CN117731771A - 液体抗体组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了液体抗体组合物及其应用，其中，该液体抗体组合物包括：靶向PD‑L1和CD47的双特异性抗体；酸性缓冲液；糖类稳定剂；聚山梨酯类表面活性剂；且pH为5.5‑6.5，优选地，为5.5‑6.0。该组合物在高浓度双特异抗体条件下具有良好的稳定性。

Description

液体抗体组合物及其应用
优先权信息
本申请请求2022年5月11日向中国国家知识产权局提交的、专利申请号为202210511286.4的专利申请的优先权和权益，并且通过参照将其全文并入此处。
技术领域
本发明涉及医药领域，具体地，涉及包含靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体的药物组合物，尤其是稳定的高浓度液体抗体组合物，以及该组合物的治疗用途。
背景技术
双特异性抗体作为生物大分子，结构复杂，在生产和贮存过程中，会发生聚集、变性、沉淀等物理变化及异构化、脱酰胺和氧化等化学变化。这些改变会影响产品的安全性及有效性。
由此，一种稳定的药物组合物制剂有待研究。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种特异性结合PD-L1和CD47的双特异抗体的药物组合物，该组合物在高浓度双特异抗体条件下具有良好的稳定性。
CD47是整合素相关蛋白，广泛的表达于细胞表面，可与信号调节蛋白α(SIRPα)、血小板反应蛋白以及整合素相互作用，介导细胞凋亡、增值、免疫等一系列反应。研究发现，CD47是一种“自我”信号，代表“别吃我”。CD47可以与巨噬细胞表面的信号调节蛋白(SIRPα)结合，从而抑制巨噬细胞的吞噬作用。由于CD47广泛表达于多种肿瘤细胞，肿瘤细胞可以通过CD47-SIRPα信号通路逃过巨噬细胞的吞噬，因此可以通过CD47抗体从而阻断CD47与SIRPα的结合可以激活巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。
PD-L1(细胞程序性死亡-配体1)是大小为40kDa的第一型跨膜蛋白。PD-L1能与T细胞上的受体PD-1相互作用，从而抑制T细胞的活化，引起T细胞的凋亡，在免疫应答负调控方面发挥着重要作用。然而肿瘤细胞也会表达PD-L1，诱导T细胞的凋亡。因此可以通过PD-L1抗体与肿瘤细胞的PD-L1结合，阻断其与T细胞的结合，激活免疫系统，发现并消灭肿瘤细胞。
人源化抗CD47/PD-L1双特异性抗体既可以通过阻断PD-1/PD-L1，激活T细胞分辨及杀灭肿瘤细胞，又可以通过阻断CD47/SIRPα的结合，促进巨噬细胞吞噬肿瘤细胞，发挥抗肿瘤作用。发明人对该抗体的制剂进行大量的研究和实验，获得了本发明实施例的液体抗体组合物，该组合物配方简单，蛋白体系稳定，便于大规模生产、贮存和运输。
因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种液体抗体组合物。根据本发明的实施例，该组合物包括：靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体；酸性缓冲液；稳定剂，所述稳定剂为糖类或多元醇；聚山梨酯类表面活性剂；且pH为5.5-6.5，优选地，为5.5-6.0，其中，所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体包括两条重链和两条轻链，其中，第一重链可变区为抗CD47单克隆抗体的重链可变区、其能够与轻链可变区形成CD47结合位点，第二重链可变区为抗PD-L1单克隆抗体的重链可变区、其能够与轻链可变区形成PD-L1结合位点；其中，所述两条轻链的轻链可变区的序列相同，并且，所述轻链可变区是基于抗CD47单克隆抗体的轻链和抗PD-L1单克隆抗体的轻链得到的，且所述轻链可变区与所述第一重链可变区形成的第一可变区结合位点与CD47特意性结合，且所述轻链可变区与所述第二重链可变区相匹配形成的第二可变区结合位点与PD-L1特意性结合。
根据本发明实施例的液体抗体组合物，配方简单，来源丰富，为生物制剂常用辅料，并且，本发明实施例的液体抗体组合物的配方蛋白体系稳定，能够有效防止蛋白聚集、降解、氧化及变性等、从而保持其有效成分的生物学活性，成本低廉，便于大规模生产、贮存和运输。
另外，根据本发明上述实施例的液体抗体组合物还可以具有如下附加的技术特征：
根据本发明的实施例，所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体的浓度为10-100mg/ml，优选地，为30-80mg/ml。
根据本发明的实施例，所述酸性缓冲液选自柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液和组氨酸缓冲液中的至少一种，优选地，为组氨酸缓冲液。
根据本发明的实施例，所述酸性缓冲液的浓度为5-25mM，优选地，为10-20mM。
根据本发明的实施例，所述糖类为蔗糖或海藻糖，优选地，为蔗糖，所述多元醇为甘露醇或山梨醇。
根据本发明的实施例，所述糖类稳定剂的浓度为3％-9％(w/v)，优选地，为5％(w/v)。
根据本发明的实施例，所述表面活性剂聚山梨酯20或聚山梨酯80。
根据本发明的实施例，所述表面活性剂的浓度为0.02％-0.06％(w/v)，优选地，为0.02％-0.04％(w/v)。
根据本发明的实施例，所述第一重链可变区包括：重链CDR1，包括X1YX2MX3，其中X1选自N、S，X2选自V、A，X3选自H、S；重链CDR2，包括YINPX4NX5X6IKYNEKFX7G，其中X4选自Y、G，X5选自D、E，X6选自G、A，X7选自T、Q；重链CDR3，包括EGDFYANYGRLGFX8Y，其中X8选自A、D；并且，轻链CDR1，包括RASQDIX9NYLN，其中X9选自S、T；轻链CDR2，包括YTSRLX10S，其中X10选自H、Q、S；轻链CDR3，包括QQGX11X12X13PX14T，其中X11选自D、A，X12选自T、G，X13选自F、R、Y、K、S、E、N，X14选自Y、R。
根据本发明的实施例，所述重链CDR1具有SEQ ID NO:31、32、33或45所示的序列；所述重链CDR2具有SEQ ID NO:34、35、36、37、38或39所示的序列；所述重链CDR3具有SEQ IDNO:40或41所示的序列。
根据本发明的实施例，所述第一重链包括SEQ ID NO:5、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19所示的氨基酸序列。
根据本发明的实施例，所述第二重链可变区包括SEQ ID NO:42所示的CDR1，SEQID NO:43所示的CDR2和SEQ ID NO:44所示的CDR3。
根据本发明的实施例，所述轻链具有SEQ ID NO:1、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30所示的序列。
根据本发明的实施例，所述第一重链的Fc段包含H315R突变、所述第二重链的Fc段包括K319E突变，所述Fc段氨基酸突变位点使用Kabat的Eu编号系统。
根据本发明的实施例，该组合物包括：10-80mg/ml所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体；5-25mM所述组氨酸缓冲液；3％-9％(w/v)所述蔗糖；0.02％-0.06％(w/v)所述聚山梨酯20，且pH为5.5-6.0。
根据本发明的实施例，该组合物包括；30mg/ml所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体；20mM组氨酸；5％蔗糖；0.03％聚山梨酯20；且pH为5.5-6.0。
根据本发明的另一方面，本发明提供了一种固体抗体组合物。根据本发明的实施例，所述固体抗体组合物是通过固化前述的液体抗体组合物而获得的。
根据本发明的实施例，所述固化为冻干处理。
根据本发明的再一方面，本发明提供了一种递送装置。根据本发明的实施例，该递送装置包括前述的液体抗体组合物或前述的固体抗体组合物。
根据本发明的再一方面，本发明提供了前述的液体抗体组合物或前述的固体抗体组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
根据本发明的实施例，所述肿瘤包括黑色素瘤、肺癌、肾癌、霍奇金淋巴瘤、头颈鳞癌、尿路上皮癌、急慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、直肠癌、前列腺癌、肾癌和多发性骨髓瘤。
根据本发明的再一方面，本发明提供了治疗患有肿瘤的对象的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括向所述对象施用治疗有效量的组合物，所述组合物为前述的液体抗体组合物或前述的固体抗体组合物。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
定义
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本领域一般技术人员通常所理解的含义相同的含义。为了本发明的目的，下文定义了以下术语：
在本文中，术语“抗体”以最广意义使用，指包含抗原结合位点的蛋白质，涵盖各种结构的天然抗体和人工抗体，包括但不限于三链抗体、完整抗体和抗体的抗原结合片段。
术语“冻干组合物”是指通过液体组合物的冷冻干燥处理得到或能够得到的组合物。优选地，其为具有少于5％、优选少于3％水含量的固体组合物。
“稳定的”抗体组合物制剂是制剂组合物中的抗体在储存于特定条件下之后保有可接受程度的物理稳定性和/或化学稳定性。尽管抗体组合物制剂中所含的抗体在储存特定时间之后可能不会100％维持其化学结构，但通常在储存特定时间之后维持约92％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的抗体结构或功能，则认为抗体组合物制剂是“稳定的”。在一些具体的实施方案中，本发明实施例的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白组合物在制造、制备、运输和长期储存过程中表现出低至检测不到的抗体聚集或降解或化学修饰，从而极少或甚至是没有抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的生物活性损失，表现出高度稳定性。在一些实施方案中，本发明实施例的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白组合物在储存后，基本上保留其物理和化学稳定性。优选地，本发明液体组合物可以在室温或在40℃稳定至少1个月，和/或在2-8℃稳定至少24个月。
本领域已知多种分析技术可以用于测定蛋白质的稳定性，参见例如Peptide andProtein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs(1991)and Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)。可以在选定的温度和选定的储存时间测量稳定性。例如，可以基于预期的制剂货架期来选择储存时间。备选地，可以使用加速稳定性试验。在一些实施方案中，通过对抗体制剂进行各种胁迫测试来进行稳定性测试。这些测试可以代表调配的抗体制剂在制造、储存或运输期间可能遭遇到的极端条件，也可以代表在非制造、储存或运输期间可能使抗体制剂中的抗体的不稳定性加速的条件。例如，可以将经调配的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白制剂充填至玻璃小瓶中以检验在高温胁迫下的抗体稳定性。
I.抗体组合物
本发明提供稳定的液体抗体组合物，其包含(i)抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白，(ii)缓冲液，(iii)稳定剂，和(iv)表面活性剂，任选地，还包含(v)其它赋形剂，所述抗体制剂的pH为约5.5-6.5。在一个优选方案中，本发明的液体抗体组合物是注射剂形式。
(i)抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白
本发明抗体组合物中的“抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白”是一种双链抗体，第一重链可变区源自抗CD47单克隆抗体的重链可变区、其能够与轻链可变区形成CD47结合位点，第二重链可变区源自抗PD-L1单克隆抗体的重链可变区、其能够与轻链可变区形成PD-L1结合位点；其中，所述两条轻链的轻链可变区的序列相同。所述抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白能够以至少约107M-1、优选地约108M-1和更优选地约109M-1或更强的亲和力常数与CD47结合，且能够以至少约107M-1、优选地约108M-1和更优选地约109M-1或更强的亲和力常数与PD-L1结合，以致所述抗体可以用作双特异性靶向CD47分子和PD-L1分子的治疗剂和/或预防剂。
对于所述特异性结合PD-L1或CD47的VH/VL对，其包含衍生自任何现有技术中报导的抗PD-L1抗体和将来研发出的抗PD-L1抗体VH/VL对的6个CDR或与所述6个CDR中的一个或多个CDR具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个氨基酸变化(例如，氨基酸置换或缺失)的序列；或者包含衍生自任何现有技术中报导的抗CD47抗体和将来研发出的抗CD47抗体VH/VL对的6个CDR或与所述6个CDR中的一个或多个CDR具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个氨基酸变化(例如，氨基酸置换或缺失)的序列。
在一个实施方案中，抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的所述第一多肽链和第二多肽链上的特异性结合CD47的VH/VL对包含衍生自中国专利申请号202111340715.8报导的抗CD47抗体，该抗体具有X1YX2MX3所示的VH CDR1，其中X1选自N、S，X2选自V、A，X3选自H、S；YINPX4NX5X6IKYNEKFX7G所示的VH CDR2，其中X4选自Y、G，X5选自D、E，X6选自G、A，X7选自T、Q；EGDFYANYGRLGFX8Y所示的VH CDR3，其中X8选自A、D；RASQDIX9NYLN所示的VL CDR1，其中X9选自S、T；YTSRLX10S所示的VL CDR2，其中X10选自H、Q、S；以及QQGX1X12X13PX14T所示的VL CDR3其中X11选自D、A，X12选自T、G，X13选自F、R、Y、K、S、E、N，X14选自Y、R，或与所述6个CDR中的一个或多个CDR具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个氨基酸变化(例如，氨基酸置换或缺失)的序列。
术语“CDR”或“互补决定区”或“CDR区”(在本文中与超变区“HVR”可以互换使用)，是抗体可变区中主要负责与抗原表位结合的氨基酸区域。重链和轻链的CDR通常被称作CDR1、CDR2和CDR3，从N-端开始顺序编号。本领域公知多种用于在一个给定的VH或VL或VHH氨基酸序列中确定其CDR序列的方案。例如，Kabat互补决定区(CDR)是基于序列变异性确定的并且是最常用的(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。而Chothia指的是结构环的位置(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM HVR是Kabat HVR和Chot-hia结构环之间的折中，并且由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用。“接触性”(Cont-act)HVR基于对可获得的复杂晶体结构的分析。HVR也可以基于与参考CDR序列(例如本文公开的示例性CDR)具有相同的Kabat编号位置而确定。
在一个实施方案中，抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的第一重链可变区源自抗CD47单克隆抗体的重链可变区、其能够与轻链可变区形成CD47结合位点，所述第一重链包含衍生自抗CD47抗体hz140-Hm的SEQ ID NO:5的重链可变区序列，或与所述重链可变区序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的序列，例如7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19所示重链可变区序列。
在一个实施方案中，抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的第二重链可变区源自抗PD-L1单克隆抗体的重链可变区、其能够与轻链可变区形成PD-L1结合位点，所述第二重链包含衍生自抗PD-L1抗体的SEQ ID NO:2的重链可变区序列，或与所述重链可变区序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的序列。
在一个实施方案中，抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的所述两条轻链的轻链可变区的序列相同，并且，所述轻链可变区是基于抗CD47单克隆抗体的轻链和抗PD-L1单克隆抗体的轻链得到的，且所述轻链可变区与所述第一重链可变区形成的第一可变区结合位点与CD47特意性结合，且所述轻链可变区与所述第二重链可变区相匹配形成的第二可变区结合位点与PD-L1特意性结合，轻链包含SEQ ID NO:1、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30所示的序列，或与之基本上同一(例如，至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更多同一)的序列。
在本文中，“序列同一性”是指在比较窗中以逐个核苷酸或逐个氨基酸为基础的序列相同的程度。可以通过以下方式计算“序列同一性百分比”：将两条最佳比对的序列在比较窗中进行比较，确定两条序列中存在相同核酸碱基(例如，A、T、C、G、I)或相同氨基酸残基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的数目以得到匹配位置的数目，将匹配位置的数目除以比较窗中的总位置数(即，窗大小)，并且将结果乘以100，以产生序列同一性百分比。为了确定序列同一性百分数而进行的最佳比对，可以按本领域已知的多种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适宜参数，包括为实现正在比较的全长序列范围内或目标序列区域内最大比对所需要的任何算法。
本发明实施例制备的双特异性抗体，具有天然抗体的双结合臂，每个结合臂均具有完整的Fab结构，避免了在抗体分子中引入受体链(例如CD47受体SIRPα)等非抗体组件而产生的结构不稳定、功能相互干扰等缺点。进而，通过本发明实施例在共同轻链可变区、重链可变区进行突变改造的基础上，实现了对两条结合臂结合能力的调控，例如制备出对第一抗原/抗原表位具有高度结合能力、并且对第二抗原/抗原表位具有适度结合能力的双特异性抗体。
根据现有技术中抗原结合位点中6个CDRs对抗原结合活性影响程度的差异，即重链三个CDRs的作用大于轻链三个CDRs、CDR3的作用大于CDR2和CDR1。结合抗PD-L1单克隆抗体hz182和抗CD47单克隆抗体hz140轻链序列结构的相似性，发明人设计了具有相同轻链的抗人PD-L1/CD47双特异性抗体。共同轻链的设计不仅简化了重组表达方法，而且彻底消除了双特异性抗体重组表达过程中轻重链错配的难题，显著简化了生产工艺、提高了产品合格率和均一性。此外，还可在Fc段引入“knobs-into-holes”突变，增强双特异性抗体重链Fc段配对的准确性，避免同源重链二聚化。
在双特异性抗体的设计制备过程中，通过对抗CD47抗体的重链进行有限的氨基酸突变，使得重组抗体中抗CD47的结合臂中重链可变区和轻链可变区均与抗CD47初始单克隆抗体存在结构上微小的差异。通过在上述抗CD47的抗原结合位点上引入序列结构的微小差异使所述双特异性抗体具有适度的抗CD47活性，既保持了双特异性抗体对肿瘤细胞表面CD47的结合活性、增强了抗PD-L1活性的肿瘤抑制作用；又显著降低了对红细胞表面CD47的结合，不仅减少或消除了溶血、红细胞凝集等不期望的后果，而且还能减少全身给药的用量。
在一个优选的实施方案中，本发明实施例的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白是申请号：202111340715.8的中国申请中公开的重组抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白，其具有SEQ ID NO:1所示的第一多肽链、SEQ ID NO:5所示的第二多肽链、和SEQ ID NO:10所示的第三多肽链。在一个实施方案中，该抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白由真核细胞如HEK293细胞或CHO细胞重组表达产生并经纯化。
(ii)缓冲液
缓冲液是可以将溶液的pH维持在可接受范围的试剂。在一些实施方案中，用于本发明制剂中的酸性缓冲液可以将本发明制剂的pH控制在大约5.5-6.5的pH范围，例如约6.0的pH。在一些具体的实施方案中，本发明的抗体组合物具有约5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4和6.5的pH。
在一些实施方案中，用于本发明实施例的制剂中的缓冲液选自柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液和组氨酸缓冲液和它们的组合。在一个实施方案中，本发明实施例的液体抗体组合物中的缓冲液的浓度为约5-25mM。在一个实施方案中，本发明的液体抗体组合物中的缓冲液的浓度为约10-20mM，例如，约10、12、15、18和20mM。
在一个实施方案中，用于本发明组合物中的缓冲液是约10mM组氨酸缓冲液。
(iii)稳定剂
用于本发明的合适的稳定剂可以为糖类或多元醇。对于作为稳定剂的糖包括但不限于蔗糖和海藻糖。对于作为稳定剂的多元醇包括但不限于甘露醇和山梨醇。在一些实施方案中，所述稳定剂在本发明的液体组合物中以约3％-9％(w/v)，更优选地约4％-7％(w/v)，例如，约4.5％、5.0％、5.5％、6.0％、6.5％的浓度存在。
在一个实施方案中，本发明液体组合物包含蔗糖作为稳定剂。蔗糖在本发明液体组合物中的量可以是约4％-7％(w/v)，优选地约4.5％-6％(w/v)(例如，约4.5、4.8、5.0、5.2、5.4、5.6、5.8和6.0％(w/v))。
(iv)表面活性剂
如本文所使用的，术语“表面活性剂”是指具有两亲结构的有机物质；即，它们由相反的溶解性倾向的基团所组成，通常是油溶性的烃链和水溶性的离子基团。
在一个实施方案中，本发明实施例的液体组合物中的表面活性剂是非离子型表面活性剂。具体地，本发明实施例的组合物中的非离子型表面活性剂为聚山梨酯类，例如聚山梨酯，诸如聚山梨酯-20、聚山梨酯-80、聚山梨酯-60、或聚山梨酯-40等。在一个优选实施方案中，本发明的液体组合物中包含聚山梨酯-20或聚山梨酯-80作为表面活性剂。
本发明抗体组合物中所含的表面活性剂的量可随制剂的特定目的特性、特定环境、和使用制剂的特定目的而改变。在优选的一些实施方案中，制剂可含有约0.1-1mg/ml，优选地约0.2-0.8mg/ml，例如约0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mg/ml的聚山梨酯类表面活性剂(例如，聚山梨酯-80)。
(v)其它赋形剂
本发明的抗体液体组合物中可以包含或不包含其它赋形剂。
在一个实施方案中，本发明的抗体液体组合物包含金属螯合剂(例如，EDTA或其盐)作为一种赋形剂。在另一实施方案中，本发明的抗体液体组合物不包含金属螯合剂(例如，EDTA或其盐)。在一个实施方案中，与不添加金属螯合剂(例如，EDTA或其盐)的相应组合物相比，添加金属螯合剂(例如，EDTA或其盐)的本发明抗体液体组合物具有更高的稳定性。
出于其他考虑，也可在本发明实施例的组合物中使用其它的赋形剂。所述赋形剂包括，例如，调味剂、抗微生物剂、甜味剂、抗静电剂、抗氧化剂、明胶等等。这些和另外已知的药物赋形剂和/或适用于本发明实施例组合物的添加剂是本领域公知的，例如，列出于“The Handbook of Pharmaceutical Excipients，第4版，Rowe等人编，AmericanPharmaceuticals Ass ociation(2003)；和Remington:the Science and Practice ofPharmacy，第21版，Gennaro编，Lippincott Williams&Wilkins(2005)”。
II.制剂的制备
本发明提供了包含抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的稳定组合物制剂。在本发明组合物中使用的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白可以使用本领域已知的用于生产抗体的技术进行制备。例如，可以重组制备抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白。在一个优选的实施方案中，本发明的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白通过在真核细胞中重组表达而制备，例如，如申请号202111340715.8的中国申请中所述，重组制备抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白。
抗体作为药物的活性成分的应用现在已经很广泛。用于将治疗性抗体纯化至药用级的技术是本领域公知的。例如，Tugcu等(Maximizing productivity of chromatographysteps for puri-fication of monoclonal antibodies,Biotechnology andBioengineering 99(2008)599–613.)描述在蛋白A捕获步骤后使用离子交换色谱(阴离子IEX和/或阳离子CEX色谱)的抗体三柱纯化方法。Kelley等(Weak partitioningchromatography for anion exchange purification of monoclonal antibodies,Biotechnology and Bioengineering 101(2008)553–566)描述了两柱纯化法，其中在蛋白A亲和色谱后使用弱分配阴离子交换树脂。
一般地，重组产生的抗体可以利用常规的纯化方法纯化，以提供具有足够的可重复性和适度纯度的药物物质用于抗体制剂的配制。例如，在抗体从重组表达细胞分泌至培养基中后，可以使用商业可得的蛋白浓缩过滤器例如Amicon的超滤装置，浓缩来自该表达系统的上清液。之后，可以使用例如色谱、透析和亲和纯化等方式进行抗体的纯化。蛋白A适应于作为亲和配体用于纯化IgG1、IgG2和IgG4型抗体。也可以使用其它抗体纯化方法，例如离子交换色谱。在获得足够纯度的抗体后，可以按照本领域已知的方法，制备包含抗体的组合物。
例如，可以采用如下步骤进行制备：(1)在发酵结束后将发酵液离心澄清去除细胞等杂质以获得上清；(2)使用亲和层析(例如对IgG1、IgG2和IgG4型抗体具有特异亲和力的蛋白A柱)捕获抗体；(3)进行病毒灭活；(4)精制纯化(一般可以采用CEX阳离子交换层析)，以去除蛋白中的杂质；(4)病毒过滤(使病毒滴度降低例如4log10以上)；(5)超滤/渗滤(可以用于将蛋白置换于利于其稳定的制剂缓冲液中并浓缩至合适的浓度供注射用)。参见例如，B.Minow,P.Rogge,K.Thompson,BioProcess International,Vol.10,No.6,2012,pp.48–57。
III.组合物的分析方法
在抗体组合物的储存过程中，抗体可能会发生聚集、降解或化学修饰，导致抗体异质性(包括大小异质性和电荷异质性)以及聚集物和片段等，从而影响抗体组合物的质量。因此，有必要进行抗体组合物稳定性的监测。
在本领域中已知多种方法可以用于检测抗体组合物的稳定性。例如，可以通过还原型CE-SDS、非还原型CE-SDS和SEC-HPLC等方法，分析抗体组合物的纯度和评估抗体的聚集水平；可以通过毛细管等电聚焦电泳(cIEF)、成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)和离子交换色谱(IEX)等，分析抗体组合物中的电荷变异体。此外，可以通过目视检测制剂外观，快速地判断组合物的稳定性。也可以使用OD350nm法检测制剂的浊度改变，该方法可以给出有关可溶性和不溶性聚集物量的信息。此外，可以使用紫外分光光度法(UV法)检测制剂中的蛋白质含量变化。
非还原型CE-SDS法是一种以毛细管为分离通道进行的单克隆抗体纯度测定方法。在CE-SDS中，蛋白迁移由SDS结合引起的表面电荷来驱动，而该表面电荷与蛋白质的分子量成正比。由于所有的SDS-蛋白质复合物都具有相似的质量-电荷比，故可以在毛细管的分子筛凝胶基质中，实现基于分子的大小或流体动力学半径的电泳分离。该方法已经被广泛地用于监测变性的完整抗体的纯度。一般，在非还原型CE-SDS法中，供试样品与SDS样品缓冲液和碘乙酰胺混合。之后，混合物可以于68-72℃孵育约10-15分钟，冷却至室温后离心的上清液用于分析。采用紫外检测器检测蛋白的迁移，获得电泳谱图。抗体组合物纯度可以计算为IgG主峰的峰面积占所有峰面积之和的百分比。关于CE-SDS法的进一步描述，可以参见例如Richard R.等,Application of CE SDS gel in development of biopharmaceuticalantibod y-based products,Electrophoresis,2008,29,3612-3620。
尺寸排阻高效液相色谱法，即SEC-HPLC法，是用于单克隆抗体标准和质控的另一重要方法。该方法主要依据分子的尺寸大小或流体动力学半径差异来进行分子的分离。通过SEC-HPLC，抗体可以分离出三种主要形式：高分子量形式(HMMS)、主峰(主要是抗体单体)、和低分子量形式(LMMS)。抗体纯度可以计算为色谱图上主峰面积占所有峰面积之和的百分比。通过SEC-HPLC法，可以测量组合物产品中抗体单体的百分数，给出可溶性聚集物和剪切物的含量信息。关于SEC-HPLC法的进一步描述，可以参见例如，J.Pharm.Scien.,83:1645-1650,(1994)；Pharm.Res.,11:485(1994)；J.Pharm.Bio.Anal.,15:1928(1997)；J.Pharm.Bio.Anal.,14:1133-1140(1986)。此外，也可以参见例如，R.Yang等，Highresolution separation of rec ombinant monoclonal antibodies by size exclusionultra-high performance liquid chromatography(SE-UHPLC),Journal ofPharmaceutical and Biomedical Analysis(2015),http://dx.doi.org/10.1016/j.jpba.2015.02.032；和Alexandre Goyon等,Protocols for the analyticalcharacterization of therap eutic monoclonal antibodies.I–Non-denaturingchromatographic techniques,Journal of Chromatogr aphy，http://dx.doi.org/10.1016/j.jchromb.2017.05.010。
成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)可以用于分析单克隆抗体的电荷异质性。该方法可以提供电荷变异体的定量分布情况。iCIEF基于分子在pH梯度中的电荷差异(表观pI值)来实现分子分离的目的。在iCIEF中，分离柱通常是短毛细管(例如,5cm长,100μm内径的二氧化硅毛细管)，蛋白质在高电压下在毛细管柱中聚焦，并通过在280nM操作的全柱成像检测系统对聚焦进行实时在线监测。该技术的一个优点是，可以通过该全柱检测系统同时记录抗体样品的各种电荷变异体。一般而言，在icIEF中，将样品与尿素和icIEF缓冲液混合，其中所述缓冲液含有甲基纤维素、pI分子量标准和ampholytes。然后，可以在iCIEF分析仪例如iCE280分析仪(Protein Simple,Santa Clara,CA)上，使用iCIEF柱例如ProtionSimple组装的iCI EF柱，在样品聚焦一定时间后，测定280nm的吸光度，获得聚焦mAb电荷变异体的谱图。在iCEIF谱图中，在主峰(即主成分)之前洗脱的蛋白相关峰被分类为酸性组分；相对地，在主峰之后洗脱的蛋白相关峰被分类为碱性组分。主成分、酸性组分和碱性组分的相对量可以表示为占总峰面积的百分数。关于iCIEF的进一步描述，可以参见例如，Salas-Solano O等,Robustness of iCIEF methodology for the analysis ofmonoclonal antibodies:an interlaboratory stu dy,J Sep Sci.2012Nov；35(22):3124-9.doi:10.1002/jssc.201200633.Epub 2012Oct 15；和Dada OO等,Characterization of acidic and basic variants of IgG1 therapeutic monoclonalantibodies base d on non-denaturing IEF fractionation,Electrophoresis.2015Nov；36(21-22):2695-2702.doi:10.1002/elps.201500219.Epub2015Sep 18.
也可以通过阳离子交换高效液相色谱法(CEX-HPLC)测定抗体组合物中抗体的电荷变异体。在该测定法中，以比主峰的保留时间更早从CEX-HPLC柱洗脱出的峰被标记为“酸性峰”，而那些以比主峰的保留时间更晚从CEX-HPLC柱洗脱出的峰被标记为“碱性峰”。
加速稳定性研究可以用于检查产品的稳定性性质，有利于筛选稳定药物制剂形式。例如，可以将组合物样品放置于升高的温度，例如约40℃±2℃、25℃±2℃条件下进行加速稳定性研究。检测指标可以包括外观、可见异物、蛋白含量、浊度、纯度(SEC-HPLC法、非还原型CE-SDS法)和电荷变异体(iCIEF法、CEX-HPLC法)。
此外，可以检测抗体的功效或生物活性。例如，可以检测组合物中抗体与其抗原分子(CD47分子和PD-L1分子)的结合能力。本领域技术人员已知多种方法可以用于定量抗体与抗原的特异性结合，例如免疫测定试验，ELISA等。
本发明实施例的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白组合物是稳定的。在一个实施方案中，于约25℃、37℃、40℃、或45℃储存至少1个月或2个月后，例如，在40℃±2℃储存1个月后，本发明的抗体组合物中的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白纯度是至少92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％以上，如通过尺寸排阻色谱法或通过非还原型CS-SDS所测定。在一个实施方案中，于约25℃、37℃、40℃、或45℃储存至少1个月或2个月后，例如，在40℃±2℃储存1个月后，本发明实施例的抗体组合物中抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的至少50％，优选至少55％是非碱性及非酸性形式(亦即，主峰或主要电荷形式)，如通过IEC-HPLC法所测定。
IV.组合物的用途
本发明的包含抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的本发明的抗体组合物可以用于治疗、预防或延缓各种与SIRPα/CD47信号传导通路和/或与PD1/PD-L1信号传导通路相关的疾病或病症。“与SIRPα/CD47信号传导通路相关的疾病或病症”和/或“与PD1/PD-L1信号传导通路相关的疾病或病症”在本文中指可以用本发明抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白组合物进行治疗(例如改善)或预防的疾病或病症。任何可以得益于本发明抗体组合物治疗的疾病或病症都适用于本发明。
在一个方面，包含抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白的本发明组合物能够用于预防或治疗受试者的各种肿瘤，包括但不限于黑色素瘤、肺癌、肾癌、霍奇金淋巴瘤、头颈鳞癌、尿路上皮癌、急慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、直肠癌、前列腺癌、肾癌和多发性骨髓瘤。
本发明也提供本发明的组合物在制备药物中的用途，其中所述药物用于向哺乳动物递送抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白，或用于治疗、预防或改善上述疾病和病症中的一种或多种。优选地，哺乳动物是人。
可以以多种途径将本发明的抗体组合物施用于受试者或患者。例如，施用可以通过输注或通过注射器进行。因此，在一个方面，本发明提供了一种递送装置(例如注射器)，其包含本发明的抗体组合物(例如，预填装注射器)。患者将接受有效量的抗CD47/PD-L1双特异性抗体蛋白作为主要活性成分，即足以治疗、改善或预防目的疾病或病症的量。
治疗效果可包括减少生理症状。用于任何特定受试者的抗体的最佳有效量和浓度将取决于多种因素，包括患者的年龄、体重、健康状况和/或性别、疾病的性质和程度、特定抗体的活性，身体对其清除率，并且也包括与所述抗体制剂组合施用的任何可能的其它治疗。对于具体的情况，所递送的有效量可以在临床医师的判断范围内来确定。取决于待治疗的适应症，有效剂量可为约0.005mg/kg体重至约50mg/kg体重，或约0.1mg/kg体重至约20mg/kg体重。在这方面，已知的基于抗体的药物的应用可以提供一定的指导。剂量可以是单剂量方案或多剂量方案。
下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本发明的限制。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Sigma公司。
实施例1：制备和纯化抗PD-L1/CD47双特异性抗体
根据202111340715.8所述，通过真核细胞中重组表达和纯化了抗CD47/PD-L1双特异性抗体2MW1531-m7。该抗CD47/PD-L1双特异性抗体由抗PD-L1单抗和抗CD47单抗组成，每条抗体的多肽链从N端至C端分别具有如下氨基酸序列：
抗PD-L1单抗：
(轻链氨基酸序列为SEQ ID NO.1，重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO.2)
抗CD47单抗：
(轻链/重链可变区序列为SEQ ID NO.3/SEQ ID NO.5)
该抗CD47/PD-L1双特异性抗体：(重链可变区序列：SEQ ID NO.19/SEQ ID NO.2，重链恒定区序列：SEQ ID NO.4/SEQ ID NO.6，共同轻链序列为SEQ ID NO.26)。
实施例2：抗体组合物筛选实验
将实施例1制备的抗体制备形成不同的组合物，进行组合物配方筛选，具体如下：
1、缓冲体系和pH筛选：
抗体置换至目的缓冲液中，抗体浓度为30mg/ml，无菌过滤后分装，分别放置于4℃和40℃进行稳定性考察，0天、7天、14天取样检测，检测项目包括SEC、IEC。
缓冲液组成：
结合SEC方法考察本发明实施例的抗体在40℃条件下SEC方法和IEC方法下主峰含量变化，从而确定适合该双抗的优选缓冲体系及pH，结果如表1所示，以实验起始0天、40度放置7天和14天的SEC主峰及IEC主峰含量来计算下降速率(％/天)。
表1.不同缓冲体系高温稳定性SEC主峰及IEC主峰考察结果
从表1可以看出在组氨酸缓冲体系pH5.5-6.5条件下，SEC和IEC主峰的下降速率略优于柠檬酸和醋酸体系。因此选择组氨酸缓冲体系进行下一步的筛选。
2、蛋白浓度筛选：
在选择组氨酸缓冲体系进行下一步的筛选后，进一步考察不同蛋白浓度对于稳定性的影响。将实施例1制备的抗体样品置换至不同组合物中，放置40℃进行加速稳定性实验，并在0天、7天、14天、28天时取样进行SEC检测。以实验起始0天、40度放置7天、14天和28天的SEC主峰含量来计算主峰的下降速率(％/天)，结果如表2所示。
表2.不同蛋白浓度高温稳定性SEC主峰考察结果
从表2可以看出，随着浓度的增加，SEC主峰含量下降速度有升高的趋势，鉴于该结果，综合考虑未来临床用药方案，后续将围绕30mg/ml的浓度进行进一步考察。
3、缓冲盐浓度筛选：
将实施例1制备的抗体样品置换至不同浓度缓冲液中，然后放置40℃进行加速稳定性实验，并在0天、7天、14天、28天时取样进行IEC检测。以实验起始0天、40度放置7天、14天和28天的IEC主峰含量来计算主峰的下降速率(％/天)，结果如表3所示。
表3.不同缓冲液浓度高温稳定性IEC主峰考察结果
表3显示缓冲液浓度的增加，对抗体的IEC主峰下降速率没有太大的影响，同时为了维持缓冲液的缓冲能力，选择10mM作为最终的缓冲液浓度。
4、保护剂筛选：
在上述条件确定后，进一步对添加保护剂进行研究比较，从而选出可使抗体稳定的辅料添加物，结果如表4和表5所示，结果显示不同保护剂中，SEC主峰的下降速率和IEC主峰的下降速率没有显著区别，因此选择生物药中常用的蔗糖作为添加剂。
表4.不同保护剂高温稳定性SEC主峰考察结果
表5.不同保护剂高温稳定性IEC主峰考察结果
5、保护剂浓度筛选：
以蔗糖为保护剂，考察了不同浓度的蔗糖对实施例1制备的抗体的影响，结果如表6和表7所示，结果显示不同蔗糖浓度中蛋白均相对稳定，基于辅料尽量少加的原则及使蛋白得到充分保护两方面考虑，选择5％蔗糖作为抗体的保护剂。
表6.不同保护剂浓度高温稳定性SEC主峰考察结果
表7.不同保护剂高温稳定性IEC主峰考察结果
6、表面活性剂筛选：
将实施例1制备的抗体样品置换至10mM组氨酸、5％蔗糖的缓冲溶液中，蛋白浓度为30mg/ml，并向置换好的样品中加入不同终浓度的聚山梨酯20及80。将制备好的样品反复冻融1次、3次和5次后测定样品中不溶性微粒。
表8.不同比例聚山梨酯20冻融样品不溶性微粒结果
表9.不同比例聚山梨酯80冻融样品不溶性微粒结果
/>
实验结果如表8和
表9所示，结果显示不含吐温的样品不溶性微粒显著增加，而添加了吐温的样品不溶性微粒没有显著的增加，不同吐温含量的不溶性微粒结果没有显著的差异。因此，选择常用表面活性剂聚山梨酯20作为抗体的表面活性剂；为了能够充分的抑制不溶性微粒的产生，优选浓度为0.03％的聚山梨酯20。
实施例3：化合物处方验证实验
本发明实施例的化合物的处方验证试验包括冻融稳定性试验、10℃振荡稳定性试验和光照试验，考察实施例1制备的CD47/PD-L1双特异性抗体在处方(10mM组氨酸、5％蔗糖、0.03％聚山梨酯20、pH5.8±0.3)中的稳定性。
1、振荡稳定性试验：
将抗体组合物进行振荡稳定性试验，10℃振荡5天，考察抗体单体含量(SEC)和电荷异构体主峰含量(IEC)，结果汇总见表10。
表10.抗体组合物振荡稳定性理化性质考察结果
2、冻融稳定性试验：
将抗体组合物反复冻融1、3、5次，考察抗体单体含量(SEC)和电荷异构体主峰含量(IEC)，结果汇总见表11。
表11.抗体组合物冻融稳定性理化性质考察结果
3、光照稳定性试验：
将抗体组合物置于4500lx±500lx条件下光照5天和10天，同时将相同的样品置于包装盒中作为避光对照。重点考察6MW3211单体含量(SEC)和电荷异构体主峰含量(IEC)，结果汇总见表12。
表12.抗体组合物光照稳定性理化性质考察结果
上述结果表明在确定本发明实施例的组合物处方下，振荡5天，冻融5次对抗体蛋白的理化性质没有显著性影响。光照10天，IEC主峰明显下降，说明CD47/PD-L1双特异性抗体应该在避光条件下保存，并且，上述结果说明在本发明实施例的组合物处方下，CD47/PD-L1双特异性抗体较稳定。
实施例4：蛋白浓度提高实验
蛋白浓度的提高会在实际使用中提供便利，在低浓度处方进行验证实验后，为了便于临床应用，本实施例中尝试进行蛋白浓度提高实验，将蛋白的浓度提高至80mg/ml，本实施例中采用实施例1制备的CD47/PD-L1双特异性抗体进行试验。
将低浓度抗体组合物处方中组氨酸浓度提高至20mM，其余不变，即20mM组氨酸、5％蔗糖、0.03％聚山梨酯20、pH5.8±0.3，作为高浓度组合物处方，进行冻融稳定性试验、10℃振荡稳定性试验、光照试验以及40℃高温稳定性试验。
1、振荡稳定性试验：
将高浓度制剂组合物进行振荡稳定性试验，10℃振荡5天。重点考察CD47/PD-L1双特异性抗体单体含量(SEC)和电荷异构体主峰含量(IEC)，结果汇总见表13。
表13.6MW3211高浓度振荡稳定性理化性质考察结果
2、冻融稳定性试验：
将高浓度制剂组合物反复冻融10次，考察CD47/PD-L1双特异性抗体单体含量(SEC)和电荷异构体主峰含量(IEC)，结果汇总见表14。
表14.6MW3211高浓度冻融稳定性理化性质考察结果
3、光照稳定性试验：
将高浓度制剂组合物进行光照稳定性试验。将样品置于4500lx±500lx条件下光照14天(光源总照度不低于1.2×106lux·hr、近紫外灯能量不低于200W·hr/m2)，同时将相同的样品置于包装盒中作为避光对照。重点考察CD47/PD-L1双特异性抗体单体含量(SEC)和电荷异构体主峰含量(IEC)，结果汇总见表15。
表15.6MW3211高浓度光照稳定性理化性质考察结果
4、40℃高温稳定性试验：
将高浓度制剂组合物进行40℃高温稳定性试验。将该样品组合物置于40℃条件下考察7D、14D和1M，考察CD47/PD-L1双特异性抗体单体含量(SEC)和电荷异构体主峰含量(IEC)，结果汇总见表16。
表16.6MW3211高浓度高温稳定性理化性质考察结果
上述结果表明，震荡5天，冻融10次对CD47/PD-L1双特异性抗体高浓度组合物没有显著影响。光照14天，IEC主峰略微下降，说明CD47/PD-L1双特异性抗体高浓度应该在避光条件下保存。40℃高温考察一个月后，SEC主峰略微下降，IEC主峰显著下降，变化趋势符合预期。根据上述结果可以说明在此组合物处方下，CD47/PD-L1双特异性抗体高浓度较稳定。
综上所述，通过对不同缓冲体系、不同pH条件、不同抗体浓度以及不同保护剂和表面活性剂组成进行考察，探索研究人源化抗CD47/PD-L1双特异性抗体的稳定性，并得到水针组合物配方，其中包含两个蛋白浓度的组合物配方。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (21)

1.一种液体抗体组合物，其特征在于，包括：
靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体；
酸性缓冲液；
稳定剂，所述稳定剂为糖类或多元醇；
聚山梨酯类表面活性剂；
且pH为5.5-6.5，优选地，为5.5-6.0，
其中，
所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体包括两条重链和两条轻链，其中，第一重链可变区为抗CD47单克隆抗体的重链可变区、其能够与轻链可变区形成CD47结合位点，第二重链可变区为抗PD-L1单克隆抗体的重链可变区、其能够与轻链可变区形成PD-L1结合位点；其中，所述两条轻链的轻链可变区的序列相同，并且，所述轻链可变区是基于抗CD47单克隆抗体的轻链和抗PD-L1单克隆抗体的轻链得到的，且所述轻链可变区与所述第一重链可变区形成的第一可变区结合位点与CD47特意性结合，且所述轻链可变区与所述第二重链可变区相匹配形成的第二可变区结合位点与PD-L1特意性结合。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体的浓度为10-100mg/ml，优选地，为30-80mg/ml。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述酸性缓冲液选自柠檬酸缓冲液、醋酸缓冲液和组氨酸缓冲液中的至少一种，优选地，为组氨酸缓冲液。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述酸性缓冲液的浓度为5-25mM，优选地，为10-20mM。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述糖类为蔗糖或海藻糖，优选地，为蔗糖，所述多元醇为甘露醇或山梨醇。
6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述糖类稳定剂的浓度为3％-9％(w/v)，优选地，为5％(w/v)。
7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述表面活性剂为聚山梨酯-20、聚山梨酯-80、聚山梨酯-60或聚山梨酯-40，优选地，为聚山梨酯-20或聚山梨酯-80。
8.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述表面活性剂的浓度为0.02％-0.06％(w/v)，优选地，为0.02％-0.04％(w/v)。
9.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述第一重链可变区包括：
重链CDR1，包括X1YX2MX3，其中X1选自N、S，X2选自V、A，X3选自H、S；
重链CDR2，包括YINPX4NX5X6IKYNEKFX7G，其中X4选自Y、G，X5选自D、E，X6选自G、A，X7选自T、Q；
重链CDR3，包括EGDFYANYGRLGFX8Y，其中X8选自A、D。
10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述重链CDR1具有SEQ ID NO:31、32、33或45所示的序列；
所述重链CDR2具有SEQ ID NO:34、35、36、37、38或39所示的序列；
所述重链CDR3具有SEQ ID NO:40或41所示的序列。
11.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述第一重链包括SEQ ID NO:5、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19所示的氨基酸序列。
12.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述第二重链可变区包括SEQ ID NO:42所示的CDR1，SEQ ID NO:43所示的CDR2和SEQ ID NO:44所示的CDR3。
13.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述轻链具有SEQ ID NO:1、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30所示的序列。
14.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述第一重链的Fc段包含H315R突变、所述第二重链的Fc段包括K319E突变，所述Fc段氨基酸突变位点使用Kabat的Eu编号系统。
15.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，包括：
10-80mg/ml所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体；
5-25mM所述组氨酸缓冲液；
3％-9％(w/v)所述蔗糖；
0.02％-0.06％(w/v)所述聚山梨酯20，
且pH为5.5-6.0。
16.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，包括；
30mg/ml所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体；
10mM组氨酸；
5％蔗糖；
0.03％聚山梨酯20；
且pH为5.5-6.0，
任选地，所述组合物包括：
80mg/ml所述靶向PD-L1和CD47的双特异性抗体；
20mM组氨酸；
5％蔗糖；
0.03％聚山梨酯20；
且pH为5.8±0.3。
17.一种固体抗体组合物，其特征在于，所述固体抗体组合物是通过固化权利要求1-16中任一项所述的液体抗体组合物而获得的。
18.根据权利要求17所述的固体抗体组合物，其特征在于，所述固化为冻干处理。
19.一种递送装置，其特征在于，包括权利要求1-16中任一项所述的液体抗体组合物或权利要求17所述的固体抗体组合物。
20.权利要求1-16中任一项所述的液体抗体组合物或权利要求17所述的固体抗体组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
21.根据权利要求20所述的用途，其特征在于，所述肿瘤包括黑色素瘤、肺癌、肾癌、霍奇金淋巴瘤、头颈鳞癌、尿路上皮癌、急慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、直肠癌、前列腺癌、肾癌和多发性骨髓瘤。
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