HCP是指在宿主细胞的裂解物中发现的除靶蛋白之外的蛋白。
如本文所用，术语“单克隆抗体”或“mAb”是指从基本上均质的抗体种群获得的抗体，即，构成该群体的各个抗体是相同的，除了可能以少量存在的可能天然存在的突变之外。
如本文所用，术语“平均流量孔径”或“MFP”是在某压降下的孔径，在该压降下通过润湿过滤介质的流量是通过干过滤介质的流量的50％。
如本文所用，术语“(一种或多种)有机可提取物”是指在冲洗期间使用的水或其他水溶液的存在下，可能从用于制备过滤介质或膜(诸如多孔深层过滤器)的材料中迁移或提取的污染物。这些污染物还可以包括，在使用期间可能从过滤器脱落的结构材料本身，从而需要在使用过滤器之前预冲洗过滤器以去除所述(一种或多种)有机可提取物。
术语“(一种或多种)总有机可提取物”和“TOC”是指存在于水溶液诸如水中的有机分子的量度并以碳含量测定。用于测定TOC的分析技术通常涉及将溶液中的所有有机分子氧化成二氧化碳，测定所得CO2浓度，并将该响应与已知的碳浓度相关联。
术语“无机可提取物”是指痕量金属物质，包括可以从过滤器提取到工艺流体中的重金属。这些金属物质可以通过分析技术来测定，诸如电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)、ICP质谱法(ICP-MS)和石墨炉原子吸收光谱仪(GFAAS)技术。
“预冲洗”在本文中定义为在使用之前通常用无菌水冲洗过滤器，以在使用之前从过滤器去除有机和无机可提取物。
术语“百万分之”或“ppm”在本文中可互换使用。
孔径等级通常以标称值给出。在某些情况下，制备商会提供平均流量孔径(MFP)尺寸或泡点(BP)孔径。MFP和BP都可以使用毛细管流动孔隙计进行测定。
术语“靶分子”、“靶生物分子”、“所需靶分子”和“所需靶生物分子”在本文中可互换使用，并且通常指需要被纯化的或与一种或多种不期望的实体(例如一种或多种杂质)分离的感兴趣多肽或产物(例如，单克隆抗体)，所述一种或多种不期望的实体可能存在于含有感兴趣多肽或产物的样品中。
如本文所用，术语“吞吐量(throughput)”是指通过过滤器过滤的体积除以过滤器的正面面积。吞吐量以经过滤流体的体积(L)/过滤面积(m2)表示。
如本文所用，术语“纳污能力”等于来自直接收获的或先前澄清的给定细胞培养液的过滤吞吐量。更高的吞吐量代表更高的纳污能力。
如本文所用且如本领域普通技术人员所理解的，“湿强度粘结剂树脂”是允许通过将纤维和/或颗粒粘合在一起形成过滤片材、增加过滤器的湿强度并且取决于所使用的粘结剂可以赋予独特的电荷性能的树脂。湿强度树脂的实例是包括以下的树脂：脲的合成聚合物的树脂或基于三聚氰胺-甲醛的聚合物、聚氨基聚酰胺-表氯醇(PAE)聚合物和乙醛酸化聚丙烯酰胺(GPAM)。
本发明的烧结过滤器
在本文中本发明的过滤器称为“烧结过滤器”。本领域技术人员已知，术语“烧结”是指通过通过烧结生产的或经历烧结的物品，烧结是通过加热而不液化的方式将粉末材料聚结成固体或多孔物质的过程。本发明的过滤器包含以下(或“基本上由以下组成”或“由以下组成”)：通过热熔由聚乙烯粘结剂粘结的高表面积合成助滤剂。高表面积合成助滤剂定义为具有大于10m2/g的BET表面积。在一些情况下，合成助滤剂的BET表面积可以大于100m2/g。BET根据气体吸附来测定表面积(Adsorption of Gases in Multimolecular Layers,Brunauer,Emmett,Teller,J.Am.Chem.Soc.,1938年2月,第60卷,309)。替代粘结剂还可包括热塑性粉末，包括尼龙6粉末(PA6,MilliporeSigma,Burlington,MA)和尼龙12粉末(PA12,MilliporeSigma,Burlington,MA)。替代粘结剂还可以包括丙烯酸类短切纤维、合成木浆、/>原纤化HDPE(Minifibres,Inc.)。
在一个优选的方面，本发明的过滤器是“均质的”或“明显均质的”，这意味着在整个过滤器上合成助滤剂与粘结剂的比率相同或基本上相同并且关于合成助滤剂与粘结剂的比率的组成仅在制备公差内变化。
本发明的深层过滤器的过滤器保留特性可根据所选择的聚合物、混合物和比率而变化。一般而言，随着高表面积合成助滤剂负载量的增加，本发明的深层过滤器将表现出增加的渗透性和减少的细颗粒保留。相反，本发明的烧结深层过滤器中高表面积合成助滤剂的负载量的减少将表现出降低的渗透性和增加的细颗粒保留。此外，鉴于在大于70重量％的高表面积合成助滤剂的高负载值下烧结过滤片材的机械完整性降低，本领域技术人员将考虑烧结过滤介质片材的过滤渗透性和过滤保留之间的折衷。
深层过滤片材的渗透性可通过在以L/m2/hr(LMH)为单位的各种水通量率(fluxrate)下确定含有深层过滤片材的过滤装置的以PSI为单位的压降来评估。较高的压降表明过滤片材的渗透性较低。
过程通量以被过滤流体的体积流速除以过滤装置的正面面积(m2)来表示。过程通量以L/m2/hr(LMH)表示。生物制药深层过滤工艺的典型过程通量范围为75-300LMH。在574LMH的通量下本发明的烧结过滤介质的压降小于1.1psi。
如上所述，本发明的过滤器通过热熔生产。热熔过程的实例在下面的实例章节中给出。热熔(thermal fusion)，有时称为热力熔合(heat fusion)，是本领域已知的用于将例如热塑性塑料连接在一起的方法。热熔实际上通过将一种或多种热塑性塑料软化和/或熔化到足以粘合其他热塑性塑料，而不是使用例如胶水、焊料或机械连接和垫圈，当冷却时将两块塑料变成一个固体块。本发明的熔合烧结过滤器保持了各组分之间的区别，即合成助滤剂和粘结剂在放大下作为组分仍然可见。参见图2。
本发明的合成烧结深层过滤器不受厚度限制，但在优选的实施方案中，厚度范围可以为0.1mm-5.0mm、0.5mm-4.0mm、1.0mm-4.0mm、1.0mm-3.0mm和2.0mm-3.0mm。
本发明的合成烧结深层过滤器不受粘结剂与合成吸附剂助滤剂的比率的限制。一方面，该比率可以为1:10-10:1粘结剂：合成吸附剂助滤剂、1:5-5:1粘结剂：合成吸附剂助滤剂、1:2-2:1粘结剂：合成吸附剂助滤剂或约1:1粘结剂：合成吸附剂助滤剂。本领域普通技术人员将能够根据本说明书提供的指导来确定针对任何特定用途的合适比率，而无需过多的实验。
本发明的合成吸附剂助滤剂通常为球形或略呈椭圆形，并且具有约10μm至约120μm的直径、约30μm至约100μm的直径、约50μm至约80μm的直径、约60μm至约70μm的直径或约63μm的直径。本领域普通技术人员将能够根据本说明书提供的指导来确定对任何特定用途的最佳尺寸，而无需过多的实验。
制备本发明的烧结深层过滤器的方法
本发明还提供了制备本发明的烧结深层过滤器的方法。优选的方法在下文实例章节中提供。一方面，将聚乙烯粘结剂和聚苯乙烯吸附剂以所需比率混合。将混合物均匀地分布在大金属烤板上，并用拉杆拉平至2mm。然后将烤板在约165℃烘烤约60分钟。冷却后，将过滤材料片材切割成所需尺寸。本领域技术人员根据本发明提供的指导将能够确定，利用一种或多种不同的粘结剂或一种或多种不同的吸附剂来制备本发明的合成深层过滤器的时间和温度，而无需进行过多的实验。同样地，本领域技术人员根据本发明提供的指导将能够确定，用于制备比2mm厚或薄的本发明的合成深层过滤器的时间和温度，而无需进行过多的实验。
制备深层过滤器的其他方法可以采用允许以有效方式制造大量过滤介质的自动化机械。
本发明的烧结深层过滤器的使用方法
本发明考虑了本发明的合成烧结深层过滤器的使用方法。例如，本发明的烧结深层过滤器可用于过滤其中已产生生物产品的细胞培养基(即，原料流)。根据原料流的处理阶段，可以使用具有不同孔径、孔隙率和流量等级的过滤器。本领域技术人员将能够借助本说明书的教导来确定针对特定用途的正确孔径、孔隙率和流动等级。一方面，本发明的合成深层过滤器可用于在进一步下游处理之前澄清原料流。澄清步骤将去除例如细胞培养物碎片诸如全细胞、破裂的细胞、大宿主细胞蛋白(HCP)和其他污染物等，同时允许靶蛋白通过过滤器。在一个实施方案中，靶蛋白是单克隆抗体、人源化单克隆抗体、CAR-T细胞产生的抗体等。靶蛋白还可以是其他基因工程化或天然存在的蛋白，例如，由经表达载体转染并且经工程化以表达所需靶蛋白的细胞所产生、或由给定细胞类型天然表达。
使细胞培养物原料流通过本发明的深层过滤器的结果是，增加了渗透物(即，通过过滤器的原料流)中靶蛋白与一种或多种污染物的相对比例。在本文中，污染物可以包括全细胞、细胞碎片和胶体颗粒。一方面，与原料流相比，靶蛋白相对于(一种或多种)污染物的浓度增加了至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少200％、至少500％和至少1000％。一方面，与原料流相比，靶蛋白相对于(一种或多种)污染物的浓度增加了至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％、至多90％、至多100％、至多200％、至多500％和至多1000％。一方面，靶蛋白相对于(一种或多种)污染物的浓度增加了10％至1000％和50％至500％。
本发明考虑了，本发明的深层过滤器在用于过滤原料流之前不进行预冲洗。一方面，明确排除在过滤原料流之前对本发明的深层过滤器进行预冲洗。
示例
实施例1
本发明的烧结深层过滤介质的制备。按下表1中所述的比率，将聚乙烯粘结剂PE(MIPELONTMXM-221u聚乙烯粘结剂,Mitsui Chemicals America,Inc.)和聚苯乙烯吸附剂PS(Medapore P787,>63μm,Merck KGaA,Darmstadt,德国)材料混合。将粉末混合物分布到带有PTFE离型膜的大金属烤板上。使用拉杆将粉末混合物均匀分布至2mm的厚度。将烤板放入预热好的165℃的烘箱中历时60分钟。将样品从烘箱中取出并冷却至室温。然后将烧结深层过滤片材切割成23cm2的圆盘并结合到安全帽(minicap)过滤器测试装置中以进行应用测试。先前已报道过使用安全帽过滤器测试装置评估深层过滤片材性能(Lutz,H.等人，Biotechnol.Prag.,2015,31,6,1542-1550；这是本领域普通技术人员对于该主题的知识的示例)。
表1
实施例2
本发明的烧结深层过滤介质的制备。按下表2中所述的比率，将聚乙烯粘结剂PE(MIPELONTMXM-221u聚乙烯粘结剂,Mitsui Chemicals America,Inc.)和离子交换吸附剂(PrAOH、PrCH和MBl/lH（/>Corporation,Bala Cynwyd,PA)材料混合。对于实施例2-4、2-5和2-6(如下表2所示)，将/>离子交换吸附剂在125℃干燥3至18小时。将粉末混合物分布到带有PTFE离型膜的大金属烤板上。使用拉杆将粉末混合物均匀分布至3mm的厚度。将烤板放入预热好的165℃的烘箱中历时60分钟。将样品从烘箱中取出并冷却至室温。然后将烧结深层过滤片材切割成5cm2的圆盘并结合到5cm2过滤器测试装置中以进行应用测试。
表2
实施例3
本发明的烧结深层过滤介质的制备。按下表3中所述的比率，将聚乙烯粘结剂PE(MIPELONTMXM-221u聚乙烯粘结剂,Mitsui Chemicals America,Inc.)和聚苯乙烯吸附剂PS(Medapore P787,>63μm,Merck KGaA,Darmstadt,德国)材料混合。将粉末混合物分布到带有PTFE离型膜的大金属烤板上。使用拉杆将粉末混合物均匀分布至2mm的厚度。将烤板放入预热好的165℃的烘箱中历时60分钟。将样品从烘箱中取出并冷却至室温。然后将烧结深层过滤片材切割成23cm2的圆盘并结合到安全帽过滤器测试装置中以进行应用测试。先前已报道过使用安全帽过滤器测试装置评估深层过滤器性能(Lutz,H.等人，Biotechnol.Prag.,2015,31,6,1542-1550；这是本领域普通技术人员对于该主题的知识的示例)。
表3
根据该实施例制备的过滤介质示于图1和2中。图1示出了如实施例ID 3-2(A)中制备的烧结深层过滤介质。示出了基于纤维素的基准样品(CE25过滤介质)的照片以作为比较(B)。
图2为本发明的烧结深层过滤介质的横截面SEM显微照片。图2中所示的烧结深层过滤介质根据实施例ID 3-2制备。SEM显微照片以放大倍数100倍(A和B)和500倍(C和D)提供。
如针对实施例ID 3-7所述制备烧结深层过滤介质。如图3所示，用100L/m2的Milli-Q(MilliporeSigma,Burlington,MA)水在600LMH下冲洗安全帽过滤器装置。在每次25L/m2冲洗后收集TOC可提取物样品。针对含有实施例ID 3-7的烧结深层过滤介质的测试装置记录的TOC可提取物值，远低于针对HC(MilliporeSigma,Burlington,MA)的典型的TOC冲洗出目标(<3ppm TOC，在100L/m2冲洗出下)。
如实施例ID 3-7所述制备烧结深层过滤介质。如图4所示，使其中一个23cm2的安全帽过滤器装置(正方形)经受40-60kGy伽马辐照剂量，而另一个则没有(圆形)。每个安全帽过滤器装置均用100L/m2的Milli-Q水在600LMH下冲洗。在每次25L/m2冲洗后收集TOC可提取物样品。针对含有实施例ID 3-7的烧结深层过滤介质的测试装置记录的TOC可提取物值，远低于针对HC的典型TOC冲洗出目标(<3ppm TOC，在100L/m2冲洗出下)。对于经受40-60kGy伽马辐照的装置，未观察到TOC可提取物显著增加。这些结果表明，对于生物药物制造中使用的典型澄清操作，本发明的烧结深层过滤介质不需要在使用前对装置进行冲洗。此外，烧结深层过滤介质的构造材料对伽马辐照表现出良好的稳定性。
如实施例ID 3-7所述制备烧结深层过滤介质。如图5所示，安全帽过滤器装置用100L/m2的Milli-Q水在600LMH下冲洗。在每次25L/m2冲洗后收集金属可提取物样品。金属可提取物通过电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)进行测定。对于含有实施例ID 3-7的烧结深层过滤介质的测试装置记录的金属可提取物值，低于针对除硅和钠之外的所有金属的仪器检测限(0.02ppm)。
如实施例ID 3-7所述制备烧结深层过滤介质。如图6所示，其中一个23cm2微帽过滤器装置经受40-60kGy伽马辐照剂量。每个安全帽过滤器装置均用100L/m2的Milli-Q水在600LMH下冲洗。每次25L/m2冲洗后收集金属可提取物样品。金属可提取物通过电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)进行测定。对于经受40-60kGy伽马辐照的装置，未观察到金属可提取物显著增加。这些结果表明，对于生物药物制造中使用的典型澄清操作，本发明的烧结深层过滤介质不需要在使用前对装置进行冲洗。此外，烧结深层过滤介质的构造材料对伽马辐照表现出优异的稳定性。
实施例4
本发明的烧结深层过滤介质的制备。将聚乙烯粘结剂PE(MIPELONTMXM-221u聚乙烯粘结剂,Mitsui Chemicals America,Inc.)和交联的聚(4-乙烯基吡啶)吸附剂PVP混合。PVP吸附剂包括聚(4-乙烯基吡啶)，2％与二乙烯基苯交联，和聚(4-乙烯基吡啶-共-乙基乙烯基苯)，25％与二乙烯基苯交联，两者均购自MilliporeSigma,St.Louis,MO,USA。按照下表4中描述的比率将这些材料混合。将粉末混合物分布到带有PTFE离型膜的大金属烤板上。使用拉杆将粉末混合物均匀分布至2mm的厚度。将烤板放入预热好的165℃的烘箱中历时120分钟。将样品从烘箱中取出并冷却至室温。
表4
实施例5
伽马射线辐照后的烧结深层过滤介质的水流速测试。提供含有实施例1中描述的烧结深层过滤介质的23cm2安全帽测试装置。含有本发明的烧结深层过滤介质的该23cm2安全帽测试装置中的一个经受剂量为40-60kGy的伽马辐照。将所描述的安全帽装置连接至蠕动泵，并将去离子水泵送通过该装置，并通过天平和计时器测定流速。通过电子压力传感器测定压降。水流速测试的结果示于下表5中。包含本发明的烧结深层过滤介质的过滤装置在用于收获物澄清单元操作的相关通量下表现出足够低的压降。
表5
实施例6
CHO细胞培养收获物的澄清。提供含有实施例3中描述的烧结深层过滤介质的23cm2安全帽测试装置。含有本发明的烧结深层过滤介质的23cm2安全帽测试装置中的一个经受剂量为40-60kGy的伽马辐照。过滤器测试装置受到总细胞密度为25.7x106个细胞/ml(89％存活力)的CHO细胞培养收获物的挑战。将所描述的安全帽装置连接至蠕动泵并将细胞培养收获物泵送通过该装置。通过天平和数据记录仪系统连续记录滤液体积。对于含有如实施例3中所述的烧结深层过滤介质的装置来说，使用前冲洗装置是不必要的。通过电子压力传感器测定过滤器压降。绘制了作为过滤器吞吐量函数的过滤阻力曲线(参见表6和图7)并将其与作为对照样品进行测试的常规的基于纤维素的深层过滤器(CE25过滤介质)进行比较。从该实验的结果可以得出一些结论。(1)对于实施例ID 6-6的过滤介质，没有观察到系统阻力的显著增加。PE粘结剂负载量的增加提高了过滤器的保留，如实施例ID 6-2至6-5的较高的过滤器阻力曲线所示。(2)实施例ID 6-4和6-5的过滤器阻力曲线相似。这些结果表明，实施例ID 3-7中的烧结深层过滤介质没有被40-60kGy的伽马辐照剂量显著降解。(3)在收获物澄清单元操作中，观察到的过滤器阻力曲线和保留特性，与常规的基于纤维素的深层过滤介质(/>CE,MilliporeSigma,Burlington,MA)相当。
表6
实施例7
模型原料流(PeptoneT)的澄清。提供含有实施例ID 3-2中描述的烧结深层过滤介质的23cm2安全帽测试装置。用100L/m2的Milli-Q水以600LMH的流速冲洗过滤器测试装置。过滤器测试装置受到模型原料流的挑战，该原料流包含15g/L的PeptoneT(P6463,MilliporeSigma)在DI(蒸馏、去离子)水中的悬浮液。测得模型进料溶液在稀释10倍时的浊度为179NTU。选择该模型原料流来近似在典型的二次澄清应用中遇到的深层过滤器堵塞的特征。二级澄清步骤通常用于在选定的应用中去除细颗粒或降低浊度，这些应用包括离心后、灌注生物反应器后、细胞保留装置后、初级深层过滤后和对于某些下游中间体的蛋白A后。将所描述的安全帽装置连接至蠕动泵并将Peptone />T原料流泵送通过该装置，并通过天平和数据记录仪连续记录滤液体积。过滤器通过电子压力传感器测定压降。绘制了作为过滤器吞吐量函数的过滤阻力曲线。参见表7和图8。从该实验的结果中可以得出一些结论。在二级澄清单元操作中，观察到的过滤器阻力曲线和保留特性(滤液浊度降低)与常规的基于硅藻土的单层深层过滤介质等级(/>DE型过滤介质,MilliporeSigma,Burlington,MA)的性能相当。
表7
实施例8
市售的现有技术培养基(例如DE和CE培养基)表现出高无机可提取物(美国专利第7,673,757号；'757专利，其全部内容并入本文)。结果，在50L/m2冲洗后测得8-12μS/cm的高滤液电导率值。'757专利中描述的介质表现出降低的无机可提取物含量，并且在58L/m2冲洗后滤液电导率值降低至2μS/cm。参见现有技术图即图9，其中'757专利的介质用名称“Celpure”表示。基于'757专利中提供的数据，本领域技术人员将认识到，使用CE或DE过滤介质将需要大于50L/m2的使用前冲洗体积。然而，虽然至少58L/m2的减少的使用前冲洗体积对于'757专利的介质来说是足够的，但是仍然认为该所需冲洗体积是不可接受的。
相比之下，在本说明书中描述的PE:PS为1:1的过滤介质在使用前需要的冲洗体积大大减少或无需使用前冲洗，因为这种过滤材料中的无机可提取物非常少。25L/m2冲洗后，滤液电导率值小于0.5μS/cm(参见图13)。根据本说明书的教导，本领域技术人员将认识到具有如此低的无机可提取物的过滤介质将不需要使用前冲洗。
在随后的研究中，使CE介质、DE介质和PE:PS为1:1的过滤介质的样品暴露于灭菌剂量的伽马辐照(25-40kGy)。虽然CE和DE介质两者在伽马射线辐照后滤液电导率值有所增加(分别参见图11和12)，但是对于在本说明书中描述的PE:PS为1:1的材料没有观察到增加(参见图13)。此外，观察到PE:PS为1:1的过滤介质的滤液电导率值为被测试的CE和DE过滤介质样品的1/50-1/100。
实施例9
在该预示性实施例中，用清洁的去离子水(MilliporeSigma,Burlington,MA)冲洗‘757专利的实施例3中所述类型的复合材料并测定在规定的58L/m2的冲洗体积后流出物的电导率。电导率值用来代表过滤介质中可溶性金属的水平。图14示出了‘757专利中的各种Celpure/聚乙烯复合材料样品所获得的电导率值与本发明的PE:PS为1:1的材料的测量值的比较(参见图13)。还提供了记录的/>CE25(图11)和DE40深层过滤介质(图12)的电导率数据以供比较。'757专利的Celpure/聚乙烯复合材料样品的流出物电导率数据表明在58L/m2的冲洗后电导率水平为约2μS/cm。由于流出物电导率值代表过滤介质中存在的可溶性金属的水平，因此预计现有技术的Celpure/聚乙烯复合材料在暴露于伽马辐照之后这些值不会增加或减少。如'757专利第7页第2栏第14行所述：“有助于电导率的可提取物(无机物)并非仅源自或主要源自硅藻土……事实上，本发明的复合材料不含纤维素和热固性粘结剂，与常规纤维素介质相比，流出物电导率降低了75-90％”。然而，虽然使用'757专利的过滤材料显著降低了流出物的电导率，但并没有在该参考文献中描述的复合材料中使用的硅藻土助滤剂中消除金属可提取物的贡献。对比之下，使用本发明的PE:PS为1:1的过滤介质，与常规纤维素介质诸如DE40相比，流出物的电导率进一步降低了至多95％，并且流出物的电导率为专利'757的材料的几分之一。本发明中描述的深层过滤材料诸如PE:PS为1:1的过滤介质不会如现有技术过滤材料(包括'757专利的过滤介质)所要求“需要使用前冲洗以在使用前将有机或无机污染物的水平降低到可接受水平”('757专利，第1栏，第53行)。/>

Claims (44)

1.一种深层过滤器，其包括：
a)烧结深层过滤介质，所述烧结深层过滤介质包含聚乙烯粘结剂的热熔混合物，和
b)一种或多种吸附剂，所述吸附剂选自PrAOH、PrCH、MB1/1h、聚苯乙烯吸附剂、2％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基苯)、25％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基吡啶-共-乙基乙烯基苯)。
2.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中所述深层过滤介质是明显均匀的。
3.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中所述深层过滤器的厚度为约1mm至约4mm。
4.根据权利要求3所述的深层过滤器，其中所述深层过滤器的厚度为约2mm至约3mm。
5.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中明确排除湿强度粘结剂树脂。
6.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:10至约10:1。
7.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:5至约5:1。
8.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:2至约2:1。
9.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:1。
10.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中所述聚苯乙烯吸附剂的尺寸为直径约10μm至约120μm。
11.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中所述聚苯乙烯吸附剂的尺寸为直径约30μm至100μm。
12.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中所述聚苯乙烯吸收剂的尺寸为直径约50μm至80μm。
13.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中所述聚苯乙烯吸收剂的尺寸为直径约60μm至70μm。
14.根据权利要求1所述的深层过滤器，其中所述聚苯乙烯吸收剂的尺寸为直径约63μm。
15.一种制备烧结深层过滤介质的方法，所述方法包括将聚乙烯粘结剂与吸附剂混合以制备混合物，将所述混合物铺展至基本上均匀的厚度并将所述混合物在约165℃加热约60分钟，所述吸附剂选自PrAOH、PrCH、MB1/1h、聚苯乙烯吸附剂、2％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基苯)、25％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基吡啶-共-乙基乙烯基苯)。
16.通过根据权利要求15所述的方法制备的烧结深层过滤介质，其中所述深层过滤介质是明显均匀的。
17.通过根据权利要求15所述的方法制备的烧结深层过滤介质，其中所述深层过滤器的厚度为约1mm至约4mm。
18.根据权利要求17所述的通过所述方法制备的烧结深层过滤介质，其中所述深层过滤器的厚度为约2mm至约3mm。
19.通过根据权利要求15所述的方法制备的烧结深层过滤介质，其中明确排除湿强度粘结剂树脂。
20.通过根据权利要求15所述的方法制备的烧结深层过滤介质，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:10至约10:1。
21.通过根据权利要求15所述的方法制备的烧结深层过滤介质，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:5至约5:1。
22.通过根据权利要求15所述的方法制备的烧结深层过滤介质，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:2至约2:1。
23.通过根据权利要求15所述的方法制备的烧结深层过滤介质，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:1。
24.通过根据权利要求15所述的方法制备的烧结深层过滤介质，其中所述吸附剂的尺寸为直径约10μm至约120μm。
25.根据权利要求24所述的通过所述方法制备的烧结深层过滤介质，其中所述吸附剂的尺寸为直径约30μm至100μm。
26.根据权利要求25所述的通过所述方法制备的烧结深层过滤介质，其中所述吸附剂的尺寸为直径约50μm至80μm。
27.根据权利要求26所述的通过所述方法制备的烧结深层过滤介质，其中所述吸附剂的尺寸为直径约60μm至70μm。
28.根据权利要求27所述的通过所述方法制备的烧结深层过滤介质，其中所述吸附剂的尺寸为直径约63μm。
29.一种澄清原料流的方法，所述原料流含有靶蛋白，所述方法包括：
a)提供：深层过滤器，其包括烧结深层过滤介质，所述深层过滤介质包含聚乙烯粘结剂和吸附剂，所述吸附剂选自PrAOH、PrCH、MB1/1h、聚苯乙烯吸附剂、2％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基苯)、25％与二乙烯基苯交联的聚(4-乙烯基吡啶-共-乙基乙烯基苯)；
b)使所述深层过滤器与所述原料流接触，使得所述靶蛋白通过所述深层过滤器，所述靶蛋白保留在渗透物中并且污染物被所述深层过滤器吸附，从而与所述原料流中靶蛋白相对于污染物的比率相比，所述渗透物中靶蛋白相对于污染物的浓度增加了至少20％。
30.根据权利要求29所述的方法，其中与所述原料流中靶蛋白相对于污染物的比率相比，所述渗透物中靶蛋白相对于污染物的浓度增加了至少50％。
31.根据权利要求29所述的方法，其中与所述原料流中靶蛋白相对于污染物的比率相比，所述渗透物中靶蛋白相对于污染物的浓度增加了至少100％。
32.根据权利要求29所述的方法，其中所述深层过滤介质是明显均匀的。
33.根据权利要求29所述的方法，其中所述深层过滤器的厚度为约1mm至约4mm。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述深层过滤器的厚度为约2mm至约3mm。
35.根据权利要求29所述的方法，其中明确排除湿强度粘结剂树脂。
36.根据权利要求29所述的方法，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:10至约10:1。
37.根据权利要求29所述的方法，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:5至约5:1。
38.根据权利要求29所述的方法，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:2至约2:1。
39.根据权利要求29所述的方法，其中聚乙烯与所述吸附剂的比率为约1:1。
40.根据权利要求29所述的方法，其中所述吸附剂的尺寸为直径约10μm至约120μm。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述吸附剂的尺寸为直径约30μm至100μm。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述吸附剂的尺寸为直径约50μm至80μm。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述吸附剂的尺寸为直径约60μm至70μm。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述吸附剂的尺寸为直径约63μm。
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