CN117771182B

CN117771182B - 一种宠物外用su3327喷剂及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN117771182B
Application number: CN202410199313.8A
Authority: CN
Inventors: 吴聪明; 陈子祺; 亢继俊; 赵恪; 王淑歌; 刘德俊
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2024-02-22
Filing date: 2024-02-22
Publication date: 2024-05-31
Anticipated expiration: 2044-02-22
Also published as: CN117771182A

Abstract

本发明提供了一种宠物外用SU3327喷剂及其制备方法和应用，属于宠物制剂技术领域。本发明提供的宠物外用SU3327喷剂包括以下质量份数的组分：SU3327 0.25份，二甲基亚砜10份，增溶剂5~10份，促渗剂0.1~1份，抗氧化剂0.01~0.02份，纯化水余量；所述宠物外用SU3327喷剂中所有组分的总质量份数为100份。本发明以抗菌药物SU3327为有效成分，具有广谱抗菌活性和优异的抑菌效果，且工艺简单，使用方便，为临床宠物皮肤病的治疗提供新的选择。

Description

一种宠物外用SU3327喷剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及宠物制剂技术领域，尤其涉及一种宠物外用SU3327喷剂及其制备方法和应用。

背景技术

皮肤病在宠物疾病中占有较大比例，其致病因素多且复杂，包括细菌、真菌等生物因素及其他非生物因素，主要以皮肤和被毛病理性改变为特征，能引起患宠皮肤瘙痒、脱毛、皮屑、出血、结痂和皮肤异常等临床症状，甚至有的皮肤病会在主人和宠物之间交叉感染。

由于宠物皮肤疾病的类型非常多，临床上不容易确诊和治愈，且存在不规范使用人用药的情况，病原菌的耐药性逐渐增强，药物选择余地越来越少，给皮肤病的治疗带来了很大的难度，并导致人畜共患皮肤病的发病率不断增加等问题。

宠物皮肤疾病的诊治一直是临床上亟待解决的难题，目前针对常见皮肤病的治疗研究，国内外都集中在新药品的开发和使用上。SU3327，又称halicin，CAS：40045-50-9，分子式为C₅H₃N₅O₂S₃，平均分子量为261.3，为浅黄色或深绿色粉末，不溶于水，可溶于乙醇、二甲基亚砜。SU3327是一种人工合成的c-Jun N末端激酶（JNK）抑制剂，是治疗糖尿病的临床前药物，目前未见用于宠物皮肤治疗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种宠物外用SU3327喷剂及其制备方法和应用，具有优异的抗菌效果，可用于临床宠物皮肤病的治疗，减少人畜共患皮肤病的发病率。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种宠物外用SU3327喷剂，包括以下质量份数的组分：SU3327 0.25份，二甲基亚砜10份，增溶剂5~10份，促渗剂0.1~1份，抗氧化剂0.01~0.02份，纯化水余量；

所述宠物外用SU3327喷剂中所有组分的总质量份数为100份。

优选的，所述增溶剂包括吐温-80、十二烷基硫酸钠、聚乙二醇或Kolliphor® HS15。

优选的，所述促渗剂包括氮酮、薄荷醇、油酸或丙二醇。

优选的，所述抗氧化剂包括丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯或维生素E。

优选的，所述宠物外用SU3327喷剂包括以下质量份数的组分：SU3327 0.25份、二甲基亚砜10份、Kolliphor® HS 15 10份、氮酮0.1份、二丁基羟基甲苯0.02份、纯化水补至100份。

本发明提供了上述技术方案所述宠物外用SU3327喷剂的制备方法，包括以下步骤：

将SU3327与二甲基亚砜混合，得到第一混合液；

将增溶剂与部分纯化水混合，得到第二混合液；

将所述第一混合液加入第二混合液后，加入促渗剂、抗氧化剂和剩余纯化水，得到宠物外用SU3327喷剂。

本发明提供了上述技术方案所述宠物外用SU3327喷剂或上述技术方案所述制备方法制备得到的宠物外用SU3327喷剂在制备治疗宠物皮肤病药物中的应用。

本发明提供的宠物外用SU3327喷剂以抗菌药物SU3327为有效成分，具有广谱的抗菌活性和优异的抑菌效果，对多种宠物皮肤病病原菌具有良好的抑制效果，同时本发明添加增溶剂能克服SU3327在水中不溶的问题，实现SU3327作为喷剂在宠物皮肤病治疗中的应用，同时添加促渗剂促进SU3327进入皮下病灶。本发明提供的SU3327喷剂作为宠物外用药，SU3327为人工筛选的小分子化合物，为临床宠物皮肤病的治疗提供新的选择。

本发明提供的宠物外用SU3327喷剂制备工艺简单，使用方便。外用药物可以直接作用于患处，减少药物在体内的分布，从而减少了药物对身体的负担，不良反应的发生率较低。且该外用药物以喷剂形式给药，无直接的机械摩擦，能减少对宠物皮肤的二次损伤，具有使用方便、吸收快等优势。

附图说明

图1为实施例3中不同促渗剂对SU3327的累计透过量Q（n=3）比较图；其中，a代表氮酮，b代表薄荷醇，c代表油酸，d代表丙二醇。

图2为实施例1中SU3327喷剂治疗的临床症状评分结果图；

图3为实施例1中SU3327喷剂治疗4天后皮肤菌载量变化图。

具体实施方式

所述宠物外用SU3327喷剂中所有组分的总质量份数为100份。

在本发明中，若无特殊说明，所需制备原料均为本领域技术人员熟知的市售商品。

以质量份数计，本发明提供的宠物外用SU3327喷剂包括SU3327 0.25份。

以所述SU3327的质量份数为基准，本发明提供的宠物外用SU3327喷剂包括二甲基亚砜10份。

以所述SU3327的质量份数为基准，本发明提供的宠物外用SU3327喷剂包括增溶剂5~10份，优选为10份。在本发明中，所述增溶剂优选包括吐温-80、十二烷基硫酸钠、聚乙二醇或Kolliphor® HS 15，更优选为Kolliphor® HS 15（毒性小，增溶效果好）。

以所述SU3327的质量份数为基准，本发明提供的宠物外用SU3327喷剂包括促渗剂0.1~1份，更优选为0.1份；所述促渗剂优选包括氮酮、薄荷醇、油酸或丙二醇，更优选为氮酮。本发明利用促渗剂增加SU3327的渗透促进效果。

以所述SU3327的质量份数为基准，本发明提供的宠物外用SU3327喷剂包括抗氧化剂0.01~0.02份，优选为0.02份；所述抗氧化剂优选包括丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯或维生素E，更优选为二丁基羟基甲苯。

以所述SU3327的质量份数为基准，本发明提供的宠物外用SU3327喷剂包括纯化水余量。

将SU3327与二甲基亚砜混合，得到第一混合液；

将增溶剂与部分纯化水混合，得到第二混合液；

当所述增溶剂为Kolliphor® HS 15时，本发明优选将所述Kolliphor® HS 15加热至60℃至其完全融化为澄清透明，停止加热，加入部分纯化水。

本发明对所述部分纯化水与剩余纯化水的体积比没有特殊的限定，根据实际需求调整即可，在本发明的实施例中，部分纯化水与剩余纯化水的体积具体为1:1。

本发明对所提及的混合没有特殊的限定，按照本领域熟知的过程搅拌混合均匀即可。

本发明提供了上述技术方案所述宠物外用SU3327喷剂或上述技术方案所述制备方法制备得到的宠物外用SU3327喷剂在制备治疗宠物皮肤病药物中的应用。本发明所述宠物外用SU3327喷剂呈溶液状态，作为喷剂使用。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

本实施例提供的宠物外用SU3327喷剂的组分为：SU3327 0.25份，二甲基亚砜 10份，Kolliphor® HS 15 10份，氮酮0.1份，二丁基羟基甲苯 0.02份，纯化水至100份。

具体的制备过程为：

（1）将0.25份SU3327溶解至10份二甲基亚砜，得到溶液1；

（2）称取10份 Kolliphor® HS 15，加热至60℃至其完全融化为澄清透明，停止加热，加入原料中50%体积的纯化水，搅拌溶解，得到溶液2；

（3）将溶液1加入溶液2中，混匀后，加入0.1份氮酮、0.02份二丁基羟基甲苯，充分溶解并混匀，加入剩余50%体积的纯化水，搅拌均匀，得到SU3327喷剂。

实施例2

在实施例1的基础上，本发明对增溶剂的种类和用量进行筛选，包括以下步骤：

取不同种类和用量的增溶剂溶于50%处方量水中，加入处方量的SU2237二甲基亚砜溶液（溶液1），处方配料见表1。

表1 实施例2中不同增溶剂种类和用量的处方

按照表1分别将不同处方用纯化水定容，观察溶液的性状，结果见表2。

表2 实施例2中不同增溶剂处方的形状检测结果

表2的结果表明，吐温80用量为1%，十二烷基硫酸钠用量为1%、2%，聚乙二醇的用量为1~5%时，增溶效果差，SU3327不能完全溶解；吐温80用量为5%，Kolliphor® HS 15用量为5%时，SU3327能完全溶解，但由于SU3327浓度接近饱和，放置一段时间后会析出沉淀；吐温80用量为6%、十二烷基硫酸钠用量为3%，Kolliphor® HS 15用量为10%、15%时增溶效果好，能使SU3327完全溶解，综合考虑增溶剂的安全性以及生产成本，以10%的Kolliphor® HS15作为增溶剂。

实施例3

在实施例1的基础上，本发明对促渗剂的种类和用量进行筛选，包括以下步骤：

称取0.25份SU3327至10份二甲基亚砜中，溶解，得到溶液1；称取10份Kolliphor®HS 15，加热至60℃至其完全融化为澄清透明，停止加热，加入原料中50%的纯化水，搅拌使溶解，得溶液2；

将溶液1加入溶液2中，加入不同种类和含量的促渗剂，处方见表3，混匀，用纯化水定容至100份。

表3 实施例3中不同促渗剂的处方

累积透过量测试：

取雄性SD大鼠，剔除其腹部鼠毛，用二氧化碳处死大鼠，剥离腹部皮肤，剔除皮下脂肪组织和血管，用常温生理盐水溶液冲洗干净，用拭镜纸吸干水分，再用拭镜纸平铺包裹，外层覆以锡箔纸后放入密封袋中，-20℃冻存备用。使用时将包装完整的皮肤自然放置于常温生理盐水中进行孵育，15分钟后检视皮肤是否完整，检视皮肤完整后转入常温生理盐水中孵育30分钟即可使用。

采用药物透皮扩散仪（天津精拓仪器TP-6）进行透皮试验，试验采用的透皮扩散装置主要包括垂直式Franz扩散池和大鼠腹部皮肤。向体外渗透扩散装置恒温槽中加入适量水，设定恒温槽中水温为（37±0.1）℃。取鼠皮固定在两室扩散池之间，角质层面向供给池，真皮层面向接收池，用铁夹夹紧。供给液为实施例3中按照表3配制的不同处方溶液，接收液为含体积分数30%无水乙醇的生理盐水。向垂直扩散池的接收池内加入15 mL接收液，放入恒温槽中预热，设定接收池搅拌速度为400 r/min。向供给池内分别加入系列供给液2ml，以封口膜封口。

分别于渗透2、4、6、8、12 h时从接受池取样1 mL至具塞离心管中，每次取样的同时向接收池中补加等量等温的接收液并排除池中的气泡，每个处方设置3个重复。

将收集的样品用乙腈稀释一定倍数后，经0.22 μm有机滤膜过滤，用液相色谱串联质谱进行检测。色谱柱为ACQUITY UPLC® HSS T3 Column（2.1×100 mm, 1.8 μm），流动相为乙腈/水，质谱检测的母离子为261.9，子离子为133.0，SU3327的保留时间为3.4 min。用质谱峰面积计算不同处方接收液中SU3327的含量，比较不同时间点的累积透过量（Q，μg/cm²），Q的计算公式为：

其中，S为透皮扩散面积（1.13 cm²），V为接收池的体积，c_n为第n次取样时接收液的浓度，c_i为第i次取样时接收液的浓度，Vi为取样量。

试验结果见图1，其中，a代表氮酮，b代表薄荷醇，c代表油酸，d代表丙二醇；图1的结果表明，0.1%、0.5%、1%的氮酮均能促进SU3327进入皮肤，其中以0.1%氮酮促渗效果最好；0.5%、1%的薄荷醇亦对SU3327有较好的促渗作用，但由于薄荷醇的溶解度问题，难以再增加其用量；油酸和丙二醇对SU3327的促渗效果一般，丙二醇浓度越高反而降低SU3327透皮量。因此，0.1%氮酮和1%薄荷醇均能有效促进SU3327透过皮肤，综合考虑促渗剂的溶解度及促渗效果，优选添加0.1%氮酮作为SU3327喷剂的促渗剂。

实施例4

在实施例1的基础上，本发明对抗氧化剂的种类和用量进行筛选，包括以下步骤：

称取0.25份SU3327至10份二甲基亚砜中，溶解，得到溶液1；

称取10份Kolliphor® HS 15，加热至60℃至其完全融化为澄清透明，停止加热，加入原料中50%的纯化水，搅拌溶解，得到溶液2；

将溶液1加入溶液2中，充分混匀，加入0.1份氮酮，加入不同抗氧化剂，处方见表4，充分溶解并混匀，用纯化水定容至100份。

表4 实施例4中不同抗氧剂的处方

将按照表4配置的不同喷剂在室温放置10天后观察溶液性状，并按照上述实施例3的方法采用液相色谱串联质谱检测其中SU3327含量，试验结果见表5。

表5 实施例4中不同抗氧剂处方的检测结果

表5的结果表明，丁基羟基茴香醚和二丁基羟基甲苯均能有效维持SU3327喷剂中SU3327的性状和含量，其中二丁基羟基甲苯的效果更好，综合考虑毒性问题与长期保存喷剂，优选0.02%的二丁基羟基甲苯作为SU3327喷剂的抗氧化剂。

测试例

采用实施例1所述SU3327喷剂作为受试样品。

本测试例的受试动物为小鼠，具体为SPF级雌性Balb/c小鼠，6~8周龄，购于北京斯贝福生物技术有限公司。

本测试例采用的病原为犬皮下脓拭子中分离的1株伪中间葡萄球菌。

将小鼠随机分成5组，每组6只，各组的被试药物分别为：

A组：不含SU3327的实施例1，1日2次，一次2喷；

B组：实施例1，1日1次，一次1喷；

C组：实施例1，1日1次，一次2喷；

D组：实施例1，1日2次，一次2喷。

本测试例中使用的喷瓶为普通喷瓶，每喷约0.1 mL。

试验方法的具体步骤如下：

（1）菌悬液制备：过夜培养的伪中间葡萄球菌以1:100体积比接种至新鲜营养肉汤中，37℃、220 rpm培养5 h，此时细菌处于对数生长期，PBS洗两次（4℃ 4000 rpm离心6min），用PBS重悬沉淀，将菌液浓度调整为1~5×10⁸CFU/mL备用。

（2）感染与给药：在建模的前一天，所有小鼠的背部都被脱毛。用毛发推器剃掉小鼠背部的毛发后，将脱毛膏均匀地涂抹在胡茬上，将乳霜留在皮肤表面5秒，然后用干棉球擦拭，并用水清洗。在建模当天，用乙醚对小鼠进行麻醉。麻醉后，将胶带贴在小鼠的背部皮肤上并取下，重复该过程10次。（每次应用使用新胶带，面积为2 cm×2 cm）剥离胶带后，加入0.1 mL菌悬液均匀地涂于小鼠皮肤的受损区域，保持5 min，然后自然干燥。感染后4 h开始按分组给药。

（3）治疗效果观察：每24h对皮肤病变进行评分和记录，病变评分分为红斑、褶皱、结痂三个指标（无：0分，轻度：1分，中度：2分，严重：3分）。96h后脱颈处死小鼠，用剪刀沿病变部位四周剪下，剥离皮肤真皮层及部分皮下组织，放置于内含1 mL生理盐水和研磨珠的无菌研磨管中，于组织研磨仪中以70 Hz进行研磨至组织破碎，对组织匀浆进行倍比稀释，涂布于固体培养基上，37℃过夜培养，进行细菌计数，结果见图2~3。

图2为实施例1中SU3327喷剂治疗的临床症状评分结果图；图3为实施例1中SU3327喷剂治疗4天后皮肤菌载量变化图。

图2~3的试验结果表明，本发明的SU3327喷剂能有效缓解小鼠的临床症状，且随给药剂量从0.1 mL增加至0.2 mL效果更明显，但单次给药剂量为0.2 mL时1日1次和1日2次效果无明显差异。SU3327喷剂连续给药4天能降低伪中间葡萄球菌在皮肤中的菌载量，相较于阳性对照组差异显著。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种宠物外用SU3327喷剂，其特征在于，包括以下质量份数的组分：SU3327 0.25份、二甲基亚砜10份、Kolliphor ® HS 15 10份、氮酮0.1份、二丁基羟基甲苯0.02份、纯化水补至100份。

2.权利要求1所述宠物外用SU3327喷剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将SU3327与二甲基亚砜混合，得到第一混合液；

将Kolliphor ® HS与部分纯化水混合，得到第二混合液；

将所述第一混合液加入第二混合液后，加入氮酮、二丁基羟基甲苯和剩余纯化水，得到宠物外用SU3327喷剂。

3.权利要求1所述宠物外用SU3327喷剂或权利要求2所述制备方法制备得到的宠物外用SU3327喷剂在制备治疗细菌性宠物皮肤病药物中的应用。