CN117783544A - 用于睾酮检测的分析缓冲液和试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于睾酮检测的分析缓冲液和试剂盒，涉及免疫分析技术领域。该分析缓冲液包含睾酮抗体、缓冲溶液、稳定剂、解离剂和表面活性剂；解离剂包括双氢睾酮和/或2‑溴雌二醇；稳定剂包括牛IgG和/或胎牛血清。该用于睾酮检测的分析缓冲液和试剂盒用于睾酮检测有较好的稳定性和准确度，对于睾酮检测有重要的作用。
Description
技术领域
本发明涉及免疫分析技术领域，尤其是涉及一种用于睾酮检测的分析缓冲液和试剂盒。
背景技术
睾酮(4-雄烯-17β-醇-3-酮)是一种含有19个碳的类固醇激素，是男性体内主要的性激素。女性睾酮浓度比男性低大约10～20倍。引起男性睾酮水平低下的主要原因有：促性腺缴素分泌不足，睾丸功能低下，高催乳素血症，垂体功能低下，某些肝脏和肾脏疾病，以及其他严重疾患。女性中较高的血清睾酮水平可能表明存在多囊卵巢综合征和肾上腺增生，在临床上表现为不育、多毛征和闭经。
目前用于检测睾酮的试剂盒主要包括磁珠组分、分析缓冲液(含睾酮抗体)、标记组分等。CN1227350A提出了一种采用以第二抗体包板的方式检测睾酮用的酶免疫分析测试盒，其具有更高的精密度、灵敏度和稳定性，以及能有更好的特异性和准确性，然而该试剂盒还存在使用不方便，无法测定总睾酮含量等问题。因此，开发出一种使用方便、稳定性好、能够准确测定睾酮含量的试剂盒具有重要意义。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于睾酮检测的分析缓冲液，以提高分析缓冲液中的稳定性和睾酮检测的准确度。本发明的另一目的在于提供用于睾酮检测的试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
第一方面，提供了一种用于睾酮检测的分析缓冲液，该分析缓冲液包含睾酮抗体、缓冲溶液、稳定剂、解离剂和表面活性剂；
所述解离剂包括双氢睾酮和/或2-溴雌二醇，优选包括2-溴雌二醇。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液含有终浓度为100～1000ng/mL的2-溴雌二醇，2-溴雌二醇终浓度例如可以为但不限于100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000ng/mL。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液含有终浓度为10～600ng/mL的双氢睾酮，双氢睾酮终浓度例如可以为但不限于10、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550或600ng/mL。
所述稳定剂包括牛IgG和/或胎牛血清，优选包括牛IgG。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液含有质量百分含量为0.01～5％的牛IgG，牛IgG的质量百分含量例如可以为但不限于0.01％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、0.8％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％，以上浓度为牛IgG在分析缓冲液中的终浓度。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液含有质量百分含量为0.5～20％的胎牛血清，胎牛血清的质量百分含量例如可以为但不限于0.5％、1％、2％、5％、8％、10％、12％、15％、17％或20％，以上浓度为胎牛血清在分析缓冲液中的终浓度。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液包括终浓度为0.01～0.2mol/L，pH为5.0～7.0的吗啉乙磺酸缓冲液；吗啉乙磺酸缓冲液的终浓度例如可以为但不限于0.01、0.02、0.05、0.08、0.1、0.12、0.15、0.18或0.2mol/L；吗啉乙磺酸缓冲液的pH例如可以为但不限于5.0、5.5、6.0、6.5或7.0。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液中睾酮抗体的浓度为20～70ng/mL，例如可以为但不限于为20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或70ng/mL。
可选的实施方式中，所述表面活性剂包括吐温系列表面活性剂和/或曲拉通系列表面活性剂中的一种或多种。
可选的实施方式中，所述表面活性剂包括吐温系列表面活性剂中的一种或多种。
可选的实施方式中，所述表面活性剂包括曲拉通系列表面活性剂中的一种或多种。
可选的实施方式中，所述表面活性剂包括吐温系列表面活性剂中的至少一种和曲拉通系列表面活性剂中的至少一种。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液包括体积百分含量为0.01～5％的吐温-20，吐温-20的体积百分含量例如可以为但不限于为0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、0.8％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％或5％，以上浓度为吐温-20在分析缓冲液中的终浓度。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液还包括防腐剂，所述防腐剂可选择本领域可接受的常规的、已知的防腐剂。
可选的实施方式中，所述分析缓冲液包括体积百分含量为0.01～0.5％的proclin300，proclin 300的体积百分含量例如可以为但不限于为0.01％、0.05％、0.1％、0.2％或0.5％，以上浓度为proclin 300在分析缓冲液中的终浓度。
可选的实施方式中，以终浓度计，所述分析缓冲液包括终浓度如下组分：0.01～0.2mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、20～70ng/mL的抗睾酮抗体、0.01～5％w/w的牛IgG、100～1000ng/mL的2-溴雌二醇、0.01～0.5％v/v的proclin 300和0.01～5％v/v的吐温-20，pH为5.0～7.0。
可选的实施方式中，以终浓度计，所述分析缓冲液包括终浓度如下组分：0.1mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、50ng/mL的抗睾酮抗体、1％w/w的牛IgG、400ng/mL的2-溴雌二醇、0.05％v/v的防腐剂proclin 300、0.05％v/v的吐温-20，pH为6.5。
第二方面，还提供了一种用于睾酮检测的试剂盒，所述试剂盒包括第一方面的用于睾酮检测的分析缓冲液。可以理解的是，所述试剂盒还可以包括本领域任选的，可接受的其他的用于检测睾酮的试剂，包括但不限于用于和待测样本中睾酮与抗体竞争结合的睾酮抗原、缓冲液、洗涤液、稀释液、样本处理液、固相载体、用于提供检测信号的标记物、发光底物、阴性对照、阳性对照、标准品和质控品中的一种和多种。
可选的实施方式中，所述试剂盒包括第一方面的用于睾酮检测的分析缓冲液，还包括如下组分中的一种或多种：含有包被有二抗的固相载体的溶液、含有经标记物标记的睾酮的溶液、洗涤液、校准品、质控品。所述二抗与睾酮抗体特异性结合。
可选的实施方式中，与所述睾酮抗体特异性结合的二抗为兔抗绵羊二抗。
可选的实施方式中，所述标记物包括但不限于荧光分子标记、化学发光标记物、量子点、荧光微球和胶体金等。
可选的实施方式中，所述包被有二抗的固相载体的溶液为磁珠工作液，pH为7.0～8.0，所述磁珠工作液包括终浓度为0.05mol/L～0.2mol/L磷酸盐缓冲液、0.1～0.8mg/mL磁珠、0.05～5％v/v的proclin 300和1～5％v/v的吐温-20。
可选的实施方式中，所述含有经标记物标记的睾酮的溶液为碱性磷酸酶标记睾酮的酶标工作液，pH为6.0～7.0，所述碱性磷酸酶标记睾酮的酶标工作液包括终浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、50～150ng/mL的碱性磷酸酶标记睾酮、1％～10％v/v甘油、5～40g/L牛血清白蛋白和5～40g/L酪蛋白钠盐。
上述用于睾酮检测的试剂盒采用化学发光法检测睾酮，检测原理为：分析缓冲液中的睾酮抗体与包被有能与其特异性结合的二抗(例如兔抗绵羊二抗)的磁珠结合，样本血清加入与之混合后，进一步加入标记的睾酮与样本中的睾酮做竞争反应。发光值的强度与样本中的睾酮量呈负相关。
可选的实施方式中，将待测样本与羧基磁珠工作液、睾酮抗体分析缓冲液混合并孵育完成后，再加入酶标工作液混合、孵育、洗涤。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的用于睾酮检测的分析缓冲液能够有效用于样本睾酮检测，经过优化得到的睾酮检测分析缓冲液用于睾酮检测时，具有较高的信噪比，很好地提高了试剂盒的灵敏度，且能够更好地提高睾酮检测体系的稳定性——能够4℃稳定储存1个月以上，在37℃亦能稳定保存至少7天。本发明还提供了相应的包含上述分析缓冲液的用于睾酮检测的试剂盒，试剂盒具有灵敏度高、特异性好、成本低、稳定性好，测定准确的优点，与已证实的检测方法检测结果具有很好的相关性，对于睾酮检测有重要的作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例2中含有不同蛋白稳定剂睾酮抗体分析缓冲液测定比对分析结果；
图2为实施例3试剂与罗氏试剂的方法学比对结果；
图3为对比例1使用与本发明相似的分析缓冲液成分用于雌二醇检测的分析结果。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中兔抗绵羊抗体(二抗)购于华葵金配生物科技有限公司，货号P101022，抗睾酮抗体购于珠海丽禾医疗诊断产品有限公司，货号MAB1040，半抗原睾酮-3-CMO购于sigma，其他未提及原料均为市售常用原料。
实施例1睾酮测定试剂盒
(1)试剂盒组分：
睾酮测定试剂盒(化学发光法)包括：磁珠工作液，睾酮抗体分析缓冲液，碱性磷酸酶标记睾酮的酶标工作液、校准品/质控品。其中：
磁珠工作液包括：pH为7.0，0.1mol/L磷酸盐缓冲液，所述缓冲液中含有0.1～0.8mg/mL兔抗绵羊抗体包被的羧基磁珠、0.05％v/v的防腐剂proclin 300、1％v/v的吐温-20。
睾酮检测分析缓冲液包括终浓度如下组分：0.1mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、50ng/mL的抗睾酮抗体、1％w/w的牛IgG、400ng/mL的2-溴雌二醇、0.05％v/v的防腐剂proclin300、0.05％v/v的吐温-20，pH为6.5。
碱性磷酸酶标记睾酮的酶标工作液包括：pH为6.5，浓度为0.1mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液配制而成，所述缓冲液中含有100ng/mL的碱性磷酸酶标记睾酮、3％v/v甘油、20g/L牛血清白蛋白、15g/L酪蛋白钠盐。
校准品/质控品：
校准品为睾酮纯品稀释于市售的蛋白稳定剂(Cantor BioConnect，BT005)配置得到，校准品浓度分别为0.3ng/mL、10.5ng/mL。
质控品为睾酮纯品稀释于市售的蛋白稳定剂(Cantor BioConnect，BT005)配置得到，浓度分别为1ng/mL、4ng/mL。
磁珠工作液、碱性磷酸酶标记睾酮的酶标工作液分别按如下方法制备得到。
该试剂盒的制备方法包括如下：
(1)羧基磁珠包被步骤如下：
1.磁珠洗涤：取所需的磁珠量，然后将磁珠在旋转混匀仪上混匀，30r/min混匀5～10min，确保无沉淀；按需求移吸取所需吗啉乙磺酸缓冲液，然后加入所需磁珠，旋涡混匀30s，磁力吸附2分钟，吸掉洗涤液。按上述步骤再重复1次，共洗涤2次。
2.磁珠活化：将磁珠用吗啉乙磺酸缓冲液重悬混匀，加入所需的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，旋涡混匀30s，加入N-羟基丁二酰亚胺，旋涡混匀30s，放置在旋转混合仪上；温度：30±1.5℃，转速30次/分钟，颠转15min。
3.磁珠洗涤：将包被管放在磁分离设备上吸附2分钟，移除上清，加入所需量的吗啉乙磺酸缓冲液，旋涡混匀30s，磁力吸附2分钟，吸掉洗涤液，按上述步骤再重复2次，共洗涤3次。
4.磁珠包被：将兔抗绵羊抗体(抗体和磁珠质量比1:50μg/mg)用吗啉乙磺酸缓冲液进行预稀释，得到包被抗体稀释液。磁珠加入所需量的吗啉乙磺酸缓冲液，旋涡混匀30s，加入包被抗体稀释液，旋涡混匀30s，然后放置旋转混合仪；温度：30±1.5℃，转速30次/分钟，颠转2小时，可延长0.5小时。
5.磁珠封闭：加入所需量的发光封闭剂(BlockmasterTM,货号：CE510)，旋涡混匀30s，然后放置旋转混合仪；温度：30±1.5℃，转速30次/分钟，颠转1小时，可延长1小时。
6.磁珠洗涤：将包被管放在磁分离设备上吸附2分钟，移除上清，然后加入磷酸盐缓冲液、旋涡混匀30s，磁力吸附2分钟，吸掉洗涤液，按上述步骤再重复2次，共洗涤3次。
7.磁珠储液：加入所需量的磁珠稀释液制备成磁珠储液，储存于2-8℃。
(2)睾酮检测分析缓冲液的制备方法：
选择合适的容器，加入700mL纯水；称取配方量的2-(N-吗啉基)乙磺酸钠盐于容器中，混匀；室温条件下将pH调到6.5±0.1；分别加入配方量的吐温-20、防腐剂proclin300、解离剂、蛋白稳定剂和睾酮抗体，于容器中搅拌1小时；定容至1L，用0.22μm过滤器过滤，储存于2-8℃。
(3)碱性磷酸酶标记睾酮的酶标工作液的制备方法：
将市售的碱性磷酸酶标记睾酮(珠海丽禾医疗诊断产品有限公司,货号：TESTO-AP)溶解于酶标稀释液，配制成酶标工作液，用0.22μm过滤器过滤，储存于2-8℃。
(4)试剂盒使用方法：将样品和磁珠工作液、睾酮检测分析缓冲液共同孵育，孵育结束后进行洗涤，加入碱性磷酸酶标记睾酮的酶标工作液进一步孵育，孵育结束后进行洗涤，洗涤后通过仪器检测发光值；进一步绘制标准曲线，并得出相应的样本结果。
实施例2
睾酮测定试剂盒，除睾酮检测分析缓冲液不同外，其余和实施例1相同。
睾酮检测分析缓冲液包括终浓度如下组分：0.2mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、70ng/mL的抗睾酮抗体、5％w/w的牛IgG、1000ng/mL的2-溴雌二醇、5％v/v的防腐剂proclin 300、5％v/v的吐温-20，pH为7.0。
实施例3
睾酮测定试剂盒，除睾酮检测分析缓冲液不同外，其余和实施例1相同。
睾酮检测分析缓冲液包括终浓度如下组分：0.01mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、20ng/mL的抗睾酮抗体、0.01％w/w的牛IgG、100ng/mL的2-溴雌二醇、0.01％v/v的防腐剂proclin 300、0.01％v/v的吐温-20，pH为5.0。
实施例4
人体内98％睾酮与蛋白质结合，其中大部分与SHBG(性激素结合球蛋白)特异性结合，一部分与白蛋白形成非特异性结合，一部分与皮质醇结合球蛋白结合，还有极少数与α1酸性糖蛋白和某些脂蛋白结合。可以利用睾酮类似物的特性，将睾酮类似物加入睾酮检测分析缓冲液中，可将分析物睾酮从结合的蛋白质上解离，从而提高试剂灵敏度。
测试分别含有四种不同睾酮类似物作为解离剂的睾酮检测分析缓冲液的检测效果，待测解离剂包括：双氢睾酮、达那唑、肝素钠、2-溴雌二醇。
待测睾酮检测分析缓冲液包括如下终浓度的组分：解离剂、1％w/w牛IgG、100mMMES缓冲液、50ng/mL睾酮抗体、0.05％v/v吐温-20、0.05％v/v Proclin 300，pH为6.5；其中，解离剂的成分和浓度如表1所示。
表1四种含解离剂的待测睾酮检测分析缓冲液中解离剂的组分和含量
搭配实施例1的磁珠工作液、酶标工作液，对不同浓度校准品为样本进行检测，检测方法参考实施例1。计算信噪比以比较不同解离剂对试剂信号的影响(结果见表2)。
表2不同睾酮检测分析缓冲液进行不同浓度样本检测的结果
由表2可得，相对于不加入解离剂，加入达那唑或肝素钠后，信噪比基本不变，故1000ng/mL达那唑、0.1mg/mL的肝素钠对于加入抗体保存液体系作用不明显。而加入双氢睾酮或肝素钠后，最大信噪比提高10倍以上，说明这两个解离剂用于睾酮检测能够有效提高灵敏度。进一步比较可见，500ng/mL的双氢睾酮加入体系后，本底(即样本浓度为0时)发光值明显降低，故选择2-溴雌二醇作为最优解离剂，加入睾酮检测分析缓冲液中。
实施例5
由于引入兔抗绵羊二抗，试剂特异性会因为抗体种类增多而降低。需要选择合适的稳定剂以减低试剂的非特异性结合。测试五种稳定剂对检测结果的影响，待测稳定剂包括：山羊血清、兔血清、胎牛血清、牛IgG、人血清白蛋白。
待测睾酮检测分析缓冲液包括如下终浓度的组分：稳定剂、400ng/mL 2-溴雌二醇、100mM MES缓冲液、50ng/mL睾酮抗体、0.05％v/v吐温-20、0.05％v/v Proclin 300，pH为6.5；其中，稳定剂的成分和浓度如表3所示。
表3待测睾酮检测分析缓冲液中的稳定剂组成
搭配实施例1磁珠工作液、酶标工作液，对各临床样本进行检测(检测方法参考实施例1)，计算相关性，比较不同稳定剂对检测结构的影响，结果见表4和图1。
表4含不同稳定剂的睾酮检测分析缓冲液的检测结果(ng/mL)
由结果分析可见，测试的睾酮检测分析缓冲液配方中，山羊血清组、兔血清组和人血清白蛋白组，相关性r均小于0.95；且发明人意外地发现，含有胎牛血清或牛IgG配方组的睾酮检测分析缓冲液相关性r大于0.95(且高于0.99)，尤其加入牛IgG的睾酮检测分析缓冲液相关性r达到0.996，故可选择胎牛血清或牛IgG作为稳定剂组分加入分析缓冲液中，进一步但考虑到胎牛血清为混合物，批间差难以控制，且其用量亦更大，优选牛IgG作为睾酮检测分析缓冲液的蛋白稳定剂。
实施例6睾酮抗体分析缓冲液稳定性测试
睾酮检测分析缓冲液包括如下终浓度的组分：1％w/w牛IgG、400ng/mL 2-溴雌二醇、100mM MES缓冲液、50ng/mL睾酮抗体、0.05％v/v吐温-20、0.05％v/v Proclin 300，pH为6.5，以该睾酮检测分析缓冲液进行稳定性测试。
配制睾酮检测分析缓冲液，搭配实施例1磁珠工作液、酶标工作液，分别检测睾酮检测分析缓冲液4℃机载1个月及热加速7天的检测效果(检测方法参考实施例1)。以系列浓度校准品为样本，使用全自动化学发光免疫分析仪进行检测，以发光值(RLU)相对偏差为判定标准，并计算发光值保留率，以考察试睾酮检测分析缓冲液的稳定性，结果见表5。
表5试剂机载1个月及热加速7天发光值
分别考察睾酮检测分析缓冲液机载7天，14天，21天，30天及热加速7天后，发光值与初始条件时发光值的相对偏差。由表5可见，该睾酮检测分析缓冲液在测试范围内，检测相对偏差均在±10％以内，表明试剂4℃机载1个月稳定，热加速7天稳定。
本发明试剂盒作用过程中形成“磁珠-兔抗绵羊二抗-睾酮单抗-睾酮“复合物，和形成“磁珠-兔抗绵羊二抗-睾酮单抗-碱性磷酸酶标记睾酮“复合物是关键步骤，所以复合物的稳定性至关重要，稳定剂的加入一方面有助于维持或提高其中组分保存的稳定性，另一方面可能还有助于维持或提高检测时上述复合物的稳定性，从而使得检测结果更佳。
实施例7试剂盒的临床试验
使用实施例1提供的试剂盒进行临床试验：
一、数据来源：
标本采自270例正常人群血清样本。样本体检结果均无传染性疾病，半年内无输血和大手术史。将测值进行统计分析，得出正常血清参考范围：男性1.962～9.071ng/mL；绝经前女性<0.1～0.534ng/mL。
二、试剂盒性能：
1.检出限：不高于0.1ng/mL。
2.准确度：相对偏差不超过±10％。
3.线性：在[0.1,16]ng/mL浓度范围内，线性相关系数|r|不低于0.990。
4.精密度：检测重复性参考品，所得结果的变异系数(CV)不大于8％。
其中，
批内精密度研究：采用2份不同浓度的样本，分别重复检测10次，检测结果如下表所示：
表6批内精密度
室内精密度研究：采用3份不同浓度的样本，每天运行2次，每次运行重复检测2次，共20天(n＝80)，检测结果如下表所示：
表7室内精密度
批间精密度研究：用3个批号的试剂盒检测重复性参考品，所得结果显示批间变异系数(CV)不大于10％。
实施例8方法学比对测试
分别采用实施例1～3和市售的罗氏的睾酮试剂(货号：05200067190)测定122个待测样本中睾酮含量，并得出实施例1～3分别与罗氏睾酮试剂相关性。
结果显示，实施例1～3试剂盒与罗氏的睾酮试剂都有较好的相关性，其中，实施例1试剂盒与罗氏试剂方法学比对相关系数R2为0.9939(如图2)，接近1，说明本发明的试剂盒能有效地测定样本中睾酮的含量，检测结果与业内认可的试剂盒的检测结果具有很好的相关性。
对比例1
将最终筛选的睾酮分析缓冲液，替换睾酮抗体为雌二醇抗体，验证此分析缓冲液是否可应用于其他项目。
待测的雌二醇分析缓冲液组成如下：0.1mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、50ng/mL的抗雌二醇抗体、1％w/w的牛IgG、0.05％v/v的防腐剂proclin 300、0.05％v/v的吐温-20，pH为6.5(雌二醇项目不适用2-溴雌二醇作为解离剂，因此换用适用于雌二醇项目的解离剂美睾酮，用量为0.1mg/mL)。
配合包被有二抗的磁珠的溶液、含有经碱性磷酸酶标记的雌二醇的溶液、洗涤液、雌二醇校准品、雌二醇质控品进行雌二醇检测，检测过程与睾酮检测相似；结果如下表和图3：
表8待测的雌二醇分析缓冲液的检测结果(pg/mL)
筛选睾酮检测分析缓冲液中重要组分蛋白稳定剂时，使用的评价指标是临床比对相关性，睾酮检测分析缓冲液的相关性较好。然而由表8和图3可见，将此分析缓冲液配方应用于雌二醇检测中，相关性r2＝0.7496，远不能达到项目需求，由此说明该配方不能适用于其他性激素项目。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种用于睾酮检测的分析缓冲液，其特征在于，包含睾酮抗体、缓冲溶液、稳定剂、解离剂和表面活性剂；
所述解离剂包括双氢睾酮和/或2-溴雌二醇；
所述稳定剂包括牛IgG和/或胎牛血清。
2.根据权利要求1所述的分析缓冲液，其特征在于，所述分析缓冲液含有质量百分含量为0.01～5％的牛IgG，或含有质量百分含量为0.5～20％的胎牛血清。
3.根据权利要求1所述的分析缓冲液，其特征在于，所述分析缓冲液含有终浓度为100～1000ng/mL的2-溴雌二醇，或含有终浓度为10～600ng/mL的双氢睾酮。
4.根据权利要求1所述的分析缓冲液，其特征在于，所述分析缓冲液包括终浓度为0.01～0.2mol/L，pH为5.0～7.0的吗啉乙磺酸缓冲液；
所述表面活性剂包括吐温系列表面活性剂和/或曲拉通系列表面活性剂中的一种或多种；
优选地，所述分析缓冲液包括体积百分含量为0.01～5％的吐温-20。
5.根据权利要求1所述的分析缓冲液，其特征在于，所述分析缓冲液还包括防腐剂；
优选地，所述分析缓冲液包括体积百分含量为0.01～0.5％的proclin 300。
6.根据权利要求1～5任一项所述的分析缓冲液，其特征在于，所述分析缓冲液包括终浓度如下组分：0.01～0.2mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、20～70ng/mL的抗睾酮抗体、0.01～5％w/w的牛IgG、100～1000ng/mL的2-溴雌二醇、0.01～0.5％v/v的proclin 300和0.01～5％v/v的吐温-20，pH为5.0～7.0；
优选地，所述分析缓冲液包括终浓度如下组分：0.1mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液、50ng/mL的抗睾酮抗体、1％w/w的牛IgG、400ng/mL的2-溴雌二醇、0.05％v/v的防腐剂proclin300、0.05％v/v的吐温-20，pH为6.5。
7.包括权利要求1～6任一项所述的用于睾酮检测的分析缓冲液的试剂盒。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括如下组分中的一种或多种：含有包被有二抗的固相载体的溶液、含有经标记物标记的睾酮的溶液、洗涤液、校准品、质控品。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒为化学发光检测试剂盒，包括如下组分中的一种或多种：含有包被有二抗的磁珠的溶液、含有经碱性磷酸酶标记的睾酮的溶液、洗涤液、校准品和质控品。
10.根据权利要求7～9任一项所述试剂盒的用途，其特征在于，所述试剂盒用于非诊断和治疗目的地检测睾酮。
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