CN117731796A - 一类白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒的制备及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一类白蛋白‑紫杉醇孪药纳米粒的制备及应用，属于医药化学和生物制药技术领域，具体涉及将白蛋白与水混合，制得白蛋白溶液；将紫杉醇或紫杉醇孪药化合物与有机溶剂混合，得到药物溶液；将白蛋白溶液与药物溶液混合，经超声分散后进行旋蒸、超滤制得白蛋白结合型紫杉醇或白蛋白‑紫杉醇孪药纳米颗粒。本发明所制备的白蛋白‑紫杉醇孪药可利用白蛋白特殊的GP60‑窖蛋白‑SPARC转运机制，增加药物在肿瘤蓄积，体内外实验均证明本发明所述的白蛋白‑紫杉醇孪药纳米颗粒具有良好的抗肿瘤作用。
Description
技术领域
本发明属于医药化学和生物制药技术领域，具体涉及一类白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒的制备及应用。
背景技术
恶性肿瘤是全球的重大公共卫生问题，发病率和死亡率呈逐年上升的趋势，严重威胁着人类的生命安全。目前，化疗仍然是治疗恶性肿瘤的主要手段（尤其是胰腺癌），但多数抗肿瘤药物因其溶解度较低、易被机体清除、缺乏肿瘤特异性靶向等问题，严重限制了其临床转化。
白蛋白具有良好的生物相容性和水溶性，独特的GP60-窖蛋白-SPARC转运机制可实现药物的肿瘤靶向和渗透，是理想的药物递送载体。此外，简单的物理方式如超声、搅拌等便可将其制备成均一的纳米颗粒，通过EPR效应增强药物在肿瘤组织的蓄积，实现所载药物的增效减毒作用。2005年，美国塞尔基因公司研发的Abraxane（一种白蛋白结合型紫杉醇纳米复合物）被FDA批准上市，目前已成为转移性乳腺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌等多种恶性肿瘤的主要化疗用药。
由于肿瘤多存在代谢异常和复杂的微环境，因此单独的化疗用药疗效往往不佳，开发多药联用的治疗方法有望为患者带来新的希望。目前，Abraxane与卡铂、吉西他滨等抗肿瘤药物的联用，凭借其良好的治疗效果，已成为多种癌症的一线治疗首选方案。联合用药虽能够显著提高患者的生存率，但仍存在卡铂、吉西他滨等游离药物生物利用率低、靶向性差、毒副作用明显等诸多问题亟待解决。此外，联合用药最棘手的是不同药物的药动学和药效学差异大、体内药效不明确、用药方案复杂，这些因素严重限制了多药联合治疗的发展。
发明内容
面对以上问题，我们以紫杉醇作为靶头通过共价键与细胞毒药物、小分子靶向药、免疫检查点抑制剂、激素类药物及免疫激动剂等偶连构筑一类紫杉醇孪药，再与白蛋白作用形成均一的白蛋白-紫杉醇孪药纳米颗粒复合物，从而实现多药高效共载，并通过靶向递送到使得药物分子在肿瘤区域释放，达到治疗并消退肿瘤的目的，该技术有望突破恶性肿瘤目前的疗效瓶颈。
本发明的目的在于提供一种抗增殖、促杀伤、防止癌细胞转移以及稳定性好的白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒的制备及应用。
本发明的第一个目的旨在提供一类紫杉醇通过不同连接键偶连抗肿瘤药物，形成紫杉醇孪药的合成方法，实现多药高效共载及所载药物在肿瘤细胞内的特异性响应释放，的抗肿瘤药物包括但不局限于细胞毒药物、小分子靶向药、免疫检查点抑制剂、激素类药物及免疫激动剂等。
本发明的第二个目的旨在利用白蛋白包裹技术构建一系列均一、稳定的白蛋白-紫杉醇孪药纳米复合物，所述的纳米复合物包括但不局限于单药、双药及多药的形式。
本发明的第三个目的在于提供并比较上述白蛋白-紫杉醇孪药纳米复合物的抗肿瘤效果。
本发明所述的紫杉醇孪药是紫杉醇与抗肿瘤药物通过共价化学键连接。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种紫杉醇孪药化合物，其具有如下结构式：
，R为药物分子，包括细胞毒药物、小分子靶向药、免疫检查点抑制剂、激素类药物以及免疫激动剂中任1种；Linker的结构如下任1种：/>、、/>、/>、/>、、/>和，其中，n为1-14中任一整数，m为1-14中任一整数，R1为腙键、酰肼键、二硫键、硫醚键、二硒键、硒醚键、硫缩酮键和Michael加合物中至少1种，R2为腙键、酰肼键、二硫键、硫醚键、二硒键、硒醚键、硫缩酮键和Michael加合物中至少1种，R3为腙键、酰肼键、二硫键、硫醚键、二硒键、硒醚键、硫缩酮键和Michael加合物中至少1种，R4为腙键、酰肼键、二硫键、硫醚键、二硒键、硒醚键、硫缩酮键和Michael加合物中至少1种。
优选地，药物分子为T785、di-ABZI、SR07、Crizotinb、Palbociclib、MK1775、MK2206、AZD7762、Ceritinib、Navitoclax、Dasatinib和Exatecan中任1种；或，Linker的结构如下所示：。
本发明公开了上述紫杉醇孪药化合物的制备方法，包括：将药物分子、Linker与紫杉醇通过化合反应制备得到紫杉醇孪药化合物。
优选地，将Linker分子与NpCl于溶剂中反应制成中间体SS-2，然后由SS-2与PTX于二氯甲烷中反应制成PTX-SS-Np，然后由PTX-SS-Np与药物分子于DMF中反应制成紫杉醇孪药化合物。Linker分子为SS-1。
优选地，化合反应中使用溶剂，溶剂为二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、邻二氯苯中的一种或几种；或，化合反应中使用碱性试剂，碱性试剂为碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属或碱土金属碳酸盐、碱金属或碱土金属碳酸氢盐、三乙胺、三丁胺、三辛胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶、哌啶、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、四氢吡咯、三乙烯二胺和四丁基氢氧化铵中的一种或几种；或，化合反应中使用缩合剂，缩合剂为EDCI、DCC和DIC中的一种或几种。
本发明公开了一种紫杉醇孪药纳米粒，其中包括上述紫杉醇孪药化合物。
优选地，紫杉醇孪药纳米粒中还包括白蛋白，紫杉醇孪药化合物键合于白蛋白上。
更优选地，白蛋白包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵白蛋白和重组人血清白蛋白中至少1种；或，键合为非共价键结合；或，紫杉醇孪药纳米粒中至少包括1种紫杉醇孪药化合物。
优选地，紫杉醇孪药纳米粒中包括1种紫杉醇孪药化合物；或，紫杉醇孪药纳米粒中包括2种紫杉醇孪药化合物；或，紫杉醇孪药纳米粒中包括3种紫杉醇孪药化合物；或，紫杉醇孪药纳米粒中包括4种紫杉醇孪药化合物；或，紫杉醇孪药纳米粒中包括5种紫杉醇孪药化合物。
本发明公开了一种紫杉醇孪药纳米粒的制备方法，包括：将上述紫杉醇孪药化合物与白蛋白混合于复合液中，制备得到紫杉醇孪药纳米粒。
优选地，将紫杉醇孪药类化合物于有机溶剂中制成药物溶液；将药物溶液与白蛋白溶液混合，制成纳米混悬液；蒸发除去纳米混悬液中的有机溶剂，超滤浓缩，得到紫杉醇孪药纳米粒。
优选地，有机溶剂包括二氯甲烷、氯仿、乙醇、DMSO、DMF和乙腈中的一种或几种。
优选地，白蛋白溶液由白蛋白与水混合而成，白蛋白溶液中白蛋白的浓度为1-100mg/mL。
优选地，纳米混悬液中使用超声仪器，超声仪器包括但不限于超声破碎仪、超声清洗仪等。
本发明公开了上述紫杉醇孪药化合物在制备治疗癌症的药物中的用途，癌症包括但不限于非小细胞肺癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、胃癌和黑色素瘤。
本发明公开了上述紫杉醇孪药纳米粒在制备治疗癌症的药物中的用途，癌症包括但不限于非小细胞肺癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、胃癌和黑色素瘤。
紫杉醇孪药化合物的制备路线如下所示：
。
优选地，中间体SS-2的制备中，将DMAP加入二氯甲烷中，冰浴下加入NpCl和SS-1，在20-40℃下搅拌12-48h，TLC监测反应，反应完成后，柱层析分离，得到SS-2。
更优选地，中间体SS-2的制备中，DMAP与二氯甲烷的的使用关系为2-8g/mL。
更优选地，中间体SS-2的制备中，NpCl与二氯甲烷的的使用关系为5-20g/mL。
更优选地，中间体SS-2的制备中，SS-1的使用量为NpCl的20-30wt%。
优选地，中间体PTX-SS-Np的制备中，将SS-2加入二氯甲烷中，然后加入PTX和DIEA，在30-50℃搅拌5-24h，TLC监测反应，反应完成后，柱层析分离，得到PTX-SS-Np。
更优选地，中间体PTX-SS-Np的制备中，SS-2与二氯甲烷的使用关系为0.1-1g/mL。
更优选地，中间体PTX-SS-Np的制备中，PTX的使用量为SS-2的40-80wt%。
更优选地，中间体PTX-SS-Np的制备中，DIEA与SS-2的使用关系为0.1-0.5mL/g。
优选地，紫杉醇孪药化合物的制备中，将PTX-SS-Np加入DMF中，然后加入药物分子和DIEA混合，在30-50℃下搅拌5-24h，TLC监测反应，反应完成后，柱层析分离，得到紫杉醇孪药化合物。
更优选地，紫杉醇孪药化合物的制备中，PTX-SS-Np与DMF的使用关系为0.05-0.5g/mL。
更优选地，紫杉醇孪药化合物的制备中，药物分子的使用量为PTX-SS-Np的20-140wt%。
更优选地，紫杉醇孪药化合物的制备中，DIEA与PTX-SS-Np的使用关系为0.2-1mL/g。
优选地，紫杉醇孪药纳米粒的制备中，将紫杉醇孪药类化合物加入氯仿中，然后再加入乙醇制成药物溶液，将药物溶液与白蛋白溶液混合制成纳米混悬液，蒸发除去纳米混悬液中的有机溶剂，超滤浓缩，得到紫杉醇孪药纳米粒。
更优选地，紫杉醇孪药纳米粒的制备中，紫杉醇孪药类化合物与氯仿的使用关系为0.3-5mg/μL。
更优选地，紫杉醇孪药纳米粒的制备中，乙醇的使用体积为氯仿的使用体积的5-20%。
更优选地，紫杉醇孪药纳米粒的制备中，白蛋白溶液由白蛋白与水混合而成，白蛋白溶液中白蛋白的浓度为1-10mg/mL。
更优选地，紫杉醇孪药纳米粒的制备中，药物溶液与白蛋白溶液混合时，药物溶液的使用量以其中氯仿的使用量为基准，氯仿的使用体积为白蛋白溶液的使用体积的1-10%。
本发明公开了一种白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，取紫杉醇/紫杉醇孪药溶于有机溶剂的混合物中，作为药物溶液；
S2，配制特定浓度的白蛋白水溶液，作为白蛋白溶液；
S3，将药物溶液加入白蛋白溶液中，超声制得纳米混悬液；
S4，将步骤S3所得混悬液中残余的有机溶剂蒸发除去；
S5，通过超滤的方式将纳米混悬液浓缩，置于冰箱中储存。
优选地，步骤S1中药物溶液包含二氯甲烷、氯仿、乙醇、DMSO、DMF、乙腈中的一种或几种；步骤S2中白蛋白溶液中白蛋白的浓度为1-100mg/mL；步骤S3中所使用超声仪器包括但不限于超声破碎仪、超声清洗仪。
本发明制备白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒时，可以选用两种不同药物的药物溶液加入白蛋白溶液中，超声制得纳米混悬液，并经后续步骤制成包括双药的白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒。
本发明制备白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒时，可以选用三种不同药物的药物溶液加入白蛋白溶液中，超声制得纳米混悬液，并经后续步骤制成包括三药的白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒。
本发明中制备得到紫杉醇孪药纳米粒或白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒后，所得纳米颗粒可以被配置用于静脉给药、口服给药、皮下注射或肿瘤内/癌旁的直接注射。
本发明公开了白蛋白结合型紫杉醇纳米颗粒（Nab-PTX）的制备及应用。
本发明公开了白蛋白-紫杉醇衍生孪药纳米颗粒（Nab-pDCs）的制备及应用。
本发明以紫杉醇为基础，设计了一类肿瘤组织微环境刺激响应的紫杉醇孪药，可实现抗肿瘤药物的响应性释放，减少药物对非肿瘤细胞的毒副作用，进而提高疗效。
本发明提供了一系列以白蛋白（例如人血清白蛋白）为包裹载体的紫杉醇孪药纳米颗粒的制备方法，包括：优选地将人血清白蛋白与水混合，制得白蛋白溶液；将紫杉醇或紫杉醇孪药与有机溶剂混合，得到药物溶液；将白蛋白溶液与药物溶液混合，经超声分散后进行旋蒸、超滤制得白蛋白结合型紫杉醇或白蛋白-紫杉醇孪药纳米颗粒。
本发明公开的技术方案中，纳米颗粒水溶液在室温下稳定长达至少2个月或更长时间。
本发明制备的含有药物的纳米颗粒具有抗肿瘤作用，抗肿瘤作用包括但不局限于抗增殖、促杀伤、防止癌细胞转移等。
本发明由于采用了将白蛋白与水混合，制得白蛋白溶液；将紫杉醇或紫杉醇孪药化合物与有机溶剂混合，得到药物溶液；将白蛋白溶液与药物溶液混合，经超声分散后进行旋蒸、超滤制得白蛋白结合型紫杉醇或白蛋白-紫杉醇孪药纳米颗粒，因而具有如下有益效果：本发明所制备的白蛋白-紫杉醇孪药可利用白蛋白特殊的GP60-窖蛋白-SPARC转运机制，增加药物在肿瘤蓄积，体内外实验均证明本发明所述的白蛋白-紫杉醇孪药纳米颗粒具有良好的抗肿瘤作用。因此，本发明是一种抗增殖、促杀伤、防止癌细胞转移以及稳定性好的白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒的制备及应用。
附图说明
图1为白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒的粒径和表面电位图；
图2为紫杉醇与抗肿瘤药物联用的细胞毒性图及联合指数图；
图3为荷胰腺癌C57小鼠静脉给药后的肿瘤体积变化及体重变化图。
具体实施方式
以下结合具体实施方式和附图对本发明的技术方案作进一步详细描述：
紫杉醇孪药化合物的合成路线如下所示：
。
实施例1：合成中间体SS-2
称取DMAP（3.6g，29.47mmol）溶于超干CH2Cl2中（100mL），冰浴下缓慢加入NpCl（12.0g，59.53mmol）和SS-1（3.0g，19.48mmol），室温条件下搅拌（900rpm）24小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到SS-2（5.3g，56%），1HNMR（400MHz，CDCl3）δ（ppm）：8.24（d，J=10Hz，4H），7.36（d，J=10Hz，4H），4.55（t，J=4Hz，4H），3.08（t，J=4Hz，4H）。
实施例2：合成中间体PTX-SS-Np
称取SS-2（4.0g，8.26mmol）溶于超干CH2Cl2中（10mL），加入PTX（2.3g，2.69mmol）和N，N-二异丙基乙胺（DIEA，1.0mL），40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-Np（2.1g，65.6%），1HNMR（400MHz，CDCl3）δ（ppm）：8.32-8.26（m，2H），8.16-8.10（d，J=8，2H），7.66-7.59（m，1H），7.54-7.48（m2H），7.45-7.38（m，4H），7.36-7.31（m，3H），6.34-6.27（br，1H），5.67-5.65（d，J=4，1H），5.55-5.46（m，2H），5.29（s，1H），5.03-4.99（d，J=8，1H），4.85（s，1H），4.59-4.47（m，2H），4.47-4.31（m，3H），4.21-4.16（m，1H），3.95-3.84（m，2H），3.47（s，3H），3.33（s，3H），3.06-2.91（m，4H），2.77-2.67（m，1H），2.47（s，3H），2.35-2.20（m，2H），2.03（s，3H），1.85-1.77（m，1H），1.75（s，3H），1.36（s，9H），1.27（s，1H），1.25-1.21（m，6H）。
实施例3：PTX-SS-T785的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物T785（0.2mmol，62.2mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-T785（165mg，72%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ（ppm）：9.22（d，J=8.5Hz，1H），8.42（d，J=9.6Hz，1H），8.30（s，0H），8.12–8.05（m，3H），8.02–7.94（m，8H），7.89–7.81（m，2H），7.78–7.67（m，3H），7.68–7.51（m，11H），7.51–7.38（m，15H），7.29–7.11（m，7H），6.42（s，5H），6.30（d，J=1.7Hz，2H），5.86（dd，J=20.3，10.0Hz，2H），5.58（t，J=8.6Hz，1H），5.47–5.24（m，6H），5.06–4.74（m，4H），4.60（d，J=10.6Hz，2H），4.49（q，J=7.3Hz，5H），4.37（td，J=6.1，3.0Hz，2H），4.22（t，J=6.5Hz，2H），4.12（q，J=6.2Hz，6H），4.08–4.00（m，5H），3.62（dd，J=14.3，7.2Hz，3H），3.11–2.96（m，7H），2.94–2.81（m，9H），2.41–2.30（m，1H），2.27（d，J=7.4Hz，6H），2.10（d，J=1.3Hz，6H），1.84–1.69（m，6H），1.73–1.39（m，19H），1.24（s，6H），1.11–0.99（m，14H），0.95（td，J=7.4，3.8Hz，6H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-T785+H]+理论值：1371.5200，实测值m/z=1371.5141。
实施例4：PTX-SS-diABZI的合成
称取PTX-SS-Np（100mg，0.083mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物di-ABZI（0.1mmol，77.9mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-diABZI（60mg，39%）。1HNMR（400MHz，Chloroform-d）δ8.17–8.03（m，2H），8.00（d，J=7.7Hz，1H），7.85（d，J=7.8Hz，1H），7.68（d，J=7.6Hz，2H），7.60–7.22（m，16H），6.81（d，J=35.0Hz，4H），6.71–6.54（m，2H），6.22（dd，J=26.6，15.3Hz，4H），5.93（dd，J=9.1，3.7Hz，1H），5.74–5.25（m，8H），5.06–4.73（m，6H），4.58（d，J=8.9Hz，6H），4.45–3.94（m，12H），3.86–3.61（m，4H），3.20（s，12H），3.08–2.56（m，6H），2.58–2.05（m，12H），2.02–1.50（m，12H），1.47–1.30（m，8H），1.31–1.11（m，16H），1.08（d，J=11.6Hz，4H），0.81（t，J=7.0Hz，3H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-diABZI+H]+理论值：1839.6706，实测值m/z=1839.6501。
实施例5：PTX-SS-SR07的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物SR07（0.2mmol，77.6mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-SR07（145mg，60%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ13.00（s，1H），9.22（d，J=8.5Hz，1H），9.12（d，J=8.7Hz，0H），8.89–8.78（m，2H），8.55（dd，J=9.1，1.3Hz，1H），8.46（d，J=9.1Hz，1H），8.26–8.18（m，2H），8.10–7.93（m，2H），7.89–7.81（m，2H），7.78–7.68（m，1H），7.67–7.61（m，2H），7.62–7.51（m，2H），7.51–7.39（m，5H），7.32–7.25（m，1H），7.21（ddt，J=6.4，3.8，2.0Hz，1H），6.30（t，J=3.9Hz，1H），5.94–5.80（m，1H），5.57（td，J=8.6，1.4Hz，1H），5.47–5.29（m，2H），5.01–4.79（m，2H），4.68–4.56（m，1H），4.37（t，J=5.3Hz，3H），4.33–3.92（m，6H），3.60（q，J=6.8，6.2Hz，1H），3.45（q，J=5.4Hz，2H），3.07–2.82（m，3H），2.71–2.56（m，1H），2.45–2.17（m，4H），2.10（t，J=2.1Hz，3H），1.94–1.74（m，4H），1.70–1.53（m，2H），1.50（d，J=3.2Hz，3H），1.24（s，2H），1.02（dd，J=14.1，3.5Hz，6H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-SR07+H]+理论值：1452.4135，实测值m/z=1452.4234。
实施例6：PTX-SS-Cri的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物Crizotinb（0.2mmol，89.8mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-Crizotinb（228mg，90%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ9.23（d，J=8.5Hz，1H），8.44（d，J=9.5Hz，1H），8.12–8.06（m，2H），8.03–7.91（m，6H），7.88–7.83（m，2H），7.77–7.68（m，5H），7.65（t，J=7.7Hz，2H），7.63–7.52（m，10H），7.52–7.38（m，13H），7.22（tt，J=6.5，1.7Hz，2H），6.92（t，J=2.0Hz，2H），6.31（d，J=2.0Hz，2H），6.09（qd，J=6.7，2.1Hz，2H），5.93–5.82（m，2H），5.68（s，4H），5.59（t，J=8.6Hz，1H），5.51–5.30（m，5H），4.96–4.74（m，4H），4.61（d，J=11.6Hz，2H），4.44–4.18（m，8H），4.17–3.93（m，10H），3.70–3.57（m，3H），3.11–2.92（m，9H），2.90（s，1H），2.81（t，J=6.6Hz，1H），2.74（s，1H），2.43–2.26（m，7H），2.10（d，J=3.0Hz，6H），2.05–1.97（m，5H），1.91–1.78（m，14H），1.75–1.63（m，2H），1.58（dd，J=15.3，8.9Hz，1H），1.52（d，J=1.7Hz，6H），1.25（s，6H），1.13–0.94（m，12H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-Cri+H]+理论值：1509.4275，实测值m/z=1509.4279。
实施例7：PTX-SS-Palb的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物Palbociclib（0.2mmol，89.5mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-Palb（208mg，83%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ10.02（s，1H），9.23（d，J=8.5Hz，1H），8.96（d，J=1.3Hz，1H），8.13–8.04（m，1H），8.03–7.94（m，2H），7.92–7.84（m，3H），7.78–7.70（m，1H），7.69–7.62（m，2H），7.62–7.53（m，1H），7.52–7.41（m，7H），7.22（tt，J=6.2，2.3Hz，1H），6.31（s，1H），5.97–5.76（m，2H），5.59（t，J=8.6Hz，1H），5.44（d，J=7.1Hz，1H），5.40（d，J=8.7Hz，1H），4.92（dd，J=9.6，2.2Hz，1H），4.84（d，J=7.1Hz，1H），4.60（s，1H），4.48–4.35（m，2H），4.25（t，J=6.1Hz，2H），4.13（dt，J=11.1，7.0Hz，1H），4.07–3.99（m，2H），3.71–3.57（m，1H），3.55（t，J=5.2Hz，5H），3.25（t，J=0.9Hz，4H），3.16（t，J=5.3Hz，5H），3.08–2.93（m，4H），2.43（s，3H），2.32（s，3H），2.27（s，2H），2.11（s，2H），1.98–1.75（m，7H），1.75–1.55（m，4H），1.52（s，2H），1.39–1.22（m，1H），1.03（d，J=15.4Hz，6H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-Palb+H]+理论值：1507.5473，实测值m/z=1507.5403。
实施例8：PTX-SS-MK1775的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干CH2Cl2中（3mL），再加入化合物MK1775（0.17mmol，82.6mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-MK1775（146mg，55.7%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ10.07（s，1H），9.23（d，J=8.5Hz，0H），8.83（s，1H），8.44（d，J=9.5Hz，0H），8.21–7.92（m，4H），7.90–7.83（m，1H），7.81–7.68（m，2H），7.68–7.52（m，6H），7.52–7.38（m，4H），7.22（dtd，J=6.4，4.5，4.1，2.5Hz，1H），7.00–6.90（m，2H），6.31（s，1H），5.94–5.83（m，1H），5.67（ddt，J=17.2，10.2，6.0Hz，1H），5.59（t，J=8.6Hz，0H），5.49–5.32（m，2H），5.26（s，1H），5.05–4.97（m，1H），4.92（dt，J=9.6，2.1Hz，1H），4.89–4.82（m，2H），4.68（d，J=6.0Hz，2H），4.61（d，J=12.1Hz，1H），4.40（hept，J=6.3，5.7Hz，1H），4.33–4.21（m，3H），4.21–4.08（m，1H），4.08–3.96（m，2H）。
实施例9：PTX-SS-MK2206的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物MK2206（0.2mmol，88.8mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）12小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-MK2206（120mg，50%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ12.62（s，1H），9.22（d，J=8.5Hz，1H），8.36（dd，J=5.7，0.7Hz，1H），8.10–8.05（m，1H），8.00（dt，J=7.0，1.4Hz，1H），7.96（s，2H），7.94–7.83（m，3H），7.76–7.68（m，1H），7.68–7.62（m，1H），7.62–7.51（m，2H），7.50–7.39（m，5H），7.38–7.27（m，9H），7.22（ddd，J=8.4，5.9，3.1Hz，1H），6.96（ddd，J=7.5，4.1，0.7Hz，1H），6.31（d，J=2.4Hz，1H），5.96–5.79（m，1H），5.59（t，J=8.6Hz，1H），5.47–5.30（m，2H），4.91（dd，J=9.6，2.2Hz，1H），4.84（dd，J=11.1，6.9Hz，1H），4.61（d，J=9.5Hz，1H），4.45–4.34（m，1H），4.34–4.18（m，1H），4.18–3.92（m，5H），3.62（dd，J=13.6，7.1Hz，1H），2.90（d，J=0.5Hz，10H），2.74（d，J=0.7Hz，5H），2.47–2.30（m，2H），2.27（d，J=6.4Hz，3H），2.15–2.07（m，3H），2.05–1.92（m，0H），1.91–1.75（m，4H），1.65（ddd，J=13.8，11.0，2.3Hz，1H），1.58（dd，J=15.4，9.0Hz，0H），1.55–1.47（m，3H），1.30–1.22（m，1H），1.12–0.94（m，6H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-MK2206+H]+理论值：1467.4836，实测值m/z=1467.4476。
实施例10：PTX-SS-AZD7762的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干CH2Cl2中（3mL），再加入化合物AZD7762（0.2mmol，72.4mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-AZD（141mg，71%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ11.75（s，1H），9.06（d，J=8.6Hz，0H），6.33（s，1H），6.05–5.85（m，1H），5.58–5.30（m，2H），4.93（dd，J=9.6，2.3Hz，1H），4.75（ddt，J=11.7，7.5，4.2Hz，1H），4.65（d，J=6.6Hz，1H），4.47（s，1H），4.43–3.88（m，8H），3.81–3.70（m，1H），3.66（dd，J=7.3，4.4Hz，1H），3.09–2.92（m，4H），2.79–2.71（m，1H），2.36（ddd，J=14.3，9.7，6.6Hz，1H），2.29（d，J=6.2Hz，2H），2.11（d，J=2.8Hz，3H），1.84（dd，J=11.5，1.5Hz，2H），1.54（s，3H），1.32–1.22（m，5H），1.11–0.98（m，5H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-AZD+H]+理论值：1422.4303，实测值m/z=1422.4294。
实施例11：PTX-SS-Cer的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物Ceritinib（0.187mmol，112mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-Ceritinib（200mg，78%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ9.46（s，1H），9.23（d，J=8.5Hz，1H），8.46（d，J=8.4Hz，1H），8.25（s，1H），8.02–7.91（m，3H），7.85（td，J=7.9，1.4Hz，3H），7.79–7.70（m，1H），7.69–7.60（m，2H），7.58–7.53（m，1H），7.52–7.41（m，5H），7.36（ddd，J=8.3，7.4，1.2Hz，1H），7.22（ddd，J=6.2，3.8，2.5Hz，1H），6.82（s，1H），6.31（s，1H），6.13–5.78（m，1H），5.59（t，J=8.6Hz，1H），5.44（d，J=7.1Hz，1H），5.39（d，J=8.7Hz，1H），4.92（dd，J=9.6，2.3Hz，1H），4.66–4.49（m，2H），4.40（td，J=6.1，4.7Hz，1H），4.24（t，J=6.1Hz，2H），4.13（dt，J=10.6，6.6Hz，3H），4.03（q，J=7.5，6.8Hz，2H），3.61（d，J=7.2Hz，1H），3.44（p，J=6.8Hz，1H），3.11–2.82（m，6H），2.45–2.31（m，1H），2.27（s，3H），2.21–2.07（m，6H），1.93–1.81（m，4H），1.74–1.63（m，3H），1.57（td，J=10.2，8.8，4.9Hz，2H），1.52（s，3H），1.27–1.14（m，12H），1.03（d，J=15.5Hz，6H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-Cer+H]+理论值：1617.5762，实测值m/z=1617.5260。
实施例12：PTX-SS-Nav的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物Navitoclax（0.25mmol，243mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-Navitoclax（121mg，35%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ8.25（s，1H），8.18（d，J=2.2Hz，1H），8.09（dt，J=8.4，1.5Hz，2H），8.04–7.93（m，4H），7.86（dt，J=8.6，1.6Hz，0H），7.78–7.67（m，5H），7.66–7.51（m，4H），7.51–7.39（m，5H），7.40–7.32（m，5H），7.30–7.21（m，4H），7.22–7.16（m，1H），7.16–7.09（m，2H），7.00（dd，J=9.3，4.4Hz，1H），6.89（d，J=8.7Hz，1H），6.84（d，J=8.9Hz，2H），6.33（s，1H），6.03–5.89（m，1H），5.70（s，2H），5.47（t，J=7.2Hz，2H），5.44–5.31（m，1H），4.93（dd，J=9.7，2.3Hz，1H），4.65（d，J=6.8Hz，1H），4.47（s，1H），4.40（t，J=6.2Hz，0H），4.38–4.13（m，7H），4.11–4.01（m，4H），3.66（t，J=6.6Hz，3H），3.37–3.19（m，12H），3.07–2.91（m，6H），2.85（t，J=6.4Hz，1H），2.80（s，3H），2.40–2.15（m，20H），2.11（d，J=3.7Hz，3H），2.02（d，J=2.3Hz，3H），1.99（s，1H），1.85（d，J=1.5Hz，3H），1.81–1.64（m，3H），1.54（s，3H），1.46（t，J=6.5Hz，3H），1.34–1.23（m，14H），1.20（t，J=7.1Hz，1H），1.07（d，J=3.7Hz，7H），0.99（s，7H），0.88（t，J=6.9Hz，1H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-Nav+H]+理论值：2032.6205，实测值m/z=2032.5682。
实施例13：PTX-SS-Das的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于超干DMF中（2mL），再加入化合物Dasatinib（0.2mmol，88.7mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-L1-Dasatinib（101mg，39.6%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ11.87（s，1H），11.44（s，5H），9.83（s，5H），9.23（d，J=8.5Hz，3H），8.44（d，J=9.6Hz，2H），8.22（s，5H），8.14–8.06（m，5H），8.04–7.95（m，11H），7.91–7.84（m，5H），7.78–7.68（m，7H），7.68–7.53（m，19H），7.52–7.36（m，31H），7.34–7.17（m，15H），6.31（d，J=1.0Hz，5H），6.08（d，J=5.8Hz，6H），5.93–5.81（m，5H），5.75（s，8H），5.59（t，J=8.6Hz，2H），5.47–5.29（m，13H），4.92（dt，J=9.6，2.6Hz，6H），4.85（dd，J=9.1，6.9Hz，5H），4.61（d，J=12.4Hz，5H），4.48–4.37（m，5H），4.28–4.21（m，14H），4.19–4.10（m，6H），4.07–3.93（m，11H），3.69–3.60（m，5H），3.58–3.44（m，43H），3.03（d，J=6.2Hz，4H），2.99–2.92（m，13H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-Das+H]+理论值：1548.4681，实测值m/z=1548.5617。
实施例14：PTX-SS-Exa的合成
称取PTX-SS-Np（200mg，0.17mmol）溶于2mL超干DMF中，再加入化合物Exatecan（0.2mmol，98.4mg）和超干DIEA（100μL），混合均匀，40℃条件下搅拌（900rpm）10小时。TLC跟踪反应，反应完成后，柱层析分离得到PTX-SS-Exatecan（228mg，90%）。1HNMR（600MHz，DMSO-d 6）δ9.23（d，J=8.5Hz，1H），8.42（d，J=8.5Hz，2H），8.12–8.06（m，1H），8.02–7.98（m，2H），7.97（d，J=7.5Hz，1H），7.90–7.83（m，2H），7.80（d，J=10.9Hz，1H），7.76–7.70（m，1H），7.65（t，J=7.7Hz，2H），7.62–7.52（m，2H），7.52–7.39（m，7H），7.33（s，2H），7.22（dq，J=8.7，2.5Hz，1H），6.45（s，1H），6.31（d，J=4.2Hz，1H），5.90–5.81（m，1H），5.64–5.51（m，3H），5.47–5.35（m，5H），5.31–5.12（m，3H），4.92（dt，J=9.8，3.0Hz，1H），4.84（s，2H），4.61（d，J=12.2Hz，1H），4.39（q，J=5.6Hz，2H），4.14（q，J=10.0，8.2Hz，4H），4.07–3.98（m，3H），3.74–3.51（m，3H），3.18（d，J=5.5Hz，2H），3.11–2.80（m，4H），2.45–2.40（m，5H），2.33（dq，J=8.0，3.4Hz，0H），2.28（d，J=8.8Hz，3H），2.25–2.17（m，1H），2.11（d，J=1.0Hz，3H），1.98–1.81（m，4H），1.81（d，J=1.4Hz，3H），1.74–1.54（m，2H），1.52（d，J=2.4Hz，3H），1.35–1.22（m，2H），1.12–0.98（m，7H），0.88（t，J=7.3Hz，4H）。HR-MS（ESI）：[PTX-SS-Exa+H]+理论值：1552.4899，实测值m/z=1552.4907。
实施例15：白蛋白紫杉醇纳米粒（Nab-PTX）的制备
称取1mg紫杉醇溶于64.8μL氯仿和7.2 μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例16：白蛋白-PTX-SS-T785纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-T785溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例17：白蛋白-PTX-SS-di-ABZI纳米粒的制备：
称取1mg PTX-SS-di-ABZI溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例18：白蛋白-PTX-SS-SR07纳米粒的制备：
称取1mg PTX-SS-SR07溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例19：白蛋白-PTX-SS-Cri纳米粒的制备：
称取1mg PTX-SS-Crizotinib溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例20：白蛋白-PTX-SS-Palb纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-Palbociclib溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例21：白蛋白-PTX-SS-MK1775纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-MK1775溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例22：白蛋白-PTX-SS-MK2206纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-MK2206溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例23：白蛋白-PTX-SS-AZD纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-AZD7762溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例24：白蛋白-Cer纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-Ceritinib溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例25：白蛋白-PTX-SS-Nav纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-Navitoclax溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例26：白蛋白-PTX-SS-Das纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-Dasatinib溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中，使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例27：白蛋白-PTX-SS-Exa纳米粒的制备
称取1mg PTX-SS-Exatecan溶于64.8μL氯仿和7.2μL乙醇的混合物中，作为有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将72μL有机相加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到纳米颗粒复合物。
实施例28：白蛋白-PTX-SS-Cri@MK1775纳米粒的制备
分别称取0.5mg的PTX-SS-Cri及PTX-SS-MK1775溶于32.4μL氯仿和3.6μL乙醇的混合物中作为A、B两种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B两种有机相按1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到双药纳米颗粒复合物。
实施例29：白蛋白-PTX-SS-Exa@MK1775纳米粒的制备
分别称取0.5mg的PTX-SS-Exa及PTX-SS-MK1775溶于32.4μL氯仿和3.6μL乙醇的混合物中作为A、B两种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B两种有机相按1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到双药纳米颗粒复合物。
实施例30：白蛋白-PTX-SS-Pal@MK2206纳米粒的制备
分别称取0.5mg的PTX-SS-Palbociclib及PTX-SS-MK2206溶于32.4μL氯仿和3.6μL乙醇的混合物中作为A、B两种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B两种有机相按1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到双药纳米颗粒复合物。
实施例31：白蛋白-PTX-SS-MK2206@MK1775纳米粒的制备
分别称取0.5mg的PTX-SS-MK2206及PTX-SS-MK1775溶于32.4μL氯仿和3.6μL乙醇的混合物中作为A、B两种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B两种有机相按1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到双药纳米颗粒复合物。
实施例32：白蛋白-PTX-SS-Das@MK1775纳米粒的制备
分别称取0.5mg的PTX-SS-Dasatinib及PTX-SS-MK1775溶于32.4μL氯仿和3.6μL乙醇的混合物中作为A、B两种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B两种有机相按1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到双药纳米颗粒复合物。
实施例33：白蛋白- PTX-SS-Exa@Cri纳米粒的制备
分别称取0.5mg的PTX-SS-Exatecan及PTX-SS-Crizotinib溶于32.4μL氯仿和3.6μL乙醇的混合物中作为A、B两种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B两种有机相按1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到双药纳米颗粒复合物。
实施例34：白蛋白- PTX-SS-Exa@Das纳米粒的制备
分别称取0.5mg的PTX-SS-Exatecan及PTX-SS-Dasatinib溶于32.4μL氯仿和3.6μL乙醇的混合物中作为A、B两种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B两种有机相按1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到双药纳米颗粒复合物。
实施例35：白蛋白-PTX-SS-MK2206@MK1775@T785纳米粒的制备
分别称取0.33mg的PTX-SS-MK2206、PTX-SS-MK1775及PTX-L-T785溶于21.6μL氯仿和2.4μL乙醇的混合物中作为A、B、C三种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B、C三种有机相按1：1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到三药纳米颗粒复合物。
实施例36：白蛋白-PTX-SS-Cri@Cer@SR07纳米粒的制备
分别称取0.33mg的PTX-SS-Crizotinib、PTX-SS-Ceritinib及PTX-SS-SR07溶于21.6μL氯仿和2.4μL乙醇的混合物中作为A、B、C三种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B、C三种有机相按1：1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到三药纳米颗粒复合物。
实施例37：白蛋白-PTX-SS-MK2206@Pal@T785纳米粒的制备
分别称取0.33mg的PTX-SS-MK2206、PTX-SS-Palbociclib及PTX-SS-T785溶于21.6μL氯仿和2.4μL乙醇的混合物中作为A、B、C三种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B、C三种有机相按1：1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到三药纳米颗粒复合物。
实施例38：白蛋白-PTX-SS-Pal@Cer@SR07纳米粒的制备
分别称取0.33mg的PTX-SS-Palbociclib、PTX-SS-Ceritinib及PTX-SS-SR07溶于21.6μL氯仿和2.4μL乙醇的混合物中作为A、B、C三种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B、C三种有机相按1：1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到三药纳米颗粒复合物。
实施例39：白蛋白-PTX-SS-Pal@Cer@T785纳米粒的制备
分别称取0.33mg的PTX-SS-Palbociclib、PTX-SS-Ceritinib及PTX-SS-T785溶于21.6μL氯仿和2.4μL乙醇的混合物中作为A、B、C三种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B、C三种有机相按1：1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到三药纳米颗粒复合物。
实施例40：白蛋白-PTX-SS-Cer@Cri@T785纳米粒的制备
分别称取0.33mg的PTX-SS-Ceritinib、PTX-SS-Crizotinib及PTX-SS-T785溶于21.6μL氯仿和2.4μL乙醇的混合物中作为A、B、C三种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B、C三种有机相按1：1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到三药纳米颗粒复合物。
实施例41：白蛋白- Exa@MK2206@SR07纳米粒的制备
分别称取0.33mg的PTX-SS-Exatecan、PTX-SS-MK2206及PTX-SS-SR07溶于21.6μL氯仿和2.4μL乙醇的混合物中作为A、B、C三种有机相；配制5mg/mL人血清白蛋白水溶液，作为水相；将A、B、C三种有机相按1：1：1的比例加入1mL水相中；使用650W探针式超声破碎仪（2mm的振幅杆，40%的振幅）按超声30秒暂停15秒的程序，连续超声6分钟得到纳米混悬液；随后在旋转蒸发仪上旋蒸30分钟，使用40℃，533mbar真空控制模式；最后用100KD的超滤管4000rpm超滤15分钟，得到三药纳米颗粒复合物。
试验例1：白蛋白紫杉醇衍生孪药纳米粒的水合粒径及表面电位
将上述实施例15-35所得的纳米粒分别用去离子水稀释10倍，再用马尔文Zetasizer Nano ZS纳米粒度电位仪测定白蛋白紫杉醇和白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒的粒径大小及其分布和PDI，并测定其表面电位，具体结果如表1所示：
表1 白蛋白紫杉醇衍生孪药纳米粒的测试结果
结果表明，除Nab-PTX水合粒径在162.1nm外，其余白蛋白结合型紫杉醇衍生孪药均在90-140nm之间；PDI均小于0.24。白蛋白-紫杉醇孪药纳米粒的粒径和表面电位如图1所示。
试验例2：白蛋白紫杉醇衍生孪药纳米粒的药物负载率
优选地，本文考察了白蛋白-PTX-SS-T785纳米粒子中PTX-SS-T785的包封率与载药量。称取1.2mg、1.5mg、2mg的PTX-SS-T785，分别溶于1mL DMSO中，用高效液相色谱进行检测，制作标准曲线；称取1.4mg PTX-SS-T785，采用实施例16方案制备白蛋白纳米粒，取12.5μL样品加入DMSO，超声10分钟后，8000rpm离心5分钟，取上清测量纳米粒中药物质量。再分别取50μL、100μL实施例16方案制备的纳米粒，加入DMSO定容至500μL，超声10分钟后，8000rpm离心5分钟，取上清并注入高效液相色谱中进行检测，进样体积为10μL。色谱条件：色谱柱为Waters XBridge-C18柱（4.6×250mm，5μm），以乙腈：水（65/35，v/v）为流动相，检测波长为254nm，柱温40℃。药物的包裹效率分别以载药量和包封率，计算方法如下：
包封率（%）=纳米粒中的药物质量/实际投药量×100%；
载药量（%）=纳米粒中的药物质量/纳米粒的总质量×100%；
具体结果如下：白蛋白-PTX-SS-T785纳米粒的总质量为19.433，纳米粒中PTX-L-T785的质量为1mg，计算得出：包封率为71.43%，载药量为5.15%。
试验例3：细胞毒性测定
采用CCK8法考察PTX联合抗肿瘤药物（化疗药、小分子抑制剂等）对BxPC-3、CFPAC-1、PATU-8988T等胰腺癌细胞的细胞毒性：将细胞（1000个/孔）接种到96孔板，培养过夜后，分别加入不同浓度的紫杉醇、不同浓度的抗肿瘤药物、紫杉醇（1μM）-不同浓度的抗肿瘤药物；72小时后，每孔分别加入10μL的CCK8工作液；于细胞培养箱中继续孵育1-2小时；使用酶标仪检测每孔的吸光值（450nm）并计算活率；最后利用CompuSyn软件计算紫杉醇与各种抗肿瘤药物的联合指数（Combination Index，CI）。
紫杉醇与抗肿瘤药物联用的细胞毒性如图2a所示，紫杉醇与多种抗肿瘤药物对胰腺癌细胞具有协同杀伤效果，结果如图2b所示，可以发现不同药物协同指数不一。
试验例4：白蛋白-紫杉醇孪药的体内抗肿瘤作用
将KPC胰腺癌细胞悬液与基质胶按1：1的比例混合均匀后，注射到C57BL/6小鼠的右侧腋下，肿瘤体积达到100mm3左右，将荷瘤小鼠随机分组，每组6只；分别进行如表2所示的处理；每两天记录一次肿瘤体积与小鼠体重；绘制肿瘤体积变化图及生存曲线；绘制小鼠的体重变化图。
表2 小鼠实验表
荷胰腺癌C57小鼠静脉给药后的肿瘤体积变化如图3a所示，荷胰腺癌C57小鼠静脉给药后的体重变化如图3b所示。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
以上所述的实施例及/或实施方式，仅是用以说明实现本发明技术的较佳实施例及/或实施方式，并非对本发明技术的实施方式作任何形式上的限制，任何本领域技术人员，在不脱离本发明内容所公开的技术手段的范围，当可作些许的更动或修改为其它等效的实施例，但仍应视为与本发明实质相同的技术或实施例。
本文中应用了具体个例对本申请的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本申请的方法及其核心思想。以上所述仅是本申请的优选实施方式，应当指出，由于文字表达的有限性，而客观上存在无限的具体结构，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以作出若干改进、润饰或变化，也可以将上述技术特征以适当的方式进行组合；这些改进润饰、变化或组合，或未经改进将发明的构思和技术方案直接应用于其他场合的，均应视为本申请的保护范围。
Claims (10)
1.一种紫杉醇孪药化合物，其具有如下结构式：
，所述R为药物分子，包括细胞毒药物、小分子靶向药、免疫检查点抑制剂、激素类药物以及免疫激动剂中任1种；所述Linker的结构如下任1种：、/>、/>、/>、、/>、/>和，其中，n为1-14中任一整数，m为1-14中任一整数，R1为腙键、酰肼键、二硫键、硫醚键、二硒键、硒醚键、硫缩酮键和Michael加合物中至少1种，R2为腙键、酰肼键、二硫键、硫醚键、二硒键、硒醚键、硫缩酮键和Michael加合物中至少1种，R3为腙键、酰肼键、二硫键、硫醚键、二硒键、硒醚键、硫缩酮键和Michael加合物中至少1种，R4为腙键、酰肼键、二硫键、硫醚键、二硒键、硒醚键、硫缩酮键和Michael加合物中至少1种。
2.根据权利要求1所述的一种紫杉醇孪药化合物，其特征是：所述药物分子为T785、di-ABZI、SR07、Crizotinb、Palbociclib、MK1775、MK2206、AZD7762、Ceritinib、Navitoclax、Dasatinib和Exatecan中任1种；或，所述Linker的结构如下所示：。
3.一种权利要求1或2所述的紫杉醇孪药化合物的制备方法，包括：将药物分子、Linker与紫杉醇通过化合反应制备得到紫杉醇孪药化合物。
4.根据权利要求3所述的一种紫杉醇孪药化合物的制备方法，其特征是：所述化合反应中使用溶剂，所述溶剂为二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、1,4-二氧六环、二甲基亚砜、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、邻二氯苯中的一种或几种；或，所述化合反应中使用碱性试剂，所述碱性试剂为碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱金属或碱土金属碳酸盐、碱金属或碱土金属碳酸氢盐、三乙胺、三丁胺、三辛胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶、4-二甲氨基吡啶、哌啶、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、四氢吡咯、三乙烯二胺和四丁基氢氧化铵中的一种或几种；或，所述化合反应中使用缩合剂，所述缩合剂为EDCI、DCC和DIC中的一种或几种。
5.一种紫杉醇孪药纳米粒，其中包括权利要求1或2所述的一种紫杉醇孪药化合物。
6.根据权利要求5所述的一种紫杉醇孪药纳米粒，其特征是：所述紫杉醇孪药纳米粒中还包括白蛋白，紫杉醇孪药化合物键合于白蛋白上。
7.根据权利要求6所述的一种紫杉醇孪药纳米粒，其特征是：所述白蛋白包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵白蛋白和重组人血清白蛋白中至少1种；或，所述键合为非共价键结合；或，所述紫杉醇孪药纳米粒中至少包括1种紫杉醇孪药化合物。
8.一种紫杉醇孪药纳米粒的制备方法，包括：将权利要求1或2所述的一种紫杉醇孪药化合物与白蛋白混合于复合液中，制备得到紫杉醇孪药纳米粒。
9.权利要求1所述的紫杉醇孪药化合物在制备治疗癌症的药物中的用途，所述癌症包括非小细胞肺癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、胃癌和黑色素瘤。
10.权利要求5所述的紫杉醇孪药纳米粒在制备治疗癌症的药物中的用途，所述癌症包括非小细胞肺癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、胃癌和黑色素瘤。
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